CN104011539B - 化妆品的评价方法 - Google Patents

Abstract

本发明的课题涉及提供使开发出给予美丽健康的肌肤这样的化妆品成为可能的化妆品的评价方法。通过提供以湿润后干燥的过程中的角质层的厚度变化作为指标，来对涂敷的化妆品的皮肤改善性进行评价的方法，来解决课题。

Description

化妆品的评价方法

技术领域

本发明涉及化妆品的评价方法。优选本发明涉及对于化妆品的皮肤改善效果进行评价的方法，更优选涉及对于角质层改善效果进行评价的方法。并且本发明也涉及适合环境的化妆品的评价方法。

背景技术

经验上已知皮肤粗糙在湿度低的冬天经常发生，在湿度高的夏天不太发生，为了保持健康的肌肤必须保湿。另一方面，具有透明度、肌理均匀的肌肤被认为是美丽的肌肤，因而关于角质层的透明度的评价方法、提高角质层透明度的药剂的评价方法进行了研究(专利文献1和2)，显示了角质层的透明度与角质层细胞间脂质的结构相关(专利文献3)。已知为了保持健康、湿润的肌肤必须保湿、以及透明度是美丽的肌肤所必须的，但关于角质层的水分含量与皮肤的透明度、健康状态的关系没有进行充分研究，尚未获得充分的见解。

另一方面，为了鉴别角质层细胞的完善度、皮肤状态，发现了测量角质层细胞的面积和厚度来计算扁平指数的方法(专利文献4)。然而，该文献仅测量了平常状态(非湿润状态)下的角质层细胞的面积和厚度，而没有测量经化妆水等溶胀后的状态的细胞的面积等。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本特开2005-249672

专利文献2：日本特开2010-172200

专利文献3：日本特开2010-175264

专利文献4：日本特开2004-105700

非专利文献

非专利文献1：日本香妆品学会志Vol.31,No.1,pp.19-24(2007)

发明内容

发明要解决的课题

已明确角质层的水分含量与美丽、健康的肌肤之间的关系，基于该见解，需要使开发出提供美丽、健康的肌肤这样的化妆品变得可能的化妆品的评价方法。另外，由于实行根据销售化妆品的地域而变更配合，从而需要对包含适合销售地域的环境的配合的化妆品进行评价的方法。

用于解决课题的方法

本发明者们对于角质层的水分量与美丽健康的肌肤的关系进行了深入研究，结果显示，被水湿润的角质层是不透明的，随着干燥而透明度变高(图1)，另一方面，被水湿润的角质层显示出角质层的皮肤屏障功能低，随着干燥而皮肤屏障功能变高(图2)。由于角质层的透明度和皮肤屏障功能分别有助于美丽的肌肤和肌肤的健康，因此这些实验结果获得了对于美丽健康的肌肤来说干燥状态比湿润状态更必要的这样的见解。由于一直以来认为对于美丽健康的肌肤来说保湿是重要的，应该避免干燥状态，因此该见解是令人惊讶的。

关于透明度和皮肤屏障功能随着角质层水分量减少而增加的原因进行了调查，结果显示，在角质层水分量减少的同时，角质层的角蛋白结构秩序良好地结构化，除此之外，由神经酰胺、胆固醇类、脂肪酸等构成的细胞间脂质秩序良好地结构化，片层结构(Lamellastructure)稳定化，从而提供屏障功能(图3)。

接着，本发明者们发现，对于将湿润状态的角质层冻结干燥而得的角蛋白结构和片层结构崩解而透明度、皮肤屏障功能变差的角质层，通过用水使其溶胀，接着经过通常的干燥工序，从而透明度和皮肤屏障功能恢复(图4和5)。认为这是由于，通过用水使角质层溶胀，从而使角蛋白结构和片层结构暂时不稳定化，在干燥工序中角蛋白结构和片层结构被秩序良好地再构成。

基于这些见解，本发明者们得到了在为了获得美丽健康的肌肤的皮肤护理工艺中，重要的不是如一直以来进行的那样仅仅进行保湿，而是将角质层置于湿润状态，使其充分溶胀而使角蛋白结构和片层结构不稳定化，然后使其干燥而再构成角蛋白结构和片层结构这样的结论，从而发明了对化妆品是否具有这样的作用进行评价的方法。

更具体而言，本发明者们发现，在使角质层湿润后使其干燥的过程中利用了具有改善角质层的透明度的作用的液体的情况下，虽然角质层细胞的面积变化少，但细胞的厚度变化，角质层的厚度的变化率增加，另一方面，在利用了不改善角质层的透明度的液体的情况下，角质层细胞的厚度和面积几乎不变化(图6和7)。在此，所谓角质层的厚度变化率，是当湿润前的角质层的厚度为A、湿润后的角质层的厚度为B、干燥后的角质层的厚度为C时，用以下的式1表示的指标。

式1：角质层的厚度变化率(％)＝(B-A)×100/A-(C-B)×100/C

基于该见解，本发明者们完成了涉及以下评价方法的发明，所述评价方法是通过以选自湿润状态和使其干燥时的皮肤角质层、分离角质层以及培养角质层片中的角质层的厚度作为指标，从而对所涂敷的化妆品的肌肤改善性进行评价的方法。具体而言，本发明涉及以下发明：

(1)化妆品的评价方法，以将角质层湿润后使其干燥的过程中的角质层的厚度变化作为指标。

(2)根据项目(1)所述的化妆品的评价方法，其中，将角质层湿润后使其干燥的过程中的角质层的厚度变化，以角质层的厚度变化率作为指标，

所述评价方法包括以下工序：

测量选自化妆品涂敷前的皮肤角质层、分离角质层以及培养角质层片中的角质层的细胞或细胞层的厚度(A)的工序；

在湿润状态测量细胞或细胞层的厚度(B)的工序；

在干燥状态测量细胞或细胞层的厚度(C)的工序；

通过下述式1计算出将角质层湿润后使其干燥的过程中的角质层的厚度变化率的工序，

式1：角质层的厚度变化率(％)＝(B-A)×100/A-(C-B)×100/C。

(3)根据项目(1)或(2)所述的方法，其中，还包括：在角质层的厚度变化率为20％～150％时，判定为化妆品具有皮肤改善效果的工序。

(4)根据项目(1)～(3)的任一项所述的方法，其中，还包括：在角质层的厚度变化率为25％～100％时，判定为化妆品具有皮肤改善效果的工序。

(5)根据项目(1)～(4)的任一项所述的方法，其中，所述皮肤改善效果是角质层改善效果。

(6)根据项目(5)所述的方法，其中，所述角质层改善效果是角质层透明度改善效果。

本发明者们进一步对干燥工序进行了深入研究，结果发现，通过在干燥工序中变更湿度，从而角质层透明度和皮肤屏障功能变化(图8和图9)。具体而言发现，在使以水溶胀后的角质层在高湿度下干燥的情况下，与在低湿度下干燥的情况相比，在角质层透明度和皮肤屏障功能这两方面均优异。认为这是由于：在高湿度下水的蒸发缓慢进行，因此有秩序地再构成角蛋白结构和片层结构。所以，通过调整化妆水所含的成分来控制干燥工序的速度，可以对化妆品是否适合使用地域的环境、例如气候(即销售地域的标准温度和标准湿度)进行评价。

所以，本申请发明者们发明了以下发明。

(6)适合环境的化妆品的评价方法，所述评价方法包括以下工序：

对选自皮肤角质层、分离角质层以及培养角质层片(不含黑色素)中的角质层涂敷化妆品的工序；

在所希望的湿度和温度下使该化妆品干燥的工序；

在上述干燥工序中测定水分量(％)和角质层透射率(％)，作图而获得近似曲线的工序；

对于上述工序所得的近似曲线是否包含在近似曲线(1)与近似曲线(2)之间的范围进行判定的工序，所述近似曲线(1)是在将水涂敷于角质层，在所述所希望的温度和湿度为30％以上且低于90％的条件下使其干燥的工序中得到的，所述近似曲线(2)是在将水涂敷于角质层，在所述所希望的温度和湿度为90％的条件下使其干燥的工序中得到的；以及

在近似曲线包含在所述范围时，评价为该化妆品适合所述环境的工序。

(7)根据项目(6)所述的评价方法，其中，获得所述近似曲线(1)时的条件的湿度的下限值从60％、70％以及80％中选择。

(8)适合环境的化妆品的评价方法，所述评价方法包括以下工序：

对选自皮肤角质层、分离角质层以及培养角质层片(不含黑色素)中的角质层涂敷化妆品的工序；

在所希望的温度和所希望的湿度下使该化妆品干燥的工序；

测定干燥后的角质层透射率的工序；以及

在该角质层透射率为85％～100％时，评价为该化妆品适合所述环境的工序。

发明的效果

本发明者们发现，湿润·干燥过程中的角质层厚度的变化与湿润·干燥过程后的角质层透明度相关。因此，根据本发明，通过以湿润·干燥过程中的角质层的厚度作为指标，可以判定使用的液体在皮肤改善效果的方面是否有效，作为开发制品时的首次筛选是有用的。另外，根据本发明的另一方式，可以判定化妆品是否适合环境，从而可以容易地进行制品开发。

附图说明

图1是显示角质层水分量与角质层总透射率的关系的图。

图2是显示角质层水分量与水分蒸发量的关系的图，显示随着角质层水分量降低而角质层的皮肤屏障功能增加。

图3是显示角质层水分量与脂质有序度的关系的图。

图4是显示通过将经冷冻干燥而成为粗糙的状态的角质层在水中再浸润来改善角质层透明度的图。

图5是显示通过将经冷冻干燥而成为粗糙的状态的角质层在水中再浸润来改善皮肤屏障功能的图。

图6是显示使角质层片浸润于液体时的角质层片的厚度变化的图。虽然在浸润了10％甘油水溶液和液体石蜡+甘油+增稠剂水溶液的情况下，厚度增加、干燥后减少，但在浸润了100％乙醇的情况下，厚度不变化。

图7是显示对冻结干燥后的角质层片浸润液体、使其干燥后的透明度和角质层透射率效果的图。用10％甘油水溶液和液体石蜡+甘油+增稠剂水溶液浸润的情况下，透明度高，角质层透射率也高，但用100％乙醇浸润的情况下，透明度低，角质层透射率也低。

图8是显示在湿度为30％、湿度为60％以及湿度为90％的条件下进行干燥时的水分量与角质层总透射率的关系的图。

图9是显示在湿度为30％、湿度为60％以及湿度为90％的条件下进行干燥时的皮肤屏障功能的图。

具体实施方式

作为第一方式，本发明提供以湿润并使其干燥的过程中的角质层的厚度变化率作为指标的化妆品的评价方法。根据本评价方法，可以对于化妆品的角质层透明度改善效果、角质层改善效果、以及皮肤改善效果、美肌效果评价化妆品，从而可以对于这些效果筛选有用的化妆品。

在本发明中，所谓湿润状态，是指涂敷化妆品使角质层充分润湿，并使化妆品充分渗透在角质层中之后的平衡状态。根据化妆品的种类不同，达到湿润状态的时间不同，不能一概地对达到湿润状态所需的时间进行定义，在涂敷化妆品后，维持化妆品不干燥至少1分钟、优选至少5分钟、更优选至少10分钟、进一步优选30分钟以上的情况下，可以说处于湿润状态。由于只要处于平衡状态即可，因此化妆品的涂敷时间比上述时间长通常不会成为问题。

在本发明中，所谓角质层的厚度变化率，当在涂敷化妆品并使其干燥的过程中，选自皮肤角质层、分离角质层以及培养角质层片中的角质层的细胞或细胞层的厚度为A，涂敷化妆品后的湿润状态下的该角质层的细胞或细胞层的厚度为B，干燥后的该角质层的细胞或细胞层的厚度为C时，由下述式1定义。

式1：角质层的厚度变化率(％)＝(B-A)×100/A-(C-B)×100/C

所以，本发明的化妆品的评价方法优选包括以下工序：

测量选自化妆品涂敷前的皮肤角质层、分离角质层以及培养角质层片中的角质层的细胞或细胞层的厚度(A)的工序；

在湿润状态测量细胞或细胞层的厚度(B)的工序；

在干燥状态测量细胞或细胞层的厚度(C)的工序；

通过式1计算出将角质层湿润后使其干燥的过程中的角质层的厚度变化率的工序。

在本发明中，在角质层的厚度变化率超过20％时，获得皮肤改善效果。更优选角质层的厚度变化率的范围的下限值从20％、25％、30％以及40％中选择，对上限值没有特别限定，但从溶胀界限的观点考虑，从100％、120％、150％以及200％中选择时，获得皮肤改善效果。

在本发明中，所谓角质层，是指皮肤角质层、分离角质层、和/或培养角质层片这样的生物体的角质层自身、由生物体的皮肤制备而得的角质层、以及通过细胞培养而得角质层的全体角质层。

所谓皮肤角质层，特别指人的皮肤中的角质层，当本发明中使用皮肤角质层时，是对生物体的皮肤的角质层直接涂敷化妆品的体内(invivo)方法。作为皮肤的位置，可以为身体的部位或区域的任一者，可以举出面部的面颊、额头、手背以及躯干等。

分离角质层可以是以所谓外科手段等有创性的方法获得的角质层，但在以评价化妆品为目的时，由于简易性和/或伦理的问题，优选以无创性的方法由皮肤获得的角质层。作为无创性的方法，可以举出该技术领域中常用的胶带剥离、擦洗法等(非专利文献1)。胶带剥离可以通过在皮肤表层粘贴胶带片或便利贴(Post-It)(住友3M制)并剥离，而直接将皮肤的角质层剥离至该胶带，因而在本发明中特别优选。

胶带剥离的优选方法如下进行：首先，对皮肤的表层，将切成适当大小(例如5×5cm)的胶带片或便利贴轻轻地放在皮肤表面上，对胶带整体施加均等的力而压平，其后，用均等的力剥掉胶带。胶带可以是市售的玻璃纸胶带等，例如可以使用ScotchSuperstrengthMailingTape(3M社制)等。另外，作为便利贴，可以使用住友3M社制PostItCoverUpTape等。

所谓培养角质层片，是指通过体外(invitro)培养得到的角质层的片，包含：从将由人或实验动物的皮肤采取的皮肤组织培养并维持得到的物质中分离到的角质层片、从三维培养皮肤中得到的角质层片，所述三维培养皮肤是在由胶原、纤维蛋白、聚乳酸等聚合物、和/或几丁质、壳聚糖、硫酸软骨素、透明质酸等多糖类构成的培养支撑体上培养成纤维细胞、或者由干细胞(例如上皮干细胞、胚胎干细胞、诱导多能干细胞)体外(invitro)分化得到的成纤维细胞而得的。角质层片是使用在控制了钙离子和镁离子浓度的生理盐水中通过蛋白质分解酶进行处理等的方法，从在培养下维持的皮肤组织中分离得到的。作为三维培养皮肤，使用可以从LabCyteEPI-MODEL(株式会社ジャパン·ティッシュ·エンジニアリング)商业获得的人三维培养表皮模型制品。

本发明的其他方式中，本发明也涉及以角质层的厚度变化率作为指标来评价化妆品的使用的方法。具体而言，化妆品的使用方法的评价方法包括以下工序：

测量选自化妆品涂敷前的皮肤角质层、分离角质层以及培养角质层片中的角质层的细胞或细胞层的厚度(A)的工序；

在湿润状态测量细胞或细胞层的厚度(B)的工序；

在干燥状态测量细胞或细胞层的厚度(C)的工序；

通过下述式1计算出将角质层湿润后使其干燥的过程中的角质层的厚度变化率的工序。

式1：角质层的厚度变化率(％)＝(B-A)×100/A-(C-B)×100/C

在该发明中，当角质层的厚度变化率超过20％时，通过该化妆品的使用获得皮肤改善效果。更优选当角质层的厚度变化率超过20％、超过25％、超过30％、超过40％、或者超过50％时，可以判定为化妆品的使用是适当的。对于上限没有特别限定，但从溶胀界限的观点考虑，优选从低于100％、低于120％、低于150％、以及低于200％之中选择。在皮肤角质层涂敷化妆品的化妆品的使用方法的评价方法是在美容院、和/或化妆品的销售店、美容沙龙等进行的。

角质层的厚度一般来说是指角质层的细胞层的厚度，但从测定角质层的厚度变化率的观点考虑，不仅可以通过比较角质层的细胞层的厚度来测定角质层的厚度变化率，还可以通过比较角质层中的1个的细胞厚度来测定角质层的厚度变化率。角质层的厚度可以利用到目前为止使用的任意的方法来测量，例如可以利用荧光显微镜或原子力显微镜来测量(专利文献4和非专利文献1)，进而还可以利用多光子激光扫描显微镜、共聚焦激光活体显微镜等。更具体而言，在测量分离角质层的细胞厚度时，可以利用荧光显微镜或原子力显微镜，通过测量扁平形状的角质层细胞的厚度方向的从细胞膜到细胞膜的长度，由此测量分离角质层的细胞的厚度。同样地对于角质层细胞层的厚度，可以测量从分离角质层中的层叠的角质层细胞的最下层细胞的细胞膜到最上层的细胞的细胞膜的长度，由此测量分离角质层的细胞层的厚度。

在本发明中，化妆品是指在皮肤上涂敷的化妆品，例如指化妆水、乳液、美容液、霜、粉底等，但不限定于此，其含义包含虽然不是以改善皮肤为直接目的、但在皮肤上涂敷的全部物质，也包含例如防晒剂、驱虫剂、脱毛剂、生发剂等。

此外，本发明的其他方式中，也涉及适合环境的化妆品的评价方法。具体而言，涉及包括以下工序的适合环境的化妆品的评价方法：

(1)对选自皮肤角质层、分离角质层以及培养角质层片中的角质层涂敷化妆品的工序；

(2)在所希望的温度和所希望的湿度下使该化妆品干燥的工序；

(3)在上述干燥工序中测定水分量(％)和角质层透射率(％)，作图而获得近似曲线的工序；

(4)对于上述所得的近似曲线是否包含在

将水涂敷于选自皮肤角质层、分离角质层以及培养角质层片(不含黑色素)中的角质层、在上述所希望的温度和湿度为30％以上且低于90％、优选60％以上且低于90％的条件下使其干燥的工序中得到的近似曲线、与

在上述所希望的温度和湿度为90％的条件下使其干燥的工序中得到的近似曲线

之间的范围进行判定的工序；以及

(5)在近似曲线包含在上述范围时，评价为该化妆品适合上述所希望的环境的工序。

在湿度为60％使其干燥的情况与在湿度为90％使其干燥的情况之间，皮肤屏障功能没有有意义的差别(图9)，因此，在包括下述工序代替上述(4)和(5)工序时，也能够评价适合环境的化妆品，所述工序是，在干燥的终点角质层总透射率高于85％时，评价为该化妆品适合上述所希望的环境的工序，所述85％相当于在所希望的温度和湿度为60％的条件下使其干燥后的角质层总透射率。在这种情况下，优选角质层透射率高于90％。

化妆品干燥的速度可以根据其中所含的各种成分的量和浓度变化而变化。在化妆品所含的成分中，作为主剂包含水、乙醇、甘油、聚乙二醇等醇类，作为保湿剂包含甘氨酸、甜菜碱、吡咯烷酮羧酸钠等氨基酸类、果糖、麦芽糖醇、甘露糖醇、海藻糖等糖类，进而作为有效成分包含透明质酸、胶原、神经酰胺等，并且作为赋形剂包含柠檬酸钠、柠檬酸、乳酸钠，作为防腐剂包含苯甲酸盐、山梨酸等，但不限定于这些。其中，特别是挥发性成分加快干燥速度，另一方面，溶质、特别是亲水性的物质、例如聚乙二醇等聚合物使干燥速度变慢，因此，通过选择这些成分及其量，配合得到的化妆品的干燥速度变化。本发明能够评价配合这些成分而得的化妆品是否适合销售地域的环境。

在本发明中，所谓销售地域的环境，是指销售化妆品的地域中的环境，例如气候、特别是温度和湿度，这些环境也根据销售地域的季节不同而大幅变化。所以，在本发明更优选的实施方式中，可以评价化妆品是否适合销售地域的各季节，例如干季或雨季、或者春夏秋冬等季节。

在本发明中，皮肤屏障功能通过透皮水分蒸发量(TEWL)来评价。TEWL是指介由角质层的水的蒸发量，TEWL越低，则角质层的皮肤屏障功能越高，随着TEWL增高，角质层的皮肤屏障功能降低。皮肤屏障功能与皮肤粗糙的关系记载于专利文献2。

以下举出具体例更具体地说明本发明。此外，本发明不受这些具体例限定。

实施例

实施例1：与角质层水分量相应的角质层的透明度的评价

(角质层样品的制备)

将12孔板的三维人表皮培养模型(LabCyteEPE-MODEL，株式会社ジャパン·ティッシュ·エンジニアリング)在0.1％胰蛋白酶溶液/等渗磷酸缓冲液中在37℃孵育30分钟，由此制备直径约10mm的角质层片。利用恒温恒湿槽MTH-2200(三洋电机公司)，以34℃的温度使该角质层片干燥，获得具有各种角质层水分量的角质层片。

(角质层水分量的测定法)

用METTLER等测定与水分量有关的角质层的湿重。此时，必要时用电离器(STABLO,ShimadzuCorp.Nagoya,Japan)进行除静电。重量测定每隔1秒进行1分钟，为其平均值。接着，测定角质层的绝干重量。即，以120度对角质层加热2小时，除去大部分水分。接着，一边暴露于湿度为0％的氮气流2小时，一边用水分吸附解吸附装置(IGAsorp,HidenIsochemaLtd.,WA,UK)制成绝干状态，直接用水分吸附解吸附装置测定湿度为0％状态的角质层绝干重量。然后，基于以下式计算角质层水分量。

角质层水分量(％)＝[(角质层湿重－角质层绝干重量)/(角质层湿重)]×100

(角质层总透射率的测定)

本发明的透明度测定装置包含CIE(国际照明委员会)标准光源C规格的白色光源、角质层样品的保持用具、作为不透过角质层样品的光的遮光体的暗幕、将透过了角质层样品的光进行均匀化的积分球、和测定由积分球导出的光的强度的光度计。将被测量角质层水分量的角质层片安装在本发明的透明度测定装置上，将照射来自上述光源的白色光而透过上述角质层片的光导入到积分球进行均匀化，测定被均匀化的光的强度。结果用百分率表示，所述百分率是总透射率、即透过了上述角质层片的光的强度的测定值除以在没有安装角质层片的空白状态下将来自上述光源的白色光直接导入到积分球得到的光的强度的测定值而得的百分率(图1)。

实施例2：与角质层水分量相应的角质层的皮肤屏障功能的评价

(来自角质层的水分蒸发量的测定)

将干燥处理后的角质层片安装在Franzcell(PermeGear，Inc.，美国)上。对上述角质层片用水充满接受侧，将给予侧保持中空，由此将上述角质层片的上面暴露于气相、下面暴露于液相，将角质层片配置于气液界面。在来自角质层的水分蒸发稳定的2小时后，用VapoMeter(DelfintechnologiesLtd.，芬兰)以NailMode测定水分蒸发量(图2)。

实施例3：与角质层水分量相应的角质层的脂质有序度的评价

(角质层样品的制备)

将12孔板的三维人表皮培养模型(LabCyteEPI-MODEL，株式会社ジャパン·ティッシュ·エンジニアリング)在0.1％胰蛋白酶溶液/等渗磷酸缓冲液中在37℃孵育30分钟，由此制备直径约10mm的角质层片。

(与5DSA的反应)

将角质层片粘贴在玻璃板(8mm×70mm×0.5mm)上，用50mL的0.001％作为自旋探针的5-氮氧自由基硬脂酸(5-doxylstearicacid，5-DSA；Aldrich社制)进行处理，使其在37℃下反应1小时后，水洗。

(ESR测定)

利用MTH-2200以60％的湿度、34℃对角质层片进行孵育，分别在从开始起0小时、30分钟、1小时、1个半小时、2小时、2个半小时、3小时、5小时、18小时后进行ESR测定。测定利用XbandESR装置(JES-REIX；日本电子制)在室温下进行。此外，数据分析采用一直以来使用的几何学法求得有序度S。

测定条件如下。微波输出功率：10mW，磁场调制宽度：0.2mT，时间常数：1秒，扫描时间：8分钟。

通过实施例1和实施例2的结果显示，随着角质层水分量减少，角质层的透明度和皮肤屏障功能增加。进而由实施例3的结果显示，在角质层水分量降低的同时，细胞间脂质的秩序改善。这是脂质随着干燥而结构化，从而角质层的稳定性增加的结果。所以可知，从充分被水润湿的状态减少到适当的角质层水分量，对于透明度高(美丽)且皮肤屏障功能高(健康)的肌肤是必要的。

实施例4：水的浸润对角质层的透明度的影响的评价

采用实施例1的角质层透明度的测定法，对于以下样品测定角质层透明度(图4)，所述样品是：用水湿润了的角质层片；在用水湿润后用恒温槽(MTH-2200，SanyoElectric,Tokyo,Japan)在34度、湿度为60％的条件下干燥了18小时的角质层片；在用水湿润后用冻结干燥装置(VD-80，TAITEC制)冻结到-20度，然后用同一装置冻结干燥了2小时的角质层片；以及在用水湿润后进行同样的冻结干燥，接着再次用水湿润，然后在湿度为60％的条件下干燥了18小时的角质层片。用水的湿润和再次用水的再湿润通过配置在水中18小时来进行。

实施例5：水的浸润对角质层的皮肤屏障功能的影响的评价

在实施例2的皮肤屏障功能的测定法中，对于以下样品测定角质层透明度，所述样品是：用水湿润了的角质层片；在用水湿润后在34℃、湿度为60％的条件下干燥了18小时的角质层片；在用水湿润后用冻结干燥装置(VD-80，TAITEC制)冻结到-20℃，然后用相同的装置冻结干燥了2小时的角质层片；以及在用水湿润后同样地进行冻结干燥，接着再次用水湿润，然后在34℃、湿度为60％的条件下干燥了的角质层片。用水的湿润和再次用水的再湿润通过配置在水中18小时来进行。

由实施例4和5的实验显示，由冻结干燥而受到损伤的角质层通过被水再浸润并被干燥，在角质层的透明度和皮肤屏障功能任一方面均恢复到与代替冻结干燥而以60％的湿度进行干燥后的状态相同的程度，显示了通过水浸润并干燥，皮肤状态被改善。

实施例6：对于以角质层的厚度变化作为指标的皮肤改善效果的试剂 评价

用游标卡尺(三丰卡尺型号227-201)测定JTech表皮人再构成模型(角质层片)的实验前厚度(各1处)(A)。进一步使角质层片分别浸润在10％甘油水溶液、液体石蜡(10％)、甘油(10％)、POE(60)硬化蓖麻油(10％)、羧基乙烯基聚合物(制品名：Carbopol981LubrizolAdvancedMaterials,Inc.)(0.2％)、KOH(0.1％)的水溶液(液体石蜡+甘油+增稠剂水溶液)、以及100％乙醇中30分钟，在浸润结束的同时用游标卡尺同样地测定角质层片的厚度(B)。

进一步在34℃、60％的条件下使其干燥18小时，进行角质层片测定(C)。由这些结果基于以下式1测定角质层片的厚度变化率(％)。

式1：厚度变化率(％)＝(B-A)×100/A-(C-B)×100/C。

接着，干燥后，通过目视判定角质层片的透明度。将角质层片的厚度变化率和透明度的结果示于表1。

表1

样品	厚度变化率(％)	透明度
			10％甘油水溶液	88.4	良
液体石蜡+甘油+增稠剂水溶液	29.9	良
			100％乙醇	3.9	否

接着，通过将JTech表皮人再构成模型(角质层片)进行冻结干燥，而获得白色不透明的角质层片。将该冻结干燥角质层片在10％甘油水溶液、液体石蜡(10％)、甘油(10％)、POE(60)硬化蓖麻油(10％)、羧基乙烯基聚合物(制品名：Carbopol981LubrizolAdvancedMaterials,Inc.)(0.2％)、KOH(0.1％)的水溶液(液体石蜡+甘油+增稠剂水溶液)、以及100％乙醇中浸润30分钟，除去液体后，在34℃、湿度为60％的气氛下使其干燥18小时，拍照(图7)。

在10％甘油水溶液和液体石蜡+甘油+增稠剂水溶液中浸润的情况下，获得了透明度高的角质层，另一方面，在液体石蜡中浸润的情况下，获得了透明度仍然低的角质层。利用(株)村上色彩技术研究所的分光光度计HR100测定透射率。另外，通过与表1的比较可知，当角质层的厚度变化率为20％以上时获得透明度高的角质层。可以说角质层的透明度越高，皮肤的状态越优异，因此，通过以从在液体中的浸润到干燥中的角质层的细胞或细胞层的厚度变化率作为指标，可以评价皮肤的改善状态。

实施例7：与干燥工序中的湿度相应的角质层透明度的变化

在湿度为30％、60％以及湿度为90％下进行实施例1的实验的干燥工序，由此将角质层总透射率相对于水分量(％)作图(图8)。由图8显示，在高湿度下干燥时更加改善角质层的透明度。通过该实验，适合环境的化妆品的评价方法得到了支持。即，将角质层透射率(％)相对于在所希望的湿度和温度使试验化妆品干燥的工序中得到的水分量(％)作图，制成曲线图而获得近似曲线，如果该近似曲线包含在将水涂敷于角质层、在上述所希望的温度和湿度为30％以上且低于90％的条件下使其干燥的工序中得到的近似曲线(1)、与在上述所希望的温度和湿度为90％的条件下使其干燥的工序中得到的近似曲线(2)之间的范围，则可以评价为改善角质层的透明度的适当化妆品。优选当获得近似曲线(1)时的条件的湿度下限值为从60％、70％以及80％中选择的下限值时，可以评价为更适合化妆品。

实施例8：与干燥工序中的湿度相应的角质层的皮肤屏障功能的变化

在30％、60％以及90％的湿度下进行实施例2的实验的干燥工序，测定水分蒸发量(图9)。由该图显示，当在高湿度下干燥时，角质层的皮肤屏障功能改善，并且显示，在60％的湿度下使其干燥的情况与在90％下使其干燥的情况之间，对其皮肤屏障功能的影响少。

Claims (8)

1.化妆品的评价方法，以将角质层湿润后使其干燥的过程中的角质层的厚度变化作为指标。

2.根据权利要求1所述的化妆品的评价方法，其中，所述将角质层湿润后使其干燥的过程中的角质层的厚度变化，以角质层的厚度变化率作为指标，

所述评价方法包括以下工序：

测量选自化妆品涂敷前的皮肤角质层、分离角质层以及培养角质层片中的角质层的细胞或细胞层的厚度A的工序；

在湿润状态测量细胞或细胞层的厚度B的工序；

在干燥状态测量细胞或细胞层的厚度C的工序；

通过式1计算出将角质层湿润后使其干燥的过程中的角质层的厚度变化率的工序，

式1：角质层的厚度变化率＝(B-A)×100/A-(C-B)×100/C。

3.根据权利要求2所述的方法，其中，还包括：在角质层的厚度变化率为20％～150％时，判定为化妆品具有皮肤改善效果的工序。

4.根据权利要求2所述的方法，其中，还包括：在角质层的厚度变化率为25％～100％时，判定为化妆品具有皮肤改善效果的工序。

5.根据权利要求3或4所述的方法，其中，所述皮肤改善效果是角质层改善效果。

6.根据权利要求5所述的方法，其中，所述角质层改善效果是角质层透明度改善效果。

7.适合环境的化妆品的评价方法，所述评价方法包括以下工序：

对选自皮肤角质层、分离角质层以及培养角质层片中的角质层涂敷化妆品的工序；

在所希望的温度和所希望的湿度下使该化妆品干燥的工序；

在所述干燥工序中测定水分量和角质层透射率，作图而获得近似曲线的工序，所述水分量和角质层透射率的单位均为％；

对于上述工序所得的近似曲线是否包含在近似曲线1与近似曲线2之间的范围进行判定的工序，所述近似曲线1是在将水涂敷于角质层，在所述所希望的温度和湿度为30％以上且低于90％的条件下使其干燥的工序中得到的，所述近似曲线2是在将水涂敷于角质层，在所述所希望的温度和湿度为90％的条件下使其干燥的工序中得到的；以及

在近似曲线包含在所述范围时，评价为该化妆品适合所述环境。

8.适合环境的化妆品的评价方法，所述评价方法包括以下工序：

对选自皮肤角质层、分离角质层以及培养角质层片中的角质层涂敷化妆品的工序；

在所希望的温度和所希望的湿度下使该化妆品干燥的工序；

测定干燥后的角质层透射率的工序；以及

在该角质层透射率为85％～100％时，评价为该化妆品适合所述环境的工序。