KR101756905B1 - 석송강 추출물 또는 이로부터 분리된 화합물을 포함하는 알츠하이머병의 예방 또는 치료용 조성물-ⅱ - Google Patents

석송강 추출물 또는 이로부터 분리된 화합물을 포함하는 알츠하이머병의 예방 또는 치료용 조성물-ⅱ Download PDF

Info

Publication number
KR101756905B1
KR101756905B1 KR1020160138349A KR20160138349A KR101756905B1 KR 101756905 B1 KR101756905 B1 KR 101756905B1 KR 1020160138349 A KR1020160138349 A KR 1020160138349A KR 20160138349 A KR20160138349 A KR 20160138349A KR 101756905 B1 KR101756905 B1 KR 101756905B1
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
compound
disease
dihydro
methoxyphenyl
extract
Prior art date
Application number
KR1020160138349A
Other languages
English (en)
Other versions
KR20160126954A (ko
Inventor
민병선
최재수
Original Assignee
대구가톨릭대학교산학협력단
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 대구가톨릭대학교산학협력단 filed Critical 대구가톨릭대학교산학협력단
Priority to KR1020160138349A priority Critical patent/KR101756905B1/ko
Publication of KR20160126954A publication Critical patent/KR20160126954A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR101756905B1 publication Critical patent/KR101756905B1/ko

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/11—Pteridophyta or Filicophyta (ferns)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/105—Plant extracts, their artificial duplicates or their derivatives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
    • A61K31/35—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having six-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom
    • A61K31/352—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having six-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom condensed with carbocyclic rings, e.g. methantheline 
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7028—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages
    • A61K31/7034—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a carbocyclic compound, e.g. phloridzin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H15/00—Compounds containing hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
    • C07H15/26—Acyclic or carbocyclic radicals, substituted by hetero rings

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Alternative & Traditional Medicine (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)

Abstract

본 발명은 석송강 추출물 또는 이로부터 분리된 화합물을 포함하는 알츠하이머병의 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것이며, 상기 석송강 추출물 또는 이로부터 분리된 화합물은 아세틸콜린에스테라아제, 부티릴콜린에스테라아제 및 β-세크레타제 1의 억제 효과가 우수하여 알츠하이머병의 예방 또는 치료용 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.

Description

석송강 추출물 또는 이로부터 분리된 화합물을 포함하는 알츠하이머병의 예방 또는 치료용 조성물-Ⅱ {A composition comprising extract of Lycopodiella cernua or compound isolated therefrom for preventing or treating of Alzheimer disease-Ⅱ}
본 발명은 석송강(Lycopodiella cernua) 추출물 또는 이로부터 분리된 화합물을 포함하는 알츠하이머병의 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것이다.
생명과학 및 의학의 급속한 발전으로 인간의 평균수명이 늘어나고, 장노년 인구의 비중이 점차 늘어남에 따라 새로운 사회적 문제들이 부각되고 있다. 특히 뇌졸증(stroke), 알츠하이머병(Alzheimer disease, AD), 파킨슨병(Parkinson disease, PD) 등의 노인성 신경계 질환들은 치명적인 신경계의 기능장애로 나타나며, 현재까지는 이를 막을 수 있는 효과적인 방법이 없어 삶의 질 저하 및 막대한 의료비의 지출 등으로 인해 주변 가족에게 상당한 정신적인 부담을 주고 있다.
특히, 노인성 신경계 질환 중 가장 흔하게 나타나고 있는 것이 알츠하이머병이며, 이는 치매를 일으키는 가장 흔한 퇴행성 뇌질환으로 기억력, 사고력 및 행동상의 문제를 야기하는 뇌 질병이다. 치매는 일상생활을 방해할 정도로 심각한 기억력 및 기타 지적 능력의 상실을 의미하는 일반 용어로 알츠하이머병은 치매 사례의 60~80%를 차지하는 것으로 추정된다. 미국의 경우, 5백만 명 이상이 알츠하이머병에 걸렸으며 미국 내 65세 이상의 인구 비율이 계속 증가함에 따라 알츠하이머병 및 기타 치매에 걸린 미국인의 수는 매년 커질 것으로 예상된다.
알츠하이머병의 발병 기전과 원인에 대해서는 아직까지 정확히 알려져 있지 않으며, 현재까지는 신경전달물질인 아세틸콜린(acetylcholine)의 합성 감소, β-아밀로이드(beta-amyloid)의 침착, 타우 단백질(tau protein)의 과인산화로 인한 신경 세포의 손상이 주된 원인으로 알려져 있다(이은희 et. al., 2008).
아세틸콜린은 신경전달물질의 하나이며, 대부분 신경세포인 뉴런과 골격근이 만나는 부분에서 발견된다. 또한, 신경말단에서 분비된 아세틸콜린은 자극의 전달이 끝나면 아세틸콜린에스테라아제(acetylcholinesterase, AChE)에 의해 콜린과 아세트산으로 분해되어 불활성화 되며, 상기 콜린은 콜린아세틸라아제(cholinacetylase)의 작용에 따라 효소적으로 합성되어 다시 아세틸콜린이 된다. 아세틸콜린에스테라아제 억제제는 기억 및 학습을 위한 중요한 화학전령인 아세틸콜린의 분해를 막고 이의 수준을 높게 유지하여 신경세포 사이의 신호전달을 지원한다. 또한, 최근 연구에서는 부티릴콜린에스테라아제(butyrylcholinesterase, BChE)가 뇌에서 아세틸콜린을 분해시키며 콜린 전달에 일정 역할을 한다고 밝혀졌다. 따라서 상기 아세틸콜린에스테라아제 및 부티릴콜린에스테라아제의 억제는 시냅스 간극의 아세틸콜린 농도를 증가시켜 아세틸콜린의 신경전달을 강화시키고, 결손을 개선시켜준다.
현재까지 알츠하이머병의 근본적인 치료방법은 개발되지 않았지만, 각국에서 사용되고 있는 치료제로는 아세틸콜린에스테라아제 억제제가 대부분이며 이는 병의 진행을 완전히 막을 수 없고, 약간의 병리적 증상을 완화시키거나 진행 정도를 늦추는 효과만 있다. 이 계열의 약물로는 도네페질(donepezil), 리바스티그민(rivastingmine), 갈란타민(galantamine), 타크린(tacrine) 등이 있다. 치료제의 개발과정에 있어, 전 세계적으로 아세틸콜린에스테라아제가 가장 많이 약리작용점으로 채택되고 있는 연구 추세에 따라, 여러 천연물을 이용하여 부작용이 적고 그 효과가 우수한 아세틸콜린에스테라아제 억제제의 약제 및 기능성 소재를 개발할 필요가 있다.
또한, β-세크레타제 1(β-secretase 1)은 β-아밀로이드의 전구체 단백질(amyloid-β-precursor protein, APP)에 작용하여 β-아밀로이드 조각을 생성하는 역할을 한다. 또한, β-아밀로이드의 축적이 알츠하이머병을 일으키는 주된 원인으로 알려져 있으므로, β-세크레타제의 억제활성에 대한 물질 개발은 β-아밀로이드 전구체 단백질이 절단되지 못하도록 하여 알츠하이머병의 치료에 도움이 될 수 있다. 또한, β-세크라타제 억제제의 경우 x-선 결정기술(x-ray crystallography)로 명확한 구조가 밝혀져 있어 다양한 억제제들이 용이하게 개발될 수 있으나, 효능이 있고 치료제로써 사용가능 한 것은 아직까지 없는 상황이다. 따라서 새로운 β-세크라타제 억제제의 개발은 알츠하이머병의 치료에 큰 도움을 줄 수 있을 것이다.
석송강(Lycopodiella cernua)은 포자를 만드는 관다발식물의 한 강으로 석송류와 이와 비슷한 식물이 속한다. 세계적으로 널리 퍼져있으며 4속, 약 1,000여 종으로 이루어져 있다. 이 강의 식물은 크기가 작고, 곧추서거나 기기도 하여 다른 식물 위에서 자라기도 한다. 줄기는 2갈래로 갈라지고 가지치기를 한다. 뿌리·줄기·잎의 분화가 뚜렷하며 광합성을 할 수 있다. 포자낭을 포자엽이라고 하는 특수한 잎에 달리는데 이 포자엽이 모여 원추 모양의 포자수를 만든다. 상록성 다년초로서 제주, 전남, 함북, 함남, 강원 등지에 서식하며 국외로는 일본, 타이완, 중국, 쿠릴, 유럽, 아프리카 등 북반구의 온대에서 열대지역의 고산까지 분포한다.
중국에서는 석송을 전통적으로 류마티즘과 백일해, 간염, 신장 결석, 타박상 등의 치료제로 이용하였으며(Zhang, X. C. et. al., 2004; Xiao, P. G., 2002), 베트남에서는 중추 신경계 치료를 위한 민간요법에 사용되기도 하였다. 또한, 한국공개특허 제2011-0118145호에는 석송(lycopoduim clavatum) 추출물 또는 이로부터 분리된 화합물이 암 치료에 효과가 있음을 제시하였으며, 석송으로부터 분리된 식물성염기의 항기억상실 효과(Chuong, N. N. et al., 2014), 남미 석송과에서 분리된 식물성염기의 항콜린에스테라아제 활성(Konrath, E. L. et al., 2013) 등의 다양한 효과가 개시된바 있다. 그러나 본 발명의 석송강으로부터 분리된 화합물들이 아세틸콜린에스테라아제 또는 부티릴콜린에스테라아제 또는 β-세크레타제 1의 억제 효과가 있음은 아직 알려지지 않은 상황이다.
한국공개특허 제2011-0118145호, 조성물 및 이의 응용방법, 2011년 10월 28일 공개.
Zhang, X. C. et al., Flora of China; Science Press: Beijing, 6, 70, 2004. Xiao, P. G., Modern Chinese Material Medica; Chemistry and Industry Press: Beijing, 3, 135, 2003. Chuong, N. N. et al., Anti-amnesic effect of alkaloid fraction from Lycopodiella cernua (L.) Pic. Serm. on scopolamine-induced memory impairment in mice, Neuroscience letters, 575, 42, 2014. Konrath, E. L. et al., Alkaloid profiling and anticholinesterase activity of South American Lycopodiaceae species, J. Enzyme. Inhib. Med. Chem., 28, 218, 2013. 이은희 et al., 한국인의 알츠하이머병 환자에서 아세틸콜린 에스터레이스 억제제의 뇌척수액 β-아밀로이드 1-42 분획과 인산화타우단백 농도에 미치는 효과, 대한신경과학회지, 25, 224, 2008. 정지영, 알츠하이머병과 치료제 개발, 범부처신약개발사업단.
본 발명의 목적은 석송강 추출물 또는 이로부터 분리된 화합물을 포함하는 알츠하이머병의 예방 또는 치료용 조성물을 제공하는 데 있다.
본 발명은 석송강(Lycopodiella cernua) 추출물 또는 이로부터 분리된 화합물을 포함하는 알츠하이머병의 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것이다. 보다 자세하게는, 하기 화학식 1의 람나진(화합물 1), 케르세틴 3,3'-디메틸 에테르(화합물 2), 구아이아실글리세롤(화합물 3), 아피게닌(화합물 4), 이소샤프토사이드(화합물 5), 아피게닌-4'-O-(2'',6''-디-O-p-쿠마로일)-β-D-글루코피라노사이드(화합물 6), 봄바신-4-O-β-D-글루코피라노사이드(화합물 7), (7R,8S)-7,8-디히드로-8-히드록시메틸-7-(3-메톡시페닐-4-O-β-D-글루코피라노사이드)-1'-벤조푸란프로피온산(화합물 8), 아피게닌-4'-O-(6''-O-p-쿠마로일)-β-D-글루코피라노사이드(화합물 9), 디히드로디히드로코니페릴알코올-4-O-β-D-글루코피라노사이드(화합물 10) 및 샤프토사이드(화합물 11)로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상의 화합물을 포함하는 석송강(Lycopodiella cernua) 추출물을 함유하는 것을 특징으로 하는 알츠하이머병의 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것이다.
[화학식 1]
Figure 112016103071362-pat00001
상기 석송강 추출물은 석송강을 물, C1 내지 C4의 저급 알코올, 아세톤, n-헥산, 디클로로메탄 및 에틸아세테이트로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상의 용매로 추출한 추출물인 것을 특징으로 한다.
본 발명은 석송강(Lycopodiella cernua)으로부터 분리된 상기 화학식 1의 람나진(화합물 1), 케르세틴 3,3'-디메틸 에테르(화합물 2), 구아이아실글리세롤(화합물 3), 아피게닌(화합물 4), 이소샤프토사이드(화합물 5), 아피게닌-4'-O-(2'',6''-디-O-p-쿠마로일)-β-D-글루코피라노사이드(화합물 6), 봄바신-4-O-β-D-글루코피라노사이드(화합물 7), (7R,8S)-7,8-디히드로-8-히드록시메틸-7-(3-메톡시페닐-4-O-β-D-글루코피라노사이드)-1'-벤조푸란프로피온산(화합물 8), 아피게닌-4'-O-(6''-O-p-쿠마로일)-β-D-글루코피라노사이드(화합물 9), 디히드로디히드로코니페릴알코올-4-O-β-D-글루코피라노사이드(화합물 10) 및 샤프토사이드(화합물 11)로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상의 화합물을 포함하는 것을 특징으로 하는 알츠하이머병의 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것이다.
상기 화합물은 아세틸콜린에스테라아제(acetylcholinesterase), 부티릴콜린에스테라아제(butyrylcholinesterase) 및 β-세크레타제 1(β-secretase 1)로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상의 효소 활성을 억제하는 것을 특징으로 한다.
또한, 본 발명은 석송강으로부터 분리된 상기 화학식 1의 람나진(화합물 1), 케르세틴 3,3'-디메틸 에테르(화합물 2), 구아이아실글리세롤(화합물 3), 아피게닌(화합물 4), 이소샤프토사이드(화합물 5), 아피게닌-4'-O-(2'',6''-디-O-p-쿠마로일)-β-D-글루코피라노사이드(화합물 6), 봄바신-4-O-β-D-글루코피라노사이드(화합물 7), (7R,8S)-7,8-디히드로-8-히드록시메틸-7-(3-메톡시페닐-4-O-β-D-글루코피라노사이드)-1'-벤조푸란프로피온산(화합물 8), 아피게닌-4'-O-(6''-O-p-쿠마로일)-β-D-글루코피라노사이드(화합물 9), 디히드로디히드로코니페릴알코올-4-O-β-D-글루코피라노사이드(화합물 10) 및 샤프토사이드(화합물 11)로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상의 화합물을 포함하는 석송강(Lycopodiella cernua) 추출물을 함유하는 것을 특징으로 하는 알츠하이머병의 예방 또는 개선용 건강기능식품에 관한 것이다.
또 다른 일면에 있어서, 본 발명은 석송강(Lycopodiella cernua)을 물, C1 내지 C4의 저급 알코올 또는 이들의 혼합용매로 석송강 추출물을 제조하는 단계; 상기 석송강 추출물을 n-헥산 및 에틸아세테이트를 이용하여 순차적으로 분획한 후 물층 잔사를 디클로로메탄으로 재분획하는 단계; 및 상기 재분획된 디클로로메탄을 제외한 물층을 크로마토그래피로 상기 화학식 1의 람나진(화합물 1), 케르세틴 3,3'-디메틸 에테르(화합물 2), 구아이아실글리세롤(화합물 3), 아피게닌(화합물 4), 이소샤프토사이드(화합물 5), 아피게닌-4'-O-(2'',6''-디-O-p-쿠마로일)-β-D-글루코피라노사이드(화합물 6), 봄바신-4-O-β-D-글루코피라노사이드(화합물 7), (7R,8S)-7,8-디히드로-8-히드록시메틸-7-(3-메톡시페닐-4-O-β-D-글루코피라노사이드)-1'-벤조푸란프로피온산(화합물 8), 아피게닌-4'-O-(6''-O-p-쿠마로일)-β-D-글루코피라노사이드(화합물 9), 디히드로디히드로코니페릴알코올-4-O-β-D-글루코피라노사이드(화합물 10) 및 샤프토사이드(화합물 11)로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상의 화합물을 분리하는 방법에 관한 것이다.
본 발명은 또한, 하기 화학구조를 갖는 신규 화합물인 (7R,8S)-7,8-디히드로-8-히드록시메틸-7-(3-메톡시페닐-4-O-β-D-글루코피라노사이드)-1'-벤조푸란프로피온산을 제공한다.
Figure 112016103071362-pat00002
이하 본 발명을 상세하게 설명한다.
본 발명은 석송강(Lycopodiella cernua)으로부터 분리된 상기 화학식 1의 화합물을 포함하는 알츠하이머병의 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것이다.
상기 석송강 추출물은 석송강을 물, C1 내지 C4의 저급 알코올 또는 이들의 혼합용매로 추출하여 얻을 수 있으며, 상기 C1 내지 C4의 저급 알코올로는 메탄올, 에탄올, 프로판올, 이소프로판올, 부탄올 등을 이용할 수 있다. 또한, 상기 석송강 추출물은 유기용매로 재분획한 분획물일 수 있으며, 상기 유기용매로는 n-헥산, 에틸아세테이트 및 디클로로메탄을 이용할 수 있다.
상기 석송강으로부터 분리된 화합물은 석송강의 물층 추출물을 크로마토그래피로 분획하여 얻을 수 있으며, 상기 크로마토그래피는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(silica gel column chromatography), HP-20 컬럼 크로마토그래피(HP-20 column chromatography), RP-18 컬럼 크로마토그래피(RP-18 column chromatography), LH-20 컬럼 크로마토그래피(LH-20 column chromatography), 고성능 액체 크로마토그래피 (High-performance liquid chromatography) 등에서 선택하여 사용할 수 있다.
한편, 본 발명의 화합물은 당해 기술 분야에서 통상적인 방법에 따라 합성될 수 있으며, 약학적으로 허용 가능한 염으로 제조될 수도 있다.
또한, 본 발명은 석송강 추출물 또는 이로부터 분리된 상기 화학식 1의 화합물 군에서 선택되는 1종 이상의 화합물을 포함하는 알츠하이머병의 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다. 상기 추출물 또는 화합물을 포함하는 약학 조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. 상기 약학 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 본 발명의 상기 추출물 또는 화합물에 적어도 하나 이상의 부형제, 예를 들면, 전분, 탄산칼슘, 수크로스 또는 락토오스, 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.
본 발명의 석송강 추출물 또는 이로부터 분리된 화합물을 포함하는 약학 조성물의 투여량은 치료받을 대상의 연령, 성별, 체중, 치료할 특정 질환 또는 병리 상태, 질환 또는 병리 상태의 심각도, 투여경로 및 처방자의 판단에 따라 달라질 것이다. 이러한 인자에 기초한 투여량 결정은 당업자의 수준 내에 있으며, 일반적으로 투여량은 0.01㎎/㎏/일 내지 대략 2000㎎/㎏/일의 범위이다. 더 바람직한 투여량은 1㎎/㎏/일 내지 500㎎/㎏/일이다. 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수도 있다. 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.
본 발명의 석송강 추출물 또는 이로부터 분리된 화합물을 포함하는 약학 조성물은 쥐, 가축, 인간 등의 포유동물에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁내 경막 또는 뇌혈관내 주사에 의해 투여될 수 있다. 본 발명의 추출물 또는 이로부터 분리된 화합물은 독성 및 부작용이 거의 없으므로 예방 목적으로 장기간 복용시에도 안심하고 사용할 수 있는 약제이다.
또한, 본 발명은 석송강 추출물 또는 이로부터 분리된 상기 화학식 1의 화합물 군에서 선택되는 1종 이상의 화합물 및 식품학적으로 허용 가능한 식품보조 첨가제를 포함하는 알츠하이머병의 예방 또는 개선용 건강기능식품을 제공한다. 상기 추출물 또는 화합물은 본 발명의 건강기능식품에 0.001~100 중량%로 하여 첨가될 수 있다. 본 발명의 건강기능식품은 정제, 캡슐제, 환제 또는 액제 등의 형태를 포함하며, 본 발명의 추출물 또는 화합물을 첨가할 수 있는 식품으로는, 예를 들어, 각종 식품류, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제 등이 있다.
본 발명은 석송강 추출물 또는 이로부터 분리된 화합물을 포함하는 알츠하이머병의 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것이며, 상기 석송강 추출물 또는 이로부터 분리된 화합물은 아세틸콜린에스테라아제, 부티릴콜린에스테라아제 및 β-세크레타제 1의 억제 효과가 우수하여 알츠하이머병의 예방 또는 치료용 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.
도 1은 본 발명의 신규 화합물인 (7R,8S)-7,8-디히드로-8-히드록시메틸-7-(3-메톡시페닐-4-O-β-D-글루코피라노사이드)-1'-벤조푸란프로피온산에 대한 1H-1H COSY(bold lines) 및 1H-13C HMBC 상관관계(arrow)를 나타내는 그림이다.
이하 본 발명의 바람직한 실시예를 상세히 설명하기로 한다. 그러나 본 발명은 여기서 설명되는 실시예에 한정되지 않고 다른 형태로 구체화될 수도 있다. 오히려, 여기서 소개되는 내용이 철저하고 완전해지고, 당업자에게 본 발명의 사상을 충분히 전달하기 위해 제공하는 것이다.
<실시예 1. 석송강 유래 화합물의 분리>
본 발명에서 사용된 석송강(Lycopodium cernua)은 2012년 4월에 베트남의 럼동성에서 얻었으며, 석송강(3㎏)을 메탄올(2ℓ×3회)로 환류 추출 및 여과하고, 상기 여과물을 감압 증류하여 메탄올 추출물 280g을 얻었다. 이후, 상기 메탄올 추출물을 물(2ℓ)에 현탁하여 n-헥산(2ℓ×3회) 및 에틸아세테이트(2ℓ×3회)로 순차적으로 분획하여, n-헥산 분획물(48g) 및 에틸아세테이트 분획물(175.5g)과 마지막으로 물층 잔사를 포함하는 분획물(55g)을 얻었다.
이후, 상기 물층 잔사를 포함하는 분획물을 5%[v/v] 염산으로 현탁한 뒤, 디클로로메탄으로 분획하여 디클로로메탄 분획물(1.9g)을 얻었다. 또한, 상기 디클로로메탄으로 분획한 것 중 물층(aqueous layers)을 0.1N의 수산화나트륨으로 pH11-12가 되게 하고, 다시 디클로로메탄으로 분획하였다. 이의 유기 층을 모아 황산나트륨으로 건조하고 증발시켜 크루드한 알칼로이드 분획물을 얻었으며, 물층을 포함하는 잔사를 메탄올 수용액(0 → 100%[v/v])의 농도구배 용출 조건에 따른 이음이온 HP-20 컬럼 크로마토그래피로 분획하여 12개의 분획물(W1-W12)을 얻었다. 상기 분획물 중에서 W3(1.24g)을 디클로로메탄:메탄올:물(4:1:0.2[v:v:v])의 등용매 용출조건에 따른 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(컬럼크기:3.5×50㎝)로 분획하여 13개의 소분획물(W3.1-W3.13)을 얻었다.
상기 소분획물 중 W3.4(115㎎)을 디클로로메탄:메탄올:물(5:1:0.1[v:v:v])의 등용매 용출조건에 따른 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(컬럼크기:1.5×25㎝)로 분획하여 화합물 3(8.8㎎)을 얻었다. 또한, 소분획물 W3.6(65㎎)은 디클로로메탄:메탄올:물(4:1:0.2[v:v:v])의 등용매 용출조건에 따른 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(컬럼크기:1.5×25㎝)로 분획하여 화합물 1(28.7㎎)을 얻었다. 소분획물 W3.8(36㎎)은 20%[v/v] 아세토나이트릴 수용액의 등용매 용출조건에 다른 RP-C18 실리카겔 컬럼 크래마토그래피로 분리하여 화합물 2(7.7㎎)를 얻었다.
분획물 W6(1.05g)은 디클로로메탄:메탄올:물(3:1:0.2[v:v:v])의 등용매 용출조건에 따른 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(컬럼크기:3.0×50㎝)로 분획하여 9개의 소분획물(W6.1-W6.9)을 얻었다. 상기 소분획물 중 W6.2(25㎎)는 여과를 통해 화합물 4(6.2㎎)를 얻었다. 소분획물 W6.9(167㎎)는 메탄올:물(1:1[v:v])의 등용매 용출조건에 따른 세파덱스 LH-20 컬럼 크로마토그래피(컬럼크기:2.0×120㎝)로 분획하여 화합물 5(7㎎) 및 화합물 6(10.3㎎)을 얻었다.
분획물 중 W8(1.52g)을 디클로로메탄:메탄올:물(3:1:0.1[v:v:v])의 등용매 용출조건에 따른 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(컬럼크기:3.0×60㎝)로 분획하여 8개의 소분획물(W8.1-W8.8)을 얻었다. 상기 소분획물 중 W8.6(125㎎)을 메탄올:물(1:1[v:v])의 등용매 용출조건에 따른 세파덱스 LH-20 컬럼 크로마토그래피(컬럼크기:2.0×60㎝)로 분획하여 화합물 7(3㎎)을 얻었다. 또한, 소분획물 W8.8(150㎎)은 메탄올:물(1:1[v:v])의 등용매 용출조건에 따른 세파덱스 LH-20 컬럼 크로마토그래피(컬럼크기:1.5×120㎝)로 화합물 8(12.3㎎)을 분리하였다.
분획물 W9(1.36g)은 디클로로메탄:메탄올:물(3:1:0.1[v:v:v])의 등용매 용출조건에 따른 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(컬럼크기:3.0×60㎝)로 7개의 소분획물(W9.1-W9.7)을 분리하였다. 상기 소분획물 중 W9.4(45㎎)을 메탄올:물(2:1[v:v])의 등용매 용출조건에 따른 세파덱스 LH-20 컬럼 크로마토그래피(컬럼크기:1.5×120㎝)로 분획하여 화합물 9(6.7㎎)를 얻었다. 또한, 소분획물 W9.7(65.7㎎)을 메탄올:물(2:1[v:v])의 등용매 용출조건에 따른 세파덱스 LH-20 컬럼 크로마토그래피(컬럼크기:1.5×120㎝)로 분획하여 화합물 10(14.1㎎)과 화합물 11(10.5㎎)을 얻었다.
<실시예 2. 석송강으로부터 분리된 화합물의 물리화학적 구조 확인>
실시예 2-1. 람나진(화합물 1)
rhamnazin;
노르스름한 분말;
IR (KBr)νmax 3545, 3400, 1658, 1130, 1117㎝-1;
1H NMR 및 13C NMR 데이터는 하기 표 1 및 표 2 참조;
EI-MS [M]+ 330.2 m/z, C17H14O7.
실시예 2-2. 케르세틴 3,3'-디메틸 에테르(화합물 2)
quercetin 3,3'-dimethyl ether;
노르스름한 분말;
1H NMR 및 13C NMR 데이터는 하기 표 1 및 표 2 참조;
EI-MS [M]+ 330.2 m/z, C17H14O7.
실시예 2-3. 구아이아실글리세롤 (화합물 3)
guaiacylglycerol;
백색 분말;
1H NMR 및 13C NMR 데이터는 하기 표 1 및 표 2 참조;
EI-MS [M]+ 214.2 m/z, C10H14O5.
실시예 2-4. 아피게닌(화합물 4)
apigenin;
노르스름한 분말;
1H NMR 및 13C NMR 데이터는 하기 표 1 및 표 2 참조;
EI-MS [M]+ 270.0 m/z, C15H10O5.
실시예 2-5. 이소샤프토사이드(화합물 5)
isoschaftoside;
노르스름한 분말;
1H NMR 및 13C NMR 데이터는 하기 표 3 참조;
EI-MS [M]+ 564.4 m/z, C26H28O14.
실시예 2-6. 아피게닌-4'- O -(2'',6''-디-O- p -쿠마로일)-β-D-글루코피라노사이드(화합물 6)
apigenin-4'-O-(2'',6''-di-O-p-coumaroyl)-β-D-glucopyranoside;
백색 무정형 분말;
1H NMR 및 13C NMR 데이터는 하기 표 4 참조;
ESI-MS [M+H] 579.1 m/z, C30H27O12.
실시예 2-7. 봄바신-4- O - β - D -글루코피라노사이드(화합물 7)
bombasin-4-O-β-D-glucopyranoside;
백색 무정형 분말;
UV (MeOH): 231 (4.23), 283 (4.17) ㎚;
IR (KBr): 3367, 2920, 1651, 1601, 1514, 1464, 1427, 1265, 1223, 1159, 1126 ㎝-1;
1H NMR 및 13C NMR 데이터는 하기 표 4 참조;
EI-MS [M]+506.18 m/z, C25H30O11.
실시예 2-8. (7 R ,8 S )-7,8- 디히드로 -8- 히드록시메틸 -7-(3- 메톡시페닐 -4- O - β -D-글루 코피라노사이 드)-1'- 벤조푸란프로피온산 (화합물 8)
(7R,8S)-7,8-dihydro-8-hydroxymethyl-7-(3-methoxyphenyl-4-O-β-D-glucopyranoside)-1'-benzofuranpropanoic acid("lycocernuaside A"라고도 함)
백색 무정형 분말;
Figure 112016103071362-pat00003
: -36.2°(c 0.53, MeOH);
IR (KBr) νmax 3379, 2941, 2834, 1638, 1600, 1515, 1453, 1274, 1032 ㎝-1;
UV (MeOH) λmax (logε) 281 (2.50), 230 (3.12) ㎚;
ECD (c 0.030 mM, MeOH): △ε 278 -2.38, △ε 232 -1.42, △ε 216 +1.30;
1H NMR 및 13C NMR 데이터는 하기 표 5 참조;
HR-FAB-MS m/z 559.1794 [M+Na]+ (calcd for C26H32O12Na, 559.1791).
실시예 2-9. 아피게닌 -4'- O -(6''- O - p - 쿠마로일 )- β -D- 글루코피라노사이드 (화합물 9)
apigenin-4'-O-(6''-O-p-coumaroyl)-β-D-glucopyranoside;
백색 무정형 분말;
1H NMR 및 13C NMR 데이터는 하기 표 6 참조;
ESI-MS [M+H] 579.1 m/z, C30H27O12.
실시예 2-10. 디히드로디히드로코니페릴알코올-4- O - β -D-글루코피라노사이드(화합물 10)
dihydrodehydroconiferyl alcohol-4-O-β-D-glucopyranoside;
무색의 고무;
IR (KBr)νmax 3380, 2945, 2834, 1600, 1517, 1462, 1270, 1035 ㎝-1;
UV (MeOH)λmax (logε) 280 (2.35), 232 (3.0) ㎚;
1H NMR 및 13C NMR 데이터는 하기 표 6 참조;
EI-MS m/z 552 [M]+(calcd for C26H34O11 , 552).
실시예 2-11. 샤프토사이드(화합물 11)
schaftoside;
노르스름한 분말;
1H NMR 및 13C NMR 데이터는 하기 표 3 참조;
EI-MS [M]+ 564.4 m/z, C26H28O14.
화합물1 화합물2 화합물3 화합물4
Position δH(ppm)a δH(ppm)a δH(ppm)b δH(ppm)a
1 　 　 4.43 (1H, d, J = 6.4 ㎐) 　
2 　 　 3.59 (1H, m, H-2) 　
3 　 　 3.41 (1H, dd, J = 11.2, 4.0 ㎐, H-3a) 3.27 (1H, m, H-3b) 6.68 (1H, s)
4 　 　 　 　
5 　 　 　 　
6 6.77 (1H, s, J = 2.0 ㎐) 6.75 (1H, s, J = 2.0 ㎐) 　 6.54 (1H, s, J = 2.0 ㎐)
7 　 　 　 　
8 6.38 (1H, s, J = 2.0 ㎐) 6.40 (1H, s, J = 2.0 ㎐) 　 6.25 (1H, s, J = 2.0 ㎐)
9 　 　 　 　
10 　 　 　 　
1' 　 　 　 　
2' 7.68 (1H, d, J = 2.0 ㎐) 7.70 (1H, d, J = 2.0 ㎐) 6.91 (1H, d, J = 1.2 H) 7.98 (1H, d, J = 8.7 ㎐)
3' 　 　 　 7.20 (1H, d, J = 8.7 ㎐)
4' 　 　 　 　
5' 6.92 (1H, s, J = 8.0 ㎐) 6.92 (1H, s, J = 8.0 ㎐) 6.69 (1H, d, J = 8.0 ㎐) 7.20 (1H, d, J = 8.7 ㎐)
6' 7.62 (1H, dd, J = 8.0, 2.0 ㎐) 7.62 (1H, dd, J = 8.0, 2.0 ㎐) 6.73 (1H, dd, J = 8.0, 1.2 ㎐) 7.98 (1H, d, J = 8.7 ㎐)
7-MeO 3.86 (3H, s) 　 　 　
3-MeO 　 3.80 (3H, s) 　 　
3'-MeO 3.87 (3H, s) 3.85 (3H, s) 3.78 (3H, s) 　
5-OH 12.05 (1H, s) 12.14 (1H, s) 　 　
a : 1H NMR(400 ㎒ in DMSO-d6) spectroscopy data
b : 1H NMR(400 ㎒ in MeOD-d4) spectroscopy data
화합물1 화합물2 화합물3 화합물4
Position δC(ppm)a δC(ppm)a δC(ppm)b δC(ppm)a
1 　 　 75.6 　
2 156.3 156.5 77.7 164.2
3 133.6 136.5 64.3 105
4 177.7 178.2 　 182.5
5 160.8 161.2 　 158.7
6 97.9 97.3 　 94.7
7 165.2 164.4 　 164.8
8 92.4 92.6 　 99.6
9 157 157.7 　 163.2
10 105 106.2 　 105.2
1' 120.7 122.5 134.9 126
2' 112.6 112.4 111.6 128.9
3' 149.6 150.5 147.2 117.5
4' 147.2 147.7 149 161
5' 115.4 115.6 116 117.5
6' 122.9 121.4 120.8 128.9
7-MeO 55.4 　 　 　
3-MeO 　 55.2 　 　
3'-MeO 55.7 56.1 56.4 　
5-OH 　 　 　 　
a : 13C-NMR(100M㎐ in DMSO-d6) spectroscopy data
b : 13C-NMR(100M㎐ in MeOD-d4) spectroscopy data
화합물5 화합물11
Position δ H ( ppm ) a δ C ( ppm ) b Position δ H ( ppm ) c δ C ( ppm ) d
2 　 165.2 2 　 166.6
3 6.63 (1H, s) 105.5 3 6.41 (1H, s) 105.5
4 　 183.5 4 　 184.1
5 　 156.8 5 　 157.4
6 　 106.8 6 　 108.3
7 　 163.2 7 　 163
8 　 103.8 8 　 103.7
9 　 163.2 9 　 162.7
10 　 109.6 10 　 105.7
1' 　 123.5 1' 　 123.3
2' 8.32 (1H, d, J = 8.8 ㎐) 129.7 2' 7.80 (1H, d, J = 8.0 ㎐) 129.6
3' 7.27 (1H, d, J = 8.8 ㎐) 117.5 3' 7.74 (1H, d, J = 8.0 ㎐) 117.1
4' 　 160.5 4' 　 160.1
5' 7.27 (1H, d, J = 8.8 ㎐) 117.5 5' 7.74 (1H, d, J = 8.0 ㎐) 117.1
6' 8.32 (1H, d, J = 8.8 ㎐) 129.7 6' 7.80 (1H, d, J = 8.0 ㎐) 129.6
8-Glc 　 　 6-Glc 　 　
1'' 5.86 (1H, d, J = 9.6 ㎐) 75.7 1'' 4.93 (1H, d, J = 9.6 ㎐) 75.5
2'' 4.68 (1H, m) 81.4 2'' 3.75 (1H, m) 82.6
3'' 4.39 (1H, m) 76.7 3'' 3.72 (1H, m) 80.3
4'' 4.28 (1H, m) 71.9 4'' 3.49 (1H, m) 71.5
5'' 4.50 (1H, m) 72.8 5'' 3.60 (1H, m) 72.4
6'' 4.57~4.28 (1H, m) 63.4 6'' 3.32 (1H, m), 3.84 (1H, m) 63.2
6-Rha 　 　 8-Rha 　 　
1''' 5.66 (1H, d, J = 9.6 ㎐) 84 1''' 4.63 (1H, d, J = 9.6 ㎐) 82.9
2''' 4.67 (1H, m) 76.2 2''' 3.90 (1H, m) 76.6
3''' 4.48 (1H, m) 73.4 3''' 3.75 (1H, m) 73.2
4''' 4.37 (1H, m) 71.4 4''' 3.42 (1H, m) 71.2
5''' 4.33 (1H, m) 72.2 5''' 3.80 (1H, m) 71.7
a : 1H NMR(400 ㎒ in Pyridine-d 5)spectroscopy data
b : 13C-NMR(100 ㎒ in Pyridine-d 5)spectroscopy data
c : 1H NMR (400 ㎒ in DMSO-d 6) spectroscopy data
d : 13C-NMR (100 ㎒ in DMSO-d 6) spectroscopy data
화합물 6 화합물 7
Position δ H ( ppm ) a δ C ( ppm ) b δ H ( ppm ) c δ C ( ppm ) d
1 　 　 　 130.8
2 　 163.8 7.33 (1H, d, J = 2.0 ㎐) 111.9
3 6.71 (1H, s) 105.7 　 150.6
4 　 182.6 　 148.4
5 　 158.3 7.19(1H, dd, J=2.0, 8.5㎐) 116.6
6 6.53 (1H, s, J = 2.0㎐) 94.5 7.59 (1H, d, J = 8.5㎐) 119.5
7 　 165.1 6.16 (1H, d, J = 6.5㎐) 89.3
8 6.27 (1H, s, J = 2.0㎐) 100.2 3.96 (1H, m) 54.2
9 　 163.7 4.27 (2H, m) 64
10 　 105.1 　 　
1' 　 124.6 7.78 (1H, brs) 120.1
2' 7.90(1H, d, J = 8.7㎐) 129.1 　 132.6
3' 7.18 (1H, d, J = 8.7㎐) 117.5 7.92 (1H, brs) 113.6
4' 　 161.3 　 137.6
5' 7.18 (1H, d, J = 8.7㎐) 117.4 　 147
6' 7.90 (1H, d, J = 8.7㎐) 129.1 　 145.2
7' 　 　 　 196.7
8' 　 　 2.58 (3H, s) 26.5
9' 　 　 　 　
1'' 5.42 (1H, d, J = 8.1㎐) 99.8 5.69 (1H, d, J = 7.0㎐) 102.7
2'' 5.15 (1H, dd, J=9.4, 8.1㎐) 74.2 4.36 (1H, m) 75
3'' 3.80 (1H, t, J = 9.0㎐) 73.9 4.37 (1H, m) 78.6
4'' 3.70 (1H, t, J = 9.0㎐) 77.3 4.32 (1H, m) 71.4
5'' 3.78 (1H, m) 74.6 4.13 (1H, m) 79
6'' 3.83 (1H, dd, J=12.1, 2.0㎐)
3.74 (1H, dd, J=12.1, 5.5㎐)		 66.4 4.55 (1H, dd, J = 2.0, 12.0㎐) 4.37 (1H, m) 62.5
1''' 　 126.7 　 　
2''' 7.54 (1H, d, J = 8.5㎐) 131.2 　 　
3''' 6.68 (1H, d, J = 8.5㎐) 116.5 　 　
4''' 　 160.8 　 　
5''' 6.68 (1H, d, J = 8.5㎐) 115.4 　 　
6''' 7.54 (1H, d, J = 8.5㎐) 130.5 　 　
7''' 7.66 (1H, d, J = 15.0㎐) 146 　 　
8''' 6.37 (1H, d, J = 15.0㎐) 114.8 　 　
9''' 　 166.7 　 　
1'''' 　 125.8 　 　
2'''' 7.53 (1H, d, J = 8.5㎐) 131.1 　 　
3'''' 6.86 (1H, d, J = 8.5㎐) 116.6 　 　
4'''' 　 160.5 　 　
5'''' 6.86 (1H, d, J = 8.5㎐) 116.6 　 　
6'''' 7.53 (1H, d, J = 8.5㎐) 131.1 　 　
7'''' 7.60 (1H, d, J = 15.0㎐) 145.6 　 　
8'''' 6.39 (1H, d, J = 15.0㎐) 114.7 　 　
9'''' 　 167.8 　 　
3-OMe 　 　 3.86 (3H, s) 56.2
6'-OMe 　 　 3.69 (3H, s) 56.2
a : 1H NMR(400 ㎒ in DMSO-d 6) spectroscopy data
b : 13C-NMR(100 ㎒ in DMSO-d 6) spectroscopy data
c : 1H NMR(400 ㎒ in MeOD-d 4) spectroscopy data
d : 13C-NMR(100 ㎒ in MeOD-d 4) spectroscopy data
화합물 8
Position δ H ( ppm , J in ㎐) a δ C ( ppm ) b
1 129.6
2 7.06, brs 111.2
3 150.9
4 147.5
5 7.17, d (8.0) 118.1
6 6.96, brd (8.0) 119.4
7 5.55, d (6.0) 88.4
8 3.51, m 55.5
9 3.88, m
3.78, m		 65.2
1' 136.1
2' 6.80, brs 114.1
3' 138.5
4' 147.7
5' 145.2
6' 6.76, brs 117.8
7' 2.84, t (7.6) 32.3
8' 2.53, t (7.6) 38.1
9' 178.1
1'' 4.89, d (7.6) 102.8
2'' 3.53, m 74.8
3'' 3.51, m 77.8
4'' 3.43, m 71.3
5'' 3.45, m 79.4
6'' 3.72, dd (3.5, 12.0)
3.89, m		 62.4
3-OMe 3.88, s 56.7
5'-OMe 3.85, s 56.8
a : 1H NMR (500 ㎒ in Methanol-d 4,d values) spectroscopic data
b: 13C NMR (125 ㎒ in Methanol-d 4,d values) spectroscopic data
화합물9 화합물10
Position δ H ( ppm ) a δ C ( ppm ) b δ H ( ppm ) c δ C ( ppm ) d
1 　 　 　 129.4
2 　 164.2 7.01 (1H, brs) 111.3
3 6.68 (1H, s) 105 　 150.7
4 　 182.5 　 147.4
5 　 158.7 6.87 (1H, d, J = 8.5 ㎐) 117.9
6 6.54 (1H, s, J = 2.0 ㎐) 94.7 6.99 (1H, dd, J = 1.5, 8.5㎐) 119.2
7 　 164.8 5.61 (1H, d, 6.0 ㎐) 88.3
8 6.25 (1H, s, J = 2.0 ㎐) 99.6 3.55 (1H, m) 55.4
9 　 163.2 3.91 (1H, m) 3.82 (1H, m) 64.9
10 　 105.2 　 　
1' 　 126 6.79 (1H, brs) 120.3
2' 7.98 (1H, d, J = 8.7 ㎐) 128.9 　 132.7
3' 7.20 (1H, d, J = 8.7 ㎐) 117.5 7.20 (1H, brs) 114.9
4' 　 161 　 138.2
5' 7.20 (1H, d, J = 8.7 ㎐) 117.5 　 147.3
6' 7.98 (1H, d, J = 8.7 ㎐) 128.9 　 145
7' 　 　 2.69 (2H, t, J = 7.5 ㎐) 32.6
8' 　 　 1.88 (2H, m) 36
9' 　 　 3.63 (2H, t,J= 6.5 ㎐) 62.3
1'' 5.39 (1H, d, J = 8.1 ㎐) 99.4 4.95 (1H, d, J = 7.0 ㎐) 102.6
2'' 5.17 (1H, dd, J=9.4, 8.1㎐) 74.1 3.53 (1H, m) 74.7
3'' 3.82 (1H, t, J = 9.0 ㎐) 75.6 3.45 (1H, m) 77.6
4'' 3.61 (1H, t, J = 9.0 ㎐) 71.2 3.46 (1H, m) 71.1
5'' 3.71 (1H, m) 78.1 3.52 (1H, m) 77.9
6'' 3.96 (1H, dd, J = 12.1, 2.0 ㎐) 3.76 (1H, dd, J = 12.1, 5.8 ㎐) 62.2 3.74 (1H, dd, J = 3.5, 12.0 ㎐) 3.94 (1H, m) 62
1''' 　 126.8 　 　
2''' 7.54 (1H, d, J = 8.5 ㎐) 130.9 　 　
3''' 6.68 (1H, d, J = 8.5 ㎐) 116.5 　 　
4''' 　 160.5 　 　
5''' 6.68 (1H, d, J = 8.5 ㎐) 116.5 　 　
6''' 7.54 (1H, d, J = 8.5 ㎐) 130.9 　 　
7''' 7.66 (1H, d, J = 15.0 ㎐) 145.5 　 　
8''' 6.37 (1H, d, J = 15.0 ㎐) 115.2 　 　
9''' 166.5 　
3-OMe 　 　 3.90 (3H, s) 56.5
6'-OMe 　 　 3.94 (3H, s) 56.6
a : 1H NMR(400 ㎒ in DMSO-d 6) spectroscopy data
b : 13C NMR(100 ㎒ in DMSO-d 6) spectroscopy data
c : 1H NMR(400 ㎒ in MeOD-d 4) spectroscopy data
d : 13C NMR(100 ㎒ in MeOD-d 4) spectroscopy data
< 실시예 3. 아세틸콜린에스테라아제 및 부티릴콜린에스테라아제의 억제활성 측정>
콜린에스테라아제에 의해 아세틸콜린 또는 부티릴아세틸콜린이 가수분해되면 노란색의 5'-티오-2-나이트로벤조에이트 음이온(5'-thio-2-nitrobenzoat anion)을 형성하게 되므로 412㎚에서 흡광도 변화를 통해 효소 활성을 측정하였다.
96웰 플레이트(96wells microplates)에 140㎕의 인산나트륨 완충용액(sodium phosphate buffer, pH8.0)과 최종 농도가 100μM인 본 발명의 각 화합물 20㎕, 아세틸콜린에스테라아제 또는 부티릴콜린에스테라아제 (5units/㎖) 20㎕, 10㎕의 DTNB(dithiobisnitrobenzoate), 10㎕의 아세틸콜린 또는 부티릴콜린을 더하여 상온에서 15분 동안 반응하였다. 양성대조군으로는 베르베린(berberine)을 이용하였으며, 반응 후 형성된 5'-티오-2-나이트로벤조에이트 음이온을 흡광도 측정기(VERSA max, Molecular Devices, USA)로 412㎚에서 확인하여 하기 표 7에 IC50(the half maximal inhibitory concentration)으로 나타내었다.
조건 아세틸콜린에스테라아제 억제활성 (IC50) 부티릴콜린에스테라아제 억제활성 (IC50)
화합물 1 8.69±0.49μM > 30μM
화합물 2 8.78±0.97μM 13.04±0.99μM
화합물 3 1.56±0.22μM > 30μM
화합물 4 7.29±0.23μM 15.78±0.95μM
화합물 5 0.23±0.17μM 3.08±0.26μM
화합물 6 1.24±0.31μM 3.11±0.77μM
화합물 7 11.25±0.99μM 12.23±0.89μM
화합물 8 15.22±0.89μM 24.09±0.33μM
화합물 9 2.78±0.42μM 7.15±0.19μM
화합물 10 11.93±0.96μM 7.02±0.29μM
화합물 11 1.70±0.22μM 0.62±0.47μM
베르베린 0.71±0.11μM 7.08±0.01μM
상기 표 7의 결과를 참고하면, 본 발명의 석송강 추출물로부터 분리된 화합물이 아세틸콜린에스테라아제 또는 부티릴콜린에스테라아제의 억제활성을 가지는 것으로 확인되어 알츠하이머병의 예방 및 치료제로서 유용하게 사용될 수 있음을 알 수 있다.
<실시예 4. β-세크레타제 1의 억제활성 측정>
β-세크레타제 1에 의해 기질이 잘리면 형광이 나타나는데 이를 BACE1 FRET 어세이 키트(β-Secretase, human recombinant, PanVera Co. USA)로 측정하여 효소의 활성을 확인하였다.
각 10㎕의 50mM 아세트산나트륨(pH4.5), β-세크레타제 1 및 기질(750nM Rh-EVNLDAEFK-Quencher)에 100μM의 각 화합물을 10㎕씩 더하여 25℃에서 60분 동안 어두운 곳에서 반응시켰다. 양성대조군으로 케르세틴을 사용하였으며, 반응 결과를 확인하기 위해 여기 파장 545㎚ 및 발광 파장 585㎚에서 형광을 측정하고, 하기 표 8에 IC50(the half maximal inhibitory concentration)으로 나타내었다.
조건 β-세크레타제 1 억제활성 (IC50)
화합물 1 5.59±0.33μM
화합물 3 7.33±1.77μM
화합물 10 26.86±1.94μM
화합물 11 2.16±0.37μM
케르세틴 6.76±0.63μM
표 8의 결과를 살펴보면, 본 발명의 석송강 추출물로부터 분리된 화합물이 β-세크레타제 1의 활성을 억제하는 것으로 확인되어, 알츠하이머병에 대한 치료 효과가 우수함을 확인할 수 있다.
<실시예 5. 독성실험>
실시예 5-1. 급성독성
본 발명의 석송강 추출물 또는 (7R,8S)-7,8-디히드로-8-히드록시메틸-7-(3-메톡시페닐-4-O-β-D-글루코피라노사이드)-1'-벤조푸란프로피온산(화합물 1)을 단기간에 과량을 섭취하였을 때 급성적(24시간 이내)으로 동물 체내에 미치는 독성을 조사하고, 치사율을 결정하기 위하여 본 실험을 수행하였다. 일반적인 마우스인 ICR 마우스를 20마리를 준비하였고, 각 군별로 10마리씩 배정하였다. 대조군에는 30% PEG-400만을 투여하고, 실험군은 본 발명의 추출물 또는 화합물 1을 1.0g/㎏의 농도로 각각 경구 투여하였다. 투여 24시간 후에 각각의 치사율을 조사한 결과, 대조군과 상기 추출물 또는 화합물 1을 투여한 실험군에서는 모두 생존하였다.
실시예 5-2. 실험군 및 대조군의 장기 및 조직 독성 실험
장기 독성 실험은 C57BL/6J 생쥐를 대상으로 동물의 각 장기(조직)에 미치는 영향을 조사하기 위하여 본 발명의 석송강 추출물 또는 (7R,8S)-7,8-디히드로-8-히드록시메틸-7-(3-메톡시페닐-4-O-β-D-글루코피라노사이드)-1'-벤조푸란프로피온산을 1.0g/㎏의 농도로 투여한 실험군과 용매만을 투여한 대조군의 동물들로부터 8주 후 혈액을 채취하여 GPT(glutamate-pyruvate transferase) 및 BUN(blood urea nitrogen)의 혈액 내 농도를 Select E(vital scientific NV, Netherland) 기기를 이용하여 측정하였다. 그 결과, 간독성과 관계있는 것으로 알려진 GPT와 신장독성과 관계있는 것으로 알려진 BUN의 경우, 대조군과 비교하여 실험군은 별다른 차이를 보이지 않았다. 또한, 각 동물로부터 간과 신장을 절취하여 통상적인 조직절편 제작과정을 거쳐 광학현미경으로 조직학적 관찰을 시행하였으나 특이한 이상은 관찰되지 않았다.
<제제예 1. 약학적 제제>
제제예 1-1. 정제의 제조
본 발명의 (7R,8S)-7,8-디히드로-8-히드록시메틸-7-(3-메톡시페닐-4-O-β-D-글루코피라노사이드)-1'-벤조푸란프로피온산 200g을 락토오스 175.9g, 감자전분 180g 및 콜로이드성 규산 32g과 혼합하였다. 이 혼합물에 10% 젤라틴 용액을 첨가시킨 후, 분쇄해서 14 메쉬체를 통과시켰다. 이것을 건조시키고 여기에 감자전분 160g, 활석 50g 및 스테아린산 마그네슘 5g을 첨가해서 얻은 혼합물을 정제로 만들었다.
제제예 1-2. 주사제의 제조
본 발명의 (7R,8S)-7,8-디히드로-8-히드록시메틸-7-(3-메톡시페닐-4-O-β-D-글루코피라노사이드)-1'-벤조푸란프로피온산 1g, 염화나트륨 0.6g 및 아스코르브산 0.1g을 증류수에 용해시켜서 100㎖를 만들었다. 이 용액을 병에 넣고 20℃에서 30분간 가열하여 멸균시켰다.
<제제예 2. 식품 제조>
제제예 2-1. 조리용 양념의 제조
본 발명의 (7R,8S)-7,8-디히드로-8-히드록시메틸-7-(3-메톡시페닐-4-O-β-D-글루코피라노사이드)-1'-벤조푸란프로피온산을 조리용 양념에 1 중량%로 첨가하여 건강 증진용 조리용 양념을 제조하였다.
제제예 2-2. 밀가루 식품의 제조
본 발명의 (7R,8S)-7,8-디히드로-8-히드록시메틸-7-(3-메톡시페닐-4-O-β-D-글루코피라노사이드)-1'-벤조푸란프로피온산을 밀가루에 0.1 중량%로 첨가하고, 이 혼합물을 이용하여 빵, 케이크, 쿠키, 크래커 및 면류를 제조하여 건강 증진용 식품을 제조하였다.
제제예 2-3. 스프 및 육즙(gravies)의 제조
본 발명의 (7R,8S)-7,8-디히드로-8-히드록시메틸-7-(3-메톡시페닐-4-O-β-D-글루코피라노사이드)-1'-벤조푸란프로피온산을 스프 및 육즙에 0.1 중량%로 첨가하여 건강 증진용 수프 및 육즙을 제조하였다.
제제예 2-4. 유제품(dairy products)의 제조
본 발명의 (7R,8S)-7,8-디히드로-8-히드록시메틸-7-(3-메톡시페닐-4-O-β-D-글루코피라노사이드)-1'-벤조푸란프로피온산을 우유에 0.1 중량%로 첨가하고, 상기 우유를 이용하여 버터 및 아이스크림과 같은 다양한 유제품을 제조하였다.
제제예 2-5. 야채주스 제조
본 발명의 (7R,8S)-7,8-디히드로-8-히드록시메틸-7-(3-메톡시페닐-4-O-β-D-글루코피라노사이드)-1'-벤조푸란프로피온산 0.5g을 토마토주스 또는 당근주스 1,000㎖에 가하여 건강 증진용 야채주스를 제조하였다.
제제예 2-6. 과일주스 제조
본 발명의 (7R,8S)-7,8-디히드로-8-히드록시메틸-7-(3-메톡시페닐-4-O-β-D-글루코피라노사이드)-1'-벤조푸란프로피온산 0.1g을 사과주스 또는 포도주스 1,000㎖에 가하여 건강 증진용 과일주스를 제조하였다.

Claims (10)

  1. 삭제
  2. 삭제
  3. 석송강(Lycopodiella cernua)으로부터 분리된 하기 화학식 1의 봄바신-4-O-β-D-글루코피라노사이드(화합물 7) 및 (7R,8S)-7,8-디히드로-8-히드록시메틸-7-(3-메톡시페닐-4-O-β-D-글루코피라노사이드)-1'-벤조푸란프로피온산(화합물 8) 중에서 선택되는 1종 이상의 화합물을 포함하는 것을 특징으로 하는 알츠하이머병의 예방 또는 치료용 조성물.
    [화학식 1]
    Figure 112016103071362-pat00005
  4. 제3항에 있어서,
    상기 화합물은 아세틸콜린에스테라아제(acetylcholinesterase), 부티릴콜린에스테라아제(butyrylcholinesterase) 및 β-세크레타제 1(β-secretase 1)로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상의 효소 활성을 억제하는 것을 특징으로 하는 알츠하이머병의 예방 또는 치료용 조성물.
  5. 삭제
  6. 삭제
  7. 석송강(Lycopodiella cernua)으로부터 분리된 하기 화학식 1의 봄바신-4-O-β-D-글루코피라노사이드(화합물 7) 및 (7R,8S)-7,8-디히드로-8-히드록시메틸-7-(3-메톡시페닐-4-O-β-D-글루코피라노사이드)-1'-벤조푸란프로피온산(화합물 8) 중에서 선택되는 1종 이상의 화합물을 포함하는 것을 특징으로 하는 알츠하이머병의 예방 또는 개선용 건강기능식품.
    [화학식 1]
    Figure 112016103071362-pat00007
  8. 제7항에 있어서,
    상기 화합물은 아세틸콜린에스테라아제(acetylcholinesterase), 부티릴콜린에스테라아제(butyrylcholinesterase) 및 β-세크레타제 1(β-secretase 1)로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상의 효소 활성을 억제하는 것을 특징으로 하는 알츠하이머병의 예방 또는 개선용 건강기능식품.
  9. 석송강(Lycopodiella cernua)을 물, C1 내지 C4의 저급 알코올 또는 이들의 혼합용매로 석송강 추출물을 제조하는 단계; 상기 석송강 추출물을 n-헥산 및 에틸아세테이트를 이용하여 순차적으로 분획한 후 물층 잔사를 디클로로메탄으로 재분획하는 단계; 및 상기 재분획된 디클로로메탄을 제외한 물층을 크로마토그래피로 하기 화학식 1의 봄바신-4-O-β-D-글루코피라노사이드(화합물 7) 및 (7R,8S)-7,8-디히드로-8-히드록시메틸-7-(3-메톡시페닐-4-O-β-D-글루코피라노사이드)-1'-벤조푸란프로피온산(화합물 8) 중에서 선택되는 1종 이상의 화합물을 분리하는 방법.
    [화학식 1]
    Figure 112016103071362-pat00008
  10. 하기 화학구조를 갖는 신규 화합물 (7R,8S)-7,8-디히드로-8-히드록시메틸-7-(3-메톡시페닐-4-O-β-D-글루코피라노사이드)-1'-벤조푸란프로피온산.
    Figure 112016103071362-pat00009
KR1020160138349A 2016-10-24 2016-10-24 석송강 추출물 또는 이로부터 분리된 화합물을 포함하는 알츠하이머병의 예방 또는 치료용 조성물-ⅱ KR101756905B1 (ko)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020160138349A KR101756905B1 (ko) 2016-10-24 2016-10-24 석송강 추출물 또는 이로부터 분리된 화합물을 포함하는 알츠하이머병의 예방 또는 치료용 조성물-ⅱ

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020160138349A KR101756905B1 (ko) 2016-10-24 2016-10-24 석송강 추출물 또는 이로부터 분리된 화합물을 포함하는 알츠하이머병의 예방 또는 치료용 조성물-ⅱ

Related Parent Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020150052664A Division KR101818084B1 (ko) 2015-04-14 2015-04-14 석송강 추출물 또는 이로부터 분리된 화합물을 포함하는 알츠하이머병의 예방 또는 치료용 조성물-ⅱ

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20160126954A KR20160126954A (ko) 2016-11-02
KR101756905B1 true KR101756905B1 (ko) 2017-07-11

Family

ID=57518879

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020160138349A KR101756905B1 (ko) 2016-10-24 2016-10-24 석송강 추출물 또는 이로부터 분리된 화합물을 포함하는 알츠하이머병의 예방 또는 치료용 조성물-ⅱ

Country Status (1)

Country Link
KR (1) KR101756905B1 (ko)

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2749496A1 (en) 2009-01-14 2010-07-22 Vanas Oncology Compositions and methods of use

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Helvetica Chimica Acta, 2008, 제91권, 제1호, 페이지 136-143

Also Published As

Publication number Publication date
KR20160126954A (ko) 2016-11-02

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR101818084B1 (ko) 석송강 추출물 또는 이로부터 분리된 화합물을 포함하는 알츠하이머병의 예방 또는 치료용 조성물-ⅱ
KR101808816B1 (ko) 남천으로부터 분리한 화합물을 포함하는 혈관 염증 질환 예방 또는 치료용 조성물
US20210040133A1 (en) Food or feed composition for improving cognitive function or memory comprising extract of desalted salicornia europaea
KR20170119871A (ko) 진통에 유효한 초피 잎 추출물의 분획물
EP2226077B1 (en) Extract of Lycoris chejuenis and/or a compound isolated therefrom for preventing and/or treating a neurodegenerative disease
KR101706156B1 (ko) 청미래덩굴로부터 분리된 화합물을 포함하는 대사성 질환의 예방 또는 치료용 조성물
KR101756929B1 (ko) 석송강 추출물 또는 이로부터 분리된 화합물을 포함하는 알츠하이머병의 예방 또는 치료용 조성물-ⅰ
KR101752247B1 (ko) 부처손으로부터 분리된 화합물을 포함하는 대사성 질환의 예방 또는 치료용 조성물
KR101779391B1 (ko) 짚신나물로부터 분리된 화합물을 포함하는 대사성 질환의 예방 또는 치료용 조성물
KR101756905B1 (ko) 석송강 추출물 또는 이로부터 분리된 화합물을 포함하는 알츠하이머병의 예방 또는 치료용 조성물-ⅱ
KR20150111073A (ko) 육계 추출물을 유효성분으로 포함하는 퇴행성 뇌 질환 예방 또는 치료용약학적 조성물
KR101725070B1 (ko) 갈색거저리로부터 분리한 신규 화합물 및 이의 분리 방법
KR102038107B1 (ko) 멀꿀 잎 추출물로부터 분리된 신규한 플라보노이드 화합물 및 이를 유효성분으로 하는 항염, 골조직 생성 또는 연골조직 생성 촉진용 조성물
KR101784413B1 (ko) 석송강 추출물 또는 이로부터 분리된 화합물을 포함하는 알츠하이머병의 예방 또는 치료용 조성물-ⅰ
KR101021835B1 (ko) 크리소스플레놀 시를 함유하는 심장 질환의 예방 및 치료용 조성물
KR101967173B1 (ko) 뽕나무로부터 분리된 화합물을 포함하는 염증성 질환의 예방 또는 치료용 조성물
KR101786999B1 (ko) 귀전우로부터 분리된 화합물을 포함하는 대사성 질환의 예방 또는 치료용 조성물
KR101811048B1 (ko) 지노스테마 론기페스 vk1 추출물 또는 이로부터 분리한 론기페노사이드 a 화합물을 유효성분으로 포함하는 인지기능장애 예방 또는 치료용 조성물
KR101132174B1 (ko) 에리스리나 아비시니카로부터 얻은 에이엠피케이를 활성화시키는 화합물 및 이를 유효성분으로 포함하는 대사증후군 관련 질환의 예방 또는 치료용 조성물
KR101716571B1 (ko) 알츠하이머성 치매 예방 또는 치료용 약제학적 조성물
KR20060029714A (ko) 포도나무 수피 추출물을 함유하는 아세틸콜린에스터라제저해제
KR102023637B1 (ko) 탈염된 퉁퉁마디 추출물을 포함하는 인지기능 또는 기억력 개선용 식품 또는 사료용 조성물
KR101783309B1 (ko) 자주색만년초 추출물 또는 이로부터 분리된 화합물을 포함하는 대사성 질환의 예방 또는 치료용 조성물
KR101373755B1 (ko) 아릴나프탈렌 리그난 유도체를 함유하는 치매 예방 및/또는 치료용 조성물
KR101418059B1 (ko) 후박 추출물을 포함하는 항암용 조성물

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
E902 Notification of reason for refusal
E701 Decision to grant or registration of patent right
GRNT Written decision to grant