KR101046524B1 - 바위솔,부처손,인동덩굴 및 청미래덩굴 혼합추출물을함유하는 항염 및 항산화용 화장료 조성물 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 바위솔(Orostachys Japonicus) 부처손(Selaginella Tamariscina) 인동덩굴(Lonicera Japonica Thunberg )및 청미래덩굴(Smilax China)의 혼합추출물을 함유하는 항염 및 항산화용 화장료 조성물을 제공한다. 본 발명의 화장료 조성물은 항염 및 항산화 효과를 갖는다.
바위솔, 부처손, 인동덩굴, 청미래덩굴, 항염, 항산화, 화장료

Description

바위솔,부처손,인동덩굴 및 청미래덩굴 혼합추출물을 함유하는 항염 및 항산화용 화장료 조성물{Cosmetic composition cpmprising mixture extracts of Orostachys japonicus, Selaginella tamariscina, Lonicera japonica thunberg and Smilax china for anti-inflammation and antioxidation}
본 발명은 항염 및 항산화용 화장료 조성물에 관한 것이다.
염증은 세균과 같은 외부 이물질의 침입과 상처로부터 인체를 보호하는 생리적인 반응이다. 염증 반응은 우리 몸에서의 항상성 유지를 위한 자극에 대한 생체의 방어 반응으로 lipopolysaccride(LPS리포폴리사카라이드)와 같은 외부 자극원과 arachidonic acid(아라키돈산)와 같은 내부 자극원들을 매개로 한다. 인체는 염증현상을 통하여 다양한 종류의 단백질 분해효소와 사이토카인(cytokine)등의 세포 생성물을 분비함으로써 치료 및 방어를 할 수 있게 한다.
그러나 이러한 염증작용이 과도하게 일어나면 단백질 분해 효소들에 의해 주변 세포 및 결합조직이 손상을 입고 결합 조직의 손상은 피부의 탄력을 감소시켜 주름의 원인이 될 뿐 아니라 나아가 세포의 재생 및 증식에도 나쁜 영향을 미치게 되어 빠른 피부노화를 초래하게 된다. 따라서 적절한 조건하에서는 염증은 초기 상태가 지난 후에는 정상기능을 되찾게 되지만 염증과정이 지속적 또는 만성적으로 계속되면 심각한 조직의 손상을 가져오게 된다.
한편, 활성산소 또는 자유라디칼은 진피의 결합조직인 콜라켄, 엘라스틴, 히알루론산 등을 파괴하여 피부의 일정 부위에 침하현상(주름)을 일으키며 세포막의 지질 부분을 산화시켜 세포의 파괴 현상을 일으켜 피부염, 여드름, 피부암 등의 질병을 유발한다. 또한 활성산소는 멜라닌 형성과정 중 자발적인 산화반응에 관여하여 기미, 주근깨 등의 원인 및 주름 생성의 원인이 되기도 한다.
따라서 최근 활성산소 또는 자유라디칼을 조절할 수 있는 물질인 항산화제에 대한 연구가 활발히 진행되어 효소계열의 예방적 항산화제인 SOD(superoxide dismutase), 카탈라아제(catalase), 글루타치온 퍼옥시다아제(glutathione peroxidase) 등과 천연항산화제인 토코페롤(tocopherol), 아스코르빈산(ascorbic acid), 카로테노이드(carotenoid), 글루타치온(glutathione) 및 합성항산화제인 BHA, BHT 등 많은 항산화제가 개발되어 있다. 그러나 이러한 약물들은 고가일 뿐만 아니라 배합시 안전성 및 안정성이 좋지 못하여 실질적인 효과를 얻기가 어려운 문제점이 있다.
따라서 이러한 자유라디칼 및 염증에 의한 피부 트러블의 개선을 위해서는 항염 및 항산화 효과가 우수하며, 부작용이 없고 비용이 저렴하며 안정성이 우수하여 사용이 용이한 화장료의 개발이 요구된다.
한편 바위솔(Orostachys japonicus.)은 돌나물과 식물로 산지의 양지바른 바위틈이나 전통가옥의 기와와 돌각담에 붙어서 서식하나, 지금은 찾아보기 어려운 실정이다. 요즘은 멸종 단계에 이르러 인위적으로 배양, 증식 시켜 약용으로 사용하고 있다. 예로부터 학질, 간염, 습진, 이질설사, 치질, 악성종기, 화상 등의 치료에 쓰였으며, 종기나 상처에 짓찧어 붙이면 고름을 빨아내는 효과가 큰 것으로 알려져 있다. 혈류량 촉진, 진통, 면역, 피부염, 모발 성장 촉진 및 피부가 갈라지는 피부염에도 효과가 있는 것으로 알려져 있다.
부처손(Selaginella tamariscina) 예로부터 여성들의 자궁출혈이나 생리불순, 생리통에 효험이 크고 치질, 장출혈, 탈항, 피오줌, 자궁냉증으로 불임을 고통 받는 여성 등에도 좋다고 알려져 있다.　 또한 만성 간염, 간경화증, 황달, 기침, 신장결석, 정신분열증, 갖가지 암, 기관지염, 폐렴, 편도선염에도 효험이 있으며 노인들이 힘이 없고 몸이 나른할 때 부처손을 달여 먹으면 기운이 난다고 한다.
인동덩굴(Lonicera japonica thunberg)은 　폐, 위경에 작용하며 　열을 내리고 해독하는 효능이 있어 　급성 열병으로 인한 발열, 열독으로 인하여 생긴 적리, 큰 종기, 종독, 간질, 급성 전염병, 갈증해소, 옴, 혈액보충, 장염, 세균성 이질, 홍역, 이하선염, 패혈증, 맹장염, 유행성 B형 뇌염, 유행성 뇌척수막염, 담도감염, 급성인후염, 매독에서 오는 가래톳, 골수염, 급성유선염, 유방암, 비인암, 중만기 암환자의 재감염, 인후부종류(咽喉部腫瘤), 농약중독, 폐렴, 젖먹이 어린이 설사, 화농성 질환, 자궁경미란, 눈 급성 염증, 두드러기, 외상감염, 어린이 땀띠, 감기, 나력, 치루, 일사병 치료에 효과가 있다고 알려져 있다.
청미래덩굴(Smilax china)은 동의치료에서 습을 내보내며 열내림과 피를 맑게 하고 오줌내기, 독풀이 효과가 있다 하여 매독, 창독, 만성 피부병, 수은중독성 피부염에 쓴다. 　또한 풍습성 관절염, 콩팥염, 방광염, 소화가 안되고 설사할 때에 15~31g을 물에 달여 먹는다. 민간에서 소화기암(식도암, 위암, 결장암)과 코암, 자궁암에 부처손, 까마중과 같이 써서 효과를 보았다고 한다.
이에 본 발명자들은 바위솔, 부처손, 인동덩굴 및 청미래덩굴의 혼합 추출물이 매우 우수한 항염 및 항산화 등의 효능을 나타냄을 발견하고 본 발명을 완성하였다.
따라서 본 발명의 목적은 바위솔, 부처손, 인동덩굴 및 청미래덩굴의혼합추출물을 함유하는 항염 및 항산화 효과가 있는 화장료 조성물을 제공하고자 하는 것이다.
본 발명은 바위솔, 부처손, 인동덩굴 및 청미래덩굴의 혼합추출물을 함유하는 항염 및 항산화용 화장료 조성물을 제공한다.
본 발명에서 사용되는 바위솔, 부처손, 인동덩굴 및 청미래덩굴은 국내외 산등에서 직접 채취하거나, 재래시장 또는 한약재를 파는 곳에서 구입하여 사용할 수 있다. 이들은 채취하거나 구입한 후 세척하여 건조시킨 후, 세절한 후에 본 발명의 추출물 제조에 사용될 수 있다.
본 발명에서 바위솔, 부처손 인동덩굴 및 청미래덩굴의 다양한 중량비로 혼합되어 사용될 수 있다. 예들 들어, 바위솔, 부처손, 인동덩굴 및 청미래덩굴을 1: 0.25~4: 0.25~4: 0.25~4 중량비로 혼합될 수 있으며, 바람직한 혼합 중량비는 1:1:1:1 이다.
본 발명의 화장료 조성물에 포함되는 바위솔, 부처손, 인동덩굴 및 청미래덩 굴의 혼합추출물의 제조방법을 예로 들면 도1에 나타낸 바와 같다. 바위솔, 부처손, 인동덩굴 및 청미래덩굴을 건조 및 파쇄하고, 선택적으로 초임계 전처리하여 멸균하고 농약 및 불순물을 제거한 후, 냉각콘덴서가 달린 추출기에서, 추출용매로 유효성분을 추출하고, 추출물을 회수하고 농축하여 제조한다. 바람직하게는 본 발명의 혼합추출물은 바위솔, 부처손, 인동덩굴 및 청미래덩굴을 초임계 전처리 한 후 추출한 것이 바람직하다. 상기 초임계 전처리 조건은 높은 압력(100~800bar)과 낮은 온도(40~70℃)에서 실시되는 초임계 이산화탄소 전처리 방법이며, 초임계 전처리 된 혼합물은 멸균 및 농약을 제거한 후에 에탄올로 50~100℃에서 3~24시간 동안 추출한 후 농축하여 제조될 수 있다.
초임계 전처리 방법은 고압 공정으로 인한 멸균 효과가 있고 낮은 온도 처리이기 때문에 열에 쉽게 반응하는 유효성분이 쉽게 변성되거나 파괴되지 않으며 별도의 유기용매를 전혀 사용하지 않기 때문에 잔류 유기용매가 없고, 불순물이 적어 보다 피부에 안전한 유효성분을 추출할 수 있다는 장점이 있다. 바위솔의 유효 성분인 에둘틴, 부처손의 유효 성분인 이노시톨, 인동덩굴의 유효 성분인 루테오린-7-그함노글리코사이드과 청미래덩굴의 휴효 성분인 스밀라사포닌B은 초임계 이산화탄소에 용해성이 없고 100℃ 이하에서 변성이 없기 때문에 초임계 전처리 과정을 거친 후 에탄올로 추출하여도 유효성분의 변성이 없다.
본 발명의 혼합추출물 제조에 사용되는 용매는 당업자에게 알려진 추출용매이면 어느 것이든 가능하다. 예를 들어, 물, 메탄올, 에탄올, 프로판올, 부탄올과 같은 C1~C4의 알코올, 또는 함수 C1~C4 알코올, 부틸렌글리콜 과 같은 C1~C6의 글리콜, 함수 C1~C6의 글리콜, 에틸아세테이트, 헥산, 벤젠, 디에틸에테르, 디클로로메탄 등이 있으며, 단일 또는 2종 이상의 혼합용매를 혼합하여 사용할 수 있다. 바람직한 천연 식물 추출용매는 에탄올을 포함하는 C1~C4의 알코올, 함수 C1~C4알코올이다.
본 발명에서 00%알코올은 00(v/v)% 알코올과 나머지 부분의 물을 함유하고 있는 알코올을 의미한다.
또한 본 발명의 화장료 조성물은 현재 시판되는 화장품, 화장용비누,화장용 세안제의 제형을 가진다. 예를 들어, 본 발명의 화장료 조성물은 화장수(스킨로션), 영양로션, 영양크림, 맛사지 크림, 에센스, 팩 또는 유화형 화운데이션와 같은 화장품 제형일 수 있다. 또한, 본 발명의 화장료 조성물은 유아전용 화장수(스킨로션), 로션, 크림, 자외선차단 로션 또는 자외선차단 크림과 같은 제형일 수 있다. 또한, 본 발명의 화장료 조성물은 유아전용 목욕 세정제, 샴푸 또는 비누와 같은 화장용 세정제의 제형일 수 있다.
이들 각 제형은 그 제형의 제제화에 필요한 각종의 기제와 첨가물을 함유할 수 있으며, 이들 성분의 종류와 양은 당업자에 의해 용이하게 선정될 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물에서, 추출물의 함량의 사용목적 및 사용자의 대상에 따라 다양하게 함유될 수 있다. 바람직한 혼합추출물의 함량은 화장료 조성물 총중량에 대하여 0.1 내지 10.0 중량% 이다.
본 발명의 화장료 조성물은 상기 혼합추출물 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함할 수 있으며, 예를 들면, 안정화제, 용매화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제 및 담체를 포함할 수 있다.
또한 본 발명에 따른 항염 및 항산화 효과를 가지는 화장료 조성물은 통상적인 사용방법에 따라 사용될 수 있으며, 사용자의 피부 상태 또는 취향에 따라 그 사용 횟수를 달리할 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물에서 바위솔, 부처손, 인동덩굴 및 청미래덩굴에 함유된 필수 지방산인 감마리놀렌산 성분은 피부 보습과 염증 현상을 조절하며, 이 감마리놀렌산은 각질층의 세포들을 촘촘하게 하여 피부 속의 유분 및 수분을 보호하여 피부가 건조해지면서 탄력을 잃어버리는 것을 막아 준다.
또한, 인체에서 지질과산화, 세포내 자유라디칼 생성, 기타 라디칼 반응을 억제함으로써 항염 및 항산화 효과를 나타낸다.
이하, 실시예, 비교예, 대조예, 제제예, 실험예 등을 본 발명의 구성 및 효과를 상세히 설명하나, 본 발명이 이들로 한정되는 것은 아니다.
< 실시예 1 내지 7>바위솔, 부처손, 인동덩굴 및 청미래덩굴의 혼합 추출물 제조
하기 표1의 시료 혼합 비율(바위솔:부처손:인동덩굴:청미래덩굴)로 한 시료를 분쇄하여 만든 분말 100g을 100~800bar, 40~70℃ 조건에서 초임계 전처리 한 후, 95(v/v)% 함수 에탄올 (5(v/v)%의 물을 함유한 에탄올) 1㎏에 넣고 냉각 콘덴서가 달린 추출기에서 60℃로 3시간 끓여서 추출하였다. 이후 400메쉬 여과포로 여과하고, 1주일간 방치하여 침전물을 0.45㎛ 필터로 여과하였다. 그리고 감압 농축기를 이용하여 50℃에서 완전히 농축하여 건조 중량 표 1에 기재된 만큼 얻었다.
시료 혼합 비율
(바위솔:부처손:인동덩굴:청미래덩굴)		 수율(g)
실시예 1 1:1:1:1(25g:25g:25g:25g) 38.89
실시예 2 1:1:2 :2(16g:16g:34g:34g) 35.89
실시예 3 1:1:3 :3(12.5g:12.5g:37.5g:37.5g) 36.51
실시예 4 1:1:4 :4(10g:10g:40g:40g) 37.39
실시예 5 2 :2 :1:1(34g:34g:16g:16g) 36.17
실시예 6 3:3:1:1(37.5g:37.5g:12.5g:12.5g) 35.81
실시예 7 4:4:1:1(40g:40g:10g:10g) 35.39
< 실시예 8 내지 10>
바위솔,부처손,인동덩굴 및 청미래덩굴의 조성 비율을 1:1:1:1중량비 즉, 25g:25g:25g:25g으로 하고 하기 표2의 용매를 사용한 것을 제외하고 실시예1과 동일한 방법으로 추출하였다. 그 결과는 하기 표2와 같다.
용매 수율 (g)
실시예 8 70% 함수 에탄올 36.39
실시예 9 50% 함수 에탄올 32.23
실시예 10 30% 함수 에탄올 31.89
< 비교예1 > 바위솔 추출물의 제조
실시예1에서 사용한 혼합 분말대신에 바위솔을 분쇄하여 만든 분말 100g을 사용한 것을 제외하고 실시예1과 동일한 방법으로 추출하여, 표제의 추출물을 건조 중량 32.33g 얻었다.
< 비교예2 > 부처손 추출물의 제조
실시예 1에서 사용한 혼합 분말대신에 부처손을 분쇄하여 만든 분말 100g을 사용한 것을 제외하고 실시예1과 동일한 방법으로 추출하여, 표제의 추출물을 건조 중량 33.62g을 얻었다.
< 비교예3 > 인동덩굴 추출물의 제조
실시예1에서 사용한 혼합 분말대신에 인동덩굴을 분쇄하여 만든 분말 100g을 상용한 것을 제외하고 실시예1과 동일한 방법으로 추출하여, 표제의 추출물을 건조 중량 36.27g을 얻었다.
< 비교예4 > 청미래덩굴 추출물의 제조
실시예1에서 사용한 혼합 분말 대신에 청미래덩굴을 분쇄하여 만든 분말 100g을 사용한 것을 제외하고 실시예1과 동일한 방법으로 추출하여, 표제의 추출물을 건조 중량 32.87g 얻었다.
< 대조예1 > 인도매타신 (카운터)의 제조
상용화된 인도메타신 결정(Indomethacin Crystalline 7378, Sigma Chemical Co.)을 사용하여 95% 에탄올 1ml에 녹여1 ㎍/㎖, 10 ㎍/㎖, 100 ㎍/㎖, 1000 ㎍/㎖ 농도별로 인도메타신 용액을 제조하였다.
< 대조예2 > 녹차씨 (카운터) 추출물의 제조
녹차씨를 분쇄한 100g을 비교예1의 방법으로 제조하여 건조 중량 36.98g을 얻었다.
< 대조예 3 내지 5> 추출용매의 함수 함량 변화에 따른 녹차씨 추출물의 제조
녹차씨를 분쇄한 100g을 표2의 용매를 추출용매로 사용하여 실시예 1과 동일한 추출방법으로 추출하여 그 결과를 하기 표3에 기재하였다.
용매 수율 (g)
대조예 3 70% 함수 에탄올 35.11
대조예 4 50% 함수 에탄올 33.03
대조예 5 30% 함수 에탄올 30.14
< 대조예 6> 리포폴리사카라이드 ( LPS ) 정제
리포폴리사카라이드(구입처: 전남대학교 약품개발 연구소)를 고온 페놀-물 추출방법에 의해 NMB-R6 세포로부터 추출하고, 초원심분리를 통해 정제하였다.
구체적으로 정제 방법을 설명하면 다음과 같다. 세포 펠릿들을 5mM EDTA 및 0.02% 나트륨 아지드를 함유하는 포스페이트완충액에 현탁시킨 후, 리소자임을 2mg/ml 농도로 현탁액에 가한다. 이어서, 이 혼합물을 4℃에서 분해시킨 후 현탁액을 37℃로 되게 하고, 100ug/ml 농도의 RNAse 및 DNAse을 추가로 3시간 분해시킨다. 이어서 분해물을 70℃로 가열하고, 이에 페놀을 70℃에서 가한다. 이 혼합물을 15분의 기간 동안 추출하고, 현탁액을 4℃로 냉각시키고, 30분 동안 원심 분리한다. 수성상을 회수하고, 페놀상을 70℃에서 15분 동안 동량의 물로 재추출한다. 이후, 이 상을 30분 동안 원심분리하고, 수성상을 분리한다. 나트륨 아세테이트를 5mg/ml의 농도로 합하여 가한다. 이어서, 아세톤 3ml를 이 혼합물에 가하고, 리포폴리사카라이드를 4℃에서 침전시킨다. 침전된 리포폴리사카라이드를 30분동안 원심분리에 의해 분리한다. 전형적으로, 리포폴리사카라이드 3mg을 NMB-R6 세포 1mg 습윤중량으로부터 정제한다.
< 실험예 1>본 발명 혼합추출물의 항염증 효과 확인
1)실험방법
상기 추출물에 대하여 RAW 264.7 세포(구입처: 전남대학교 약품개발 연구소)를 페놀 레드가 없는 10% FBS가 함유된 동물세포배양 배지에 현탁하여 24 well plate의 각 well 당 5x105개씩 넣어 37℃, 5% CO2 배양 조건에서 24시간 동안 배양한다. RAW 264.7 세포에 리포폴리사카라이드와 식물 추출물 혹은 디메틸설폭사이드를 동시에 처리하여 20시간 배양 후 상등액 100㎕를 그리에스 시약 180㎕와 반응시켜 540㎚에서 흡광도를 측정한다.
대조예1, 비교예1 내지 4 및 실시예1 내지 10 추출한 추출물을95%에탄올 1ml에 녹여1 ㎍/㎖, 10 ㎍/㎖, 100 ㎍/㎖, 1000 ㎍/㎖ 농도별로 상기 방법에 따라 항염증 실험을 하였다.
2)실험결과
항염효과는 계산식1에 의해 계산된 값이며, 그 결과를 표 4에 나타내었다.
< 계산식1 >
Figure 112008056795699-pat00001
1 ㎍/㎖ 10 ㎍/㎖ 100 ㎍/㎖ 1000 ㎍/㎖
대조예1 0.1821 5.1903 18.2102 24.2012
비교예1 0.1271 6.1225 24.6038 44.5909
비교예2 2.3694 8.5647 22.4772 47.6877
비교예3 1.3220 7.1263 26.3760 45.2376
비교예4 2.4781 7.7577 25.8766 46.0032
실시예 1 3.6063 8.9674 44.5156 75.6196
실시예 2 3.3103 8.6563 44.2409 75.2856
실시예 3 3.4938 8.8235 44.4089 75.5313
실시예 4 3.5736 8.9035 44.4982 75.5883
실시예 5 3.4895 8.8053 44.3903 75.4238
실시예 6 3.4322 8.7413 44.3255 75.4008
실시예 7 3.4137 8.7044 44.2987 75.3885
실시예 8 3.4907 8.8774 44.4403 75.5288
실시예 9 3.1134 8.2244 43.8722 74.9122
실시예 10 3.0268 7.8752 43.1487 74.8322
상기 표4에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 혼합추출물은 단일 성분 추출물(비교예1,2,3,4)이나 대조예1로 사용한 인도메타신보다 우수한 항염 효과가 있음이 확인되었다.
< 실험예 2> 본 발명의 혼합추출물의 항산화 효과 확인
1)실험방법
0.2 mM DPPH 메탄올 용액 150㎕와 희석한 각각의 샘플 용액 150㎕를 각각 96-well plate에 넣고 상온에서 30분간 반응시킨 후 517㎚에서 흡광도를 측정한다. 샘플 150㎕와 메탄올 150㎕를 섞어서 블랭크(blank)로 하고 DPPH 메탄올 용액 150㎕와 메탄올 150㎕를 섞은 것을 대조군(control)로 하여 하기 계산식2에 따라서 항산화 활성을 계산한다.
< 계산식2 >
Figure 112008056795699-pat00002
(Sabs : 샘플의 흡광도, Babs : 블랭크의 흡광도, Cabs : 대조군의 흡광도)
상기 방법에 따라 대조예2 내지 5, 비교예1 내지 4 및 실시예1 내지 실시예10 에서 추출한 추출물을 메탄올 1ml에 녹여 1 ㎍/㎖, 10 ㎍/㎖, 100 ㎍/㎖, 1000 ㎍/㎖ 농도별로 항산화 실험을 하였다.
2)실험결과
항산화 효과는 계산식2에 의해 나타내었고 그 결과를 표 5에 나타내었다.
1 ㎍/㎖ 10 ㎍/㎖ 100 ㎍/㎖ 1000 ㎍/㎖
대조예2 3.1684 3.1991 8.2318 42.1684
대조예3 3.1287 3.1744 8.1628 42.1129
대조예4 2.9310 3.1696 8.0107 41.9882
대조예5 2.6508 2.9032 8.0068 40.9384
비교예 1 2.7592 4.1029 13.008 76.2009
비교예2 3.4555 4.3073 15.8783 77.9666
비교예3 3.9022 4.8443 14.9742 76.4827
비교예4 3.8267 5.1343 16.2173 78.0323
실시예 1 3.5871 10.8361 27.4767 96.7983
실시예 2 3.2789 10.5163 27.1924 96.5032
실시예 3 3.3532 10.6134 27.2305 96.5742
실시예 4 3.4347 10.7869 27.3243 96.6465
실시예 5 3.3077 10.5477 27.2208 96.5376
실시예 6 3.2738 10.4934 27.0051 96.4896
실시예 7 3.2689 10.4902 27.0011 96.4807
실시예 8 3.3411 10.5988 27.2288 96.5983
실시예 9 3.0843 10.1187 26.8643 96.1007
실시예 10 2.8885 9.7967 26.0764 95.8865
상기 표5에 나타낸 바와 같이, 본발명의 혼합추출물은 단일 성분추출물(비교예1,2,3,4)이나 대조예2 내지 5의 추출물보다 우수한 항산화 효과 나타내었으며, 농도가 증가할수록 항산화 활성이 급격히 증가함을 알 수 있었다. 보다 구체적으로 혼합추출물(실시예1)의 경우 단일 성분 추출물에 비해 시너지 효과에 의해 더욱 가파른 상승곡선을 그리며 항산화 활성이 증가하였고, 대조군인 녹차추출물(대조예2)에 비해서도 높은 항산화 활성을 갖고 있음이 확인되었다.
< 실험예3 > 본 발명의 혼합추출물의 안전성 시험
1)실험방법
상기 추출물에 대하여 안전성 실험을 하기 위하여 실시예1를 사용하였다. Human fibroblast cell line(인간 섬유아세포)을 1x103 cell/well의 농도로 접시에 파종 한다. 10% FBS가 함유된 동물세포배양 배지를 이용하여 37℃, 5% CO2 배양 조건에서 24시간 동안 배양한다. 각각의 추출물을 디메틸설폭사이드에 녹여 배지와 혼합한 후 200㎕씩 로딩 한 후 37℃, 5% CO2 배양 조건에서 72시간 동안 배양한다. 배양이 끝난 후 배지 200㎕에 MTT 용액 50㎕를 로딩하여 5시간 배양한다. 배양 후 MTT 용액을 제거한 다음 디메틸설폭사이드 200㎕를 넣고 540㎚에서 흡광도를 측정한다.
상기 방법에 따라 실시예1 및 대조예2에서 추출한 추출물을 95%에탄올 1ml에 녹여 1㎖, 10 ㎍/㎖, 100 ㎍/㎖, 1000 ㎍/㎖ 농도별로 안전성을 측정하였다.
2)실험결과
실험예3의 방법에 따른 결과를 표 6에 나타내었다.
반응액 중에 함유시킨 시료의 농도(㎍/㎖) 안전성 효과(%)
혼합추출물(실시예1) 녹차씨(대조예2)
1 99.90 97.46
10 99.22 95.23
100 99.57 93.26
1000 99.53 90.23
일반적으로 천연추출물의 농도를 증가함에 따라 안정성은 미미하게 떨어지지만 실시예1의 안전성 효과는 떨어지지 않음을 볼 수 있다. 따라서 본 발명의 혼합추출물은 기존 녹차추출물(대조예2)과 비교하여 안전성면에서 현저히 우수함을 알 수 있다.
< 실험예 4> 본 발명의 혼합추출물의 피부자극 완화 효과 확인
1)실험방법
누드 마우스[BALB/C sic-nu/nu mouse(12-17g, ♀)]에 증류수에 0.5%로 희석한 컴파운드 48/80(피부자극 유도물질)을 오른쪽 어깨에 주사한 후 1 시간 동안 긁는 횟수를 측정한다. 그 다음 24시간 후에 12마리의 쥐에 표 7의 화장료 처방예 1 내지 6를 각각 100 ul를 왼쪽 어깨에 주사하고 10분 뒤에 동일한 자리에 0.5% 컴파운드 48/80을 50 ul 주사하여 한 시간 동안 긁는 횟수를 측정한다. 0.5%의 컴파운드 48/80만을 주사하였을 때의 긁는 횟수를 100%로 환산하여 기준공통 횟수로 하고 이에 대하여 시료 및 컴파운드 48/80을 주사한 후 긁은 횟수를 공통기준횟수에 비교하여 나타내었다.
2) 처방예1 내지 6의 제조
번호 원 료 처방예1 처방예2 처방예3 처방예4 처방예5 처방예6
1 바위솔 추출물(비교예1) 5.0
2 부처손 추출물(비교예2) 5.0
3 인동덩굴 추출물(비교예3) 5.0
4 청미래덩굴 추출물(비교예4) 5.0
5 바위솔,부처손,인동덩굴,청미래덩굴의 혼합추출물(실시예1) 5.0
6 리포폴리사카라이드(대조예6) 5.0
7 스테아린산 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0
8 세토스테아릴알콜 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0
9 글리세릴모노스테아레이트 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0
10 폴리옥시에틸렌소르비탄모노스테아레이트 1.1 1.1 1.1 1.1 1.1 1.1
11 솔비탄세스퀴올레이트 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4
12 밀납 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0
13 유동파라핀 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0
14 스쿠알란 7.0 7.0 7.0 7.0 7.0 7.0
15 카프릴릭/카프릭트리글리세라이드 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0
16 카르복시비닐폴리머 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2
17 부틸렌글리콜 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0
18 트리에탄올아민 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
19 정제수 to 100 to 100 to 100 to 100 to 100 to 100
성분15, 16, 17, 19번을 혼합믹서기에 넣고 혼합 교반하면서 80~85℃사이로 가열하여 제조부에 투입한 후 유화기를 작용시키고 성분 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14번을 80~85℃사이로 가열하여 용해한 후 성분18번을 투입 교반하여 제조부에 투입하고 유화시킨다. 유화가 끝나면 교반기를 이용하여 교반하면서 35℃까지 냉각하고 성분1, 2, 3, 4, 5 및 6번을 투입하여 25℃까지 냉각한 뒤 숙성시켜 처방예1 내지 6을 제조하였다.
3)실험결과
실험예4의 실험 방법을 3번 반복하여 그 평균치를 하기 표8 에 나타내었다.
처방예1 처방예2 처방예3 처방예4 처방예5 처방예6
Screaching
Ratio(%)		 33 36.5 31 35.5 20 42
이 실험 결과로부터 본 발명의 혼합물추출물은 단일 성분의 추출물에 비해 우수한 피부자극완화 효과가 있음이 확인되었다.
< 실험예 5> 본 발명의 혼합추출물의 보습 효과 확인
1) 실험방법
본 발명의 혼합추출물 및 Buthylene Glycol(대조군) 5㎖를 각각 plate에 넣은 후 완전 건조 된 CaCl2를 흡습제로 하여 35℃ 데시케이터에서 무게를 측정하였다. 무게는 총 144시간 동안 측정하였다. 그 결과를 표 9에 나타내었다.
24 시간 48 시간 72 시간 120 시간 144 시간
실시예1 99.1325 98.8324 98.5877 98.2810 97.2471
Buthylene Glycol 98.1145 91.3316 88.6555 80.4817 76.8301
상기 결과로부터 본 발명의 혼합추출물이 기존 Buthylene Glycol과 비교하여 보습력에서 현저히 우수한 효과가 있음이 확인되었다.
< 제제예 1> 본발명이 혼합추출물을 함유하는 화장수 제조
실시예1의 혼합추출물을 함유한 화장수 (스킨로션) 1kg을 하기 표의 조성으로 다음과 같은 방법으로 제조하였다.
번호 원 료 함량(중량%)
1 실시예1의 혼합추출물( 실시예1 ) 5.0
2 글리세린 3.0
3 부틸렌글리콜 3.0
4 판테놀 1.0
5 피피지-26-부테스-26/피이지-40히드로게네이티드 캐스터오일 1.1
6 에탄올 8.0
7 히아루론산 0.2
8 방부제 미량
9 색소 미량
10 향료 미량
11 정제수 to 100
성분 11번에 성분 2,3,4 및 8번을 혼합믹서기에 순서대로 투입하고 실온에서 교반하여 용해시켰다. 그 후, 성분 5번을 60℃ 정도로 가열하여 용해시킨 후, 성분 10번을 투입, 교반하여 용해한 후 성분 11번에 투입하였다. 마지막으로 성분 1,6,7 및 9번을 투입하여 충분히 실온에서 교반한 뒤 72시간 숙성시켜 표제의 화장수를 제조하였다.
< 제제예 2> 본발명의 혼합추출물을 함유하는 영양로션 제조
실시예1의 혼합추출물을 함유한 영양로션 1kg을 하기 표의 조성으로 제조하였다.
번호 원 료 함량(중량%)
1 실시예1의 혼합추출물 5.0
2 시토스테롤 1.5
3 폴리글리세릴 2-올레이트 1.2
4 세라마이드 0.2
5 비타민 E 1.0
6 콜레스테롤 1.2
7 프로폴리스 0.5
8 부틸렌글리콜 5.0
9 선플라워오일 3.0
10 카르복시비닐폴리머 0.2
11 세테아레스-4 0.1
12 방부제 미량
13 향료 미량
14 정제수 to 100
성분 2, 3, 4, 5, 및 6번을 혼합믹서기에 투입하고 실온에서 균질화하고, 이에 성분1, 7, 8 및 14번을 혼합하고, 실온에서 균질화 한 후 성분 9번을 실온에서 서서히 첨가하여 균질화시켰다. 그 후, 성분 10, 11, 12, 13번을 투입하여 분산시킨 후, 실온에서 안정화한 다음 72시간 숙성시켜 표제의 영양로션을 제조하였다.
< 제제예 3> 본발명의 혼합추출물을 함유하는 영양크림 제조
실시예1의 혼합추출물을 함유한 영양크림 1kg을 하기 표의 조성으로 제조하였다.
번호 원 료 함량(중량%)
1 실시예1의 혼합추출물 5.0
2 시토스테롤 1.5
3 폴리글리세틸 2-올레이트 1.5
4 세라마이드 0.5
5 세테아레스-4 1.8
6 콜레스테롤 2.5
7 디세틸포스페이트 0.5
8 플라센터 4.0
9 선플라워오일 8.0
10 아데노신 0.4
11 트리에탄올아민 0.4
12 방부제 미량
13 향료 미량
14 정제수 to 100
성분 2, 3, 4, 5 및 6번을 실온에서 균질화한 비이온계 양친매성 지질과 성분 1, 7, 8, 및 14번를 혼합믹서기에서 혼합하고, 실온에서 균질화 한 후 성분 9번을 실온에서 서서히 첨가하여 균질화하였다. 그 후, 성분 10, 11, 12, 13번을 투입하여 분산시켜 실온에서 안정화한 다음 72시간 숙성시켜 표제의 영양크림을 제조하였다.
< 제제예 4> 본 발명의 혼합추출물을 함유하는 에센스 제조
실시예 1의 혼합추출물을 함유한 에센스 1kg을 하기 표의 조성으로 제조하였다.
번호 원 료 함량(중량%)
1 실시예1의 혼합추출물 5.0
2 시토 스테롤 1.5
3 씨12-20애씨드피이지-8에스텔 1.5
4 세라마이드 0.4
5 세테스-4 1.1
6 콜레스테롤 1.4
7 판테놀 0.5
8 부틸렌글리콜 5.0
9 썬플라워씨드오일 12.0
10 스쿠알렌 0.3
11 아데노신 0.2
12 산탄검 0.1
13 방부제 미량
14 항료 잔량
15 정제수 to 100
성분 2, 3, 4, 5 및 6번을 실온에서 균질화한 비이온계 양친매성 지질과 성분 1, 7, 8 및 15번을 혼합 믹서에서 혼합하고 실온에서 균질화하여 마이크로플루이다이져를 통과하고 이어 성분 9번을 실온에서 서서히 첨가하여 균질화한 후 다시 마이크로플루이다이져에 재차 통과시켰다. 그리고 성분 10, 11, 12, 13 및 14번을 투입하여 분산시켜 실온에서 안정화하고 72시간 숙성시켜 표제의 에센스를 제조하였다.
도1은 본 발명의 혼합추출물의 제조 방법의 모식도를 나타낸 도 및 사진이다.

Claims (8)

  1. 바위솔, 부처손, 인동덩굴 및 청미래덩굴을 1 : 1 : 0.25~4 : 0.25~4의 중량비로 혼합하여 추출한 혼합추출물을 함유하는 항염 및 항산화용 화장료 조성물.
  2. 삭제
  3. 제1항에 있어서, 상기 혼합 추출물은 바위솔, 부처손, 인동덩굴 및 청미래덩굴을 1:1:1:1 중량비로 혼합하여 추출한 것인 화장료 조성물.
  4. 제1항 또는 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 혼합추출물은 바위솔, 부처손, 인동덩굴 및 청미래덩굴을 100~800bar, 40~70℃ 조건에서 초임계 전처리한 후 추출된 것인 화장료 조성물.
  5. 제4항에 있어서, 상기 혼합 추출물이 에탄올 또는 함수에탄올로 추출된 것인 화장료 조성물.
  6. 제1항 또는 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 혼합 추출물이 조성물 총 중량에 대하여 0.1중량%(w/w) 내지 10.0중량%(w/w) 함유된 화장료 조성물.
  7. 제1항 또는 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화장료는 유연화장수, 영양화장수, 영양로션, 영양크림, 맛사지크림, 에센스 또는 팩 중 에서 선택된 어느 하나의 형태의 제형을 갖는 화장료 조성물.
  8. 제5항에 있어서, 상기 함수에탄올은 70~95(v/v)% 함수에탄올인 화장료 조성물.
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