KR101480585B1 - 신규 저분자화 콘드로이틴황산 및 그 용도 - Google Patents

신규 저분자화 콘드로이틴황산 및 그 용도 Download PDF

Info

Publication number
KR101480585B1
KR101480585B1 KR1020107009715A KR20107009715A KR101480585B1 KR 101480585 B1 KR101480585 B1 KR 101480585B1 KR 1020107009715 A KR1020107009715 A KR 1020107009715A KR 20107009715 A KR20107009715 A KR 20107009715A KR 101480585 B1 KR101480585 B1 KR 101480585B1
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
chondroitin sulfate
molecular weight
peritoneal dialysis
low molecular
kda
Prior art date
Application number
KR1020107009715A
Other languages
English (en)
Other versions
KR20100074246A (ko
Inventor
가즈히로 고지마
유키오 고토
히로시 마에다
Original Assignee
세이가가쿠 고교 가부시키가이샤
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 세이가가쿠 고교 가부시키가이샤 filed Critical 세이가가쿠 고교 가부시키가이샤
Publication of KR20100074246A publication Critical patent/KR20100074246A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR101480585B1 publication Critical patent/KR101480585B1/ko

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61M—DEVICES FOR INTRODUCING MEDIA INTO, OR ONTO, THE BODY; DEVICES FOR TRANSDUCING BODY MEDIA OR FOR TAKING MEDIA FROM THE BODY; DEVICES FOR PRODUCING OR ENDING SLEEP OR STUPOR
    • A61M1/00—Suction or pumping devices for medical purposes; Devices for carrying-off, for treatment of, or for carrying-over, body-liquids; Drainage systems
    • A61M1/14—Dialysis systems; Artificial kidneys; Blood oxygenators ; Reciprocating systems for treatment of body fluids, e.g. single needle systems for hemofiltration or pheresis
    • A61M1/28—Peritoneal dialysis ; Other peritoneal treatment, e.g. oxygenation
    • A61M1/287—Dialysates therefor
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/715—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
    • A61K31/726—Glycosaminoglycans, i.e. mucopolysaccharides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/715—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
    • A61K31/737—Sulfated polysaccharides, e.g. chondroitin sulfate, dermatan sulfate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P39/00—General protective or antinoxious agents
    • A61P39/06—Free radical scavengers or antioxidants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/08—Plasma substitutes; Perfusion solutions; Dialytics or haemodialytics; Drugs for electrolytic or acid-base disorders, e.g. hypovolemic shock
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
    • C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
    • C08B37/006—Heteroglycans, i.e. polysaccharides having more than one sugar residue in the main chain in either alternating or less regular sequence; Gellans; Succinoglycans; Arabinogalactans; Tragacanth or gum tragacanth or traganth from Astragalus; Gum Karaya from Sterculia urens; Gum Ghatti from Anogeissus latifolia; Derivatives thereof
    • C08B37/0063—Glycosaminoglycans or mucopolysaccharides, e.g. keratan sulfate; Derivatives thereof, e.g. fucoidan
    • C08B37/0069—Chondroitin-4-sulfate, i.e. chondroitin sulfate A; Dermatan sulfate, i.e. chondroitin sulfate B or beta-heparin; Chondroitin-6-sulfate, i.e. chondroitin sulfate C; Derivatives thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08J—WORKING-UP; GENERAL PROCESSES OF COMPOUNDING; AFTER-TREATMENT NOT COVERED BY SUBCLASSES C08B, C08C, C08F, C08G or C08H
    • C08J3/00—Processes of treating or compounding macromolecular substances
    • C08J3/28—Treatment by wave energy or particle radiation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08K—Use of inorganic or non-macromolecular organic substances as compounding ingredients
    • C08K3/00—Use of inorganic substances as compounding ingredients
    • C08K3/02—Elements
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08K—Use of inorganic or non-macromolecular organic substances as compounding ingredients
    • C08K3/00—Use of inorganic substances as compounding ingredients
    • C08K3/02—Elements
    • C08K3/08—Metals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08K—Use of inorganic or non-macromolecular organic substances as compounding ingredients
    • C08K5/00—Use of organic ingredients
    • C08K5/04—Oxygen-containing compounds
    • C08K5/09—Carboxylic acids; Metal salts thereof; Anhydrides thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08J—WORKING-UP; GENERAL PROCESSES OF COMPOUNDING; AFTER-TREATMENT NOT COVERED BY SUBCLASSES C08B, C08C, C08F, C08G or C08H
    • C08J2305/00—Characterised by the use of polysaccharides or of their derivatives not provided for in groups C08J2301/00 or C08J2303/00
    • C08J2305/08—Chitin; Chondroitin sulfate; Hyaluronic acid; Derivatives thereof

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Materials Engineering (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Anesthesiology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
  • External Artificial Organs (AREA)

Abstract

본 발명의 과제는, 포도당이나 그 다당체를 침투압 물질로서 포함한 복막 투석액의 장기 사용에 의한 복막 장해에 대한 억제제로서의 이용성이나, 복막 투석액에서의 침투압물질로서의 이용성 등이 있는 저분자화 콘드로이틴황산을 제공하는 것이다. 그 해결수단으로서의 본 발명의 저분자화 콘드로이틴황산은, 중량 평균 분자량이 1000∼20000이고, 또한, 하기의 구조식으로 나타나는 구성 이당 단위가 전체의 65%∼100%(몰비)를 차지하는 것을 특징으로 하는 것이다. -[4GlcAβ1-3GalNAc(6S)β1]-(식중, GlcA는 글루쿠론산 잔기를, GalNAc는 N-아세틸-D-갈락토사민산 잔기를, β1-3은 β1-3글리코시드 결합을, β1-4는 β1-4글리코시드 결합을, (6S)는 당해 단당 잔기중의 6위가 황산화되어 있는 것을 각각 나타낸다.)

Description

신규 저분자화 콘드로이틴황산 및 그 용도{NOVEL CHONDROITIN SULFATE HAVING DECREASED MOLECULAR WEIGHT AND USE THEREOF}
본 발명은, 신규 저분자화 콘드로이틴황산 및 그 용도에 관한 것이다. 보다 상세하게는, 포도당이나 그 다당체를 침투압 물질로서 포함한 복막 투석액의 장기 사용에 의한 복막 장해에 대한 억제제로서의 이용성이나, 복막 투석액에서의 침투압 물질로서의 이용성 등이 있는 저분자화 콘드로이틴황산 및 그 용도에 관한 것이다.
말기 신부전 환자에 대한 인공 투석요법은 크게 혈액 투석요법과 복막 투석요법으로 나누어진다. 이 중에서, 복막 투석요법은, 포도당이나 그 다당체를 침투압물질로서 포함한 고장(hypertonic) 투석액을 복강내에 주입하고, 복막의 반투막 기능을 이용하여 체내의 과잉의 노폐물, 물, 전해질을 제거하는 방법이다. 복막 투석요법은 혈액 투석요법과 비교하여, 식사나 활동의 제한이 적은 점, 순환 동태에 미치는 영향이 낮은 점, 잔존 신장 기능 보전능이 높은 점, 사회복귀가 용이한 점 등의 많은 장점을 가지고 있다. 그러나, 최근, 복막 투석요법의 장기화에 따른 여러 가지 장해, 예를 들면, 복막 기능 저하에 따른 물의 제거 불량이나 노폐물의 제거 부족이 심각한 문제가 되고 있다. 이러한 복막 기능 저하에는, 침투압 물질로서 복막 투석액에 포함된 포도당이 단백질과 반응하는 것에 의해 생기는 종말당화산물 (AGE:advanced glycationendproduct)이나, AGE가 그 수용체를 가진 세포에 결합하는 것이나 세포가 고농도의 포도당에 폭로되는 것에 의해서 산생되는 활성 산소종 (ROS:reactive oxygen species)이 깊이 관여하고 있다.
이상과 같은 문제를 해소하기 위해서, 포도당이나 그 다당체에 기인한 복막 기능 저하를 억제하는 물질의 탐색이나, 포도당이나 그 다당체를 대체할 만한 새로운 침투압 물질의 탐색이 현재까지 이루어지고 있으며, 그 후보물질로서 황산화 글리코사미노글리칸인 콘드로이틴황산(CS:chondroitin sulfate)이 이미 제안되어 있다(예컨대 특허문헌 1이나 비특허문헌 1).
특허문헌 1 : 일본 공개특허공보 평성1-151462호
비특허문헌 1 : 오노 다카시(大野卓志), 이마다 아키오(今田 聰雄) '복막 투석액 침투압 물질로서 콘드로이틴황산을 이용하는 것의 유용성' 투석회지, 30(1) : 65, 1997
콘드로이틴황산은, 생체내 물질이기 때문에 생체 적합성이 높고, 헤파린류와 같은 혈액 응고계에의 영향이 거의 없기 때문에, 안전성 면에서도 유망하다고 생각된다. 그러나, 동물 모델을 이용한 평가에서는, 콘드로이틴황산에는 복막 기능의 보호작용이 있다는 보고가 있는 한편(비특허문헌 1), 그러한 보호작용은 없다는 보고도 있어(스야마 카즈호(須山 一穗), 쿠마노 카즈오(熊野 和雄), 사카이 타다스(酒井 糾) '한외 여과능 저하 래트 모델에서의 한외 여과 저하 억제물질의 탐색' 일본 신장학회지, 37(9):491, 1995), 그 유용성에 대해서는 견해가 일치되어 있지 않은 것이 현 상황이다. 또한, 콘드로이틴황산으로는, 콘드로이틴황산 A, 콘드로이틴황산 C, 콘드로이틴황산 D, 콘드로이틴황산 E와 같은 황산기의 결합 위치의 차이에 기초한 몇가지 종류가 존재하는 것 외에, 구조상의 다양성이 현저하다. 따라서, 구조상의 다양성에 기초하여 기능성의 다양성도 생긴다고 생각되지만, 현재까지, 복막 투석요법에서의 콘드로이틴황산의 구조와 기능의 관계를 명백히 밝힌 보고는, 본 발명자가 아는 범위에서 존재하지 않는다.
따라서 본 발명은, 복막 투석요법에서 유용한 신규 콘드로이틴황산을 제공하는 것을 목적으로 한다.
본 발명자는 상기의 점을 감안하여 예의 연구를 행한 결과, 특정의 분자량과 특정의 구성 이당 단위가 전체의 특정 비율을 차지하는 저분자화 콘드로이틴황산이, 뛰어난 AGE 생성 억제 작용이나 활성 산소 소거 작용에 기초하여, 포도당이나 그 다당체를 침투압 물질로서 포함한 복막 투석액의 장기 사용에 의한 복막 장해에 대한 억제제로서나, 복막 투석액에서의 침투압 물질 등으로서 유용한 것을 발견하였다.
상기의 지견에 기초하여 완성된 본 발명의 저분자화 콘드로이틴황산은, 청구항 1에 기재된 바와 같이, 중량 평균 분자량이 1000∼20000이고, 또한, 하기의 구조식으로 나타나는 구성 이당 단위가 전체의 65%∼100%(몰비)를 차지하는 것을 특징으로 한다.
-[4GlcAβ1-3GalNAc(6S)β1]-
(식중, GlcA는 D-글루쿠론산 잔기를, GalNAc는 N-아세틸-D-갈락토사민 잔기를, β1-3은 β1-3글리코시드 결합을, β1-4은 β1-4글리코시드 결합을, (6S)는 당해 단당 잔기중의 6위가 황산화되고 있는 것을 각각 나타낸다.)
또한, 본 발명의 복막 투석액은, 청구항 2에 기재된 바와 같이, 청구항 1에 기재된 저분자화 콘드로이틴황산이 배합되어 있는 것을 특징으로 한다.
또한, 본 발명의 복막 투석액 배합제는, 청구항 3에 기재된 바와 같이, 청구항 1에 기재된 저분자화 콘드로이틴황산을 유효 성분으로 하는 것을 특징으로 한다.
또한, 본 발명의 포도당 및/또는 그 다당체를 침투압 물질로서 포함한 복막 투석액에 기인하는 복막 장해에 대한 억제제는, 청구항 4에 기재된 바와 같이, 청구항 1에 기재된 저분자화 콘드로이틴황산을 유효 성분으로 하는 것을 특징으로 한다.
또한, 본 발명의 AGE 생성 저해제는, 청구항 5에 기재된 바와 같이, 청구항 1에 기재된 저분자화 콘드로이틴황산을 유효 성분으로 하는 것을 특징으로 한다.
또한, 본 발명의 활성 산소 소거제는, 청구항 6에 기재된 바와 같이, 청구항 1에 기재된 저분자화 콘드로이틴황산을 유효 성분으로 하는 것을 특징으로 한다.
또한, 본 발명의 지질 과산화 억제제는, 청구항 7에 기재된 바와 같이, 청구항 1에 기재된 저분자화 콘드로이틴황산을 유효 성분으로 하는 것을 특징으로 한다.
본 발명에 의하면, 포도당이나 그 다당체를 침투압 물질로서 포함한 복막 투석액의 장기 사용에 의한 복막 장해에 대한 억제제로서의 이용성이나, 복막 투석액에서의 침투압 물질로서의 이용성 등이 있는 저분자화 콘드로이틴황산을 제공할 수 있다.
[도 1] 실시예 3의 본 발명의 저분자화 콘드로이틴황산의 복막 투석에서의 복막 보호 효과(제수율 저하 억제작용)를 나타내는 그래프이다.
[도 2] 실시예 4의 본 발명의 저분자화 콘드로이틴황산의 복막 투석에서의 복막 보호 효과(복막 지질 과산화 억제작용)를 나타내는 그래프이다.
[도 3] 실시예 7의 본 발명의 저분자화 콘드로이틴황산의 복막 투석에서의 복막 보호 효과(공지의 AGE 생성 저해제와의 비교)를 나타내는 그래프이다.
[도 4] 실시예 8의 본 발명의 저분자화 콘드로이틴황산의 복막 투석에서의 복막 보호 효과(공지의 활성 산소 소거제와의 비교)를 나타내는 그래프이다.
포도당이나 그 다당체를 침투압 물질로서 포함한 복막 투석액의 장기 사용에 의한 복막 장해에 대한 억제제로서의 이용성이나, 복막 투석액에서의 침투압 물질로서의 이용성 등이 있는, 본 발명의 저분자화 콘드로이틴황산은, 중량 평균 분자량이 1000∼20000이고, 또한, 하기의 구조식으로 나타나는 구성 이당 단위가 전체의 65%∼100%(몰비)를 차지하는 것을 특징으로 하는 것이다.
-[4GlcAβ1-3GalNAc(6S)β1]-
(식중, GlcA는 D-글루쿠론산 잔기를, GalNAc는 N-아세틸-D-갈락토사민 잔기를, β1-3은 β1-3글리코시드 결합을, β1-4는 β1-4글리코시드 결합을, (6S)는 당해 단당잔기중의 6위가 황산화되고 있는 것을 각각 나타낸다.)
본 발명의 저분자화 콘드로이틴황산은, 예를 들면, 하기의 구조식으로 나타나는 구성 이당 단위가 전체의 65%∼100%(몰비)를 차지하는 콘드로이틴황산 C(콘드로이틴 6-황산)를 출발 원료로 하고, 중량 평균 분자량이 1000∼20000이 되도록, 바람직하게는 5000∼18000이 되도록 저분자화하는 것에 의해서 조제할 수 있다. 이러한 출발 원료의 콘드로이틴황산 C로서는, 예를 들면, 청새리상어 유래의 콘드로이틴황산 C(세이가가쿠 고교 가부시키가이샤의 상품명:콘드로이틴황산 C, 나트륨염 (상어 연골), SG)를 이용할 수 있다. 그 저분자화는, 자체 공지된 콘드로이틴황산의 저분자화 방법인, 염산을 이용한 화학 분해법, 양 고환 히알루로니다아제를 이용한 효소 분해법 외에, 일본 공개특허공보2004-43645호에 기재된 전자선 조사 분해법 등으로 행할 수 있다. 한편, 출발 원료의 하기의 구조식으로 나타나는 구성 이당 단위의 점유율은, 반드시 전체의 65% 이상(몰비)일 필요는 없고, 분획 정제에 의해서 65%이상(몰비)의 획분을 취득할 수 있는 것이면, 65% 미만(몰비)이더라도 좋다. 또한, 본 발명의 저분자화 콘드로이틴황산은, 화학 합성된 것이더라도 좋고, 상어 등의 생체 조직의 배양물이나 발효물로부터 추출된 것이더라도 좋다.
-[4GlcAβ1-3GalNAc(6S)β1]-
(식중, GlcA는 D-글루쿠론산 잔기를, GalNAc는 N-아세틸-D-갈락토사민 잔기를, β1-3은 β1-3글리코시드 결합을, β1-4는 β1-4글리코시드 결합을, (6S)는 당해 단당잔기중의 6위가 황산화되고 있는 것을 각각 나타낸다.)
본 발명의 저분자화 콘드로이틴황산은, 뛰어난 AGE 생성 저해 작용이나 활성 산소 소거 작용을 가진다. 따라서, 포도당이나 그 다당체를 침투압 물질로서 포함한 복막 투석액에 배합함으로써, 이러한 복막 투석액의 장기 사용에 의한 포도당이나 그 다당체에 기인하는 복막 장해(예를 들면 지질 과산화 등)에 대한 억제제로서의 효과를 발휘시킬 수 있다. 또한, 본 발명의 저분자화 콘드로이틴황산은, 복막 투석액에서의 침투압 물질로서 복막 투석액에 배합할 수도 있다.
본 발명의 저분자화 콘드로이틴황산을, 포도당이나 그 다당체를 침투압 물질로서 포함한 기존의 복막 투석액에 배합하는 경우, 그 농도가 0.01%(w/v)∼1%(w/v)가 되도록 배합하면 좋다. 또한, 본 발명의 저분자화 콘드로이틴황산을 포도당이나 그 다당체를 대체하는 침투압 물질로서 배합하는 것에 의해 복막 투석액을 조제하는 경우, 그 농도가 1%(w/v)∼10%(w/v)가 되도록 배합하고, 나트륨, 마그네슘, 칼슘, 염소, 유산 등의 복막 투석액의 구성 성분으로서 알려져 있는 성분과 함께 복막 투석액을 구성하면 좋다.
또한, 본 발명의 저분자화 콘드로이틴황산이 가진 AGE 생성 저해 작용은, 당뇨병이나 각종 당뇨병 합병증(예를 들면 당뇨병성 망막증, 당뇨병성 신부전, 당뇨병성 신경장애, 당뇨병성 혈관 합병증) 등의 처치에 유효하고, 활성 산소 소거 작용은, 암, 백내장, 동맥 경화, 알츠하이머병, 천식 등의 처치에 유효하다. 따라서, 본 발명의 저분자화 콘드로이틴황산은, 이러한 질환의 처치를 위한 유효 성분으로서 이용할 수도 있다. 이 경우, 본 발명의 저분자화 콘드로이틴황산은, 환자에 대하여, 증상의 정도나 연령·체중 등에 기초하여 적절히 설정된 투여량을 경구적 또는 비경구적으로 투여하면 된다. 그 투여 방법은, 자체 공지된 제재 형태로 행할 수 있다.
실시예
이하에 본 발명을 실시예에 의해서 상세하게 설명하지만, 본 발명은 이하의 기재에 한정되어 해석되는 것이 아니다. 한편, 이 실시예에서는 분자량의 표시를 "kDa"로 행한다(lKDa=1000).
실시예 1:본 발명의 저분자화 콘드로이틴황산의 조제(그 1)
청새리상어 유래의 콘드로이틴황산 C(중량 평균분자량:30kDa, 세이가가쿠 고교 가부시키가이샤의 상품명:콘드로이틴황산 C, 나트륨염(상어 연골), SG)를 출발 원료로 하고, 1g를 PBS(pH 5.3) 50mL에 용해하였다. 이 용액에 양 고환 히알루로니다아제(시그마사 제품:type V) 10만U를 첨가하여 37℃에서 효소 반응시켰다. 시간이 경과함에 따라 반응액의 일부를 채취하고, GPC-HPLC로 분석하여, 저분자화의 정도를 조사하였다. 목적의 분자량에 이른 지점에서 반응액을 끓여 효소 반응을 정지시켰다. 목적의 분자량에 이르지 않은 경우는, 양고환 히알루로니다아제를 반응액에 첨가하여 효소 반응을 더 진행시키고, 목적의 분자량에 이른 지점에서 반응액을 끓여 효소 반응을 정지시켰다. 이렇게 해서 얻은 목적의 분자량 획분은, 반응 종료액에 활성탄을 첨가하여 50℃에서 1시간 반응시키고, 그 후, 반응액을 여과하고, 이어서 초산나트륨3수화물을 첨가한 후, 에탄올을 첨가하여 침전물을 얻고, 얻어진 침전물을 에탄올로 세정한 후, 건조함으로써 정제하였다. 이상의 방법에 의해서, 중량 평균 분자량이 10kDa이고, 또한, -[4GlcAβ1-3GalNAc(6S)β1]-(식중, GlcA는 D-글루쿠론산 잔기를, GalNAc는 N-아세틸-D-갈락토사민 잔기를, β1-3은 β1-3글리코시드 결합을, β1-4는 β1-4글리코시드 결합을, (6S)는 당해 단당잔기중의 6위가 황산화되어 있는 것을 각각 나타낸다.)으로 나타나는 구성 이당 단위가 전체의 74.0%(몰비)를 차지하는 본 발명의 저분자화 콘드로이틴황산을 백색 분말로서 얻었다(구성 이당 조성은 상세한 내용은 표 1과 같음).
한편, 구성 이당 조성의 분석은, 측정용 시료(약 200㎍/mL}를 100μL 채취하여, 100mM 트리스 염산 완충액(pH8.0) 40μL와 콘드로이티나아제 ABC(83mU;세이가가쿠 고교 가부시키가이샤 제품)를 첨가하여 전량을 200μL로 하고, 37℃에서 3시간 반응시켜, 반응액을 10000컷의 한외 여과 필터로 여과하고, 여과액을 HPLC(컬럼:주식회사 YMC제의 YMC겔 PA-120)로 처리하여 행하였다(실시예 2에 대해서도 동일).
Figure 112010028254208-pct00001
0S: -[4GlcAβ1-3GalNAc:β1]-
6S: -[4GlcAβ1-3GalNAc:(6S)β1]-
4S: -[4GlcAβ1-3GalNAc:(4S)β1]-
SD: -[4GlcA(2S)β1-3GalNAc(6S)β1]-
SB: -[4GlcA(2S)β1-3GalNAc(4S)β1]-
SE: -[4GlcAβ1-3GalNAc(4S,6S)β1]-
(식중, GlcA는 D-글루쿠론산 잔기를, GalNAc는 N-아세틸-D-갈락토사민 잔기를, β1는 β1-3글리코시드 결합을, β1-4는 β1-4글리코시드 결합을, (2S), (4S) 및 (6S)는 당해 단당잔기중의 2,4 및 6위가 황산화되어 있는 것을 각각 나타낸다.)
실시예2: 본 발명의 저분자화 콘드로이틴황산의 조제(그 2)
청새리상어 유래의 콘드로이틴황산 C(중량 평균 분자량:30kDa, 세이가가쿠 고교 가부시키가이샤의 상품명:콘드로이틴황산 C, 나트륨염(상어 연골), SG)를 출발 원료로 하고, 여기에 일본 공개특허공보2004-43645호에 기재된 방법에 기초하여 조사 에너지가 200kGy인 전자선을 조사함으로써, 중량 평균 분자량이 10kDa이고, 또한, -[4GlcAβ1-3GalNAc(6S)β1]-(식중, GlcA는 D-글루쿠론산 잔기를, GalNAc는 N-아세틸-D-갈락토사민 잔기를, β1-3은 β1-3글리코시드 결합을, β1-4는 β1-4글리코시드 결합을, (6S)는 당해 단당잔기중의 6위가 황산화되어 있는 것을 각각 나타낸다.)로 나타나는 구성 이당 단위가 전체의 73.0%(몰비)를 차지하는 본 발명의 저분자화 콘드로이틴황산을 백색 분말로서 얻었다(구성 이당 조성의 상세한 내용은 표 2와 같음).
Figure 112010028254208-pct00002
0S:-[4GlcAβ1-3GalNAcβ1]-
6S:-[4GlcAβ1-3GalNAc(6S)β1]-
4S:-[4GlcAβ1-3GalNAc(4S)β1]-
SD:-[4GlcA(2S)β1-3GalNAc(6S)β1]-
SB:-[4GlcA(2S)β1-3GalNAc(4S)β1]
SE:-[4GlcAβ1-3GalNAc(4S,6S)β1]-
{식중, GlcA는 D-글루쿠론산 잔기를, GlNAc는 N-아세틸-D-갈락토사민 잔기를, β1-3은 β1-3글리코시드 결합을, β1-4는 β1-4글리코시드 결합을, (2S), (4S) 및 (6S)는 당해 단당잔기중의 2, 4 및 6위가 황산화되고 있는 것을 각각 나타낸다.)
실시예 3:본 발명의 저분자화 콘드로이틴황산의 복막 투석에서의 복막 보호 효과(그 1)
(실험 방법)
8주령의 Wistar계 수컷 래트에게, 피험물질을 O.1%(w/v)의 농도로 용해한 미드펠릭 250(상품명:테루모 주식회사 제품 포도당 농도가 2.5%(w/v)의 복막 투석액)을, 에테르 마취하에 1일 1회, 15mL/body로, 7일간 복강내에 반복 투여하였다. 대조군(Control)에게는 미드펠릭 250을 마찬가지로 투여하였다. 최종 투여 다음날에 복막 평형 시험을 실시하여, 복막기능을 평가하였다. 즉, 미드펠릭 250을 60mL/kg으로 복강내에 주입하고, 4시간 후에 복강내 잔류액을 회수하였다. 회수액량을 측정하여, 복막의 한외 여과능(제수율)을 평가하였다.
한편, 피험물질은 이하와 같이 하였다.
(a)실시예 2의 방법에서 조사 에너지가 300kGy인 전자선을 조사하는 것에 의해 조제한 중량 평균 분자량이 7kDa인 본 발명의 저분자화 콘드로이틴황산 (CSC7kDa)
(b)동일, 조사 에너지가 200kGy의 전자선을 조사하는 것에 의해 조제한 중량 평균 분자량이 1OkDa인 본 발명의 저분자화 콘드로이틴황산(CSC10kDa)
(c)동일, 조사 에너지가 100kGy의 전자선을 조사하는 것에 의해 조제한 중량 평균 분자량이 17kDa인 본 발명의 저분자화 콘드로이틴황산(CSC17kDa)
(d)출발 원료로서 이용한 청새리 상어 유래의 콘드로이틴황산 C(중량 평균 분자량:30kDa, 세이가가쿠 고교 가부시키가이샤의 상품명:콘드로이틴황산 C, 나트륨염(상어 연골), SG)(CSC30kDa)
(실험 결과)
도 1에 도시한다. 도 1로부터 명백하듯이, 중량 평균 분자량이 7kDa, 10kDa, 17kDa의 본 발명의 저분자화 콘드로이틴황산에는, 대조군에 비해서 통계학적으로 의미가 있는 복막 보호 효과가 인정되었지만, 출발 원료로서 이용한 중량 평균 분자량이 30kDa인 상어 어깨 연골 유래의 콘드로이틴황산 C에는 통계학적으로 의미가 있는 효과는 인정되지 않았다(도면 중에서, Normal의 표기는 복막 투석액의 투여를 행하지 않은 경우의 결과이다). 또한, 상어 지느러미 연골 유래의 콘드로이틴황산 C(중량 평균 분자량:20kDa)를 출발 원료로 하고, 이것을 염산을 이용하여 가수분해하여 조제한, 중량 평균 분자량이 10kDa이고, 또한, -[4GlcAβ1-3GalNAc(6S)β1]-(식중, GlcA는 D-글루쿠론산 잔기를, GalNAc는 N-아세틸-D-갈락토사민 잔기를,β-3는 β1-3글리코시드 결합을, β1-4는 β1-4글리코시드 결합을, (6S)는 해당 단당잔기중의 6위가 황산화되어 있는 것을 각각 나타낸다.)로 나타나는 구성 이당 단위가 전체의 59.0%(몰비)를 차지하는 저분자화 콘드로이틴황산에도 통계학적으로 의미가 있는 효과는 인정되지 않았다(별도의 실험에 의한 것이다).
실시예 4:본 발명의 저분자화 콘드로이틴황산의 복막 투석에서의 복막 보호 효과(그 2)
(실험 방법)
8주령의 Wistar계 수컷 래트에게, 피험물질로서 실시예 1의 방법으로 조제한 중량 평균 분자량이 1OkDa인 본 발명의 저분자화 콘드로이틴황산(CSC10kDa)을 0.1% (w/v)의 농도로 용해한 미드펠릭 250(상품명:테루모 주식회사 제품 포도당 농도가 2.5%(w/v)의 복막 투석액)를, 에테르 마취하에 1일 1회, 15mL/body로, 7일간 복강내에 반복 투여하였다. 대조군(Control)에게는 미드펠릭 250을 마찬가지로 투여하였다. 최종 투여 다음날에 복막(대망)을 채취하고, 조직중의 과산화 지질 함량을 티오바르비탈산법에 의해 정량함으로써, 피험물질의 복막 보호 효과를 복막 지질 과산화 억제작용을 지표로 하여 평가하였다.
(실험 결과)
도 2에 도시한다. 도 2로부터 명백하듯이, 중량 평균 분자량이 10kDa의 본 발명의 저분자화 콘드로이틴황산에는, 대조군에 비해서 통계학적으로 의미가 있는 복막 보호 효과가 인정되었다(도면 중에서, Normal의 표기는 복막 투석액의 투여를 행하지 않은 경우의 결과이다).
실시예 5: 본 발명의 저분자화 콘드로이틴황산의 AGE 생성 저해 작용(실험방법)
실험은, T Kiho등의 방법(Biosci Biolechnol Biochem68:200, 2004)에 준하여 실시하였다. 즉, 글루코오스 500mM 및 혈청 알부민 10mg/mL를 포함한 0.1M 인산 완충액(pH7.4)에, 피험물질을 0.1%(w/v)의 농도로 용해하고, 37℃로 4주간 인큐베이트하였다. 4주일후, 여기광파장 355nm, 측정 파장 460nm으로, AGE가 발하는 형광치를 측정하고, AGE 생성량을 계측하여, 하기의 계산식으로 AGE 생성 저해율을 산출하였다.
[수식 1]
Figure 112010028254208-pct00003
(실험 결과)
표 3에 나타낸다. 한편, 피험물질은 이하와 같이 하였다. 또한, 양성 대조 물질로서 1mM의 아미노구아니딘(공지의 AGE 생성 저해제)을 이용하였다.
(a)실시예 1의 방법으로 조제한 중량 평균 분자량이 10kDa인 본 발명의 저분자화 콘드로이틴황산(CSC1OkDa)
(b)동일한 방법으로 고래 유래의 콘드로이틴황산 A(중량 평균 분자량:30kDa, 세이가가쿠고교 가부시키가이샤의 상품명:콘드로이틴황산 A,나트륨염(고래 연골), SG)로부터 조제한, 중량 평균 분자량이 1OkDa이고, 또한, -[4GlcAβ1-3GalNAc(6S)β1]-(식중, GlcA는 D-글루쿠론산 잔기를, GalNAc는 N-아세틸-D-갈락토사민 잔기를, β1-3은 β1-3글리코시드 결합을, β1-4는 β1-4글리코시드 결합을, (6S)는 당해 단당잔기중의 6위가 황산화되고 있는 것을 각각 나타낸다.)로 나타나는 구성 이당 단위를 거의 포함하지 않는 (20%∼30%) 저분자화 콘드로이틴황산(CSA10kDa)
(c)동일한 방법으로 오징어 유래의 콘드로이틴황산 E(중량 평균 분자량: 75kDa, 세이가가쿠 고교 가부시키가이샤의 상품명:콘드로이틴황산 E, 나트륨염(오징어 연골로부터 조제한, 중량 평균 분자량이 10kDa이고, 또한, -[4GlcAβ1-3GalNAc(6S)β1]-(식중, GlcA는 D-글루쿠론산 잔기를, GalNAc는 N-아세틸-D-갈락토사민 잔기를, β1-3은 β1-3글리코시드 결합을, β1-4은 β1-4글리코시드 결합을, (6S)는 당해 단당잔기중의 6위가 황산화되고 있는 것을 각각 나타낸다.)로 나타나는 구성 이당 단위를 거의 포함하지 않는 (10%∼20%) 저분자화 콘드로이틴황산 (CSE1OkDa)
(d)실시예 2의 방법으로 맨드라미 유래의 데르마탄 황산(중량 평균 분자량: 40kDa)에 조사 에너지가 200kGy인 전자선을 조사하는 것에 의해 조제한 중량 평균 분자량이 1OkDa이고, 또한, -[4GlcAβ1-3GalNAc(6S)β1]-(식중, GlcA는 D-글루쿠론산 잔기를, GalNAc는 N-아세틸-D-갈락토사민 잔기를, β1-3은 β1-3글리코시드 결합을, β1-4는 β1-4글리코시드 결합을, (6S)는 당해 단당 잔기중의 6위가 황산화되고 있는 것을 각각 나타낸다)로 나타나는 구성 이당 단위를 거의 포함하지 않는 (10% 이하) 저분자화 데르마탄 황산(DS1OkDa)
Figure 112010028254208-pct00004
표 3으로부터 명백하듯이, 중량 평균 분자량이 1OkDa인 본 발명의 저분자화 콘드로이틴황산(CSC1OkDa)만이, 양성 대조 물질인 아미노구아니딘에 필적하는 AGE 생성 저해 작용을 가지고 있다.
실시예6:본 발명의 저분자화 콘드로이틴황산의 활성 산소 소거 작용
(실험 방법)
실험은, OlgaT 등의 방법(Toxicological Science76:376, 2003)에 준하여 실시하였다. 즉, 호중구와 같이 분화시킨 HL-60 세포를 2×1O6cells/mL가 되도록 배양액에 현탁하고, 얻어진 세포현탁액을 96well plate에 50μL/well로 첨가한 후, 피험물질(종농도 0.03%, 0.1%, 0.3%:w/v)을 50μL/well로 첨가하였다. 또한, 음성 대조로서 배양액을 50μL/well로 첨가하였다. ROS 검출용 형광 기질 L-Ol2(종농도 100μM;와코 순약 공업 주식회사 제품)와 ROS 생성 자극제인 포르볼 에스테르(포르볼-12-미리스테이트-13-아세테이트, Sigma사 제품, 종농도 5ng/mL)을, 각각 50μL/well로 첨가한 후, 5%CO2 인큐베이터내에서 37℃, 25분간 인큐베이트하였다. 백그라운드로서 포르볼 에스테르 대신에 배양액을 첨가한 것을 마찬가지로 인큐베이트하였다. 인큐베이트 종료후, ARVOSX1420 멀티 라벨 카운터(PerkinElmer사 제품)에서 발광 강도(CPS)를 측정하고, 하기의 계산식으로 ROS 소거율을 산출하였다.
[수식 2]
Figure 112010028254208-pct00005
(실험 결과)
표 4 및 표 5에 나타낸다. 한편, 피험물질은 이하와 같이 하였다. 또한, 양성 대조 물질로서 20nM의 스타우로스포린(공지의 포르볼 에스테르 시그날 저해제)을 이용하였다.
[표 4]
(a)실시예 1의 방법으로 조제한 중량 평균 분자량이 1kDa인 본 발명의 저분자화 콘드로이틴황산(CSC1kDa)
(b)동일, 중량 평균 분자량이 1OkDa인 본 발명의 저분자화 콘드로이틴황산 (CSC10kDa)
(c)출발 원료로서 이용한 청새리상어 유래의 콘드로이틴황산 C(중량평균 분자량:30kDa, 세이가가쿠 고교 가부시키가이샤의 상품명:콘드로이틴황산 C, 나트륨염(상어 연골), SG)(CSC30kDa)
(d)출발 원료로서 콘드로이틴(중량 평균 분자량:5kDa, 세이가가쿠 고교 가부시키가이샤의 상품명:콘드로이틴, 나트륨염)을 이용하여 동일한 방법으로 조제한, 중량 평균 분자량이 1kDa이며, 또한, -[4GlcAβ1-3GalNAc(6S)β1]-(식중, GlcA는 D-글루쿠론산 잔기를, GalNAc는 N-아세틸-D-갈락토사민 잔기를, β1-3은 β1-3글리코시드 결합을, β1-4는 β1-4글리코시드 결합을, (6S)는 당해 단당잔기중의 6위가 황산화되고 있는 것을 각각 나타낸다.)로 나타나는 구성 이당 단위를 포함하지 않는 저분자화 콘드로이틴(Ch1kDa)
(e)출발원료로서 이용한 콘드로이틴(Ch5kDa)
(f)출발 원료로서 고래 유래의 콘드로이틴황산 A(중량 평균 분자량:30kDa, 세이가가쿠 고교 가부시키가이샤의 상품명:콘드로이틴황산 A, 나트륨염(고래 연골), SG)를 이용하여 동일한 방법으로 조제한, 중량 평균 분자량이 1kDa이고, 또한, -[4GlcAβ1-3GalNAc(6S)β1]-(식중, GlcA는 D-글루쿠론산 잔기를, GalNAc는 N-아세틸-D-갈락토사민 잔기를, β1-3은 β1-3글리코시드 결합을, β1-4는 β1-4글리코시드결합을, (6S)는 당해 단당 잔기중의 6위가 황산화되고 있는 것을 각각 나타낸다.)로 나타나는 구성 이당 단위를 거의 포함하지 않는 (20%∼30%) 저분자화 콘드로이틴황산(CS1kDa)
(g)동일, 중량 평균 분자량이 5kDa의 저분자화 콘드로이틴황산(CSA5kDa)
(h)동일, 중량 평균 분자량이 10kDa의 저분자화 콘드로이틴황산(CSA10kDa)
(i)출발 원료로서 이용한 고래 유래의 콘드로이틴황산 A(CSA30kDa)
(j)출발 원료로서 오징어 유래의 콘드로이틴황산 E(중량 평균 분자량:75kDa, 세이가가쿠 고교 가부시키가이샤의 상품명:콘드로이틴황산 E, 나트륨염(오징어 연골))을 이용하여 동일한 방법으로 조제한, 중량 평균 분자량이 5kDa이고, 또한,- [4GlcAβ1-3GalNAc(6S)β1]-(식중, GlcA는 D-글루쿠론산 잔기를, GalNAc는 N-아세틸-D-갈락토사민 잔기를, β1-3은 β1-3글리코시드 결합을, β1-4는 β1-4글리코시드 결합을, (6S)는 당해 단당잔기중의 6위가 황산화되고 있는 것을 각각 나타낸다.)로 나타나는 구성 이당 단위를 거의 포함하지 않는 (10%∼20%) 저분자화 콘드로이틴황산(CSE5kDa)
(k)동일, 중량 평균 분자량이 10kDa의 저분자화 콘드로이틴황산(CSE10kDa)
(l)동일, 중량 평균 분자량이 25kDa의 저분자화 콘드로이틴황산(CSE25kDa)
(m)출발 원료로서 이용한 오징어 유래의 콘드로이틴황산 E(CSE75kDa)
(n)출발 원료로서 맨드라미 유래의 데르마탄 황산(중량 평균 분자량:40kDa)을 이용하여 실시예 2의 방법으로 조사 에너지가 300kGy인 전자선을 조사하는 것에 의해 조제한 중량 평균분자량이 5kDa이고, 또한, -[4GlcAβ1-3GalNAc(6S)β1]-(식중, GlcA는 D-글루쿠론산 잔기를, GalNAc는 N-아세틸-D-갈락토사민 잔기를, β1-3은 β1-3글리코시드 결합을, β1-4는 β1-4글리코시드 결합을, (6S)는 해당 단당잔기중의 6위가 황산화되고 있는 것을 각각 나타낸다.)로 나타나는 구성 이당 단위를 거의 포함하지 않는 (10% 이하) 저분자화 데르마탄 황산(DS5kDa)
(o)동일, 조사 에너지가 200kGy인 전자선을 조사함으로써 조제한 중량평균 분자량이 10kDa의 저분자화 데르마탄 황산(DS10kDa)
(p)출발 원료로서 이용한 맨드라미 유래의 데르마탄 황산(DS40kDa)
(q)중량 평균 분자량이 900kDa이고, 또한, -[4GlcAβ1-3GalNAc(6S)β1]-(식중, GlcA는 D-글루쿠론산 잔기를, GalNAc는 N-아세틸-D-갈락토사민 잔기를, β1-3은 β1-3글리코시드 결합을, β1-4는 β1-4글리코시드 결합을, (6S)는 당해 단당잔기중의 6위가 황산화되어 있는 것을 각각 나타낸다.)로 나타나는 구성 이당 단위를 포함하지 않는 맨드라미 유래의 히알루론산(세이가가쿠 고교 가부시키가이샤 제품) (HA900kDa)
[표 5]
(a)실시예 2의 방법으로 조사 에너지가 300kGy인 전자선을 조사하는 것에 의해 조제한 중량 평균 분자량이 7kDa인 본 발명의 저분자화 콘드로이틴황산 (CSC7kDa)
(b)동일, 조사 에너지가 200kGy인 전자선을 조사하는 것에 의해 조제한 중량 평균 분자량이 1OkDa인 본 발명의 저분자화 콘드로이틴황산(CSC10kDa)
(c)동일, 조사 에너지가 100kGy인 전자선을 조사하는 것에 의해 조제한 중량 평균 분자량이 17kDa인 본 발명의 저분자화 콘드로이틴황산(CSC17kDa)
Figure 112010028254208-pct00006
Figure 112010028254208-pct00007
표 4로부터 명백하듯이, 중량 평균 분자량이 1kDa와 10kDa인 본 발명의 저분자화 콘드로이틴황산(CSC1kDa과 CSC1OkDa)만이, 뛰어난 ROS소거율을 가지고 있으며, CSC1OkDa의 ROS소거율은, 양성 대조 물질인 스타우로스포린의 ROS소거율에 필적하는 것이었다. 또한, 표 5로부터 명백하듯이, 본 발명의 저분자화 콘드로이틴황 산의 활성 산소 소거 작용은, 농도 의존적이었다.
실시예7:본 발명의 저분자화 콘드로이틴황산의 복막 투석에서의 복막 보호 효과(공지의 AGE 생성제와의 비교)
(실험 방법)
8주령의 Wistar계 수컷 래트에게, 피험물질을 소정의 농도로 용해한 미드펠릭 250(상품명:테루모 주식회사 제품 포도당 농도가 2.5%(w/v)의 복막 투석액)를, 에테르 마취하에 1일 1회, 15mL/body로, 7일간 복강내에 반복 투여하였다. 대조군 (Control)에게는 미드펠릭 250을 마찬가지로 투여하였다. 최종 투여 다음날에 복막 평형 시험을 실시하여, 복막기능을 평가하였다. 즉, 미드펠릭 250을 60mL/kg로 복강내에 주입하고, 4시간 후에 복강내 잔류액을 회수하였다. 회수액량을 측정하여, 복막의 한외 여과능(제수율)을 평가하였다. 또한, 회수액중의 포도당농도를 측정하여, 복막 투과성을 평가하였다.
한편, 피험물질은 이하와 같이 하였다.
(a)실시예 2의 방법으로 조사 에너지가 200kGy의 전자선을 조사하는 것에 의해 조제한 중량 평균 분자량이 1OkDa인 본 발명의 저분자화 콘드로이틴황산 (CSC1OkDa):농도 O.1%(w/v)
(b)공지의 AGE 생성 저해제인 아미노구아니딘:농도 O.1%(w/v)
(c)동일, 피리독사민:농도 0.05%(w/v)
(실험 결과)
도 3에 도시한다. 도 3으로부터 명백하듯이, 중량 평균 분자량이 10kDa인 본 발명의 저분자화 콘드로이틴황산에는, 대조군에 비해서 통계학적으로 의미가 있는 복막 보호 효과가 인정되고, 그 효과는, 공지의 AGE 생성 저해제인 아미노구아니딘 및 피리독사민의 효과보다 뛰어난 것이었다(도면 중, Normal의 표기는 복막 투석액의 투여를 행하지 않은 경우의 결과이다).
실시예 8:본 발명의 저분자화 콘드로이틴황산의 복막 투석에서의 복막 보호 효과(공지의 활성 산소 소거제와의 비교)
(실험 방법)
실시예 7과 동일하게 하여, 복막의 한외 여과능(제수율)과 복막 투과성을 평가하였다. 한편, 피험물질은 이하와 같이 하였다.
(a)실시예 2의 방법으로 조사 에너지가 200kGy의 전자선을 조사하는 것에 의해 조제한 중량 평균 분자량이 10kDa인 본 발명의 저분자화 콘드로이틴황산 (CSC10kDa):농도 O.1%(w/v)
(b)공지의 활성 산소 소거제인 L-아스코르빈산:농도 0.5mM
(c)동일, 트로록스:농도 0.5mM
(d)동일, N-아세틸-L-시스테인:농도 10mM
(실험 결과)
도 4에 도시한다. 도 4로부터 명백하듯이, 중량 평균 분자량이 10kDa의 본 발명의 저분자화 콘드로이틴황산에는, 대조군에 대해서 통계학적으로 의미가 있는 복막 보호 효과가 인정되고, 그 효과는, 공지의 활성 산소 소거제의 효과보다 뛰어난 것이었다(도면 중, Normal의 표기는 복막 투석액의 투여를 행하지 않은 경우의 결과이다).
복막 투석액 조제예 1:
이하의 조성으로 이루어진 복막 투석액을 통상의 방법에 따라서 조제하였다.
포도당 2.5(w/v%)
나트륨 135.0(mEq/L)
마그네슘 1.5(mEq/L)
칼슘 4.0(mEq/L)
염소 105.5(mEq/L)
유산 35.0(mEq/L)
본 발명의 저분자화 콘드로이틴황산 O.1(w/v%)
침투압비(대생리식염수) 약 1.4∼1.6
pH 6.3∼7.3
복막 투석액 조제예 2:
이하의 조성으로 이루어진 복막 투석액을 통상의 방법에 따라서 조제하였다.
본 발명의 저분자화 콘드로이틴황산 2.5(w/v%)
나트륨 135.0(mEq/L)
마그네슘 1.5(mEq/L)
칼슘 4.0(mEq/L)
염소 105.5(mEq/L)
유산 35.0(mEq/L)
침투압비(대생리식염수) 약 1.4∼1.6
pH 6.3∼7.3
[산업상이용가능성]
본 발명은, 포도당이나 그 다당체를 침투압 물질로서 포함한 복막 투석액의 장기 사용에 의한 복막 장해에 대한 억제제로서의 이용성이나, 복막 투석액에서의 침투압 물질로서의 이용성 등이 있는 저분자화 콘드로이틴황산을 제공할 수 있는 점에서 산업상 이용가능성을 가진다.

Claims (7)

  1. 중량 평균 분자량이 1000∼20000이고, 또한, 하기의 구조식으로 나타나는 구성 이당 단위가 전체의 65%∼100%(몰비)를 차지하는 것을 특징으로 하는 저분자화 콘드로이틴황산.
    -[4GlcAβ1-3GalNAc(6S)β1]-
    (식중, GlcA는 D-글루쿠론산 잔기를, GalNAc는 N-아세틸-D-갈락토사민 잔기를, β1-3은 β1-3글리코시드 결합을, β1-4는 β1-4글리코시드 결합을, (6S)는 당해 단당 잔기중의 6위가 황산화되고 있는 것을 각각 나타낸다.)
  2. 제 1 항에 기재된 저분자화 콘드로이틴황산이 배합되어 있는 것을 특징으로 하는 복막 투석액.
  3. 제 1 항에 기재된 저분자화 콘드로이틴황산을 유효 성분으로 하는 것을 특징으로 하는 복막 투석액 배합제.
  4. 제 1 항에 기재된 저분자화 콘드로이틴황산을 유효 성분으로 하는 것을 특징으로 하는 포도당 및/또는 그 다당체를 침투압 물질로서 포함한 복막 투석액에 기인하는 복막 장해에 대한 억제제.
  5. 제 1 항에 기재된 저분자화 콘드로이틴황산을 유효 성분으로 하는 것을 특징으로 하는 종말당화산물(AGE:advanced glycationendproduct) 생성 저해제.
  6. 제 1 항에 기재된 저분자화 콘드로이틴황산을 유효 성분으로 하는 것을 특징으로 하는 활성 산소 소거제.
  7. 제 1 항에 기재된 저분자화 콘드로이틴황산을 유효 성분으로 하는 것을 특징으로 하는 지질 과산화 억제제.
KR1020107009715A 2007-10-01 2008-10-01 신규 저분자화 콘드로이틴황산 및 그 용도 KR101480585B1 (ko)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2007257945 2007-10-01
JPJP-P-2007-257945 2007-10-01
JP2008109492 2008-04-18
JPJP-P-2008-109492 2008-04-18
PCT/JP2008/067805 WO2009044765A1 (ja) 2007-10-01 2008-10-01 新規な低分子化コンドロイチン硫酸およびその用途

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20100074246A KR20100074246A (ko) 2010-07-01
KR101480585B1 true KR101480585B1 (ko) 2015-01-08

Family

ID=40526190

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020107009715A KR101480585B1 (ko) 2007-10-01 2008-10-01 신규 저분자화 콘드로이틴황산 및 그 용도

Country Status (7)

Country Link
US (2) US20100286085A1 (ko)
EP (1) EP2204387B1 (ko)
JP (1) JP5320296B2 (ko)
KR (1) KR101480585B1 (ko)
CN (1) CN101883794B (ko)
CA (1) CA2706254C (ko)
WO (1) WO2009044765A1 (ko)

Families Citing this family (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
PL2707396T3 (pl) * 2011-05-12 2019-04-30 Gnosis Spa Biotechnologiczny siarczanowany siarczan chondroityny w pozycji 4 lub 6 na tym samym łańcuchu polisacharydowyn i sposób jego wytwarzania
JP5873319B2 (ja) * 2011-12-16 2016-03-01 株式会社コーセー メイラード反応阻害剤
ITMI20120880A1 (it) * 2012-05-22 2013-11-23 Gnosis Spa Condroitin 6-solfato biotecnologico a basso peso molecolare dotato di attivita' antiinfiammatoria e antiartritica e suo uso nel trattamento e nella prevenzione dell'osteoartrite
ITMI20120896A1 (it) 2012-05-23 2013-11-24 Bongulielmi Reto Condroitina per uso in medicina
CN103342758B (zh) * 2013-07-08 2016-01-20 山东大学 低分子量硫酸软骨素及其在制备血管性痴呆或轻度认知损伤的药物中的应用
JP6312074B2 (ja) * 2013-08-09 2018-04-18 学校法人明治大学 インスリン抵抗性軽減用食品及びインスリン抵抗性軽減薬
WO2015070386A1 (zh) * 2013-11-13 2015-05-21 青岛贝尔特生物科技有限公司 一种预防中老年人骨关节疾病的膳食营养补充剂
JP6147322B2 (ja) * 2015-10-01 2017-06-14 ゼリアヘルスウエイ株式会社 サーチュイン１活性化剤
CN105566513A (zh) * 2016-02-02 2016-05-11 山东蓝孚高能物理技术股份有限公司 一种电子束辐照制备低分子硫酸软骨素的方法
CN105924544B (zh) * 2016-05-16 2018-03-09 山东大学 一种高硫酸化硫酸软骨素及其制备方法与应用
JP7153429B2 (ja) * 2017-06-22 2022-10-14 小林製薬株式会社 活性酸素消去剤
CN109674814B (zh) * 2019-02-28 2021-08-17 山东第一医科大学(山东省医学科学院) 一种硫酸软骨素纳米硒的制备方法及其在制备抑制tau蛋白过度磷酸化药物中的应用
CN111662394B (zh) * 2019-03-05 2022-11-04 中国医学科学院药物研究所 硫酸软骨素多糖半合成制备方法和应用
CN113318121B (zh) * 2021-06-23 2022-03-25 黑龙江中医药大学 一种用于治疗糖尿病性视网膜病变的药物及其制备方法

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1993014796A1 (en) 1992-02-04 1993-08-05 Baxter International, Inc. Peritoneal dialysis composition and method usable during and after peritonitis
WO1998001141A1 (en) 1996-07-09 1998-01-15 Bieffe Medital S.P.A. Alternative osmotic agents and related solutions for peritoneal dialysis

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS5740502A (en) * 1980-08-22 1982-03-06 Seikagaku Kogyo Co Ltd Depolymerization of acidic mucopolysaccharide
JPH01151462A (ja) 1987-12-09 1989-06-14 Terumo Corp 腹膜灌流液
ATE239503T1 (de) * 1992-02-04 2003-05-15 Baxter Int Lösungen für die peritonealdialyse und deren verwendung zum verringern von schädigungen an mesothelialen zellen
CA2118217A1 (en) * 1992-04-17 1993-10-28 Katsukiyo Sakurai Platinum complex and antitumor agent
IT1274351B (it) * 1994-10-06 1997-07-17 Alfa Wassermann Spa Uso di alcuni glicosaminoglicani nella dialisi peritoneale.
JP2004043645A (ja) * 2002-07-11 2004-02-12 Seikagaku Kogyo Co Ltd 低分子化糖の製造方法
JP2004217594A (ja) * 2003-01-16 2004-08-05 Toshie Tsuchiya ギャップ機能抑制剤
WO2006068146A1 (ja) * 2004-12-20 2006-06-29 Seikagaku Corporation 新規コンドロイチン硫酸画分

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1993014796A1 (en) 1992-02-04 1993-08-05 Baxter International, Inc. Peritoneal dialysis composition and method usable during and after peritonitis
WO1998001141A1 (en) 1996-07-09 1998-01-15 Bieffe Medital S.P.A. Alternative osmotic agents and related solutions for peritoneal dialysis

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Artifical Cells, Blood Sbustitutes and Biotechnology. 1990, Vol.18, No.1, pp.1-24 *

Also Published As

Publication number Publication date
EP2204387A1 (en) 2010-07-07
CN101883794A (zh) 2010-11-10
WO2009044765A1 (ja) 2009-04-09
JP5320296B2 (ja) 2013-10-23
US20100286085A1 (en) 2010-11-11
JPWO2009044765A1 (ja) 2011-02-10
EP2204387B1 (en) 2016-07-20
EP2204387A4 (en) 2011-08-24
US9149572B2 (en) 2015-10-06
CA2706254C (en) 2016-11-08
US20130196943A1 (en) 2013-08-01
KR20100074246A (ko) 2010-07-01
CA2706254A1 (en) 2009-04-09
CN101883794B (zh) 2012-11-07

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR101480585B1 (ko) 신규 저분자화 콘드로이틴황산 및 그 용도
US11395833B2 (en) Process for the preparation and purification of the sodium salt of hyaluronic acid
JP4278716B2 (ja) Ｎ−硫酸化ヒアルロン酸化合物、その誘導体および製造方法
US6946551B2 (en) Preparation of hyaluronic acid from eggshell membrane
CN1163236C (zh) 用于连续性不卧床性腹膜透析的生物适合的水溶液
JPS6117A (ja) ムコ多糖系癌転移抑制剤
RU2613887C2 (ru) Устойчивый к расщеплению сшитый низкомолекулярный гиалуронат
EP3463392B1 (en) Polysaccharide compositions for tissue repair
CN101501075A (zh) 支化透明质酸和制造方法
US6610666B1 (en) Hyaluronan product and process for manufacturing thereof
US20160067275A1 (en) Co-crosslinked phosphated native and/or functionalized polysaccharide-based hydogel
CN111228296A (zh) 一种交联透明质酸依克多因等渗创口冲洗液
PL200677B1 (pl) Sposób oczyszczania wysokocząsteczkowego kwasu hialuronowego
EP1366082B1 (en) Highly sulfated derivatives of k5 polysaccharide and their preparation
DK172798B1 (da) Fremgangsmåde til fremstilling af lavmolekylære hepariner ved depolymerisation af normal heparin
WO2019124363A1 (ja) ポリ硫酸ペントサン及びポリ硫酸ペントサンを含む医薬
RU2477138C1 (ru) Способ получения заполняющего материала для пластической хирургии и инструментальной косметологии, заполняющий материал и способ введения заполняющего материала в проблемную зону
CN110950976B (zh) 一种氨基葡萄糖透明质酸盐及应用
JP2007534749A (ja) コラーゲン原線維形成に関連する疾患または状態の治療のためのコンドロイチン硫酸（ｃｓ−ｅ）の使用
Swann et al. Hyaluronic acid
US10632144B2 (en) Low polydispersity, low molecular weight biotechnological chondroitin sulfate with anti-inflammatory and antiarthritis activity and use thereof in the prevention of osteoarthritis
TWI763817B (zh) 用於透析的滲透活性組成物
JP4633232B2 (ja) 成長因子誘導剤
CN105949478B (zh) 除去交联透明质酸中交联剂的方法
CN115703846B (zh) 一种透明质酸衍生物的纯化方法

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
E701 Decision to grant or registration of patent right
GRNT Written decision to grant
LAPS Lapse due to unpaid annual fee