KR102070466B1 - 화장료의 평가 방법 - Google Patents

Abstract

본 발명의 과제는, 아름답고 건강한 피부를 만들어주는 화장료의 개발을 가능하게 하는 화장료의 평가 방법을 제공하는 것에 관한 것이다. 습윤후 건조시키는 과정에서의 각층의 두께 변화를 지표로 함으로써, 도포된 화장료의 피부 개선성을 평가하는 방법을 제공하는 것에 의해, 과제가 해결된다.

Description

화장료의 평가 방법{METHOD FOR EVALUATING COSMETIC}

본 발명은 화장료의 평가 방법에 관한 것이다. 바람직하게는, 본 발명은, 화장료의 피부 개선 효과, 보다 바람직하게는 각층 개선 효과에 관해 평가하는 방법에 관한 것이다. 또한 본 발명은, 환경에 따른 적절한 화장료의 평가 방법에도 관한 것이다.

피부 거칠음은, 습도가 낮은 동절기에 자주 발생하지만, 습도가 높은 하절기에는 그다지 발생하지 않으며, 건강한 피부를 유지하기 위해서 보습이 필요하다는 것은 경험상 알려져 있는 것이다. 한편, 투명도를 가지며 피부결이 정돈된 피부가 아름다운 피부라고 여겨지고 있어, 각층의 투명도의 평가 방법이나, 각층 투명도를 높이는 약제의 평가 방법에 관해 연구가 이루어지고 있고(특허문헌 1 및 2), 각층의 투명도가 각층 세포간 지질의 구조와 관련이 있다는 것이 개시되어 있다(특허문헌 3). 건강하고 윤기 있는 피부를 유지하기 위해 보습이 필요한 것, 및 투명도가 아름다운 피부에 필요하다는 것이 알려져 있지만, 각층의 수분 함량과 피부의 투명도나 건강 상태와의 관계에 관해서는 충분한 연구가 이루어지지 않아, 충분한 지견을 얻을 수 없었다.

한편, 각층 세포의 완성도나 피부 상태를 감별하기 위해, 각층 세포의 면적과 두께를 계측하여 편평 지수를 산출하는 방법이 개시되어 있다(특허문헌 4). 그러나, 그 문헌은, 평상 상태(비습윤 상태)에서의 각층 세포의 면적과 두께를 계측하고 있는 것에 불과하며, 화장수 등으로 팽윤된 상태의 세포의 면적 등을 계측하는 것은 행해지지 않았다.

특허문헌 1 : 일본 특허 공개 제2005-249672호 특허문헌 2 : 일본 특허 공개 제2010-172200호 특허문헌 3 : 일본 특허 공개 제2010-175264호 특허문헌 4 : 일본 특허 공개 제2004-105700호

비특허문헌 1 : 일본 향장품 학회지 Vol.31, No.1, pp.19-24 (2007)

각층의 수분 함량과 아름답고 건강한 피부 사이의 관계를 밝히고, 그 지견에 기초하여, 아름답고 건강한 피부를 만들어주는 화장료의 개발을 가능하게 하는 화장료의 평가 방법이 필요로 되고 있다. 또한, 화장료를 판매하는 지역에 맞춰 배합을 변경하는 것이 행해지고 있어, 판매 지역의 환경에 대하여 적절한 배합을 포함하는 화장료를 평가하는 방법이 필요로 되고 있다.

본 발명자들이, 각층의 수분량과 아름답고 건강한 피부의 관계에 관해 예의 연구한 바, 물로 습윤된 각층은 불투명하고, 건조함에 따라서 투명도가 높아지는(도 1) 한편, 물로 습윤된 각층은 각층의 피부 배리어 기능이 낮고, 건조함에 따라서 피부 배리어 기능이 높아지는 것이 나타났다(도 2). 각층의 투명도 및 피부 배리어 기능은, 각각 아름다운 피부 및 피부의 건강에 기여하기 때문에, 이들 실험 결과에서, 아름답고 건강한 피부에는 습윤 상태보다는 건조 상태가 필요하다는 지견을 얻었다. 종래, 아름답고 건강한 피부에는 보습이 중요하며, 건조 상태는 피해야 한다고 생각되었기 때문에, 이 지견은 놀라운 것이다.

투명도와 피부 배리어 기능이 각층 수분량이 감소함에 따라서 증가하는 원인에 관해 조사한 바, 각층 수분량의 감소와 함께 각층의 케라틴 구조가 질서있게 구조화하는 것 외에, 세라마이드, 콜레스테롤류, 지방산 등으로 구성되는 세포간 지질이 질서있게 구조화하여 라멜라 구조가 안정화되어, 배리어 기능을 부여하는 것이 나타났다(도 3).

다음으로 본 발명자들은, 습윤 상태의 각층을 동결 건조시킴으로써 케라틴 구조 및 라멜라 구조가 무너져 투명도나 피부 배리어 기능이 나빠진 각층을, 물로 팽윤시키고, 이어서 통상의 건조 공정을 거침으로써, 투명도 및 피부 배리어 기능이 회복되는 것을 발견했다(도 4 및 5). 이것은, 각층을 물로 팽윤시킴으로써, 케라틴 구조 및 라멜라 구조를 한번 불안정화시키고, 건조 공정에서 케라틴 구조 및 라멜라 구조가 질서있게 재구성되기 때문이라고 생각된다.

이러한 지견에 기초하여, 본 발명자들은, 아름답고 건강한 피부를 얻기 위한 스킨케어 프로세스에는, 종래 행했던 바와 같이 단순히 보습을 행하는 것이 아니라, 각층을 습윤 상태에 두고, 충분히 팽윤시켜 케라틴 구조 및 라멜라 구조를 불안정화한 후에, 건조시켜 케라틴 구조 및 라멜라 구조를 재구성하는 것이 중요하다는 결론에 이르러, 화장료가 그와 같은 작용을 갖는지의 여부를 평가하는 방법을 발명하기에 이르렀다.

보다 구체적으로, 본 발명자들은, 각층을 습윤시킨 후 건조시키는 과정에서, 각층의 투명도를 개선시키는 작용을 갖는 액체가 이용된 경우, 각층 세포의 면적의 변화는 적지만 세포의 두께가 변화하여, 각층의 두께의 변화율이 증가하는 한편, 각층의 투명도를 개선시키지 않는 액체가 이용된 경우, 각층 세포의 두께 및 면적은 거의 변화가 없는 것을 발견했다(도 6 및 7). 여기서, 각층의 두께 변화율이란, 습윤전의 각층의 두께를 A, 습윤후의 각층의 두께를 B, 건조후의 각층의 두께를 C로 한 경우, 이하의 식:

각층의 두께 변화율(%) = (B-A)×100/A-(C-B)×100/C

로 표시되는 지표이다. 이 지견에 기초하여, 본 발명자들은, 습윤 상태 및 그것을 건조시켰을 때의 피부 각층, 단리 각층 및 배양 각층 시트로 이루어진 군에서 선택되는 각층의 두께를 지표로 함으로써, 도포된 화장료의 피부 개선성을 평가하는 방법에 관한 발명을 완성시켰다. 구체적으로, 본 발명은 이하의 발명에 관한 것이다:

(1) 각층을 습윤시킨 후 건조시키는 과정에서의 각층의 두께 변화를 지표로 한 화장료의 평가 방법.

(2) 각층을 습윤시킨 후 건조시키는 과정에서의 각층의 두께 변화가, 각층의 두께 변화율을 지표로 한 화장료의 평가 방법으로서, 이하의 공정:

화장료 도포전의 피부 각층, 단리 각층 및 배양 각층 시트로 이루어진 군에서 선택되는 각층의 세포 또는 세포층의 두께(A)를 계측하는 공정;

습윤 상태에서 세포 또는 세포층의 두께(B)를 계측하는 공정;

건조 상태에서 세포 또는 세포층의 두께(C)를 계측하는 공정;

각층을 습윤시킨 후 건조시키는 과정에서의 각층의 두께 변화율을 하기 식 1에 의해 산출하는 공정;

식 1) 각층의 두께 변화율(%) = (B-A)×100/A-(C-B)×100/C

을 포함하여 이루어진 항목 (1)에 기재된 평가 방법.

(3) 각층의 두께 변화율이 20%∼150%인 경우에, 화장료가 피부 개선 효과를 갖는다고 판정하는 공정을 더 포함하는, 항목 (1) 또는 (2)에 기재된 방법.

(4) 각층의 두께 변화율이 25%∼100%인 경우에, 화장료가 피부 개선 효과를 갖는다고 판정하는 공정을 더 포함하는, 항목 (1) 내지 (3) 중 어느 하나에 기재된 방법.

(5) 상기 피부 개선 효과가 각층 개선 효과인, 항목 (1) 내지 (4) 중 어느 하나에 기재된 방법.

(6) 상기 각층 개선 효과가 각층 투명도 개선 효과인, 항목 (5)에 기재된 방법.

본 발명자들은, 또한 건조 공정에 관해 예의 연구한 결과, 건조 공정에서 습도를 변경함으로써, 각층 투명도 및 피부 배리어 기능이 변화하는 것을 발견했다(도 8 및 도 9). 구체적으로 물로 팽윤시킨 각층을 고습도하에서 건조시킨 경우에, 저습도하에서 건조시킨 경우에 비해서, 각층 투명도 및 피부 배리어 기능의 양쪽 면에서 우수하다는 것을 발견했다. 이것은, 고습도하에서는 물의 증발이 천천히 행해지기 때문에, 케라틴 구조 및 라멜라 구조가 질서있게 재구성되기 때문이라고 생각된다. 따라서, 화장수에 포함되는 성분을 조정하여 건조 공정의 속도를 제어함으로써, 화장료가 사용 지역의 환경, 예컨대 기후(즉, 판매 지역의 표준 온도 및 표준 습도)에 적합한지를 평가하는 것이 가능해진다.

따라서, 본원 발명자들은 이하의 발명을 발명했다.

(6) 환경에 따른 적절한 화장료를 평가하는 방법으로서,

피부 각층, 단리 각층 및 배양 각층 시트(멜라닌을 포함하지 않음)로 이루어진 군에서 선택되는 각층에 대하여 화장료를 도포하는 공정;

원하는 습도 및 온도에서 그 화장료를 건조시키는 공정;

상기 건조 공정에서 수분량(%)과 각층 투과율(%)을 측정하고, 플롯도를 작성하여 근사 곡선을 취득하는 공정;

물을 각층에 도포하고, 상기 원하는 온도와 습도 30% 이상 90% 미만의 조건하에서 건조시키는 공정에서 얻어진 근사 곡선(1)과, 상기 원하는 온도와 습도 90%의 조건하에서 건조시키는 공정에서 얻어진 근사 곡선(2) 사이의 범위에, 상기 공정에서 얻어진 근사 곡선이 포함되는지의 여부를 판정하는 공정; 및

상기 범위에 근사 곡선이 포함된 경우에, 그 화장료가 상기 환경에서 적합하다고 평가하는 공정

을 포함하는 상기 평가 방법.

(7) 상기 근사 곡선(1)을 얻을 때의 조건의 습도의 하한치가 60%, 70% 및 80%로 이루어진 군에서 선택되는, 항목 (6)에 기재된 평가 방법.

(8) 환경에 따른 적절한 화장료를 평가하는 방법으로서,

피부 각층, 단리 각층 및 배양 각층 시트(멜라닌을 포함하지 않음)로 이루어지는 군에서 선택되는 각층에 대하여 화장료를 도포하는 공정;

원하는 온도 및 원하는 습도에서 그 화장료를 건조시키는 공정;

건조후의 각층 투과율을 측정하는 공정; 및

그 각층 투과율이 85%∼100%인 경우에, 그 화장료가 상기 환경에서 적합하다고 평가하는 공정

을 포함하는 상기 평가 방법.

본 발명자들은, 습윤ㆍ건조 과정에서의 각층의 두께의 변화가, 습윤ㆍ건조 과정후의 각층 투명도와 관련된 것을 발견했다. 따라서, 본 발명에 의하면, 습윤ㆍ건조 과정에서의 각층의 두께를 지표로 함으로써, 사용한 액체가 피부 개선 효과의 점에서 유효한지의 여부를 판정하는 것이 가능해져, 제품 개발시의 1차 스크리닝으로서 유용하다. 또한, 본 발명의 다른 양태에 의하면, 화장료가 환경에 따라서 적절한지의 여부를 판정하게 되어, 제품 개발을 용이하게 할 수 있다.

도 1은, 각층 수분량과 각층 전투과율의 관계를 나타낸 도면이다.
도 2는, 각층 수분량과 수분 증산량의 관계를 나타낸 도면이며, 각층 수분량이 저하함에 따라서 각층의 피부 배리어 기능이 증가하는 것을 나타낸다.
도 3은, 각층 수분량과 지질 질서도의 관계를 나타낸 도면이다.
도 4는, 동결 건조에 의해 거칠어진 상태의 각층이, 물에 재침윤시키는 것에 의해, 각층 투명도가 개선되는 것을 나타낸 도면이다.
도 5는, 동결 건조에 의해 거칠어진 상태의 각층이, 물에 재침윤시키는 것에 의해, 피부 배리어 기능이 개선되는 것을 나타낸 도면이다.
도 6은, 각층 시트를 액체에 침윤시켰을 때의 각층 시트의 두께의 변화를 나타낸 도면이다. 10% 글리세린 수용액 및 유동 파라핀+글리세린+증점제 수용액을 침윤시킨 경우에는 두께가 증가하고, 건조후 감소하지만, 100% 에탄올을 침윤시킨 경우에는 두께는 변화하지 않았다.
도 7은, 동결 건조시킨 각층 시트에 대하여 액체를 침윤, 건조시켰을 때의 투명도 및 각층 투과율 효과를 나타낸 도면이다. 10% 글리세린 수용액 및 유동 파라핀+글리세린+증점제 수용액으로 침윤시킨 경우는, 투명도가 높고, 각층 투과율도 높았지만, 100% 에탄올로 침윤시킨 경우는 투명도가 낮고, 각층 투과율도 낮았다.
도 8은, 습도 30%, 습도 60% 및 습도 90%의 조건하에서 건조를 행했을 때의 수분량과 각층 전투과율의 관계를 나타낸 도면이다.
도 9는, 습도 30%, 습도 60% 및 습도 90%의 조건하에서 건조를 행했을 때의 피부 배리어 기능을 나타낸 도면이다.

제1 양태로서, 본 발명은, 습윤하여 건조시키는 과정에서의 각층의 두께 변화율을 지표로 한 화장료의 평가 방법을 제공한다. 본 평가 방법에 의해, 화장료의 각층 투명도 개선 효과, 각층 개선 효과, 나아가서는 피부 개선 효과, 아름다운 피부 효과에 관해 화장료가 평가되고, 이러한 효과에 관해 유용한 화장료를 스크리닝하는 것이 가능해진다.

본 발명에서 습윤 상태란, 화장료를 도포하여 각층을 충분히 적시고, 화장료를 각층에 충분히 침투시킨 평형 상태를 말한다. 화장료의 종류에 따라서 습윤 상태에 이르는 시간은 상이하며, 일률적으로 습윤 상태가 될 때까지 걸리는 시간에 관해서 정의할 수는 없지만, 화장료를 도포한 후 적어도 1분, 바람직하게는 적어도 5분, 보다 바람직하게는 적어도 10분, 더욱 바람직하게는 30분 이상 화장료가 건조하지 않도록 유지한 경우에 습윤 상태에 있다고 할 수 있다. 평형 상태에 있으면 되기 때문에, 화장료의 도포 시간이 상기 시간보다 길어지는 것은 통상 문제가 되지는 않는다.

본 발명에서 각층의 두께 변화율이란, 화장료를 도포하여 건조시키는 과정에서, 피부 각층, 단리 각층 및 배양 각층 시트로 이루어진 군에서 선택되는 각층의 세포 또는 세포층의 두께를 A, 화장료를 도포한 후의 습윤 상태에서의 그 각층의 세포 또는 세포층의 두께를 B, 건조후의 그 각층의 세포 또는 세포층의 두께를 C로 한 경우, 하기 식 1):

식 1) 각층의 두께 변화율(%) = (B-A)×100/A-(C-B)×100/C

에 의해 정의된다. 따라서, 본 발명의 화장료의 평가 방법은, 바람직하게는 이하의 공정 :

화장료 도포전의 피부 각층, 단리 각층 및 배양 각층 시트로 이루어진 군에서 선택되는 각층의 세포 또는 세포층의 두께(A)를 계측하는 공정;

습윤 상태에서 세포 또는 세포층의 두께(B)를 계측하는 공정;

건조 상태에서 세포 또는 세포층의 두께(C)를 계측하는 공정;

각층을 습윤시킨 후 건조시키는 과정에서의 각층의 두께 변화율을 식 1에 의해 산출하는 공정;

을 포함한다. 본 발명에서, 각층의 두께 변화율이 20%를 넘는 경우에 피부 개선 효과를 얻을 수 있다. 보다 바람직하게는, 각층의 두께 변화율의 범위의 하한치는, 20%, 25%, 30% 및 40%로 이루어진 군에서 선택되며, 상한치는 특별히 한정되지 않지만, 팽윤 한계의 관점에서 100%, 120%, 150% 및 200%로 이루어진 군에서 선택되는 경우에 피부 개선 효과를 얻을 수 있다.

본 발명에서 각층이란, 피부 각층, 단리 각층이나 배양 각층 시트와 같은 생체의 각층 자체나, 생체의 피부로 조제한 것, 나아가 세포 배양에 의해 얻어진 것을 모두 의미한다.

피부 각층이란, 특히 인간의 피부에서의 각층을 말하며, 본 발명에서 피부 각층을 이용하는 경우, 생체의 피부의 각층에 직접 화장료가 도포되는 생체내(in vivo) 방법이다. 피부의 장소로는, 신체의 부위 또는 영역 어느 것이어도 좋으며, 안면의 볼, 이마, 손등 및 체간(體幹) 등을 들 수 있다.

단리 각층이란, 소위 외과적 수단 등의 침습적인 방법에 의해 취득된 것이어도 좋지만, 화장료의 평가를 목적으로 하는 경우에는, 간편함이나 윤리적인 문제를 이유로, 비침습적인 방법에 의해 피부로부터 취득되는 것이 바람직하다. 비침습적인 방법으로는, 해당 기술분야에서 상용되고 있는 테이프 스트립핑나 스크럽법 등을 들 수 있다(비특허문헌 1). 테이프 스트립핑은, 피부 표층에 점착 테이프편 또는 포스트잇(스미토모 3M 제조)을 접착, 박리함으로써 피부의 각층을 그 점착 테이프에 그대로 박리할 수 있으므로, 본 발명에서 특히 바람직하다.

테이프 스트립핑의 바람직한 방법은, 우선 피부의 표층을, 적당한 사이즈(예컨대 5×5 cm)로 절단한 점착 테이프편 또는 포스트잇을 피부 표면 위에 가볍게 얹고, 테이프 전체에 균등한 힘을 가하여 평평하게 누르고, 그 후 균등한 힘으로 점착 테이프를 박리함으로써 행해진다. 점착 테이프는 시판하는 셀로판 테이프 등이면 되며, 예컨대 Scotch Superstrength Mailing Tape(3M사 제조) 등을 사용할 수 있다. 또한, 포스트잇으로는 스미토모 3M사 제조의 포스트잇 커버업 테이프 등을 사용할 수 있다.

배양 각층 시트란, 시험관내(in vitro) 배양에 의해 얻어진 각층의 시트를 말하며, 인간 또는 실험동물의 피부로부터 채취한 피부 조직을 배양하여 유지한 것으로부터 단리된 각층 시트나, 선유아세포 또는 줄기세포(예컨대 상피줄기세포, 배아 줄기세포, 유도 다능성 줄기세포)로부터 시험관내에서 분화된 선유아세포를, 콜라겐, 피브린, 폴리젖산 등의 폴리머나, 키틴, 키토산, 콘드로이친황산, 히알루론산 등의 다당류에 의해 구성된 배양 지지체 상에서 배양하여 얻어진 삼차원 배양 피부로부터 얻어진 각층 시트가 포함된다. 각층 시트는, 배양하에 유지된 피부 조직으로부터, 칼슘 이온 및 마그네슘 이온 농도를 제어한 생리식염수 중에서 단백질 분해 효소에 의해 처리하는 등의 방법을 이용하여 단리된다. 삼차원 배양 피부로서, LabCyte EPI-MODEL(주식회사 재팬ㆍ티슈ㆍ엔지니어링)로부터 상업적으로 입수 가능한 인간 3차원 배양 표피 모델 제품이 이용된다.

본 발명의 다른 양태에서는, 본 발명은, 각층의 두께 변화율을 지표로 하여 화장료의 사용을 평가하는 방법에도 관한 것이다. 구체적으로는, 화장료의 사용 방법을 평가하는 방법은, 이하의 공정 :

화장료 도포전의 피부 각층, 단리 각층 및 배양 각층 시트로 이루어진 군에서 선택되는 각층의 세포 또는 세포층의 두께(A)를 계측하는 공정;

습윤 상태에서 세포 또는 세포층의 두께(B)를 계측하는 공정;

건조 상태에서 세포 또는 세포층의 두께(C)를 계측하는 공정;

각층을 습윤시킨 후 건조시키는 과정에서의 각층의 두께 변화율을 하기 식 1에 의해 산출하는 공정;

식 1) 각층의 두께 변화율(%) = (B-A)×100/A-(C-B)×100/C

을 포함한다. 이 발명에서, 각층의 두께 변화율이 20%를 넘는 경우에, 그 화장료의 사용에 의해 피부 개선 효과를 얻을 수 있다. 보다 바람직하게는, 각층의 두께 변화율이 20% 초과, 25% 초과, 30% 초과, 40% 초과 또는 50% 초과인 경우에, 화장료의 사용이 적절하다고 판정할 수 있다. 상한에 관해서는 특별히 한정되는 것은 아니지만, 팽윤 한계의 관점에서 100% 미만, 120% 미만, 150% 미만 및 200% 미만 중에서 선택되는 것이 바람직하다. 피부 각층에 화장료를 도포하는 화장료의 사용 방법을 평가하는 방법은, 미용실이나, 화장품의 판매점, 에스테틱 살롱 등에서 행해지는 것이다.

각층의 두께는, 일반적으로 각층의 세포층의 두께를 가리키지만, 각층의 두께의 변화율을 측정하는 관점에서는, 각층의 세포층의 두께뿐만 아니라, 각층 중의 하나의 세포의 두께를 비교함으로써, 각층의 두께의 변화율을 측정할 수 있다. 각층의 두께는, 종래 이용되고 있는 임의의 방법을 이용할 수 있고, 예컨대 형광 현미경 또는 원자간력 현미경을 이용하여 계측하는 것이 가능하다(특허문헌 4 및 비특허문헌 1). 나아가, 다광자 주사형 레이저 현미경, 공촛점 레이저 생체 현미경 등도 이용할 수 있다. 보다 구체적으로, 단리 각층의 세포의 두께를 계측하는 경우에는, 형광 현미경 또는 원자간력 현미경을 이용하여, 편평 형상의 각층 세포의 두께 방향의 세포막으로부터 세포막까지의 길이를 계측함으로써, 단리 각층의 세포의 두께를 계측할 수 있다. 마찬가지로 각층 세포층의 두께는, 단리 각층에서의 적층되어 있는 각층 세포의 최하층 세포의 세포막으로부터, 최상층의 세포의 세포막까지의 길이를 계측함으로써, 단리 각층의 세포층의 두께를 계측할 수 있다.

본 발명에서 화장료란 피부에 도포되는 화장료를 말하며, 예컨대 화장수, 유액, 미용액, 크림, 파운데이션 등을 말하지만, 이들에 한정되지 않고, 피부의 개선을 직접적인 목적으로 하는 것은 아니지만, 피부에 도포되는 것 모두를 포함하는 것을 의도하며, 예컨대 자외선 차단제, 벌레 퇴치제, 제모제, 육모제 등도 포함하는 것으로 한다.

또한 본 발명의 다른 양태에서는, 환경에 따른 적절한 화장료를 평가하는 방법에도 관한 것이다. 구체적으로는, 이하의:

(1) 피부 각층, 단리 각층 및 배양 각층 시트로 이루어진 군에서 선택되는 각층에 대하여 화장료를 도포하는 공정;

(2) 원하는 온도 및 원하는 습도에서 그 화장료를 건조시키는 공정;

(3) 상기 건조 공정에서, 수분량(%)과 각층 투과율(%)을 측정하고, 플롯도를 작성하여 근사 곡선을 취득하는 공정;

(4) 물을 피부 각층, 단리 각층 및 배양 각층 시트(멜라닌을 함유하지 않음)로 이루어진 군에서 선택되는 각층에 도포하고, 원하는 온도 및 습도 30% 이상 90% 미만, 바람직하게는 60% 이상 90% 미만의 조건하에서 건조시키는 공정에서 얻어진 근사 곡선과, 원하는 온도 및 습도 90%의 조건하에서 건조시키는 공정에서 얻어진 근사 곡선 사이의 범위에, 상기 공정에서 얻어진 근사 곡선이 포함되는지의 여부를 판정하는 공정; 및

(5) 상기 범위에 근사 곡선이 포함된 경우에, 그 화장료가, 상기 원하는 환경에서 적합하다고 평가하는 공정

을 포함하는 환경에 따른 적절한 화장료를 평가하는 방법에 관한 것이다.

습도 60%에서 건조시킨 경우와 습도 90%에서 건조시킨 경우에, 피부 배리어 기능에서는 유의차가 없었기 때문에(도 9), 상기 (4) 및 (5)의 공정 대신, 건조의 종점에서, 원하는 온도 및 습도 60%의 조건하에서 건조시킨 경우의 각층 전투과율에 해당하는 85%보다 높은 각층 전투과율인 경우에, 그 화장료가 상기 원하는 환경에서 적합하다고 평가하는 공정을 포함하는 경우에도, 환경에 따른 적절한 화장료를 평가할 수 있다. 이 경우에 있어서, 각층 투과율이 90%보다 높은 것이 바람직하다.

화장료가 건조하는 속도는, 그 중에 포함되는 각종 성분의 양 및 농도에 따라 변화할 수 있다. 화장료에 포함되는 성분에는, 기제로서 물, 에탄올, 글리세린, 폴리에틸렌글리콜 등의 알콜류가 포함되고, 보습제로서 글리신, 베타인, 피롤리돈카르복실산 Na 등의 아미노산류, 과당, 말티톨, 만니톨, 트레할로스 등의 당류, 또한 유효 성분으로서 히알루론산, 콜라겐, 세라마이드 등, 그리고 부형제로서 시트르산나트륨, 시트르산, 젖산나트륨, 방부제로서 벤조산염, 소르브산 등이 포함되어 있지만, 이들에 한정되는 것은 아니다. 그 중에서, 특히 휘발성 성분은 건조 속도를 빠르게 하는 한편, 용질, 특히 친수성의 물질, 예컨대 폴리에틸렌글리콜 등의 폴리머는 건조 속도를 느리게 하기 때문에, 이들 성분 및 그 양의 선택에 따라, 배합되어 얻은 화장료의 건조 속도가 변화한다. 본 발명은, 이들 성분을 배합하여 얻은 화장료가, 판매 지역의 환경에 적합한지의 여부를 평가할 수 있다.

본 발명에서 판매 지역의 환경이란, 화장료가 판매되는 지역에서의 환경, 예컨대 기후, 특히 온도 및 습도를 말하며, 이들 환경은 판매 지역의 계절에 의해서도 크게 변화하는 것이다. 따라서, 본 발명의 보다 바람직한 실시양태에서는, 판매 지역의 각 계절, 예컨대 건기 또는 우기, 또는 춘하추동 등의 계절에 따라서 화장료가 적합한지를 평가하는 것이 가능해진다.

본 발명에서 피부 배리어 기능은, 경피 수분 증산량(TEWL)에 의해 평가된다. TEWL은, 각층을 통한 물의 증산량을 의미하며, TEWL이 낮을수록 각층의 피부 배리어 기능은 높고, TEWL이 높아짐에 따라서 각층의 피부 배리어 기능은 낮아진다. 피부 배리어 기능과 피부 거칠음의 관계는, 특허문헌 2에 기재되어 있다.

이하, 구체예를 들어 본 발명을 더욱 구체적으로 설명한다. 또한, 본 발명은 이에 의해 한정되는 것은 아니다.

실시예

실시예 1 : 각층 수분량에 따른 각층의 투명도의 평가

(각층 시료의 조제)

12웰 플레이트의 3차원 인간 표피 배양 모델(LabCyte EPI-MODEL, 주식회사 재팬ㆍ티슈ㆍ엔지니어링)을, 0.1% 트립신 용액/등장 인산 완충액 중에서 37℃로 30분간 인큐베이션함으로써, 직경 약 10 mm의 각층 시트를 조제했다. 그 각층 시트를, 항온 항습조 MTH-2200(산요전기 주식회사)을 이용하여 온도 34℃로 건조시켜, 여러가지 각층 수분량을 갖는 각층 시트를 취득했다.

(각층 수분량의 측정법)

수분량에 관심이 있는 각층의 습중량을 메틀러 등으로 측정한다. 이 때, 필요시에는 이오나이저(STABLO, Shimadzu Corp. Nagoya, Japan)로 정전기 제거를 행한다. 중량 측정은 1초마다 1분간 행하여 그 평균치로 한다. 다음으로 각층의 완전 건조 중량을 측정한다. 즉, 각층을 120도로 2시간 가열하여 대부분의 수분을 제거한다. 다음으로, 습도 0%의 질소 가스류에 2시간 노출시키면서 수분 흡탈착 장치(IGAsorp, Hiden Isochema Ltd., WA, UK)로 완전 건조 상태로 하고, 그대로 습도 0% 상태의 각층 완전 건조 중량을 수분 흡탈착 장치로 측정한다. 그리고, 각층 수분량을 이하의 식에 기초하여 계산했다.

각층 수분량(%) = [(각층 습중량-각층 완전 건조 중량)/(각층 습중량)]×100

(각층 전투과율의 측정)

본 발명의 투명도 측정 장치는, CIE(국제 조명 위원회) 표준 광원 C규격의 백색 광원과, 각층 시료의 유지 기구와, 각층 시료를 투과하지 않는 광의 차광체로서의 암막과, 각층 시료를 투과한 광을 균일화하는 적분구와, 적분구로부터 유도된 광의 강도를 측정하는 측광기를 포함한다. 각층 수분량이 계측된 각층 시트를 본 발명의 투명도 측정 장치에 장착하고, 상기 광원으로부터의 백색광을 조사하여 상기 각층 시트를 투과한 광을 적분구로 유도하여 균일화된 광의 강도를 측정했다. 결과는, 전투과율, 즉, 상기 각층 시트를 투과한 광의 강도의 측정치를, 각층 시트를 장착하지 않는 블랭크 상태로 상기 광원으로부터의 백색광을 직접 적분구로 유도한 광의 강도의 측정치로 나눈 백분율로 나타낸다(도 1).

실시예 2 : 각층 수분량에 따른 각층의 피부 배리어 기능의 평가

(각층으로부터의 수분 증산량의 측정)

프란츠셀(PermeGear, Inc., 미국)에 건조 처리후의 각층 시트를 장착했다. 상기 각층 시트에 대하여 리시버측을 물로 채우고, 도너측을 비워서 유지함으로써, 상기 각층 시트의 상면을 기상에, 하면을 액상에 노출시켜, 각층 시트를 기액 계면에 배치했다. 각층으로부터의 수분 증산이 안정되는 2시간 후에 VapoMeter(Delfin technologies Ltd., 핀란드)를 네일 모드에서 수분 증산량을 측정했다(도 2).

실시예 3 : 각층 수분량에 따른 각층의 지질 질서도의 평가

(각층 시료의 조제)

12웰 플레이트의 3차원 인간 표피 배양 모델(LabCyte EPI-MODEL, 주식회사 재팬ㆍ티슈ㆍ엔지니어링)을, 0.1% 트립신 용액/등장 인산 완충액 중에서 37℃로 30분간 인큐베이션함으로써, 직경 약 10 mm의 각층 시트를 조제했다.

(5DSA와의 반응)

각층 시트를 유리판(8 mm×70 mm×0.5 mm)에 접착하고, 스핀 프로브인 5-독실스테아르산(5-DSA; Aldrich사 제조) 0.001% 50 mL로 처리하여, 37℃ 1시간 반응시킨 후 물로 세정했다.

(ESR 측정)

MTH-2200을 이용하여 각층 시트를 습도 60%, 34℃로 인큐베이션을 행하고, 개시로부터 0시간, 30분, 1시간, 1시간 반, 2시간, 2시간 반, 3시간, 5시간, 18시간 후에 각각 ESR 측정을 행했다. 측정은 X밴드 ESR 장치(JES-REIX; 니혼덴시 제조)를 이용하여 실온에서 행했다. 또한, 데이터 해석은 종래부터 이용되고 있는 기하학법에 의해 질서도 S를 구했다.

측정 조건은 이하와 같다. 마이크로파 출력 : 10 mW, 자기장 변조폭 : 0.2 mT, 시정수 : 1초, 스위프 시간 : 8분.

실시예 1 및 실시예 2의 결과에 의해, 각층 수분량이 감소함에 따라서, 각층의 투명도 및 피부 배리어 기능이 증가하는 것이 나타났다. 또한 실시예 3의 결과로부터, 각층 수분량의 저하와 함께 세포간 지질의 질서가 개선되는 것이 나타났다. 이것은, 건조함에 따라서 지질이 구조화함으로써, 각층의 안정성이 증가한 결과이다. 따라서, 충분히 물에 젖은 상태로부터 적절한 각층 수분량까지 감소하는 것이, 투명도가 높고(아름답고) 또한 피부 배리어 기능이 높은(건강한) 피부에 필요하다는 것을 알 수 있다.

실시예 4 : 물의 침윤이 각층의 투명도에 미치는 영향의 평가

실시예 1의 각층 투명도의 측정법을 이용하여, 이하의 시료 : 물로 습윤시킨 각층 시트, 물로 습윤시킨 후에 항온조(MTH-2200, Sanyo Electric, Tokyo, Japan)로 34도, 습도 60% 조건하에서 18시간 건조시킨 각층 시트, 물로 습윤시킨 후에 동결 건조 장치(VD-80, TAITEC 제조)로 -20도로 동결시킨 후, 동일한 장치로 2시간 동결 건조시킨 각층 시트, 및 물로 습윤시킨 후에 동일한 동결 건조를 행하고, 계속해서 다시 물로 습윤시킨 후에 습도 60% 조건하에서 18시간 건조시킨 각층 시트에 관해 각층 투명도를 측정했다(도 4). 물에서의 습윤 및 재차 물에서의 재습윤은, 수중에 18시간 배치함으로써 행했다.

실시예 5 : 물의 침윤이 각층의 피부 배리어 기능에 미치는 영향의 평가

실시예 2의 피부 배리어 기능의 측정법에 있어서, 이하의 시료 : 물로 습윤시킨 각층 시트, 물로 습윤시킨 후에 34℃, 습도 60% 조건하에서 18시간 건조시킨 각층 시트, 물로 습윤시킨 후에 동결 건조 장치(VD-80, TAITEC 제조)로 -20℃로 동결시킨 후, 동일한 장치로 2시간 동결 건조시킨 각층 시트, 및 물로 습윤시킨 후에 동일하게 동결 건조를 행하고, 계속해서 다시 물로 습윤시킨 후에 34℃, 습도 60%의 조건하에서 건조시킨 각층 시트에 관해 각층 투명도를 측정했다. 물에서의 습윤 및 재차 물에서의 재습윤은, 수중에 18시간 배치함으로써 행했다.

실시예 4 및 5의 실험에서, 동결 건조에 의해 손상을 받고 있는 각층이 물에 재침윤되고 건조됨으로써, 동결 건조 대신에 습도 60%에서 건조된 상태와 동일한 정도로까지 각층의 투명도 및 피부 배리어 기능의 모든 점에서 회복되는 것이 나타났고, 물이 침윤하여 건조함으로써, 피부 상태가 개선되는 것이 나타났다.

실시예 6 : 각층의 두께의 변화를 지표로 한 피부 개선 효과에 관한 시약의 평가

J 테크 표피 인간 재구성 모델(각층 시트)의 실험전의 두께를 노기스(미쯔토요노기스 No.227-201)로 측정했다(각 1 개소)(A). 각층 시트를 또한 10% 글리세린 수용액, 유동 파라핀(10%), 글리세린(10%), POE(60) 경화 피마자유(10%), 카르복시비닐 폴리머(제품명; 카보폴 981 Lubrizol Advanced Materials, Inc.)(0.2%), KOH(0.1%)의 수용액(유동 파라핀+글리세린+증점제 수용액) 및 100% 에탄올 중에 각각 30분간 침윤시키고, 침윤의 종료와 동시에 각층 시트의 두께를 노기스로 동일하게 측정했다(B).

또한 34℃, 60%의 조건하에서 18시간 건조시켜, 각층 시트 측정을 행했다(C). 이들 결과로부터 각층 시트의 두께 변화율(%)을 이하의 식 1 :

두께 변화율(%) = (B-A)×100/A-(C-B)×100/C

에 기초하여 측정했다. 계속해서 건조후 각층 시트의 투명도를 육안으로 판정했다. 각층 시트의 두께 변화율 및 투명도의 결과를 표 1에 나타낸다.

샘플	두께 변화율(%)	투명도
10% 글리세린 수용액	88.4	양호
유동 파라핀+글리세린+증점제 수용액	29.9	양호
100% 에탄올	3.9	불량

다음으로 J 테크 표피 인간 재구성 모델(각층 시트)을 동결 건조시킴으로써, 하얗고 불투명한 각층 시트를 취득했다. 이 동결 건조 각층 시트를 10% 글리세린 수용액, 유동 파라핀(10%), 글리세린(10%), POE(60) 경화 피마자유(10%), 카르복시비닐 폴리머(제품명; 카보폴 981 Lubrizol Advanced Materials, Inc.)(0.2%), KOH(0.1%)의 수용액(유동 파라핀+글리세린+증점제 수용액) 및 100% 에탄올 중에 30분간 침윤시키고, 액체를 제거한 후에 34℃, 습도 60%의 분위기하에 18시간 건조시켜 촬영했다(도 7).

10% 글리세린 수용액 및 유동 파라핀+글리세린+증점제 수용액 중에서 침윤시킨 경우에는, 투명도가 높은 각층이 얻어진 한편, 유동 파라핀에 침윤시킨 경우에는, 투명도가 낮은 상태의 각층이 얻어졌다. (주)무라카미 색채기술연구소의 분광 광도계 HR100을 이용하여 투과율을 측정했다. 또한, 표 1과의 비교에 의해, 각층의 두께 변화율이 20% 이상인 경우에 투명도가 높은 각층이 얻어지는 것을 알 수 있다. 각층의 투명도가 높을수록 피부의 상태가 우수하다고 할 수 있기 때문에, 액체로의 침윤으로부터 건조에서의 각층의 세포 또는 세포층의 두께 변화율을 지표로 함으로써, 피부의 개선 상태를 평가하는 것이 가능해진다.

실시예 7 : 건조 공정에서의 습도에 따른 각층의 투명도의 변화

실시예 1의 실험의 건조 공정을, 습도 30%, 60% 및 습도 90%로 행함으로써, 수분량(%)에 대하여 각층 전투과율을 플롯했다(도 8). 도 8에서, 고습도로 건조시킨 경우에, 각층의 투명도가 보다 개선되는 것이 나타났다. 이 실험에 의해, 환경에 따른 적절한 화장료를 평가하는 방법이 서포트된다. 즉, 원하는 습도 및 온도에서 시험 화장료를 건조시키는 공정에서 얻어지는 수분량(%)에 대하여 각층 투과율(%)을 플롯하여 플롯도를 작성하여 근사 곡선을 취득하고, 이 근사 곡선이, 물을 각층에 도포하고 상기 원하는 온도와 습도 30% 이상 90% 미만의 조건하에서 건조시키는 공정에서 얻어진 근사 곡선(1)과, 상기 원하는 온도와 습도 90%의 조건하에서 건조시키는 공정에서 얻어진 근사 곡선(2) 사이의 범위에 포함된다면, 각층의 투명도를 개선시키는 적절한 화장품이라고 평가할 수 있다. 바람직하게는, 근사 곡선(1)을 얻을 때의 조건의 습도의 하한치가, 60%, 70% 및 80%로 이루어진 군에서 선택되는 하한치인 경우에, 보다 적절한 화장품이라고 평가할 수 있다.

실시예 8 : 건조 공정에서의 습도에 따른 각층의 피부 배리어 기능의 변화

실시예 2의 실험의 건조 공정을, 습도 30%, 60% 및 90%로 행하여 수분 증산량을 측정했다(도 9). 이 도면에서, 고습도로 건조시킨 경우에, 각층의 피부 배리어 기능이 개선되는 것이 나타났고, 그리고 습도 60%로 건조시킨 경우와 90%로 건조시킨 경우에는, 그의 피부 배리어 기능에 대한 영향은 적은 것이 나타났다.

Claims (8)

1. 각층을 화장료로 습윤시킨 후 건조시키는 과정에서의 각층의 두께 변화율을 지표로 한 화장료의 평가 방법으로서,
   이하의 공정:
   화장료 도포전의 피부 각층, 단리 각층 및 배양 각층 시트로 이루어진 군에서 선택되는 각층의 세포 또는 세포층의 두께(A)를 계측하는 공정;
   각층의 세포 또는 세포층에 화장료를 도포하여 습윤된 각층을 제공하는 공정;
   습윤 상태에서 세포 또는 세포층의 두께(B)를 계측하는 공정;
   습윤된 각층의 세포 또는 세포층을 건조시켜 건조된 각층을 제공하는 공정;
   건조 상태에서 세포 또는 세포층의 두께(C)를 계측하는 공정;
   각층을 습윤시킨 후 건조시키는 과정에서의 각층의 두께 변화율을 식 1에 의해 산출하는 공정;
   식 1) 각층의 두께 변화율 = (B-A)×100/A-(C-B)×100/C
   을 포함하여 이루어진 평가 방법.
2. 제1항에 있어서, 각층의 두께 변화율이 20%∼150%인 경우에, 화장료가 피부 개선 효과를 갖는다고 판정하는 공정을 더 포함하는 방법.
3. 제2항에 있어서, 각층의 두께 변화율이 25%∼100%인 경우에, 화장료가 피부 개선 효과를 갖는다고 판정하는 공정을 더 포함하는 방법.
4. 제2항 또는 제3항에 있어서, 상기 피부 개선 효과가 각층 개선 효과인 방법.
5. 제4항에 있어서, 상기 각층 개선 효과가 각층 투명도 개선 효과인 방법.
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