KR101423297B1 - 진세노사이드 Rg3 고농도 함유 돌외 발효 조성물 및 이의 제조방법 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 돌외(Gynostemmae Folium ) 추출물 상에 Monascus ruber 균을 발효시켜 진세노사이드 Rg3의 함량을 증가시키는 방법 및 프로토파낙사디올(protopanaxadiol)의 함량을 증가시키는 방법에 관한 것이다. 이를 통하여, 생리활성 물질인 인삼 사포게닌인 진세노사이드 Rg3 와 프로토파낙사디올을 고농도로 함유하는 돌외 발효 조성물을 제공할 수 있다.
Description
본 발명은 진세노사이드 Rg3 고농도 함유 돌외 발효 조성물 및 이의 제조방법에 관한 것이다.
돌외 (칠엽담 七葉膽 Gynostemma pentaphyllum (Thunberg) Makino)는 산이나 숲속에서 자라는 박과의 덩굴성 여러해살이 식물이다. 줄기는 덩굴수염으로 다른 식물이나 물체에 감아 올라간다. 잎은 어긋나고 새 발바닥모양의 또는 손 바닥 모양의 겹잎이다. 작은 잎은 3~7개이며 난상 피침형이고 끝이 날카롭고 잎아래는 날카로우며 거친 치아 모양의 톱니와 짧은 털이 있다. 꽃은 8~9월에 담황록색으로 피며 잎겨드랑이에서 원추화서 또는 총상 화서로 달리고 열매는 장과이며 구형이고 검은 녹색으로 익으며 크기는 지름 6~8밀리이다. 칠엽담의 성미는 맛은 쓰고 성질은 차다. 효능은 소염(消炎), 해독(解毒), 거담(祛痰), 지해(止咳)의 효능이 있고, 소염작용으로 만성기관지염에 진해, 거담 효과가 있다. 성분은 인삼 사포닌과 화학구조가 유사한 dammarane triterpenoid인 Gypenoside를 함유하고 있다. 만성기관지염에 1회에 3그램을 물을 넣고 달여서 1일 3회 복용하고 10일 후에 일정한 효과를 볼 수 있다.
칠엽담의 함유 성분인 gypenoside III는 인삼사포닌인 진세노사이드 Rb1과 화학구조가 같은 것으로 생물전환 발효기술에 의해서 홍삼 특유 성분이며 기능성 인삼사포닌인 진세노사이드 Rg3 로 생물전환이 가능하다. 진세노사이드 Rg3 는 홍삼을 쪄서 가공할 때 생기는 활성 사포닌으로 항암, 항당뇨, 혈압강하 등 생리활성이 보고되어서 기능성 소재로서 기대가 모아지고 있는 성분이다.
진세노사이드 Rg3를 다량 함유한 인삼제제를 만들기 위해 물리적인 반응인 고온처리 혹은 생화학적 반응인 효소 처리하는 방법 등을 사용하고 있다. 고온 처리하는 방법으로 예를 들면 인삼을 고온에서 가열처리함으로써 약효가 증강된 가공인삼에 관한 것으로 인삼을 120 ~ 180 의 고온에서 0.5 ~ 20시간동안 가열처리하여 진세노사이드 (Rg3+Rg5)/(Rc+Rd+Rb1+Rb2)의 비율이 1 이상이 되도록 약효성분을 증가시킨 가공인삼제품 및 이 가공식품이 함유하는 음료조성물에 관한 특허(대한민국특허 제192678호)와 사포닌 글리코사이드 분해효소를 이용하여 인삼 사포닌의 당기를 가수분해하여 희소한 항암사포닌(진세노사이드 Rh1, Rh2)을 제조하는 방법에 관한 특허(대한민국특허 제329259호)등이 있으며 현재 시중에 제품으로는 선삼 그리고 신삼으로 시판되고 있다.
이와 같은 연구는 인삼을 대상으로 가공한 것으로 본 발명의 대상인 돌외를 사용하지 않았고, 이에 따라 본 발명자는 돌외를 이용하여 진세노사이드 Rg3 고농도 함유 조성물을 발명하였다.
본 발명은 돌외(Gynostemmae Folium ) 추출물 상에 Monascus ruber 균을 발효시켜 진세노사이드 Rg3의 함량을 증가시키는 방법을 제공하고, 돌외(Gynostemmae Folium) 추출물 상에 Monascus ruber 균을 발효시켜 프로토파낙사디올(protopanaxadiol)의 함량을 증가시키는 방법을 제공하는 것을 목적으로 한다.
또한, 본 발명은 돌외(Gynostemmae Folium ) 추출물 상에 Monascus ruber 균을 발효시켜 진세노사이드 Rg3 및 프로토파낙사디올(protopanaxadiol)의 함량을 증가시킨 발효 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.
상기의 방법으로 제조된 돌외 발효 조성물은 유효성분인 진세노사이드 Rg3 를 0.1~1.3 중량%, 프로토파낙사디올(protopanaxadiol)이 0.1 ~ 0.6 중량%를 함유함을 확인하였으며, 이로써 항암, 항당뇨, 고지혈증 개선, 발기부전 개선, 피로회복, 고혈압 그리고 뇌기능 개선 용도 등에 유용하게 사용할 수 있다.
본 발명에서 돌외라 함은 Gynostemma pentaphyllum (Thunberg) Makino)을 비롯한 Gynostemma 속 식물의 지상 또는 지하부 생약 및 이들을 가공 처리한 경우도 포함하는 것이며, 이는 돌외와 관련된 반복적인 실험으로부터 확인된 사실에 기초한 것이다.
따라서, 본 발명은 상기와 같은 방법에 의해 제조된 돌외 발효 조성물은 진세노사이드 Rg3 를 0.1 ~ 1.3 중량%, 프로토파낙사디올(protopanaxadiol)이 0.1 ~ 0.6 중량%를 함유하여 훨씬 우수한 약리학적 효과를 나타내는 돌외 발효 조성물을 포함한다.
본 발명의 돌외 발효 조성물를 통상의 분말화 공정을 거쳐 분말화하거나 환 또는 캡슐형태로 제조하여 보존기간을 연장시킬 수 있으며, 음료 형태의 액상 돌외 발효 조성물의 제조도 가능하다.
이상에서 상술한 바와 같이, 본 발명은 생리활성 물질인 인삼 사포게닌인 진세노사이드 Rg3 와 프로토파낙사디올을 고농도로 함유하는 돌외 발효 조성물을 간단하게 제조할 수 있다.
도 1은 돌외 발효물을 HPLC로 분석하여 진세노사이드를 검출한 것이다.
이하, 본 발명은 다음 실시예에 의거하여 더욱 상세히 설명하겠는바, 본 발명이 이에 한정되는 것은 아니다.
실시예
1.
돌외
추출 건조물의
Monascus
Ruber
균주에 의한 발효
돌외
추출 건조물의 제조
건조한 돌외를 세말로 하여 시료 100g 씩에 50% 및 95% 에틸 알콜과 증류수로 수욕상에서 2시간씩 2회씩 각각 추출하여 여과 후 여액을 합하여 감압 농축하여 추출 건조물을 얻었다.
제조예
1
상기 돌외 추출 건조물 2g, 설탕 20g, 증류수 100ml를 삼각플라스크에 담아 Auto Clave에서 멸균시키고, Clean bench에서 방냉한 후, Monascus Ruber 균주을 접종하여 25에서 2일 배양하였다.
제조예
2
제조예 1과 동일하게 발효를 진행하되, 25℃에서 4일 배양하였다.
제조예
3
제조예 1과 동일하게 발효를 진행하되, 25℃에서 6일 배양하였다.
제조예
4
제조예 1과 동일하게 발효를 진행하되, 25℃에서 8일 배양하였다.
제조예
5
제조예 1과 동일하게 발효를 진행하되, 25℃에서 10일 배양하였다.
제조예
6
제조예 1과 동일하게 발효를 진행하되, 25℃에서 12일 배양하였다.
비교예
1
건조한 돌외를 세말로 하여 시료 100g 에 95% 에틸 알콜로 수욕상에서 2시간씩 2회 추출하여 여과 후 여액을 합하여 감압 농축하여 추출 건조물을 얻었다.
실시예
2.
발효물의
고용량
Rg3
함량의 확인
HPLC
법을 통한 인삼
사포게닌
성분 분석
실험방법
배양이 끝난 돌외 발효물을 여과하고 농축 한 후, 에테르 50ml로 1시간 3회 처리 하여 지용성물질을 제거한 후, 수포화부탄올 100ml을 넣고 1시간 초음파 처리를 한다. 얻은 부탄올층만 모아 감압농축을 하여 조사포닌을 수득한 후, 이를 HPLC법에 의하여 정량하였으며, 그 결과를 다음 표 2에 나타내었다.
HPLC
분석조건
위에서 얻은 추출 건조물을 고 등의 조건을 응용하여 도 1에서 보는바와 같이 HPLC를 실시하고, 상법에 따라 표품과 직접 비교하여 인삼사포닌의 함량 및 조성을 각 시료당 3회 반복 실험하여 결과의 재현성을 확인하여 분석하였다. 표품은 Chromadex (U.S.A.)로부터 구입한 순도 99% 이상의 진세노사이드를 사용하였다.
사용한 HPLC 장치는 Waters 1525 binary HPLC system (Waters, 미국)이며, 컬럼은 Gemini 5μ C18 110A(Phenomenex, 4.6×250mm, 미국)을 사용하였다. 이동상은 acetonitrile(HPLC급, Sigma, 미국)과 HPLC용 증류수이며, acetonitrile의 비율을 17 %에서 30 %, 40 %, 60 % 그리고 80 %로 순차적으로 늘려주고 마지막으로 다시 17%로 조절하였다. 전개온도는 실온, 유속은 분당 1.0 ml, 크로마토그램은 uv/vis Waters 2487 Dual λ Absorbance Detector (Waters, U.S.A.) 검출기를 이용하여 203nm에서 검출하였다.
이동상 조건은 하기 표와 같았다:
Time | Flow | A% (ACN) | B% (Water) |
0 | 0.8 | 17.0 | 83.0 |
55 | 0.8 | 30 | 70 |
80 | 0.8 | 40 | 60 |
135 | 0.8 | 60 | 40 |
145 | 0.8 | 80 | 20 |
165 | 0.8 | 80 | 20 |
170 | 0.8 | 100 | 0 |
180 | 0.8 | 100 | 0 |
185 | 0.8 | 17.0 | 83.0 |
195 | 0.8 | 17.0 | 83.0 |
(%,w/w) | |||||||
진세노사이드 | Monascus ruber fermented Gynostemmae Folium | ||||||
비교예1 | 제조예1 | 제조예2 | 제조예3 | 제조예4 | 제조예5 | 제조예6 | |
Rb1 | 4.702 ±0.015 |
0.085 ±0.018 |
0.056 ±0.005 |
- | 0.045 ±0.006 |
0.036 ±0.018 |
0.055 ±0.008 |
Rb2 | 0.828 ±0.009 |
- | 0.068 ±0.001 |
0.066 ±0.042 |
- | - | - |
Rc | - | - | - | - | 0.053 ±0.006 |
0.058 ±0.031 |
0.076 ±0.005 |
Rd | 0.255 ±0.001 |
0.160 ±0.008 |
- | - | - | - | - |
Rg2 | - | - | - | - | - | - | - |
(20S)-Rg3 | - | 1.323 ±0.197 |
0.415 ±0.041 |
0.537 ±0.465 |
- | - | 0.090 ±0.017 |
(20R)-Rg3 | - | - | - | - | - | - | - |
Rg5 | - | - | 0.082 ±0.027 |
0.126 ±0.086 |
- | - | - |
Rh1 | - | - | - | - | - | - | - |
Rh2 | - | - | - | - | - | - | - |
Rh4 | - | - | - | - | - | - | - |
F4 | - | - | - | - | - | 0.016 ±0.009 |
0.019 ±0.000 |
Rk1 | - | - | - | - | 0.092 ±0.008 |
0.069 ±0.045 |
- |
ppd | - | 0.639 ±0.568 |
0.367 ±0.030 |
0.192 ±0.044 |
0.100 ±0.010 |
0.137 ±0.014 |
0.082 ±0.010 |
ppt | - | - | - | - | - | - | - |
comK | - | - | - | - | - | - | - |
총 진세노사이드 | 5.785 | 2.206 | 0.987 | 0.921 | 0.289 | 0.315 | 0.321 |
값은 평균±SD (n=3)임.
상기 표 2에 나타낸 바와 같이, Monascus ruber를 접종하여 25℃ 에서 2, 4, 6, 8, 10, 12일씩 액상 발효한 결과, 제조예 1에서와 같이 2일 발효시 1.3226%의 진세노사이드 Rg3, 0.6391%의 프로토파낙사디올을 함유한다는 것을 확인할 수 있었다.
지금까지 예시적인 실시 태양을 참조하여 본 발명을 기술하여 왔지만, 본 발명의 속하는 기술 분야의 당업자는 본 발명의 범주를 벗어나지 않고서도 다양한 변화를 실시할 수 있으며 그의 요소들을 등가물로 대체할 수 있음을 알 수 있을 것이다. 또한, 본 발명의 본질적인 범주를 벗어나지 않고서도 많은 변형을 실시하여 특정 상황 및 재료를 본 발명의 교시내용에 채용할 수 있다. 따라서, 본 발명이 본 발명을 실시하는데 계획된 최상의 양식으로서 개시된 특정 실시 태양으로 국한되는 것이 아니며, 본 발명이 첨부된 특허청구의 범위에 속하는 모든 실시 태양을 포함하는 것으로 해석되어야 한다.
Claims (9)
- 돌외(Gynostemmae Folium ) 추출물 상에 Monascus ruber 균을 발효시켜 진세노사이드 Rg3의 함량을 증가시키는 방법.
- 제 1항에 있어서,
발효는 25℃ ~ 50℃ 에서 수행됨을 특징으로 하는 방법. - 제 1항에 있어서,
발효는 2일 내지 6일 또는 12일간 수행됨을 특징으로 하는 방법. - 제 1항에 있어서,
돌외 추출물은 알콜 및 열수로 추출한 것을 특징으로 하는 방법. - 돌외(Gynostemmae Folium ) 추출물 상에 Monascus ruber 균을 발효시켜 프로토파낙사디올(protopanaxadiol)의 함량을 증가시키는 방법.
- 제 5항에 있어서,
발효는 25℃ ~ 50℃ 에서 수행됨을 특징으로 하는 방법. - 제 5항에 있어서,
발효는 2일 내지 12일간 수행됨을 특징으로 하는 방법. - 제 5항에 있어서,
돌외 추출물은 알콜 및 열수로 추출한 것을 특징으로 하는 방법. - 돌외(Gynostemmae Folium ) 추출물 상에 Monascus ruber 균을 발효시켜 진세노사이드 Rg3 및 프로토파낙사디올(protopanaxadiol)의 함량을 증가시킨 발효 조성물.
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Title |
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손나리. 돌외에서 Gypenoside V 분리,동정 및 Ginsenoside로의 전환. 경희대학교 대학원 석사학위논문. 2011년 2월 * |
손나리. 돌외에서 Gypenoside V 분리,동정 및 Ginsenoside로의 전환. 경희대학교 대학원 석사학위논문. 2011년 2월* |
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