KR101697152B1

KR101697152B1 - 장어로부터 추출한 뮤신을 이용한 항노화 기능을 가지는 화장품 제재의 제조방법

Info

Publication number: KR101697152B1
Application number: KR1020160087820A
Authority: KR
Inventors: 김태석; 정춘옥
Original assignee: 주식회사 리온메디코스
Priority date: 2016-07-12
Filing date: 2016-07-12
Publication date: 2017-01-17

Abstract

본 발명은 장어로부터 추출한 뮤신을 이용한 항노화 기능을 가지는 화장품 제재의 제조방법에 관한 것으로, 상세하게는 장어로부터 추출한 뮤신을 피부의 주성분을 이루는 단일아미노산복합체 및 아미노산의 짧은 사슬의 결합인 펩타이드와 혼합하여 초음파 처리함으로써 생성된 뮤신, 단일아미노산복합체 및 펩타이드 혼합물를 이용한 항노화 기능을 가지는 화장품 제재를 제조하는 방법을 제공하는 것으로, 본 발명의 장어로부터 추출한 뮤신을 이용한 항노화 기능을 가지는 화장품 제재는, 장어로부터 추출한 분말화된 뮤신을 가수하여 분산 유화시키는 (1)단계; 상기 (1)단계의 가수 분산시킨 뮤신에 단일아미노산 복합체 및 펩타이드 등을 혼합하여 40~60 ℃로 가온한 상태에서 초음파 처리하는 (2)단계; 및 상기 초음파 처리된 (2)단계의 뮤신, 단일아미노산복합체 및 펩타이드 혼합물을 실온으로 식히는 (3)단계를 포함하는 제조공정을 통해 제조되는 것을 특징으로 하며, 본 발명은 보다 저렴한 가격에 다량의 뮤신성분을 제공함으로써 종래보다 원가를 낮춘 고품질의 주름개선 및 항노화 화장품 제재를 제공할 수 있으며, 뮤신성분이 아미노산과 펩타이드 등의 영양성분에 대한 피부의 흡수력을 높여주고 피부의 보습 유지기간을 늘려주어 주름개선 및 항노화 기능을 가지는 고품질의 화장품 제재를 제공할 수 있다.

Description

장어로부터 추출한 뮤신을 이용한 항노화 기능을 가지는 화장품 제재의 제조방법{Manufacturing method of cosmetic material having an anti-aging effect using mucin from eel skin}

본 발명은 장어로부터 추출한 뮤신을 이용한 항노화 기능을 가지는 화장품 제재의 제조방법에 관한 것으로, 상세하게는 장어로부터 추출한 뮤신을 피부의 주성분을 이루는 단일 아미노산복합체 및 아미노산의 짧은 사슬의 결합인 펩타이드와 혼합하여 초음파 처리함으로써 생성된 뮤신, 단일아미노산복합체 및 펩타이드 혼합물를 이용한 항노화 기능을 가지는 화장품 제재를 제조하는 방법을 제공하는 것이다.

피부는 여러 가지 생리기능을 가진 보호막이면서 동시에 타인으로부터 미용적 호감을 얻는 데 중요한 기관이다. 피부는 크게 표피와 진피로 이루어지는데, 표피는 약 50~100μm의 두께를 가지며 각질층(stratum corneum), 과립층(stratum granulosum), 가시층(stratum spinosum), 기저층(stratum basale)의 다섯 층으로 구성되어 있습니다. 표피세포의 대부분은 각질세포(keratinocyte)이며, 그 외에 면역 기능을 담당하는 랑게르한스세포(Langerhans cell)와 피부 색소를 만드는 멜라닌세포(melanocyte)로 구성되어 있다. 정상 피부에서 표피세포는 매 30일마다 완전히 새로운 세포로 교체되며 각질층은 표피장벽으로 작용하여 수분의 증발과 미생물의 침입을 막아준다. 진피층은 약 2~3mm의 두께를 가지며 피부 부피의 대부분을 차지하고 있다. 진피의 주요 구성요소는 콜라겐(collagen)과 탄력섬유(elastin), 그리고 그 사이를 채우고 있는 히알루론산(hyaluronic acid)과 같은 점다당질이다. 피하층은 진피 하부에 연결되는 느슨한 구조물로서 체온조절에 관여하고 외부 충격을 완충시키며, 피부를 다른 내부기관에 고정해주고 있다.

피부노화는 크게 두 가지 과정으로 일어나는데, 특별한 환경적 요인 없이 누구에게나 세월과 함께 일어나는 변화를 내인성 노화(intrinsic aging)라 하며, 여기에 햇볕과 같은 환경요인에 장기간 노출돼 얼굴, 목, 손 등에 나타나는 변화를 광노화(photoaging)라고 한다. 내인성 노화의 주요 원인은 우리 몸의 대사과정에서 만들어진 반응성 활성산소라디칼에 의해 우리 몸의 구성 성분에 생기는 손상이 누적되기 때문이며, 외인성 노화는 유해한 활성산소가 자외선에 의해 만들어진다는 점에서 차이가 있다. 일단 만들어진 활성산소가 몸속에 있는 여러 가지 보호 장치에 의해 효과적으로 제거되지 못하면 일련의 염증반응이 일어나 피부 손상이 생기게 된다. 광노화는 피부노화의 주된 요인으로 피부에 생기는 대부분의 미용 및 의학적 문제의 원인이 되고 있다. 광노화를 일으키는 햇빛의 파장대(action spectrum)는 자외선 영역으로서 주로 자외선 B(UVB, 290~320nm)에 의해 발생하지만, 피부노화와 암을 유발하는 것은 자외선 B 뿐만 아니라 자외선 A(UVA, 320~400nm)도 원인이다. 따라서 광노화를 막기 위해서는 반드시 자외선 A와 B를 모두 차단해야 한다. 그 밖에 피부노화를 유발하는 가장 대표적인 외적 요인은 적외선, 흡연, 약물복용, 폐경 등 기타 많은 요인이 연관되어 있다.

피부의 노화는 주로 피부의 진피층을 구성하는 성분인 콜라겐(collagen)의 분해 및 표피층의 천연보습인자(natural moisturizing factor, NMF)의 분해와 관련되어 있는데, 천연보습인자는정상 피부 내의 각질층에 존재하는 수용성, 친수성 성분을 총칭하는 말로 외부로부터 수분을 흡수하고 각질층의 수분보유능을 증가시키며 피부가 건조해지는 것을 방지하여 피부의 유연성과 가수성을 유지하는 기능을 한다. 천연보습인자는 필라그린이 분해되면서 생성된 아미노산과 아미노산의 대사산물로 구성되며, 이외에 각종 무기염류도 포함된다. 필라그린의 유전적 기능 손상은 각질 중 아미노산양의 감소와 밀접하게 관련되어 있으며, 아미노산이 피부의 보습상태에 중요한 역할을 한다는 연구가 다수 보고되었다(J. Koyama, I. Horii, K. Kawasaki, et al., Free amino acids of stratum corneum as a biochemical marker to evaluate dry skin, J. Soc. Cosmet. Chem., 35, 183, 1984). 또한 세포외 기질을 분해하는 매트릭스 메탈로프로티네이즈(matrix metallo-proteinases, MMPs)의 증가가 콜라겐의 분해를 증가시켜 노화를 촉진시키는 것으로 알려져있다. 정상적인 피부의 각질층은 약 30% 정도의 수분이나 수용성 성분을 함유하고 있으나 각질층의 수분 함량이 20% 이하로 떨어지면 피부가 건조해지고 표면이 거칠어지기 시작하며 10% 이하가 되면 갈라지게 된다. 광노화가 일어난 진피에서는 진피 상부에 변형된 탄력섬유성 물질(elastotic material)이 광범위하게 침착되며, 또한 진피 기질의 점다당질(mucopolysaccharide) 중 히알루론산(hyaluronic acid)의 감소가 현저하여 피부의 긴장도가 떨어지게 되는데, 진피 두께의 감소와 그 구성 성분의 변화는 피부 탄력의 감소를 초래하여 외관상 처지거나 굵게 주름진 피부로 보이게 한다.

이러한 피부의 노화를 방지하고 개선하기 위해서는 천연보습인자의 기능을 유지시키고, 피부의 구조를 이루는 콜라겐의 분해속도를 늦추어주는 것이 중요한데, 종래의 등록특허 제10-0490212호에 피부 각질층의 아미노산 구성비율을 가지는 아미노산복합물과 그것을 함유한 노화방지 조성물에 대해 개시되어 있다. 하지만 종래 발명의 화장료는 1회 피부도포 후 보습력이 30분 이내로 짧아 보습력을 더욱 연장시키는 고품질의 화장품 제재의 발명이 필요하다.

최근 보습 및 노화방지로 각광 받고 있는 화장품 제재로서 점액성 물질인 뮤신(mucin) 있다. 뮤신(mucin)은 생물체의 점막에서 분비되는 점액 물질로서 동물의 뇌하수체, 위점막, 연골, 침, 혈액, 콧물 등에 존재하며, 달팽이, 장어, 미꾸라지 등의 피부에 다량 함유되어 있다. 뮤신의 화학적 본체는 당단백질의 일종이나, 점액의 기원이나 종류에 따라 여러 가지 당단백질을 함유한다. 뮤신은 물과 중성염용액에는 녹기 어렵고, 산성에서는 녹지 않고 침전되나, 알칼리성에서는 점성질의 액이 되는 특성이 있다. 뮤신의 역할은 생체 기능의 윤활 작용 및 보호 작용으로서, 소화 기관에서는 기관의 보호 및 소화 운동의 윤활제 역할을 하고, 위점막에서 뮤신은 펩신과 위산에 의한 손상을 방지하는 역할을 해서 위산과다와 위궤양 치료에 사용되는데, 비피더스균의 증식을 활발하게 하는 락투로오스를 함유한 조제분유에 뮤신을 첨가하면 락투로오스의 상승 작용으로 뮤신의 활성이 높아지고 변을 좋게 한다고 알려져 있다. 또한 장에서는 아미노산이나 지방의 흡수를 돕는 역할을 한다. 대장에서 분비되는 뮤신은 장내에서 윤활제 기능을 하여 장 내강에 붙어 있는 이물질이 매끄럽게 잘 떨어지게 한다.

뮤신은 피부의 구조형성에 관계된 성분인 콜라겐, 엘라스틴, 단백질 등 천연 복합물질인 콘드로이친을 함유하고 있어 외부의 거친 환경으로 부터 수분손실을 막아 피부의 건조를 막아주며, 상처가 난 피부를 빠르게 재생시켜 주는 역할을 한다.

이러한 뮤신의 수분보유성 및 피부의 재생능을 이용한 화장제재 및 화장품의 개발이 활발히 이루어지고 있는데, 특히 달팽이와 마로부터 추출된 뮤신을 이용한 화장품이 출시되고 있다. 종래에 대한민국 특허등록공보 제 10-1361848호에 둥근마 유래의 뮤신 제조방법 및 이를 함유하는 화장료 조성물이 개시되어 있으며, 대한민국 특허공개공보 특1995-0002714호에 달팽이로부터 추출한 뮤신성분을 이용한 화장품의 제조방법 등의 기술이 개시되어 있으나, 종래의 달팽이로부터 추출되는 뮤신의 경우 달팽이 한마리에서 추출될 수 있는 뮤신의 양은 매우 소량으로 제한되어 있어, 다량의 뮤신을 공급하기 위해 매우 많은 수의 달팽이를 필요로하므로 원료비가 매우 고가라는 문제점이 있으며, 둥근마로부터 추출되는 뮤신의 경우에도 둥근마를 구하기 쉽지 않을 뿐만 아니라 둥근마의 가격이 매우 비싸기 때문에 원료비가 많이 드는 문제점이 있다.

따라서, 좀더 저렴한 가격에 많은 양의 뮤신성분을 획득할 수 있는 기술개발이 필요하다.

이에 본 발명자는 비교적 저렴한 가격에 다량의 뮤신성분을 얻을 수 있는 방법을 연구하던 중, 살처분하지 않고 살아있는 장어에서 반복적으로 다량의 뮤신성분을 추출하는 방법을 창안하였고, 상기 방법을 통하여 획득한 뮤신과 피부의 성분으로 구성된 단일아미노산복합체 및 짧은 사슬의 펩타이드를 이용하여 보다 피부에 흡수력을 높이고 보습력을 높임으로써 항노화 기능을 가지는 화장품 제재를 개발하게 되었다.

1. 대한민국 특허공개공보 특1995-0002714호

본 발명의 목적은 장어에서 추출한 뮤신성분과 단일아미노산복합체 및 짧은 사슬의 펩타이드를 이용하여 피부의 흡수력을 높이고, 보습 기간을 늘려주어 항노화 기능을 가지는 고품질의 화장품 제재를 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 목적은 장어에서 추출한 뮤신성분을 이용하여 종래보다 원가를 낮춘 고품질의 항노화 화장품 제재를 제공하는 것이다.

상기 목적을 달성하기 위한 본 발명의 장어로부터 추출한 뮤신을 이용한 항노화 기능을 가지는 화장품 제재는, 장어로부터 추출한 분말화된 뮤신을 가수하여 분산 유화시키는 (1)단계; 상기 (1)단계의 가수 분산시킨 뮤신에 단일아미노산 복합체 및 펩타이드 등을 혼합하여 40~60 ℃로 가온한 상태에서 초음파 처리하는 (2)단계; 및 상기 초음파 처리된 (2)단계의 뮤신, 단일아미노산복합체 및 펩타이드 혼합물을 실온으로 식히는 (3)단계를 포함하는 제조공정을 통해 제조되는 것을 특징으로 한다.

상기 (1)단계의 분말화된 뮤신은, 한 마리 이상 다수의 장어를 수온 20 ~ 25 ℃의 수조에서 4 ~ 6 시간동안 체류시킨 후, 수온 5 내지 10 ℃의 수조에서 10 ~ 20 분간 체류시키는 준비단계; 상기 준비단계 이후, 조명, 전기자극, 초음파 중에서 어느 하나 또는 어느 하나 이상의 방법으로 장어의 피부에 3 내지 10 분 동안 자극(스트레스)을 가하는 자극단계; 상기 자극을 받은 장어의 피부로부터 분비물을 긁어 채취하는 단계; 상기 수득된 장어의 분비물을 1,000 ~ 15,000 rpm으로 고속원심분리시켜 가라 앉는 이물질을 제거하는 이물질 제거단계; 상기 이물질이 제거된 장어의 분비물에 45 ~ 55%의 에탄올수용액을 가하여 30 분 ~ 1 시간 20 분 동안 교반하여 뮤신성분을 침전시키는 침전단계; 및 상기 침전된 뮤신성분을 영하 120℃의 온도에서 분무시켜 동결건조시키는 동결건조 단계를 통해 추출하는 것을 특징으로 한다.

상기 (1)단계에서 첨가되는 수분은 정제수, 고로쇠수액, 차의 추출액, 녹차추출액, 대나무추출액, 매실추출액 등을 포함하는 식물추출액, 과일추출액, 식물발효액 또는 과일발효액 중 어느 하나 또는 하나 이상의 혼합액이 포함될 수 있으며, 첨가되는 수분의 양은 화장품의 제형 용도에 따라 뮤신 분말 대비 1 : 1~20배로 첨가 가능하다.

상기 (2)단계의 단일아미노산복합체는 글리신(Glycine), 알라닌(Alanine), 프롤린(Proline), 세린(Serine), 트레오닌(Threonine), 아르기닌(Arginine), 라이신(Lysine), 글루탐산(Glutamic acid), 아스파르트산(Aspartic acid), 발린(Valine), 로이신(Leucine), 히스티딘(Histidine), 메티오닌(Methionine), 이소로이신(Isoleucine), 티로신(Tyrosine), 페닐알라닌(Phenylalanine), 시스테인(cysteine) 중 하나 이상의 아미노산 성분으로 구성된 것을 특징으로 하되, 바람직하기로는 글리신(Glycine), 알라닌(Alanine), 프롤린(Proline), 세린(Serine), 트레오닌(Threonine), 아르기닌(Arginine), 라이신(Lysine) 및 글루탐산(Glutamic acid)이 포함된 것을 특징으로 한다.

상기 단일아미노산복합체의 아미노산의 함량은 물과 글리신 1~3중량%, 알라닌 0.1~1중량%, 프롤린 0.1~1중량%, 세린 0.5~3중량%, 트레오닌 0.1~1중량%, 아르기닌 0.1~1중량%, 라이신 0.1~1중량%, 글루탐산 0.5~3중량%, 아스파르트산 0.1~1.5중량%, 발린 0.1~1중량%, 로이신 0.1~1중량%, 히스티딘 0.1~1중량%, 메티오닌 0.1~1중량%, 이소로이신 0.1~1중량%, 티로신 0.1~1중량%, 페닐알라닌 0.1~1중량%, 시스테인 0.1~1중량%를 포함하는 것을 특징으로 한다.

상기 (2)단계의 펩타이드는 팔미토일올리고펩다이드(Palmitoyl Oligopeptide), 팔미토일트리펩타이드-38(Palmitoyl Tripeptide-38), 팔미토일펜타펩타이드-4(Palmitoyl Pentapeptide-4), 팔미토일테트라펩타이드-7(Palmitoyl Tetrapeptide-7), 아세틸헥사펩타이드-8(Acetyl Hexapeptide-8), 올리고펩타이드-68(Oligopeptide-68), 디펩타이드-2(Dipeptide-2), 알에이치올리고펩타이드-1(rh-Oligopeptide-1,EGF) 중 하나 이상으로 구성된 것을 특징으로 하되, 바람직하기로는 아세틸헥사펩타이드-8(Acetyl Hexapeptide-8), 팔미토일펜타펩타이드-4(Palmitoyl Pentapeptide-4) 및 알에이치올리고펩타이드-1(rh-Oligopeptide-1,EGF)가 포함된 것을 특징으로 한다.

상기 뮤신, 단일아미노산복합체 및 펩타이드 혼합물의 함량은 제조된 화장품 제재 100 중량%에 대해 장어 유래의 분말 뮤신 0.1 ~ 15 중량%, 단일아미노산복합체 0.1 ~ 10 중량% 및 펩타이드 0.5 ~ 15 중량%를 포함하는 것을 특징으로 한다.

본 발명의 효과는 보다 저렴한 가격에 다량의 뮤신성분을 제공함으로써 종래보다 원가를 낮춘 고품질의 주름개선 및 항노화 화장품 제재를 제공할 수 있다.

본 발명의 다른 효과는 뮤신성분이 아미노산과 펩타이드 등의 영양성분에 대한 피부의 흡수력을 높여주고 피부의 보습 유지기간을 늘려주어 주름개선 및 항노화 기능을 가지는 고품질의 화장품 제재를 제공할 수 있다.

본 발명에 의해 제도된 화장품 제재를 사용하기 전 및 후의 피부상태를 나타낸 사진임.

본 발명을 실시하기 위한 구체적인 내용은 아래와 같다.

1. 장어 뮤신 추출

한 마리 이상 다수의 장어를 수온 20 ~ 25 ℃의 수조에서 4 ~ 6 시간동안 체류시킨 후, 수온 5 내지 10 ℃의 수조에서 10 ~ 20 분간 체류시킨 후, 조명, 전기자극, 초음파 중에서 어느 하나 또는 어느 하나 이상으로 장어의 피부에 3 내지 10 분 동안 자극(스트레스)을 가한 다음, 상기 자극을 받은 장어를 내부에 장어의 피부로부터 분비물을 긁어 채취할 수 있는 구조를 가지는 원형터널로 한마리씩 통과시켜 분비물을 수득하고, 상기 수득된 장어의 분비물을 1,000 ~ 15,000 rpm으로 고속원심분리시켜 가라 앉는 이물질을 제거하고, 이물질이 제거된 장어의 분비물에 45 ~ 55%의 에탄올수용액을 가하여 30 분 ~ 1 시간 20 분 동안 휘젓는 상태로 뮤신성분을 침전시키고, 상기 침전된 뮤신성분은 영하 120℃의 온도에서 분무시켜 동결건조시켜 뮤신 분말을 수득한다.

장어는 대표적인 스태미너 식품으로서 피부 보호를 위하여 피부에서 분비물을 배출하며 장어의 피부 분비물에 뮤신 함량이 높은 것으로 알려져 있다. 이러한장어는 자극이나 스트레스를 가할 경우, 그에 대한 방어 현상으로 피부 분비물의 분비량이 증가한다.

상기 원형터널을 통과한 장어는 피부(표피)로부터 분비물이 제거된 상태로 다시 해당 수조에 투입되므로 살아있는 상태가 유지되며 약 2 시간 경과 후 장어의 피부는 분비물이 정상상태로 복구되는 것으로 확인된다. 즉, 장어를 재활용할 수 있는 장점이 있다.

장어에 자극을 주는 방법은 조명, 전기자극, 초음파로 이루어 질 수 있는데, 조명은 원형터널의 1m 상부에 설치하고, 100와트(W)의 백열전등을 0.2~1초의 범위 에서 점멸 반복하는 것이 바람직한데, 가장 바람직하기로는 0.4초 간격으로 점멸을 반복한다.

전기자극은 원형터널의 바닥부위에 가로*세로 5cm의 면적에 2~3mm의 길이로 돌출되며, 침은 전후좌우 1cm 간격으로 바채되도록 하며, 전기자극침에는 주파수 500 내지 1000 헤르츠의 범위 또는 5 내지 6 볼트의 전압의 범위로 자극을 주는 것이 바람직하다.

초음파는 원형터널의 바닥부위에 10~20cm의 간격으로 배치하며, 일반 가습기용 10와트급 원형진동자와 동일 또는 유사한 것을 최대 출력상태로 자극을 주는 것이 바람직하다.

상기 조명, 전기자극 또는 초음파 자극은 상기 범위에서 수행하는 것이 장어의 분비물을 가장 많은 양 채취할 수 있다.

2. 장어로부터 추출한 뮤신을 이용한 항노화 화장품 조성물 제조

상기 장어로부터 추출한 분말화된 뮤신을 고속분산유화장치에 넣고, 뮤신 중량의 5 ~ 30배의 정제수를 가하여 잘 분산시킨 다음, 상기 분산된 뮤신성분에 단일아미노산복합체와 펩타이드를 가하여 40 ~ 60℃로 가온한 상태에서 5 ~ 20분간 초음파 처리한 후, 이를 다시 고속분산유화장치로 교반 및 분산시킨 후 20 ~ 25℃의 실온으로 냉각시킨다.

상기 분산된 뮤신, 단일아미노산복합체 및 펩타이드를 40 ~ 60℃로 가온하여 초음파 처리를 하면 뮤신이 점액질의 겔상태로 되고, 단일아미노산복합체 및 펩타이드의 가교결합이 끊어져서 겔상태의 뮤신과 서로 잘 섞이게 된다.

상기 초음파 처리 온도는 40 ~ 60℃에서 진행하는 것이 바람직한데, 40℃ 미만일 경우 분말상태의 뮤신이 점액질의 겔상태로 되기 어려우며, 60℃가 초과될 경우 단백질의 변성이 일어날 수 있어 바람직하지 않다.

상기 단일아미노산복합체는 피부의 주성분을 이루고 있는 아미노산인 글리신(Glycine), 알라닌(Alanine), 프롤린(Proline), 세린(Serine), 트레오닌(Threonine), 아르기닌(Arginine), 라이신(Lysine), 글루탐산(Glutamic acid), 아스파르트산(Aspartic acid), 발린(Valine), 로이신(Leucine), 히스티딘(Histidine), 메티오닌(Methionine), 이소로이신(Isoleucine), 티로신(Tyrosine), 페닐알라닌(Phenylalanine), 시스테인(cysteine) 중 하나 이상의 아미노산을 포함하는 것을 특징으로 하며, 바람직하기로는 글리신(Glycine), 알라닌(Alanine), 프롤린(Proline), 세린(Serine), 트레오닌(Threonine), 아르기닌(Arginine), 라이신(Lysine) 및 글루탐산(Glutamic acid)이 포함된 것을 특징으로 한다.

상기 단일아미노산복합체에 물 대신에 부틸렌글라이콜(Butylene Glycol) 25~35중량%를 첨가할 수 있다.

부틸렌글라이콜은 단맛을 지닌 액체로 피부자극성 및 독성이 거의 없어 안전하며, 주로 해바라기씨 오일, 옥수수 오일, 생선의 간유, 포도주 등의 발효 생성물 촉매를 이용하여 수소첨가 반응에 의해 제조되며, 수분을 유지시켜 주며, 보존기능이 뛰어나, 화장품에 주로 보습제, 용제, 점도조절용, 피부컨디셔닝제의 역할을 한다.

상기 단일아미노산복합체에 소듐피씨에이(Sodium PCA), 베타인(Betaine) 및 소르비톨(Sorbitol)을 첨가할 수 있다.

소듐피씨에이는 소듐피로리돈카르복실산(Sodium Pyrrolidone Carboxylic acid)의 약자로 동물의 피부조직을 비롯한 여러 조직에서 발견되는 자연물질로 야채와 과일 또는 당밀 등에 포함된 글루탐산 등의 아미노산에 의해 체내에서 합성되며, 히알루론산과 마찬가지로 매우 우수한 보습력을 가진 성분으로 공기중의 수분을 끌어당겨 표피에 수분을 공급하는 보습제 역할을 한다. 이 물질은 수용성이며 천연보습인자의 하나로 글리세린보다 약 50% 향상된 보습능력을 가지고 있다.

베타인은 대부분 모든 자연계의 생물체에 존재하고 있는 아미노산계 보습성분으로 글리세린을 많이 함유하고 있어 글리세린 베타인이라고도 불린다. 우수한 보습력을 가지고 있으며 수용성 천연 성분이라 화장품, 샴푸, 비누등에 보습제로 사용한다.

솔비톨은 은 포도당과 같은 육탄당을 환원하여 얻는 6가 알코올의 일종으로 설탕과 유사한 단맛을 낸다. 연소성과 흡습성을 지닌 흰색의 결정으로, 물이나 알코올에 잘 녹으며 사과, 복숭아, 마가목 따위의 과즙에 함유되어 있는 성분으로 흡습성이 있어 보습제 및 유연제의 역할을 하며, 크림 제조시 크림의 표면이 갈라지는 것을 방지하며 향을 보존하는 능력이 탁월하여 향 보존제의 역할을 한다.

상기 소듐피씨에이(Sodium PCA), 베타인(Betaine) 및 소르비톨(Sorbitol) 성분은 단백질과 당으로 구성되어 있어 당단백질인 장어로부터 추출된 뮤신과 아미노산을 좀더 잘 섞이도록 하고, 섞인 후의 겔상태를 안정화시키는 역할을 한다.

상기 펩타이드는 팔미토일올리고펩타이드(Palmitoyl Oligopeptide), 팔미토일트리펩타이드-38(Palmitoyl Tripeptide-38), 팔미토일펜타펩타이드-4(Palmitoyl Pentapeptide-4), 팔미토일테트라펩타이드-7(Palmitoyl Tetrapeptide-7), 아세틸헥사펩타이드-8(Acetyl Hexapeptide-8), 올리고펩타이드-68(Oligopeptide-68), 디펩타이드-2(Dipeptide-2), 알에이치올리고펩타이드-1(rh-Oligopeptide-1EGF) 중 하나 이상으로 구성된 것을 특징으로 하며, 바람직하기로는 아세틸헥사펩타이드-8, 팔미토일펜타펩타이드-4 및 알에이치올리고펩타이드-1(EGF)가 포함된 것을 특징으로 한다.

상기 펩타이드들은 안정성이 뛰어나 변성 또는 산화가 잘 일어나지 않으며 피부에 빠르게 흡수되어 피부 재생을 도와 주는 역할을 하며, 물과 결합력이 좋아 보습제의 역할도 한다.

본 발명의 화장품 재제에 사용되는 물은 정제수, 고로쇠수액, 차의 추출액, 녹차추출액, 대나무추출액, 매실추출액 등을 포함하는 식물추출액, 과일추출액, 식물발효액 또는 과일발효액 중 어느 하나 또는 하나 이상의 혼합액이 포함될 수 있으며, 물과 함께 글리세린, 히알루론산, 부딜렌글리콜, 레시틴, 세어버터 등과 같이 보존제, 유화제, 보습제, 산화방지제, 검제, 향유, 오일, 유지류 등 화장품에 통상적으로 사용되는 첨가제를 첨가할 수도 있다.

상기 뮤신, 단일아미노산복합체 및 펩타이드의 함량은 상기 범위 미만일 경우 피부보습 및 항노화기능이 떨어져 바람직하지 않으며, 상기 범위를 초과할 경우 원가가 높아져 바람직하지 않다.

상기 소듐피씨에이, 베타인 및 소르비톨은 단일아미노산복합체 100중량부에 대하여 소듐피씨에이 10~15중량부, 베타인 10~15중량부 및 소르비톨 5~10중량부를 첨가하는 것이 바람직하다.

이하에서 본 발명의 구체적인 내용을 실시예를 들어 설명하고자 한다.

본 발명은 특정한 실시 형태에 대해 한정하려는 것이 아니며 다양한 변환을 가할 수 있고, 본 발명의 사상 및 기술 범위에 포함되는 모든 변환, 균등물 내지 대체물을 포함하는 것으로 이해되어야 한다. 본 발명을 설명함에 있어서 관련된 공지 기술에 대한 구체적인 설명이 본 발명의 요지를 흐릴 수 있다고 판단되는 경우 그 상세한 설명을 생략한다.

<실시예 1>

50마리의 장어를 수온 21 ℃의 수조에서 5 시간동안 체류시킨 후, 수온 6 ℃의 수조에서 12 분간 체류시킨 다음, 전체 2m 길이의 자극부(스트레스부)를 통과시키되, 상기 자극부는 진행 경로 상측 1m 위치에 50cm 간격으로 100 와트(W)의 백열전등을 설치하여 0.4초 간격으로 점멸이 반복되도록 하며, 경로의 하부 또는 바닥면에는 일반 가습기용 10 와트(W)급 원형초음파 진동자가 15cm의 간격으로 진행방향으로 설치되어 최대 출력상태로 장어의 피부에 5분 동안 자극을 가하였다. 상기 자극부에서 스트레스를 받은 장어를 내부에 장어의 피부로부터 분비물을 긁어 채취할 수 있는 구조를 가지는 원형터널로 한마리씩 통과시켜 장어 분비물을 채취하고, 상기 수득된 장어의 분비물을 12,000rpm으로 고속원심분리시켜 가라 앉는 이물질을 제거하였다. 이물질이 제거된 장어의 분비물에 대하여 3배의 50%의 에탄올수용액을 가하여 1시간 동안 휘젓는 상태로 뮤신성분을 침전시킨 후, 영하 120℃의 온도에서 분무시켜 동결건조시켜 뮤신 분말을 수득하였다. 상기 장어로부터 추출한 분말화된 뮤신 100g을 고속분산유화장치(PASSON,(주)케이엔에스컴퍼니)에 넣고, 1.5L의 정제수를 가하여 30분 동안 잘 분산시킨 다음, 여기에 물과 글리신 2.5중량%, 알라닌 0.5중량%, 프롤린 0.5중량%, 세린 1.5중량%, 트레오닌 0.5중량%, 아르기닌 0.4중량%, 라이신 0.5중량%, 글루탐산 1.4중량%, 소듐피씨에이 1.0중량%, 베타인 0.8중량% 및 소르비톨 0.4중량%가 포함된 단일아미노산복합체 50g과 팔미토일올리고펩타이드 21.16중량%, 팔미토일트리펩타이드-38 21.16중량%, 팔미토일펜타펩타이드-4 21.16중량%, 팔미토일테트라펩타이드-7 21.16중량%, 아세틸헥사펩타이드-8 7.40중량%, 올리고펩타이드-68 6.9중량%, 디펩타이드-2 1.05중량%, 알에이치올리고펩타이드-1 0.01중량%가 포함된 펩타이드 200g을 추가한 후, 부피가 2L가 되도록 정제수를 추가하여 30분간 더 분산유화시켰다. 상기 고속분산유화장치에 의해 잘 혼합된 뮤신 및 단일아미노산복합체 혼합물을 40 ~ 60℃로 가온한 상태에서 15분간 20MHz로 초음파 처리한 후, 이를 다시 고속분산유화장치로 20분간 교반 및 분산시킨 후 실온으로 냉각시켜 겔화 된 본 발명의 화장품 제재의 제조를 완료하였다.

<비교예 1>

상시 실시예 1의 제조방법에서 단일아미노산복합체 및 펩타이드 대신에 정제수를 첨가하여 동일하게 제조하였다.

<비교예 2>

상시 실시예 1의 제조방법에서 장어에서 추출한 분말상태의 뮤신 대신에 정제수를 첨가하여 동일하게 제조하였다.

<시험예 1>

뮤신의 동정

상기 본 발명의 실시예를 통해 추출된 당단백질인 뮤신의 동정을 위하여 분광학적 분석법인 FT-IR분석을 실시하여, 펩타이드의 구조에서 가지는 아미노카보닐기(C=O)와 당에 존재하는 하이드록시(-OH)기를 각각 3200cm^-1및 1520cm^-1에서 확인하였다. 즉, 상기 실시예에서 수득한 뮤신 0.001g과 0.5g KBr(FT-IR grade, Sigma)을 막자사발에 넣고 고르게 분쇄한 후, 소량을 펠렛 주형에 놓고 유압기를 사용하여 펠렛을 만든 다음, FT-IR(Varian 640-IR, Varian, USA)을 이용하여 적외선 스펙트럼을 측정하였다.

<시험예 2>

상시 실시예 1 및 비교예 1 내지 2에 의해 제조된 본 발명의 화장품 제재에 대해 세포독성을 테스트하기 위해 세포생존율을 측정하여 표 1에 나타내었다.

10% FBS(Fetal Bovine Serum, GIBCO BRL)를 포함하는 DMEM(Dulbecco's Modified Eagles Medium) 배지로 배양된 사람의 피부 표피세포인 HaCaT를 5×10⁴cell/well의 수로 24well 플래이트에 분주한 후 37℃, 5% CO₂의 조건에서 24시간 배양하였다. 상기 배양한 세포의 배지를 제거하고, 10% FBS를 포함하는 DMEM으로 각각 교체한 후, 5, 10, 15, 20, 25, 30%의 실시예 1 및 비교예 1 내지 2의 시료를 첨가한 후 2일 간 배양하였다. 상기 배양된 cell에 0.33mg/ml의 MTT 용액을 각 well에 1ml씩 첨가한 후 4시간 동안 반응시킨 다음, MTT 용액을 제거하고, DMSO로 세포를 녹인 후, ELISA reader(TECAN, Austria)로 570nm에서 흡광도를 측정하여 생존율을 확인하였다.

대조군으로 아무처리도 하지 않고 10% FBS를 포함하는 DMEM 배지만 첨가하여 세포 생존율을 측정하였다.

세포생존율 (%) = 처리군의 흡광도 ÷ 대조군의 흡광도 × 100

구분	처리농도
구분	5%	10%	15%	20%	25%	30%
실시예1	99.76	101.23	98.97	98.77	98.42	98.56
비교예1	100.07	100.14	99.45	98.96	98.67	98.54
비교예1	99.87	100.05	99.26	98.74	98.64	98.62

그 결과 본발명의 실시예 1 및 비교예 1 내지 2 모두 세포생존율에 있어 대조군에 비해 차이가 없었다. 따라서 본 발명의 실시예 및 비교예는 세포독성이 없음을 알 수 있다.

<시험예 3>

본 발명의 화장품 제재의 항노화력을 측정하기 위해 콜라겐의 분해를 일으키는 MMPs(Matrix Metallo Proteinases) 중 MMP-1의 저해효소인 TIMP-1의 발현율을 측정하였다. 사람의 피부 섬유아세포(Human skin fibroblast)를 배양하여 60mm plate에 1×10⁶cell로 분주한 후, 37℃, 5% CO₂ 인큐베이터에서 24시간 배양한 다음, 클린벤치 내에서 약 10초간 자외선(F15T8, 15W UV B,Sankyo, Japan)을 조사하였다. 상기 UV가 조사된 세포에 본 발명의 실시예 1 및 비교예 1 내지 2를 5%, 10%, 15%, 20% 농도로 처리한 새로운 배지로 갈아준 다음 24시간 배양하였다. 상기 배양된 세포의 배지를 회수하여 96플레이트로 옮긴 후, 일차항제로서 MMP-1(antibdy-5) 단일 클론항체와 MMP-2(antibdy-3)단일클론항체를 처리하고 37℃에서 1시간 동안 반응시킨 다음, 이차항체로 Antimouse IgG(whole mouse, alkaline phosphatase conjugated)를 첨가하여 37℃에서 1시간 동안 반응시킨 후, 알칼라인 포스파타아제 기질용액을 실온에서 30분간 반응시킨 후, ELISA reader(TECAN, Austria)로 405nm에서 흡광도를 측정하였다. 대조군으로는 시료를 첨가하지 않은 배지를 사용하였으며, 그 결과를 표 2에 나타내었다.

항노화력 측정 결과

구분	MMP-1의 발현정도(ng/ml)
시료의 도(%)	0	5	10	15	20
실시예1	56.4	45.1	43.6	40.2	36.4
비교예1	57.1	51.2	48.1	46.3	44.5
비교예2	56.2	52.3	47.1	46.4	43.4

MMP-1의 발현이 낮을 수록 흡광도 낮아지므로 가장 낮은 흡광도를 보이는 실시예 1의 본 발명의 뮤신과 단일아미노산 복합체가 항노화 기능을 가진다는 것을 알 수 있다.

<시험예 4>

보습유지력 측정

본 발명의 실시예 1 및 비교예 1 내지 2의 보습유지력을 측정하기 위하여 30~40대 여성 10명을 대상으로 아침에 비누 및 일체의 세정제를 사용하지 않고 물로만 세정하게 한 뒤, 양쪽 전박부위에 4개의 분획을 그은 다음, 23℃, 45%의 항온항습실에서 30분간 대기시켰다. 아무것도 바르지 않은 상태에서 피부의 수분량을 피부수분측정기(my-808s,스칼라 주식회사 Made in Japan)로 측정한 다음, 본 발명의의 실시예 1 및 비교예 1 내지 2를 전박 부위에 도포하고 시간에 따른 피부의 수분량을 피부수분측정기로 측정하였다. 각 측정 부위는 3번 반복하여 측정하였으며, 그 평균값을 표 3에 나타내었다.

보습유지력 측정 결과

구분	도포전	도포후 시간에 따른 피부 수분량 (A.U)
구분	도포전	0분	30분	60분	90분	120분	150분	240분	480분
실시예1	38.45	62.33	59.76	59.35	58.42	58.37	57.71	55.12	52.01
비교예1	38.45	61.26	58.24	58.06	57.68	57.41	56.01	52.25	48.87
비교예2	38.45	60.37	58.47	58.25	57.99	57.59	56.24	53.62	49.34

그 결과, 본 발명의 실시예 1의 보습유지력이 가장 오랜시간 유지되는 것을 확인할 수 있었다.

<시험예 5>

주름개선 효과 측정

본 발명의 실시예 1 및 비교예 1 내지 2의 주름개선 효과를 측정하기 위하여 30~40대 여성 10명을 대상으로 25% 농도로 함유된 본 발명의 실시예 1 및 비교예 1 내지 2의 화장품 제재를 4주간 아침, 저녁으로 하루 두 번 양쪽 눈가의 주름 부위에 사용하게 한 후, 1주일 간격으로 4주 후 눈가 주름 주형을 영상분석법으로 Skin visiometer(SV-600, Germany)를 이용하여 주름의 깊이를 측정하고 그 결과를 표 4에 나타내었다.

시간에 따른 주름개선 효과

구분	도포전 (㎛)	도포후 시간에 따른 주름 깊이
구분	도포전 (㎛)	1주	2주	3주	4주
실시예1	258±37	242±22	224±24	208±21	197±17
비교예1	258±37	247±15	237±31	231±18	223±15
비교예2	258±37	248±31	241±26	235±16	228±24

그 결과, 본 발명의 실시예 1의 주름 개선효과가 가장 우수한 것으로 나타났다.

<시험예 6>

본 발명의 실시예 1에 대해 30~60대 여성 5명을 대상으로 미백, 주름개선 및 보습력에 대해 전체적인 관능테스트를 실시하였다. 본 발명의 실시예 1에 대해 4주간 아침, 저녁으로 하루 두번 세안 후 사용하도록 하였으며, 사용전과 사용후의 결과를 도 1에 나타내었다.

도 1에 나타난 바와 같이 모두 피부의 주름이 현저히 감소하였으며, 피부의 색상도 밝아지고, 더욱 촉촉해짐을 알 수 있었다.

Claims

장어로부터 추출한 분말화된 뮤신을 가수하여 분산유화시키는 (1)단계; 상기 (1)단계의 가수 분산시킨 뮤신에 단일아미노산 복합체 및 펩타이드 등을 혼합하여 40~60 ℃로 가온한 상태에서 초음파 처리하는 (2)단계; 및 상기 초음파 처리된 (2)단계의 뮤신, 단일아미노산복합체 및 펩타이드 혼합물을 실온으로 식히는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 장어로부터 추출한 뮤신을 이용한 항노화 기능을 가지는 화장품 제재의 제조방법.
청구항 제 1 항에 있어서,
상기 (1)단계의 분말화된 뮤신은, 장어를 일정 온도의 수조에서 체류시키는 준비단계; 상기 준비단계 이후, 조명, 전기자극, 초음파 중에서 어느 하나 또는 어느 하나 이상의 방법으로 장어의 피부에 자극을 가하는 자극단계; 상기 자극을 받은 장어의 피부로부터 분비물을 긁어 채취하는 채취단계를 통해 채취된 장어의 분비물로부터 추출되는 것을 특징으로 하는 장어로부터 추출한 뮤신을 이용한 항노화 기능을 가지는 화장품 제재의 제조방법.
청구항 제 2 항에 있어서,
상기 (1)단계의 분말화된 뮤신은, 채취된 장어의 분비물을 1,000 ~ 15,000 rpm으로 고속원심분리시켜 가라 앉는 이물질을 제거하는 이물질 제거단계; 상기 이물질이 제거된 장어의 분비물에 45 ~ 55%의 에탄올수용액을 가하여 30 분 ~ 1 시간 20 분 동안 교반하여 뮤신성분을 침전시키는 침전단계; 및 상기 침전된 뮤신성분을 영하 120℃의 온도에서 분무시켜 동결건조시키는 동결건조 단계를 추가로 수행하여 추출하는 것을 특징으로 하는 장어로부터 추출한 뮤신을 이용한 항노화 기능을 가지는 화장품 제재의 제조방법.
청구항 제 2 항에 있어서,
상기 준비단계는 장어를 수온 20 ~ 25 ℃의 수조에서 4 ~ 6 시간동안 체류시킨 후, 수온 5 내지 10 ℃의 수조에서 10 ~ 20 분간 체류시키는 것을 특징으로 하는 장어로부터 추출한 뮤신을 이용한 항노화 기능을 가지는 화장품 제재의 제조방법.
제 1 항에 있어서,
상기 (2)단계의 단일아미노산복합체는 글리신(Glycine), 알라닌(Alanine), 프롤린(Proline), 세린(Serine), 트레오닌(Threonine), 아르기닌(Arginine), 라이신(Lysine), 글루탐산(Glutamic acid), 아스파르트산(Aspartic acid), 발린(Valine), 로이신(Leucine), 히스티딘(Histidine), 메티오닌(Methionine), 이소로이신(Isoleucine), 티로신(Tyrosine), 페닐알라닌(Phenylalanine), 시스테인(cysteine) 중 하나 이상의 아미노산 성분으로 구성된 것을 특징으로 하는 장어로부터 추출한 뮤신을 이용한 항노화 기능을 가지는 화장품 제재의 제조방법.
제 5 항에 있어서,
단일아미노산복합체의 아미노산의 함량은 물과 글리신 1~3중량%, 알라닌 0.1~1중량%, 프롤린 0.1~1중량%, 세린 0.5~3중량%, 트레오닌 0.1~1중량%, 아르기닌 0.1~1중량%, 라이신 0.1~1중량%, 글루탐산 0.5~3중량%, 아스파르트산 0.1~1.5중량%, 발린 0.1~1중량%, 로이신 0.1~1중량%, 히스티딘 0.1~1중량%, 메티오닌 0.1~1중량%, 이소로이신 0.1~1중량%, 티로신 0.1~1중량%, 페닐알라닌 0.1~1중량%, 시스테인 0.1~1중량% 중 하나 이상의 아미노산 성분을 포함하는 것을 특징으로 하는 장어로부터 추출한 뮤신을 이용한 항노화 기능을 가지는 화장품 제재의 제조방법.
제 1 항에 있어서,
펩타이드는 팔미토일올리고펩다이드(Palmitoyl Oligopeptide), 팔미토일트리펩타이드-38(Palmitoyl Tripeptide-38), 팔미토일펜타펩타이드-4(Palmitoyl Pentapeptide-4), 팔미토일테트라펩타이드-7(Palmitoyl Tetrapeptide-7), 아세틸헥사펩타이드-8(Acetyl Hexapeptide-8), 올리고펩타이드-68(Oligopeptide-68), 디펩타이드-2(Dipeptide-2), 알에이치올리고펩타이드-1(rh-Oligopeptide-1,EGF) 중 하나 이상으로 구성된 것을 특징으로 하는 장어로부터 추출한 뮤신을 이용한 항노화 기능을 가지는 화장품 제재의 제조방법.
제 1 항에 있어서,
뮤신, 단일아미노산복합체 및 펩타이드 혼합물의 함량은 제조된 화장품 재제 100 중량%에 대해 장어 유래의 분말 뮤신 0.1 ~ 15 중량부%, 단일아미노산복합체 0.1 ~ 10 중량% 및 펩타이드 0.5 ~ 15 중량%가 포함되는 것을 특징으로 하는 장어로부터 추출한 뮤신을 이용한 항노화 기능을 가지는 화장품 제재의 제조방법.
제 1 항에 있어서,
단일아미노산복합체에 소듐피씨에이, 베타인 및 소르비톨이 추가로 첨가되는 것을 특징으로 하는 장어로부터 추출한 뮤신을 이용한 항노화 기능을 가지는 화장품 제재의 제조방법.
제 9 항에 있어서,
소듐피씨에이, 베타인 및 소르비톨의 함량은 단일아미노산복합체 100중량부에 대하여 소듐피씨에이 10~15중량부, 베타인 10~15중량부 및 소르비톨 5~10중량부를 첨가하는 것을 특징으로 하는 장어로부터 추출한 뮤신을 이용한 항노화 기능을 가지는 화장품 제재의 제조방법.
청구항 제 1 항 내지 제 9 항 중 어느 한 항에 의해 제조된 화장품 제재.