KR101435260B1

KR101435260B1 - 애기마디잘록이 추출물을 포함하는 자외선에 대한 피부 보호 및 치료용 조성물

Info

Publication number: KR101435260B1
Application number: KR1020120074685A
Authority: KR
Inventors: 현진원; 이남호; 강희경; 유은숙; 고영상; 서인수
Original assignee: 제주대학교 산학협력단
Priority date: 2012-07-09
Filing date: 2012-07-09
Publication date: 2014-08-28
Also published as: KR20140007218A

Abstract

본 발명은 애기마디잘록이 추출물을 포함하는 자외선에 대한 피부 보호 및 치료용 조성물 및 상기 조성물 함유 자외선에 대한 피부 보호 및 치료용 제품에 관한 것으로, 구체적으로 본 발명에 따른 애기마디잘록이 추출물을 포함하는 자외선에 대한 피부 보호 및 치료용 조성물은 과산화수소(H₂O₂) 및 UVB 방사선에 의해 발생된 세포내 활성 산소종(reactive oxygen species, ROS), 잔틴/잔틴 산화효소 시스템(xanthine/xanthine oxidase system)에 의해 발생된 초과산화물 음이온(superoxide anion) 및 펜톤 반응(Fenton reaction, FeSO₄+H₂O₂)에 의해 발생된 수산화 라디칼(hydroxyl radical)에 대한 소거(scavenging) 활성을 가지면서, UVB를 흡수할 뿐 아니라 UVB로 인해 발생될 수 있는 산화 스트레스로 인한 세포 성분(예, 지질, 단백질 및 DNA) 손상 및 세포사멸(apoptosis)을 완화 또는 감소시키는 것으로 나타난 애기마디잘록이 추출물을 포함함으로써 피부세포를 UVB로 인한 손상으로부터 효과적으로 보호할 수 있으므로, 자외선에 대한 피부 보호용 기능성 화장료 조성물 또는 약제학적 조성물의 원료로 유용하게 활용될 수 있다.

Description

애기마디잘록이 추출물을 포함하는 자외선에 대한 피부 보호 및 치료용 조성물{Compositions for protecting and treating skin against ultraviolet ray comprising Lomentaria hakodatensis extracts}

본 발명은 애기마디잘록이 추출물을 포함하는 자외선에 대한 피부 보호 및 치료용 조성물 및 상기 조성물 함유 자외선에 대한 피부 보호용 및 치료용 제품에 관한 것이다.

자외선 B(ultraviolet B, UVB 방사선(radiation), 파장: 280-320 nm)는 피부암(skin cancer), 면역시스템 억제 및 광노화(photo-aging) 등의 피부에 대한 유해 작용을 일으키는 주요 환경 요인 중 하나이다[Karol, M. H., Biomol . Ther. 17: 113-124.]. 이러한 UVB 방사선에 의해 발생된 활성 산소종(reactive oxygen species, ROS)은 지질(lipids), 단백질(proteins) 및 DNA와 같은 세포 성분들에 산화성 손상(oxidative damage)을 일으켜, 결과적으로 피부 노화를 촉진시키고 암질환의 피부 병변을 유발하게 된다[Ramachandran, S. 등, Arch . Dermatol . Res . (2010), 302, 733-744].

ROS로 인한 세포 손상으로부터 피부를 보호하기 위한 수많은 항산화물들이 제시되었으며, 예를 들면 (-)-에피갈로카테킨-3-갈레이트((-)-epigallocatechin-3-gallate) 및 레스베라트롤(resveratrol) 등이 UVB로 인한 피부 손상을 저해하는 것으로 알려져 있다[Huang, C. C. 등, Molecules . (2007), 12, 1845-1858; Aziz, M. H. 등, Photochem . Photobiol . (2005), 81, 25-31]. 또한, 카로티노이드(carotenoids), 페놀화합물(phenolics) 또는 항산화 비타민(antioxidant vitamins) 등의 화합물을 함유하는 다양한 종류의 해조류(marine algae) 또는 해초류(seaweed)들도 생물학적 항산화 시스템 및 직접적인 유리 라디칼(free radicals) 소거를 통해 피부 세포에서의 산화 스트레스(oxidative stress)를 완화시키는 것으로 알려져 있다[Kim, S. J. 등, Food Sci . Biotechnol . (2005), 14, 798-802; Maeda, H. 등, Asia . Pac . J. Clin . Nutr. (2008), 1, 196-199].

홍조류(red algae)는 특히 이러한 피부-보호 항산화물들이 풍부한 원료이며, 이러한 홍조류의 하나인 애기마디잘록이(Lomentaria hakodatensis Yendo, Champiaceae)는 대한민국 전역에 광범위하게 분포하는 것으로 알려져 있다[Lee, O. H. 등, J. Phycol . (2011), 47, 548-556]. 그러나 UVB로 인한 손상으로부터 피부 세포를 보호하는 역할에 대해서는 아직까지 밝혀진 바 없다. 이에 본 발명자들은 애기마디잘록이의 에탄올 추출물(L. hakodatensis ethanol extract, LHE)이 UVB로 인한 피부세포(keratinocyte) 손상에 어떤 영향을 줄 수 있는지 연구하였으며, 그 결과 LHE가 ROS를 소거하고 UVB 광선을 흡수함으로써 UVB로 인한 산화 스트레스로부터 피부세포를 보호함을 확인하였다.

따라서 본 발명의 목적은 자외선 B((ultraviolet B, UVB)로 인한 산화 스트레스 및 손상으로부터 효과적으로 피부를 보호할 수 있는 피부 보호 및 치료용 조성물을 제공하는 것이다.

또한 본 발명의 다른 목적은 상기 조성물을 포함하는 피부 보호 및 치료용 제품을 제공하는 것이다.

상기 목적에 따라, 본 발명은 애기마디잘록이(Lomentaria hakodatensis Yendo, Champiaceae) 추출물을 활성성분으로 포함하는 자외선에 대한 피부 보호 및 치료용 조성물 제공한다.

상기 다른 목적에 따라, 본 발명은 상기 조성물을 포함하는 피부 보호 및 치료용 제품을 제공한다.

본 발명에 따른 애기마디잘록이 추출물을 포함하는 자외선에 대한 피부 피부 보호 및 치료용 조성물은 과산화수소(H₂O₂) 및 UVB 방사선에 의해 발생된 세포내 활성 산소종(reactive oxygen species, ROS), 잔틴/잔틴 산화효소 시스템(xanthine/xanthine oxidase system)에 의해 발생된 초과산화물 음이온(superoxide anion) 및 펜톤 반응(Fenton reaction, FeSO₄+H₂O₂)에 의해 발생된 수산화 라디칼(hydroxyl radical)에 대한 소거(scavenging) 활성을 가지면서, UVB를 흡수할 뿐 아니라 UVB로 인해 발생될 수 있는 산화 스트레스로 인한 세포 성분(예, 지질, 단백질 및 DNA) 손상 및 세포사멸(apoptosis)을 완화 또는 감소시키는 것으로 나타난 애기마디잘록이 추출물을 포함함으로써 피부세포 등의 피부세포를 UVB로 인한 손상으로부터 효과적으로 보호할 수 있으므로, 자외선에 대한 피부 보호용 기능성 화장료 조성물 또는 약제학적 조성물의 원료로 유용하게 활용될 수 있다.

도 1a는 애기마디잘록이 추출물(LHE)을 각각 0, 25, 50, 100, 150 및 200 ㎍/ml 농도로 인간 HaCaT 피부세포에 처리하여 세포독성을 확인한 MTT 분석 결과이다.
도 1b는 무처리 대조군(control), LHE 처리(100 ㎍/ml)군(LHE) 또는 통상의 ROS 소거제(scavenger)인 NAC 처리(2 mM) 군(NAC)의 인간 HaCaT 피부세포를 대상으로 H₂O₂ 또는 UVB 방사선에 의해 발생된 세포내 ROS를 확인한 DCF-DA 분석 결과이다.
도 1c는 무처리 대조 용액(control), LHE 처리 용액(LHE), 잔틴/잔틴 산화효소 시스템을 통한 초과산화물 음이온 반응액(Superoxide anion) 및 상기 반응액에 LHE를 처리한 반응액(LHE+Superoxide anion)을 대상으로 ESR 분광광도 분석을 수행한 결과이다.
도 1d는 무처리 대조 용액(control), LHE 처리 용액(LHE), 펜톤 반응(H₂O₂+FeSO₄) 시스템을 통한 수산화 라디칼 반응액(Hydroxyl radical) 및 상기 반응액에 LHE를 처리한 반응액(LHE+Hydroxyl radical)을 대상으로 ESR 분광광도 분석을 수행한 결과이다.
도 1e는 UVB 방사선 영역에 해당하는 280-320 nm 영역에서의 전자기 방사선(electromagnetic radiation)에 대한 LHE의 흡광능(absorption)을 확인한 UV/vis 분광광도 분석 결과이다.
도 2a는 무처리 대조군(control), LHE 처리군(LHE), UVB에 대한 노출군(UVB) 및 LHE 처리 후 UVB 노출군(LHE+UVB)의 인간 HaCaT 피부세포를 대상으로 8-이소프로스탄(8-isoprostane)의 양을 측정한 결과이다.
도 2b는 무처리 대조군(control), LHE 처리군(LHE), UVB에 대한 노출군(UVB) 및 LHE 처리 후 UVB 노출군(LHE+UVB)의 인간 HaCaT 피부세포를 대상으로 카보닐화된 단백질 수준을 측정한 결과이다.
도 2c는 무처리 대조군(control), LHE 처리군(LHE), UVB에 대한 노출군(UVB) 및 LHE 처리 후 UVB 노출군(LHE+UVB)의 인간 HaCaT 피부세포를 대상으로 세포 DNA의 손상을 알칼리 코메드 분석(alkaline comet assay)을 통해 확인한 형광 현미경 이미지(사진) 및 코메드 말단에서의 세포 형광 백분율(그래프) 결과이다.
도 3a는 무처리 대조군(control), LHE 처리군(LHE), UVB에 대한 노출군(UVB) 및 LHE 처리 후 UVB 노출군(LHE+UVB)의 인간 HaCaT 피부세포를 대상으로 세포 생존율을 확인한 MTT 분석 결과이다.
도 3b는 무처리 대조군(control, UVB-), LHE 처리군(LHE, UVB-), UVB에 대한 노출군(UVB, 사진에서 Control 및 UVB+) 및 LHE 처리 후 UVB 노출군(LHE+UVB, 사진에서 LHE 및 UVB+)의 인간 HaCaT 피부세포를 대상으로 세포의 핵을 Hoechst 33342로 염색하여 형광 현미경 분석을 통한 사진 및 세포사멸 지수(apoptotic index) 결과이다.
도 3c는 무처리 대조군(control), LHE 처리군(LHE), UVB에 대한 노출군(UVB) 및 LHE 처리 후 UVB 노출군(LHE+UVB)의 인간 HaCaT 피부세포를 대상으로 요오드화 프로피디엄 유동 세포분석(propidium iodide flow cytometry)을 통해 세포사멸을 확인한 결과이다.
도 3d는 무처리 대조군(control), LHE 처리군(LHE), UVB에 대한 노출군(UVB) 및 LHE 처리 후 UVB 노출군(LHE+UVB)의 인간 HaCaT 피부세포를 대상으로 DNA 단편화수준을 확인한 결과이다.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.

본 발명의 일실시예에 따르면, 애기마디잘록이 추출물(L. hakodatensis Yendo extracts, LHE)은 UVB-조사된(irradiated) 세포에서의 활성 산소종(reactive oxygen species, ROS) 발생을 현저히 감소시키며, 이는 그 추출물 성분의 ROS-소거(scavenging) 활성으로 인한 것을 확인하였다. 또한, LHE는 이러한 광-보호 활성과 더불어 세포내 ROH, 초과산화물 음이온(superoxide anion) 및 수산화 라디칼(hydroxyl radical)을 소거할 수 있으며, 270-340 nm 파장 영역의 UVB를 흡수할 수 있다.

본 발명의 일실시예에 따르면, UVB 방사선은 세포에서 ROS의 발생을 일으키는데, 특히 단일 산소, H₂O₂, 초과산화물 음이온 및 수산화 라디칼 수준을 증가시킨다. UVB 방사선은 또한 DNA, RNA, 지질 및 단백질의 산화를 일으킨다. 이러한 과정 모두가 유해한 UVB-매개 생물 반응(즉, 화상(sunburn) 광-알러지 질환(photo-allergy disorder, 또는 태양 알러지 광-피부염(sun allergy photo-dermatitis)), 광-면역억제(photo-immunosuppression), 광-노화(photo-aging) 및 광-암화(photo-carcinogenesis))에 연관되어 있다.

본 발명의 일실시예에 따르면, UVB 조사된 피부세포의 배양액에 분비된 8-이소프로스탄(8-isoprostane)의 양을 측정하여 LHE가 과산화성 손상(peroxidation damage)으로부터 지질 성분을 보호하는 것을 확인하였으며, 또한 UVB 방사선에 반응하여 발생된 카보닐화된 단백질의 수준 증가 및 DNA 손상을 저해하는 것을 확인하였다. 뿐만 아니라, UVB에 노출된 세포는 세포예정사(programmed cell death), 즉 세포사멸(apoptosis)을 일으키는 특징이 있는데, 이러한 징후로는 사포사멸체(apoptotic bodies) 형성, 사포사멸성 sub-G₁DNA(apoptotic sub-G₁DNA) 함량 증가, 및 DNA 단편화(DNA fragmentation) 등이 포함된다. 본 발명의 일실시예에 따르면, 이러한 UVB 방사선으로 인해 유도된 HaCaT 피부세포에서의 세포사멸로 인한 형태학적 및 생물학적 변화가 LHE의 처리로 인해 현저히 감소하는 것을 확인하였다.

따라서 본 발명에 따른 조성물에서 활성성분으로 포함되는 애기마디잘록이 추출물(LHE)은 (1) 초과산화물 음이온 및 수산화 라디칼과 같은 유리 라디칼의 직접적 소거(scavenging) 및 (2) UVB 광선의 흡수을 통해 UVB 방사선으로 인한 손상에 대한 보호 활성을 나타내므로, 본 발명의 따른 LHE를 활성성분으로 함유하는 피부 보호 및 치료용 조성물은 UVB 노출로 인한 손상으로부터 피부를 효과적으로 치료하고 보호할 수 있음을 알 수 있다.

본 발명에 따른 애기마디잘록이(L. hakodatensis Yendo) 추출물은 당업계에 공지된 추출 및 분리하는 방법을 사용하여 천연으로부터 추출 및 분리하여 수득할 수 있다. 이러한 추출에 사용되는 용매로는 당업계에서 추출에 통상적으로 사용되는 용매라면 어느 것이나 사용할 수 있으며, 예를 들면 물 또는 유기용매를 사용할 수 있다. 구체적으로, 정제수, 메탄올(methanol), 에탄올(ethanol), 프로판올(propanol), 이소프로판올(isopropanol), 부탄올(butanol) 등을 포함하는 탄소수 1 내지 4의 알코올, 아세톤(acetone), 에테르(ether), 벤젠(benzene), 클로로포름(chloroform), 에틸아세테이트(ethyl acetate), 메틸렌클로라이드(methylene chloride), 헥산(hexane) 및 시클로헥산(cyclohexane) 등의 각종 용매를 단독으로 혹은 혼합하여 사용할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

추출 방법으로는 열수추출법, 냉침추출법, 환류냉각추출법, 용매추출법, 수증기증류법, 초음파추출법, 용출법, 압착법 등의 방법 중 어느 하나를 선택하여 사용할 수 있다. 또한, 목적하는 추출물은 추가로 통상의 분획 공정을 수행할 수도 있으며, 통상의 정제 방법을 이용하여 정제될 수도 있다. 본 발명의 애기마디잘록이 추출물(LHE)의 제조방법에는 제한이 없으며, 공지되어 있는 어떠한 방법도 이용될 수 있다.

본 발명의 일실시예에 따르면, 상기 애기마디잘록이 추출물(LHE)은 용매 추출법으로 추출된 1차 추출물을, 감압 증류 및 동결 건조 또는 분무 건조 등과 같은 추가적인 과정에 의해 분말 상태로 제조할 수 있다. 또한 상기 1차 추출물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(silica gel column chromatography), 박층 크로마토그래피(thin layer chromatography), 고성능 액체 크로마토그래피(high performance liquid chromatography) 등과 같은 다양한 크로마토그래피를 이용하여 추가로 정제된 분획으로 얻을 수도 있다.

따라서 본 발명에서 '추출물'은 추출, 분획 또는 정제의 각 단계에서 얻어지는 모든 추출액, 분획 및 정제물, 그들의 희석액, 농축액 또는 건조물을 모두 포함하는 것을 의미한다.

또한, 본 발명의 애기마디잘록이 추출물은 바람직하게는, 적절한 용매를 이용하여 애기마디잘록이로부터 추출한 것이며, 예를 들어, 애기마디잘록이의 열수추출물, 극성용매 가용 추출물 또는 비극성용매 가용 추출물을 모두 포함할 수 있다.

본 발명의 일실시예에 따르면, 상기 LHE는 동결건조한 애기마디잘록이를 파쇄한 후, 건조된 시료의 중량의 약 0.5 내지 20배, 바람직하게는 약 1 내지 15배 분량의 추출용매를 사용하여 바람직하게는 상온에서 약 0.5 내지 48시간, 바람직하게는 1 내지 30시간 동안 추출하여 수득할 수 있다.

본 발명의 일실시예에 따르면, 본 발명의 조성물에서 활성성분으로 포함되는 상기 LHE는 조성물 총 중량에 대하여 0.001 내지 100 중량%, 바람직하게는 0.01 내지 90 중량%로 포함될 수 있으나, 이러한 조성은 대상의 연령, 성별, 체중, 증상, 질환의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간 등에 따라 조절될 수 있으며, 따라서 본 발명의 범위는 이에 제한되는 것은 아니다.

약제학적 조성물

본 발명의 조성물은 활성성분인 애기마디잘록이 추출물(LHE)을 약제학적으로 허용되는 담체와 함께 포함하는 약제학적 조성물일 수 있다.

상기 약제학적 조성물은 투여를 위해서 상기 활성성분인 LHE 외에 통상적인 약제학적으로 허용 가능한 담체를 1종 이상 추가로 포함할 수 있으며, 이를 통해 투여경로에 따라 바람직한 형태로 제제화(formulation)할 수 있다. 이러한 약제학적 조성물의 제제 형태는 특별히 제한되지 않으며, 해당분야의 적절한 방법으로 Remington's Pharmaceutical Science, Mack Publishing Company, Easton PA에 개시되어 있는 방법을 이용하여 각 질환에 따라 또는 성분에 따라 바람직하게 제제화할 수 있다.

또한, 본 발명의 약제학적 조성물은 상기 성분들 이외에 약제학적 및 생리학적으로 허용가능한 보조제를 추가로 포함할 수 있으며, 상기 보조제로는 부형제, 붕해제, 감미제, 결합제, 피복제, 팽창제, 윤활제, 활택제 또는 향미제 등을 사용할 수 있다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 본 발명의 약제학적 조성물은 피부 외용제 조성물일 수 있다. 본 발명의 피부외용 약제학적 조성물은 자외선으로부터 피부보호 효과를 갖는 피부외용제로서 크림, 젤, 패취, 분무제, 연고제, 경고제, 로션제, 리니멘트제, 파스타제 또는 카타플라스마제의 피부 외용제 형태의 약학조성물로 제조하여 사용할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 조성물에서 활성성분으로 사용되는 LHE의 투여량은 투여 대상의 연령, 성별, 체중, 증상, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 달라질 수 있으며, 본 발명의 일실시예에 따르면 사람을 포함하는 포유동물에 0.001 내지 1000 mg/kg체중, 바람직하게는 0.01 내지 100 mg/kg체중의 양으로 매일 수회에 걸쳐 비경구적 제제, 바람직하게는 피부외용제 형태로 투여할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 또한 일부 경우에 있어서, 상기 언급된 범위 보다 적은 투여량 수치가 보다 적합할 수 있고, 해로운 부작용을 일으키지 않으면서도 보다 많은 투여량이 사용될 수도 있으며, 보다 많은 투여량의 경우는 수회의 적은 투여량으로 분배되어 투여될 수 있다.

화장료 조성물

또한, 본 발명의 조성물은 애기마디잘록이 추출물(LHE)을 활성성분으로 포함하는 자외선(ultraviiolet ray)에 대한 피부 보호 및 치료용 제품에 사용되는 화장료 조성물일 수 있으며, 자외선 차단제, 피부 보호용 크림, 로션 등의 여러 기능성 제품에 광범위하게 활용될 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물은 당분야에 통상적으로 사용될 수 있는 자외선에 대한 피부 보호 및 치료용 제품이라면 어느 것이든 적용되어 사용될 수 있으며, 예를 들면 자외선 차단제, 유액, 크림, 화장수, 팩, 파운데이션, 로션, 미용액, 모발화장료 등과 같은 기능성 화장품류 등에 사용될 수 있다. 또한, 본 발명의 조성물이 화장료 조성물로 사용되는 경우에는 활성성분인 애기마디잘록이 추출물(LHE) 외에 화장료 조성물에 통상적으로 사용할 수 있는 담체 성분들을 추가로 포함할 수 있으며, 예를 들면 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제 및 담체를 추가로 포함할 수 있다. 또한, 이외에도 본 발명의 목적 및 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 필요에 따라 여러 다른 성분들을 추가로 포함할 수 있다.

본 발명의 조성물의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로 동물섬유, 식물섬유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등을 추가로 포함할 수 있으며, 본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더 등을 추가로 포함할 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 추가로 포함할 수 있다.

또한, 본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용매화제 또는 유탁화제 등을 포함할 수 있고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르를 포함할 수 있다. 또한, 본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등을 포함할 수 있다.

또한, 본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 리놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등을 포함할 수 있다.

본 발명에 따른 애기마디잘록이 추출물을 포함하는 자외선에 대한 피부 보호 및 치료용 조성물 및 상기 조성물을 포함하는 피부 보호 및 치료용 제품은 과산화수소(H₂O₂) 및 UVB 방사선에 의해 발생된 세포내 활성 산소종(reactive oxygen species, ROS), 잔틴/잔틴 산화효소 시스템(xanthine/xanthine oxidase system)에 의해 발생된 초과산화물 음이온(superoxide anion) 및 펜톤 반응(Fenton reaction, FeSO₄+H₂O₂)에 의해 발생된 수산화 라디칼(hydroxyl radical)에 대한 소거(scavenging) 활성을 가지면서, UVB를 흡수할 뿐 아니라 UVB로 인해 발생될 수 있는 산화 스트레스로 인한 세포 성분(예, 지질, 단백질 및 DNA) 손상 및 세포사멸(apoptosis)을 완화 또는 감소시키는 것으로 나타난 애기마디잘록이 추출물(LHE)을 활성성분으로 포함함으로써 피부세포를 UVB로 인한 손상으로부터 효과적으로 보호할 수 있으므로, 자외선에 대한 피부 보호용 기능성 화장료 조성물 또는 약제학적 조성물의 원료로 유용하게 활용될 수 있다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 추가적으로 설명하고자 한다. 이들 실시예는 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.

재료 및 방법

1) 애기마디잘록이(Lomentaria hakodatensis Yendo, Champiaceae) 추출

애기마디잘록이(L. hakodatensis Yendo) 시료는 제주도로부터 제주 생물종다양성연구소의 식물표본관(herbarium)에 기탁된 확증표본번호(voucher specimen number) JBRI-10279의 시료를 회수하여 사용하였다. 얻어진 시료를 건조 후 상온에서 24시간 동안 80% 에탄올로 추출하고 진공 하에 증류반응을 수행하여 애기마디잘록이 추출물(L. hakodatensis extracts, LHE)을 수득하였다.

2) 시약

NAC(N-acetyl cysteine), MTT([3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium] bromide), DCF-DA(2',7'-dichlorodihydrofluorescein diacetate) 및 DMPO(5,5-dimethyl-1-pyrroline-N-oxide)는 Sigma Chemical 사(St. Louis, USA)로부터 구입하여 사용하였다.

3) 세포 배양

인간 피부세포 HaCaT는 아모레 태평양(Amore Pacific Company) 사로부터 공급받았다. 세포는 가습된 5% CO₂/95% 공기 조건의 37℃ 배양기내에서 배양하였으며, 배지로는 10% 열-불활성화된 우태아 혈청(fetal calf serum), 스트렙토마이신(streptomycin, 100 ㎍/ml) 및 페니실린(penicillin, 100 units/ml) 함유 DMEM(Dulbeccos modified Eagles medium)을 사용하였다.

4) 세포 생존 분석(cell viability assay)

애기마디잘록이 추출물(LHE)을 사용한 세포 생존 시험(cell viability)을 다음과 같이 수행하였다.

세포를 96-웰 플레이트에 5×10⁴세포/웰의 농도로 넣고 60시간 동안 배양한 후, LHE를 각각 25, 50, 100, 150 또는 200 ㎍/ml로 가하여 37℃에서 24시간 동안 배양하였다. UVB 방사선에 대한 피부세포의 보호효과를 확인하기 위해서는, LHE를 100 ㎍/ml로 가하였다. 1시간 후에 세포를 30 mJ/cm² UVB 방사선에 노출시키고 37℃에서 24시간 동안 추가 배양하였으며, 이때 UVB 방사선은 CL-1000M UV Crosslinker(UVP, Upland, CA, USA)를 사용하여 UVB 광선(280-320 nm)의 에너지 스펙트럼을 통해 전달하였다. MTT 스탁 솔루션(stock solution, 2 mg/ml) 50 ㎕를 각 웰에 가하여 전체 반응액이 200 ㎕가 되게 하였으며, 4시간 동안 반응시킨 후 800×g에서 5분 동안 원심분리하여 상등액을 제거하였다. 각 웰의 포마잔 결정(formazan crystals)을 DMSO(dimethylsulfoxide, 150 ㎕)에 용해시킨 후 스캐닝 멀티-웰 분광광도계(scanning multi-well spectrophotometer)를 통해 540 nm에서의 흡광도를 측정하였다.

5) 세포내 ROS 검출

H₂O₂-처리 세포에서의 ROS를 검출하기 위해, 세포를 3×10⁴ 세포/웰의 농도로 플레이팅(plating)하고 16시간 후에 LHE(100 ㎍/ml) 또는 NAC(2 mM)를 처리하였다. 30분 후, H₂O₂(1 mM)를 가하여 37℃에서 30분 동안 추가 배양하였으며, DCF-DA 용액(25 μM)을 각 웰에 가하고 10분 후에 2',7'-다이클로로플루오레세인(2',7'-dichlorofluorescein, DCF) 산물의 형광발광을 PerkinElmer LS-5B 형광분광광도계(spectrofluorometer)(PerkinElmer, Waltham, MA, USA)를 사용하여 검출 및 정량화하였다.

UVB-조사된 피부세포에서의 ROS를 검출하기 위해서는, 상기에서와 동일한 방법으로, 세포를 LHE 또는 NAC로 처리하고 1시간 후에 UVB 방사선에 노출시킨 다음 37℃에서 24시간 동안 배양시켰으며, DCF-DA 용액(25 μM)을 가하고 10분 후 DCF 산물을 검출하였다.

6) 초과산화물 음이온 검출

초과산화물 음이온(superoxide anion)은 잔틴/잔틴 산화효소 시스템(xanthine/xanthine oxidase system)을 통해 발생시켰으며, 나이트론 스핀 트랩(nitrone spin trap)인 DMPO와 반응시켰다. 따라서 그 결과산물인 DMPO/ㆍOOH 부가물(adducts)을 JES-FA 전자스핀공명(electron spin resonance, ESR) 분광광도계(JEOL, Tokyo, Japan)를 사용하여 검출함으로써 초과산화물 음이온 수준을 확인하였다. 이때, 잔틴 산화효소(xanthine oxidase, 0.25 U/ml) 20 ㎕를 잔틴(xanthine, 5 mM), DMPO(1.5 M) 및 LHE(100 ㎍/ml)의 혼합액 20 ㎕와 혼합하고 5분 후에 ESR 신호(signaling)를 기록하였으며, 사용된 ESR 분광광도계의 파라미터(parameters)는 자기장(magnetic field) 336 mT; 전력(power) 1.00 mW; 빈도(frequency) 9.438 GHz; 진폭변조(modulation amplitude) 0.2 mT; 이득(gain) 500; 스캔시간(scan time) 0.5 분; 스캔넓이(scan width) 10 mT; 시간 상수(time constant) 0.03 초; 온도(temperature) 25℃이었다.

7) 수산화 라디칼의 검출

수산화 라디칼(hydroxyl radical)㎍은 펜톤 반응(Fenton reaction, H₂O₂+FeSO₄)에 의해 발생시켰으며, DMPO와 반응시켰다. 따라서 그 결과산물인 DMPO/ㆍOH 부가물을 ESR 분광광도계를 사용하여 검출함으로써 수산화 라디칼 수준을 확인하였다. 이때, 포스페이트 버퍼 용액(phosphate buffer solution, pH 7.4) 0.2 ml을 DMPO(0.3 M), FeSO₄(10 mM), H₂O₂(10 mM) 및 LHE(100 ㎍/ml)의 혼합액 0.2 ml과 혼합하고 2.5분 후에 ESR 스펙트럼을 기록하였으며, 사용된 ESR 분광광도계의 파라미터는 자기장 336 mT; 전력 1.00 mW; 빈도 9.438 GHz; 진폭변조 0.2 mT; 이득 200; 스캔시간 0.5 분; 스캔넓이 10 mT; 시간상수 0.03 초; 온도 25℃이었다.

8) 자외/가시광 흡수 스펙트럼 분석(UV/visible light absorption spectrum analysis)

LHE의 UVB 흡수능을 확인하기 위해, LHE를 1:500(v/v)의 비율로 DMSO에 희석시켜 Biochrom Libra S22 자외/가시광 분광광도계(UV/visible light spectrophotometer, Biochrom Ltd., UK)를 통해 200-500 nm 범위의 자외/가시광(UV/visible light)을 스캔하였다.

9) 지질 과산화 분석(lipid peroxidation assay)

지질의 과산화반응(lipid peroxidation)은 HaCaT에 의해 세포 배양액으로 분비된 8-이소프로스탄(8-isoprostane)의 양을 시판중인 효소 면역분석 키트(enzyme immunoassay, Cayman Chemical, Ann Arbor, MI, USA)를 사용하여 제조사 설명서에 따른 비색정량법(colorimetric determination)을 통해 결정하였다.

10) 단백질 카보닐 형성(protein carbonyl formation)

단백질 카보닐 형성(protein carbonyl formation) 정도는 Oxiselect^TM 단백질 카보닐(protein carbonyl) ELISA 키트(Cell Biolabs, USA)를 사용하여 제조사 설명서에 따라 결정하였다.

11) 단일 세포 겔 전기영동(single cell gel electrophoresis, 코메드 분석(comet assay))

산화성 DNA 손상 정도는 코메드 분석(comet assay)의 알칼리 버전(alkaline version)을 사용하여 결정하였다. 세포 부유물을 39℃에서 0.5% 저융점 아가로즈(low melting temperature agarose, LMTA) 75 ㎕와 혼합하고, 얻어진 혼합물을 1% 정융점 아가로즈(normal melting temperature agarose) 200 ㎕로 미리 코팅된 풀리 프로스트 현미경 슬라이드(fully frosted microscopic slide) 상에 도포하였다. 아가로즈의 고체화 후, 슬라이드를 0.5% LMTA 75 ㎕로 추가 도포하고 세포용해액(lysis solution: 2.5 M NaCl, 100 mM NaEDTA, 10 mM Tris, 1% Trion X-100 및 10% DMSO, pH 10)에 4℃에서 1시간 동안 담가두었다. 슬라이드를 300 mM NaOH 및 10 mM NaEDTA(pH 13) 함유 겔 전기영동 장치에 넣고 40분 동안 방치하여 DNA 풀림(unwinding) 및 알칼리-불안정 손상(alkali-labile damage)을 유도하였으며, 이후 전기장을 4℃에서 20분 동안 적용하여 음전하의 DNA가 양극을 향하도록 하였다. 얻어진 슬라이드를 중화 버퍼(neutralizing buffer: 0.4 M Tris, pH 7.5)로 4℃에서 5분씩 3회 반복 세척하였으며, 요오드화 프로피디엄(propidium iodide)으로 염색하여 영상분석기(image analyzer)를 장착한 형광 현미경(fluorescence microscope)(Komet 5.5; Kinetic Imaging Company, UK)을 통해 관찰하였다. 슬라이드 당 50 세포의 DNA 말단(tails)에서의 총 세포 형광 강도의 백분율 및 말단 길이를 기록하였다.

12) Hoechst 33342 핵 염색

세포를 LHE(100 ㎍/ml)로 처리 후 1시간 뒤 UVB 방사선에 노출하였으며, 추가로 37℃에서 24시간 동안 배양하였다. DNA-특이적 형광 염색제인 Hoechst 33342를 각 웰에 가한 후 37℃에서 10 분간 반응시켰다. 염색된 세포들을 CoolSNAP-Pro 칼라 디지털 카메라가 장착된 형광 현미경으로 관찰하였으며, 핵 응축(nuclear condensation) 정도를 계산하여 사멸 세포(apoptotic cells) 수를 확인하였다.

13) 저두배수체(sub-G₁ hypodiploid) 세포 검출

요오드화 프로피디엄 유동 세포분석(propidium iodide flow cytometry)을 수행하여 저두배수체 DNA를 갖는 사멸성(apoptotic) sub-G₁ 세포의 수를 정량화하였다. 세포들을 LHE(100 ㎍/ml) 처리 한 시간 후 UVB 방사선에 노출시키고 37℃에서 24시간 추가 배양하였다. 이후 회수하여 70% 에탄올(1 ml)에 4℃에서 30 분간 고정시켰으며, PBS(phosphate buffered saline)로 2회 세척 후 100 ㎍ 요오드화 프로피디엄 및 100 ㎍ RNase A를 함유하는 PBS 내에서 37℃에서 30분 동안 암배양(dark incubation)하였다. 유동 세포분석은 FACS Calibur 유동 세포 분석기(flow cytometer, Becton Dickinson, USA)를 사용하여 수행하였으며, sub-G₁ 저두배수체 세포의 백분율을 CellQuest 및 ModFit 소프트웨어(software, Becton Dickinson)을 사용하여 얻어진 그래프를 근거로 산출하였다.

14) DNA 단편화(fragmentation)

세포 DNA 단편화(fragmentation)를 Roche Diagnostics 사(USA)의 키트를 사용하여 제조사의 설명에 따라 DNA 단편화 정도를 분석하여 확인하였다.

15) 통계 분석

모든 측정은 세 번 반복을 통해 이루어졌으며 모든 측정값은 평균 ± 표준편차를 의미한다. 결과는 튜키 검정법(Tukey's test)을 사용한 분산분석(analysis of variance, ANOVA)을 통해 평균치 간의 분산을 분석하였으며, 각 경우에서 P 값이 0.05 미만일 때 통계적 유의성을 갖는 것으로 판단하였다.

실시예 1: LHE 의 HaCaT 피부세포 내 H ₂ O ₂ 및 UVB 로 인해 발생된 유리 라디칼 소거능 확인

우선, LHE가 인간 HaCaT 피부세포에 세포독성을 갖는지를 MTT 분석을 통해 확인하였다. 그 결과, 도 1a에서 볼 수 있는 바와 같이, 대조군(무처리군) 세포의 세포 생존율을 100%로 봤을 때 LHE의 처리는 100 ㎍/ml까지 세포 생존율에 어떠한 영향도 주지 않는 것으로 확인되었다. 그러나 도 1a에서 볼 수 있는 바와 같이, LHE의 농도가 150 및 200 ㎍/ml인 경우에는 생존 세포의 수가 감소하는 것을 확인하였으며, 따라서 LHE의 최적 처리 농도를 100 ㎍/ml로 보고 이후 실험에서는 이 농도로 LHE를 처리하였다.

다음, LHE의 H₂O₂ 또는 UVB 방사선에 의해 발생된 세포내 ROS에 대한 소거능을 DCF-DA 분석을 통해 확인하였다. DCF는 ROS에 의해 DCF-DA로부터 발생되므로, DCF 형광의 유무를 통해 ROS 발생 여부를 알 수 있다. 그 결과, LHE-처리 세포 내 DCF 형광 강도의 감소를 통해 분석된 바와 같이, LHE는 H₂O₂로 인한 세포내 ROS를 성공적으로 소거하는 것을 확인하였으며, UVB 처리 세포에서도 유사한 결과를 확인하였다. 이때, LHE의 소거 활성은 양성 대조군으로 사용된 통상의 ROS 소거제(scavenger)인 NAC의 65%와 비교하여 100 ㎍/ml 농도에서 27%로 나타났다(도 1b). 또한, LHE의 UVB로 인한 세포내 ROS에 대한 소거능은 NAC의 19%와 비교하여 100 ㎍/ml 농도에서 18%로 나타났다(도 1b).

이러한 LHE의 소거능이 반응 분자에 대한 직접적인 소광(quenching)을 통한 것인지 확인하기 위해, ESR 분광광도계를 사용하여 초과산화물 음이온(superoxide anion) 및 수산화 라디칼(hydroxyl radical)에 대한 LHE의 활성을 조사하였다. 그 결과, 도 1c에서 볼 수 있는 바와 같이, 잔틴/잔틴 산화효소 시스템에서의 초과산화물 음이온 신호는 310의 대조값에서 2529까지 증가한 것을 확인하였다. 여기에 LHE를 처리하였을 때는 단독인 경우 339이나 초과산화물 음이온의 신호를 2004로 감소시키는 것을 확인하였다(도 1c).

또한, 펜톤 반응(H₂O₂+FeSO₄) 시스템에서의 수산화 라디칼 값도 대조값 41(LHE 단독 48)에서부터 3256까지 증가하였으나, LHE의 처리로 인해 2538로 감소하는 것을 확인하였다(도 1d).

또한, LHE의 UVB에 대한 흡광능(absorption)을 확인하기 위해 자외/가시광 분광광도 분석을 수행하였다. 그 결과, 도 1e에서 볼 수 있는 바와 같이, LHE는 UVB 광 영역에 해당하는 280-320 nm 영역에서의 전자기 방사선(electromagnetic radiation)을 흡수하는 것을 확인하였다.

따라서 상기 결과들을 통해, LHE가 피부 세포에 적용될 때 ROS-소거 및 UVB-흡수 활성을 통해 UVB 방사선에 대한 우수한 광보호 효과를 나타낼 것임을 알 수 있다.

실시예 2: LHE 의 UVB 로 인한 산화성 지질, 단백질 및 DNA 손상에 대한 HaCaT 보호

LHE가 UVB-조사된 세포에서의 막 지질 과산화반응(peroxidation), 단백질 카보닐 형성(carbonyl formation) 및 DNA 손상을 저해할 수 있는지를 UVB 노출 24시간 후에 조사하였다. 지질 과산화반응은 피부세포 배양액 내 8-이소프로스탄(8-isoprostane)의 양을 측정하여 확인하였으며, 그 결과 도 2a에서 볼 수 있는 바와 같이, UVB에 노출된 세포들에서 증가된 8-이소프로스탄의 수준은 LHE의 처리로 인해 감소하는 것을 확인하였다. UVB 조사된 세포의 배양액에서의 8-이소프로스탄의 양은 LHE의 부재 및 존재 시 각각 3.3 및 1.9 pg/mg을 나타내었다.

또한, 카보닐화된 단백질 수준도 UVB-조사된 세포에서 증가하였으며, LHE 처리로 인해 이러한 증가가 감소한 것을 확인하였다(도 2b).

또한, UVB로 인한 세포 DNA의 손상은 알칼리 코메드 분석(alkaline comet assay)을 통해 확인하였으며, 그 결과 도 2c의 핵의 형광 현미경 이미지 및 코메드 말단에서의 세포 형광 백분율에서 볼 수 있는 바와 같이, UVB에 대한 세포 노출로 인해 말단 길이 및 핵 말단에서의 세포 형광 백분율이 증가하였으며, UVB-조사 세포의 경우 말단에서의 형광 백분율은 46%까지 증가한 것을 확인하였다. 그러나 UVB-조사된 세포에 LHE를 처리한 경우 이러한 형광 강도가 현저히 감소한 것을 확인하였으며(22%, 도 2c), 따라서 LHE는 UVB 노출에 의해 유도된 산화성 손상으로부터 지질, 단백질 및 DNA를 보호하는 것을 알 수 있다.

실시예 3: LHE 의 UVB 로 인한 세포사멸( apoptosis )에 대한 보호 활성

UVB로 조사된 세포의 세포 생존율을 MTT 분석을 통해 확인하였다. 그 결과, 도 3a에서 볼 수 있는 바와 같이, 무처리 대조군 세포에서의 세포 생존율은 거의 100%였으나, LHE를 처리하지 않고 HVB-조사된 피부세포에서는 이러한 생존율이 58%로 감소하는 것을 확인하였다. 반면, LHE 처리 후 UVB-조사된 피부세포는 세포 생존율이 66%로 현저히 증가한 것을 확인하였다.

또한, UVB 조사로 인한 세포사멸(apoptosis) 및 세포사(cell death)와의 직접적인 연관성을 확인하기 위해, UVB-조사된 피부세포의 핵을 Hoechst 33342로 염색하고 형광 현미경을 통해 영상화하였다. 그 결과, 대조군에서는 정상핵(intact nuclei)이 관찰되었으나, UVB-조사된 세포에서는 현저한 핵 단편화(세포사멸의 특징)가 관찰되었다(세포사멸 지수 = 5.2, 세포사멸체의 숫자에 의해 추정)(도 3b). 그러나 LHE로 처리된 세포를 UVB로 조사한 경우에는 이러한 핵 단편화가 현저히 감소한 것을 확인하였다(세포사멸 지수 = 2.6)(도 3b).

또한, 이러한 형태 분석에 추가하여 세포사멸에 대한 LHE의 보호효과를 요오드화 프로피디엄 유동 세포분석(propidium iodide flow cytometry)을 통해 확인하였다. 그 결과 도 3c에서 볼 수 있는 바와 같이, 세포사멸성 sub-G₁ DNA의 정도는 무처리 대조군 세포 및 LHE 단독 처리 세포에서 1%인 반면 UVB-조사된 세포에서 17%로 증가하였으며, LHE를 처리후 UVB-조사된 세포에서는 이러한 세포사멸성 sub-G₁ DNA의 정도가 7%로 감소한 것을 확인하였다.

또한, UVB-조사된 세포에서 DNA 단편화 수준도 무처리 대조군 및 LHE-단독 처리군 세포와 비교하여 증가하였으나, LHE 처리후 UVB-조사된 세포에서는 이러한 증가된 수준이 다시 현저히 감소하는 것을 확인하였다(도 3d).

따라서, LHE는 (1) 초과산화물 음이온 및 수산화 라디칼과 같은 유리 라디칼의 직접적 소거 및 (2) UVB 광선의 흡수를 통해 UVB 방사선으로 인한 손상에 대한 보호 활성을 나타내므로, 본 발명의 따른 LHE를 활성성분으로 함유하는 피부 보호 및 치료용 조성물은 UVB 노출로 인한 손상으로부터 피부를 효과적으로 치료하고 보호할 수 있음을 알 수 있다.

제품예 1: 애기마디잘록이 추출물( LHE )을 포함하는 연고의 제조

상기 추출방법에서와 동일한 방법으로 추출된 LHE를 조성물 총 중량의 0.001 내지 100 중량%로 포함되도록 첨가하여 통상적인 연고 조성물 제조방법에 따라 자외선에 대한 피부 보호용 기능성 연고를 제조하였다.

제품예 2: 애기마디잘록이 추출물( LHE )을 포함하는 기능성 크림의 제조

상기 추출방법에서와 동일한 방법으로 추출된 LHE를 조성물 총 중량의 0.001 내지 100 중량%로 포함되도록 첨가하여 통상적인 기능성 크림 조성물 제조방법에 따라 자외선에 대한 피부 보호용 기능성 크림을 제조하였다.

이제까지 본 발명에 대하여 그 바람직한 실시예들을 중심으로 살펴보았다. 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자는 본 발명이 본 발명의 본질적인 특성에서 벗어나지 않는 범위에서 변형된 형태로 구현될 수 있음을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 개시된 실시예들은 한정적인 관점이 아니라 설명적인 관점에서 고려되어야 한다. 본 발명의 범위는 전술한 설명이 아니라 특허청구범위에 나타나 있으며, 그와 동등한 범위 내에 있는 모든 차이점은 본 발명에 포함된 것으로 해석되어야 할 것이다.

Claims

애기마디잘록이(Lomentaria hakodatensis Yendo, Champiaceae) 추출물을 활성성분으로 포함하는 자외선에 대한 피부 보호용 화장료 조성물.
제 1 항에 있어서,
상기 애기마디잘록이 추출물은 자외선 B에 대한 노출로 인해 세포내 발생된 활성 산소종(reactive oxygen species, ROS)의 소거(scavenging) 작용을 통해 피부 보호 활성을 나타내는 것을 특징으로 하는, 자외선에 대한 피부 보호용 화장료 조성물.
제 2 항에 있어서,
상기 활성 산소종은 단일 산소, H₂O₂, 초과산화물 음이온(superoxide anion) 및 수산화 라디칼(hydroxyl radical)을 포함하는 것을 특징으로 하는, 자외선에 대한 피부 보호용 화장료 조성물.
제 1 항에 있어서,
상기 애기마디잘록이 추출물은 270-340 nm 파장 영역의 자외선 B에 대한 흡수(absorption) 작용을 통해 피부 보호 활성을 나타내는 것을 특징으로 하는, 자외선에 대한 피부 보호용 화장료 조성물.
제 1 항에 있어서,
상기 애기마디잘록이 추출물은 자외선 B에 대한 노출로 인한 세포내 지질, 단백질 및 DNA 손상을 감소시키는 작용을 통해 피부 보호 활성을 나타내는 것을 특징으로 하는, 자외선에 대한 피부 보호용 화장료 조성물.
제 1 항에 있어서,
상기 애기마디잘록이 추출물은 자외선 B에 노출된 세포의 세포사멸(apoptosis)을 저해(inhibition)하는 작용을 통해 피부 보호 활성을 나타내는 것을 특징으로 하는, 자외선에 대한 피부 보호용 화장료 조성물.
제 1 항에 있어서,
상기 애기마디잘록이 추출물은 천연 애기마디잘록이를 물 또는 유기용매를 사용하여 추출한 것임을 특징으로 하는, 자외선에 대한 피부 보호용 화장료 조성물.
제 7 항에 있어서,
상기 유기용매는 메탄올(methanol), 에탄올(ethanol), 프로판올(propanol), 이소프로판올(isopropanol), 부탄올(butanol) 등을 포함하는 탄소수 1 내지 4의 알코올, 아세톤(acetone), 에테르(ether), 벤젠(benzene), 클로로포름(chloroform), 에틸아세테이트(ethyl acetate), 메틸렌클로라이드(methylene chloride), 헥산(hexane) 및 시클로헥산(cyclohexane)을 포함하는 군으로부터 하나 이상 선택된 것임을 특징으로 하는, 자외선에 대한 피부 보호용 화장료 조성물.
제 1 항에 있어서,
상기 애기마디잘록이 추출물은 조성물 총 중량에 대하여 0.001 내지 99.999 중량%로 포함되는 것을 특징으로 하는, 자외선에 대한 피부 보호용 화장료 조성물.
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