KR100739232B1

KR100739232B1 - 아폽토시스 저해 활성을 나타내는 나도하수오 추출물

Info

Publication number: KR100739232B1
Application number: KR1020050052028A
Authority: KR
Inventors: 이충환; 고영희; 김진희; 이호재; 김동현; 황재인
Original assignee: 한국생명공학연구원
Priority date: 2005-06-16
Filing date: 2005-06-16
Publication date: 2007-07-13
Also published as: KR20060131522A

Abstract

본 발명은 아폽토시스 저해 활성을 나타내는 나도하수오 추출물에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 나도하수오 추출물 또는 에모딘이 아폽토시스 저해 활성을 가짐을 밝힘으로써, 나도하수오 추출물, 에모딘 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 함유한 약학적 조성물이 아폽토시스의 증가로 인한 염증 질환, 후천성 면역결핍증, 신경퇴행성 질환, 뇌졸중을 포함한 허혈성 질환 및 알콜 등 독성물질에 의한 간질환 등의 예방 및 치료에 이용될 수 있는 약학적 조성물에 관한 것이다.

나도하수오(Pleuropterus ciliinervis), 아폽토시스, 에모딘(emodin)

Description

아폽토시스 저해 활성을 나타내는 나도하수오 추출물{Pleuropterus ciliinervis extracts showing apoptosis inhibitive effect }

아폽토시스 또는 프로그램화 세포 사멸(programmed cell death, PCD)은 광범위한 생물학적 체계에서 손상되었거나 원치않는 세포를 자발적으로 자기-제거(self-elimination)하기 위한 기본적인 세포내 과정이다. 아폽토시스의 과정을 통하여 사멸한 세포의 내용물은 세포외로 유리되지 않아 다른 세포들에 손상을 주 지 않기 때문에 아폽토시스는 기관 발달, 조직 재형성, 세포내 항상성 유지 및 비정상적이고 손상된 세포의 제거에 필수적인 기작이다.

상기와 같이, 생물체내에서 중요한 역할을 담당하는 아폽토시스 과정은 반드시 정해진 프로그램에 따라 정교하게 조절되어야 하는데, 만약 아폽토시스가 저해되면 암, 자가면역질환(autoimmune disease) 및 바이러스 감염질환과 같은 질병이 유도되며[Kerr et al., Br. J. Cancer, 26, 239-257, 1972], 아폽토시스가 부적절하게 증가되면, 후천성 면역결핍증, 신경퇴행성 질환, 뇌졸중을 포함한 허혈성 질환 및 알콜 등 독성물질에 의한 간질환과 같은 질병이 유도된다.

아폽토시스가 진행되는 초기의 세포는 세포 연합(cell junctions)의 손상, 세포막의 물집형성(blebbing) 및 세포 수축(shrinkage) 등과 같은 현상이 유도되고 후기로 진행되면서 크로마틴 응집(chromatin aggregation), 세포질 및 핵 농축(cytoplasm and nuclei condensation), 마이토콘드리아 막 전위(mitochondrial membrane potential)의 손실, 원형질막 조성의 변화 및 아폽토시스 체(apoptotic body) 형성 등이 유도되어 전체적으로 형태학적 및 생화학적 변화를 거친다. 아폽토시스의 최종 결과로서 나타나는 올리고뉴클레오좀(oligonucleosome) 형태의 DNA 절편화(DNA fragmentation)는 아폽토시스를 겪는 세포의 전형적인 생화학적 특징이다[Green D. R., and Reed, J. C., Science, 281, 1309-1312, 1998].

현재 많은 아폽토시스 관련 연구결과, 아폽토시스에 관여하는 주요한 역할자(key players)와 기작이 다양한 생물체에서 밝혀지고 있다. 대표적으로, 포유동물 세포에서는 세포성 시스테인 프로테아제(cystein protease)의 일종인 캐스페 이즈(caspase)가 아폽토시스 기작을 조절하는데 중요한 역할을 담당하는 것으로 알려져 있는데, 상기 캐스페이즈는 아미노산 배열의 상동성에 따라 추정된 진화 계통수에 의하여 ICE(interlukin 1 converting enzyme), CPP32, ICH-1을 중심으로 하는 세 가지 형태로 구분될 수 있다.

캐스페이즈(caspase)는 수용체-매개성 신호 전달기작(receptor-mediated signal transduction), 성장인자의 결핍(depletion of growth factors), 산화적 스트레스(oxidative stress), DNA 손상 및 세포-세포(cell-cell) 또는 세포-기질 결합(cell-matrix interaction)의 붕괴 등을 포함하는 다양한 자극에 의해 활성화되어 폴리(ADP-라이보스)중합효소(poly(ADP-ribose) polymerase, RARP), 라민(lamine), 사이토케라틴(cytokeratins) 및 캐스페이즈-활성화 DNase 억제제(ICAD) 등과 같은 세포성 단백질들을 분해함으로써 아폽토시스 형성을 유도한다[Cryns, V., and Yuan, J., Genes Dev., 12, 1551-1570, 1998].

아폽토시스에 관한 활발한 연구결과, 지금까지 최소한 14 개의 서로 다른 부류에 속하는 캐스페이즈가 포유동물에서 밝혀졌으며, 이들이 모두 아폽토시스의 개시와 실행에 중추적인 역할을 하는 아스파르트산(aspartic acid) 잔기 이후의 펩타이드 기질을 절단함으로써 아폽토시스를 유발함이 보고되었다[Nunez et al., Oncogene, 17, 3237-3245, 1998].

아폽토시스 유도 활성을 가지는 물질은 비정상적인 세포의 조절되지 않은 성장 및 확산이 일어나는 각종 암에서 세포 사멸을 유도하는 데 사용할 수 있는 것으로 보고되고 있다[Siegel, D.S. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. 6;95(1),162-6, 1998].

이에 반해, 이러한 아폽토시스 저해 활성을 가지는 화합물은 염증 질환, 특히 아폽토시스 증가로 인한 염증질환[Lee et al., BBRC, 302, 539-544, 2003],후천성 면역결핍증[Donnerer J., Pharmacology, 269, 197-204, 2003], 알츠하이머병, 파킨슨병 등의 신경퇴행성질환[Li et al., FEBS Lett., 21, 261-269, 2004], 뇌졸중을 포함한 허혈성 질환[Gotz et al., J.Neurosci. Res., 56, 420-426, 1999], 알콜 등 독성물질로 인한 간질환[Vanesa et al., Life Sci., 24, 683-692, 2005]의 치료 및 예방에 이용될 수 있다고 보고되고 있다.

그리고, 에모딘은 대황 등에서 추출된 바 있는 화합물로서, 종래에 캐스페이즈를 활성화시켜 아폽토시스를 유도하는 물질로 알려져 있었고[Lee,H.Z., Br. J. Pharmaco., 134(5), 1093-1103, 2001; Srinivas et al., Eur. J. Pharmaco., 473(2/3), 117-125, 2003; Shieh et al., Life Sciences, 74(18), 2279, 2004], 아폽토시스를 저해할 수 있다는 사실은 아직까지 보고된 바 없었다.

이에 본 발명자들은 아폽토시스 저해 활성을 가지는 물질을 천연물로부터 탐색한 결과, 나도하수오(Pleuropterus ciliinervis)로부터 유효성분을 분리하였고, 이에 대한 이화학적 분석을 실시하여, 상기 유효성분이 다음 화학식 I로 표시되는 에모딘(emodin)임을 밝히고, 에모딘이 종래에 보고된 바 없는 아폽토시스 저해 활성을 나타내는 것을 밝힘으로서 본 발명을 완성하였다.

에모딘은 각종 암에서 세포 사멸을 유도하는 데에 사용할 수 있다고 종래에 보고되고 있었으나, 본 발명에서는 아폽토시스 저해 활성을 가짐을 최초로 밝혀, 아폽토시스 증가로 인한 염증 질환, 후천성 면역결핍증, 신경퇴행성질환, 뇌졸중을 포함한 허혈성 질환, 알콜 등 독성물질로 인한 간질환의 치료 및 예방에 이용될 수 있음을 처음으로 제시하였다.

또한, 본 발명은 나도하수오를 메탄올 추출 및 에틸아세테이트 추출과 크로마토그래피를 이용하여 아폽토시스 저해활성을 가지는 화합물을 분리하는 방법을 제공하는데 그 목적이 있다.

또한, 본 발명은 상기 에모딘 또는 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 함유하는 아폽토시스 저해제용 약학적 조성물을 제공하는데 또 다른 목적이 있다.

본 발명은 나도하수오(Pleuropterus ciliinervis) 추출물을 유효성분으로 함유하는 아폽토시스 증가로 인한 염증 질환, 후천성 면역결핍증, 신경퇴행성 질환, 뇌졸중을 포함한 허혈성 질환 및 알콜 등 독성물질에 의한 간질환으로 이루어진 군으로부터 선택된 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 그 특징으로 한다.

또한, 본 발명은 나도하수오로부터 아폽토시스 저해 활성을 가진 추출물을 제조하고, 유효성분을 분리하는 방법을 또 다른 특징으로 한다.

이와 같은 본 발명을 더욱 상세히 설명하면 다음과 같다.

본 발명은 나도하수오 추출물, 에모딘(emodin) 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염이, 아폽토시스의 증가로 인한 염증 질환, 후천성 면역결핍증, 신경퇴행성 질환, 뇌졸중을 포함한 허혈성 질환 및 알콜 등 독성물질에 의한 간질환 등을 저해하거나 예방하는데 유용하게 이용될 수 있음을 밝힘으로써, 나도하수오 추출물, 에모딘 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 함유하는 약학적 조성물에 관한 것이다.

먼저, 나도하수오로부터 아폽토시스 저해 활성을 갖는 나도하수오 추출물을 제조하는 방법은 나도하수오를 채취하여 절단하여, 메탄올로 40 ~ 50 시간 환류추출하고 감압여과한 후, 에틸아세테이트로 추출하여 나도하수오 추출물을 제조한다.

또한, 나도하수오로부터 에폽토시스 저해 활성을 갖는 유효성분을 분리하는 방법은 다음과 같다.

1) 상기와 같이 나도하수오 추출물 제조하는 단계;

2) 상기 나도하수오 추출물을 메탄올에 용해시킨 후 겔 여과 크로마토그래피 (gel filtration chromatography)를 수행하여 활성분획을 모으는 단계; 및

3) 상기 활성분획을 고압액체 크로마토그래피(high pressure liquid chromatography)로 분리하고 용매를 감압건조기로 제거한 후 냉동건조하여 아폽토시스 저해 활성의 유효성분을 얻는 단계로 이루어진다.

상기 단계를 보다 구체적으로 설명하면, 먼저, 에틸아세테이트로 추출한 나도하수오 추출물을 메탄올에 용해시킨 후 세파덱스 LH-20 젤 칼럼 크로마토그래피(sephadex LH-20 gel column chromatography)를 수행하여 활성분획을 모은다.

그리고 나서, C18 칼럼과 물-아세토나이트릴(acetonitrile) 용출 용매(20% 아세토나이트릴~100% 아세토나이트릴, 30분)를 이용하는 고압액체 크로마토그래피(high pressure liquid chromatography)로 활성분획을 분리하여 유지시간 33 분대의 활성분획으로부터 아폽토시스 저해 활성을 갖는 유효성분을 얻는다.

이렇게 얻어진 유효성분에 대하여 ESI-MS(electron spray ionization mass spectrometer), 핵자기 공명 스펙트럼 등의 방법으로 이화학적 특성을 분석한 결과, 상기 화합물은 하기와 같은 이화학적 특성을 갖는 것으로 확인되었다.

1) 물질 성상: 분말 2) 분자량: 270

3) 분자식: C₁₅H₁₀O₅ 4) 질량분석치(M-H): 269(m/z)

또한, 듀트로 메탄올(CD₃OD)을 용매로 이용하여 측정한 수소 핵자기공명 스펙트럼 및 탄소 핵자기공명 스펙트럼 분석결과, 상기 화합물은 하기 화학식 1의 에모딘(emodin) 또는 1,3,8-트리하이드록시-2-메틸-안트라퀴논으로 알려진 화합물로 판명되었다.

[화학식 1]

본 발명은 나도하수오 추출물, 화학식 1로 표시되는 에모딘 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 함유하는 아폽토시스 저해제용 약학적 조성물을 그 특징으로 한다.

본 발명에서 사용한 에모딘은 나도하수오 등의 천연물에서 분리시키거나, 통상적인 유기 합성법으로 제조될 수 있다.

이러한 나도하수오 추출물 또는 에모딘은 아폽토시스의 증가로 인한 염증 질환, 후천성 면역결핍증, 신경퇴행성 질환, 뇌졸중을 포함한 허혈성 질환 및 알콜 등 독성물질에 의한 간질환 등을 저해하거나 예방하는데 유용하게 이용될 수 있는 아폽토시스 저해 활성이 뛰어난 것으로 확인되었다.

한편, 본 발명의 유효성분인 에모딘은 약학적으로 허용 가능한 염의 형태로 사용할 수 있으며, 염으로는 약학적으로 허용 가능한 유리산(free acid)에 의해 형성된 산 부가염이 유용하다. 에모딘은 당해 기술 분야에서 통상적인 방법에 따라 약제학적으로 형용되는 산 부가염을 형성할 수 있다. 유리산으로는 유리산과 무기산을 사용할 수 있으며, 무기산으로는 염산, 브롬산, 황산, 인산 등을 사용할 수 있고 유기산으로는 구연산(citric acid), 초산, 젖산, 주석산(tartaric acid), 말레인산, 푸마르산(fumaric acid), 포름산, 프로피온산(propionic acid), 옥살산, 트리플루오로아세트산, 벤조산, 글루콘산, 메탄술폰산, 글리콜산, 숙신산, 4-톨루엔술폰산, 갈룩투론산, 엠본산, 글루탐산 또는 아스파르트산 등을 사용할 수 있다.

따라서, 본 발명의 나도하수오 추출물, 에모딘 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 함유하는 조성물은 아폽토시스 증가로 인한 염증 질환, 후천성 면역결핍증, 신경퇴행성 질환, 뇌졸중을 포함한 허혈성 질환 및 알콜 등 독성물질에 의한 간질환의 예방 또는 치료에 사용될 수 있다.

본 발명의 조성물은 임상 투여시에 경구 또는 비경구로 투여, 예를 들어 정맥 내, 피하, 복강 내 또는 국소 적용할 수 있으며, 일반적인 의약품 제제의 형태로 사용될 수 있다.

본 발명의 약학적 조성물은 경구 투여용 제형, 예를 들면 정제, 트로키제(troches), 로렌지(lozenge), 수용성 또는 유성현탁액, 조제분말 또는 과립, 에멀젼, 하드 또는 소프트 캅셀, 시럽 또는 엘릭실제(elixirs)로 제제화된다. 정제 및 캅셀 등의 제형으로 제제하기 위해 락토오스, 사카로오스, 솔비톨, 만니톨, 전분, 아밀로펙틴, 셀룰로오스 또는 젤라틴과 같은 결합제; 디칼슘 포스페이트와 같은 부형제; 옥수수 전분 또는 고구마 전분과 같은 붕괴제; 스테아린산 마그네슘, 스테아린산 칼슘, 스테아릴푸마르산 나트륨 또는 폴리에틸렌글리콜 왁스와 같은 윤활유가 함유된다. 캅셀제형의 경우는 상기에서 언급한 물질 이외에도 지방유와 같은 액체 담체를 함유한다.

또한, 본 발명의 약학적 조성물은 비 경구로 투여할 수 있으며, 비 경구 투 여는 피하주사, 정맥주사, 근육 내 주사 또는 흉부 내 주사 주입방식에 의한다. 비 경구 투여용 제형으로 제제화하기 위해서는 상기 화학식 1의 화합물을 안정제 또는 완충제와 함께 물에서 혼합하여 용액 또는 현탁액으로 제조하고 이를 앰플 또는 바이알의 단위 투여형으로 제제한다.

화학식 1로 표시되는 에모딘의 유효 용량은 일반적으로 성인 환자 체중 1 kg 당 1 내지 50 mg/일이고, 바람직하기로는 5내지 20 mg/일이며, 의사 또는 약사의 판단에 따라 일정 시간 간격으로 1 일 수회, 바람직하기로는 하루 2 회 내지 3 회 분할 투여될 수 있다.

또한, 에모딘에 대하여 급성독성 실험을 한 결과, MLD(mouse lethal dosage) 값이 500 mg/kg 이상으로 매우 안정하였다.

이하, 본 발명을 다음의 실시예에 의거하여 더욱 상세하게 설명하겠는바, 본 발명이 이들에 의해 한정되는 것은 아니다.

실시예 1: 나도하수오 추출물의 제조

아폽토시스 기작을 조절할 수 있는 화합물을 탐색하기 위하여, 본 발명자들은 나도하수오로부터 추출물을 제조하였다.

먼저, 일신약품에서 구입한 나도하수오 1 kg을 100% 메탄올로 48 시간 동안 추출하여 감압농축한 후 에틸아세테이트로 추출하여 나도하수오 추출물을 제조하였다.

실시예 2: 아폽토시스 저해 활성 유효성분의 분리

아폽토시스 기작을 조절할 수 있는 화합물을 탐색하기 위하여, 본 발명자들은 추출 및 크로마토그래피를 이용하여 나도하수오로부터 화합물을 분리하였다.

먼저, 실시예 1에서와 같이 제조한 나도하수오 추출물을 농축하여, 농축물질을 2 ㎖의 메탄올에 용해시킨 후 세파덱스 LH 젤 칼럼 크로마토그래피를 수행하여 활성분획을 모았다. 상기 활성분획을 물-아세토나이트릴(20% 아세토나이트릴 ~ 100% 아세토나이트릴, 30분) 용출용매로 이용하는 고압액체 크로마토그래피(컬럼: C18, 유속: 1.5 ㎖/분, 220 nm 검출)를 수행하여 유지시간 33 분대의 활성분획을 분리하고 감압건조기로 용매를 제거한 후 얻은 잔사(residue)를 냉동건조하여 화학식 1의 화합물 3.0 ㎎을 얻었다.

실시예 3: 실시예 2에서 얻어진 화합물의 이화학적 특성 분석

실시예 2에서 얻어진 화학식 1로 표시되는 화합물의 이화학적인 특성을 분석하기 위하여, 본 발명자들은 ESI-MS(electrospray ionization mass spectrometry, Fisons VG Quattro 400 mass spectrometer, USA), 수소 및 탄소 핵자기 공명 스펙트럼 등의 방법을 이용하였다. NMR 실험은 각 시료를 듀트로 메탄올(CD₃OD) 용매로 녹여 5 ㎜ NMR tube에서 측정하였으며, 각 용매의 피이크를 내부 표준물질로 하거나 TMS(tetramethylsilane)의 피이크를 기준으로 하여 화학이동을 측정하였다. 상기 화합물에 대하여 물질의 성상, 분자량, 분자식 및 질량을 분석한 결과, 본 발명의 화합물은 하기와 같은 이화학적인 특성을 갖는 것으로 확인되었다.

그 결과, 화학식 1의 화합물의 물질 성상은 분말이고, 분자량은 270이며 분자식은 C₁₅H₁₀O₅로 확인되었고, 상기 화합물의 질량분석치(M-H)^-는 269(m/z)이었다. 상기 이화학적 특성과 함께 듀트로 메탄올(CD₃OD)을 용매로 측정한 수소 핵자기공명 스펙트럼 및 탄소 핵자기공명 스펙트럼 분석결과, 화학식 1로 표시되는 본 발명의 화합물은 에모딘(emodin) 또는 1,3,8-트리하이드록시-2-메틸-안트라퀴논으로 알려진 화합물로 판명되었다.

화학식 1의 화합물

¹³C NMR (CD₃OD) δ 21.2, 106.3, 109.6, 119.2, 119.8, 123.1, 123.6, 140.7, 142.2, 142.5, 158.5, 160.0, 162.1, 187.0

실험예 1: 나도하수오 추출물 및 이로부터 분리된 에모딘의 아폽토시스 저해 활성 측정

실시예 1에서 얻은 나도하수오 추출물과 에모딘의 아폽토시스 저해효과를 측정하기 위하여, 본 발명자들은 인간혈액암 세포주인 U937 세포를 이용하여 하기와 같은 생체외 실험을 수행하였다.

U937 세포를 96-웰 마이크로플레이트(96-well microplate)에서 5X10⁶ 세포/웰이 될 때까지 배양한 후 아폽토시스 유도물질인 에토포사이드 10 ㎍/㎖ 및 본 발명의 화합물을 1 내지 100 ㎍/ml의 농도로 상기 U937 세포에 처리하고 5 % CO₂- 95 % 공기조건으로 37 ℃에서 5 시간 동안 배양하여 아폽토시스 저해효과를 비교하였다. 이 때, 에토포사이드만 처리한 세포를 양성대조군으로 이용하고, 에토포사이드 및 본 발명의 나도하수오 추출물 및 에모딘 모두를 처리하지 않은 세포를 음성대조군으로 사용하였다. 5시간 후 현미경으로 U937 세포의 모양을 관찰하여 아폽토시스 여부를 1 차 판정하고, 원심분리하여 얻은 세포를 이용하여 DEVD-AFC(Z-Asp-Glu-Val-Asp-7-amino-4-trifluoromethyl coumarin)를 기질로 캐스페이즈-3 활성을 측정하였다. 양성대조군(에토포사이드만 처리한 경우)의 캐스페이즈-3 활성과 음성대조군(에토포사이드, 나도하수오 추출물 및 에모딘을 처리하지 않은 경우)의 캐스페이즈-3 활성을 기준으로 본 발명의 화합물이 나타내는 아폽토시스 저해효과를 결정하여 하기 표 1에 나타내었다.

U937 세포주에서의 아폽토시스 저해 활성 비교

화합물	저해율(IC₅₀,㎍/㎖)
나도하수오 추출물	65.5
에모딘(emodin)	10.0
PDTC(pyrrolidine dithiocarbonate)	15.0

상기 표 1에 나타나 있듯이, 에토포사이드에 의하여 유도된 U937 세포의 아폽토시스에 대한 나도하수오 추출물과 에모딘의 저해 활성 농도(IC₅₀, 50%의 저해효과를 나타내는데 요구되는 농도)는 각각 65.5, 10.0 ㎍/㎖이며 표준 비교물질인 PDTC(pyrrolidine dithiocarbonate)의 저해 활성 농도인 15.0 ㎍/㎖로 나타나, 본 발명에 따른 나도하수오 추출물 및 에모딘은 표준 비교물질인 PDTC보다 우수한 아폽토시스 저해효과를 가짐을 알 수 있었다. 상기의 결과로부터, 본 발명의 에모딘은 생체외에서 아폽토시스를 저해할 수 있는 천연물 유래의 화합물임을 확인할 수 있었다.

실험예 2: 랫트에 대한 경구투여 급성 독성실험

6주령의 특정병원부재(SPF) SD계 랫트를 사용하여 급성독성실험을 실시하였다. 군당 2 마리씩의 동물에 에모딘을 각각 0.5 % 메틸셀룰로즈 용액에 현탁하여 1 g/kg/1 ㎖의 용량으로 단회 경구투여하였다. 시험물질 투여후 동물의 폐사여부, 임상증상, 체중변화를 관찰하고 혈액학적 검사와 혈액생화학적검사를 실시하였으며, 부검하여 육안으로 복강장기와 흉강장기의 이상여부를 관찰하였다. 시험결과, 시험물질을 투여한 모든 동물에서 특기할 만한 임상증상이나 폐사된 동물은 없었으며, 체중변화, 혈액검사, 혈액생화학 검사, 부검소견 등에서도 독성변화는 관찰되지 않았다. 이상의 결과 실험된 화합물은 모두 랫트에서 500 mg/kg까지 독성변화를 나타내지 않으며 경구 투여 최소치사량 (LD₅₀)은 500 mg/kg이상인 안전한 물질로 판단되었다.

상기에서 확인된 바와 같이, 화학식 1로 표시되는 본 발명의 에모딘은 우수한 아폽토시스 저해효과를 나타내어 아폽토시스 저해제용 약학적 조성물로 제제될 수 있었다.

제제예 1: 시럽제의 제조

본 발명의 화학식 1로 표시되는 에모딘 및 약학적으로 허용되는 그의 염을 유효성분 2 %(중량/부피)로 함유하는 시럽은 다음과 같은 방법으로 제조하였다.

에모딘의 산부가염, 사카린, 당을 온수 80 g에 용해시켰다. 이 용액을 냉각시킨 후, 여기에 글리세린, 사카린, 향미료, 에탄올, 소르빈산 및 증류수로 이루어진 용액을 제조하여 혼합하였다. 이 혼합물에 물을 첨가하여 100 ㎖가 되게 하였다. 상기 부가염은 실시예에 의한 다른 염으로 대치시킬 수 있다.

상기 시럽제의 구성성분은 다음과 같다.

에모딘 · 염산염 ................. 2 g

사카린 ......................... 0.8 g

당 ............................ 25.4 g

글리세린 ....................... 8.0 g

향미료 ........................ 0.04 g

에탄올 ......................... 4.0 g

소르빈산 ....................... 0.4 g

증류수 .......................... 정량

제제예 2: 정제의 제조

유효성분 15 mg이 함유된 정제는 다음과 같은 방법으로 제조하였다.

에모딘 · 염산염 250 g을 락토오스 175.9 g, 감자전분 180 g 및 콜로이드성 규산 32 g과 혼합하였다. 이 혼합물에 10 % 젤라틴 용액을 첨가시킨 후, 분쇄해서 14 메쉬체를 통과시켰다. 이것을 건조시키고 여기에 감자전분 160 g, 활석 50 g 및 스테아린산 마그네슘 5 g을 첨가해서 얻은 혼합물을 정제를 제조하였다.

제제예 3: 주사액제의 제조

유효성분 10 mg을 함유하는 주사액제는 다음과 같은 방법으로 제조하였다.

에모딘 · 염산염 1 g, 염화나트륨 0.6 g 및 아스코르빈산 0.1 g을 증류수에 용해시켜서 100 ㎖을 만들었다. 이 용액을 병에 넣고 20℃에서 30 분간 가열하여 멸균시켜 주사액제를 제조하였다.

상기에서 살펴본 바와 같이, 본 발명에 따른 나도하수오 추출물 및 이로 부터 분리된 에모딘은 독성은 없고 우수한 아폽토시스 저해효과를 나타내므로 아폽토시스 증가로 인한 염증 질환, 후천성 면역결핍증, 신경퇴행성 질환, 뇌졸중을 포함한 허혈성 질환 및 알콜 등 독성물질에 의한 간질환 등을 저해하거나 예방하는데 유용하게 이용될 수 있다.

Claims

나도하수오(Pleuropterus ciliinervis) 추출물을 유효성분으로 함유하는 아폽토시스 증가로 인한 독성물질에 의한 간질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
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