KR100584223B1

KR100584223B1 - 녹차 추출물을 포함하는 질 세정용 조성물

Info

Publication number: KR100584223B1
Application number: KR1020050036332A
Authority: KR
Inventors: 배수미; 김순영; 김상희
Original assignee: (주)보성녹차테크; 안웅식
Priority date: 2005-04-29
Filing date: 2005-04-29
Publication date: 2006-05-26

Abstract

본 발명은 녹차로부터 추출한 에틸아세테이트 분획물을 포함하는 항균 조성물 및 이를 함유하는 질 세정제에 관한 것이다.

본 발명의 조성물은 질내 악취의 원인균을 포함한 질내 세균을 살균할 수 있으므로 질내 세균 감염을 예방 또는 치료하기 위한 질세정제로서 유용하게 사용할 수 있다.

녹차, 에틸아세테이트 분획물, 질 세정제

Description

녹차 추출물을 포함하는 질 세정용 조성물{Composition for vaginal hygiene comprising green tea extract}

도 1은 본 발명에 따른 녹차 추출물의 용매 분획 공정을 나타내는 흐름도이다.

도 2는 Clostridium sordelli, Clostridium innocum, Staphylococcus saccharolyticus에 대해 37℃의 혐기 상태에서 녹차의 에틸아세테이트 분획물 존재 하에 2 내지 3일 동안 배양한 후 콜로니의 생성 여부를 나타내는 사진이다.

도 3은 녹차 추출물(열수 추출물, GE) 또는 에틸아세테이트(EtOAc), 메틸렌클로라이드(MC) 및 물(H₂O) 분획물의 그람 음성 박테리아인 Proteus mirabilis에 대한 항균 활성 측정 결과를 나타내는 사진이다.

도 4는 녹차 추출물(열수 추출물, GE) 또는 에틸아세테이트(EtOAc), 메틸렌클로라이드(MC) 및 물(H₂O) 분획물의 Streptococcus pyogenes KCTC 3096에 대한 항균 활성 측정 결과를 나타내는 사진이다.

도 5는 녹차 추출물(열수 추출물, GE) 또는 에틸아세테이트(EtOAc), 메틸렌클로라이드(MC) 및 물(H₂O) 분획물의 Candida albicans KCTC 7270에 대한 항균 활성 측정 결과를 나타내는 사진이다.

녹차 추출물의 효능에 대하여는 다양한 연구들이 진행되어 왔다. 알려진 녹차의 효능으로는 항균, 항암, 항산화 작용, 자외선 흡수 작용, 항히스타민 작용, 유해산소 제거, 미백효과, 콜레스테롤 감소, 항고혈압, 알코올과 담배의 해독 및 해소작용, 환경호르몬의 체외 배설 촉진 작용, 당뇨병 완화작용 등을 들 수 있다. 상기한 다양한 효능에 기초하여 녹차 또는 이의 추출물을 이용한 항균제, 식품, 화장품, 위생패드, 껌, 세제 등 다양한 제품이 개발되고 있다.

녹차 추출물 중에는 항균, 항암 활성과 관련하여 폴리페놀이 주요 유효성분으로 공지되어 있다. 알려진 폴리페놀 종류에는 에피갈로카테킨 갈레이트, 에피갈로카테킨, 에피카테킨 갈레이트, 에피카테킨, 카테킨 등이 포함된다. 그러나, 이전의 보고는 녹차 추출물의 항균 활성에 근거하여 세정제로 사용될 수 있다고 단순 개시하고 있을 뿐 질 세정제로서의 응용가능성에 대해서는 심도 있는 연구가 수행되지 않았다.

현재 살균 목적으로 사용되고 있는 화학 물질들은 건강상의 안전이 우려되고 있으며, 천연 물질-유래의 항균제라 하더라도 경제적인 측면, 항균 활성 등을 고려하였을 때 이들을 만족시키는 항균제의 개발이 여전히 요구되고 있다.

이러한 배경 하에서, 본 발명자는 녹차로부터 일련의 추출 공정을 통해 수득한 에틸아세테이트 분획 추출물이 열처리 및 pH 변화에 안정하며 질 분비물로부터 직접 분리한 질내의 악취 및 질병의 원인이 되는 병원성 미생물과 기타 질내 미생물에 대해서 항균 활성을 나타내는 것을 확인하여 화학적 질 세정제가 갖는 안전성의 문제를 야기하지 않으면서 사용할 수 있는 안전한 천연 물질 유래의 세정제를 제공할 수 있게 되었다.

본 발명의 목적은 녹차로부터 일련의 추출 공정을 통해 분리한 에틸아세테이트 분획 추출물을 포함하는 항균 조성물을 제공하는 것이다.

또한, 본 발명의 또 목적은 상기한 조성물을 포함하는 질 세정제를 제공하는 것이다.

하나의 양태로서, 본 발명은 녹차잎의 열수 추출물을 물과 메틸렌클로라이드에 분배시켜 수용액층과 메틸렌클로라이드층을 분리한 다음 상기 수용액층을 물과 에틸아세테이트에 분배시켜 에틸아세테이트층을 분리하여 얻어진 에틸아세테이트 분획 추출물을 유효 성분으로 포함하는 항균 조성물에 관한 것이다.

본 발명자들은 녹차잎을 도 1에 개시된 공정을 통해 열수 추출물(녹차 추출물), 메틸렌클로라이드 분획물, 에틸아세테이트 분획물 및 물 분획물로 분획화하였으며, 이 분획물 가운데 에틸아세테이트 분획물이 질 분비물과 월경혈의 악취 원인균 및 질내 병원균에 대해 우수한 항균 작용을 나타내었다.

상기한 녹차의 에틸아세테이트 분획물은, 구체적으로 분쇄된 건조 녹차잎을 녹차잎에 대한 물의 중량비 10 내지 50 중량%의 범위에서 80℃ 이상의 열수를 녹차잎에 첨가한 다음 2 내지 4회 반복 추출하여 여과하고, 얻어진 여과액에 메틸렌클로라이드를 첨가하여 추출한 후 수용액층을 회수하여 이 수용액층을 다시 에틸아세테이트로 추출하여 얻어지는 에틸아세테이트 층을 농축한 다음, 감압 증류하여 용매를 완전히 제거한 후, 동결 건조하여 얻어진다.

상기 에틸아세테이트 분획 추출물의 살균 효과를 조사하기 위해, 병원성 또는 질환과 관련이 있으며 악취의 원인인 Clostridium sordelli, Clostridium innocum, Staphylococcus saccharolyticus 균주를 직접 질 분비물로부터 선별하여 상기 에틸아세테이트 분획 추출물을 처리하였다. 그 결과, 상기 균주 모두 성장이 완전히 저해되었으며 Staphylococcus saccharolyticus의 경우 0.2 mg/㎖에서도 성장이 완전히 저해되었다.

또한, 상기한 에틸아세테이트 분획 추출물은 또 다른 질내 병원성 세균인 Proteus mirabilis 및 Streptococcus pyrogenes에 대해서도 우수한 살균 효과를 나타내었다.

녹차의 다양한 효능에 대한 꾸준한 연구에도 불구하고, Clostridium sordelli, Clostridium innocum, Staphylococcus saccharolyticus, 및 Proteus mirabilis와 같은 질 분비물 또는 월경혈의 악취 및 질과 관련된 질병을 일으키는 병원성 미생물에 대한 녹차의 항균 활성에 대해서는 보고된 바 없었다.

본 발명에 따르면, 상기 에틸아세테이트 분획 추출물은 상기한 바와 같은 질내 세균에 대한 살균 효과뿐만 아니라 소취 효과도 우수하였다. 또한, 열처리 시 EGCG 표준품과 비교하여 우수한 열적 안정성을 나타내었으며, pH 변화에도 영향을 받지 않았다.

따라서, 본 발명에 따른 녹차의 에틸아세테이트 분획 추출물의 상기한 바와 같은 우수한 특성을 이용하여 이를 질 세정제로서 사용하므로써 질 분비물 및 월경혈에 의한 악취를 제거하고 병원성 세균을 살균할 수 있다.

또 다른 양태로서 본 발명은 상기 에틸아세테이트 분획 추출물을 포함하는 질 세정제를 제공한다.

본 발명의 질 세정제는 상기한 에틸아세테이트 분획 추출물을 유효 성분으로 포함하는 다양한 제형 형태를 취할 수 있다. 일 양태로서, 용액형, 현탁형, 유제형 등의 액상 제형을 들 수 있으며, 멸균수에 용해보조제, 유화제, pH 조절을 위한 완충제 등 첨가하여 제조할 수 있다.

상기한 바와 같은 조성물은 유효 성분에 추가하여 이를 제형화하기 위한 담체를 포함할 수 있다. 이러한 담체에는 경구 투여 시에는 결합제, 활탁제, 붕해제, 부형제, 가용화제, 분산제, 안정화제, 현탁화제, 색소, 향료 등을 사용할 수 있으며, 주사제의 경우에는 완충제, 보존제, 무통화제, 가용화제, 등장제, 안정화제 등을 혼합하여 사용할 수 있으며, 국소 투여용의 경우에는 기제, 부형제, 윤활제, 보존제 등을 사용할 수 있다. 상술한 바와 같은 약제학적으로 허용되는 담체와 혼합하여 다양한 제형이 제조될 수 있으며, 예를 들어, 경구 투여 시에는 정제, 트로키, 캡슐, 엘릴시르, 서스펜션, 시럽 등의 형태로 제조할 수 있으며, 주사제의 경우에는 단위 투약 앰플 또는 다수 회 투약 형태로 제조할 수 있다. 상기 조성물의 투여 경로는 목적 조직에 도달할 수 있는 한 어떠한 일반적인 경로를 통하여 투여될 수 있다. 복강내 투여, 정맥내 투여, 근육내 투여, 피하 투여, 피내 투여, 경구 투여, 비내 투여 될 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다. 본 발명의 조성물은 약제학적으로 유효한 양으로 투여하며, 환자의 질병 종류 및 중증도, 연령, 성별, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료 기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 상기 요소를 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 보다 상세히 설명하고자 한다. 이러한 실시예는 단지 본 발명을 설명하고자 하는 것으로써 본 발명은 이에 제한되지 않는다.

실시예 1 녹차의 용매 분획별 항균 활성 측정

1-1. 녹차의 추출 및 분획

건조 녹차엽을 분쇄기로 분쇄 후 분쇄된 녹차엽 100g과 80℃의 열수 1000 ㎖를 혼합하고 80℃에서 60분간 2회 반복하여 추출 후 여과하였다. 용매의 극성 정도에 따라 도 1에 도시된 추출과정을 거쳐, 비극성 용매인 메틸렌클로라이드(MC) 및 에틸아세테이트(EtOAc)와 극성용매인 물로 분획한 후 농축하여 용매를 감압증류하여 완전히 제거한 후 동결 건조하여 메틸렌클로라이드, 물 및 에틸아세테이트 각각의 분획물을 얻었다.

한편, 메틸렌클로라이드로 분획하기 전의 녹차 추출물(열수 추출물)을 농축하여 동결건조 후 항균 실험에 사용하였다.

1-2. 녹차 용매 분획물의 카테킨 및 카페인 정량

상기에서 얻어진 녹차 추출물 및 이들의 분획물을 대상으로 항균 활성에 중요한 역할을 하는 것으로 알려진 카테킨 및 카페인에 대해 정량 분석을 실시하였다. 정량분석 조건은 다음과 같다: JASCO(JASCO Co., 일본산) HPLC 펌프(Model PU-980), 컬럼 오븐(Model CO-965), 자동 인젝터(Model AS-950-10) 및 UV/VIS 검출기(Model UV-975)로 구성된 HPLC를 이용하여 Sentri^TMμ-본다탁 C₁₈ 가드 컬럼(125Å, 3.9×20 mm, Waters, USA)이 장착된 μ-본다탁 C₁₈ 컬럼(125Å, 3.9×300 mm, Waters, USA)을 사용하여 분리하였다. 이동상은 40℃에서 유속 1 ㎖/분이었으며, 카테킨과 카페인은 207 nm에서 검출되었다. 이동상의 자세한 조건은 표 1에 나타내었다.

이동상	A : H₂O-CH₃CN-85% H₃PO₄(94.95: 5: 0.05, v/v/v)
	B : H₂O-CH₃CN-85% H₃PO₄(49.95: 50: 0.05, v/v/v)
경사도 테이블
경사도 테이블	시간	유속(㎖/분)	%A	%B
	0	1.0	90	10
	5	1.0	90	10
	10	1.0	70	30
	20	1.0	20	80

각 용매 분획물의 카테킨 및 카페인 정량 분석 결과를 아래의 표 2에 정리하였다. 표 2에 나타낸 바와 같이, 용매 분획에 의해 녹차 추출물 중의 카테킨은 주로 에틸아세테이트층으로 이행되었고 카페인은 메틸렌클로라이드층으로 이행되었다. 물층에는 카테킨 일부와 카페인 일부가 남아 있었다. 카테킨 중 생리활성 효과가 큰 EGCG의 경우 녹차 추출물에서는 30.43 mg/g, 에틸아세테이트 분획물에서는 114.73 mg/g, 물 분획물에서는 11.32 mg/g이 검출되었다. 메틸렌클로라이드(MC) 분획물에서는 936.72 mg/g의 카페인만 검출되었다.

	함량 (mg/g)
	녹차 추출물	EtOAc 분획물	H₂O 분획물	MC 분획물
GC	5.27	6.81	23.06	N.D.
EGC	30.30	81.08	24.89	N.D.
C	2.75	6.01	6.10	N.D.
EC	14.57	41.66	7.39	N.D.
EGCG	30.43	114.73	11.32	N.D.
GCg	1.38	2.84	5.58	N.D.
ECg	9.02	33.58	1.49	N.D.
Cg	N.D.	N.D.	0.44	N.D.
카페인	58.43	11.89	22.84	936.72

N.D. : 미검출

GC: Gallocatechin

EGC: Epigallocatechin

C: Catechin

EC: Epicatechin

EGCG: Epigallocatechin gallate

GCg: Gallocatechin gallate

Cg: Catechin gallate

실시예 2 항균 활성 측정

각각의 용매에서 분획된 메틸렌클로라이드, 에틸아세테이트 및 물의 3개 분획물, 분획 전 녹차 추출물(또는 열수 추출물, GE) 및 대조용으로 카페인과 EGCG 표준물질로 항균 활성을 측정하였다.

항균 활성은 페이퍼 디스크법을 이용한 클리어 존의 직경 크기로 측정하였으며 질내 세균으로 알려진 Proteus mirabilis KCTC 2510, Streptococcus pyogenes KCTC 3096, Candida albicans KCTC 7270을 대상으로 시험되었다.

2-1. Proteus mirabilis에 대한 항균 활성 측정

Proteus mirabilis에 대해 녹차 추출물 및 각 분획물의 농도에 따른 항균 활성을 측정하였다. 영양평판배지에 균액을 10⁶세포가 되게 접종하여 멸균 면봉으로 균일하게 도말하고 8 mm 멸균 페이퍼 디스크(Advantec, Toyo Roshi Kaishi, Ltd., 일본)를 올려놓은 후 녹차 추출물 및 분획물을 농도별로 50 ㎕씩 흡수시켜 37℃ 배양기에서 24시간 배양시킨 후 클리어 존의 직경을 측정하였으며, 그 결과를 표 3에 나타내었다.

	클리어 존 직경(mm)
	1.5625	3.125	6.25	12.5	25	50
녹차 추출물(GE)	-	-	10.0	16.7	19.3	21.8
EtOAc 분획물	11.0	12.0	17.3	21.7	24.3	28.2
MC 분획물	-	-	-	-	-	-
물 분획물	-	-	-	-	9.0	17.0
EGCG (대조용)	-	11.0	16.3	16.3	19.0	24.2
카페인 (대조용)	-	-	-	-	-	-

표 3에 나타낸 바와 같이, 2.60×0⁶ CFU/㎖ 수준에서 녹차 추출물은 3.125 mg/㎖ 첨가 시에는 클리어 존이 나타나지 않았으나 6.25 mg/㎖에서는 10.0 mm, 12.5 mg/㎖에서는 16.7 mm, 25 mg/㎖에서는 19.3 mm, 50 mg/㎖에서는 21.8 mm의 클리어 존이 나타났다.

EtOAc 분획물은 0.78125 mg/㎖에서는 클리어 존이 나타나지 않았으나 1.56 mg/㎖에서는 11.0 mm, 3.125 mg/㎖에서는 12 mm, 6.25 mg/㎖에서는 17.3 mm, 12.5 mg/㎖에서는 21.7 mm, 25 mg/㎖에서는 24.3 mm, 50 mg/㎖에서는 28.2 mm의 클리어 존을 나타냈다. 물 분획물은 25 mg/㎖에서는 9 mm, 50 mg/㎖에서는 17.0 mm의 클리어 존을 나타냈다.

대조용 EGCG의 농도별 클리어 존 측정 결과, 3.125 mg/㎖에서는 11 mm, 6.25 mg/㎖에서는 16.3 mm, 12.5 mg/㎖에서는 16.3 mm, 25 mg/㎖에서는 19.0 mm, 50 mg/㎖에서는 24.2 mm의 클리어 존을 나타내어 녹차 추출물 보다는 항균 활성이 높게 나타났으나 EtOAc 분획물 보다는 활성이 낮게 나타났다.

상기한 결과로부터, Proteus mirabilis에 대한 항균 활성은 EGCG 단독 보다는 여러 카테킨의 상승작용에 의해 효과가 더 향상될 수 있는 것으로 추정되며, EtOAc 분획물에서는 이러한 여러 카테킨에 의한 상승작용이 확인되었다.

또한, 도 3에 도시된 바와 같이, 녹차 추출물과 EtOAc 분획물에서 활성을 나타냈으며 미약하나마 물 분획물에서도 활성을 나타냈으나 MC 분획물에서는 활성을 나타내지 않았다. 표준품 EGCG 및 카페인을 대상으로 실험한 결과, EGCG에서는 활성을 나타냈으나 카페인에 대해서는 활성을 나타내지 않았다.

2-2. Streptococcus pyogenes에 대한 항균 활성 측정

그람 양성균인 Streptococcus pyogenes에 대해 녹차 추출물 및 각 분획물의 농도에 따른 항균 활성을 측정하였다. 브레인 하트 인퓨전 평판배지에 균액을 10⁶세포가 되게 접종하여 멸균 면봉으로 균일하게 도말하고 8 mm 멸균 페이퍼 디스크를 올려놓은 후 녹차 추출물 및 분획물을 농도별로 50 ㎕씩 흡수시켜 37℃ 배양기에서 24시간 배양시킨 후 클리어 존의 직경을 측정하였으며, 그 결과를 표 4에 기재하였다.

	클리어 존 직경(mm)
	1.5625	3.125	6.25	12.5	25	50
녹차 추출물	-	-	9.0	10.0	11.7	17.3
EtOAc 분획물	약함	9.7	11.7	13.3	16.7	18.3
MC 분획물	-	-	-	-	-	-
물 분획물	-	-	-	-	-	11.0
EGCG (대조용)	-	9.5	11.0	13.3	17.0	19.0
카페인 (대조용)	-	-	-	-	-	-

표 4에 나타낸 바와 같이, 3.7×10⁶ CFU/㎖ 수준에서 녹차 추출물은 3.125 mg/㎖ 첨가시에는 클리어 존이 나타나지 않았으나 6.25 mg/㎖에서는 9.0 mm, 12.5 mg/㎖에서는 10.0 mm, 25 mg/㎖에서는 11.7 mm, 50 mg/㎖에서는 17.3 mm의 클리어 존이 나타났다.

EtOAc 분획물은 3.125 mg/㎖에서는 약하게 저해 흔적만 나타났으나 3.125 mg/㎖ 9.7 mm, 6.25 mg/㎖에서는 11.7 mm, 12.5 mg/㎖에서는 13.3 mm, 25 mg/㎖에서는 16.7 mm, 50 mg/㎖에서는 18.3 mm의 클리어 존을 나타냈다. 물 분획물은 50 mg/㎖에서만 11 mm의 클리어 존을 나타내 항균 활성이 아주 낮은 것으로 나타났다.

표준품 EGCG의 농도별 클리어 존 측정 결과 3.125 mg/㎖에서는 9.5 mm, 6.25 mg/㎖에서는 11.0 mm, 12.5 mg/㎖에서는 13.3 mm, 25 mg/㎖에서는 17.0 mm, 50 mg/㎖에서는 19.0 mm의 클리어 존을 나타내 EtOAc 분획물과 거의 유사한 항균 활성을 나타냈다.

또한, 도 4에서도 확인되는 바와 같이, 녹차 추출물과 EtOAc 분획물은 항균 활성을 나타냈으나, MC 분획물에서는 활성을 나타내지 않았다. 대조용 EGCG와 카페인을 대상으로 실험한 결과, EGCG에서만 활성을 나타내어 항균 활성 경향은 Proteus mirabilis와 유사하게 나타났다.

2-3. Candida albicans에 대한 항균 활성 측정

진균인 Candida albicans에 대해 녹차 추출물 및 각 분획물의 농도에 따른 항균 활성을 측정하였다. 각 농도별 항균 활성 측정은 YM 평판배지에 균액을 10⁵세포가 되게 접종하여 멸균 면봉으로 균일하게 도말하고 8 mm 멸균 페이퍼 디스크를 올려놓은 후 시료를 농도별로 50 ㎕씩 흡수시켜 25℃ 배양기에서 48시간 배양시킨 후 클리어 존의 직경을 측정하였으며, 그 결과를 표 5에 나타내었다.

	클리어 존 직경(mm)
	30	40	50	60	80	100
녹차 추출물	-	-	-	-	-	-
EtOAc 분획물	-	-	-	-	-	-
MC 분획물	-	(11.5)¹⁾	(12.7)	10.0²⁾(13.7)	10.7 (14.3)	12.7 (16.0)
물 분획물	-	-	-	-	-	-
EGCG (대조용)	-	-	-	-	-	-
카페인 (대조용)	(13.0)	(13.0)	10.5 (13.3)	10.7 (15.3)	12.3 (19.7)	14.7 (22.7)

¹⁾저해 존

²⁾클리어 존

표 5에 나타낸 바와 같이, Proteus mirabilis 및 Streptococcus pyrogenes와는 다른 양상을 나타내었다. Candida albicans의 생육을 완전히 억제하는 클리어 존과 Candida albicans의 생육을 저해하는 저해 존이 동시에 나타났으며, 5.05×0⁵ CFU/㎖ 수준에서 MC 분획물의 경우 40 mg/㎖에서는 완전히 균을 사멸하지는 못하고 생육을 저해하는 효과만 있었고 생육을 완전히 억제하는 클리어 존의 생성은 60 mg/㎖에서 10 mm, 80 mg/㎖에서 10.7 mm, 100 mg/㎖에서 12.7 mm의 직경을 나타냈다.

대조용 카페인의 경우는 30 mg/㎖에서 생육을 저해하는 효과가 나타났으며 클리어 존은 50 mg/㎖에서 10.52 mm, 60 mg/㎖에서 10.7 mm, 80 mg/㎖에서 12.3 mm, 100 mg/㎖에서 14.7 mm의 직경을 나타내었다.

또한, 도 5에서도 확인되는 바와 같이, MC 분획물 및 표준품 카페인에 대해서만 활성을 나타내었다.

실시예 3 질 분비물 및 월경혈에서 분리한 균주에 대한 항균 활성 측정

가톨릭 의대 강남성모병원 이형증 클리닉을 방문한 20명을 대상으로 샘플을 수집하였다. 샘플에서 분리 동정한 균주 중에서 유산균 외에 병원성 또는 질병과 관련이 있으며 악취의 원인이라고 추측되는 3종의 균주 Clostridium sordelli, Clostridium innocum, Staphylococcus saccharolyticus를 선별하였다.

EtOAc 분획물의 항균 효과를 측정하기 위하여 아래의 농도와 같이 100 mg/㎖ 내지 0.1 mg/㎖까지 EtOAc 분획물을 희석한 후 트로픽 소이 아가 배지에 포함하여 선발된 균주 Clostridium innocum, Clostridium sordelli, Staphylococcus saccharolyticus을 도말하고, 37 ℃의 혐기 상태에서 2 내지 3일 동안 배양 후 콜로니의 생성여부를 관찰하여 항균성을 판정하였다. 모든 실험은 6회 반복하여 실시하였으며, 그 결과를 표 6 및 도 2에 나타내었다. 표 6에서 항균 효과 결과는 콜로니 있음(＋)과 없음(－)으로만 판독하였다.

시료 균주	EtOAc 분획물 (mg/㎖)
시료 균주	100	50	25	12.5	6.25	3.125	1.5625	0.8	0.4	0.2	0.1
C. innocum	－	－	－	－	－	－	＋	＋	＋	＋	＋
C. sordelli	－	－	－	－	－	－	＋	＋	＋	＋	＋
S. saccharolyticus	－	－	－	－	－	－	－	－	－	－	＋

3종류의 균주 모두 3.125 mg/㎖의 EtOAc 분획물을 함유한 배지에서 성장을 못하는 것으로 나타났으며, 특히 S. saccharolyticus의 경우 0.2 mg/㎖의 EtOAc 분획물로만 처리하여도 완전히 성장이 저해되는 것으로 나타나서 조사한 균주들 중 EtOAc 분획물에 가장 민감하게 반응하는 것으로 나타났다.

실시예 4 열 안정성 및 pH 영향 시험

4-1. 열 안정성 시험

1) 시료의 열처리

열 안정성 시험은 각각의 균주에 대해 활성이 인정된 EtOAc 분획물을 대상으로 80℃에서 30분, 100℃에서 30분 가열하고 121℃에서 15분간 고압 멸균시킨 후 시험용 시료로 사용하였다.

2) 카테킨 및 카페인 분석

열처리된 각각의 EtOAc 분획물에 대해 HPLC를 이용하여 카테킨 및 카페인을 분석하였다. 표 7은 EtOAc 분획물에 대한 결과로서 총 카테킨 함량은 열처리를 하지 않은 대조구에 비해 80℃에서 91.6%, 100℃에서 82.4%, 121℃에서 72.9% 만이 잔존하였으며 대조구에 없었던 마늘산이 모든 열처리구에서 검출되었다. 카테킨 중 시스 형태인 에피카테킨인 EGC, EC, EGCG 및 ECg는 감소하였고 트란스 형태의 카테킨인 GCg 및 Cg는 증가하였다. 특히, 에피카테킨 중 EGC의 감소폭이 가장 컸으며 121℃, 15분 멸균처리에 의해 카테킨의 에피머리제이션이 가속화되었다. 카페인의 경우는 모든 열 처리구에서 대조구에 비해 약간씩 증가하였다.

	함량(mg/g)
	대조군	80℃	100℃	121℃
GA^*	미검출	4.55^c	8.18^b	22.96^a
GC^*	6.81^d	8.57^c	14.72^b	31.69^a
EGC^*	81.08^a	66.77^b	50.80^c	22.29^d
C^*	6.01^d	7.25^c	9.84^b	25.43^a
EC^*	41.66^a	39.92^a	34.23^b	19.30^c
EGCG^*	114.73^a	102.1^b	81.79^c	43.21^d
GCg^*	2.84^d	4.93^c	13.32^b	36.78^a
ECg^*	33.58^a	33.16^a	27.80^b	16.81^c
Cg^*	미검출	미검출	3.84^b	13.53^a
카페인	11.89^b	12.71^ab	12.04^b	13.30^a

^*: P〈0.0001, ^**: P〈0.0233

^a,b,c,d각각의 열에서 같은 첨자는 실질적인 차이가 없음을 나타낸다.

열처리가 녹차 추출물의 카테킨 및 카페인 함량에 미치는 영향에 대한 HPLC 분석 결과는 표 8에 나타낸 바와 같이 총 카테킨 함량은 열처리를 하지 않은 대조군에 비해 80℃에서 72.7%, 100℃에서 58.0%, 121℃에서 44.4% 만이 잔존하여 EtOAc 분획물에서 보다 열처리에 더 불안정하였으며, EtOAc 분획물에서와 같이 카테킨 중 시스 형태의 에피카테킨인 EGC, EC, EGCG 및 ECg는 감소하였고 트란스 형태의 카테킨인 GC, C, GCg 및 Cg는 증가하였다. 특히, 에피카테킨 중 EGC의 감소폭이 가장 컸다. 카페인의 경우는 모든 열처리군에서 대조군에 비해 약간씩 증가하였다.

	함량(mg/g)
	대조군	80℃	100℃	121℃
GC^*	5.27^c	5.40^c	8.63^b	10.47^a
EGC^*	30.30^a	19.88^b	10.30^c	4.11^d
C^*	2.75^d	3.19^c	5.15^b	9.25^a
EC^*	14.57^a	12.71^b	9.93^c	4.10^d
EGCG^*	30.43^a	21.02^b	13.97^c	7.28^d
GCg^*	1.38^d	1.98^c	4.84^b	7.46^a
ECg^*	9.02^a	7.49^a	3.81^b	1.93^b
Cg^*	미검출	미검출	3.28^b	5.18^a
카페인^**	58.43^b	58.75^b	60.08^b	61.94^a

^*: P〈0.0001, ^**: P〈0.0066

표 9는 표준품 EGCG에 대한 열처리 결과로서, 대조군에 없었던 마늘산 및 EGCG의 에피머인 GCg가 생성되었으며 EtOAc 분획물처럼 다른 카테킨과 혼재해 있을 때보다 열처리에 더 민감하였다.

	함량(mg/g)
	대조군	80℃	100℃	121℃
GA	N.D.	114.22^c	219.05^b	444.73^a
EGCG^*	795.35^a	445.13^b	307.01^c	105.19^d
GCg	N.D.	47.99.^c	111.93^b	131.09^a

^*EGCG: 분석 80%

^a,b,c,d각각의 열에서 같은 첨자는 실질적인 차이가 없음을 나타낸다 (P〈0.0001).

4-2. pH의 영향

pH가 녹차 각 분획물의 항균 활성에 미치는 영향을 조사하기 위하여 pH 4.0, 7.0, 10.0의 Clark-Lubs 완충액에 각 시료를 용해하여 각 균주를 대상으로 실험하였다. 그 결과 표 10에 나타낸 바와 같이, EtOAc 분획물이 모든 pH 영역에서 녹차 추출물과 EGCG 표준품에 비해 향상된 항균 활성을 나타내었다. 아울러, Streptococcus pyogenes와 Candida albicans의 경우, 시료의 pH에 관계없이 거의 유사한 항균 활성을 나타냈다.

	클리어 존 직경(mm)
	Proteus mirabilis	Streptococcus pyogenes
녹차 추출물
pH 4.0	10.3	14.7
pH 7.0	17.7	15.3
pH 10.0	22.7	13.7
EtOAc 분획물
pH 4.0	13.3	20.3
pH 7.0	27.0	21.0
pH 10.0	33.0	21.7
EGCG
pH 4.0	11.3	17.0
pH 7.0	25.0	18.7
pH 10.0	30.0	20.0
완충용액
pH 4.0	-	-
pH 7.0	-	-
pH 10.0	-	-

본 발명에 따라 녹차로부터 추출한 에틸아세테이트 분획물은 열처리 및 pH 변화에 안정하며, 질 분비물 및 월경혈과 같이 질내 악취의 원인균을 포함한 질내 세균을 살균할 수 있으므로, 질 세정제로 유용하게 사용될 수 있다.

Claims

녹차잎의 열수 추출물을 물과 메틸렌클로라이드에 분배시켜 수용액층과 메틸렌클로라이드층을 분리한 다음 상기 수용액층을 물과 에틸아세테이트에 분배시켜 에틸아세테이트층을 분리하여 얻어진 에틸아세테이트 분획 추출물을 유효 성분으로 포함하는, Clostridium sordelli, Clostridium innocum, Staphylococcus saccharolyticus 또는 Proteus mirabilis 에 대한 항균 조성물.
제 1항에 따른 항균 조성물을 포함하는 질 세정제.