KR102230887B1 - 은행 추출물을 유효 성분으로 포함하는 항산화 및 dna 손상 보호용 조성물 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 은행 추출물을 유효 성분으로 포함하는 항산화 및 DNA 손상 보호용 조성물에 관한 것으로, 항산화 효과 및 자외선에 의한 피부 DNA 손상을 예방할 수 있다.
또한, 피부 노화 예방 및 개선, 피부 주름 개선, 피부 염증 개선에 우수한 효과를 나타낼 수 있는 은행 외종피 추출물을 유효 성분으로 포함하는 피부 외용제를 제공할 수 있다.

Description

은행 추출물을 유효 성분으로 포함하는 항산화 및 DNA 손상 보호용 조성물{Composition for protecting against antioxidant and DNA damage containing ginkgo biloba extract}
본 발명은 은행 추출물을 유효 성분으로 포함하는 항산화 및 DNA 손상 보호용 조성물에 관한 것으로, 보다 구체적으로 은행 외종피 추출물을 유효 성분으로 포함하는 자외선에 의한 피부 DNA 손상 보호 효과가 우수한 조성물에 관한 것이다.
사람의 피부는 사람의 몸을 외부 환경으로부터 보호해 주는 장벽 역할을 하는 중요한 기관이다. 인간은 평생을 살면서 많은 외부자극에 노출되는데, 그 중 가장 위험한 자극 중의 하나가 바로 자외선(ultraviolet Radiation, UV)이다.
자외선은 그 파장에 따라 A, B 및 C의 3개 영역으로 나눌 수 있으며, 가장 에너지가 크고 해로운 자외선 C 영역은 대부분 오존층에서 흡수되어 지구표면에 도달하지 못하고, 피부 속 깊은 곳까지 도달할 수 있는 자외선 A는 에너지가 비교적 약해 인체에 큰 해를 주기에는 미약하다.
반면에 자외선 B는 피부 내 세포의 지질, 단백질 및 DNA에 심각한 손상을 유발하여, 세포사멸 또는 돌연변이 유발에 의한 심각한 질병을 발생시킬 수 있다.
자외선 B(ultraviolet B, UVB 방사선(radiation), 파장: 280-320 nm)는 피부암(skin cancer), 면역시스템 억제 및 광노화(photo-aging) 등의 피부에 대한 유해 작용을 일으키는 주요 환경 요인 중 하나이다[Karol, M. H., Biomol. Ther. 17: 113-124.].
이러한 UVB 방사선에 의해 발생된 활성 산소종(reactive oxygen species, ROS)은 지질(lipids), 단백질(proteins) 및 DNA와 같은 세포 성분들에 산화성 손상(oxidative damage)을 일으켜, 결과적으로 피부 노화를 촉진시키고 암질환의 피부 병변을 유발하게 된다[Ramachandran, S. 등, Arch. Dermatol. Res. (2010), 302, 733-744].
ROS로 인한 세포 손상으로부터 피부를 보호하기 위한 수많은 항산화물들이 제시되었으며, 예를 들면 (-)-에피갈 로카테킨-3-갈레이트((-)-epigallocatechin-3-gallate) 및 레스베라트롤(resveratrol) 등이 UVB로 인한 피부 손상을 저해하는 것으로 알려져 있다[Huang, C. C. 등, Molecules. (2007), 12, 1845-1858; Aziz, M. H. 등, Photochem. Photobiol. (2005), 81, 25-31].
H2O2는 활성산소종의 하나로 세포의 생장과 소멸 그리고 노화 등 그 운명을 결정짓는 중요한 요소이다. 활성산소란 자유 라디칼(free radicals)을 포함한 생체 내의 불안정한 산소를 지칭하며 이러한 활성산소는 불안정하기 때문에 강하게 활성화하는 특성을 가지고 있다(Frippiat et al., 2001). 불안정한 특성에 따라 주위의 물질과 매우 강하게 반응하기 때문에(Beckman et al., 1988), UV와 같은 외부자극요인의 지속적 피부 노출은 H2O2와 같은 활성산소의 지나친 생성으로 산화적 스트레스에 의해 세포 손상을 일으키고 더 나아가 유전자와 단백질 구조를 변화시켜 피부 노화를 가속화한다(Kim, 2012; Son et al., 2013; Jung et al., 2013).
이러한 문제를 해결하기 위해, 천연 추출물을 이용하여, 자외선에 의한 피부 DNA 손상 방지가 가능한 제품에 대한 개발이 필요하다.
(특허 문헌 1) KR 10-2014-0007218 A1
본 발명의 목적은 은행 추출물을 유효 성분으로 포함하는 항산화 및 DNA 손상 보호용 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 은행 외종피 추출물을 유효 성분으로 포함하여, 항산화 및 자외선에 의한 피부 DNA 손상을 예방할 수 있는 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 은행 외종피 추출물을 유효 성분으로 포함하여, 피부 노화 예방 및 개선, 피부 주름 개선, 피부 염증 개선에 우수한 효과를 나타낼 수 있는 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 은행 외종피 추출물을 유효 성분으로 포함하는 약제학적 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 은행 외종피 추출물을 유효 성분으로 포함하는 피부 외용제를 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명의 일 실시예에 따른 항산화 및 DNA 손상 보호용 조성물은 은행(Ginko biloba) 추출물을 유효 성분으로 포함할 수 있다.
상기 은행 추출물은 은행 외종피(Ginko biloba outer seedcoat) 추출물일 수 있다.
상기 은행 추출물은 물, 탄소수 1 내지 6의 알코올 및 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택된 추출 용매를 이용하여 추출될 수 있다.
상기 DNA 손상은 자외선에 의한 피부 DNA 손상이다.
상기 조성물은 H2O2 소거 효과 및 DNA 손상에 대한 보호를 통해, 우수한 피부 노화 예방 및 개선, 피부 주름 개선, 피부 염증 개선의 효과를 나타낼 수 있다.
본 발명의 다른 일 실시예에 따른 약제학적 조성물은 상기 항산화 및 DNA 손상 보호용 조성물을 유효 성분으로 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 일 실시예에 따른 식품 조성물은 상기 항산화 및 DNA 손상 보호용 조성물을 유효 성분으로 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 일 실시예에 따른 피부 외용제는 상기 항산화 및 DNA 손상 보호용 조성물을 유효 성분으로 포함할 수 있다.
이하, 본 발명을 더욱 상세하게 설명한다.
본 명세서에서, "자외선에 의한 피부 DNA 손상"이라 함은 자외선과 같은 외부 요소에 의한 피부 세포와의 상호작용에 의해 발생하는 손상을 말하며, 상기 상호작용으로는 DNA 손상, 활성산소의 증가, 이들로 인한 세포의 변성 또는 사멸을 포함한다.
또한, 본 명세서에서, "예방"이라 함은 자외선에 의한 피부 손상으로부터 피부를 보호하여 피부 손상을 막거나, 억제하거나, 지연시키는 것을 말하며, 따라서 '자외선에 의한 피부 손상의 예방'과 '자외선에 의한 피부 손상의 보호'는 동일한 의미를 갖는다.
또한, 본 명세서에서, "개선"이라 함은 자외선에 의한 피부 손상을 치유하거나, 완전히 치유하지 않아도 증상의 진전 및/또는 악화를 억제하여 손상의 진행을 멈추거나, 또는 증상의 일부 혹은 전부를 치유의 방향으로 유도하는 것을 의미한다.
또한, 본 명세서에서, “은행”은 은행나무 잎, 은행나무 줄기, 은행나무 뿌리 및 은행나무 열매를 의미하는 것이다. 구체적으로 은행 종자 추출물이며, 보다 구체적으로 은행 외종피이지만, 상기 예시에 국한되지 않는다.
또한, 본 발명에서, “은행 외종피”는 은행 열매의 씨 부분을 감싸고 있는 과육 부분을 의미하는 것이다.본 발명의 일 실시예에 따른 항산화 및 DNA 손상 보호용 조성물은 은행(Ginko biloba) 추출물을 유효 성분으로 포함한다.
은행나무(Ginkgo biloba)는 행자목이라고도 하며, 겉씨식물에 속하는 낙엽성 활엽수로 한국, 중국 및 일본 등지에 고루 분포한다. 9 내지 10월경에 열리는 황색의 은행종자는 크게 바깥쪽 육질층(외종피, sarcotesta)과 딱딱 한 중간 껍질(후벽내종피, sclerotesta), 그리고 그 안쪽의 얇은 껍질(내종피, endotesta)로 이루어져 있다.
은행에는 간놀, 펙틴, 히스티딘, 전분, 단백질 등이 많이 함유되어 있어 폐기능을 향상시키고 기침을 멎게 하며, 레시틴을 함유하고 있어 신경세포막을 보호해 뇌의 건강에 도움을 준다.
또한 장코플라톤이라는 성분에 의해 안 좋은 콜레스테롤을 제거하고 여러 독소를 제거하는 효과가 있으며, 글로불린이 풍부하고 아미노산 조성도 우수 하다. 무기질 P, Ca와 비타민 A, 비타민 C 및 나이아신 등을 적절히 함유하고 있으며, 특히 나이아신의 함량이 높다.
그 외에도 혈액순환 촉진 및 혈관 확장작용, 항균작용, 항알레르기 등에 효과적이며 관상동맥을 확장하여 혈압과 콜레스테롤 수치를 내린다.
상기 항산화 및 DNA 손상 보호용 조성물은 은행 추출물을 유효 성분으로 포함하며, 보다 바람직하게는 은행 외종피(Ginko biloba outer seedcoat) 추출물이다.
일반적으로 식용하는 은행 내종피 부분이 아닌, 내종피를 감싸고 있는 육질층인 은행 외종피를 이용하는 것이다. 상기 은행 외종피는 내종피를 식용하기 위해 버려지는 부분이다.
상기 은행 외종피 추출물은 과산화수소(H2O2)에 대한 우수한 항산화 활성 및 DNA 손장 보호 활성이 우수하다. 보다 구체적으로, 상기 은행 외종피 추출물은 ROS 제거를 통해 산화 스트레스와 관련된 세포 손상을 차단하여, H2O2에 의해 유발된 DNA 손상 및 세포 사멸로부터 HaCa T 세포의 보호를 가능하게 한다.
상기 은행 추출물의 추출 방법은 공지된 추출 방법을 이용하여 추출할 수 있으며, 추출 방법에 국한되지 않고, 당업자가 쉽게 선택 가능한 추출 방법을 이용하여 획득할 수 있다.
구체적으로, 은행 외종피를 분쇄하는 단계; 용매를 사용하여 상기 분쇄물을 침출시키는 단계; 시료를 침출 후 건조시키는 단계; 건조된 시료를 추출 용매를 사용하여 재 침출시키는 단계; 시료를 침출 후 건조시키는 단계; 물을 이용하여 침출시키는 단계; 및 침출하는 단계를 포함하여, 천연 추출물을 획득할 수 있다.
상기 추출 용매를 사용하여 추출한 은행 외종피 추출물은 유기 용매를 사용하여 분획을 실시하는 단계를 더 포함할 수 있다.
상기 추출물을 제조하는 방법은 초음파 추출법, 침출법 및 환류 추출법 등 당업계의 통상적인 추출 방법일 수 있다. 구체적으로 세척 및 건조로 이물질이 제거된 천연물을 물, 탄소수 1 내지 6의 알코올 또는 이들의 혼합 용매로 추출한 추출물일 수 있으며, 상기 용매들을 순차적으로 시료에 적용하여 추출한 추출물일 수도 있다. 바람직하게는 물 또는 메탄올을 추출 용매로 이용할 수 있으며, 보다 바람직하게는 메탄올이지만, 상기 예시에 국한되지 않는다.
상기 환류 추출법은 탄소수 1 내지 6의 알코올 100mL기준으로, 천연물의 분쇄물 10 내지 30g, 환류 시간 1 내지 3시간 및 50 내지 100%의 탄소수 1 내지 6의 알코올에 의한다. 보다 구체적으로, 탄소수 1 내지 6의 알코올 100mL기준으로, 천연물의 분쇄물 10 내지 20g, 환류 시간 1 내지 2시간 및 70 내지 90%의 탄소수 1 내지 4의 알코올에 의한 것이다.
상기 침출법은 15 내지 30℃, 24 내지 72시간 동안 및 50 내지 100%의 탄소수 1 내지 6의 알코올에 의한 것이다. 보다 구체적으로는 20 내지 25℃, 30 내지 54시간 동안 및 70 내지 80%의 탄소수 1 내지 6의 알코올에 의한 것이다.
상기 초음파 추출법은 30 내지 50℃, 0.5 내지 2.5시간 동안 및 50 내지 100%의 탄소수 1 내지 6의 알코올에 의한 것이다. 구체적으로는 40 내지 50℃, 1 내지 2.5시간 동안 및 70 내지 80%의 탄소수 1 내지 6의 알코올에 의한 것이다.
상기 추출 용매는 시료의 중량 기준으로 2 내지 50배를 사용할 수 있으며, 보다 구체적으로는 2 내지 20배이다. 추출을 위해 시료는 추출 용매에서 침출을 위해 1 내지 72 시간 동안 방치될 수 있으며, 보다 구체적으로 24 내지 48시간 동안 방치될 수 있다.
추출 후, 추출물은 새로운 분획 용매를 순차적으로 적용하여 분획할 수 있다. 분획시 사용하는 분획 용매는 상기 용매는 물, 헥산, 부탄올, 에틸아세트산, 에틸 아세테이트, 메틸렌클로라이드 및 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나 이상이며, 바람직하게는 에틸아세테이트 또는 메틸렌클로라이드이다.
추출물 또는 분획물을 얻은 후에는 농축 또는 동결건조 등의 방법을 추가적으로 사용할 수 있다.
상기 DNA 손상은 자외선에 의한 피부 DNA 손상을 의미한다. 자외선 영역 중 자외선 B(ultraviolet B, UVB 방사선(radiation), 파장: 280-320 nm)는 피부암(skin cancer), 면역시스템 억제 및 광노화(photo-aging) 등의 피부에 대한 유해 작용을 일으키는 주요 환경 요인 중 하나이다. 특히, 산화적 스트레스와 관련되어 세포 손상을 유발할 수 있고, DNA 손상을 통해 결과적으로 피부 노화를 촉진하게 된다.
보다 구체적으로, 자외선에 의해 유발된 활성 산소종(reactive oxygen species, ROS)은 DNA에 산화성 손상(oxidative damage)을 일으켜, 결과적으로 피부 노화를 촉진시키고 암질환의 피부 병변을 유발하게 된다.
본 발명에서의 은행 외종피 추출물은 이러한 자외선에 의한 피부 DNA 손상을 예방하고자 한다. 특히, 피부 외용제로 사용됨에 따라, 피부 노화를 방지하는 효과를 높일 수 있다.
보다 구체적으로, 상기 은행 외종피 추출물은 H2O2 소거 효과 및 DNA 손상에 대한 보호를 통해, 우수한 피부 노화 예방 및 개선, 피부 주름 개선, 피부 염증 개선의 효과를 나타낼 수 있다.
본 발명의 다른 일 실시예로, 상기 항산화 및 DNA 손상 보호용 조성물은 은행 외종피 추출물에 야자수 열매(Cocos nucifera L) 추출물, 검인(仁) 추출물 및 무루자(無漏子) 추출물을 추가로 포함할 수 있다.
상기 야자수 열매는 종려과야자속식물에 속하는 것으로, 식물체가 높고, 높이는 15 내지 30m이며, 교목상이다. 줄기가 없으며 대형의 잎이 줄기 끝에 무리지어 달린다. 원산지는 아시아 동남부, 인도네시아에서 태평양 군도, 중국 광동 남부 제이저우 반도, 해남, 대만 및 운남 남부 열대 지구에서 모두 재배되고 있다. 야자수 열매는 코코넛이라고도 불리우며, 야자즙 및 야자 과육에는 대량의 단백질, 과당, 포도당, 자당, 지방, 비타민 B1, 비타민 E, 비타민 C, 칼륨, 칼슘, 마그네슘 등이 함유되어 있다. 야자 과육 색깔은 박속같고 즙은 청량하고 감미로운 맛을 제공하는 것이 특징이다. 종래 야자수 열매는 위, 비장, 장을 튼튼히 하고, 과육은 체질이 허약한 것을 보충하여 강건하게 한다고 하고, 편충, 비대흡충증을 치료하며, 자양에 효과가 있는 것으로 알려져있다. 또한, 야자수 열매의 껍데기 기름은 옴(선), 매독을 치료하는데도 사용되었다.
상기 검인은 가시연꽃의 종자로, 가시연꽃의 종자 성숙기에 채취하여 종자만을 꺼내어 햇볕에 말린 것을 의미한다. 상기 가시연꽃(Euryale ferox Salisb.)은 늪이나 연못에 자라는 일년초로 가시가 있으며 수염뿌리가 많이 나온다. 종자가 발아해서 나오는 잎은 작으나 점차 큰 잎이 나오며 표면에 주름이 진다. 꽃은 7 내지 8월 가시가 돋는 긴 꽃자루가 자라서 끝에 1개 달린다. 열매는 액과로 둥글며 종자는 육질 종의에 싸인다.
상기 무루자는 소철(Cycas revoluta Thunb.)의 익은 종자 말린 것을 의미한다. 상기 소철은 공원이나 정원에 조경수로 식재하는 상록성 떨기나무 또는 작은큰키나무로 높이 1 내지 4m, 지름 20 내지 30cm이다. 줄기 껍질은 잎자국으로 둘러싸여 자란다. 잎은 줄기 끝에 모여 달리고 1회 깃꼴겹잎이며 작은잎은 선형이며 길이 8 내지 20cm, 폭 5 내지 8cm, 가장자리가 밋밋하며 약간 뒤로 말려 있다. 꽃은 6 내지 8월에 암수딴그루에 핀다. 수꽃차례는 줄기 끝에 곧게 서고 원기둥 모양이며 길이 50 내지 60cm, 폭 10 내지 13cm, 많은 비늘조각으로 되며 비늘조각 안에 수술대가 없는 꽃밥이 붙어 있다. 암꽃차례는 원줄기 끝에 둥글게 모여 달리며, 자루에 2 내지 8개의 배주가 어긋나서 붙고 위쪽에 황갈색 털이 빽빽하게 나 있다. 열매는 구과이며, 10월에 익는데 씨는 길이 4cm쯤이고, 붉은색이다. 우리나라 남부지방, 제주도 등에서 식재하며, 일본, 중국, 타이완 등 자생지에서는 해안가에 분포한다. 관상용으로 식재하고, 열매를 식용, 약용한다.
상기 항산화 및 DNA 손상 보호용 조성물로 효과를 높이기 위해, 은행 외종피 추출물에 야자수 열매 추출물, 검인 추출물 및 무루자 추출물을 추가로 포함시켜, 복합 추출물로 구성함에 따라, 은행 외종피 추출물만을 단독으로 사용하는 경우에 비해, 항산화 및 DNA 손상 보호 효과를 동등 또는 상승시키고, 더 나아가 기호성 높은 조성물로의 제공을 가능하게 한다.
바람직하게, 상기 항산화 및 DNA 손상 보호용 조성물은 은행 외종피 추출물 100 중량부에 대해, 야자수 열매 추출물 10 내지 20 중량부, 검인 추출물 10 내지 20 중량부 및 무루자 추출물 10 내지 20 중량부로 포함한다. 상기와 같은 범위 내에서 복합 추출물로 사용하는 경우, 각 성분간의 혼합 작용에 의해 항산화 및 DNA 손상 보호 효과가 더욱 상승하게 된다.
상기 야자수 열매 추출물, 검인 추출물 및 무루자 추출물은 앞서 은행 외종피 추출물과 동일한 추출 방법을 이용하여 제조될 수 있다.
상기와 같이 본 발명의 은행(Ginko biloba) 추출물은 항산화 효과 및 DNA 보호 활성을 가질 뿐만 아니라 안정성도 확인되었으므로, 항산화제 또는 DNA 손상 보호용 물질로서 하기와 같은 다양한 형태로 사용될 수 있다.
본 발명의 은행(Ginko biloba) 추출물은 이를 유효성분으로 함유하는 약학적 조성물의 형태로 사용될 수 있다. 본 발명의 약학적 조성물은 산화적 스트레스 관련 질환 또는 DNA 손상 관련 질환의 예방 및 치료용 조성물이 될 수 있다.
상기 산화적 스트레스 관련 질환은, 예를 들어 알츠하이머, 파킨슨병, 근위축증 등의 신경퇴행성 질환, 심근경색이나 뇌경색 등의 허혈성 질환, 색소성 망막증, 백내장, 황반변성 등의 안구 질환, 관절염, 혈관염, 사구체신염, 홍반성 루푸스 등의 염증 질환을 포함하는 세포의 산화적 손상과 관련된 질환, 고지혈증 등의 지질대 사질환, 동맥경화증, 심부전증, 고혈압성 심장질환, 부정맥 심근경색증, 협심증 등의 심장질환뿐만 아니라 주름살, 기미, 주근깨 등의 피부노화, 면역질환, 암 등을 포함하나, 이에 제한되는 것은 아니다.
또한 상기 DNA 손상 관련 질환은 상기 산화적 스트레스에 의해서도 유발될 수 있으나, 그 외 병원성 미생물, 화학물질 또는 방사선 조사 등에 의해 발생할 수 있는 질환을 포함한다.
여기에서, '유효성분으로서 함유'한다는 것은, 산화적 스트레스 관련 질환 또는 DNA 손상 관련 질환의 예방 및 치료 효과를 나타낼 수 있을 정도로 함유한다는 의미로서, 구체적인 함량이 특별히 제한되는 것은 아니며, 섭취의 빈도나 섭취량, 음식물의 종류, 섭취하는 사람의 체중, 성별 등에 따라 적절히 조절할 수 있다. 예를 들어, 직접 경구 섭취하는 경우에는 비교적 저농도가 좋고, 음식물의 원료 등에 사용하는 경우는 고농도가 바람직할 수 있다.
본 발명의 은행(Ginko biloba) 추출물을 유효성분으로 포함하는 약학적 조성물은 임상적으로 경구 또는 비경구로 투여할 수 있다. 경구 투여용 제형으로는, 예를 들면, 정제, 트로키제(troches), 로진지(lozenge), 수용성 또는 유성현탁액, 조 제분말 또는 과립, 에멀젼, 하드 또는 소프트 캅셀, 시럽 또는 엘릭실제(elixirs)로 제제화될 수 있다. 또한, 정제 및 캡슐 등의 제형으로 제제화하기 위해 락토오스, 사카로오스, 솔비톨, 만니톨, 전분, 아밀로펙틴, 셀룰로오스 또는 젤라틴과 같은 결합제; 디칼슘 포스페이트와 같은 부형제; 옥수수 전분 또는 고구마 전분과 같은 붕괴제; 스테아린산 마그네슘, 스테아린산 칼슘, 스테아릴푸마르산 나트륨 또는 폴리에틸렌글리콜 왁스와 같은 윤활유가 함유될 수 있다. 캡슐제형의 경우는 상기에서 언급한 물질 이외에도 지방유와 같은 액체 담체를 함유할 수 있다. 또한, 본 발명의 약학적 조성물은 비경구로 투여할 수 있으며, 비경구 투여는 피부 외용제, 주사제 등의 제형을 의미한다.
본 발명의 약학적 조성물은 약제학적으로 허용 가능한 첨가제를 더 포함할 수 있으며, 이때 약제학적으로 허용 가능한 첨가제로는 전분, 젤라틴화 전분, 미결정셀룰로오스, 유당, 포비돈, 콜로이달실리콘디옥사이드, 인산수 소칼슘, 락토스, 만니톨, 엿, 아라비아고무, 전호화전분, 옥수수전분, 분말셀룰로오스, 히드록시프로필셀룰로오스, 오파드라이, 전분글리콜산나트륨, 카르나우바납, 합성규산알루미늄, 스테아린산, 스테아린산마그네슘, 스테아린산 알루미늄, 스테아린산칼슘, 백당, 덱스트로스, 소르비톨 및 탈크 등이 사용될 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물에 있어서 은행(Ginko biloba) 추출물의 유효투입량은 환자의 나이, 신체적 조건, 몸무게 등에 의해 다양 화될 수 있지만, 일반적으로 성인에게 1일에 10 내지 500 ㎎, 바람직하게는 50 내지 300 ㎎의 양이 투여되도록 하는 것이 바람직하며, 의사 또는 약사의 판단에 따라 일정시간 간격으로 1일 수회, 바람직하게는 1회 내지는 6회 분 할 투여할 수 있다.
본 발명의 은행(Ginko biloba) 추출물은 식품 조성물로 이용될 수 있다. 본 발명에 따른 식품 조성물은 본 발명의 은행(Ginko biloba) 추출물을 함유하기 때문에 산화적 스트레스 관련 질환 또는 DNA 손상 관련 질환의 예방 및 치료 효과를 기대 할 수 있다. 본 발명의 기능성 식품 조성물은 상기 효과를 배가시키기 위하여 다른 생리적 활성 성분, 즉 안전성이 검증된 천연의 항산화 물질 등을 추가적으로 배합하여 제조할 수 있다.
본 발명의 식품 조성물은, 이에 제한되는 것은 아니나, 예를 들어 정제, 과립, 분말, 캅셀, 액상의 용액 및 환으로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나의 제형으로 제조될 수 있다. 본 발명의 식품 조성물은 그 형태에 있어서 특별히 제한은 없으며, 예를 들어 통상의 형태 이외에, 유동식품, 경장영양식품, 건강식품, 유소아 식품 등의 형태로 제조될 수 있다. 계속적 섭취의 측면에서는 쌀밥이나 각종 조미료, 조합 유지나 마가린, 쇼트닝, 마요네즈, 드레싱 등의 유지 가공품이 가능하다.
또한, 형태는 고체 형상, 반고체 형상, 겔 형상, 액체 형상, 분말 형상 등 당업계에서 통상 사용되는 어떠한 형태도 이용가능하다. 또한, 본 발명의 식품 조성물은 과자, 가공식품, 조합 유지, 유제품, 음료, 비타민 복합제, 건강 기능성 식품류 등의 형태로 상품화할 수 있다.
추가로, 본 발명의 식품 조성물은 본 발명의 당단백질 이외에 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제 및 중 진제, 펙트산, 알긴산, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있으며, 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다.
본 발명의 은행(Ginko biloba) 추출물은 화장료 조성물로 이용될 수 있다. 본 발명의 은행 열매 종피(Ginko biloba) 추출물을 함유한 화장료 조성물은 산화적 스트레스로 인한 증상, 예컨대 주름을 포함한 피부 노화 등을 억제 및 개선하는 효과를 나타낼 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물은 본 발명의 은행(Ginko biloba) 추출물에 추가적으로 피부학적으로 허용된 담체를 혼합하여 제조될 수 있다.
상기 피부학적으로 허용된 담체는 정제수, 오일, 왁스, 지방산, 지방산 알코올, 지방산 에스테르, 계면활 성제, 흡습제, 증점제, 항산화제, 점도 안정화제, 킬레이팅제, 완충제, 방부제, 저급 알코올 등이 포함될 수 있지만, 이에 한정되는 것은 아니며, 그 종류와 농도는 다양하고, 당업자가 본 발명의 범위 내에서 변경할 수 있는 부분을 포함한다.
또한, 필요에 따라 기능적 물질, 예컨대, 미백제, 보습제, 항염증제, 항박테리아제, 항진 균제, 비타민, 자외선 차단제, 항생제, 여드름 방지제, 향수, 염료가 포함될 수도 있으며, 이들은 화장품 분야에서 통상적으로 사용되는 양으로 본 발명에 따른 화장용 조성물에 포함될 수 있다. 본 발명의 화장료는 그 기능적 효과를 증대시키기 위하여 본 발명의 은행(Ginko biloba seedcoat) 추출물에 추가로 동일 또는 유사한 기능을 나타내는 항산화 활성 성분을 1종 이상 함유할 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물로부터 제조되는 화장품은 일반적인 유화 제형 및 가용화 제형의 형태로 제조할 수 있다. 유화 제형의 화장품으로는 영양화장수, 크림, 에센스 등이 있으며, 가용화 제형의 화장품으로는 유연화장수가 있다.
상기 화장품은 본 발명의 은행(Ginko biloba) 추출물 이외에도 피부학적으로 허용된 매질 또는 기제를 함유함으로써 당업계에서 통상적으로 사용되는 국소 적용 또는 전신 적용할 수 있는 보조제 형태로 제조될 수도 있다.
적합한 화장품의 제형으로는 예를 들면, 용액, 겔, 고체 또는 반죽 무수 생성물, 수상에 유상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 현탁액, 마이크로에멀젼, 마이크로캡슐, 미세과립구 또는 이온형(리포좀), 비이온형의 소낭 분산제의 형태, 크림, 스킨, 로션, 파우더, 연고, 스프레이 또는 콘실 스틱(conceal stick)의 형태로 제공될 수 있다. 또한, 포말 (foam)의 형태 또는 압축된 추진제를 더 함유한 에어로졸 조성물의 형태로도 제조될 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물을 첨가할 수 있는 제품으로는, 예를 들어, 수렴화장수, 유연화장수, 영양화장수, 각종 크림, 에센스, 팩, 파운데이션 등과 같은 화장품류와 클렌징, 세안제, 비누, 트리트먼트 또는 미용액 등이 있다. 구체적인 제형으로서는 스킨로션, 스킨 소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스처 로션, 영양로션, 맛사 지크림, 영양크림, 모이스처 크림, 핸드크림, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 샴푸, 클렌징 폼, 클렌징로션, 클 렌징크림, 바디로션, 바디클렌저, 유액, 프레스파우더, 루스파우더 또는 아이섀도 등의 제형을 포함한다.
본 발명의 은행 추출물을 유효 성분으로 포함하는 항산화 및 DNA 손상 보호용 조성물에 의하면, 항산화 효과 및 자외선에 의한 피부 DNA 손상을 예방할 수 있다.
또한, 피부 노화 예방 및 개선, 피부 주름 개선, 피부 염증 개선에 우수한 효과를 나타낼 수 있는 은행 외종피 추출물을 유효 성분으로 포함하는 피부 외용제를 제공할 수 있다.
도 1은 본 발명의 일 실시예에 따른 항산화 및 DNA 손상 보호용 조성물의 과산화수소 소거능에 대한 실험 결과이다.
도 2는 본 발명의 일 실시예에 따른 항산화 및 DNA 손상 보호용 조성물의 DPPH 자유라디칼 소거능에 대한 실험 결과이다.
도 3은 본 발명의 일 실시예에 따른 항산화 및 DNA 손상 보호용 조성물의 과산화수소 스트레스 하에서의 DNA 손상 보호 효과에 대한 실험 결과이다.
도 4는 본 발명의 일 실시예에 따른 항산화 및 DNA 손상 보호용 조성물의 과산화수소 스트레스 하에서의 HaCa T 세포의 보호 효과에 대한 실험 결과이다.
도 5는 본 발명의 일 실시예에 따른 항산화 및 DNA 손상 보호용 조성물의 과산화수소 스트레스 하에서의 HaCa T 세포의 보호 효과에 대한 게놈 DNA 단편화(genomic DNA fragmentation)에 대한 실험 결과이다.
도 6은 본 발명의 일 실시예에 따른 항산화 및 DNA 손상 보호용 조성물의 과산화수소 스트레스 하에서의 HaCa T 세포의 보호 효과에 대한 게놈 DNA 단편화(genomic DNA fragmentation)에 대한 실험 결과이다.
도 7은 본 발명의 일 실시예에 따른 항산화 및 DNA 손상 보호용 조성물의 DPPH 자유라디칼 소거능에 대한 실험 결과이다.
이하, 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있도록 본 발명의 실시예에 대하여 상세히 설명한다. 그러나 본 발명은 여러 가지 상이한 형태로 구현될 수 있으며 여기에서 설명하는 실시예에 한정되지 않는다.
[제조예 1: 은행 외종피 추출물의 제조]
1. 은행 외종피 물 추출물(GSWE)의 제조
은행 외종피을 세척하고 건조한 뒤 이를 분쇄하였다. 상기 분쇄물을 물에 혼합하고 이를 2시간 동안 98 내지 100℃를 유지하고, 이를 냉각시킨 뒤 와트만 여과지로 여과하여 그 여액을 수득하였다.
2. 은행 외종피 메탄올 추출물(GSME)의 제조
물 대신 메탄올을 사용한 것을 제외하고, 은행 외종피 물 추출물의 제조 방법과 동일한 방법으로 은행 외종피 메탄올 추출물을 제조하였다.
[실험예 1: 항산화 및 DNA 손상 보호에 대한 실험]
세포
HaCa T 세포를 스트렙토 마이신 및 페니실린이 첨가된 10 % FCS-DMEM 배지에서 유지하였다.
과산화수소 소거능
과산화수소 용액 (40 mM)을 인산 완충액 (pH 7.4)에서 제조하였다. GSME 및 GSWE를 과산화수소 용액 (0.6 mL, 40 mM)에 첨가하였다. 과산화수소가 없는 인산염 완충액을 함유하는 블랭크 용액에 대해 230 nm에서 과산화수소의 흡광도를 10 분 후에 측정하였다. 샘플 및 표준 화합물 모두의 과산화수소 소거능의 백분율을 계산하였다:
[수학식 1]
소거된 [H2O2] = [(AC - AS)/AC] × 100
여기서 AC는 대조군의 흡광도이고 AS는 시료 또는 표준 시료의 존재시 흡광도이다.
도 1에 나타낸 바와 같이, GSWE는 함량을 점차적으로 증가하더라도, 과산화수소 소거능이 크게 차이 나지 않음을 확인할 수 있다. 반면, GSME는 50mg/ml 및 100mg/ml 사용하는 경우, 즉 함량이 증가될수록 과산화수소 소거능이 향상되는 것을 확인하였다.
DPPH 자유 라디칼 소거능 평가
10 ㎎ DPPH를 100 ㎖ 메탄올(MeOH)에 용해시켜 100 ㎍/㎖가 되도록 하였다. 추출물의 저장 용액은 25 mg을 50 ml의 MeOH에 용해시킴으로써 제조하였다.
1 ml DPPH를 각각의 용액에 첨가하고 용액을 어둡게 유지하고 정확한 30분 동안 정치시켰다. 각 용액의 UV 흡수는 517 nm에서 기록하였다. 반응을 37 ℃에서 30 분간 진행시키고 517 nm에서 마이크로 플레이트 판독기로 흡광도를 모니터링 하였다. % 라디칼 소거 활성(% RSA)은 DMSO 함유 대조군과 비교하여 결정하였다. 라디칼 소거 활성(%)으로서의 DPPH에 의한 자유 라디칼의 소거는 다음과 같이 계산하였다:
[수학식 2]
% RSA = (대조 흡광도 - 흡광도)X100/대조 흡광도
결과는 도 2와 같다. 도 2에 따르면, GSWE와 GSME의 DPPH 자유 라디칼 소거능은 추출 용매를 물을 사용하는 경우보다 메탄올을 사용하는 경우 더욱 우수한 것으로 확인되었다.
특히, GSME를 25 mg/ml, 50mg/ml 및 100mg/ml 사용하는 경우, 즉 함량이 증가될수록 DPPH 자유 라디칼 소거능이 향상되는 것을 확인하였다. 상기 실험 결과를 통해, GSME의 경우, DPPH 라디칼 소거능이 우수하여 항산화에 의한 노화 억제 작용이 우수하다고 할 것이다.
H 2 O 2 를 사용한 DNA 손상에 대한 회복 결과 실험
대조군에서는 H2O2를, GBSO 항산화 물질에서는 시험관을 사용하여 플라스미드 DNA (pcDNA3.1)와 게놈 DNA 손상을 유도하였다. 플라스미드 DNA를 1 mM H2O2를 포함하는 E-튜브에 넣고 4 ℃에서 1 시간 동안 배양하였다. 플라스미드 DNA를 pcDNA 3.1로 DNA 손상에 사용하고 1 mM H2O2 처리 HaCaT 세포로부터 분리 한 게놈 DNA 손상을 아가로즈겔에 로딩 하였다.
실험 결과는 도 3과 같다. 도 3에 따르면, 각 레인은 1 mM H2O2와 함께 24 시간 동안 배양한 대조 pcDNA 3.1 플라스미드 DNA (290 ng)를 함유하고 있다. M은 크기 표식을 나타내는 것이다.
무처리 군과 비교하여, GSME를 0.05 mg/ml 및 0.1 mg/ml 처리한 군에서 동일한 pcDNA 3.1 플라스미드 DNA를 확인할 수 있다. 실험 결과에 따르면, H202에 의해 DNA가 손상되는 것(GSME 0 mg/ml 처리군)을 확인할 수 있고, GSME를 처리한 군에서는 H2O2에 의한 DNA 손상을 방지할 수 있는 것을 확인하였다.
HaCa T 세포 생존능 분석
HaCa T 세포 하에서의 H2O2 및 GSME의 세포 독성은 세포 역가 96 AQueous One Solution 세포 증식 검정 (MTS)(Promega, USA)에 의해 결정되었다. 간략하게, 세포 (5 × 105)를 96-웰 플레이트에서 H2O2 및 GSME의 연속으로 희석하여 첨가하였다. 24 시간 후, 5 % MTS를 96-웰 플레이트에 첨가하고, 2시간 동안 배양하였다. 이후, 490nm의 파장에서 마이크로 플레이트 판독기(Bio-Rad, USA)를 이용하여 판독하였다.
도 4에 따르면, H2O2의 고농도 처리 군에서 HaCa T 세포의 생존능이 떨어지는 것을 확인할 수 있다.
가장 생존능이 떨어지는 1,000μM의 H202 처리 군에 대해 GSME를 처리한 실험 결과, H2O2에 의해 유도된 HaCa T 세포의 사멸로부터 GSME가 HaCa T 세포를 보호함으로써, 세포 생존능이 증가함을 확인하였다.
도 5는 과산화수소 스트레스 하에서의 HaCa T 세포의 보호 효과에 대한 게놈 DNA 단편화(genomic DNA fragmentation)에 대한 실험 결과를 나타낸 것으로, 24시간 배양 후 세포 상태를 확인한 결과, 무처리 군과 1mM의 H2O2+100㎍/ml의 GSME 처리 군에서 동등한 정도의 세포가 역상 현미경 하에서 관찰된 것을 확인하였다. 반면, 1mM의 H2O2만 처리한 군에서는 적은 수의 세포만 관찰되는 것을 확인하였다.
또한 도 5에 나타낸 바와 같이, 게놈 DNA는 GSME를 무처리하고, 1mM의 H2O2만 처리한 군에서 분리된 것을 확인하였다.
[실험예 2: 복합 추출물의 항산화 및 DNA 손상 보호에 대한 실험]
1. 천연 추출물의 제조
야자수 열매 추출물(ACME), 검인 추출물(EFME) 및 무루자 추출물(CRME)은 GSME의 제조 방법과 동일한 방법을 이용하여 제조하였다.
은행 외종피 부분을 수득하고 남은 내종피를 GSME와 동일한 제조 방법을 이용하여 은행 내종피 추출물(GBME)을 제조하였다.
2. 복합 추출물의 제조
상기 GSME, ACME, EFME 및 CBME를 하기 표 1과 같은 함량 범위로 혼합하여 복합 추출물을 제조하였다.
GB1 GB2 GB3 GB4 GB5
GSME 100 100 100 100 100
ACME 5 10 15 20 25
EFME 5 10 15 20 25
CRME 5 10 15 20 25
(단위 중량부)
3. DPPH 자유 라디칼 소거능 평가
GBME, GB1 내지 GB5에 대한 DPPH 자유 라디칼 소거능을 평가하였다.
앞서 DPPH 자유 라디칼 소거능 평가와 동일한 방법에 의해 실험을 진행하였다.
100mg/ml를 동일하게 처리한 이후, DPPH 자유 라디칼 소거능을 평가한 결과는 도 7과 같다.
도 7에 따르면, GBME는 DPPH 자유 라디칼 소거 효과가 거의 미비한 것으로 확인되었으며, 복합 추출물로 GB2 내지 GB4에서 GSME와 동등 또는 우수한 DPPH 자류 라디칼 소거능을 나타내는 것을 확인하였다. 상기 실험 결과를 토대로, DPPH 라디칼 소거능이 우수하여 항산화에 의한 노화 억제 작용이 우수하다고 할 것이다.
4. 피부 주름 개선 효과
건강한 40세 이상의 여성 중 문진과 이학적 검사상 눈가에 주름이 있는 사람을 선정하였다. 눈가 주름부위를 시험부위로 결정하였다.
GSME, GBME, GB1 내지 GB5을 피부 외용제로 제조하고, 이를 모집된 실험자들에게 무작위로 배정한 후 시험 부위인 눈가 주름 부위에 적당량을 ??래 잘 스며들도록 1일 2회, 6주 동안 도포하도록 하였다.
각 실험군 당 실험자는 4명씩 배정하여, 총 28명을 대상으로 실험을 진행하였으며, 얼굴 눈가 주름 시험부위에 대한 모사판(Replica)을 제작하고 비져미터(Visiometer, SkinVisiometer SV 600, Courage & Khazaka, 독일)를 이용하여 피부주름 모사판(Replica)에 대한 화상분석(Image Analysis)을 시행하였다. 주름분석은 모사판 주름에 일정한 각도의 빛을 조사하여 발생하는 그림자의 명암에 의해 주름의 깊이 정도를 파악함으로써 피부주름 깊이의 변화를 분석하였다.
주름의 깊이는 작아질수록 피부주름이 개선된 것을 의미한다.
GB1 GB2 GB3 GB4 GB5 GSME GBME
0주 0.25±0.12 0.26±0.10 0.28±0.14 0.26±0.12 0.27±0.11 0.26±0.12 0.25±0.11
6주 0.25±0.11 0.25±0.12 0.25±0.11 0.24±0.10 0.27±0.14 0.24±0.11 0.26±0.12
(단위 mm, 평균±표준편차를 의미함)
상기 실험 결과에 따르면, GSME, GB2 내지 GB4에서 주름 개선에 우수한 효과를 나타냄을 확인할 수 있다.
5. 관능 시험
상기 피부 주름 개선 효과 실험과 더불어, 눈가 주름 부분에 피부 외용제를 바르고, 발림성 및 흡수성에 대한 관능 시험을 진행하였다.
평가 점수는 1 내지 5점으로 평가를 요청하였으며, 점수가 높을수록 우수한 평가를 의미한다고 할 것이다.
GB1 GB2 GB3 GB4 GB5 GBME GSME
발림성 2 3 4 4 2 1 3
흡수성 2 3 4 4 3 1 3
상기 관능 평가에 따르면, GSME, GB2 내지 GB4에서 발림성 및 흡수성에서 우수한 평가를 나타냄을 확인하였다. 상기 관능 평가에 의하면, 피부 외용제로 제공 시, GSME, GB2 내지 GB4의 경우, 기호도가 높은 피부 외용제로의 제공이 가능함을 확인할 수 있다고 할 것이다.
이상에서 본 발명의 바람직한 실시예에 대하여 상세하게 설명하였지만 본 발명의 권리범위는 이에 한정되는 것은 아니고 다음의 청구범위에서 정의하고 있는 본 발명의 기본 개념을 이용한 당업자의 여러 변형 및 개량 형태 또한 본 발명의 권리범위에 속하는 것이다.

Claims (8)

  1. 은행(Ginko biloba) 추출물을 유효 성분으로 포함하고,
    상기 은행 추출물은 은행 외종피(Ginko biloba outer seedcoat) 추출물이며,
    야자수 열매(Cocos nucifera L) 추출물, 검인 추출물 및 무루자 추출물을 더 포함하고,
    상기 은행 외종피 추출물 100 중량부에 대하여, 야자수 열매 추출물 10 내지 20 중량부, 검인 추출물 10 내지 20 중량부 및 무루자 추출물 10 내지 20 중량부를 포함하는
    항산화 및 피부 주름 개선용 식품 조성물.
  2. 삭제
  3. 제1항에 있어서,
    상기 추출물은 물, 탄소수 1 내지 6의 알코올 및 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택된 추출 용매를 이용하여 추출된
    항산화 및 피부 주름 개선용 식품 조성물.
  4. 삭제
  5. 제1항에 있어서,
    상기 조성물은 DPPH 자유 라디칼 소거 활성을 통해,
    우수한 피부 노화 예방 및 개선, 피부 주름 개선의 효과를 나타낼 수 있는
    항산화 및 피부 주름 개선용 식품 조성물.
  6. 삭제
  7. 삭제
  8. 삭제
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