KR101770902B1 - 바실러스 코아굴란스로부터 부분적으로 정제된 세포외 대사물질 생산물을 생산하는 방법 및 이의 생물학적 적용 - Google Patents

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Abstract

알려진 박테리아 스트레인 바실러스 코아굴란스 ATCC 31284, 바실러스 코아굴란스 NBRC 3887 및 바실러스 코아굴란스 ATCC 7050과 99% 유전자 상동성을 나타내는, 프로바이오틱 박테리아 스트레인 바실러스 코아굴란스 SBC37-01(기탁번호: MTCC No.5856)로부터 부분적으로 정제된 세포외 대사물질 조제물을 생산하기 위한 방법이 개시된다. 또한, 미생물의 병원체의 패널에 대한 상기 세포외 대사물질 조제물의 항-미생물 프로필이 개시되며, 이는 매그놀리아 오피시날리스의 초임계 유체 추출물로부터 수득된 매그놀롤 약 1 % w/w, 모노라우린 약 38%, 및 티몰 약 61 % w/w로 이루어진 상승적인 방부제 블렌드와 함께 혼합될 때 조제물의 상승적인 항-미생물 효과를 포함한다. 상기 세포외 대사물질 조제물 단독, 또는 상기 세포외 대사물질 조제물과 방부제 블렌드의 혼합은, 또한 상승적인 방식에서 미생물의 바이오필름 형성을 억제한다.

Description

바실러스 코아굴란스로부터 부분적으로 정제된 세포외 대사물질 생산물을 생산하는 방법 및 이의 생물학적 적용 {METHOD OF PRODUCING PARTIALLY PURIFIED EXTRACELLULAR METABOLITE PRODUCTS FROM BACILLUS COAGULANS AND BIOLOGICAL APPLICATIONS THEREOF}
본 출원은 발명의 제목 "바실러스 코아굴란스로부터 부분적으로 정제된 세포외 대사물질 생산물을 생산하는 방법 및 이의 생물학적 적용"로 2013년 12월 24일에 출원된 US61920567 가출원의 정규 출원이다.
본 발명의 분야
본 발명은 일반적으로 프로바이오틱 조제물의 항-미생물 효과에 관한 것이다. 더 구체적으로는, 본 발명은 (1) 알려진 박테리아 스트레인 바실러스 코아굴란스 ATCC 31284, 바실러스 코아굴란스 NBRC 3887 및 바실러스 코아굴란스 ATCC 7050과 99% 유전자 상동성을 나타내는, 프로바이오틱 박테리아 스트레인 바실러스 코아굴란스 SBC37-01(기탁번호: MTCC No.5856)로부터 부분적으로 정제된 세포외 대사물질 조제물 (extracellular metabolite preparation)을 생산하기 위한 방법, 및 (2) 미생물 병원균의 패널(panel)에 대한 상기 세포외 대사물질 조제물의 항-미생물 프로필에 관한 것으로, 이는 매그놀리아 오피시날리스 (Magnolia officinalis)의 초임계 유체 추출물로부터 수득된 매그놀롤 약 1 % w/w, 모노라우린 약 38%, 및 티몰 약 61 % w/w로 이루어진 상승적인 방부제 블렌드와 함께 혼합되는 경우 조제물의 상승적인 항-미생물 효과를 포함한다. 세포외 대사물질 조제물 단독 또는 세포외 대사물질 조제물과 방부제 블렌드의 조합은 또한 상승적인 방법으로 미생물의 바이오필름 형성을 억제하는 것으로 보여진다.
배경기술
바실러스 코아굴란스 배양액의 정제물 또는 상청액을 포함하는 바실러스 코아굴란스 세포외 생산물은 포유류의 점막 또는 피부에 전형적으로 적용하기에 적합하여, 박테리아, 효모군, 곰팡이류, 바이러스 및 이들의 조합의 성장을 저해하는데 활용될 수 있다고 해당 기술분야에 알려져 있다 (US6905692, "프로바이오틱 바실러스 박테리아, 포자 및 세포외 생성물을 포함하는 전형적인 조성물 및 이의 용도"). 본 발명은 프로바이오틱 바실러스 코아굴란스 SBC37-01(기탁번호: MTCC No.5856)의 배양물의 세포외 성분의 정제에 관한 것으로, 상청액 자체를 단독으로, 및 매그놀리아 오피시날리스 (Magnolia officinalis)의 초임계 유체 추출물로부터 수득된 매그놀롤 약 1 % w/w, 모노라우린 약 38%, 및 티몰 약 61 % w/w로 이루어진 상승적인 방부제 블렌드와 함께 조합되는 경우와 비교하여, 강화된 항-미생물 효과를 나타내는 농축된 세포외 대사물질 조제물을 얻기 위한 것이다.
본 발명의 주요한 목적은, 다음을 개시하는 것이다.
1) 알려진 박테리아 스트레인 바실러스 코아굴란스 ATCC 31284, 바실러스 코아굴란스 NBRC 3887 및 바실러스 코아굴란스 ATCC 7050과 99% 유전자 상동성을 나타내는, 프로바이오틱 박테리아 스트레인 바실러스 코아굴란스 SBC37-01(기탁번호: MTCC No.5856)로부터 부분적으로 정제된 세포외 대사물질 조제물을 생산하는 방법.
2) 매그놀리아 오피시날리스 (Magnolia officinalis)의 초임계 유체 추출물로부터 수득된 매그놀롤 약 1 % w/w, 모노라우린 약 38%, 및 티몰 약 61 % w/w로 이루어진 상승적인 방부제 블렌드와 함께 혼합되는 경우 조제물의 상승적인 항-미생물 효과를 포함하는, 미생물 병원균의 패널에 대한 상기 세포외 대사물질 조제물의 항-미생물 프로필.
3) 상기 세포외 대사물질 조제물 단독으로의, 또는 매그놀리아 오피시날리스 (Magnolia officinalis)의 초임계 유체 추출물로부터 수득된 매그놀롤 약 1 % w/w, 모노라우린 약 38%, 및 티몰 약 61 % w/w로 이루어진 상승적인 방부제 블렌드와 함께 조합으로의 잠재적인 미생물 바이오필름 저해력.
본 발명은 상술한 목적을 이행하고 관련된 이익을 더 제공한다.
본 발명의 요약
본 발명은 다음을 기술한다:
(1) 알려진 박테리아 스트레인 바실러스 코아굴란스 ATCC 31284, 바실러스 코아굴란스 NBRC 3887 및 바실러스 코아굴란스 ATCC 7050과 99% 유전자 상동성을 나타내는, 프로바이오틱 박테리아 스트레인 바실러스 코아굴란스 SBC37-01(기탁번호: MTCC No.5856)로부터 부분적으로 정제된 세포외 대사물질 조제물 (extracellular metabolite preparation)을 생산하는 방법;
(2) 매그놀리아 오피시날리스 (Magnolia officinalis)의 초임계 유체 추출물로부터 수득된 매그놀롤 약 1 % w/w, 모노라우린 약 38%, 및 티몰 약 61 % w/w로 이루어진 상승적인 방부제 블렌드와 함께 혼합되는 경우 조제물의 상승적인 항-미생물 효과를 포함하는, 미생물 병원균의 패널에 대한 상기 세포외 대사물질 조제물의 항-미생물 프로필 및
(3) 상기 세포외 대사물질 조제물 단독으로,의 또는 매그놀리아 오피시날리스 (Magnolia officinalis)의 초임계 유체 추출물로부터 수득된 매그놀롤 약 1 % w/w, 모노라우린 약 38%, 및 티몰 약 61 % w/w로 이루어진 상승적인 방부제 블렌드와 함께 혼합으로의 잠재적인 미생물 바이오필름 저해력.
(4) 상기 세포외 대사물질 조제물 단독으로, 또는 매그놀리아 오피시날리스 (Magnolia officinalis)의 초임계 유체 추출물로부터 수득된 매그놀롤 약 1 % w/w, 모노라우린 약 38%, 및 티몰 약 61 % w/w로 이루어진 상승적인 방부제 블렌드와 함께 혼합으로의 수-불용성 글루칸 내 부착 S.뮤탄스에 대한 항-산생 효과 (anti-acidogenic effect)와 항미생물 활성.
본 발명은 다음의 이점을 제공한다.
1) 알려진 박테리아 스트레인 바실러스 코아굴란스 ATCC 31284, 바실러스 코아굴란스 NBRC 3887 및 바실러스 코아굴란스 ATCC 7050과 99% 유전자 상동성을 나타내는, 프로바이오틱 박테리아 스트레인 바실러스 코아굴란스 SBC37-01(기탁번호: MTCC No.5856)로부터 부분적으로 정제된 세포외 대사물질 조제물을 생산하는 정제방법의 개시;
2) 매그놀리아 오피시날리스 (Magnolia officinalis)의 초임계 유체 추출물로부터 수득된 매그놀롤 약 1 % w/w, 모노라우린 약 38%, 및 티몰 약 61 % w/w로 이루어진 상승적인 방부제 블렌드와 함께 혼합되는 경우 상기 부분적으로 정제된 세포외 조제물의 상승적인 항-미생물 효과를 포함하는, 미생물 병원균의 패널에 대하여 부분적으로 정제된 항-미생물 프로필의 개시.
3) 상기 세포외 대사물질 조제물 단독의, 또는 매그놀리아 오피시날리스 (Magnolia officinalis)의 초임계 유체 추출물로부터 수득된 매그놀롤 약 1 % w/w, 모노라우린 약 38%, 및 티몰 약 61 % w/w로 이루어진 상승적인 방부제 블렌드와 함께 조합의 잠재적인 미생물 바이오필름 저해력의 개시.
4) 상기 세포외 대사물질 조제물 단독으로의, 또는 매그놀리아 오피시날리스 (Magnolia officinalis)의 초임계 유체 추출물로부터 수득된 매그놀롤 약 1 % w/w, 모노라우린 약 38%, 및 티몰 약 61 % w/w로 이루어진 상승적인 방부제 블렌드와 함께 조합으로의, 수-불용성 글루칸 내 부착 S.뮤탄스에 대한 항-산생 효과 (anti-acidogenic effect)와 항미생물 활성의 개시.
본 발명의 다른 이점들과 특징들은, 예시에 의하여, 발명의 원리를 설명하는, 이미지와 함께 결합되어, 다음의 더 자세한 기술로부터 명확해질 수 있을 것이다.
도 1은, 알려진 박테리아 스트레인 바실러스 코아굴란스 ATCC 31284, 바실러스 코아굴란스 NBRC 3887 및 바실러스 코아굴란스 ATCC 7050과 99% 유전자 상동성을 나타내는, 프로바이오틱 박테리아 스트레인 바실러스 코아굴란스 SBC37-01(기탁번호: MTCC No.5856)로부터 부분적으로 정제된 세포외 대사물질 조제물을 생산하는 정제방법에 대한 공정 흐름도를 나타낸다.
도 2는, 상승적인 항-미생물 연구를 위한 체커보드 브로스 마이크로-희석 방법 (checkerboard broth micro-dilution method)을 도시한 도면을 나타낸다.
도 3a-3b, 3c-3d, 3e-3f, 3g-3h, 3i-3j, 3k-3l, 3m-3n, 3o-3p은, 각각, 슈도모나스 아에루기노사 (Pseudomonas aeruginosa) ATCC 9027, 대장균 (Escherichia coli) ATCC 25922, 살모넬라 아보니 (Salmonella abony) NCIM 2257, 스트렙토코커스 뮤탄스 (Streptococcus mutans) MTCC 1943, 프로피오니박테리움 아크네스 (Propionibacterium acnes) ATCC 11827, 스타필로코커스 아우레우스 (Staphylococcus aureus) ATCC 29213, 스타필로코커스 에피데르미디스 (Staphylococcus epidermidis) ATCC 14990 및 바실러스 세레우스 (Bacillus cereus) ATCC 14579 생존력과 성장과 조합으로, 및 B.코아굴란스 SBC37-01(기탁번호: MTCC No.5856) 단독으로, 및 천연 방부제 블렌드의 효과를 도시한 도면을 나타낸다.
도 4a, 4b, 4b, 4d 및 4e는, 각각, 슈도모나스 아에루기노사 ATCC 9027, 대장균 ATCC 25922, 스트렙토코커스 뮤탄스 MTCC 1943, 스타필로코커스 아우레우스 ATCC 29213 및 스타필로코커스 에피데르미디스 ATCC 14990의 바이오필름 형성과 조합으로, 및 B. 코아굴란스 SBC37-01(기탁번호: MTCC No.5856)의 세포외 대사물질 단독으로, 및 천연 방부제 블렌드의 효과를 도시한 도면이다.
도 5a 및 5b는, 각각, 2% 수크로스 존재 내에서 S.뮤탄스 MTCC 1943의 수불용성 글루칸의 형성 및 성장/pH 드롭 상에서 B. 코아굴란스 SBC37-01(기탁번호: MTCC No.5856)의 세포외 대사물질과 천연 방부제 블렌드의 효과를 도시한 도면이다.
가장 바람직한 실시예에서, 본 발명은, 알려진 박테리아 스트레인 바실러스 코아굴란스 ATCC 31284, 바실러스 코아굴란스 NBRC 3887 및 바실러스 코아굴란스 ATCC 7050과 99% 유전자 상동성을 나타내는, 프로바이오틱 박테리아 스트레인 바실러스 코아굴란스 SBC37-01(기탁번호: MTCC No.5856)로부터 부분적으로 정제된 세포외 대사물질 조제물 (extracellular metabolite preparation)을 생산하기 위한 정제 방법에 관한 것으로서, 상기 정제 방법은 다음의 단계를 포함함:
1. 알려진 박테리아 스트레인 바실러스 코아굴란스 ATCC 31284, 바실러스 코아굴란스 NBRC 3887 및 바실러스 코아굴란스 ATCC 7050과 99% 유전자 상동성을 나타내는 바실러스 코아굴란스 SBC37-01(기탁번호: MTCC No.5856)의 배양물을, 옥수수 침지 분말 배지 또는 0.5 %의 트윈 80을 포함하는 MRS 브로스 또는 글루코스 이스트 추출 아세테이트 브로스 배지의 1.0 리터로 접종하는 단계 (Inoculating a culture of Bacillus coagulans MTCC 5856 exhibiting 99% genetic homology with the known bacterial strains Bacillus coagulans ATCC 31284, Bacillus coagulans NBRC 3887 and Bacillus coagulans ATCC 7050 into 1.0 liter of Glucose Yeast Extract Acetate broth medium (HiMedia, Mumbai India) or MRS broth containing 0.5% tween 80 or Corn steep powder media);
2) 단계 1의 접종된 배지 내에서 24 내지 48시간 동안 37 ℃에서 120 rpm으로 발효시키는 단계;
3) 단계 2의 발효 브로스 (fermentation broth)을 4000 내지 7000 rpm에서 원심 분리하는 단계;
4) 50 ℃에서 회전 농축기를 사용하여 단계 3의 상청액을 10 배 농축하는 단계;
5) 냉각된 아세톤 150 ml를 한 방울씩, 단계 4의 10배 농축된 상청액 100 ml에 첨가하는 단계에, 이어서 혼합하는 단계;
6) 단계 5의 혼합물을 0 ℃에서 30분 동안 인큐베이션하고 이어서 7000 내지 8000 rpm에서 원심분리하는 단계;
7) 단계 6에서 수득된 펠렛을 버리고, 60 % 아세톤 포화된 상청액을 모으는 단계(~ 200ml);
8) 단계 7의 상기 아세톤 포화된 상청액을 회전 농축기로 50 ml까지 농축하는 단계;
9) 4N HCl을 사용하여 pH를 5.0까지 조정하고, 여과되고 (0.22 마이크론; Millex, Millipore, India) 추가적인 사용전까지 -20 ℃에서 보관되는 단계;
10) 단계 8의 상청액을 동결 건조/스프레이 건조/트레이 건조하는 단계.
또 다른 가장 바람직한 실시예에서, 본 발명은 타겟 미생물의 억제 공정에 관한 것으로, 상기 공정은, 알려진 박테리아 스트레인 바실러스 코아굴란스 ATCC 31284, 바실러스 코아굴란스 NBRC 3887 및 바실러스 코아굴란스 ATCC 7050과 99% 유전자 상동성을 나타내는, 프로바이오틱 박테리아 스트레인 바실러스 코아굴란스 SBC37-01(기탁번호: MTCC No.5856)로부터 부분적으로 정제된 세포외 대사물질 조제물의 유효 농도, 및 타겟 미생물 균체를 접촉시키는 단계를 포함한다(In another most preferred embodiment, the present invention relates to a process of microbial control, said process comprising the step of bringing into contact effective concentrations of a partially purified extracellular metabolite preparation from probiotic bacterial strain Bacillus coagulans SBC37-01 (Deposited in the Microbial Type Culture Collection and Gene Bank and was assigned the strain number MTCC 5856) exhibiting 99% genetic homology with the known bacterial strains Bacillus coagulans ATCC 31284, Bacillus coagulans NBRC 3887 and Bacillus coagulans ATCC 7050 and a target microbial cell). 더 상세한 실시예에서, 상기 타겟 미생물 균체는 슈도모나스 아에루기노사 (Pseudomonas aeruginosa),대장균 (Escherichia coli), 스타필로코커스 아우레우스 (Staphylococcus aureus), 스타필로코커스 에피데르미디스 (Staphylococcus epidermidis),스트렙토코커스 뮤탄스 (Streptococcus mutans), 프로피오니박테리움 아크네스 (Propionibacterium acnes), 바실러스 세레우스 (Bacillus cereus) 및 살모넬라 아보니 (Salmonella abony)를 포함하는 군으로부터 선택되는 어느 하나일 수 있다.
또 다른 가장 바람직한 실시예에서, 본 발명은 타겟 미생물의 억제 공정에 관한 것으로, 상기 공정은, 알려진 박테리아 스트레인 바실러스 코아굴란스 ATCC 31284, 바실러스 코아굴란스 NBRC 3887 및 바실러스 코아굴란스 ATCC 7050과 99% 유전자 상동성을 나타내는, 프로바이오틱 박테리아 스트레인 바실러스 코아굴란스 SBC37-01(기탁번호: MTCC No.5856)로부터 부분적으로 정제된 세포외 대사물질 조제물 (extracellular metabolite preparation)과 매그놀리아 오피시날리스 (Magnolia officinalis)의 초임계 유체 추출물로부터 수득된 매그놀롤 약 1 % w/w, 모노라우린 약 38%, 및 티몰 약 61 % w/w로 이루어진 상승적인 방부제 블렌드로 필수적으로 구성된 조제물의 유효 농도에 미생물 균체를 접촉시키는 단계를 포함한다.
또 다른 가장 바람직한 실시예에서, 본 발명은 바이오필름 생산 미생물에 의한 바이오필름 형성을 저해하는 공정에 관한 것으로, 상기 공정은, 알려진 박테리아 스트레인 바실러스 코아굴란스 ATCC 31284, 바실러스 코아굴란스 NBRC 3887 및 바실러스 코아굴란스 ATCC 7050과 99% 유전자 상동성을 나타내는, 프로바이오틱 박테리아 스트레인 바실러스 코아굴란스 SBC37-01(기탁번호: MTCC No.5856)로부터 부분적으로 정제된 세포외 대사물질 조제물 (extracellular metabolite preparation) 단독으로, 또는 매그놀리아 오피시날리스 (Magnolia officinalis)의 초임계 유체 추출물로부터 수득된 매그놀롤 약 1 % w/w, 모노라우린 약 38%, 및 티몰 약 61 % w/w로 이루어진 상승적인 방부제 블렌드와 혼합된 상기 조제물로 필수적으로 구성된 조제물, 및 바이오필름 생산 미생물 균체를 접촉시키는 단계를 포함한다.
다음의 예시들은 본 발명의 예시적인 실시예를 설명하기 위하여 여기 함께 나타낸다.
실시예 1
미생물 및 배양 조건
본 연구에서 사용된 박테리아 스트레인은 스트렙토코커스 뮤탄스 MTCC 1943, 스타필로코커스 아우레우스 ATCC 29213, 스타필로코커스 에피데르미디스 ATCC 14990, 대장균 ATCC 25922, 슈도모나스 아에루기노사 ATCC 9027, 살모넬라 아보니 NCIM 2257 및 바실러스 세레우스 ATCC 14579를 포함하였다. 대조군 스트레인(reference strains)은 ATCC (American Type Culture Collection, Manassas, VA, USA), MTCC (IMTECH, Chandigarh, India) 및 NCIM (National Collection of Industrial Microorganisms, Pune, India)로부터 구입되었다. S. 뮤탄스 및 P.아크네스 는 브레인-하트 인퓨젼 아가 (brain-heart infusion agar) (BHI; Difco Laboratories, Detroit, MI, USA) 상에서 유지되었고, 각각 클로스트리달 아가 (clostridial agar) (RCA; HiMedia, Mumbai, India)를 보강하였다. S. 아우레우스, S. 에피데르미디스, E. coli, P. 아에루기노사, S. 아보니 및 B. 세레우스는 트립티케이스 소이 아가 (trypticase soy agar) (Difco Laboratories) 37 ℃에서 유지되었다. S. 뮤탄스 및 P.아크네스는 혐기적으로 (80% N2, 10% H2 및 10% CO2) 37 ℃에서 48 시간이상 혐기 챔버 (Coy Laboratory Products Inc, Michigan)에서 인큐베이션되었다. 본 발명에 사용된 바실러스 코아굴란스 SBC37-01(기탁번호: MTCC No.5856)는 Microbial Type Culture Collection, Chandigarh, India에 공탁되고 스트레인이 바실러스 코아굴란스 MTCC 5856로 배정되었다는 특징이 있다.
기법 - 시너지 연구를 위한 체커보드 방법
이것은 인 비트로 (in vitro)에서 항미생물 조합에 접근하기 위하여 가장 빈번하게 사용되는 방법이다. 용어 "체커보드(checkerboard)"는 테스트되는 두 가지 약의 다양한 희석에 의하여 형성되는 패턴 (튜브 또는 미세적정 플레이트 웰(microtiter plate wells))로 언급된다(Eliopoulos GM, Moellering RC: Antimicrobial combinations. In Antibiotics in laboratory medicine. Edited by Lorian V. Baltimore, The Williams & Wilkins Co; 1991:432-492). 본 연구에서는, 체커보드는 칼럼(column)들로 구성되고, 각각의 튜브 (또는 웰)이 X-축(가로)을 따라서 희석되는 프로바이오틱 박테리아 스트레인 바실러스 코아굴란스 SBC37-01(기탁번호: MTCC No.5856)로부터 부분적으로 정제된 세포외 조제물이 동일한 양을 포함하고, 각각의 튜브 (또는 웰)이 Y-축에 따라 희석되는 방부제 블렌드의 동일한 양을 포함한다(도 2). 결과적으로 체커보드의 각각의 사각형 (하나의 튜브/웰 또는 플레이트로 표현되는)는, 프로바이오틱 박테리아 스트레인 바실러스 코아굴란스 SBC37-01(기탁번호: MTCC No.5856)로부터 부분적으로 정제된 세포외 조제물과 방부제 블렌드의 독특한 조합을 포함하였다. 본 연구의 방부제 블렌드의 농도 범위는 2000 μg/ml 내지 31.25 μg/ml 이고 경우에 따라서 더 낮았으며, 반면에 프로바이오틱 박테리아 스트레인 바실러스 코아굴란스 SBC37-01(기탁번호: MTCC No.5856)로부터 부분적으로 정제된 세포외 조제물은 8 % (v/v) 내지 0.015 % (v/v)의 범위로 테스트되었다. 이러한 체커보드 기법은 액상 또는 반고체 (아가) 배지 (media)와 함께 수행될 수 있다. BHI 브로스 (BHI broth) 및 RC 브로스 (RC broth)이 S. mutans and P. acnes 각각에 사용되었고, 플레이트들은 혐기적으로 (80% N2, 10% H2 및 10% CO2) 37 ℃에서 48시간 이상 혐기 챔버 내에서 인큐베이션 되었다. 멜로 힌톤 브로스 (Mueller hinton broth: Difco)이 S. 아우레우스, S. 에피데르미디스, E. coli, P. 아에루기노사, S. 아보니 및 B. 세레우스 에 사용되었고, 플레이트들은 37 ℃에서 18 시간 동안 인큐베이션되었다.
사멸 역학 (Kill kinetics)
스트레인 바실러스 코아굴란스 SBC37-01(기탁번호: MTCC No.5856)로부터 부분적으로 정제된 세포외 대사물질 조제물 및 방부제 블렌드의 시간-사멸 연구가 P. 아에루기노사, 대장균, S., S.에피데르미디스, S.뮤탄스, P.아크네스, B.세레우스 및 살모넬라 아보니에 대하여 수행되었고, 이전에 기술되었듯이(Eliopoulus GM, Moellering RCJ. Antimicrobial combinations. In: Lorian V, ed. Antibiotics in Laboratory Medicine, 4th edn. Baltimore: Williams & Wilkins, 1996; 330-6.), 시간-사멸 곡선 방법(time-kill curve method)을 사용하여 평가되었다. 박테리아 현탁액 (suspension)은 대수기 (logarithmic phase) (1×106 cfu/ml) 에서 접종원으로 사용되었다. 스트레인 바실러스 코아굴란스 SBC37-01(기탁번호: MTCC No.5856)로부터 부분적으로 정제된 세포외 대사물질 조제물 및 방부제 블렌드는 단독으로, 및 서로 다른 농도에서 조합으로 테스트되었으며, 체커보드 어쎄이로 측정되었다. cfu/ml 로서 세포 개체군은 각각의 배양액에서 3번에 걸쳐 단계 희석 방법으로 측정되었고 각각의 성장 조건에서 인큐베이션 되었다. 생균 측정 (viable count) 및 흡광도 (OD610)은 0에서 (비처리된 대조군), 37 ℃에서 24시간 이뤄졌다. 생균 측정은 Log10 cfu/ml 로 표현되었으며, 흡광도는 610 nm에서 OD 값으로 표현되었다.
바이오필름 민감성 어쎄이
방부제 블렌드 및 스트레인 바실러스 코아굴란스 SBC37-01(기탁번호: MTCC No.5856)로부터 부분적으로 정제된 세포외 대사물질 조제물 단독으로의 및 조합으로의 바이오필름 저해 효과는 극소희석 (microdilution method; Wei et al. Journal of Antimicrob. Chemother. 2006. 57:1100-1109.)에 의하여 S. 뮤탄스,대장균, S.아우레우스, S.에피데르미디스 및 P. 아에루기노사 에 대하여 실험되었다. 이러한 방법은 플라크톤 세포 (planktonic cells)를 위한 체커보드 방법과 유사하였다. S. 뮤탄스 바이오필름 어쎄이를 위하여, 2% 수크로스로 보충된 BHI 브로스 (BHI broth)이 사용되었다. 다른 유기체의 경우, 2% 글루코스로 보충된 TSB 가 본 연구에 사용되었다. 박테리아 현탁액은 오버나이트-성장된 배양으로부터 준비되었고, 현탁액의 혼탁도는 610 nm에서 광학밀도 (A610) 0.7 (1 x 109 CFU/ml)로 조정되었다. 본 연구의 방부제 블렌드의 농도 범위는 2000 μg/ml 내지 31.25 μg/ml이고 일부 경우에서는 더 낮은 농도였던 반면, 스트레인 바실러스 코아굴란스 SBC37-01(기탁번호: MTCC No.5856)로부터 부분적으로 정제된 세포외 대사물질 조제물은 8 % (v/v) 내지 0.015 % (v/v)의 범위에서 테스트 되었다. 신선한 배지 브로스 (media broth)의 40 마이크로리터가 각각의 웰에 첨가되었고, 이어서 상기-언급된 현탁액의 60 ㎕이 상기 플레이트의 각각의 웰에 첨가되었다. 결과적으로 각각의 웰 내에서 6 x 107 CFU/ml의 마지막 접종물을 초래하였다; 37 ℃에서 48 시간 동안 인큐베이션 후, 각각의 웰로부터 배양 상청액을 다른 곳에 붓고, 플랑크톤 세포 (planktonic cells)는 인산염-완충된 살린 (phosphate-buffered saline (PBS; pH 7.2))으로 웰을 세척하여 제거되었다. 바이오필름은 15분 동안 메탄올로 고정되었고, 그런 다음에 상온에서 공기 건조되었다. 건조된 플레이트의 웰들은 0.1% (w/v) 크리스탈 바이올렛 (crystal violet) (Sigma Chemical Co., St Louis, MO)으로 10분 동안 염색되었고, 음성 대조군 (negative control) 웰들이 무색을 나타낼 때까지 물로 완전히 헹궈졌다. 바이오필름 형성은 95 % 에탄올 200 ㎕를 크리스탈 바이올렛-염색된 웰에 추가함으로써 정량되었고 595 nm (A595) 에서 흡광도를 기록하였다. 바이오필름 저해의 퍼센트는 방정식 (테스트 제제로 처리된 바이오필름의 A595/비-처리된 대조군의 A595)×100 을 사용하여 계산되었다. 테스트 제제 없는 배양은 비-처리 대조군으로 사용되었다.
수-불용성 글루칸 내 부착 S. 뮤탄스 (adherent S. mutans )에 대한 항미생물 활성
S. 뮤탄스 MTCC 1943의 수-불용성 글루칸의 형성은 이전에 언급된 방법 (Katsura et al., Antimicrob. Agents Chemother. 2001. 45:3009-3013)으로 수행되었다. 간략하게는, S. 뮤탄스 MTCC 1943 (~ 1×108 cells/ml)의 배양액 100 ㎕의 엘리쿼트 (aliquots)는, 2% 수크로스 (w/v)를 함유하는 신선한 BHI 브로스의 10 ml로 테스트 튜브 내에서 인큐베이션되었고, 30°경사에서 24시간 동안 37 ℃에서 인큐베이션되었다. 플랑크톤 세포를 포함하는 유체는 서서히 제거되었다. S. 뮤탄스 MTCC 1943의 세포를 포함하는 수-불용성 글루칸은 살균수 (sterile water) 10 ml로 서서히 세척되었고, 스트레인 바실러스 코아굴란스 SBC37-01(기탁번호: MTCC No.5856)로부터 부분적으로 정제된 세포외 대사물질 조제물 및 방부제 블렌드를 단독으로 및 조합으로 함유하는 인산염 완충액 (10 mM, pH 5.0) 10 ml에서 재현탁되었고, 이어서 5분 동안 37 ℃에서 인큐베이션 되었다. 상기 혼합물은 살균 살린 sterile saline: 0.89% NaCl, w/v)으로 다시 세척되었고, 2% 수크로스 (w/v)를 함유하는 신선한 BHI 브로스 10 ml로 처리된 세포의 재현탁이 이어졌다. 37 ℃에서 6, 12, 18 및 24 시간동안 세포들의 인큐베이션 후, 배양액에 의하여 생성된 산이 pH 미터로 측정되었다. S. 뮤탄스 MTCC 의 자유 세포를 함유하는 유체는 서서히 제거되었다. 수 불용성 글루칸은 1N NaOH 용액 10 ml에서 재현탁되었고 균질화되었다: 혼탁도는 610 nm에서 측정되었다.
결과
표 1은, 부분적으로 정제된 세포외 대사물질 (Partially Purified Extracellular Metabolites: PPEM) 또는 천연 방부제 블렌드 (Natural Preservative Blend: NPB)를 포함하는 A. 포뮬레이션 (A. formulations); 및 부분적으로 정제된 세포외 대사물질 (PPEM) 과 천연 방부제 블렌드 (NPB) 둘 모두를 병합한 B. 포뮬레이션 (B. formulations)에 접촉한 경우, 인간의 미생물 병원체의 감소 비율 (fold reduction of human microbial pathogens)을 나타낸 것이다. 부분적으로 정제된 세포외 대사물질 (PPEM) 과 천연 방부제 블렌드 (NPB) 둘 모두를 병합한 공식은, 수도모나스 아에루기노사 병원체에 대하여 8배의 상당한 감소, 및 대장균 병원체에 대하여 4배의 감소를 유발한다.
[표 1. 인간 병원체에 대한 프로바이오틱 스트레인 바실러스 코아굴란스 SBC37-01(기탁번호: MTCC No.5856)의 부분적으로 정제된 세포외 대사물질 및 천연 방부제 블렌드의 체커보트 테스팅의 결과]
Figure 112015084479697-pct00001
본 발명은 바람직한 실시예에 관하여 기술되었으나, 본 발명은 이에 제한되지 않는다는 것이 해당 기술분야의 통상의 기술자에게 명확하게 이해될 것이다. 또한, 본 발명의 범위는 오직 덧붙인 청구항과 결합하여 해석될 것이다.

Claims (11)

  1. 프로바이오틱 박테리아 스트레인 바실러스 코아굴란스 SBC37-01(기탁번호: MTCC No.5856)으로부터 세포외 대사물질을 분리하기 위한 정제 방법으로서, 다음의 단계를 포함하는 정제 방법:
    a) 바실러스 코아굴란스 SBC37-01(기탁번호: MTCC No.5856)의 배양물을, i) 옥수수 침지 분말 배지 또는 ii) 0.5%의 트윈 80을 포함하는 1) MRS 브로스(broth) 또는 2) 글루코스 이스트 추출 아세테이트 브로스 배지 1.0 리터에 접종하여 박테리아 발효를 개시하는 단계;
    b) 단계 a의 접종된 배지 내에서 24 내지 48시간 동안 37 ℃에서 120 rpm으로 박테리아 박효를 진행하는 단계;
    c) 단계 b의 발효 브로스를 4000 내지 7000 rpm에서 원심분리하고 상청액을 모으는 단계;
    d) 50 ℃에서 회전 농축기를 사용하여 단계 c의 상청액을 10 배 농축하는 단계;
    e) 냉각된 아세톤 150 ml를 한 방울씩 단계 d의 10배 농축된 상청액 100 ml에 첨가하고 이어서 혼합하여 상청액-아세톤 혼합물을 형성하는 단계;
    f) 단계 e의 상청액-아세톤 혼합물을 0 ℃에서 30분 동안 인큐베이션하고 이어서 7000 내지 8000 rpm에서 원심분리하여 펠렛을 모으는 단계;
    g) 단계 f에서 수득된 펠렛을 버리고, 60 % v/v 아세톤 포화된 상청액(200ml)을 모으는 단계;
    h) 단계 g의 상기 아세톤 포화된 상청액을 회전 농축기로 50 ml까지 농축하는 단계;
    i) 4N HCl을 사용하여 단계 h의 상기 상청액의 pH를 5.0까지 조정하고, 여과되고 (0.22 마이크론; Millex, Millipore, India) 추가적인 사용까지 -20 ℃에서 보관되는 단계;
    j) 단계 i의 상청액을 동결 건조하여 프로바이오틱 박테리아 스트레인 바실러스 코아굴란스 SBC37-01(기탁번호: MTCC No.5856)의 세포외 대사물질 조제물을 수득하는 단계.
  2. 제1항의 정제 방법에 따라 분리된 프로바이오틱 박테리아 스트레인 바실러스 코아굴란스 SBC37-01(기탁번호: MTCC No.5856) 유래의 세포외 대사물질 조제물을 포함하는 조제물 및 타겟 미생물 균체를 접촉시켜 상기 타겟 미생물 억제 효과를 유발하는 단계를 포함하는, 타겟 미생물의 억제 공정.
  3. 제2항에 있어서,
    상기 타겟 미생물 균체는, 슈도모나스 아에루기노사 (Pseudomonas aeruginosa), 대장균 (Escherichia coli), 스타필로코커스 아우레우스 (Staphylococcus aureus), 스타필로코커스 에피데르미디스 (Staphylococcus epidermidis),스트렙토코커스 뮤탄스 (Streptococcus mutans), 프로피오니박테리움 아크네스 (Propionibacterium acnes), 바실러스 세레우스 (Bacillus cereus) 및 살모넬라 아보니 (Salmonella abony)를 포함하는 군으로부터 선택되는 하나인 것인, 공정.
  4. 제2항에 있어서,
    상기 조제물의 전체 부피를 기준으로, 상기 세포외 대사물질 조제물의 농도가 0.015% v/v 내지 8% v/v인, 공정.
  5. 모노라우린 38% w/w, 티몰 61 % w/w 및 매그놀리아 오피시날리스의 초임계 유체 추출물로부터 수득된 매그놀롤 1 % w/w로 이루어진 조성물, 및 제1항의 정제 방법에 따라 분리된 프로바이오틱 박테리아 스트레인 바실러스 코아굴란스 SBC37-01(기탁번호: MTCC No.5856) 유래의 세포외 대사물질 조제물을 포함하는 조제물에 타겟 미생물 균체를 접촉시켜 상기 타겟 미생물 억제 효과를 유발하는 단계를 포함하는, 타겟 미생물의 억제 공정.
  6. 제5항에 있어서,
    상기 타겟 미생물 균체는 슈도모나스 아에루기노사 (Pseudomonas aeruginosa), 대장균 (Escherichia coli), 스타필로코커스 아우레우스 (Staphylococcus aureus), 스타필로코커스 에피데르미디스 (Staphylococcus epidermidis),스트렙토코커스 뮤탄스 (Streptococcus mutans), 프로피오니박테리움 아크네스 (Propionibacterium acnes), 바실러스 세레우스 (Bacillus cereus) 및 살모넬라 아보니 (Salmonella abony)를 포함하는 군으로부터 선택되는 하나인 것인, 공정.
  7. 제5항에 있어서,
    상기 조성물의 농도가 31.25㎍/㎖ 내지 2,000㎍/㎖인, 공정.
  8. 제5항에 있어서,
    상기 조제물의 전체 부피를 기준으로, 상기 세포외 대사물질 조제물의 농도가 0.015% v/v 내지 8% v/v인, 공정.
  9. 제1항의 정제 방법에 따라 분리된 프로바이오틱 박테리아 스트레인 바실러스 코아굴란스 SBC37-01(기탁번호: MTCC No.5856) 유래의 세포외 대사물질 조제물 단독으로, 또는 모노라우린 38% w/w, 티몰 61 % w/w 및 매그놀리아 오피시날리스의 초임계 유체 추출물로부터 수득된 매그놀롤 1 % w/w로 이루어진 조성물과 혼합된 상기 조제물을 포함하는 조제물, 및 바이오필름 생산 미생물 균체를 접촉시켜 상기 바이오필름 형성 저해 효과를 유발하는 단계를 포함하는, 바이오필름 생산 미생물에 의한 바이오필름 형성을 저해하는 공정.
  10. 제9항에 있어서,
    상기 바이오필름 생산 미생물 균체는 슈도모나스 아에루기노사 (Pseudomonas aeruginosa), 대장균 (Escherichia coli), 스타필로코커스 아우레우스 (Staphylococcus aureus), 스타필로코커스 에피데르미디스 (Staphylococcus epidermidis),스트렙토코커스 뮤탄스 (Streptococcus mutans)를 포함하는 군으로부터 선택되는 하나인 것인, 공정.
  11. 수크로스(sucrose)의 존재 내에서 스트렙토코커스 뮤탄스 (Streptococcus mutans) 바이오필름의 축적 및 pH 저하를 방지하는 공정으로서,
    상기 공정은, 제1항의 정제 방법에 따라 분리된 프로바이오틱 박테리아 스트레인 바실러스 코아굴란스 SBC37-01(기탁번호: MTCC No.5856) 유래의 세포외 대사물질 조제물 단독으로, 또는 모노라우린 38% w/w, 티몰 61 % w/w 및 매그놀리아 오피시날리스의 초임계 유체 추출물로부터 수득된 매그놀롤 1 % w/w로 이루어진 조성물과 혼합된 상기 조제물을 포함하는 조제물, 및 바이오필름 또는 플랑크 생산 스트렙토코커스 뮤탄스를 접촉시켜 바이오필름의 축적 및 pH 저하를 방지하는 단계를 포함하는 것인, 공정.
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Families Citing this family (21)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US10624934B2 (en) 2014-03-06 2020-04-21 Research Institute At Nationwide Children's Hospital Prebiotic formulations
EP3536168A3 (en) 2014-03-06 2019-10-16 The Research Institute at Nationwide Children's Hospital Probiotic formulations and methods for use
KR102089566B1 (ko) * 2014-08-29 2020-03-16 무하메드 마제에드 유산균의 생균수를 증진시키기 위한 방법 및 이의 유용한 조성물
JP6629875B2 (ja) * 2016-01-07 2020-01-15 サミ ラブズ リミテッド バチルス・コアグランスｓｂｃ３７−０１，ｍｔｃｃ５８５６を使用する下痢型過敏性腸症候群の治療管理の方法
JP6908633B2 (ja) * 2016-06-30 2021-07-28 サミ ラブズ リミテッド 大鬱病性障害の管理のためのバチルス コアグランス ｍｔｃｃ ５８５６
WO2018183355A1 (en) * 2017-03-27 2018-10-04 Research Institute At Nationwide Children's Hospital Prebiotic formulations
NZ758787A (en) * 2017-05-26 2024-01-26 Sami Labs Ltd Beverage compositions containing bacillus coagulans mtcc 5856
WO2018226554A1 (en) * 2017-06-06 2018-12-13 Muhammed Majeed Skin care applications of extracellular metabolites from bacillus coagulans
EP3634361A4 (en) * 2017-06-06 2021-02-24 Sami Labs Limited HAIR CARE COMPOSITIONS CONTAINING AN EXTRACELLULAR METABOLITE PREPARATION FROM BACILLUS COAGULANS
US10966919B2 (en) * 2017-06-06 2021-04-06 Sami Labs Limited Anti-aging potential of extracellular metabolite isolated from Bacillus coagulans MTCC 5856
WO2018226271A1 (en) * 2017-06-09 2018-12-13 Muhammed Majeed Hypolipidemic effects of bacillus coagulans
US11549950B2 (en) 2017-07-31 2023-01-10 The Trustees Of Princeton University Cryptic metabolites and method for activating silent biosynthetic gene clusters in diverse microorganisms
EP3675812A4 (en) * 2017-08-31 2021-06-02 Sami Labs Limited ANTI-POLLUTION COMPOSITIONS CONTAINING BACILLUS COAGULANS
KR102515209B1 (ko) * 2017-09-21 2023-03-29 새미-사빈사 그룹 리미티드 바실러스 코아귤런스를 함유하는 알코올 음료 조성물
CN107937447B (zh) * 2017-11-10 2021-04-13 嘉兴欣贝莱生物科技有限公司 一种生物合成厚朴酚的方法
CA3083777C (en) * 2017-12-04 2024-03-26 Sami Labs Limited Compositions for microbial anti-adhesion
CA3155357A1 (en) * 2018-04-30 2019-11-07 Sami Labs Limited Modulation of immune function by bacillus coagulans
WO2020144207A1 (en) * 2019-01-10 2020-07-16 Evonik Operations Gmbh Fermentation broths and their use
BR112021022916A2 (pt) * 2019-05-13 2022-01-18 Sami Sabinsa Group Ltd Bactérias produtoras de ácido lático frutofílico
CN114958676B (zh) * 2022-06-15 2024-02-20 扬州大学 一种基于芽孢杆菌发酵产物的抗菌剂及其制备方法和应用
CN116064330B (zh) * 2023-01-10 2024-05-03 北京工商大学 凝结芽孢杆菌及其应用

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2002512615A (ja) * 1997-04-18 2002-04-23 ガネデン バイオテック，インコーポレイテッド 微生物感染を予防または制御するための共生Ｂａｃｉｌｌｕｓ芽胞の局所的使用
JP2003507437A (ja) 1999-08-26 2003-02-25 ガネデン バイオテック， インコーポレイテッド 抗真菌薬剤、抗細菌薬剤、および抗ウイルス薬剤のためのキャリアであるエミュー油の使用
WO2012079973A1 (en) 2010-12-17 2012-06-21 Unilever Nv Food product comprising probiotic bacterial spores
US20120251512A1 (en) 2011-03-31 2012-10-04 Ganeden Biotech, Inc. Probiotic Sports Nutrition Compositions

Family Cites Families (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2057806C1 (ru) * 1994-05-17 1996-04-10 Товарищество с ограниченной ответственностью "Сибэнзим" Штамм бактерий bacillus coagulans - продуцент эндонуклеазы рестрикции, узнающей и расщепляющей последовательность нуклеотидов 5'-gatnnnnatc-3'
US6645506B1 (en) 1997-04-18 2003-11-11 Ganeden Biotech, Inc. Topical compositions containing extracellular products of Pseudomonas lindbergii and Emu oil
US7507402B1 (en) * 1997-04-18 2009-03-24 Ganeden Biotech, Inc. Topical use of probiotic Bacillus spores to prevent or control microbial infections
JP2002502430A (ja) * 1997-06-03 2002-01-22 ガネデン バイオテック，インコーポレイテッド Ｓｉｄｓに関連する細菌感染を処置するための共生乳酸細菌
US6413501B2 (en) * 1997-10-17 2002-07-02 Novozymes A/S Plaque-inhibiting oral compositions
US6461607B1 (en) * 1998-08-24 2002-10-08 Ganeden Biotech, Inc. Probiotic, lactic acid-producing bacteria and uses thereof
AU780367B2 (en) 1999-04-14 2005-03-17 Ganeden Biotech, Inc. Methods for inhibiting microbial infections associated with sanitary products
EP1229923A1 (en) * 1999-11-08 2002-08-14 Ganeden Biotech, Inc. Inhibition of pathogens by bacillus coagulans strains
EE04529B1 (et) * 2001-03-16 2005-08-15 Tartu �likool Termofiilne mikroorganismi tüvi Bacillus coagulans SIM-7 DSM 14043 ja meetod L(+)-laktaadi tootmiseks fermenteeritavatest suhkrutest ja nende segudest nimetatud mikroorganismi tüve abil
US20040197277A1 (en) * 2001-08-24 2004-10-07 The Procter & Gamble Company Chewable compositions with probiotic agents
US20090305387A1 (en) * 2008-01-30 2009-12-10 Ganeden Biotech, Inc. Compositions and methods for cleaning surfaces
US20100120911A1 (en) * 2008-05-02 2010-05-13 Muhammed Majeed Preservative system for cosmetic formulations
CN101503708B (zh) * 2009-03-05 2012-04-11 天津科技大学 一种凝结芽孢杆菌抗真菌活性物质的培养发酵方法
US20140094517A1 (en) 2012-10-01 2014-04-03 Muhammed Majeed Preservative system for cosmetic formulations- compositions and methods thereof
CN102712512A (zh) * 2009-11-10 2012-10-03 诺维信生物股份有限公司 用于控制膜结垢的方法、组合物和系统
JPWO2013035804A1 (ja) * 2011-09-08 2015-03-23 カルピス株式会社 芽胞形成菌の発芽誘起方法

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2002512615A (ja) * 1997-04-18 2002-04-23 ガネデン バイオテック，インコーポレイテッド 微生物感染を予防または制御するための共生Ｂａｃｉｌｌｕｓ芽胞の局所的使用
JP2003507437A (ja) 1999-08-26 2003-02-25 ガネデン バイオテック， インコーポレイテッド 抗真菌薬剤、抗細菌薬剤、および抗ウイルス薬剤のためのキャリアであるエミュー油の使用
WO2012079973A1 (en) 2010-12-17 2012-06-21 Unilever Nv Food product comprising probiotic bacterial spores
US20120251512A1 (en) 2011-03-31 2012-10-04 Ganeden Biotech, Inc. Probiotic Sports Nutrition Compositions

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