KR100385448B1 - 브라질린(Brazilin)을주성분으로함유하는탠닝화장료 - Google Patents

Abstract

본 발명에 따르면, 브라질린을 주성분으로 함유하는 탠닝 화장료가 제공된다.

본 발명의 탠닝 화장료에 함유되는 브라질린은 소목으로부터 분리·정제될 수 있으며, 멜라닌 형성 세포의 티로시나아제의 활성을 촉진시켜 멜라닌 생합성을 증가시킴으로써 자외선의 조사없이도 멜라닌의 함량을 증가시켜 피부를 탠닝시킨다.

본 발명의 탠닝 화장료는 자외선 조사의 부작용이 없고 지속적인 탠닝 효과를 가진다.

Description

브라질린(Brazilin)을 주성분으로 함유하는 탠닝 화장료

본 발명은 브라질린(Brazilin)을 주성분으로 함유하는 탠닝 화장료에 관한 것이다.

피부의 자연적인 탠닝(tanning)은 피부를 짙은 갈색으로 만드는 것으로, 이는 멜라닌 형성 세포(Melanocyte)내에서 멜라닌이 합성되고 방출되어 표피세포에 분포한 데서 기인한다. 이때 티로시나아제(tyrosinase)는 멜라닌 합성 경로에서 가장 핵심적인 역할을 하는데, 멜라닌 형성 세포에서 티로시나아제의 활성이 촉진되면 멜라닌 합성이 증가되어 결국 피부가 탠닝이 되는 것이다.

탠닝에 의한 갈색피부는 건강하고 젊으며 세련된 인상을 주기 때문에 서구의 많은 사람들뿐만아니라 최근 국내 젊은 여성들에 의하여 선호되고 있다.

현재 주로 사용되고 있는 피부의 탠닝 방법은 자연적으로 태양광에 노출하거나 인공적인 자외선 조사장치에 의하여 자외선 조사를 받는 것이다. 그러나 자외선에 대한 피부의 장기간 노출은 화상뿐만아니라 주름살, 표피조직이 두꺼워짐, 엘라스틴 단백질의 변화, 피부 탄력성 상실 등의 광노화 및 피부암인 멜라노마(Melanoma) 등의 부작용이 있다. 특히 태양광의 경우 오존층의 파괴로 과다한 자외선의 조사가 심각하게 우려되고 있다.

이러한 자외선 조사의 부작용이 없는 또다른 피부의 탠닝 방법이 연구되고 있는데, DHA(Dihydroxy acetone)를 이용하여 피부를 염색하는 방법[K.Laden et al., J. Soc. Cosmotic Chemist 16, 777-782 (1965): T. Kurz et al. Cosmetic & Toiletries 109, 55-61 (1994)]과 티로신(Tyrosine), 티로신과 가수분해된 콜라겐, 티로신 유도체 또는 DAG(Diacyl glycerol)을 이용하여 멜라닌 형성 세포에서의 멜라닌의 합성을 증가시키는 방법[A.Muller. Cosmetics & Toiletries 107, 125-132 (1992); 미국특허 5,352,440]이 있다. 이중 DHA를 이용한 피부 염색 방법은 그 염색상태가 지속적이지 못해 자연스러운 탠닝 효과를 얻지 못하고 있다.

본 발명자들은 이미 소목 추출액이 탠닝 화장료로 이용될 수 있음을 발명한바 있다(특허출원 96 - 30755). 또한 본 발명자들은 연구를 계속하여 소목 추출물을 박막크로마토그래피하고 각 성분을 분리한 후 이들 성분중 티로시나아제 활성을 촉진시키는 성분인 브라질린에 주목하였다.

브라질린(Brazilin)은 소목으로부터 분리 정제되거나 합성가능한 단일화합물로, 주로 색소제로 이용되어 오고 있는데 미국의 로레알 사는 이미 브라질린을 이용하여 머리카락의 케라티노스 화이버 (Keratinous fiber)을 염색하는 방법을 특허출원한 바 있다(미국 특허 제 5,073,174 호). 따라서 브라질린이 탠닝 화장료로 사용된 예는 없었으며, 본 발명에서 처음으로 브라질린이 탠닝 화장료로 사용될 수 있음을 발견한 것이다.

본 발명의 목적은 브라질린을 함유하는 부작용이 없고 지속적인 탠닝 효과를 가지는 탠닝 화장료를 제공하는데 있다.

본 발명의 탠닝 화장료는 브라질린을 주성분으로 함유하는 탠닝 화장료이다.

본 발명에서 사용되는 브라질린은 소목 추출물로부터 퍼킨 등의 방법[Perkin et al., J. Chem. Soc., 1928; 1504]에 따라 분리·정제될 수 있다.

본 발명의 탠닝 화장료는 통상적인 크림제로 처방될 수 있다.

본 발명의 브라질린은 멜라닌 형성 세포의 티로시나아제의 활성을 촉진시켜 멜라닌 생합성을 증가시킴으로써, 자외선의 조사없이도 멜라닌의 함량을 증가시켜 피부를 탠닝시키는 것이다.

본 발명의 브라질린은 소목 추출물보다 높은 티로시나아제 활성 증가 효과를 가지는 것으로 나타났다.

또한 본 발명에서는 브라질린이 소목 추출물에서 티로시나아제 활성을 증가시키는 성분임을 확인하였다.

이하 본 발명을 상세히 설명하나, 본 발명이 이에 한정되는 것은 아니다.

실험예 1 : 브라질린의 티로시나아제 활성 증가 효과

브라질린, 소목추출물 및 코직산(kojic acid)에 대하여 티로시나아제 활성 증가 효과를 측정하였다. 이때 코직산은 멜라닌 합성을 저해하는 물질이다.

티로시나아제는 버섯에서 분리 및 정제된 것으로 시그마(SIGMA)사에서 구입하여 사용하였다. 기질인 티로신은 0.05M 인산나트륨 완충용액(pH 6.8)에 녹여 0.3mg/ml 용액으로 만들어 사용하였다.

브라질린은 완충용액에 희석하여 적당한 농도로 조절하여 시료액으로 사용하였다.

티로신 용액 0.5 ㎖를 시험관에 넣고 여기에 브라질린 시료액 0.5 ㎖를 가하고 37℃ 항온기에서 10분동안 방치한 후, 200 유니트/㎖의 티로시나아제 0.5 ㎖를 넣고 37℃에서 10분간 반응시킨다. 이때 대조군은 각 추출물 대신 완충용액만 0.5 ㎖를 넣은 것이다. 이 반응액이 든 시험관을 얼음위에 놓아 급냉시켜 반응을 중지시키고, 분광 광도계(Spectrophotometer)로 파장 475 nm에서의 흡광도를 측정한다.

각 추출물의 티로시나아제 활성 증가 효과는 하기의 공식으로 구한다.

실험 결과는 하기의 표 1에 나타낸 바와 같다.

표 1. 브라질린의 티로시나아제 활성 증가 효과

브라질린과 소목추출물은 그 농도가 증가함에 따라 티로시나아제 활성을 증가시키는 효과를 보였으며 이때 브라질린은 소목추출물보다 티로시나아제 활성을 더욱 증가시키는 것으로 나타났다. 한편 멜라닌 합성 억제제인 코직산은 그 농도가 증가함에 따라 티로시나아제 활성을 감소시켰다.

실험예 2 : 멜라닌 형성 세포의 증식에 대한 브라질린의 영향

멜라닌 형성 세포는 마우스 유래 B16-F1 멜라노마(ATCC CRL6323) 세포주를 구입하여 사용하였다.

멜라노마 세포주를 포도당 4.5g/1, 10% 혈청, 1% 항생제가 함유된 DMEM 배지에 접종하여 25cm²T 플라스크에 37℃에서 배양한다. 5% CO₂조건하에서 24시간 배양한 후, 0.02% EDTA가 함유된 0.05% 트립신(Trypsin)을 처리하여 세포를 분리한 후, 96 웰 플레이트에 0.1ml 당 4,000 세포를 접종하고 37℃에서 24시간 배양한다. 배양후 96 웰에 적당 농도의 브라질린을 DMEM 배지에 희석시켜 10μl식 첨가한다. 이를 다시 24시간 배양한 후, 살린-포스페이트 완충용액(PBS)에 MTT를 5mg/ml의 농도로 용해시킨 용액을 10μl씩 첨가한 후, 37℃에서 4시간 반응시킨다. 96 웰 플레이트의 내용물을 완전히 버린 후 MTT 용해 용액인 10% 트리톤 X-100(Triton X-100)을 함유한 산처리 이소프로판올(0.1N HCl)을 웰당 100 μl씩 첨가하여 20분간 교반한 후, ELISA 측정기로 570nm 와 630nm에서 흡광도를 측정한다.

실험결과는 제 1 도에 나타낸 바와 같이, 멜라닌 형성 세포의 증식은 일어나지 않았다. 이는 브라질린이 멜라닌 형성 세포의 증식에 영향을 미치지 않았음을나타낸다.

실험예 3: 멜라닌 형성 세포에서 멜라닌 생성에 대한 브라질린의 영향

멜라닌 형성 세포를 실험예 2에서와 동일한 방법으로 배양하였다.

멜라노마 세포주를 6웰 플레이트에 접종하여 37℃에서 24시간 배양한다. 이때 세포수는 4x10⁴세포/웰이다. 여기에 적당 농도의 브라질린을 DMEM 배지에 희석시켜 배양된 멜라노마 세포에 처리하여 37℃에서 24시간 배양한다. 배양 후 배지를 모두 제거하고, 0.02% EDTA와 0.05% 트립신을 함유한 살린-포스페이트 완충용액(PBS)을 1ml을 처리하여 세포를 분리시킨 후, 1,000 rpm에서 5분간 원심분리하여 세포만 얻는다. 5% 트리클로로아세테이트(TCA)를 처리하여 교반하고, 원심분리하여 침전된 멜라닌을 살린-포스페이트 완충용액으로 세척한다. 침전된 멜라닌에 1N NaOH를 처리하여 용해시킨 후, 475nm에서 흡광도를 측정한다. 멜라닌 농도는 합성 멜라닌(SIGMA)의 표준 농도 곡선으로부터 결정하였다.

실험결과는 제 1 도에 나타낸 바와 같이, 브라질린의 농도가 증가함에 따라 멜라닌 형성 세포에서 멜라닌 함량이 증가하였다.

실험예 1, 2 및 3의 결과를 종합해 볼 때, 브라질린은 멜라닌의 함량을 증가시키며 이는 브라질린의 농도가 증가함에 따라 멜라닌 형성 세포의 증식 없이 멜라닌 형성 세포내의 티로시나아제의 활성이 증가되어 멜라닌 합성을 촉진한데서 기인하는 것임을 나타낸다.

처방예

브라질린을 함유하는 화장료로 크림제의 처방예는 다음과 같다.

제 1 도는 브라질린의 농도변화에 따른 멜라닌 형성 세포의 생존률 및 멜라닌 형성 세포내 멜라닌의 함량을 나타내는 그림이다.

Claims (2)

1. 브라질린을 주성분으로 함유하는 탠닝 화장료.
2. 제 1 항에 있어서, 브라질린이 소목으로부터 분리·정제되는 것임을 특징으로 하는 탠닝 화장료.

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