KR101528275B1

KR101528275B1 - 나래미역취, 개미취 및 바위취의 추출물을 포함하는 화장료 조성물

Info

Publication number: KR101528275B1
Application number: KR1020120141635A
Authority: KR
Inventors: 이종범; 전태영; 함태훈; 이상종; 김태원; 곽윤희
Original assignee: 주식회사 에버코스
Priority date: 2012-12-07
Filing date: 2012-12-07
Publication date: 2015-06-25
Also published as: KR20140073784A

Abstract

본 발명은 나래미역취, 개미취 및 바위취의 추출물을 포함하는 화장료 조성물에 관한 것으로, 항염, 주름개선 및 항산화 효과가 우수하다.

Description

나래미역취, 개미취 및 바위취의 추출물을 포함하는 화장료 조성물{Cosmetic composition with the extract of Solidago virgaurea L. var coreana Nakai, Aster tataricus, Saxifraga stolonifera}

본 발명은 화장료 조성물에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 나래미역취, 개미취 및 바위취의 추출물을 포함하는 화장료 조성물에 관한 것이다.

피부는 신체 중 가장 큰 기관으로 항상 외부 환경과 직접 접하고 있으면서 여러 가지 자극이나 건조한 환경으로부터 생체를 보호하는 보호막의 역할을 하고 있으며, 다른 기관에 비하여 새로운 세포의 생성과 소멸이 활발히 일어나는 기관이다. 또한, 물리적인 찰과상으로부터 신체를 보호하고, 신체 내부의 수분의 손실을 막아주며 태양에서 발생되는 자외선으로부터 보호해주고, 몸의 체온을 조절해주는 데 매우 중요한 역할을 담당하고 있다.

이러한 피부는 여러 가지 물리적 요인, 외부 환경적 요인 등으로 인한 외부 자극을 받게 되면 주름 생성, 탄력 손실, 각질화 등과 같은 노화가 발생하게 된다. 피부 노화는 크게 자연 노화(혹은 내인성 노화)와 외적 노화로 구분되며, 자연 노화는 유전적인 요소에 영향을 받기 때문에 인위적인 조절이 어려운 반면 외적 노화는 환경적인 요소에 영향을 받기 때문에 인위적인 조절이 비교적 용이하다.

대표적인 외적 노화 인자로는 자외선을 들 수 있으며, 가장 두드러진 외적인 노화 현상은 주름 형성이다(Daniell HW, Ann. Intern. Med., 1971, 75(6), 873; Grove GL 등, J. Am. Acad. Dermatol., 1989, 21(3), 631; Griffiths CE 등, Arch. Dermatol., 1992, 128, 347). 자외선에 의해 야기되는 광노화 메커니즘 중의 하나는 자유 라디칼 경로를 경유하는 것이다(Harman D, J. Gerontol., 1956, 11(3), 298).

자유 라디칼들은 피부 콜라겐 등의 결합 조직 형성 파괴, 세포막 기능 저해, DNA 변이 촉진, 단백질 작용 변형, 세포 간 에너지 전이, 신진 대사와 관련된 분자들의 변형 등을 유발하는 것으로 알려져 있다(Lavker RM 및 Kligman AM, J. Invest. Dermatol., 1988, 90, 325). 노화에 자유 라디칼이 관여한다는 사실은 자유 라디칼을 불활성화시키는 항산화제 또는 여러 가지 화학적 소거제들을 사용하여 노화 과정을 지연시킬 수 있다는 것을 의미한다.

한편, 정상적인 세포에서도 대사과정 중 어느 정도의 자유 라디칼 (free radical)과 기타 활성산소 및 과산화물이 생성되고 있으나, 생체 내에는 이들에 대한 방어기구로서 슈퍼옥사이드디스뮤타제(SOD), 카탈라아제(catalase), 퍼록시다제 (peroxidase) 등의 항산화성 효소와 함께, 비타민 C, 비타민 E, 글루타치온(glutathione), 유비퀴논(ubiquinone), 요산(uric acid) 등의 항산화 물질이 존재하여 스스로를 보호하고 있다. 그러나, 이와 같은 생체방어기구에 이상이 초래되거나 각종 물리적, 화학적 요인들에 의하여 활성산소의 생성이 생체방어계의 용량을 초과하게 될 경우, 산화적 스트레스(oxidative stress)가 야기된다. 그러므로 활성산소를 억제하는 것은 피부노화 화장료에 중요한 요소이다.

이러한 활성 산소종의 중화를 목적으로 토코페롤, 폴리페놀류, Coenzyme Q 10, BHT, BHA 등 항 산화제가 폭 넓게 이용되고 있으나 이들은 대부분 합성품으로서 장기간 인간의 피부에 적용할 경우 안전성이 문제화되므로 사용이 제한된다. 이에 따라 항산화 효과가 높고, 사람의 피부에 대해서는 안전성이 보증되며, 경제적인, 식물기원의 천연 항산화제를 개발하고자 하는 많은 연구가 기대 속에 이루어지고 있다.

한편, 나래미역취(Solidago virgaurea L. var coreana Nakai)는 여러해살이풀로 높이 40~80㎝, 꽃은 7~10월에 핀다. 열매는 수과로 원통형이고, 털이 약간 있거나 없으며, 관모는 길이 3.5㎜가량이다. 전국의 산에 자라며, 일본, 만주, 중국, 대만, 필리핀에 분포한다. 전초를 일지황화(一枝黃花)라고 하며, 소풍, 청열, 소종, 해독의 효능이 있고 감기, 인후종통, 황달, 백일해, 소아경련, 종기 등을 치료한다. 성분으로는 solidagosaponin, limonen, bornylacetate, borneol 등이 함유되어 있다.

개미취(Aster tataricus)는 여러해살이풀로 높이 1~1.5m, 꽃은 지름 2.5~3.3㎝로 7~10월에 가지 끝과 원줄기 끝에 산방상으로 달린다. 총포는 반구형이고, 포는 3줄로 배열되고 끝이 뾰족한 바늘 모양이며, 짧은 털이 있고 가장자리가 건막질이다. 설상화는 길이 16~17㎜, 너비 3~3.5㎜로 하늘색이다. 열매는 수과로 길이 3㎜ 가량이며 털이 있고, 관모는 길이 6㎜가량이다. 전국의 산의 습지에 흔히 자라며, 일본, 만주, 중국, 우수리, 몽고, 다후리아에 분포한다. 뿌리 및 뿌리줄기를 가을에 채취하여 말린다. 뿌리 및 뿌리줄기를 자원이라고 하며 온폐, 하기, 소담, 지해의 효능이 있다. 풍한에 의한 해수, 천식 및 소변불통을 치료한다. 성분으로는 epifriedelanol, friedelin, shinone, astersaponin, quercetin, lachnophyllol, lachnophyllolacetate, anethol이 함유되어 있다.

바위취(Saxifraga stolonifera)는 여러해살이풀로 높이 약 40㎝ 가량이며 꽃은 백색으로 5월에 핀다. 열매는 삭과로 달걀 모양이다. 전국의 산 바위 겉이나 습지에서 흔히 자라며, 일본, 만주, 중국에 분포한다. 전초를 호이초(虎耳草)라 하며 거풍, 청열, 양혈해독의 효능이 있다. 풍진, 습진, 중이염, 단독, 해수토혈, 폐종, 치질을 치료한다. 전초에는 알부틴(arbutin), 애스쿨린(aesculin)이 함유되어 있다.

대한민국 특허공개번호 제10-2012-0117115호 (공개일자: 2012. 10. 24)에는, 자완 추출물을 함유하는 모발 성장 촉진 또는 탈모 방지용 조성물이 기재되어 있다. 대한민국 특허공개번호 제10-2002-0094349호 (공개일자: 2002. 12. 18)에는, 모란뿌리, 상지 및 호이초 추출물의 혼합물을 포함하는 미백 화장료가 기재되어 있다.

본 발명에서는 상기에서 설명한 나래미역취, 개미취 및 바위취를 이용하여 화장료 조성물을 개발하고자 한다.

본 발명은 제1형태로, 나래미역취, 개미취 및 바위취를 혼합한 후 추출하여 수득되는 혼합추출물을 유효성분으로 포함하는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 제2형태로, 나래미역취 추출물, 개미취 추출물 및 바위취 추출물을 유효성분으로 포함하는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명에서 사용하는 나래미역취, 개미취('자완'으로 불리기도 함) 및 바위취('호이초'로 불리기도 함)는 경동시장과 같은 재래 시장 또는 인터넷 마켓 등을 통해 용이하게 구입할 수 있다.

본 발명에서 사용하는 나래미역취, 개미취(자완) 및 바위취(호이초)는 바람직하게 정제수로 깨끗이 세척하여 사용하는 것이 좋으며, 추출 방법에 따라 건조시켜 세절하거나 가루로 만들어 사용하는 것이 바람직하다.

본 발명에서 추출용매는 물, 탄소수 1 내지 4의 무수 또는 함수알코올, 에틸아세테이트, 아세톤, 글리세린, 에틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 부틸렌글리콜 및 이들의 혼합용매(예를 들어, 함수알코올, 함수글리세린 등 2개의 용매혼합 또는 2개 이상의 용매혼합) 중에서 선택된 하나 이상의 용매를 사용할 수 있는데, 그 중 물, 탄소수 1 내지 4의 무수알코올 또는 함수알코올에서 선택된 용매로 추출되는 것이 바람직하다. 여기서, 탄소수 1 내지 4의 알코올은 메탄올, 에탄올, n-프로판올, iso-프로판올, n-부탄올, tert-부탄올 등이 있다. 이들 추출용매 중 함수 에탄올이 가장 바람직하며, 함유된 물의 양은 30 내지 90(wt/wt)% 이내가 바람직하며, 70(wt/wt)%가 더 바람직하다.

본 발명의 나래미역취, 개미취(자완) 및 바위취(호이초)의 혼합 추출물 또는 각각의 개별 추출물은 통상의 기술자에게 알려진 공지된 추출법에 의해 제조될 수 있다. 예를 들어, 본 발명에서의 나래미역취, 개미취(자완) 및 바위취(호이초) 건조물을 각각(또는 모두 혼합한 후) 세절하고, 그 건조 중량의 1~50배 부피량의 물, 탄소수 1~4의 무수 알코올 또는 함수 알코올 중에서 선택된 추출용매를 부가하여 4∼30℃에서 3∼20일간 침적시켜 유효성분을 추출한 후, 추출용매를 감압농축기로 농축하여 수득할 수 있다.

또한, 본 발명에서는 나래미역취, 개미취(자완) 및 바위취(호이초) 건조물을 분쇄하여, 각각(또는 모두 혼합한 것)에 대해, 건조 중량의 1~30배 부피량의 물, 탄소수 1~4의 무수 알코올 또는 함수알코올로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 용매를 사용하며, 이어서 용매가 증발되는 것을 방지하기 위하여 냉각 콘덴서를 구비한 추출기로 30∼100℃에서 1∼48시간 동안 가열 추출하거나 5∼30℃에서 1~10일간 침적시켜 유효성분을 추출하고, 추출 용매를 감압농축기로 농축하여 수득할 수 있다. 또한, 위에서 열거한 추출용매에 공지된 초음파 추출법 등을 이용하여 추출할 수도 있다. 다만, 본 발명의 나래미역취, 개미취(자완) 및 바위취(호이초) 혼합추출물 또는 각각의 개별 추출물은 물, 탄소수 1 내지 4의 무수 또는 함수알코올로 추출하는 것이 바람직하며, 그 추출온도는 50 내지 100℃이 바람직하다.

한편, 본 발명에서 나래미역취, 개미취(자완) 및 바위취(호이초) 혼합추출물 또는 각각의 개별 추출물은 추출 용매로 추출한 추출액을 감압 농축한 농축액, 농축액을 동결건조한 분말 또는 농축액을 분무 건조하여 건조한 분말일 수도 있다.

한편, 본 발명의 화장료 조성물에서 나래미역취, 개미취(자완) 및 바위취(호이초) 혼합추출물은 화장료 조성물의 총 중량에 대하여 분말형태 또는 액상 형태로 0.001%~10중량%의 양으로 화장료에 첨가될 수 있으며, 바람직하게는 화장료 조성물 총 중량에 대하여 분말형태 또는 액상형태로 0.01∼5중량%의 양으로 화장료에 첨가될 수 있다.

한편, 본 발명은 나래미역취, 개미취(자완) 및 바위취(호이초)에 대해 각각의 추출물을 별도로 제조한 후, 화장료 조성물에 첨가하여 이들 성분을 혼합할 수도 있다. 그 첨가량은 세 성분의 합이 화장료 조성물의 총 중량에 대하여 분말형태 또는 액상 형태로 0.001%~10중량%의 양만큼, 바람직하게는 화장료 조성물 총 중량에 대하여 분말형태 또는 액상형태로 0.01∼5중량%의 양만큼 첨가될 수 있다. 이때, 세 성분의 배합비는 다양하게 조절될 수 있다.

한편, 본 발명의 화장료 조성물은 그 제형에 있어서 특별히 한정되는 바가 없으며, 예를 들면, 화장수, 영양로션, 영양크림, 마사지크림, 에센스, 팩, 유화형 화운데이션, 고체형 화운데이션, 자외선 차단 크림 등의 제형을 가질 수 있다. 또한, 목욕세정제, 샴푸, 비누 등의 제형일 수도 있다. 또한, 각 제형의 화장료 조성물에 있어서, 상기의 나래미역취, 개미취(자완) 및 바위취(호이초) 추출물(또는 혼합추출물) 외에 다른 성분들을 기타 화장료의 제형 또는 사용목적 등에 따라 임의로 선정하여 배합할 수 있다. 예를 들어, 착색제(색소), 착향제(향료), 현탁화제, 유화제, 용해보조제, 안정제, 등장제, pH조절제, 점도조절제, 용제 등을 포함할 수 있다.

한편, 본 발명의 화장료 조성물은 바람직하게 염증 완화용 또는 주름개선용 또는 노화방지용일 수 있는데, 나래미역취, 개미취(자완) 및 바위취(호이초) 추출물(또는 혼합추출물) 외에 항염, 주름개선 또는 항산화 효과를 나타내는 다른 유효성분을 한 개 이상 포함할 수 있다.

나래미역취, 개미취(자완) 및 바위취(호이초)의 혼합 추출물을 함유하는 본 발명의 화장료 조성물은, 실험 결과, 항염, 주름개선 및 항산화 효과가 우수한 것으로 확인되었다.

이하, 본 발명의 내용을 하기 실시예를 통해 더욱 상세히 설명하고자 한다. 다만, 본 발명의 권리범위가 하기 실시예에만 한정되는 것은 아니고, 그와 등가의 기술적 사상의 변형까지를 포함한다.

[ 실시예 1: 나래미역취 , 개미취( 자완 ) 및 바위취( 호이초 ) 혼합추출물 분말의 제조]

경동시장에서 구입한 나래미역취, 개미취(자완) 및 바위취(호이초)를 정제수로 세척한 후, 건조시킨 나래미역취 100g, 개미취(자완) 100g, 바위취(호이초) 100g에 증류수 6㎏을 넣고 냉각 콘덴서가 달린 추출기에서 80℃~100℃로 2시간 끓여서 추출하였다. 이 과정을 3회 반복하여 추출하였다. 이 후 300메쉬 여과지로 여과하고, 1주일간 실온에서 방치하여 침전물을 에드벤텍 5번 여과지와 와트만 GFC 150mm 여과지로 2번 여과하였다. 그리고 감압 농축기를 이용하여 40~50℃의 온도에서 농축한 후 스프레이드라이어(모델명:B-290, BUCHI사 제품)를 다음 조건으로 이용하여 건조된 추출 분말 20g을 얻었다.

-Inlet 온도 : 180 ℃

-Aspirator 효율 : 100% (35㎤/hr)

-Pump 효율 : 25% (7.5㎖/min)

-Nozzle Cleaner 4

-Rotameter : 30㎜ (357Liter/hr)

[ 실시예 2 내지 11: 나래미역취 , 개미취( 자완 ) 및 바위취( 호이초 )에 대해, 추출 용매에 따른 혼합추출물 분말의 제조 및 혼합 비율에 따른 혼합추출물 분말의 제조]

나래미역취, 개미취(자완) 및 바위취(호이초)의 혼합물에 대해 추출용매 및 첨가 비율을 달리하여 상기 실시예 1의 방법과 동일한 방법으로 혼합추출물 분말을 제조하였다. 사용한 추출 용매는 아래 표 1과 같았다. 이때, 표 1에 기재된 실시예 2 내지 5에서 나래미역취, 개미취(자완) 및 바위취(호이초)은 각각 1 : 1 : 1의 무게비로 혼합된 것이다.

한편, 추출 용매에 따른 효과를 먼저 확인한 후, 우수한 효과가 확인된 실시예 4의 70% 에탄올을 사용하여, 하기 표 2와 같은 다양한 혼합 비율로 추출물 분말을 제조하였다.

구분	추출 용매
실시예 2	30% 에탄올
실시예 3	50% 에탄올
실시예 4	70% 에탄올
실시예 5	100% 에탄올

구분	약재 비율 (나래미역취 : 개미취 : 바위취)
실시예 6	2 : 1 : 1
실시예 7	1 : 2 : 1
실시예 8	1 : 1 : 2
실시예 9	2 : 2 : 1
실시예 10	1 : 2 : 2
실시예 11	2 : 1 : 2

[ 실험예 1: 잔틴 옥시다아제( Xanthine Oxidase ) 저해 효과 확인]

잔틴 옥시다아제(Xanthine oxidase)에 의해 생성된 수퍼옥사이드 라디칼(superoxide radical)의 소거 활성을 측정하는 방법으로 Nitro-Blue Tetrazolium(NBT) 환원법을 사용하였다.

0.4mM xanthine과 0.24mM NBT를 포함하는 0.1M potassium phosphate buffer(pH7.5) 1㎖과 0.1M potassium phosphate buffer(pH7.5) 0.6㎖에 시료 0.1㎖을 혼합한 후 xanthine oxidase(0.05U/㎖) 1㎖을 가하여 37℃에서 20분간 반응시킨다. 1M HCl 1㎖을 첨가하여 반응을 종결시킨 후, 520㎚에서 흡광도를 측정하였다.

NBT 환원 저해능은 하기 수학식 1에 의해 산출되었고, 그 결과는 하기 표 3에 나타내었다.

[수학식 1]

B (Blank) : 0.4mM xanthine을 포함한 0.1M potassium phosphate buffer (pH7.5)와 1M HCl만 첨가한 반응액의 흡광도

C (Control) : 시료 대신 0.24mM NBT를 첨가한 반응액의 흡광도

S (Sample) : 시료를 첨가한 반응액의 흡광도

구분	NBT 환원 저해능 (%)
구분	0.1%	0.2%	0.5%	1.0%	2.0%	5.0%
실시예 1	10	11	20	33	43	60
실시예 2	13	13	26	37	47	65
실시예 3	12	15	30	41	50	78
실시예 4	25	43	50	57	64	84
실시예 5	11	12	21	32	40	55
실시예 6	10	11	20	31	59	80
실시예 7	15	19	32	43	52	76
실시예 8	17	20	29	40	57	76
실시예 9	8	10	23	33	45	78
실시예 10	10	11	20	32	41	75
실시예 11	9	14	18	30	43	79

[ 실험예 2: 수퍼옥사이드 디스뮤타아제 ( superoxide Dismutase , SOD ) 유사 활성 효과 확인]

SOD 유사활성은 마크룬드 등(Marklund S. et al. Eur. J. Biolchem., 47, p468, 1975)의 방법에 따라 과산화수소로 전환시키는 반응을 촉매하는 피로갈롤(pyrogallol)의 생성량을 측정하여 SOD 유사활성으로 나타내었다. 시료 0.2㎖에 Tris-HCl buffer (50mM Tris [hydroxymethyl] amino methane, 10mM EDTA, pH 8.5) 3㎖과 7.2mM 피로갈롤 0.2㎖을 첨가하여 25℃에서 10분간 반응 후, 1N HCl 1㎖을 가하여 반응을 정지시켰다. 반응액 중 산화된 피로갈롤 양은 420nm에서 흡광도를 측정하였다.

SOD 유사활성은 하기 수학식 2에 의해 산출되었고, 그 결과는 하기 표 4에 나타내었다.

[수학식 2]

구분	SOD 유사활성 (%)
구분	0.1%	0.2%	0.5%	1.0%	2.0%	5.0%
실시예 1	3	5	12	20	31	39
실시예 2	6	15	24	29	46	55
실시예 3	7	19	31	44	63	78
실시예 4	11	28	42	60	75	91
실시예 5	3	4	10	17	25	33
실시예 6	11	18	33	48	63	80
실시예 7	7	15	31	44	60	75
실시예 8	8	14	32	40	59	73
실시예 9	5	11	31	41	59	71
실시예 10	6	12	30	42	61	76
실시예 11	5	10	29	43	62	77

[ 실험예 3: 아질산염( NO ) 소거 활성 효과 확인]

아질산염(NaNO₂) 소거작용은 카토 등 (Kato H. et al., Agric. Biol. Chem. 51, p1333, 1987)의 방법에 따라 측정하였다. 1mM의 아질산나트륨(NaNO₂) 용액 2㎖에 시료를 첨가하고, 0.1N HCl (pH 1.2)과 0.2M 구연산염 완충용액(Citrate buffer)를 사용하였다. 반응 용액의 pH를 각각 1.2, 3.0, 6.0으로 조정한 후, 반응 용액의 부피를 10㎖으로 하여 37℃에서 1시간 반응시킨 후 각각 1㎖씩 취하여 2% 아세트산(acetic acid) 5㎖을 첨가하였다. 그리고 그리스시약(Griess Reagent, A:B=1:1, A:1% sulfanilic acid in 30% acetic acid, B:1% naphthylamine in 30% acetic acid) 0.4㎖ 첨가한 후 실온에서 15분간 반응시켰다. 반응 후 520nm에서 흡광도를 측정하였다.

아질산염 소거 활성은 하기 수학식 3에 의해 산출되었고, 그 결과는 하기 표 5에 나타내었다.

[수학식 3]

구분	아질산염 소거 활성 (%)
구분	0.1%	0.2%	0.5%	1.0%	2.0%	5.0%
실시예 1	4	7	10	15	19	27
실시예 2	6	9	14	22	37	50
실시예 3	8	20	28	35	41	57
실시예 4	11	24	33	41	59	74
실시예 5	3	8	9	13	20	26
실시예 6	5	9	14	26	36	51
실시예 7	6	9	15	22	31	50
실시예 8	4	7	13	20	34	52
실시예 9	6	5	14	21	33	49
실시예 10	7	8	12	21	30	45
실시예 11	6	6	13	20	31	47

[ 실험예 2: NO 생성 억제 효과 확인]

항염 활성 효과를 확인하기 위해 염증 유발에 중요한 역할을 하는 것으로 알려진 NO(Nitric Oxide) 생성 억제에 대한 효과를 알아보았다. 일반적인 NO의 형성은 박테리아를 죽이거나 종양을 제거시키는 중요한 역할을 하지만, 염증상태에서 iNOS에 의해 생성된 NO는 혈관 투과성, 부종 등의 염증반응을 촉진시킬 뿐만 아니라 염증매개체의 생합성을 촉진하여 염증을 심화시키는 것으로 알려져 있다.

Raw 264.7 세포를 10% 륜가 첨가된 DMEM 배지를 이용하여 5×10⁵ cell/well로 조절한 후 24 well plate에 접종하고, 시료를 처리하고 30분 배양 후 LPS(Lipopolysaccharide, 1㎍/㎖)를 첨가하여 24시간 배양하였다. 생성된 NO의 양은 NO detection kit (iNtRON)를 이용하여 측정한 값을 하기 계산식으로 계산하여 나타내었다. 대조군은 LPS를 단독으로 처리한 실험군으로 하였다.

NO 생성 억제율은 하기 수학식 4에 의해 산출되었고, 그 결과는 하기 표 6에 나타내었다.

[수학식 4]

구분	NO 생성 억제율 (%)
구분	0.5%	1.0%	2.0%	5.0%
실시예 1	0	13	24	41
실시예 2	7	17	27	46
실시예 3	11	21	30	57
실시예 4	28	37	44	65
실시예 5	5	12	20	36
실시예 6	7	18	37	55
실시예 7	8	14	31	50
실시예 8	6	15	30	53
실시예 9	7	16	33	54
실시예 10	5	18	32	52
실시예 11	6	17	31	50

[ 실험예 3: 프로스타글란딘 생성 억제 효과 확인]

염증 유발에 중요한 역할을 하는 것으로 알려진 프로스타글란딘 E₂(prostaglandin E₂, PGE₂) 생성 억제 효과를 알아보았다. Cyclooxygenase(COX)는 아라키돈산(arachidonic acid)을 프로스타글란딘으로 전환하는 효소로 COX-1과 COX-2로 분류된다. COX-1은 체내에서 혈소판의 형성, 위벽보호, 신장기능의 유지 등 정상적인 생체기능에 작용하며, COX-2는 염증매개 물질인 PGE₂를 형성시킨다. PGE2는 염증반응, 면역반응 그리고 혈관형성(angiogenesis)을 촉진하는 등 암 발생에도 깊이 관여하고 있는 것으로 알려져 있다.

Raw 264.7 세포를 10% 륜가 첨가된 DMEM 배지를 이용하여 5×10⁵ cell/well로 조절한 후 24 well plate에 접종하고, 시료를 처리하고 30분 배양 후 LPS(Lipopolysaccharide, 1㎍/㎖)를 첨가하여 24시간 배양하였다. 생성된 PGE₂의 양은 PGE₂ ELISA kit (R&D systems, Inc, USA)를 이용하여 측정한 값을 하기 계산식으로 계산하여 나타내었다. 대조군은 LPS를 단독으로 처리한 실험군으로 하였다.

PGE₂ 생성 억제율은 하기 수학식 5에 의해 산출되었고, 그 결과는 하기 표 7에 나타내었다.

[수학식 5]

구분	PGE₂ 생성 억제율 (%)
구분	0.5%	1.0%	2.0%	5.0%
실시예 1	10	18	22	46
실시예 2	9	13	22	37
실시예 3	14	18	26	56
실시예 4	31	39	47	61
실시예 5	14	15	33	41
실시예 6	7	15	29	47
실시예 7	10	18	30	48
실시예 8	8	17	24	45
실시예 9	9	14	25	40
실시예 10	6	18	27	41
실시예 11	7	16	26	44

[ 실험예 4: TNF -α 생성 억제 효과 확인]

항염 활성 효과를 확인하기 위해 초기 염증성 분자 중 하나인 TNF-α 생성 억제 효과를 확인하였다. TNF-α와 같은 염증성 사이토카인(pro-inflammatory cytokine)의 형성은 포스포리파제 A2(phospholipase A2)의 활성으로 인해 아라키돈산(arachidonic acid)이 프로사타글란딘(prostaglandin)으로 바뀌는 과정 및 NO 형성 과정으로 이어지게 된다.

Raw 264.7 세포를 10% FBS가 첨가된 DMEM 배지를 이용하여 5×10⁵ cell/well로 조절한 후 24 well plate에 접종하고, 시료를 처리하고 30분 배양 후 LPS(Lipopolysaccharide, 1㎍/㎖)를 첨가하여 24시간 배양하였다. 생성된 TNF-α의 양은 TNF-α ELISA kit (eBioscience, Inc, USA)를 이용하여 측정한 값을 하기 계산식으로 계산하여 나타내었다. 대조군은 LPS를 단독으로 처리한 실험군으로 하였다.

TNF-α 생성 억제율은 하기 수학식 6에 의해 산출되었고, 그 결과는 하기 표 8에 나타내었다.

[수학식 6]

구분	TNF-α 생성 억제율 (%)
구분	0.5%	1.0%	2.0%	5.0%
실시예 1	8	14	25	38
실시예 2	10	18	29	41
실시예 3	17	21	30	45
실시예 4	31	39	47	59
실시예 5	16	12	20	36
실시예 6	11	20	38	47
실시예 7	9	19	39	51
실시예 8	10	15	36	49
실시예 9	11	18	35	50
실시예 10	10	17	33	48
실시예 11	9	16	34	45

[ 실험예 5: 자외선에 의해 유발되는 염증반응 억제 확인]

사람 피부각질세포(human keratinocyte)를 페니실린(100 IU/ml), 스트렙토마이신(100 g/ml), 10% FBS(fetal bovine serum)를 함유하는 DMEM배지를 넣고 37℃를 유지하며 5% 이산화탄소를 포함하는 배양기 내에서 배양하였다. 수득된 피부각질세포를 6 well plate에 각 웰당 3×10⁵ 개로 분주한 다음 24시간 배양하였다. 배양 후 세포에 25mJ/㎠ 량의 자외선을 조사한 후 시료를 첨가한 후 24시간 추가 배양하였다. 생성된 TNF-α와 IL-1α의 양은 ELISA kit (eBioscience, Inc, USA)를 이용하여 측정한 값을 하기 계산식으로 계산하여 나타내었다. 대조군은 자외선를 단독으로 처리한 실험군으로 하였다.

TNF-α및 IL-1α 생성 억제율은 하기 수학식 7과 수학식 8에 의해 산출되었고, 그 결과는 하기 표 9와 표 10에 나타내었다.

[수학식 7]

[수학식 8]

구분	TNF-α 생성 억제율 (%)
구분	0.5%	1.0%	2.0%	5.0%
실시예 1	4	10	20	33
실시예 2	8	14	25	41
실시예 3	9	14	31	45
실시예 4	21	28	40	48
실시예 5	9	14	22	35
실시예 6	10	15	29	39
실시예 7	11	17	28	40
실시예 8	9	16	30	42
실시예 9	7	15	31	40
실시예 10	10	13	28	41
실시예 11	8	14	29	37

구분	IL-1-α 생성 억제율 (%)
구분	0.5%	1.0%	2.0%	5.0%
실시예 1	0	2	11	30
실시예 2	2	8	15	31
실시예 3	1	10	21	44
실시예 4	5	18	32	46
실시예 5	0	7	14	30
실시예 6	7	12	24	35
실시예 7	4	9	29	40
실시예 8	7	11	26	39
실시예 9	5	8	25	37
실시예 10	6	10	24	38
실시예 11	3	7	19	36

[ 제형예 1: 나래미역취 , 개미취( 자완 ) 및 바위취( 호이초 ) 혼합추출물을 함유한 화장수 제조]

나래미역취, 개미취(자완), 바위취(호이초) 혼합추출물 분말 (실시예 4)을 함유한 화장수(스킨로션)를 하기의 표 11의 함량으로 하기 제조 방법을 이용하여 1kg을 제조하였다.

번호	원 료	함량(중량%)
1	나래미역취 개미취(자완) 및 바위취(호이초) 혼합추출물 분말 (실시예 4)	1.0
2	글리세린	3.0
3	부틸렌글리콜	2.0
4	프로필렌글리콜	2.0
5	폴리옥시에칠렌 경화피마자유	1.0
6	에탄올	10.0
7	구연산	0.02
8	구연산나트륨	0.06
9	방부제	미량
10	향료	미량
11	정제수	잔량

상기 표 11에서 11번 물질에 2, 3, 4번 물질을 순서대로 반응용기에 투입하고 교반하여 용해시킨 후, 5,6번 물질을 50℃ 정도로 가열하여 용해시켰다. 이 후, 10번 물질을 투입하여 용해한 후 11번 물질에 투입하였다. 마지막으로 1, 7, 8, 9번 물질을 투입하여 충분히 교반시킨 뒤 25℃에서 3일간 숙성시켜 표제의 화장수를 제조하였다.

[ 제형예: 2] 나래미역취 , 개미취( 자완 ) 및 바위취( 호이초 ) 혼합추출물을 함유한 영양 로션 제조

나래미역취, 개미취(자완), 바위취(호이초) 혼합추출물 분말 (실시예 4)을 함유한 하이드로좀 영양로션을 하기 표 12의 함량으로 하기 제조 방법을 이용하여 1kg을 제조하였다.

번호	원 료	함량(중량%)
1	나래미역취, 개미취(자완) 및 바위취(호이초) 혼합추출물 분말 (실시예 4)	1.0
2	밀납	1.0
3	폴리솔베이트 60	1.5
4	솔비탄 세스퀴올레이트	0.5
5	유동 파라핀	10.0
6	소르비탄 스테아레이트	1.0
7	친유형 모노스테아린산 글리세린	0.5
8	스테아린산	1.5
9	글리세릴스테아레이트/피이지-100 스테아레이트	1.0
10	프로필렌글리콜	3.0
11	카르복시비닐폴리머	0.1
12	트리에탄올아민	0.2
13	방부제	미량
14	색소	미량
15	향료	미량
16	정제수	잔량

상기 표 12에서 10, 11, 13, 16번 물질을 혼합 교반 하면서 80~85℃ 사이로 가열하여 제조부에 투입한 후 유화기를 작용시키고 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 12번 물질을 80~85℃ 사이로 가열 용해한 후 유화시켰다. 유화가 끝나면 교반기를 이용하여 교반 하면서 50℃까지 냉각한 뒤 15번 물질을 투입하고 45℃까지 냉각한 뒤 14번 물질을 투입하고 35℃에서 1번 물질을 투입하여 25℃까지 냉각한 뒤 25℃에서 3일간 숙성시켜 표제의 영양로션을 제조하였다.

[ 제형예 3: 나래미역취 , 개미취( 자완 ) 및 바위취( 호이초 ) 혼합추출물을 함유한 영양 세럼 제조

나래미역취, 개미취(자완) 및 바위취(호이초) 혼합추출물 분말 (실시예 4)을 함유한 하이드로좀 영양세럼을 하기 표 13의 함량으로 하기 제조 방법을 이용하여 1kg을 제조하였다.

번호	원 료	함량(중량%)
1	나래미역취, 개미취(자완) 및 바위취(호이초) 혼합추출물 분말 (실시예 4)	1.0
2	잔탄검	0.02
3	부틸렌글리콜	10.0
4	포스포리피드	10.0
5	하이드록시에틸셀룰로오즈	0.1
6	소디움히아루로네이트	5.0
7	방부제	미량
8	향료	미량
9	정제수	잔량

상기 표 13에서 2, 3, 5, 9번 물질을 혼합 교반 하면서 40~45℃ 사이로 가열하여 제조부에 투입한 후 유화기를 작용시키고 4, 6, 7, 8번 물질을 제조부에 투입하고 혼합시켰다. 혼합이 끝나면 교반기를 이용하여 교반 하면서 35℃까지 냉각하고 1번 물질을 투입하여 25℃까지 냉각한 뒤 25℃에서 3일간 숙성시켜 표제의 영양 세럼을 제조하였다.

[ 제형예 4: 나래미역취 , 개미취( 자완 ) 및 바위취( 호이초 ) 혼합추출물을 함유한 에센스 제조]

나래미역취, 개미취(자완) 및 바위취(호이초) 혼합추출물 분말 (실시예 4)을 함유한 하이드로좀 에센스를 하기의 표 14의 함량으로 하기 제조 방법을 이용하여 1kg을 제조하였다.

번호	원 료	함량(중량%)
1	나래미역취, 개미취(자완) 및 바위취(호이초) 혼합추출물 분말 (실시예 4)	1.0
2	세테아릴알코올	1.0
3	폴리글리세릴 2-올레이트	0.8
4	세라마이드	0.1
5	스테아레스-20	1.2
6	콜레스테롤	1.5
7	디세틸포스페이트	0.4
8	농글리세린	5.0
9	마카다미아 오일	15.0
10	카르복시비닐폴리머	0.2
11	트리에탄올아민	0.2
12	산탄검	0.2
13	방부제	미량
14	향료	미량
15	정제수	잔량

상기 표 14에서 2, 3, 4, 5 및 6번 물질을 일정한 온도에서 균질화하여 비이온계 양친매성 지질을 제조하였다. 이 비이온계 양친매성 지질과 1, 7, 8 및 15번 물질을 혼합하고 일정한 온도에서 균질화하여 마이크로플루이다이져를 통과시키고 이어 9번 물질을 50~60℃로 가온하여 서서히 첨가하여 균질화한 후 다시 마이크로플루이다이져에 재차 통과시켰다. 그 후, 10, 11, 12, 13, 14번 물질을 투입하여 분산시켜 안정화하고 숙성시켜 표제의 에센스를 제조하였다.

[ 실험예 6: 제형 안정도 확인]

나래미역취, 개미취(자완) 및 바위취(호이초) 혼합추출물을 포함하는 제형예 1 내지 4에 대하여 실내(25℃), 냉장(4℃) 및 항온(45℃)로 일정하게 유지되는 실내, 냉장고 및 인큐베이터에서 불투명 초자 용기에 담아 12주 동안 보관 및 관찰(변색, 변취 및 상 분리)하며, 안정성을 확인하였다.

온도 조건	안정성 확인 (변색, 변취 및 분리)
온도 조건	제형예 1	제형예 2	제형예 3	제형예 4
실내(25℃)	0	0	0	0
냉장(4℃)	0	0	0	0
항온(45℃)	0	0	0	0

<제형 안정 등급>

0 : 변화 없음, 1 : 미세한 변화, 2 : 변화, 3: 극심한 변화

상기 표 15에서 나타난 바와 같이, 제형예 1 내지 4 제형 모두 , 25℃, 4℃ 및 45℃ 온도 조건하에서 변색, 변취 및 분리 현상이 나타나지 않고 안정하였다.

Claims

나래미역취, 개미취 및 바위취를 1 : 1 : 1의 중량비로 혼합한 후 70% 에탄올로 추출하여 수득되는 혼합추출물을 유효성분으로 포함하는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
나래미역취 70% 에탄올 추출물, 개미취 70% 에탄올 추출물 및 바위취 70% 에탄올 추출물을 1 : 1 : 1의 중량비로 포함하는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
제1항 또는 제2항에 있어서,
상기 화장료 조성물은,
염증 완화용인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
제1항 또는 제2항에 있어서
상기 화장료 조성물은,
주름개선용인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
제1항 또는 제2항에 있어서,
상기 화장료 조성물은,
노화방지용인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
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