TW201333464A - 化妝品之評估方法 - Google Patents

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Abstract

本發明之課題係關於提供一種化妝品之評估方法，其可開發如形成美麗健康之肌膚之化妝品。本發明藉由提供如下方法而解決課題：藉由以濕潤後進行乾燥之過程中之角質層的厚度變化作為指標，而評估所塗抹之化妝品之皮膚改善性。

Description

化妝品之評估方法
本發明係關於一種化妝品之評估方法。較佳為本發明係關於一種對化妝品之皮膚改善效果、更佳為對角質層改善效果進行評估之方法。進而，本發明亦關於一種適應環境之適當之化妝品的評估方法。
肌膚粗糙於濕度較低之冬季經常產生，但於濕度較高之夏季不常產生，經驗上已知為保持健康之肌膚而需要保濕。另一方面，業界將具有透明度、且肌理勻稱之肌膚視為美麗之肌膚，並對角質層之透明度之評估方法、或提高角質層透明度之藥劑之評估方法進行研究(專利文獻1及2)，顯示角質層之透明度係與角質層細胞間脂質之結構相關(專利文獻3)。雖已知為保持健康且具有滋潤度之肌膚而需要保濕、及透明度為美麗之肌膚所必需，但未對角質層之水分含量與皮膚之透明度及健康狀態的關係進行充分之研究，而未獲得充分之見解。
另一方面，為了鑑別角質層細胞之完成度或皮膚狀態，而發現測量角質層細胞之面積與厚度，算出扁平指數之方法(專利文獻4)。然而，該文獻僅測量平常狀態(非濕潤狀態)下之角質層細胞之面積與厚度，未進行利用化妝水等進行膨潤之狀態之細胞的面積等之測量。
[先前技術文獻] [專利文獻]
[專利文獻1]日本專利特開2005-249672
[專利文獻2]日本專利特開2010-172200
[專利文獻3]日本專利特開2010-175264
[專利文獻4]日本專利特開2004-105700
[非專利文獻]
[非專利文獻1]日本香料化妝品學會誌Vol. 31, No.1, pp.19-24 (2007)
需要查明角質層之水分含量與美麗健康之肌膚之間的關係，且基於該見解，可開發如形成美麗健康之肌膚之化妝品的化妝品之評估方法。又，需要評估根據銷售化妝品之地區而進行調配之變更，且針對銷售地區之環境而含有適當之調配的化妝品之方法。
本發明者等人對角質層之水分量與美麗健康之肌膚的關係進行努力研究，結果顯示利用水濕潤之角質層不透明，隨著進行乾燥，透明度增高(圖1)，另一方面，利用水濕潤之角質層之角質層的皮膚障壁(skin barrier)功能較低，隨著進行乾燥，皮膚障壁功能增高(圖2)。由於角質層之透明度及皮膚障壁功能分別有助於美麗之肌膚及肌膚的健康，因此該等實驗結果獲得如下見解：對美麗健康之肌膚而言，較之濕潤狀態更需要乾燥狀態。由於先前一般認為對美麗健康之肌膚而言，保濕較重要，且應避免乾燥狀態， 因此該見解令人吃驚。
對透明度與皮膚障壁功能隨著角質層水分量減少而增加之原因進行調査，結果顯示，除隨著角質層水分量之減少，使角質層之角蛋白結構秩序良好地結構化以外，亦使包含腦醯胺、膽固醇類、脂肪酸等之細胞間脂質秩序良好地結構化而使層狀結構穩定化，從而形成障壁功能(圖3)。
繼而，本發明者等人發現，利用水使藉由將濕潤狀態之角質層冷凍乾燥從而角蛋白結構及層狀結構變形而使透明度或皮膚障壁功能變差之角質層膨潤，繼而，經由通常之乾燥步驟，藉此使透明度及皮膚障壁功能恢復(圖4及5)。 一般認為其原因在於：藉由利用水使角質層膨潤，而使角蛋白結構及層狀結構暫時不穩定化，且於乾燥步驟中秩序良好地再構成角蛋白結構及層狀結構。
基於該等見解，本發明者等人得出以下結論：於用以獲得美麗健康之肌膚之皮膚保養過程中，並非如先前所進行般僅進行保濕，較重要的是使角質層處於濕潤狀態，於充分地進行膨潤而使角蛋白結構及層狀結構不穩定化後，進行乾燥而再構成角蛋白結構及層狀結構，從而發明評估化妝品是否具有此種作用之方法。
更具體而言，本發明者等人發現，於將角質層濕潤後進行乾燥之過程中，於使用具有改善角質層之透明度之作用的液體之情形時，角質層細胞之面積變化雖較少，但細胞之厚度產生變化，且角質層之厚度之變化率增加，另一方面，於使用未改善角質層之透明度之液體的情形時，角質 層細胞之厚度及面積幾乎無變化(圖6及7)。此處，所謂角質層之厚度變化率，於將濕潤前之角質層之厚度設為A、將濕潤後之角質層之厚度設為B、將乾燥後之角質層之厚度設為C的情形時，係以下之式所表示之指標：角質層之厚度變化率(%)=(B-A)×100/A-(C-B)×100/C。
基於該見解，本發明者等人藉由將濕潤狀態及使其乾燥時之選自由皮膚角質層、單離角質層、及培養角質層薄片所組成之群中的角質層之厚度作為指標，而完成評估所塗抹之化妝品之肌膚改善性的方法之發明。具體而言，本發明係關於以下之發明：
(1)一種化妝品之評估方法，其係以於將角質層濕潤後進行乾燥之過程中之角質層的厚度變化作為指標。
(2)如上述項目(1)之評估方法，其係將角質層濕潤後進行乾燥之過程中之角質層的厚度變化以角質層之厚度變化率作為指標之化妝品的評估方法，且包括以下之步驟而成：測量選自由塗抹化妝品前之皮膚角質層、單離角質層、及培養角質層薄片所組成之群中之角質層的細胞或細胞層之厚度(A)；於濕潤狀態下測量細胞或細胞層之厚度(B)；於乾燥狀態下測量細胞或細胞層之厚度(C)；及藉由下述式1算出將角質層濕潤後進行乾燥之過程中之角質層的厚度變化率： 式1)角質層之厚度變化率(%)=(B-A)×100/A-(C-B)×100/C。
(3)如上述項目(1)或(2)之方法，其進而包括於角質層之厚度變化率為20%~150%之情形時，判定化妝品具有皮膚改善效果之步驟。
(4)如上述項目(1)至(3)中任一項之方法，其進而包括於角質層之厚度變化率為25%~100%之情形時，判定化妝品具有皮膚改善效果之步驟。
(5)如上述項目(1)至(4)中任一項之方法，其中上述皮膚改善效果為角質層改善效果。
(6)如上述項目(5)之方法，其中上述角質層改善效果為角質層透明度改善效果。
本發明者等人進而對乾燥步驟進行努力研究，結果發現藉由在乾燥步驟中變更濕度，角質層透明度及皮膚障壁功能產生變化(圖8及圖9)。具體而言，發現於在高濕度下乾燥利用水進行膨潤之角質層之情形時，與於低濕度下進行乾燥之情形時相比，於角質層透明度及皮膚障壁功能之兩者之方面均優異。一般認為其原因在於：由於在高濕度下緩慢進行水之蒸發，因此有序地再構成角蛋白結構及層狀結構。因此，可藉由調整化妝水所含之成分而控制乾燥步驟之速度，評估化妝品是否適合使用地區之環境例如氣候(即銷售地區之標準溫度及標準濕度)。
因此，本申請案發明者等人發明以下之發明。
(6)一種評估方法，其係評估適應環境之適當之化妝品 的方法，且包括如下步驟：對選自由皮膚角質層、單離角質層、及培養角質層薄片(不含黑色素)所組成之群中之角質層塗抹化妝品；於所需之濕度及溫度下使該化妝品乾燥；於上述乾燥步驟中，測定水分量(%)與角質層穿透率(%)，並製作曲線圖而獲得近似曲線；判定於上述步驟中獲得之近似曲線是否包含於將水塗抹於角質層上，於在上述所需之溫度與濕度30%以上且未達90%的條件下進行乾燥之步驟中獲得之近似曲線(1)與於在上述所需之溫度與濕度90%的條件下進行乾燥之步驟中獲得之近似曲線(2)之間的範圍內；以及於在上述範圍內包含近似曲線之情形時，評估該化妝品適合上述環境。
(7)如上述項目(6)之評估方法，於獲得上述近似曲線(1)時之條件之濕度的下限值係選自由60%、70%及80%所組成之群中。
(8)一種評估方法，其係評估適應環境之適當之化妝品的方法，且包括如下步驟：對選自由皮膚角質層、單離角質層、及培養角質層薄片(不含黑色素)所組成之群中的角質層塗抹化妝品；於所需之溫度及所需之濕度下將該化妝品乾燥；測定乾燥後之角質層穿透率；及於該角質層穿透率為85%~100%之情形時，評估該化妝品適合上述環境。
本發明者等人發現，濕潤、乾燥過程中之角質層之厚度的變化係與濕潤、乾燥過程後之角質層透明度相關。因此，根據本發明，可藉由以濕潤、乾燥過程中之角質層之厚度作為指標，而判定所使用之液體於皮膚改善效果之方面是否有效，從而可用作製品開發時之一次篩選。又，根據本發明之其他態樣，判定化妝品根據環境是否適合，而可容易地開發製品。
作為第一態樣，本發明提供一種化妝品之評估方法，其係以進行濕潤並使其乾燥之過程中之角質層的厚度變化率作為指標。藉由本評估方法，對化妝品之角質層透明度改善效果、角質層改善效果、進而皮膚改善效果、美肌效果，評估化妝品，而可篩選對該等效果有用之化妝品。
於本發明中，所謂濕潤狀態，係指塗抹化妝品而使角質層充分地濕潤，且使化妝品充分地滲透至角質層中之平衡狀態。根據化妝品之種類，到達濕潤狀態之時間不同，無法籠統地對至成為濕潤狀態所花費之時間下定義，但於塗抹化妝品後，以至少1分鐘、較佳為至少5分鐘、更佳為至少10分鐘、進而較佳為30分鐘以上化妝品不乾燥之方式維持之情形時，可認為處於濕潤狀態。由於處於平衡狀態即可，因此化妝品之塗抹時間長於上述時間通常不會成為問題。
於本發明中，所謂角質層之厚度變化率，於塗抹化妝品 並使其乾燥之過程中，於將選自由皮膚角質層、單離角質層、及培養角質層薄片所組成之群中之角質層的細胞或細胞層之厚度設為A，將於塗抹化妝品後之濕潤狀態下之該角質層的細胞或細胞層之厚度設為B，將乾燥後之該角質層之細胞或細胞層的厚度設為C之情形時，係藉由下述式1)進行定義：式1)角質層之厚度變化率(%)=(B-A)×100/A-(C-B)×100/C。
因此，本發明之化妝品之評估方法較佳為包括以下之步驟：測量選自由塗抹化妝品前之皮膚角質層、單離角質層、及培養角質層薄片所組成之群中之角質層的細胞或細胞層之厚度(A)；於濕潤狀態下測量細胞或細胞層之厚度(B)；於乾燥狀態下測量細胞或細胞層之厚度(C)；藉由式1算出將角質層濕潤後並使其乾燥之過程中之角質層的厚度變化率。
於本發明中，於角質層之厚度變化率超過20%之情形時，可獲得皮膚改善效果。更佳為，角質層之厚度變化率之範圍的下限值係選自由20%、25%、30%及40%所組成之群中，上限值並無特別限定，就膨潤極限之觀點而言，於選自由100%、120%、150%、及200%所組成之群中之情形時，可獲得皮膚改善效果。
於本發明中，所謂角質層，係指由皮膚角質層、單離角 質層、或培養角質層薄片之活體之角質層自身，或活體之皮膚調製者，進而係指藉由細胞培養而獲得者之全部。
所謂皮膚角質層，尤其係指人之皮膚之角質層，於本發明中，於使用皮膚角質層之情形時，係於活體之皮膚之角質層上直接塗抹化妝品的in vivo(活體內)方法。作為皮膚之部位，可為身體之部位或區域中之任一者，且可列舉面部之臉頰、額頭、手背及軀體等。
所謂單離角質層，可為藉由所謂外科方式等侵入性方法而獲得者，但於以化妝品之評估作為目的之情形時，基於簡易度或倫理之理由，較佳為藉由非侵入性方法自皮膚上取得者。作為非侵入性方法，可列舉於該技術領域中常用之膠帶剝離法或磨砂法等(非專利文獻1)。膠帶剝離法由於可藉由於皮膚表層上貼附、剝離膠帶片或Post-it(住友3M製造)，而直接於該膠帶上將皮膚之角質層剝離，因此於本發明中尤佳。
膠帶剝離法之較佳之方法係藉由如下方式進行：首先於皮膚之表層上，將切割成適當之大小(例如5×5 cm)之膠帶片或Post-it輕置於皮膚表面之上，對膠帶整體施加均等之力並壓平，其後藉由均等之力將膠帶剝離。膠帶只要為市售之透明膠帶等即可，例如可使用Scotch Superstrength Mailing Tape(3M公司製造)等。又，作為Post-it，可使用住友3M公司製造之Post-it修正帶(cover-up tape)等。
所謂培養角質層薄片，係指藉由活體外(in vitro)培養而獲得之角質層之薄片，包括自培養自人或實驗動物之皮膚 提取之皮膚組織而維持者上單離之角質層薄片，或由在藉由膠原蛋白、血纖維蛋白、聚乳酸等聚合物或甲殼素、殼聚糖、硫酸軟骨素、透明質酸等多糖類構成之培養支持體上，培養以活體外之方式自纖維母細胞或幹細胞(例如上皮幹細胞、胚性幹細胞、誘導多能性幹細胞)分化之纖維母細胞而獲得之三維培養皮膚獲得之角質層薄片。角質層薄片係於控制鈣離子及鎂離子濃度之生理食鹽水中，使用藉由蛋白質分解酵素進行處理等方法而自於培養下維持之皮膚組織上單離。作為三維培養皮膚，可使用可自商業途徑自LabCyte EPI-MODEL(Japan Tissue Engineering股份有限公司)獲取之人三維培養表皮樣本製品。
於本發明之其他態樣中，本發明亦關於一種以角質層之厚度變化率作為指標，而評估化妝品之使用之方法。具體而言，評估化妝品之使用方法之方法包括如下步驟：測量選自由塗抹化妝品前之皮膚角質層、單離角質層、及培養角質層薄片所組成之群中之角質層的細胞或細胞層之厚度(A)；於濕潤狀態下測量細胞或細胞層之厚度(B)；於乾燥狀態下測量細胞或細胞層之厚度(C)；藉由下述式1算出將角質層濕潤後進行乾燥之過程中之角質層的厚度變化率：式1)角質層之厚度變化率(%)=(B-A)×100/A-(C-B)×100/C。
於本發明中，於角質層之厚度變化率超過20%之情形 時，可獲得使用該化妝品所致之皮膚改善效果。更佳為於角質層之厚度變化率超過20%、超過25%、超過30%、超過40%、或超過50%之情形時，可判定化妝品之使用較適當。關於上限，並無特別限定，就膨潤極限之觀點而言，較佳為自未達100%、未達120%、未達150%、及未達200%之中選擇。評估於皮膚角質層上塗抹化妝品之化妝品之使用方法的方法係於美容室或化妝品之銷售店、美容沙龍等中進行者。
角質層之厚度通常係指角質層之細胞層的厚度，就測定角質層之厚度變化率的觀點而言，可藉由不僅比較角質層之細胞層之厚度，亦比較角質層中之1個細胞之厚度，而測定角質層之厚度之變化率。角質層之厚度可使用先前使用之任意之方法，例如可使用螢光顯微鏡或原子力顯微鏡進行測量(專利文獻4及非專利文獻1)。進而，亦可使用多光子掃描型雷射顯微鏡、共軛焦雷射活體顯微鏡等。更具體而言，於測量單離角質層之細胞厚度的情形時，可藉由使用螢光顯微鏡或原子力顯微鏡，測量自扁平形狀之角質層細胞之厚度方向的細胞膜至細胞膜之長度，而測量單離角質層之細胞之厚度。同樣地角質層細胞層之厚度可藉由測量自單離角質層中之積層之角質層細胞的最下層細胞之細胞膜至最上層之細胞之細胞膜的長度，而測量單離角質層之細胞層之厚度。
於本發明中，所謂化妝品，係指塗抹於皮膚上之化妝品，例如係指化妝水、乳液，美容液、乳霜、粉底等，但 並不限定於該等，雖非以皮膚之改善作為直接之目的，但意在包括塗抹於皮膚上者之全部，例如亦包括防曬劑、除蟲劑、脫毛劑、生髮劑等。
再者，於本發明之其他態樣中，亦關於一種評估適應環境之適當之化妝品的方法。具體而言，係關於一種包括以下之步驟之評估適應環境之適當的化妝品之方法：(1)對選自由皮膚角質層、單離角質層、及培養角質層薄片所組成之群中之角質層塗抹化妝品；(2)於所需之溫度及所需之濕度下將該化妝品乾燥；(3)於上述乾燥步驟中，測定水分量(%)與角質層穿透率(%)，並製作曲線圖而獲得近似曲線；(4)判定於上述步驟中獲得之近似曲線是否包含於將水塗抹於選自由皮膚角質層、單離角質層、及培養角質層薄片(不含黑色素)所組成之群中之角質層上，於在所需之溫度及濕度30%以上且未達90%、較佳為60%以上且未達90%的條件下進行乾燥之步驟中獲得之近似曲線與於在所需之溫度及濕度90%之條件下進行乾燥的步驟中獲得之近似曲線之間之範圍內；及(5)於在上述範圍內包含近似曲線之情形時，評估該化妝品適應上述所需之環境。
於在濕度60%下進行乾燥之情形時與於在濕度90%下進行乾燥之情形時，由於在皮膚障壁功能方面無顯著差異(圖9)，因此代替上述(4)及(5)之步驟，於乾燥之終點，於角質層總穿透率高於相當於在所需之溫度及濕度60%之條 件下進行乾燥的情形時之角質層總穿透率之85%之情形時，亦可於包括評估該化妝品適應上述所需之環境之步驟的情形時，評估適應環境之適當之化妝品。於該情形時，角質層穿透率較佳為高於90%。
化妝品乾燥之速度可根據其中所含之各種成分的量及濃度而變化。於化妝品所含之成分中，作為基劑，含有水、乙醇、甘油、聚乙二醇等醇類，作為保濕劑，含有甘胺酸、甜菜鹼、吡咯啶酮羧酸Na等胺基酸類，果糖、麥芽糖醇、甘露醇、海藻糖等糖類，進而作為有效成分，含有透明質酸、膠原蛋白、腦醯胺等，並且，作為賦形劑，含有檸檬酸鈉、檸檬酸、乳酸鈉，作為防腐劑，含有苯甲酸鹽、山梨酸等，但並不限定於該等。其中，由於尤其是揮發性成分會加快乾燥速度，另一方面，溶質、尤其是親水性之物質例如聚乙二醇等聚合物會降低乾燥速度，因此藉由該等成分及其量之選擇，經調配而獲得之化妝品之乾燥速度產生變化。本發明可評估調配該等成分而獲得之化妝品是否適應銷售地區之環境。
於本發明中，所謂銷售地區之環境，係指銷售化妝品之地區之環境例如氣候，尤其指溫度及濕度，該等環境係根據銷售地區之季節亦會產生較大變化者。因此，於本發明之更佳之實施態樣中，可評估根據銷售地區之各季節例如乾季或雨季、或春夏秋冬等季節，化妝品是否適合。
於本發明中，皮膚障壁功能係藉由經皮水分蒸散量(TEWL，Transepidermal Water Loss)而進行評估。TEWL 係指經由角質層之水之蒸散量，TEWL越低，角質層之皮膚障壁功能越高，隨著TEWL增高，角質層之皮膚障壁功能下降。皮膚障壁功能與肌膚粗糙之關係係記載於專利文獻2中。
以下，列舉具體例，更具體地說明本發明。再者，本發明並不受其限定。
[實施例] 實施例1：根據角質水分量之角質層之透明度的評估 (角質層試樣之調製)
藉由將12孔培養板之三維人表皮培養樣本(LabCyte EPI-MODEL，Japan Tissue Engineering股份有限公司)於0.1%胰蛋白酶溶液/等張磷酸緩衝液中於37℃下培養30分鐘，而調製直徑約10 mm之角質層薄片。使用恆溫恆濕槽MTH-2200(三洋電機股份有限公司)，於溫度34℃下使該角質層薄片乾燥，而獲得具有各種角質層水分量之角質層薄片。
(角質層水分量之測定法)
藉由Mettler等測定意在水分量之角質層之濕重量。此時，必要時利用離子化器(STABLO，Shimadzu Corp.Nagoya,Japan)進行除靜電。重量測定係每隔1秒進行1分鐘，並設為其平均值。繼而，測定角質層之絕對乾重。即，將角質層於120度下加熱2小時，而去除大部分水分。繼而，一面將其暴露於濕度0%之氮氣流中2小時，一面利用水分吸附脫附裝置(IGAsorp,Hiden Isochema Ltd.,WA,UK)使其形成為絕乾狀態，並直接利用水分吸附脫附裝置 測定濕度0%狀態之角質層絕對乾重。並且，基於以下之式計算角質層水分量。
角質層水分量(%)=[(角質層濕重量-角質層絕對乾重)/(角質層濕重量)]×100
(角質層總穿透率之測定)
本發明之透明度測定裝置包含CIE(Commission International Eclairage，國際照明委員會)標準光源C標準之白色光源、角質層試樣之保持器、作為不會穿透角質層試樣之光之遮光體的遮光幕(black-out curtain)、使穿透角質層試樣之光均勻化之積分球、及測定自積分球導入之光之強度的測光器。將測量角質層水分量之角質層薄片安裝於本發明之透明度測定裝置上，測定將照射源自上述光源之白色光而穿透上述角質層薄片之光導入至積分球中且使其均勻化而成的光之強度。結果係以將總穿透率即穿透上述角質層薄片之光之強度之測定值除以於未安裝角質層薄片的空白狀態下將源自上述光源之白色光直接導入至積分球中之光的強度之測定值而得到之百分率表示(圖1)。
實施例2：根據角質層水分量之角質層之皮膚障壁功能的評估 (源自角質層之水分蒸散量之測定)
於Franz Cell(PermeGear,Inc.,美國)上安裝乾燥處理後之角質層薄片。藉由對上述角質層薄片將受體側盛滿水，並將施體側保持為空，使上述角質層薄片之上表面暴露於氣相中，使下表面暴露於液相中，而將角質層薄片配置於 氣液界面。於自角質層之水分蒸散穩定之2小時後，藉由VapoMeter(水蒸汽滲透性能測定儀)(Delfin technologies Ltd.,芬蘭)之nail模式測定水分蒸散量(圖2)。
實施例3：根據角質層水分量之角質層之脂質有序度的評估 (角質層試樣之調製)
藉由將12孔培養板之三維人表皮培養樣本(LabCyte EPI-MODEL，Japan Tissue Engineering股份有限公司)於0.1%胰蛋白酶溶液/等張磷酸緩衝液中於37℃下培養30分鐘，而調製直徑約10 mm之角質層薄片。
(與5DSA(5-doxylstearic acid，2-(3-羧基丙基)-4,4-二甲基-2-十三烷基-3-唑啶氧自由基)之反應)
將角質層薄片貼附於玻璃板(8 mm×70 mm×0.5 mm)上，利用50 mL之作為自旋探針(spin probe)之5-DSA(Aldrich公司製造)0.001%進行處理，並於37℃下使其反應1小時後，進行水洗。
(ESR(Electron Spin Resonance，電子自旋共振)測定)
使用MTH-2200，將角質層薄片於濕度60%、34℃下進行培養，距開始0小時、30分鐘、1小時，1個半小時、2小時、2個半小時、3小時、5小時、18小時後，分別進行ESR測定。測定係使用X波段ESR裝置(JES-REIX，日本電子製造)，於室溫下進行。再者，資料解析係藉由自先前以來使用之幾何學法而求出有序度S。
測定條件係如下所述。微波輸出：10 mW，磁場調變幅 度：0.2 mT，時間常數：1秒鐘，掃描時間：8分鐘。
根據實施例1及實施例2之結果顯示，隨著角質層水分量減少，角質層之透明度及皮膚障壁功能增加。進而由實施例3之結果顯示，隨著角質層水分量之下降，細胞間脂質之秩序得以改善。其為藉由隨著進行乾燥，將脂質結構化，而增加角質層之穩定性之結果。因此，可知對透明度較高(美麗)且皮膚障壁功能較高(健康之)肌膚而言，必需自充分地被水潤濕之狀態減少至適當之角質層水分量。
實施例4：水之浸潤對角質層之透明度造成的影響之評估
使用實施例1之角質層透明度之測定法，對以下之試樣測定角質層薄片的角質層透明度(圖4)：利用水使其濕潤之角質層薄片；於利用水使其濕潤後，利用恆溫槽(MTH-2200，Sanyo Electric,Tokyo,Japan)於34度、濕度60%之條件下使其乾燥18小時而成之角質層薄片；於利用水使其濕潤後利用冷凍乾燥裝置(VD-80，TAITEC製造)冷凍至-20度後，利用同一裝置冷凍乾燥2小時而成之角質層薄片；及於利用水使其濕潤後進行同樣之冷凍乾燥，繼而於再次利用水使其濕潤後，於濕度60%之條件下乾燥18小時而成之角質層薄片。利用水之濕潤及再次利用水的再濕潤係藉由配置於水中18小時而進行。
實施例5：水之浸潤對角質層之皮膚障壁功能造成的影響之評估
於實施例2之皮膚障壁功能之測定法中，對以下之試樣測定角質層薄片之角質層透明度：利用水使其濕潤之角質 層薄片；於利用水使其濕潤後，於34℃、濕度60%之條件下乾燥18小時而成之角質層薄片；於利用水使其濕潤後，利用冷凍乾燥裝置(VD-80，TAITEC製造)冷凍至-20℃後，利用相同之裝置冷凍乾燥2小時而成之角質層薄片；及於利用水使其濕潤後同樣地進行冷凍乾燥，繼而於再次利用水使其濕潤後，於34℃、濕度60%之條件下使其乾燥而成之角質層薄片。利用水之濕潤及再次之利用水的再濕潤係藉由配置於水中18小時而進行。
由實施例4及5之實驗顯示，將因冷凍乾燥而受損之角質層再浸潤於水中並使其乾燥，藉此角質層之透明度及皮膚障壁功能之任一方面均恢復至與代替冷凍乾燥而以濕度60%使其乾燥之狀態相同的程度，且顯示藉由浸潤水並使其乾燥，皮膚狀態得以改善。
實施例6：關於以角質層之厚度之變化作為指標之皮膚改善效果的試劑之評估
利用游標卡尺(Mitutoyo Nonius No.227-201)，測定J-TEC表皮人再構成樣本(角質層薄片)之實驗前之厚度(各1處)(A)。進而將角質層薄片分別於10%甘油水溶液、液態石蠟(10%)、甘油(10%)、POE(Polyoxyethylene，聚環氧乙烷)(60)氫化蓖麻油(10%)、羧乙烯聚合物(製品名：Carbopol 981，Lubrizol Advanced Materials,Inc.)(0.2%)、KOH(0.1%)之水溶液(液態石蠟+甘油+增黏劑水溶液)、及100%乙醇中浸潤30分鐘，於浸潤結束之同時，利用游標卡尺同樣地測定角質層薄片之厚度(B)。
進而於34℃、60%之條件下使其乾燥18小時，而進行角質層薄片測定(C)。
由該等結果，基於以下之式1測定角質層薄片之厚度變化率(%)：厚度變化率(%)=(B-A)×100/A-(C-B)×100/C。
繼而，乾燥後，目測判定角質層薄片之透明度。將角質層薄片之厚度變化率及透明度之結果示於表1中。
繼而，藉由冷凍乾燥J-TEC表皮人再構成樣本(角質層薄片)，而獲得白色不透明之角質層薄片。將該冷凍乾燥角質層薄片於10%甘油水溶液、液態石蠟(10%)、甘油(10%)、POE(60)氫化蓖麻油(10%)、羧乙烯聚合物(製品名：Carbopol 981，Lubrizol Advanced Materials,Inc.)(0.2%)、KOH(0.1%)之水溶液(液態石蠟+甘油+增黏劑水溶液)、及100%乙醇中浸潤30分鐘，於去除液體後，於34℃、濕度60%之環境下使其乾燥18小時，並進行拍攝(圖7)。
於浸潤於10%甘油水溶液及液態石蠟+甘油+增黏劑水溶液中之情形時，可獲得透明度較高之角質層，另一方面，於浸潤於液態石蠟中之情形時，可獲得保持透明度較低之狀態之角質層。使用村上色彩技術研究所股份有限公司之 分光光度計HR100測定穿透率。又，根據與表1之比較可知，於角質層之厚度變化率為20%以上之情形時，可獲得透明度較高之角質層。由於可認為角質層之透明度越高，皮膚之狀態越優異，因此可藉由以自浸潤於液體中至乾燥下之角質層的細胞或細胞層之厚度變化率作為指標，而評估皮膚之改善狀態。
實施例7：根據乾燥步驟中之濕度之角質層的透明度之變化
藉由於濕度30%、60%、及濕度90%下進行實施例1之實驗之乾燥步驟，而對水分量(%)繪製角質層總穿透率(圖8)。由圖8顯示，於在高濕度下使其乾燥之情形時，更改善角質層之透明度。藉由該實驗，評估適應環境之適當之化妝品的方法得到支持。即，對在所需之濕度及溫度下乾燥試驗化妝品的步驟中獲得之水分量(%)繪製角質層穿透率(%)，並製作曲線圖而獲得近似曲線，若該近似曲線包含於將水塗抹於角質層上，於在上述所需之溫度與濕度30%以上且未達90%的條件下使其乾燥之步驟中獲得之近似曲線(1)與於在上述所需之溫度與濕度90%之條件下使其乾燥的步驟中獲得之近似曲線(2)之間之範圍內，則可評估為改善角質層之透明度之適當的化妝品。較佳為，可於獲得近似曲線(1)時之條件之濕度的下限值為選自由60%、70%及80%所組成之群中之下限值的情形時，評估為更適當之化妝品。
實施例8：根據乾燥步驟中之濕度之角質層的皮膚障壁功 能之變化
於濕度30%、60%、及90%下進行實施例2之實驗之乾燥步驟，測定水分蒸散量(圖9)。由該圖顯示，於在高濕度下使其乾燥之情形時，角質層之皮膚障壁功能得以改善，並且，於以濕度60%使其乾燥之情形時與於以濕度90%使其乾燥之情形時，對該皮膚障壁功能之影響較少。
圖1係表示角質層水分量與角質層總穿透率之關係之圖。
圖2係表示角質層水分量與水分蒸散量之關係之圖，顯示隨著角質層水分量下降，角質層之皮膚障壁功能增加。
圖3係表示角質層水分量與脂質有序度之關係之圖。
圖4係表示藉由將因冷凍乾燥而粗糙之狀態之角質層再浸潤於水中，而改善角質層透明度之圖。
圖5係表示藉由將因冷凍乾燥而粗糙之狀態之角質層再浸潤於水中，而改善皮膚障壁功能之圖。
圖6係表示於將角質層薄片浸潤於液體中之時之角質層薄片的厚度變化之圖。雖於使其浸潤10%甘油水溶液及液態石蠟+甘油+增黏劑水溶液之情形時，厚度增加，且於乾燥後減少，但於浸潤100%乙醇之情形時，厚度未產生變化。
圖7係表示對經冷凍乾燥之角質層薄片，使其浸潤液體並乾燥時之透明度及角質層穿透率效果之圖。於利用10%甘油水溶液及液態石蠟+甘油+增黏劑水溶液使其浸潤之情 形時，透明度較高，角質層層穿透率亦較高，但於利用100%乙醇使其浸潤之情形時，透明度較低，角質層穿透率亦較低。
圖8係表示於濕度30%、濕度60%、及濕度90%之條件下，進行乾燥時之水分量與角質層總穿透率之關係的圖。
圖9係表示於濕度30%、濕度60%、及濕度90%之條件下，進行乾燥時之皮膚障壁功能之圖。

Claims (9)

  1. 一種化妝品之評估方法，其係以於將角質層濕潤後進行乾燥之過程中之角質層的厚度變化作為指標。
  2. 如請求項1之評估方法，其係將角質層濕潤後進行乾燥之過程中之角質層的厚度變化以角質層之厚度變化率作為指標之化妝品的評估方法，且包括以下之步驟而成：測量選自由塗抹化妝品前之皮膚角質層、單離角質層、及培養角質層薄片所組成之群中之角質層的細胞或細胞層之厚度(A)；於濕潤狀態下測量細胞或細胞層之厚度(B)；於乾燥狀態下測量細胞或細胞層之厚度(C)；藉由式1算出將角質層濕潤後進行乾燥之過程中之角質層的厚度變化率：式1)角質層之厚度變化率=(B-A)×100/A-(C-B)×100/C。
  3. 如請求項1或2之方法，其進而包括於角質層之厚度變化率為20%~150%之情形時，判定化妝品具有皮膚改善效果之步驟。
  4. 如請求項3之方法，其進而包括於角質層之厚度變化率為25%~100%之情形時，判定化妝品具有皮膚改善效果之步驟。
  5. 如請求項1或2之方法，其中上述皮膚改善效果為角質層改善效果。
  6. 如請求項3之方法，其中上述皮膚改善效果為角質層改 善效果。
  7. 如請求項5之方法，其中上述角質層改善效果為角質層透明度改善效果。
  8. 一種評估方法，其係評估適應環境之適當之化妝品的方法，且包括如下步驟：對選自由皮膚角質層、單離角質層、及培養角質層薄片所組成之群中之角質層塗抹化妝品；於所需之溫度及所需之濕度下將該化妝品乾燥；於上述乾燥步驟中，測定水分量(%)與角質層穿透率(%)，並製作曲線圖而獲得近似曲線；判定於上述步驟中獲得之近似曲線是否包含於將水塗抹於角質層上，於在上述所需之溫度與濕度30%以上且未達90%的條件下進行乾燥之步驟中獲得之近似曲線(1)與於在上述所需之溫度與濕度90%的條件下進行乾燥之步驟中獲得之近似曲線(2)之間的範圍內；以及於在上述範圍內包含近似曲線之情形時，評估該化妝品適合上述環境。
  9. 一種評估方法，其係評估適應環境之適當之化妝品的方法，且包括如下步驟：對選自由皮膚角質層、單離角質層、及培養角質層薄片所組成之群中之角質層塗抹化妝品；於所需之溫度及所需之濕度下將該化妝品乾燥；測定乾燥後之角質層穿透率；及於該角質層穿透率為85%~100%之情形時，評估該化妝品適合上述環境。
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