EA024087B1 - Способ получения ферментированного молочного продукта при синергетической ферментации lactobacillus rhamnosus и lactobacillus paracasei subsp. paracasei - Google Patents

Способ получения ферментированного молочного продукта при синергетической ферментации lactobacillus rhamnosus и lactobacillus paracasei subsp. paracasei Download PDF

Info

Publication number
EA024087B1
EA024087B1 EA201291229A EA201291229A EA024087B1 EA 024087 B1 EA024087 B1 EA 024087B1 EA 201291229 A EA201291229 A EA 201291229A EA 201291229 A EA201291229 A EA 201291229A EA 024087 B1 EA024087 B1 EA 024087B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
sism
strains
fermentation
bacillus
rathasa8e1
Prior art date
Application number
EA201291229A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201291229A1 (ru
Inventor
Кристоф Даваль
Франсуа Дебрю
Дамьен Лавернь
Original Assignee
Компани Жервэ Данон
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Компани Жервэ Данон filed Critical Компани Жервэ Данон
Publication of EA201291229A1 publication Critical patent/EA201291229A1/ru
Publication of EA024087B1 publication Critical patent/EA024087B1/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING THEREOF
    • A23C9/00—Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations
    • A23C9/12—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes
    • A23C9/123—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes using only microorganisms of the genus lactobacteriaceae; Yoghurt
    • A23C9/1234—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes using only microorganisms of the genus lactobacteriaceae; Yoghurt characterised by using a Lactobacillus sp. other than Lactobacillus Bulgaricus, including Bificlobacterium sp.
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/135—Bacteria or derivatives thereof, e.g. probiotics
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2400/00—Lactic or propionic acid bacteria
    • A23V2400/11—Lactobacillus
    • A23V2400/175—Rhamnosus
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/225—Lactobacillus

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Dairy Products (AREA)
  • Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
  • General Preparation And Processing Of Foods (AREA)

Abstract

Изобретение относится к способу получения ферментированного продукта при синергетической ферментации Lactobacillus rhamnosus и Lactobacillus paracasei subsp. paracasei.

Description

Настоящее изобретение относится к способу ферментации, включающему синергетический рост по меньшей мере двух штаммов ЬасФЪасйФк.
Способы сбраживания молочно-кислыми бактериями развивались на протяжении веков. При молочно-кислом брожении молочно-кислые бактерии превращают сбраживаемые сахара в энергию, что обеспечивает рост бактерий и приводит в результате к образованию молочной кислоты. Сбраживание молочно-кислыми бактериями широко используется для получения пищевых продуктов.
В течение длительного времени считалось, что некоторые ферментированные пищевые продукты, такие как йогурт, оказывают положительное воздействие на здоровье как за счет улучшенной усвояемости/доступности нутриентов благодаря ферментации, так и за счет специфического воздействия самих бактерий.
В последнее время проводилось множество клинических исследований, нацеленных на изучение положительного воздействия на здоровье некоторых штаммов, продуцирующих молочную кислоту. Эти штаммы, как правило, называют пробиотиками. В соответствии с принятым в настоящее время ΡΆΘ/νΗΘ определением, пробиотиками являются: Живые микроорганизмы, которые при введении в соответствующих количествах оказывают положительное воздействие на здоровье хозяина. Подавляющее большинство используемых в качестве пробиотиков микроорганизмов представляют молочнокислые бактерии, в частности штаммы Рас!оЪасй1и8 и ВШбоЪасЮпа.
Сначала считалось, что пробиотики оказывают положительное воздействие на хозяина, главным образом улучшая баланс микрофлоры в желудочно-кишечном тракте, конкурируя с патогенными бактериями и бактериями, продуцирующими токсины. В настоящее время исследуется и документируется специфическое воздействие на здоровье, включая облегчение хронических воспалительных заболеваний желудочно-кишечного тракта, профилактику и лечение диареи, индуцированной патогенами, урогенетальные инфекции и атопические заболевания. Считается, что такое воздействие оказывают сами бактерии, а также их метаболиты, продуцируемые в процессе ферментации.
Различные исследования связывают различные штаммы пробиотиков, даже принадлежащие к одним и тем же видам, с различным положительным воздействием на здоровье. Например, поскольку кишечник человека является домом для около 400-500 типов микроорганизмов, которые заселяют различные участки пищеварительного тракта, считается, что каждый из множества штаммов пробиотиков, заселяющих различные участки, оказывает свое положительное воздействие.
Дальнейшее исследование выявило дополнительные положительные целебные свойства композиций, содержащих множество видов или штаммов пробиотиков, по сравнению с таковыми, содержащими один единственный штамм (ΤΙΜΜΕΚΜΑΝ е! а1., Ιη!. I. Рооб МюгоЪю1., 96, 219-33, 2004; νίΡΡΙΆΜδ е! а1., Айтеп! Рйагтасо1. Тйег, 2008). В ν02005095656 и νΕΚΌΕΝΕΡΡΙ е! а1. (Еиг. I. ΝΦτ, 48, 355-63, 2009) описывается способ отбора штаммов пробиотиков, включающий стадию тестирования их адгезионных свойств к клеткам желудочно-кишечного тракта в присутствии бактерий других штаммов; в частности, в этих документах описаны два штамма: йасЮЪасШщ тйатпокик ΙΜΡ 501 и йасЮЪасШщ рагаса^е! ΙΜΡ 502, отобранные при использовании этого способа, и предлагается использовать их при совместном введении для улучшения или восстановления микрофлоры желудочно-кишечного тракта.
Композиции с множеством штаммов пробиотиков, как правило, получают, выращивая по отдельности каждый штамм пробиотиков, используемый в композиции, при условиях, подходящих для роста указанного штамма, и добавляя их в конечный продукт после выращивания. Такой процесс имеет недостаток, состоящий в больших временных затратах и необходимости использовать отдельные емкости для ферментации каждого штамма пробиотика, что приводит к высокой стоимости. Дополнительно, в большинстве случаев штаммы пробиотиков отделяют от ростовой среды перед добавлением в конечный продукт. Следовательно, метаболиты, которые они выделяют в среду в процессе ферментации и которые могут вносить свой вклад в оказание положительного воздействия на здоровье, больше не присутствуют в конечном продукте.
Однако совместное культивирование нескольких штаммов или видов бактерий связано с проблемой, заключающейся в возможной конкуренции и/или взаимодействии этих двух бактерий. Например, если штаммы с различными скоростями роста культивируют совместно, как правило, штамм с более быстрым ростом подавляет другой штамм. Также метаболиты, продуцируемые каждым штаммом, могут оказывать стимулирующее воздействие или наоборот оказывать ингибирующее воздействие на один или более из совместно культивируемых штаммов.
Хорошо известны синергетические и антагонистические эффекты, возникающие в процессе ферментации, между бактериями, используемыми при традиционном получении пищевого продукта. Например, классический йогуртный симбиоз представляет совместное культивирование 8!гер!ососси8 ШетторйДш и йасЮЪасШщ ЪФдапсш. Синергизм этих двух бактерий приводит к ускоренному размножению их обоих и подкислению молока. Примеры антагонистического воздействия комбинаций различных бактерий могут быть найдены в предшествующем уровне техники (Е. сой апб 8. ТйурФтитФт: ΤΙΜΜΕΚΜΑΝ е! а1. Ιη!. I. Рооб Μ^с^оЪ^о1., 96, 219-33, 2004, АкретдШик: ΒυΕΝΟ-ΌΑΝΤΕ е! а1., 1оитпа1 о£ Фоб рга!есйоп, 69, 2544, ос!. 2006), оно связано с продуцированием молекул, таких как бактериоцин, антибиотиков и других метаболических продуктов.
- 1 024087
В настоящее время мало что известно о взаимодействии между видами или штаммами Ьас1оЪасШиз и еще меньше о пробиотиках Ьас1оЪасШиз. Сообщалось (ЬЕЕ, Ргосезз ВюсНстМгу. 40, 1559-64, 2005), что при получении молочной кислоты смешенное культивирование молочно-кислых бактерий может быть более эффективным, чем культивирование только одного, но отсутствуют сведения о синергетическом эффекте при совместном культивировании бактерий подвидов ЬасЮЪасШиз сазе1/рагасазе1 и Ьас1оЪасШиз гЬатиозиз. В \УО2005095656 и νΕΡΌΕΝΕΕΕΙ е1 а1. (Еиг. 1. Ыи1г., 48, 355-63, 2009) не описывается совместное культивирование двух штаммов Ьас1оЪасШиз гЬатиозиз 1МС 501 и Ьас1оЪасШиз рагасазе1 1МС 502.
Неожиданно авторы настоящего изобретения обнаружили, что когда штаммы Ьас1оЪасШиз видов рагасазе1 и гЬатиозиз совместно культивируют в молочной ферментационной среде, происходит синергетический рост этих бактерий. В результате за заданное время ферментации рН ферментируемой среды более кислый, и/или биомасса бактерий при совместном культивировании равна и, как правило, выше, чем при моно культивировании каждого индивидуального штамма.
Следовательно, настоящее изобретение относится к способу получения ферментированного молочного продукта, содержащего два или более штамма Ьас1оЪасШиз, например 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 штаммов Ьас1оЪасШиз, где указанный способ включает:
a) инокулирование молочной ферментационной среды указанными штаммами Ьас1оЪасШиз;
b) ферментацию инокулированной среды инкубированием ее при температуре, подходящей для роста указанных штаммов, до достижения заданного целевого рН или до достижения заданного целевого показателя популяции бактерий;
c) остановку ферментации и извлечение ферментированного продукта; где штаммы Ьас1оЪасШиз выбирают из штаммов видов Ьас1оЪасШиз рагасазе1 зиЪзр. рагасазе1 и/или штаммов вида Ьас1оЪасШиз гЬатиозиз.
Используемый в описании настоящей патентной заявки термин молочная ферментационная среда относится к жидкой среде на основе молока. Подразумевается любой источник животного или растительного молока. Однако предпочтительным является коровье молоко. Оно может быть, например, цельным, частично или полностью обезжиренным молоком, необязательно восстановленным из сухого молока. Также среда может состоять из фракции молока, например сыворотки или смесей двух или более фракций молока. Предпочтительно указанную среду используют без дополнительных добавок. Однако необязательно в нее могут быть добавлены такие ингредиенты, как сахара, крахмал, загустители и тому подобное, при условии, что эти ингредиенты не оказывают воздействия на рост одного или более совместно культивируемого штамма Ьас1оЪасШиз, при условии, что они подходят для потребления человеком или животными. В частности, в случае, когда один или более штамм Ьас1оЪасШиз не может ферментировать лактозу (например, в случае Ьас1оЪасШиз гЬатиозиз ЬОО), сахар, который может быть переработан указанным штаммом (например, глюкоза), может быть добавлен в молочную ферментационную среду, предпочтительно в концентрации вплоть до 10%, предпочтительно в пределах от 1 до 10%.
Указанную среду, как правило, стерилизуют перед инокуляцией штаммами Ьас1оЪасШиз. Стерилизацию проводят при использовании традиционных известных способов, таких как тепловая обработка. рН культуральной среды перед инокуляцией бактериями предпочтительно составляет в пределах от 5,5 до 7, предпочтительно около 6,5.
Для инокуляции среды может быть использована любая комбинация штаммов или видов Ьас1оЪас111из рагасазе1 зиЪзр. рагасазе1 и/или штаммов видов Ьас1оЪасШиз гЬатиозиз.
Например, может быть использовано два или более штамма одного вида, или комбинация одного, двух или более штаммов одного из видов с одним, двумя или более штаммами другого вида. Как правило, по меньшей мере один из указанных штаммов имеет пробиотические или потенциально пробиотические свойства. Предпочтительно по меньшей мере два и еще более предпочтительно все штаммы, используемые для инокуляции среды, имеют пробиотические или потенциально пробиотические свойства.
Сообщалось о пробиотических свойствах штаммов обоих видов Ьас1оЪасШиз рагасазе1 зиЪзр. рагасазе1 и Ьас1оЪасШиз гЬатиозиз.
Примеры указанных штаммов с пробиотическими свойствами Ьас1оЪасШиз рагасазе1 зиЪзр. рагасазе1 включают
Ьас1оЪасШиз рагасазе1 зиЪзр. рагасазе1 СЖ’М 1-1518, описанный в ЕР0794707;
Ьас1оЪасШиз рагасазе1 зиЪзр. рагасазе1 СЖ’М 1-3689, описанный в ^02009122042;
Ьас1оЪасШиз сазе1 8Ыго1а (который фактически принадлежит к виду Ьас1оЪасШиз рагасазе1 зиЪзр. рагасазе1);
Примеры указанных штаммов с пробиотическими свойствами Ьас1оЪасШиз гЬатиозиз включают
Ьас1оЪасШиз гЬатиозиз СNСМ 1-3690, описанный в \УО2009130423;
Ьас1оЪасШиз гЬатиозиз ЬОО (АТСС 53103), описанный в И84839281;
Ьас1оЪасШиз гЬатиозиз ΗΝ001, описанный, например, в \У09910476.
Предпочтительными комбинациями штаммов являются таковые, которые включают по меньшей мере один и предпочтительно по меньшей мере два из Ьас1оЪасШиз рагасазе1 зиЪзр. рагасазе1 СЖ’М 11518, Ьас1оЪасШиз рагасазе! зиЪзр. рагасазе! ΟΝΟΜ 1-3689 и Ьас1оЪасШиз гЬатиозиз СЖ’М 1-3690. На- 2 024087 пример, они могут включать ЬаскЪасШик ратасаке1 киЪкр. ратасаке1 СЫСМ 1-1518 с ЬаскЪасШик ратасаке1 киЪкр. ратасаке1 СЫСМ 1-3689; ЬаскЪасШик ратасаке1 киЪкр. ратасаке1 СЫСМ 1-1518 с ЬаскЪасШик тйатИО5И5 СЫСМ 1-3690; ЬаскЪасШик ратасаке1 киЪкр. ратасаке1 СЫСМ 1-3689 с ЬаскЪасШик тНашпокик СЫСМ 1-3690. По существу, предпочтительная комбинация штаммов включает три штамма ЬаскЪасШик ратасаке1 киЪкр. ратасаке1 СЫСМ 1-1518, ЬаскЪасШик ратасаке1 киЪкр. ратасаке1 СЫСМ 1-3689 и ЬаскЪасП1ик тНашпокик СЫСМ 1-3690.
Эти комбинации дополнительно могут включать другие штаммы пробиотиков и не пробиотиков Ьас1оЪасШи5 ратасаке1 киЪкр. ратасаке1 и/или ЬаскЪасШик тНашпокик.
Как правило, численность штаммов ЬаскЪасШик, инокулированных в молочную ферментационную среду, составляет по меньшей мере 106 КОЕ/мл, предпочтительно в пределах от 5х106 до 1х108 КОЕ/мл, более предпочтительно в пределах от 1х107 до 5х107 КОЕ/мл и еще более предпочтительно около 2х107 КОЕ/мл.
Пропорция каждого из штаммов в общей популяции инокулированных Ьас1оЪасШи5 может быть выбрана по доли пропорции, которую желательно получить в конечном ферментированном продукте. Как правило, каждый индивидуальный штамм должен составлять по меньшей мере 1% от общей инокулированной популяции. Следовательно, он может составлять вплоть до 99% в случае совместного культивирования двух штаммов, вплоть до 98% в случае совместного культивирования трех штаммов и так далее. Предпочтительно каждый индивидуальный штамм составляет по меньшей мере 5%, более предпочтительно по меньшей мере 10% от общей популяции.
Индивидуальные штаммы могут быть инокулированы по отдельности или смешаны вместе перед инокуляцией.
После инокуляции молочной среды ферментацию проводят при обычных условиях, подходящих для роста инокулированных штаммов бактерий.
Обе, и ЬаскЪасШик ратасаке1 киЪкр. ратасаке1 и ЬаскЪасШик тНашпокик представляют мезофильные бактерии. Следовательно, температура ферментации, как правило, составляет в пределах от 30 до 42°С, предпочтительно в пределах от 34 до 38°С, наиболее предпочтительно около 37°С.
Ферментацию останавливают, когда ферментационная среда достигает заданного целевого рН, или когда общая популяция ЬаскЪасШик достигает заданного целевого показателя.
Как правило, целевой рН составляет в пределах от 3,7 до 4,2; предпочтительно в пределах от 3,75 до з, 9; наиболее предпочтительно около 3,8.
Целевой показатель общей популяции ЬаскЪасШик, как правило, составляет по меньшей мере в 5 раз, предпочтительно по меньшей мере в 10 раз, еще более предпочтительно по меньшей мере в 100 раз, и, как правило, вплоть до в 1000 раз больше инокулированной популяции. Как правило, ферментацию останавливают, когда популяция бактерий составляет по меньшей мере 108 КОЕ/мл, предпочтительно по меньшей мере 109 КОЕ/мл.
Время ферментации для достижения целевого рН или целевой популяции Ьас1оЪасШи5 зависит от условий ферментации (включая, в частности, размер инокулированной популяции, композицию молочной ферментационной среды, и/или температуру ферментации). При использовании комбинации штаммов ЬаскЪасШик ратасаке1 киЪкр. ратасаке1 и/или ЬаскЪасШик тНашпокик, время ферментации уменьшается. Оно может быть, например, по меньшей мере короче на 1%, предпочтительно по меньшей мере короче на 5%, предпочтительно по меньшей мере короче на 10%, например, в пределах на от 1 до 80% или в пределах на от 5 до 50%, или в пределах на от 10 до 40% короче, чем время ферментации, необходимое для достижения того же целевого рН или той же целевой популяции Ьас1оЪасШи5 со штаммами Ьас1оЪасШик ратасаке1 киЪкр. ратасаке1 или ЬаскЪасШик тНашпокик, культивированными по отдельности при тех же условиях ферментации. Время ферментации короче в пределах на от 1 до 10% считается слабым синергизмом. Время ферментации короче по меньшей мере на 10% считается сильным синергизмом.
Как правило, условия ферментации выбирают, таким образом, чтобы время ферментации составляло в пределах от 10 до 120 ч, предпочтительно в пределах от 25 до 75 ч и предпочтительно, чтобы время ферментации не превышало 50 ч.
Также настоящее изобретение относится к ферментированному молочному продукту, полученному способом по настоящему изобретению. Как правило, этот продукт содержит дополнительно к штаммам, используемым для ферментации ферментируемой молочной среды, штаммы ЕаскЪасШик ратасаке1 киЪкр. рагасаке! или ЕаскЪасШик тНашпокик. Следовательно, он содержит все метаболиты, продуцированные штаммами во время ферментации, включая, метаболиты, полученные в результате взаимодействия между совместно культивированными штаммами (например, метаболиты, выделенные одним из штаммов, которые затем были метаболизированы другим штаммом).
Этот ферментированный молочный продукт может быть использован, как таковой, в частности, как пищевой продукт или как пищевая добавка.
Он также может быть добавлен в пищевой продукт, в частности в молочный продукт, такой как йогурт, или нутритивную или фармацевтическую или косметическую композицию. Пищевая композиция наряду с нутритивными, фармацевтическими или косметическими композициями, включающими ука- 3 024087 занный ферментированный молочный продукт, также является частью настоящего изобретения.
Далее настоящее изобретение будет проиллюстрировано неограничивающими Примерами вариантов воплощения способа по настоящему изобретению дополнительно к описанию.
Пример 1. Синергетический рост двух или трех штаммов Ьас1оЬасШик.
Материалы и методы.
1) Штаммы.
Проводят исследование следующих штаммов: штаммы Ьас1оЬасШик гЬатпокик:
КЬатпо А,
КЬатпо В,
ΗΝ001,
СЫСМ 1-3690.
Штаммы Ьас1оЬасШи8 рагасаЮ киЬкр. ратасакек
РагасаЮ А,
РагасаЮ В,
ШСМ 1-1518,
ШСМ 1-3689,
ΗΝ001, ΟΝΟΜ 1-3690, СNСМ 1-1518 и СNСМ 1-3689 представляют известные штаммы пробиотиков, в то время как КЬатпо А, КЬатпо В, РагасаЮ А апй РагасаЮ В представляют обычные, случайно выбранные штаммы.
2) Криопробирки.
Полученные ранее согласно приведенной ниже инструкции штаммы хранят в криопробирках (2 мл).
Культуру штамма получают при использовании бульона Мап Кодока 8Ьатре (МК8) инкубированием в течение 16 ч при температуре 37°С; для улучшения стабильности штамма при хранении добавляют стерилизованный ΌΜ8Θ (5,3%). Криопробирку замораживают в потоке жидкого азота в течение 30 мин. Чистоту штамма проверяют при использовании АР1 да11егу 50СН + метиленовый синий. Криопробирки хранят при температуре -80°С.
3) Субкультура с ростовой средой.
Каждый штамм культивируют по отдельности. Криопробирки размораживают в стерильных условиях и добавляют 1 мл (1%) культуры в 100 мл стерильного бульона МК8, используемого в качестве ростовой среды, и инкубируют при температуре 37°С до достижения культурой стационарной фазы (рН около 4,00). Субкультуру центрифугируют при 5000 об/мин в течение 15 мин при температуре 4°С. Супернатант заменяют стерильным солевым раствором триптона.
4) Ферментация в молочной среде.
Молочная среда содержит обезжиренное сухое молоко (120 г) и дистиллированную воду (930 г). После 1 ч регидратации смесь стерилизуют автоклавированием в течение 15 мин при температуре 115°С.
Бактерии субкультур инокулируют при общей популяции бактерий 2х107 клеток/мл в 200 мл молочной среды. Когда используют 2 штамма, каждый штамм составляет 1/2 от общей популяции бактерий; когда используют 3 штамма, каждый штамм составляет 1/3 от популяции бактерий. Ферментацию проводят при температуре 37°С, и проводят наблюдение, измеряя снижение рН культуральной среды. Ферментацию останавливают, когда достигается целевой показатель рН 3,80.
Подсчет клеток проводят, проводя серии разведений ферментированной среды солевым раствором триптона, и культивируют в чашках Петри на агаре МК8. Чашки Петри инкубируют при температуре 37°С в течение 72 ч в анаэробных условиях.
Результаты.
Результаты приведены в табл. I и II и на фиг. 1-3. В табл. I приведено общее количество бактерий при достижении целевого рН 3,80.
В табл. II приведено уменьшение времени ферментации, необходимого для достижения целевого рН 3,80 (среднее 2 независимых экспериментов). Уменьшение рассчитывают как разницу между временем, необходимым для достижения рН 3,80 для штамма с самой большой скоростью ферментации при отдельном культивировании, и временем, за которое достигнут рН 3,80 при использовании комбинации штаммов. Авторы настоящего изобретения считают, что синергетический эффект достигнут, когда время снижения ферментации при использовании комбинации составляет по меньшей мере 1%, предпочтительно, по меньшей мере, при том же минимальном уровне популяции.
- 4 024087
Таблица I
№ комбинации Комбинация штаммов Общее количество КОЕ/г
1 СЫСМ 1-1518+СЫСМ 1-3689 3χ1θ
2 СЫСМ 1-1518+Рагасазеа В 3*10
3 СЫСМ 1-1518+КЛатло А 2, 8χ10у
4 СЫСМ 1-1518+НЫ001 3*10
5 СЫСМ 1-3689+СЫСМ 1-3690 3,1x10
6 СЫСМ 1-1518+Рагасазеа А 4*10
7 СЫСМ 1-1518+СЫСМ 1-3690 3,1x10
8 СЫСМ 1-1518+СЫСМ 1- 3689+КЛатло В 4*10
9 СЫСМ 1-1518+ СЫСМ 1- 3689+КЛашло А 2,5х10а
10 СЫСМ 1-1518+СЫСМ 1-3689+НЫ001 1,4х10а
11 СЫСМ 1-1518+СЫСМ 1-3690+СЫСМ 1-3689 3x10
12 СЫСМ 1-1518+Рагасазег В+СЫСМ 1-3690 2,75x10
13 СЫСМ 1-1518+Рагасазег А+СЫСМ 1-3690 3,2x10
В табл. I приведены результаты по общему количеству. Целевое количество (такое же, как для ферментации каждого отдельного штамма = по меньшей мере 1х109 КОЕ/г) достигнуто для каждой тестируемой комбинации, приведенной в табл. II.
- 5 024087
Таблица II
№ Комбинация Уменьшение времени Уменьшение
комбинации штаммов ферментации (среднее 2 независимых экспериментов) времени ф ориентации т
1 сысм 1518+СЫСМ 3689 1- 1- -1час -1%
2 СЫСМ 1- 1518+Рагасазеа Б -1 час -1%
3 СЫСМ 1518+йЛатпо А 1- -4 часа -10%
4 СЫСМ 1518+НЫ001 1- -6 часов -13%
5 СЫСМ 3689+СЫСМ 3690 1- 1- -6 часов -12%
6 СЫСМ 1- 1518+Рагасазе% А -7 часов -15%
7 СЫСМ 1518+СЫСМ 3690 1 1 -10 часов -19%
8 СЫСМ 1518+СЫСМ 3689+ЫЛатпо В 1- 1- -4 часа -12%
9 СЫСМ 1518+СЫСМ 3689+йЛашно А 1- 1- -6 часов -15%
10 СЫСМ 1518+СЫСМ 3689+НЫ001 1- 1- -7 часов -16%
11 СЫСМ 1- 1518+СЫСМ 1- 3690+СЫСМ 1- 3689 -12 часов -29%
12 СЫСМ 1- 1518+Рагаса5е1 В+СЫСМ 1-3690 -14 часов -28%
13 СЫСМ 1- 1518+Рагасазе/ А+СЫСМ 1-3690 -20 часов -40%
- 6 024087
Из табл. II ясно видно, что все комбинации Ь. тЬатпо8И8 и/или Ь. са8е1 дали неожиданное синергетическое усиление роста, отраженное снижением времени ферментации по меньшей мере на 1 ч. Этот синергетический эффект даже сильнее при совместном культивировании трех штаммов.
Фиг. 1 - кривые ферментации при одинаковых условиях культивирования 2 индивидуальных штаммов СИСМ 1-3689 и СИСМ 1-3690 и при совместном культивировании 2 штаммов (комбинация 5). Совместная ферментация приводит к 6-часовому снижению времени ферментации.
Фиг. 2 - кривые ферментации при одинаковых условиях культивирования 2 индивидуальных штаммов СИСМ 1-1518 и СИСМ 1-3690 и при совместном культивировании 2 штаммов (комбинация 7). Совместная ферментация приводит к 10-часовому снижению времени ферментации.
Фиг. 3 - кривые ферментации при одинаковых условиях культивирования 3 индивидуальных штаммов СИСМ 1-1518, СИСМ 1-3689 и СИСМ 1-3690 и при совместном культивировании 3 штаммов (комбинация 11). Совместная ферментация приводит к 12-часовому снижению времени ферментации.
Эти результаты подтверждают таковые, приведенные в табл. II, показывая синергетическое воздействие совместной ферментации штаммов на скорость роста, и что комбинация трех различных штаммов более эффективна в более короткое время ферментации.

Claims (11)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Способ получения ферментированного молочного продукта, содержащего два или более штамма Ьас1оЬасШи8, где указанный способ включает:
    a) инокулирование среды для ферментации, содержащей молоко, указанными штаммами БасЮЬасП1и8;
    b) ферментацию инокулированной среды до достижения заданного целевого рН от 3,7 до 4,2 или до момента, когда общая популяция Ьас1оЬасШи8 по меньшей мере в 10 раз превысит инокулированную популяцию;
    c) остановку ферментации и извлечение ферментированного продукта, где штаммы Ьас1оЬас111и8 выбирают из штаммов видов ЬасФЬасШш ратаса8е1 8иЬ8р. ратаса8ец выбранных из Ьас1оЬасШи8 ратаса8е1 8иЬ8р. ратаса8е1 СИСМ 1-1518, или Ьас1оЬасШи8 ратаса8е1 8иЬ8р. рагаса8е1 СИСМ 1-3689, или ЬасФЬасШш са8е1 8Ыто1а; и/или штаммов вида ЬасФЬасШш тЬатпо8И8, выбранных из ЬасФЬасШш тйатпо8И8 СИСМ 1-3690, или ЬасФЬасШш тЬатпо8И8 ЬОО (АТСС 53103), или Ьас1оЬасШи8 тйатпо8И8 НИ001, и содержат по крайней мере один штамм, выбранный из ЬасФЬасШиз рагаса8е1 8иЬ8р. рагаса8е1 СИСМ 1-1518, Ьас1оЬасй1и8 ратаса8е1 8иЬ8р. ратаса8е1 СИСМ 1-3689 и Ьас1оЬасШи8 тйатпо8И8 СИСМ 1-3690.
  2. 2. Способ по п.1, где штаммы Ьас1оЬасШи8 инокулируют в среды для ферментации, содержащей молоко, в общем количестве по меньшей мере 106 КОЕ/мл.
  3. 3. Способ по любому из пп.1 или 2, где каждый индивидуальный штамм составляет по меньшей мере 1% от общей популяции инокулированных Ьас1оЬасШи8.
  4. 4. Способ по любому из пп.1-3, где ферментацию останавливают, когда общая популяция Ьас1оЬасШи8 по меньшей мере в 100 раз превысит инокулированную популяцию.
  5. 5. Способ по любому из пп.1-4, где ферментацию останавливают, когда общая популяция Ьас1оЬасШи8 составляет по меньшей мере 108 КОЕ/мл.
  6. 6. Способ по любому из пп.1-5, где общая популяция Ьас1оЬас111и8 в полученном ферментированном продукте составляет в пределах от 106-109 КОЕ/мл.
  7. 7. Способ по любому из пп.1-6, где инокулированные штаммы включают, по меньшей мере, комбинацию штаммов, выбранных из
    ЬасФЬасШш ратаса8е1 8иЬ8р. ратаса8е1 СИСМ 1-1518 и ЬасФЬасШш ратаса8е1 8иЬ8р. ратаса8е1 СИСМ 1-3689;
    ЬасФЬасШш ратаса8е1 8иЬ8р. ратаса8е1 СИСМ 1-1518 и ЬасФЬасШш тйатпо8И8 СИСМ 1-3690;
    ЬасФЬасШш ратаса8е1 8иЬ8р. ратаса8е1 СИСМ 1-3689 и ЬасФЬасШш тйатпо8И8 СИСМ 1-3690.
  8. 8. Способ по п.7, где инокулированные штаммы включают три штамма Ьас1оЬасШи8 рагаса8е1 8иЬ8р. ратаса8е1 СИСМ 1-1518, ЬасФЬасШш ратаса8е1 8иЬ8р. ратаса8е1 СИСМ 1-3689 и Ьас1оЬасШи8 тйатпо8И8 СИСМ 1-3690.
  9. 9. Ферментированный молочный продукт, полученный способом по любому из пп.1-8.
  10. 10. Композиция, включающая молочный продукт и следующие штаммы Ьас1оЬас111и8:
    ЬасФЬасШш ратаса8е1 8иЬ8р. ратаса8е1 СИСМ 1-1518 и ЬасФЬасШш ратаса8е1 8иЬ8р. ратаса8е1 СИСМ
    1-3689; или
    ЬасФЬасШш ратаса8е1 8иЬ8р. рагаса8е1 СИСМ 1-1518 и ЬасФЬасШш тйатпо8И8 СИСМ 1-3690; или
    ЬасФЬасШш ратаса8е1 8иЬ8р. ратаса8е1 СИСМ 1-3689 и ЬасФЬасШш тйатпо8И8 СИСМ 1-3690, или
    ЬасФЬасШш ратаса8е1 8иЬ8р. ратаса8е1 СИСМ 1-1518, ЬасФЬасШш ратаса8е1 8иЬ8р. ратаса8е1 СИСМ 1-3689 и ЬасФЬасШш тЬатпо8И8 СИСМ 1-3690, для получения ферментированного молочного продукта по п.9.
  11. 11. Молочный продукт, содержащий композицию по п.10.
EA201291229A 2010-05-12 2011-05-11 Способ получения ферментированного молочного продукта при синергетической ферментации lactobacillus rhamnosus и lactobacillus paracasei subsp. paracasei EA024087B1 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PCT/IB2010/001400 WO2011141762A1 (en) 2010-05-12 2010-05-12 Synergistic fermentation of lactobacillus rhamnosus and lactobacillus paracasei subsp paracasei
PCT/IB2011/052072 WO2011141881A1 (en) 2010-05-12 2011-05-11 Synergistic fermentation of lactobacillus rhamnosus and lactobacillus paracasei subsp paracasei

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA201291229A1 EA201291229A1 (ru) 2013-05-30
EA024087B1 true EA024087B1 (ru) 2016-08-31

Family

ID=43446399

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201291229A EA024087B1 (ru) 2010-05-12 2011-05-11 Способ получения ферментированного молочного продукта при синергетической ферментации lactobacillus rhamnosus и lactobacillus paracasei subsp. paracasei

Country Status (8)

Country Link
US (1) US10123547B2 (ru)
EP (1) EP2568815B1 (ru)
BR (1) BR112012028918B1 (ru)
CA (1) CA2799101C (ru)
EA (1) EA024087B1 (ru)
ES (1) ES2487653T3 (ru)
PL (1) PL2568815T3 (ru)
WO (2) WO2011141762A1 (ru)

Families Citing this family (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20130149415A1 (en) 2010-07-15 2013-06-13 Laurent Marchal Use of manganese for enhancing the growth of L.casei in mixed cultures.
KR101947107B1 (ko) 2011-04-08 2019-02-13 시에이치알. 한센 에이/에스 향미 강화 락토바실러스 람노서스
PL2836588T3 (pl) 2012-04-09 2017-08-31 Chr. Hansen A/S Bioprotekcja z zastosowaniem szczepów Lactobacillus paracasei
KR101627850B1 (ko) * 2013-07-23 2016-06-07 서원대학교산학협력단 인체 유래 복합 균주를 이용한 발효물의 제조방법 및 상기 발효물을 함유한 기능성 화장료 조성물
WO2015159124A1 (en) * 2014-04-15 2015-10-22 Compagnie Gervais Danone Use of lactobacillus paracasei for promoting intestinal clearance of opportunistic pathogens after antibiotic dysbiosis
WO2015159125A1 (en) * 2014-04-15 2015-10-22 Compagnie Gervais Danone Use of lactobacillus rhamnosus for promoting recovery of the intestinal microbiota diversity after antibiotic dysbiosis
BR112018012950B1 (pt) * 2015-12-24 2022-06-14 Danone Us, Llc Produtos lácteos adoçados com glicosídeos de esteviol e enzima lactase
WO2018109520A1 (en) * 2016-12-16 2018-06-21 Compagnie Gervais Danone Probiotic composition comprising lactobacillus rhamnosus and lactobacillus paracasei strains
CN109832616A (zh) * 2019-01-04 2019-06-04 中国食品发酵工业研究院有限公司 一种甘草发酵制品及其制备方法

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2005095656A1 (en) * 2004-03-31 2005-10-13 Alberto Cresci Lactic acid bacteria strains exhibiting probiotic properties and compositions comprising the same
WO2010043696A1 (en) * 2008-10-17 2010-04-22 Pierre Fabre Medicament Composition comprising a combination of an elder extract and a strain of l. paracasei, l. casei, l. bulgaricus or s. thermophilus

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4839281A (en) 1985-04-17 1989-06-13 New England Medical Center Hospitals, Inc. Lactobacillus strains and methods of selection
EP0794707B1 (fr) 1995-01-02 1998-11-11 Compagnie Gervais-Danone Ferment lactique, et son utilisation pour la preparation de produits anti-diarrheiques
DK2241616T3 (da) 1997-08-21 2013-02-18 New Zealand Dairy Board Immunitetsforbedrende mælkesyrebakterier
FR2928935B1 (fr) 2008-03-19 2011-05-20 Gervais Danone Sa Souche de lactobacillus rhamnosus.
FR2930264B1 (fr) 2008-04-18 2013-02-22 Gervais Danone Sa Nouvelle souche de lactobacillus paracasei subsp. paracasei dotee de proprietes antimicrobiennes et immunomodulatrices.

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2005095656A1 (en) * 2004-03-31 2005-10-13 Alberto Cresci Lactic acid bacteria strains exhibiting probiotic properties and compositions comprising the same
WO2010043696A1 (en) * 2008-10-17 2010-04-22 Pierre Fabre Medicament Composition comprising a combination of an elder extract and a strain of l. paracasei, l. casei, l. bulgaricus or s. thermophilus

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
LEE K.B.: "Comparison of fermentative capacities of lactobacilli in single and mixed culture in industrial media", PROCESS BIOCHEMISTRY, vol. 40, 20 May 2001 (2001-05-20), p. 1559-1564, XP25306414, the whole document *
MOUSSAVI M., ADAMS M.C.: "An in vitro study on bacterial growth interactions and intestinal cell adhesion characteristics of probiotic combinations", CURR. MICROBIOL., vol. 60, 1 December 2009 (2009-12-01), p. 327-335, XP002617483, the whole document *
TIMMERMAN ET AL.: "Monostrain, multistrain and multispecies probiotics - A comparison of functionality and efficiency", INT. J. FOOD MICROBIOL., vol. 96, 20 April 2001 (2001-04-20), p. 219-33, XP4580747, the whole document *
VERDENELLI ET AL.: "Probiotic properties of Lactobacillus rhamnosus and Lactobacillus paracasei isolated from human faeces", EUR. J. NUTR., vol. 48, 20 September 2001 (2001-09-20), p. 355-63, XP19739726, the whole document *
WILLIAMS ET AL.: "Clinical trial: multistrain probiotic preparation significantly reduces symptoms of irritable bowel syndrome in a double-blind placebo-controlled study", ALIMENT PHARMACOL THER, vol. 29, 20 August 2001 (2001-08-20), p. 97-103, XP002592410, the whole document *

Also Published As

Publication number Publication date
EP2568815A1 (en) 2013-03-20
BR112012028918B1 (pt) 2020-02-18
ES2487653T3 (es) 2014-08-22
WO2011141762A1 (en) 2011-11-17
EA201291229A1 (ru) 2013-05-30
EP2568815B1 (en) 2014-04-16
PL2568815T3 (pl) 2014-09-30
WO2011141881A1 (en) 2011-11-17
CA2799101C (en) 2018-08-14
BR112012028918A2 (pt) 2017-12-12
CA2799101A1 (en) 2011-11-17
US10123547B2 (en) 2018-11-13
US20130202738A1 (en) 2013-08-08

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA024087B1 (ru) Способ получения ферментированного молочного продукта при синергетической ферментации lactobacillus rhamnosus и lactobacillus paracasei subsp. paracasei
JP4862053B2 (ja) 新規乳酸菌
CN105420152A (zh) 高活性植物乳杆菌n3117、其筛选方法及应用
JP6535285B2 (ja) シトルリンの調製方法
US8673616B2 (en) Lactococcus lactis strain with high vitamin K2 production
US8765118B2 (en) Lactococcus lactis strain with high vitamin K2 production
CN110157650B (zh) 一株分离自母乳的乳双歧杆菌m8及其应用
CN115340965A (zh) 一株副干酪乳酪杆菌pc724及其应用
Uugantsetseg et al. Antioxidant activity of probiotic lactic acid bacteria isolated from Mongolian airag
CN111635875A (zh) 一种长双歧杆菌cz70及其制备活菌型黑莓果浆的方法
Miranda-Yuquilema et al. Obtaining, characterization and evaluation of two candidate preparations for probiotics developed with agroindustrial waste
CN101073341A (zh) 酸奶型乳酸菌奶粉
CN104774783A (zh) 一种降低胆固醇的干酪乳杆菌及其生产益生菌酸奶的方法
CN102399728B (zh) 一种乳酸杆菌及其发酵方法
JP4794592B2 (ja) 新規乳酸菌
JP6117474B2 (ja) 生存率が高い乳酸菌を含む飲食品および該飲食品の製造方法
TWI812128B (zh) 乳酸菌或其發酵物用於維持或改善腸胃狀況的用途
KR0148340B1 (ko) 락토바실루스 아시도필루스 균주(kctc 3145)를 이용한 유산균 원말의 제조방법
Tzugkiev et al. The Characteristic of Lactic Acid Bacteria Isolated in North Ossetia-Alania
RU2724529C2 (ru) Штамм бактерий Streptococcus thermophilus T-3693, используемый в качестве закваски прямого внесения для приготовления кисломолочных продуктов
RU2722700C2 (ru) Штамм бактерий Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus Т-7817, используемый в качестве закваски прямого внесения для приготовления кисломолочных продуктов
JP2009082126A (ja) 新規な乳酸菌、それを用いた乳酸発酵物及び乳酸発酵物含有飲食品
JP2009232717A (ja) 新規乳酸菌を用いた発酵乳の製造方法
KHACHATRYAN et al. A STUDY OF LACTIC ACID BACTERIA AND PROSPECTS FOR THEIR APPLICATION.
JP2022117889A (ja) 酸化ストレス抵抗性付与能（ｉｌ－８抑制能）及び小腸幹細胞遺伝子調節機能を有する乳酸菌

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM AZ BY KZ KG MD TJ TM