KR20160002125A

KR20160002125A - 천연 식물 추출물을 함유하는 화장료 조성물

Info

Publication number: KR20160002125A
Application number: KR1020140080981A
Authority: KR
Inventors: 권오운; 서화진; 김상욱; 이은실; 김성순; 김수진; 신정혜; 강민정; 홍성수; 최윤혁; 김명화
Original assignee: (재) 경북천연염색산업연구원; 김명화
Priority date: 2014-06-30
Filing date: 2014-06-30
Publication date: 2016-01-07
Also published as: KR101664025B1

Abstract

본 발명은 천연 식물 추출물을 함유하는 화장료 조성물에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 천연 색소 성분을 포함하는 식물인 치자, 황벽, 오배자 및 아선약으로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 추출물을 함유함으로써 제형 안정성이 우수하고 피부에 안전하면서 항산화, 미백, 항염 및 항노화 효과가 우수한 화장료 조성물에 관한 것이다.

Description

천연 식물 추출물을 함유하는 화장료 조성물{Cosmetic composition containing natural herb extracts}

최근에는 대부분의 화장품에 있어서, 효능 면에서 긍정적인 효능을 가지는 천연원료가 포함되면서 화장품의 기능과 역할이 점차 중요시 되고 있으며, 또한 이와 함께 화장료의 원료로 사용되는 물질의 범위도 확대되고 있는 추세이다. 특히, 광노화에 대한 소비자의 관심이 크게 증가하고 있으며, 피부 미백 고시 원료를 포함한 기능성화장품의 매출이 증가하고 있다.

현재, 기능성화장품 산업은 국민소득 증가추세의 지속, 중장년과 노령인구의 급속한 증가, 여성인구의 사회활동 가속화, 수요자들의 다양성과 개성 중시라는 외부환경 트랜드에 기업들의 적극적 마케팅이 주효하여, 최근 연평균 50%를 상회하는 괄목할만한 성장을 이루고 있으며, 이와 함께 친환경, 유기농, 웰빙(Well-being)에 대한 선호와 함께 소비자들의 소득 수준향상과 물질적 풍요에 따른 미용제품의 선호도도 다양해져 기존 제품의 기능을 개선한 효과적인 고품격의 미용제품의 개발이 필요하게 되었다.

한편, 천연 식물 유래 소재는 안전성 측면에서 우수하여 오랫동안 화장품 원료로서 인용되어 왔으며, 국내의 경우 민간에서 이용되어 오거나 혹은 한방에서 이용되어 오던 식물 및 생약 성분을 주로 한 기능성 소재 개발이 활발히 이루어지고 있다.

그러나, 천연 원료라 하더라도 조합에 따라서 성분 간의 상호작용에 의하여 시너지 효과를 나타낼 수도 있고, 반대로 서로 저해하여 개별 사용에 비하여 오히려 효과가 떨어질 수도 있으나, 이와 같은 조합에 따른 효능에 대하여는 아직 밝혀진 정도가 미미하다.

따라서, 피부에 안전하면서 충분한 피부 개선 효과를 나타내어 화장품의 원료로서 사용되기에 적합한 천연 원료의 탐색 및 이러한 원료의 조합을 통한 새로운 소재 개발에 대한 수요가 여전히 존재한다.

국내공개특허 제2003-0047680호 국내공개특허 제2010-0038797호 국내공개특허 제2011-0044966호

본 발명자들은 색소 물질로서 이용되는 천연 식물 중 치자, 황벽, 오배자 및 아선약 추출물은 피부독성이 없어 안전하고, 제형 안정성이 우수하면서 우수한 항산화, 피부 미백 및 항노화 효과를 제공함을 발견하여 본 발명을 완성하게 되었다.

따라서, 본 발명은 천연 식물 추출물을 이용함으로써 우수한 제형안정성과 피부 안전성을 가지면서 항산화, 피부 미백 및 항노화 효과를 제공할 수 있는 화장료 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.

상기한 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 치자, 황벽, 오배자 및 아선약 추출물을 함유하는 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명의 조성물은 색소 물질을 포함하는 천연 식물의 추출물을 이용함으로써 우수한 항산화, 피부 미백 및 항노화 효과를 제공하며, 또한 피부에 안전하면서 제형 안정성이 우수한 화장료 조성물을 제공할 수 있다.

도 1은 온도 변화에 따른 제형의 pH 변화를 나타낸 그래프이다.

본 발명은 치자, 황벽, 오배자 및 아선약 추출물을 함유함으로써 피부에 안전하면서 제형 안정성이 우수하며, 항산화, 피부 미백 또는 항노화 효과를 가지는 피부 외용제 조성물을 제공한다.

본 발명에서 사용되는 치자(Gardenia Florida Fruit)는 꼭두서니과에 속하는 상록활엽관목으로서, 일본, 대만, 중국 등에 분포한다. 열매는 해열, 이담(利膽), 지혈, 소염(消炎) 등의 효능이 있어 한방에서는 약재로 이용되고, 민간에서는 식도암에 치자를 검게 볶아 가루를 만들어 술에 타서 먹는다. 또 열매는 천을 노랗게 염색하거나 빈대떡이나 전을 노랗게 물들이는 데에도 사용된다. 열매에는 카로티노이드색소인 크로신(crocin)이 함유되어 있어 가수분해하면 크로셀린(crocelin)과 포도당이 되고, 꽃은 정유 및 꽃밀을 함유하며, 정유는 에스텔이 풍부하다.

본 발명에서 사용되는 황벽(Phellodendron Amurense Bark)은 낙엽교목으로서, 우리나라 전역, 중국 북부, 일본 등에 분포한다. 나무껍질을 벗기면 노란빛을띠는데, 절편으로 절단하기 전에는 연한 황색을 띠고 있으나, 건조를 하면 노란빛이 많이 첨가된다.

본 발명에서 사용되는 오배자는 옻나무과의 오배자나무(Rhus Javanica)의 잎에 매미목 진딧물과의 오배자면충이 기생하여 만든 벌레혹으로서, 수렴작용이 강해 폐가 허하여 생기는 만성해수, 오래된 기침, 그리고 오랜 설사, 탈항, 저절로 나는 땀, 식은땀, 유정 등을 치료하고 대변출혈, 코피, 자궁출혈, 외상출혈, 조기, 피부염, 가려움증에 사용한다. 또한, 타닌 성분을 50~60% 함유하고 있어 타닌제를 비롯하여 염모제(染毛劑)나 잉크의 원료가 된다.

본 발명에서 사용되는 아선약(Uncaria gambir, 아차, 아전약, 감비르)은 꼭두서니과에 속하는 식물로 동인도에서 널리 자생하며 말레이시아, 중국, 인도, 스마트라, 브루네이에서는 재배한다. 또한 감겨자라는 떨기나무로 닭알 모양잎이 마주 붙어 있고, 잎겨드랑이에 머리 모양 꽃차례를 이룬 흰꽃이 핀다. 꽃이 지면 꽃대는 갈구리처럼 구부러져 다른 식물에 감긴다. 아선약의 씨를 심어서 1년이 지났을 때 잎이 붙은 가지의 끝부분을 잘라서 채취하는 것이 물엑스로 4-8달에 한번씩 채취할 수 있다. 이 물엑스는 여섯 해 자란나무에서 가장 많이 채취할 수 있으며 15년 정도 자라면 밭을 갈아엎고 포기가름한다. 물엑스의 성분은 d- 및 dl-카테킨(카테콜), 탄닌질, 쿠에르쩨틴, 알칼로이드인 감비린으로 이루어졌다. 아선약 추출물은 약용으로 사용하며, 밤색물감이나 가죽 이김약으로도 많이 이용되며 특히, 빈랑자를 늘 먹는 동남아시아의 일부 민족들은 아선약을 물로 개서 빈랑자에 발라 먹는다. 물엑스는 수렴약으로 인단과 같이 씹는 약품을 만드는데 널리 쓰인다.

본 발명에서 사용하는 천연 식물의 추출물은 당업계에 공지된 추출 방법을 이용할 수 있으며, 그 방법이 특별히 한정되는 것은 아니다. 예를 들어, 세척한 천연 식물을 건조하고 세절한 후 물 또는 유기용매를 넣고, 열수 추출 또는 환류 추출하여 침적시킨 후 여과포 여과와 원심분리를 통해 잔사와 여액을 분리하고, 분리된 여액을 감압 농축하여 추출물을 얻을 수 있다. 본 발명에서 사용하는 천연 식물 추출물의 제조시 사용하는 용매로는 이에 한정되는 것은 아니지만, 물 또는 에탄올, 메탄올, 부탄올, 에테르, 에틸아세테이트, 클로로포름 등의 유기용매, 또는 이들 유기용매와 물의 혼합용매를 선택하여 사용할 수 있으며, 바람직하게는 물을 사용할 수 있다. 또는 초음파로 세포벽을 깨고 저온으로 교반하여 시료의 유용물질을 추출하는 초음파 추출 방법, 효소를 이용한 효소 처리 방법을 이용할 수도 있으며, 이 때 효소로는 바람직하게 알카레이즈(alcalase)가 사용될 수 있다. 또한 필요에 따라서는 식물을 발효시켜 숙성한 후 이로부터 추출물을 얻거나, 식물의 추출물을 발효시켜서 발효 추출물을 얻을 수도 있다. 바람직하게는 상기한 방법을 모두 사용하여 추출물을 얻을 수 있다.

추출물은 30분~240분 동안 55~100℃, 0.01~1cmHg의 압력 하에서 제조될 수 있다. 또한, 추출물의 농축은 5~20시간 동안 40~90℃, 0.5~1cmHg의 압력 하에서 이루어질 수 있다.

상기와 같이 얻은 추출물은 당업계에 알려진 통상적인 방법으로 상온에서 냉침, 가열 및 여과하여 액상물을 얻을 수 있으며, 또는 추가로 용매를 증발, 분무 건조 또는 동결 건조하여 분말화할 수 있다. 고온 열풍건조는 건조 중 식물 추출물에 포함된 색소 성분이 변질되어 기능성이 저하될 수 있고, 저온 열풍건조는 건조시간이 길뿐만 아니라 일부 색소 성분이 변질되어 기능성이 저하될 수 있다. 또한 동결 건조는 색소 성분의 기능성 변화가 없이 유지될 수 있지만 건조에 시간이 많이 걸리고 대량 건조시에는 부적합하며, 건조 처리하는데 비용이 많이 든다는 문제점이 있다. 따라서, 본 발명에서는 분말 크기의 조절이 용이하며, 분말화 시간을 절약할 수 있으면서, 색소 성분의 기능성도 유지될 뿐만 아니라 대량 건조에도 용이하고 비용이 적게 드는 분무 건조법을 사용하는 것이 바람직하다.

또한, 본 발명에서 사용되는 추출물은 각 성분을 별도로 추출하여 혼합하거나, 천연 식물을 혼합한 후 추출하는 것도 가능하다.

본 발명에 있어서, 천연 식물의 추출물은 조성물 총 중량에 대하여 0.0001~80중량%의 양으로 사용될 수 있다. 또한, 바람직하게는 치자, 황벽, 오배자 및 아선약 추출물을 0.1~2:0.1~2:0.1~2:0.1~2의 비율로 혼합하여 사용하는 것이 좋다.

본 발명의 조성물은 우수한 피부 미백 효과를 제공한다. 또한, 본 발명의 조성물은 우수한 항산화 효과를 제공하여 피부 노화 및 광에 의한 피부 노화, 피부 주름살 생성 및 탄력 감소 등의 피부 노화 현상을 완화시키는 효과를 제공한다.

본 발명의 조성물은 피부 외용제 조성물, 특히 화장료 조성물로서 제형화될 수 있으며, 화장품학 또는 피부과학적으로 허용 가능한 매질 또는 기제를 함유하여 제형화될 수 있다. 또한, 본 발명의 조성물은 국소 적용에 적합한 모든 제형으로 제공될 수 있으며, 예를 들어 용액, 수상에 유상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 유상에 수상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 현탁액, 고체, 겔, 분말, 페이스트, 포말(foam) 또는 에어로졸 조성물의 제형으로 제공될 수 있다. 이러한 제형의 조성물은 당해 분야의 통상적인 방법에 따라 제조될 수 있다. 구체적으로, 본 발명은 유연화장수(스킨), 영양화장수, 영양로션(로션), 영양크림, 맛사지 크림, 에센스, 팩, 파운데이션, 메이크업 베이스 등의 메이크업 제품, 비누, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림 등의 세안제, 바디로션, 바디클렌저, 유액 등의 다양한 제형으로 제형화될 수 있다.

또한, 본 발명에 따른 조성물은 상기한 물질 이외에 주 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서, 바람직하게는 주 효과에 상승 효과를 줄 수 있는 다른 성분들을 포함할 수 있다. 또한 본 발명에 따른 조성물은 보습제, 에몰리언트제, 자외선 흡수제, 방부제, 살균제, 산화 방지제, pH 조정제, 유기 및 무기 안료, 향료, 냉감제 또는 제한제를 더 포함할 수 있다. 상기 성분의 배합량은 본 발명의 목적 및 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 당업자가 용이하게 선정 가능하며, 그 배합량은 조성물 총 중량에 대하여 0.01~5중량%, 구체적으로 0.01~3중량%일 수 있다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지 않는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.

[참고예 1] 천연 식물 추출물의 준비

1. 시료 구입

치자, 황벽, 오배자 및 아선약은 한우리약초(www.hanwoore.com) 및 화수목(www.whasoomok.com)에서 구입하였다.

2. 추출

1) 조추출

치자, 황벽, 오배자 및 아선약 목질부를 각각 흐르는 물로 여러 번 씻어 이물질을 제거 한 뒤 자연건조하고, 건조한 시료는 분쇄기를 이용하여 고운 분말을 만들어 진공포장한 후 실험 전까지 -20℃에서 보관하였다.

2) 추출

준비한 치자, 황벽, 오배자 및 아선약 각각으로부터 하기 표 1의 조건으로 하여 추출물을 제조하였다.

우선, 상기 조추출하여 건조한 시료 100g을 측정하고 여기에 시료 부피의 약 10배인 1000ml의 물을 넣고 시료 무게의 1% 중량부에 해당하는 효소를 처리하여 24시간 반응을 시킨 후 열수감압 추출하였으며 각각의 조건에 따라서 반복하여 2회 추출하였다.

그 다음 수득한 추출물을 원심분리하여 상청액만을 분리한 후, 이렇게 얻은 상청액을 농축하고, 동결건조하여 추출물을 제조하였다.

순번	1	2	3	4
염재	치자	황벽	오배자	아선약
추출온도(℃)	85	75	60	80
압력(cmHg)	0.04	0.035	0.52	0.04
시간(분)	60	1차 : 60	1차 : 82	1차 : 60
시간(분)	60	2차 : 40	2차 : 40	2차 : 40
농축온도(℃)	50	50	48	50
압력(cmHg)	0.90	0.75	0.90	0.90
시간(hr)	7.5	14	8.5	14
효소종류	CelluBio (셀룰라제)	Denimax BT (셀룰라제/헤미셀룰라제)	Alcalase (프로테아제)	Cellubio (셀룰라제)
처리온도(℃)	55	50~55	45	55
효소처리 pH	6	7	6	7
처리시간(hr)	24	24	24	24

이렇게 수득한 추출물을 하기 시험예에서 사용하였다.

[시험예 1] 항산화 활성 평가

1. ABTS 분석

7 mM ABTS(2,2'-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulphonic acid) 버퍼와 2.45 mM 과황산칼륨 버퍼(K₂S₂O₈) 제조 후, ABTS : K₂S₂O₈= 2 : 1의 부피비로 섞어 스톡 버퍼를 제조한 후 12~16시간 차광하여 반응시켰다. 스톡 버퍼를 734 nm에서 측정한 O.D. 값이 0.70 ± 0.02가 되도록 희석하고, 스톡 버퍼 100 μL에 상기 참고예 1에서 제조한 치자(10 mg/ml), 황벽(10 mg/ml), 오배자(10 mg/ml), 아선약(10 mg/ml) 추출물 또는 치자(10 mg/ml), 황벽(10 mg/ml), 오배자(10 mg/ml), 아선약(10 mg/ml) 추출물의 1:1:1:1(중량비) 혼합물을 증류수를 이용하여 농도별로 희석한 시료 100 μL를 첨가하고 실온에서 6분간 반응시켰다. 이 시료를 96 웰 플레이트로 옮겨 734 nm에서 흡광도를 SPECTROstar^Nano(BMG Labtech 제품)로 측정하여 각각의 시료에 대한 IC₅₀ 값을 구해 비교하였다. 이 때, 양성대조군으로 항산화제인 BHA를 사용하였다. IC₅₀ 값은 라디칼을 50%를 억제하는데 필요한 농도값을 나타내며, 억제율은 하기 수학식 1과 같이 계산하였다. 수학식 1에서 대조군은 시료 대신 증류수를 넣은 것이다.

2. DPPH 분석

DPPH(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl; Sigma-Aldrich Chemical Co. 제품) 용액을 시료 또는 표준 물질과 함께 넣은 반응액을 하기 표 2와 같이 준비하고, 충분히 혼합한 다음, 30분 동안 상온에 반응시켜 ELISA 판독기(spectra Max 190, molecular devices 제품)를 이용하여 517 nm에서 흡광도를 측정하였다. 본 실험에서는 표준 물질로서 BHA를 사용하였으며, 억제율은 하기 수학식 2와 같이 계산하였다.

	DPPH	시료	MeOH	시료 용해 용액
A	100 μL	100 μL
B		100 μL	100 μL
C	100 μL			100 μL
D			100 μL	100 μL

3. 결과

상기 ABTS 분석 결과 및 DPPH 분석 결과를 하기 표 3에 나타내었다.

BHA와 비교하여 나타낸 다양한 천연 식물 추출물의 ABTS 및 DPPH 자유 라디칼 소거능

시료	ABTS IC₅₀ (μg/mL)	DPPH IC₅₀ (μg/mL)
치자	> 100	> 100
황벽	27.84	> 100
오배자	3.90	20.68
아선약	4.53	17.79
치자+황벽+오배자+아선약	2.84	16.23
BHA	3.36	17.71

다양한 식물 추출물 및 이의 혼합물의 항산화 효능을 평가한 결과, 상기 표 3에 나타낸 바와 같이 4가지 추출물의 혼합물을 사용할 경우 자유 라디칼 소거능이 단일 추출물을 사용하는 경우보다 현저하게 더 우수한 것으로 나왔으며, 공지된 항산화제인 BHA보다도 더 우수한 항산화능을 보임을 확인하였다.

[시험예 2] 항염증 효능 평가

1. NO 분석

RAW 264.7 대식세포를 96 웰 플레이트에 5×10⁴/웰의 세포 수로 분주하고 24시간 후 내독소로 작용하여 NO 합성 미토겐으로 쓰이는 지질다당체를 0.5 μg/mL 농도로 처리하였다. 37℃, 5% CO₂의 조건에서 PBS(Phosphate buffered saline) 버퍼 중에서 1시간 배양한 후 상기 참고예 1에서 제조한 치자, 황벽, 오배자, 아선약 추출물 또는 치자, 황벽, 오배자, 아선약 추출물의 1:1:1:1(중량비) 혼합물을 농도별로 처리하고, 24시간 동안 재배양하였다. 생성된 NO의 정량을 위하여 1 M NaNO₂(아질산나트륨)을 0, 3.12, 6.25, 12.5, 25, 50 및 100 μM이 되도록 희석하여 기준 값을 정한 후 표준검량선을 작성하였다. 또한, 비교를 위하여 양성대조군으로서 L-NMMA를 사용하였다. 1% 설파닐아미드와 0.1% N-(1-나프틸) 에틸렌디아민 디하이드로클로라이드를 1:1의 부피비로 혼합한 시약과 배지 상등액을 1:1로 각각 50 μL씩 혼합하여 10분간 상온에 보관한 후 540 nm에서 ELISA 판독기(spectra Max 190, molecular devices 제품)를 이용하여 대조군 대비 NO생성 억제능을 측정하였다.

2. MTT 분석

상기 1. NO 분석과 동일한 방법으로 세포에 시료를 처리하고, NO 생성량을 측정한 후, 상층액을 제거하고 5 mg/mL MTT 용액이 10% 포함된 무혈청 배지를 100 μL씩 가한 후 37℃, 5% CO₂ 배양기에 넣어 2시간 보관하였다. 다시 배지를 제거하고 DMSO를 100 μL/웰의 농도로 첨가한 후 플레이트 진탕기에서 15분간 용해시키고, ELISA 판독기(spectra Max 190, molecular devices 제품)를 이용해 540 nm에서 흡광도를 측정하였다.

3. 결과

상기 NO 분석 결과 및 MTT 분석 결과를 하기 표 4에 나타내었다.

다양한 천연 식물 추출물의 NO 분석 및 세포 생존율

시료	NO IC₅₀ (μg/mL)	MTT IC₅₀ (μg/mL)
치자	>100	>100
황벽	>100	>100
오배자	69.81	>100
아선약	76.05	>100
치자+황벽+오배자+아선약	49.07	>100
L-NMMA	43.56uM	>100

다양한 식물 추출물 및 이의 혼합물의 항염증 효능을 평가한 결과, 상기 표 4에 나타낸 바와 같이 4가지 추출물 모두 세포 독성이 없으며, 혼합물을 사용할 경우 더 효과적으로 NO 생성량을 감소시키는 것이 확인되었다.

[시험예 3] 미백 효능 평가

1. 티로시나제 억제 분석

0.1 M 인산칼륨 버퍼(pH 6.5) 220 μL에 상기 참고예 1에서 제조한 치자(10 mg/ml), 황벽(10 mg/ml), 오배자(10 mg/ml), 아선약(10 mg/ml) 추출물 또는 치자(10 mg/ml), 황벽(10 mg/ml), 오배자(10 mg/ml), 아선약(10 mg/ml) 추출물의 1:1:1:1(중량비) 혼합물을 PBS 버퍼를 이용하여 농도별로 희석한 시료(모든 시료의 스톡용액농도는 10 mg/ml임) 20 μL를 첨가 한 후 1250 unit/mL 농도의 버섯 티로시나제(Sigma-Aldrich Chemical Co.) 20 μL를 첨가하였다. 여기에 1.5 mM의 L-티로신 기질을 40 μL씩 첨가하여 잘 섞은 후 37℃에서 10분 반응시킨 다음 490 nm에서 ELISA 판독기(spectra Max 190, molecular devices 제품)를 이용해 흡광도를 측정하였다. 티로시나제 대신 버퍼로 대체하여 측정한 흡광도와 비교하여 아래의 계산식에 따라 티로시나제 억제 활성을 계산하여 IC₅₀ 값을 산출하였으며, 양성대조군으로 알부틴과 코직산을 사용하였다. 억제율은 하기 수학식 3과와 같이 계산하였다.

A: 시료액의 반응 후의 흡광도

B: 티로시나제 대신 버퍼로 대체하여 측정한 시료액의 흡광도

C: 공시료액의 반응 후의 흡광도

D: 티로시나제 대신 버퍼로 대체하여 측정한 공시료액의 흡광도

2. 결과

상기 티로시나제 억제 분석 결과를 하기 표 5에 나타내었다.

다양한 천연 식물 추출물의 티로시나제 활성 억제 효능

시료	IC₅₀ (μg/mL)
치자	>1000
황벽	84.56
오배자	6.59
아선약	>100
치자+황벽+오배자+아선약	4.76
알부틴	215.31
코직산	4.84

다양한 식물 추출물 및 이의 혼합물의 티로시나제 억제 활성 정도를 측정한 결과, 상기 표 5에 나타낸 바와 같이 4가지 추출물의 혼합물을 사용할 경우 티로시나제 활성 억제능이 현저하게 우수한 것으로 나왔으며, 이는 공지된 미백제인 코직산과 거의 유사한 정도인 것으로 나타났다.

[시험예 4] 주름 개선 효능 평가

1. 엘라스타제 분석

50 mM Tris-Cl 버퍼(pH 8.5)와 상기 참고예 1에서 제조한 치자(10 mg/ml), 황벽(10 mg/ml), 오배자(10 mg/ml), 아선약(10 mg/ml) 추출물 또는 치자(10 mg/ml), 황벽(10 mg/ml), 오배자(10 mg/ml), 아선약(10 mg/ml) 추출물의 1:1:1:1(중량비) 혼합물을 Tirs 버퍼를 이용하여 농도별로 희석한 시료(모든 시료의 스톡용액농도는 10 mg/ml임) 50 μL를 첨가한 후 50 mM Tris-Cl 버퍼(pH 8.5)에 녹인 기질 1 mg/ml N-석시닐-(Ala)₃-p-니트로아닐리드 50 μL를 첨가하였다. 5℃에서 10분간 반응시킨 후 0.6 U/ml 돼지 췌장 엘라스타제(PPE)를 25 μL씩 첨가하였다. 이를 잘 혼합한 다음 상온에서 5분 반응시킨 후 405 nm에서 ELISA 판독기(spectra Max 190, molecular devices 제품)를 이용해 흡광도를 측정하였다. 양성대조군으로 우르솔릭산을 사용하였고, 엘라스타제 억제율은 하기 수학식 4와 같이 계산하고, 각각의 시료에 대한 IC₅₀ 값을 구해 평가하였다. 수학식 4에서 대조군은 시료 대신 버퍼를 넣은 것이다.

2. 결과

상기 엘라스타제 억제 분석 결과를 하기 표 6에 나타내었다.

우르솔릭산과 비교한 다양한 천연 식물 추출물의 엘라스타제 활성 억제 효능

시료	IC₅₀ (μg/mL)
치자	>1000
황벽	>1000
오배자	>1000
아선약	>1000
치자+황벽+오배자+아선약	68.16
우르솔릭산	40.94

다양한 식물 추출물 및 이의 혼합물의 엘라스타제 억제 활성 정도를 측정한 결과, 상기 표 6에 나타낸 바와 같이 4가지 추출물을 1종씩 사용할 경우에는 엘라스타제 억제 효능이 거의 없으나, 혼합물을 사용할 경우에는 엘라스타제 활성 억제능이 우수한 것으로 나타났다.

[시험예 5] 제형 안정성 평가

상기 시험예들의 평가 결과를 바탕으로 하면, 치자, 황벽, 오배자 및 아선약 추출물을 모두 포함하는 경우가 효능이 가장 우수하므로, 제형 안정성은 상기 4가지 추출물을 모두 함유하는 제형에 대하여 실시하였다.

1. 천연 식물 추출물을 함유하는 조성물의 제조

하기 표 7에 제시된 조성을 가지는 크림 유형의 조성물을 통상적인 제조 방법으로 제조하였다. 식물 추출물은 상기 참고예 1에서 제조한 것을 사용하였다.

상	INCI 명칭
A 상	탈이온수	to 100
	디소듐 EDTA	Q.S
	라피노스	Q.S
	판테놀	Q.S
	소듐 히알루로네이트	Q.S
	L-아르기닌	Q.S
	1,3-부틸렌글리콜	Q.S
B 상	옥틸도데칸올	Q.S
	하이드로제네이티드 레시틴	Q.S
	세라마이드 3	Q.S
	콜레스테롤	Q.S
	세테아릴 올리베이트, 소르비탄 올리베이트	Q.S
	C14-22 알코올, C12-20 알킬 글루코사이드	Q.S
	슬리세릴 스테아레이트 SE	Q.S
	라우레스-23	-
	소르비탄 세스퀴올리에이트	Q.S
	스테아르산	1.00
	세테아릴 알코올	1.50
	마카다미아씨 오일 (Macadamia Ternifolia Seed Oil)	Q.S
	카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드	-
	세틸 에틸헥사노에이트	Q.S
	쉐어버터(Butyrospermum Parkii_	2.00
	식물성 스크알란	Q.S
	디메치콘	Q.S
	페트롤레이텀	2.00
	비타민 E 아세테이트	Q.S
	치자 추출물	0.01
	오배자 추출물	0.01
	황벽 추출물	0.01
	아선약 추출물	0.01
	글리세린	Q.S
C 상	잔탄검	Q.S
C 상	카보머	Q.S

2. pH 측정

화장품의 pH는 피부표면과 유사한 pH인 약산성과 중성으로 유사하게 맞추어진다. 피부가 알칼리성이 되면 저항력이 약해지고 세균의 번식에 의해 피부병이 생기기 쉽기 때문에 피부에는 중성 또는 약산성의 화장품을 사용하는 것이 좋다. 또한 pH의 변화가 크지 않고 안정해야 한다.

pH 측정은 HANNA INSTRUMENT사의 211 Microprocessor pH 미터기를 이용하였다. 0℃, 25℃, 40℃, 온도순환(0℃→25℃→40℃, 각 8시간씩)인 각각의 챔버에 보관한 생체형 계면 활성제를 이용한 ANM 크림(aminolipid and nonionic surfactant multiple emulsion)을 25℃에 3시간 동안 보관하여 동일한 온도가 되었을 때 pH를 측정하였다. 측정하기 전에 유리전극은 미리 염기성 완충액이나 증류수에 수 시간 담그어 두었으며, pH 미터는 전원에 연결하고 10분 이상 두었다가 pH 미터를 보정할 때 사용하는 시약인 스탠더드 버퍼인 pH 버퍼를 사용하여 pH 4.0, pH 7.0에 맞춰 보정을 한 후 pH를 측정하였다. pH 측정 후의 검출부는 증류수로 잘 씻어 가볍게 닦아낸 다음 사용하였다. 이와 같은 온도에 따른 pH 변화 측정을 60일 동안 관찰하였다. 측정 결과는 도 1에 나타내었다.

도 1에 나타낸 바와 같이, 초기에 pH 5.60이었던 제형의 pH는 60일 후 0℃, 25℃, 40℃, 온도순환에서 pH가 각각 5.61, 5.58, 5.59, 5.63으로 나타나 초기와 비교하여 약간의 변화를 보이기는 하였으나, 이는 무시할 수 있는 정도의 수준으로 제형 안정성에는 영향을 미치지 않는 안정한 범위 내인 것으로 확인되었다.

3. 가속 시험(온도에 따른 안정성)

일반적으로 보존시험법과 특수·가혹 보존시험에서 실시하는 안정성 시험법에는 온도(0, 25, 40℃)에 따른 안정성과 온도순환에 따른 안정성 시험법이 있다. 온도에 따른 안정성 시험법 중 고온(40℃)에서는 가수 분해현상이 빠르게 일어나 외관의 산패, 변색, 변취, 점도, 증발, 부유, 침전, 탁도, 분리 등을 관찰할 수 있고 저온(0℃)에서는 부피, 팽창, 용해도차에 의한 계면막 손상, 크림의 불안정성, 응고, 침전, 탁도, 결정, 석출, 분리 등의 화학적·물리적 변화를 관찰할 수 있다. 이와 같은 현상은 사용성에 큰 영향을 줄 뿐 만아니라 화장품이 갖는 미적외관, 이미지손실에도 큰 영향을 주는 요인이 된다.

온도에 따른 안정성 시험법은 JSR사의 JSMI-04CP 4룸 챔버를 이용하여 0℃, 25℃, 40℃에서 생체형 계면활성제를 이용한 제형을 1, 3, 5, 7, 14, 30, 60일 동안 보관하면서 상층부의 크리밍, 응집, 침전, 변색, 변취, 빙결 여부, 응고, 곰팡이 등의 경시적 변화를 평가하였다. 결과는 하기 표 8에 나타내었다.

상기 표 8에 나타낸 바와 같이, 본 발명에 따른 조성물은 0, 25, 40℃에서 각각 보관 후 안정성을 관찰한 결과, 60일 동안 모든 온도 조건에서 상층부의 크리밍, 응집, 침전, 변색, 빙결 여부, 응고, 곰팡이 등의 변화없이 안정함을 확인할 수 있었다.

4. 가혹시험

(1) 온도격차 및 극한 조건(cycle)

4계절이 분명한 우리나라에서 화장품의 저온 및 고온의 보관조건에 따른 물성변화를 관찰하기 위하여 온도순환(0℃→25℃→40℃, 각 8시간씩)에 따른 안정성 시험법을 실시하였다. 온도 변화는 유화 제품의 변화를 더 빨리 진행시켜 제형의 불안정성을 확인하기 위한 방법으로 많이 사용된다. 또한 온도 변화에 따라 유화에서의 물성변화를 관찰 시, 가속조건 하에서 3개월 동안 안정하면 실온조건 하에서 3년간 안정하다고 판단할 수 있다.

본 발명에 따른 조성물을 0, 25, 40℃의 온도를 1일 순환하도록 설정하여 60일 동안 확인한 결과는 하기 표 9에 나타내었다.

상기 표 9에 나타낸 바와 같이, 본 발명에 따른 조성물은 60일 동안 모두 상층부의 크리밍, 응집, 침점, 변색, 변취, 빙결 여부, 응고, 곰팡이 등의 변화 없이 안정함을 확인할 수 있었다.

(2) 자연광 노출 시험

화장품이 제품으로 출시되어 운송이나 보관 중에 제품이 빛에 장시간 노출되어 있으므로 안정성을 확인하기 위해 자연광 조건하에서 실시하였다. 투명 용기에 생체형 계면활성제를 이용한 ANM 크림(aminolipid and nonionic surfactant multiple emulsion)을 담아 햇빛이 잘 드는 실내에 1, 3, 5, 7, 15, 30, 60일 동안 보관하면서 제품의 크리밍, 응집, 침전, 변색, 변취 등의 경시적 변화를 관찰하였으며, 그 결과는 하기 표 10에 나타내었다.

상기 표 10에 나타낸 바와 같이, 본 발명에 따른 조성물은 60일 동안 자연광에 노출되어도 상층부의 크리밍, 응집, 침전, 변색, 변취 등의 변화가 관찰되지 않았다. 따라서 태양광선 노출에 영향을 받지 않는다는 것을 확인 할 수 있었다.

(3) 인공 광 노출 시험

화장품은 출시 후 직접 일광 하에 진열되거나 쇼윈도 내에 장기간 두는 경우가 대부분인 화장품은 케이스 내에 내용물이 있어 직접 광조사하에 있지 않은 경우도 있으나 투명용기나 유리용기 상태의 경우 광안정성은 반드시 확인이 필요하다. 직접 또는 간접적으로 태양광과 형광등의 빛에 노출되어 물리·화학적으로 품질의 특성이 변하는 것을 확인하는 광안정성 실험을 실시하였다.

투명 용기에 생체형 계면활성제를 이용한 ANM 크림(aminolipid and nonionic surfactant multiple emulsion)을 담아 태양등(sun lamp)(Labtron사의 WL-610)에 넣은 후 기기 내의 온도는 40℃, 광원과의 거리는 20cm로 조절하여 인공 UV를 조사한 후, 3시간 동안 조성물의 변색, 발색, 변취, 응집, 산패 등의 변화를, 그 결과는 하기 표 11에 나타내었다.

그룹	온도: 40℃ 광원과의 거리: 20cm 보관: 3시간
안정성	30분	1시간	2시간	3시간
안정성	O	O	O	O

O : 안정적임

상기 표 11에 나타낸 바와 같이, 본 발명에 따른 조성물은 0.5, 1, 2, 3시간 동안 인공 광에 노출된 상층부의 크리밍, 응집, 침전, 변색, 변취 등의 변화가 관찰되지 않았다. 따라서 인공 광 노출에 영향을 받지 않는다는 것을 확인할 수 있었다.

[시험예 5] 피부 안정성 평가 - 피부 첩포 시험(patch test)

개발된 원료나 제품을 이용할 때 피부염이 일어나지 않는 것을 확인하기 위해서 간편한 예비 실험으로서 사람의 팔과 등 부위에 첩포 시험을 행한다. 첩포 시험(Patch test)은 피부에 생물학적 또는 화학적 물질을 반응시켜 피검자가 어떤 물질에 알레르기성 과민증을 나타내는지 알아보는 시험으로써 원래는 새로운 화학화합물이 동물들에게 알레르기를 일으킬 가능성이 있는지 시험해보기 위해서 개발되었으나, 현재는 사람의 알레르기를 진단하는데 광범위하게 사용한다.

본 시험은 대구한의대학교에 재학 중인 20대 남, 여 10명을 대상으로 실시하였다. 상기 본 발명에 따른 조성물, 블랭크로서 정제수를 각각 0.1g 씩 덜어 피부 위에 부착하고 24시간 동안 방치한 후, 첩포를 떼어낸 직후와 24시간 후의 피부의 반응을 조사해 점수를 매겨 평가하였다. 그 결과는 하기 표 12에 나타내었다.

그룹	인원수	0시간	24시간
여성	6	-	-
남성	4	-	-

상기 표 12에 나타낸 바와 같이, 첩포시험의 피검자들에게서 가려움, 따가움 등의 자극이 나타내지 않아, 본 발명에 따른 조성물은 피부 자극이 없는 안전한 물질임을 알 수 있다.

Claims

치자, 황벽, 오배자 및 아선약 추출물을 함유하는 화장료 조성물.
제1항에 있어서, 상기 추출물은 열수 추출방법으로 제조된 것임을 특징으로 하는 화장료 조성물.
제2항에 있어서, 상기 추출물은 30분~240분 동안 55~100℃, 0.01~1cmHg의 압력 하에서 제조되는 것임을 특징으로 하는 화장료 조성물.
제1항에 있어서, 상기 치자, 황벽, 오배자 및 아선약 추출물은 1:1:1:1의 중량비로 혼합된 것임을 특징으로 하는 화장료 조성물.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 항산화용임을 특징으로 하는 화장료 조성물.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 피부 미백용임을 특징으로 하는 화장료 조성물.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 항염용임을 특징으로 하는 화장료 조성물.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 피부 주름 개선용용임을 특징으로 하는 화장료 조성물.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 제형 안정성이 개선된 것임을 특징으로 하는 화장료 조성물.