KR100373928B1 - 엑디스테로이드류와 이리도이드류를 함유하는 식물 추출조성물 및 그의 용도 - Google Patents

Abstract

본 발명은 엑디스테로이드류(ecdysteroids)와 이리도이드류(iridoids)를 주성분으로 함유하는 식물 추출물 및 그의 제조 방법과 상기 추출물을 포함하는 조성물 및 이들의 용도에 관한 것으로서, 구체적으로 추출물에서의 엑디스테로이드류와 이리도이드류의 함량이 질량비로 1:3∼1:10인 것을 특징으로 하는 아주가 투르케스타니카 (Ajuga turkestanica), 아주가 데쿰벤즈 (Ajuga decumbens, 금창초), 라포니카 카르탐모이드 (Rhaponica cartammoides) 또는 셀레나 프리믹타 (Selena primicta) 추출물, 그 제조 방법 및 상기 추출물을 포함하는 의약, 화장품 식품 또는 음료용 조성물에 관한 것이다. 상기 추출물은 모유 생산 촉진, 단백질 생산 촉진, 스트레스에 대한 저항성 증진 및 강장 효과를 가지며, 우수한 보습력과 상피세포의 분화 촉진을 통한 피부 개선효과를 나타내므로, 이들 식물 추출물을 주성분으로 포함하는 조성물은 의약, 화장품, 식품 및 음료용으로 사용될 수 있다.

Description

엑디스테로이드류 와 이리도이드류를 함유하는 식물 추출 조성물 및 그의 용도{Plant extract compositions comprising ecdysteroids and iridoids and the use thereof}

본 발명은 엑디스테로이드류(ecdysteroids)와 이리도이드류(iridoids)를 주성분으로 함유하는 식물 추출물과 이들 식물 추출물을 포함하는 의약, 화장품, 식품 및 음료 조성물에 관한 것이다. 이들 조성물은 여성의 모유 생산을 촉진하거나, 강장 효과를 가지며, 단백질의 생합성을 촉진하는 등, 순수한 엑디스테로이드류만에서는 관찰되지 않았던 여러 가지의 새로운 효능을 갖는다.

엑디스테로이드(ecdysteroids)는 2,3,14-트리하이드록시-△-7-케토스테로이드의 1 군으로서, 공지의 엑디스테론(ecdysterons) 또는 엑디손(ecdysones) 등을 포함하는 폴리히드록실화 스테로이드류에 속하는 화합물이다.

엑디스테로이드, 특히 엑디스테론은 동물계, 곤충 및 식물계에서 중요한 역할을 하는 것으로 알려져 있다. 곤충에 있어서 이 호르몬은 성장 및 생식에 중요한 역할을 한다. 이 호르몬은 처음에는 곤충 탈피 호르몬으로서 동정되었다. 식물에서 이들 물질들의 작용은 완전하게 알려지지는 않았으나, 일부 유도체들은 개화(flowering)에 영향을 미치는 것으로 알려져 있다.

미국 특허 제5,609,873호에는 엑디스테로이드 유도체가 케라티노사이트 분화를 조절한다는 사실과 이를 화장품 재료 및 피부 체세포 배양 배지의 성분으로 사용할 수 있음이 보고되어 있다.

이리도이드류는 그의 공통적 구조적 특징이 시클로펜탄-피란 고리계로 이루어진 천연 물질들의 그룹으로서, 천연 상태로 존재하는 이리도이드류는 일반적으로 글리코시드류의 형태로 존재하며, 이들의 당은 이리도이드의 1번 탄소에 결합되어 있다. 이리도이드 배당체는 지질의 생합성 과정에서 생산되는 모노테르펜(monoterpene) 유도체로서 일반적으로 병원균에 대한 억제 화합물로 알려져 있다. 이 화합물은 그 치환체에 따라 용도가 매우 다양하며, 그 중 일부는 고지혈증 치료제로서 사용 가능성이 개시된 바 있다(미국 특허 제 5,459,160호). 또한 항 B형 간염 바이러스 활성을 갖는 신규한 이리도이드 유도체(한국 특허공고 96-46732호)와 간질환 치료제로서 효과를 갖는 이리도이드 유도체(한국 특허공개 97-66389호)가 알려져 있다.

현재까지 엑디스테로이드는 다양한 동물 및 식물체로부터 분리되는 것으로 알려져 있으며, 식물의 경우에는 아주가 디쿰벤스(Ajuga decumbens) 등을 포함한 다양한 식물체로부터 분리되는 것으로 알려져 있다.

그러나, 표피세포의 분화를 촉진하고 피부의 보습력을 향상시키는 것외에 엑디스테로이드의 생물학적 활성에 대해서는 아직까지 밝혀진 바가 없을 뿐 아니라, 이리도이드에 대해서는 그것을 다량 함유하는 식물체 및 상기 화합물의 생물학적 효과에 대해 연구가 미흡한 실정이고, 특히 이들 혼합물에 대한 연구실적은 거의 없다.

한편, 지금까지 알려진 엑디스테로이드를 함유하는 식물 추출물의 제조 방법을 구체적으로 살펴보면 다음과 같다;

1) 원료 식물 분쇄물을 메탄올로 추출한 후, 메탄올이 완전히 제거될 때까지 추출물을 농축시킨다. 2) 추출 잔사를 1:1의 함량으로 물로 희석한 후, 8% 클로로포름 처리하여 지용성 부분을 제거한다. 3) 이어, 정제된 수용액을 클로로포름/이소프로필(1:1) 혼합물로 추출한 후 가열농축하여 용매를 제거한다. 4) 얻어진 추출물 잔사를 클로로포름:메탄올(1:1)의 용매 혼합물을 사용하여 Al₂O₃상에서 크로마토그래피에 의한 분획화에 의해 최종 생성물을 정제하고, 건조시킨다. 5) 건조 잔사를 메탄올:에틸 아세테이트 혼합물로 결정화시키고 여과한다. 마지막으로, 6) 여액을 10% 에탄올 용액으로 희석하고 흡습탄(absorbent coal)으로 처리한 후 결정화시켜 목적하는 식물 추출물을 수득한다.

상기한 방법에 따르면, 엑디스테로이드계 화합물인 엑디스테론(ecdysteron)을 비교적 고순도로 얻을 수는 있으나, 엑디스테론 이외의 기타 엑디스테로이드계 화합물 대부분의 손실이 발생할 뿐만 아니라 이리도이드계 화합물을 얻을 수 없다는 문제점이 있다. 또한, 최종 식물 추출물로부터 기대되는 유효 성분의 함량이 너무 낮고, 추출 단계가 복잡하여 시간 및 비용의 낭비가 초래된다. 즉, 최초 원료의 분쇄물이 함유하는 엑디스테로이드류의 함량을 100% 기준하여 단계마다 발생하는 손실율을 계산해 보면, 엑디스테로이드의 양이 단계 1)에서 93%, 단계 2에서 85%, 단계 3에서 65%, 단계 4)에서 50%, 단계 5) 및 6)에서 38%(대분분은 엑디스테론임)로 감소하고, 이리노이드류는 단계 3)에서 클로로포름/이소프로필(1:1) 혼합물에 의해 추출되지 못하고 수용액 중에 잔존하게 됨으로서, 62%에 달하는 엑디스테로이드계 화합물 및 전량의 이리도이드계가 손실되는 문제가 있다.

이에 본 발명자들은 예의 연구를 계속한 결과, 엑디스테로이드류와 이리도이드류를 약 1:3∼1:10의 질량 비율로 함유하는 식물의 추출물을 얻고, 상기 추출물을 유효성분으로 하는 조성물이 공지의 강장제보다 월등히 우수한 강장 효과를 나타내며, 모유분비를 촉진하고, 피부 재생력 증가 등의 활성을 나타냄을 확인하였으며, 이를 의약, 화장품, 식품 또는 음료 등의 원료로 사용할 수 있음을 밝힘으로써 본 발명을 완성하였다. 또한, 원료 식물 추출물을 사용하여 이를 분쇄하고, 분쇄물을 80-90%의 알코올로 추출함과 동시에, 지용성 부분이 제거된 수용액에 알코올을 첨가하여 희석시킨 다음 단지 울트라 멤브레인 여과를 통해 정제함으로써 정제공정에서의 손실과 비용을 최소화하고 엑드스테로이드류는 물론 이리도이드류를 포함하는 식물 추출물 얻는 방법을 완성하였다.

따라서, 본 발명의 목적은 엑디스테로이드류(ecdysteroids)와 이리도이드류

(iridoids)를 주성분으로 함유하는 식물 추출물 및 상기 추출물을 강장 효과, 모유 분비 촉진 효과, 피부 개선효과를 갖는 의약, 화장품과 식품 또는 음료용으로 사용하는 용도를 제공하는 것이다.

또한 본 발명의 목적은 엑디스테로이드류 외에도 이리도이드류를 포함할 수 있도록 상기 성분을 함유하는 식물 추출물을 얻는 방법을 제공하는 것이다.

상기 목적에 따라, 본 발명에 따르면, 엑디스테로이드류(ecdysteroids) 와 이리도이드류(iridoids)를 주성분으로 함유하는 식물 추출물 및 이들의 식품용 재료, 음료수용 재료, 의약 및 화장품 등으로서의 용도를 제공한다.

본 발명의 식물 추출물은 엑디스테로이드류와 이리도이드류의 함량이 질량비로 1:3∼1:10인 것이 바람직하며, 더욱 바람직하게는 함량비가 약 1:5이다.

또한 엑디스테로이드류에서는 엑디스테론과 투르케스테론의 함량이 질량비로 약 1:0.5-1:2 이며, 특히 상기 성분의 질량비가 약 1:1인 것이 바람직하다.

특히 본 발명의 조성물은 식물 추출물의 형태로 얻는 것이 바람직한데, 본 발명에 따른 식물 추출물의 구체적인 조성 및 조성비는 사용하는 원료 식물 및 추출 조건에 따라 달라질 수 있다. 본 발명의 추출물의 원료가 되는 식물로는 아주가 속, 특히 아주가 투르케스타니카 (Ajuga turkestanica)을 사용할 수 있으며, 이외에도 아주가 데쿰벤즈 (Ajuga decumbens), 라포니카 카르탐모이데스 (Rhaponica cartammoides) 및 셀레나 프리믹타 (Selena primicta) 등과 같은 엑드스테로이드류와 이리도이드류를 함유하는 식물을 이용할 수 있다. 아주가 투르케스타니카는 주로 우즈벡키스탄의 남부 산악 지대의 고산 초원 지대에 밀생하고 있다. 셀레나 프리믹타는 남부 카자히스탄 및 우즈벡키스탄의 북부의 반사막 지대에서 자란다. 문헌들의 기록에 의하면 아주가 속이 널리 분포되어 있는 것이지만, 종 및 성장 지역에 따라서, 엑디스테로이드계 화합물와 이리도이드계 화합물의 각 성분의 조합 및 양이 다르다는 것으로 알려져 있다. 한국 종(Ajuga decumbens) 및 우즈벡키스탄 종(Ajuga turkestanica)은 엑디스테론의 존재를 제외하고는 성분 상에 약간 차이가 있다.

본 발명의 식물 추출물은 엑디스테로이드류와 이리도이드류의 총량이 전체 추출물 중량의 약 12% 인 것이 바람직하며, 추출물의 유효 성분의 중량을 기준으로 엑디스테로이드류의 함량이 2% 이상이고, 이리도이드류의 함량은 10% 이상인 것이 바람직하다. 더욱 바람직하게는 엑디스테로이드류와 이리도이드류의 총량이 전체 추출물 중량의 약 24% 이상이며, 엑디스테로이드류 4% 이상, 이리도이드류 20% 이상인 것이 바람직하다.

본 발명은 상기와 같은 조성의 식물 추출물을 유효성분으로 하는 강장제용 조성물, 유선확대 촉진용 약학적 조성물, 화장품 조성물 및 식품 또는 음료용 조성물을 제공한다. 상기 조성물들은 본 발명의 식물 추출물을 전체 조성물 중량의 약 0.001∼10%로 함유하는 것이 바람직하다.

또한 본 발명은 상기 엑디스테로이드와 이리도이드를 주성분으로 포함하는 식물 추출물의 제조방법을 제공한다. 상기 식물 추출물의 제조방법은,

1) 원료 식물 분쇄물을 80-90%의 알코올로 추출한후, 가열 농축하여 알코올을 제거하고,

2) 상기 단계 1)에서 생성된 추출물 잔사를 물로 희석한 후 클로로포름 또는 벤졸로 처리하여 지용성 부분을 제거하고

3) 상기 단계 2)에서 얻어진 수용액을 상기 알코올로 희석한 다음 울트라 멤브레인 여과(ultra membrane filtration)하는 공정을 포함하는 것으로 구성된다.

상기 단계 1)에서, 80% 내지 90% 농도의 알코올을 사용하여 추출함으로써 엑디스테로이드와 이리도이드의 추출을 극대화시키고 기타 수용성 성분의 알코올로의 이동을 극소화시킬 수 있다. 알코올의 농도는 80-90%의 농도로 사용하는 것이 좋고, 80-85%의 농도가 더욱 바람직하며, 예를 들어, 90% 이상의 농도의 알코올을 사용하면, 바람직하지 않은 타르(지질) 성분이 비교적 다량 추출되는 문제가 발생한다.

이때, 적합한 알코올로는 에탄올, 메탄올 및 이소프로필을 들 수 있으며, 이들 용매는 실질적으로 동일하지만, 안전성의 측면에서는 에탄올이 가장 바람직하다.

또한, 상기 단계 1)에서 추출에 사용된 알코올을 진공 조건하에서 60℃ 이하의 온도에서 증발시켜 추출물을 농축시킨다. 증발에 의한 추출물의 농축은 냉장상태에서 그의 응축의 수단에 의해 알코올 스팀을 포획하면서 진공 용기 중에서 수행한다. 이 공정은 용액으로부터 알코올의 완전한 제거가 이루어질 때까지 수행하는 한편, 온도는 60 ℃ 이하로 유지시키는 것이 중요하다.

이어, 본 발명의 상기 단계 2)에 따르면, 상기 단계 1)에서 생성된 추출물 잔사를 물로 희석한 후 클로로포름 또는 벤졸로 처리한다. 클로로포름 또는 벤졸 처리에 의해 형성된 지용성 부분을 제거함으로써 원하지 않은 지질 성분들을 최대한 제거할 수 있다. 물론, 이 단계에서 사용 가능한 용매로서는 에테르, 벤젠 또는 기타 수불용성 용매를 사용할 수도 있으나, 클로로포름 또는 벤졸을 사용하는 것이 유효 성분의 최소 손실 및 지용성 부분의 최대 제거의 효과를 달성할 수 있다.

이어, 본 발명의 상기 단계 3)에 따르면, 상기 단계 2)에서 얻어진 수용액을 알코올로 희석한 다음 울트라멤브레인(ultramembrane) 여과함으로써 고분자 물질이 제거된 엑디스테로이드와 이리노이드를 함유한 식물 추출물을 얻는다.

이 울트라멤브레인 여과에 의해 분자량 10,000 이상의 물질의 제거함으로써 생성물의 안정된 함량을 제공하고 또한 본 발명의 식물 추출물을 물에 용해시킬 때 침전 또는 혼탁을 없앨 수 있다. 이때, 여과에 앞서 수용액을 알코올로 희석함으로써 유효 성분의 용해도를 높여 유효 성분의 여과시에 손실을 최소화할 수 있으며, 알코올의 농도가 20∼60 %가 될 때까지 알코올을 첨가하는 것이 바람직하다. 이 때 알코올로서는 메탄올, 에탄올 또는 이소프로필을 사용하는 것이 적합하다.

또한, 바람직하게는 본 발명에 따른 상기 울트라멤브레인 여과에 있어서, 약 10,000 달톤의 공극 크기를 갖는 여과막을 사용하여 분자량이 10,000 내지 20,000 이상의 분자량을 갖는 고분자 물질을 제거할 수 있다. 10,000 내지 20,000 이상의분자량을 갖는 고분자 물질이 식물 추출물에 잔존하면, 추출 후 물에 용해되어 이를 필요한 제품으로 제품화할 때 침전물을 발생시키거나 탁도의 증가를 가져화 안정성의 측면에서 바람직하지 않다. 한편, 10,000 달톤 이하의 공극 크기, 예컨대 5,000 달톤의 공극 크기를 갖는 여과기를 사용할 경우 활성 성분들도 여과되어 제거되는 문제가 있다.

본 발명에서 사용된 용어 '식물 추출물' 또는 '추출물'은 본원 발명의 실시예에서 제조된 바와 같은 건조물의 형태 또는 용매가 포함된 용매화물 형태를 모두 포괄하며, 반드시 본 발명에서 언급한 바와 동일한 식물 추출물일 필요는 없으며, 본 발명의 명세서에서 나타낸 바와 유사한 조성을 갖는 것이라면, 별도의 방법에 의해 자연 상태로부터 추출되거나 또는 인공적으로 합성된 것들도 모두 포괄하는 것으로 이해되어야 한다.

본 발명에 따른 식물 추출물은 고형분 50%를 포함하는 액체, 흡습성 탄수화물을 포함한 동결건조된 분말, 또는 펙틴, 덱스트린과 같은 불활성 충진제를 포함한 분무 건조물의 형태로 수득될 수 있다.

상기한 바와 같이, 본 발명의 방법에 따르면, 엑디스테로이드류와 이리도이드류를 주성분으로 함유하는 식물 추출물들을 고 수율로 간편하게 제조할 수 있으며, 특히 10,000 내지 20,000 이상의 분자량을 갖는 고분자 물질을 식물 추출물로부터 제거할 수가 있어, 식물 추출물의 안정성을 향상시킬 수 있다.

본 발명에 의해 제조된 식물 추출물의 성분은 다음과 같은 방식으로 동정 및확인할 수 있다.

엑디스테로이드류 함량의 분석은 다음의 방법에 의해 결정할 수 있다: 먼저, 시료를 클로로포름:메탄올:아세톤 시스템의 크로마토그래피용 플레이트 상에 분배시켜 위치시킨다. 이어서 엑디스테로이드를 플레이트로부터 추출하고 241 nm의 파장에서 분광분광계로 결정한다. 이리도이드류는 광열량계법에 따라 이리도이드 + H₃PO₄+ 바닐린에 의한 착색 반응 및 얻어진 착색 용액을 540 nm의 파장에서 결정한다.

본 발명에 따른 식물 추출물은 주로 갈색을 띄며, 주된 성분으로서 대략 엑디스테로이드류 (엑디스테론 + 투르케스테론) >4%, 및 이리도이드류 >20%을 포함한다. 물론 주요 성분들의 함량은 사용하는 식물 원료, 추출 조건 및 식물 추출물의 특정 용도에 따라서 약간씩 달리할 수도 있는 것은 자명하다. 일반적으로 엑디스테론 및 투르케스테론이 1:1의 함량비로 포함되고, 중량을 기준으로 이리도이드류가 5배 가량 포함된 본 발명 식물 추출물과 같은 조합은 자연 상태로는 발견되지 않는다. 본 발명자들의 약리학적 시험에 의하면, 투르케스테론의 활성은 엑디스테론의 것에 비하여 10-20% 정도 더 높은 것으로 밝혀졌다.

본 발명에 따른 엑디스테로이드류와 이리도이드류를 주된 구성 부분으로 함유하는 식물 추출물은 후술하는 바와 같이 여성의 모유 생산을 촉진하거나, 강장 효과를 가지며, 단백질의 생합성을 촉진하는 등, 순수한 엑디스테로이드류만에서는 관찰되지 않았던 여러 가지의 새로운 효능을 가진 것으로 밝혀졌다.

따라서, 일면으로 본 발명은 이들 추출물들의 새로운 용도, 예들들면 의약, 식품 또는 음료수, 및 화장품 재료 등으로 유용하게 사용될 수 있다. 특히, 이 식물 추출물을 주성분으로 하는 약제학적 제제는 소염작용을 가지며, 여성의 모유 생산을 촉진하고, 만성 중독, 체세포 및 감염성 질환, 신경증, 과도한 노동, 저긴장성, 심장혈관계 이상 징후를 가진 생물체에서 단백질 합성 과정을 약화시키는 무력증 및 무력증-우울증 상태에 적절히 사용될 수 있고, 운동 선수들의 누적된 스트레스의 증가에 대한 치료에도 사용될 수 있다.

본 발명의 식물 추출물은 또한 과도한 정신적 및 육제적 긴장 동안 일반적인 강장제로도 사용될 수 있다.

따라서, 추가의 일면에 있어서 본 발명은 제조된 식물 추출물을 주성분으로 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다.

본 발명의 약제학적 조성물을 제조하기 위하여, 활성 성분으로서 본 발명에 따른 식물 추출물을 통상적인 약제 배합 기술에 따라 약제학적 부형제 또는 담체와 긴밀하게 혼합시키는데, 이때 담체는 투여, 예를 들어 투여의 목적하는 제제 형태에 따라 매우 다양한 형태일 수 있다. 본 발명의 조성물은 목적하는 바에 따라 경구용 제제로 투여하는 것이 좋으며, 경구용 고체 또는 액체에 널리 사용되는 약제학적 부형제 또는 담체를 적절히 사용할 수 있다.

경구투여용 고체 제형으로는 정제, 환제, 산제 및 입제 등의 형태를 취할 수 있으며, 특히 정제가 바람직하다. 고체투여 형태는 식물 추출물을 수크로오스, 락토오스, 전분 등과 같은 하나 이상의 불활성 희석제 및 마그네슘스테아레이트와같은 윤활제, 붕해제, 결합제, 등과 같은 통상의 담체와 혼합시킴으로써 제조할 수 있다. 액상 경구 제제(예: 현탁제 및 용액제)의 경우에 적합한 담체 및 첨가제로는 물이나 유기용매, 물과 유기용매의 혼합물, 약제학적으로 적합한 오일이나 지방 같은 액체부형제를 사용하여 주성분을 용해시키거나 분산시킨다. 액체 부형제는 다른 약제학적으로 사용 가능한 첨가제를 함유할 수 있는데 이러한 첨가제에는 완충용액, 보존제, 감미료, 향료, 연화제, 착색제, 점도조절제, 안정화제, 삼투압조절제 등이 있다.

이들의 투여 용이성 때문에, 정제가 가장 유리한 경구 투여 형태를 나타내며, 이 경우 고형 약제학적 담체 또는 부형제가 바람직하게 사용된다. 정제에서 유효 성분은 적당한 비율로 필요한 성형성이 있는 부형제와 혼합하여 적당한 모양과 크기로 압축성형한다.

또한, 본 발명의 약제학적 조성물을 산제로서 제조할 경우에는 널시 사용되는 통상의 부형제를 사용하여 미세화된 주성분과 골고루 섞일 수 있도록 미세한 분말로 만들 수 있다.

본 발명의 조성물은 임상적인 목적으로 투여시에 단일용량 또는 분리용량으로 개체에 투여할 수 있으며, 이때 사용하는 식물 추출물의 총 일일 용량은 예를 들면, 체중 1㎏ 당 0.1㎎ 내지 100㎎의 범위를 들 수 있으나, 더욱 바람직한 투여 용량수준은 개별 환자의 체중, 성별, 건강상태, 식이, 투여시간, 투여방법, 배설률, 투여목적 및 질환의 심도에 따라 적절히 결정될 수 있다.

본 발명에 따른 약제학적 조성물은 바람직하게는 다른 투여 단위, 예를 들어정제, 산제 등의 제형에 대하여 식물 추출물을 활성 성분으로서 약 0.1-100 mg 함유하는 것이 좋다. 그러나 활성 성분의 양은 이에 의해 한정되는 것은 아니다.

포유동물에서 상기한 적응증에 대한 치료학적 용도에서, 본 발명의 추출물은 매일 약 0.1 내지 100 ㎎/㎏의 양을 1일 3회 분할하여 경구 투여하는 것이 좋다. 인체에 투여할 경우는 식전에 복용하는 것이 더 좋은 효과를 나타낸다. 인체를 대상으로 할 경우, 본 발명의 식물 추출물을 함유하는 약제학적 조성물은 상기한 질병 또는 적응증에 대하여 약 15-20일 정도 투여하는 것이 좋으며, 필요에 따라 치료과정은 1-2 주 더 반복할 수도 있다.

본 발명에 따른 식물 추출물은 또한 후술하는 시험예에 의해 알 수 있는 바와 같이 피부에 대한 자극이 없고, 피부 및 피부 재생에 양호한 결과를 나타내므로, 화장품 재료로 사용될 수 있다. 따라서, 다른 일면에 있어서 본 발명은 상기 식물 추출물을 주성분으로 포함하는 화장품 재료를 제공한다. 이 경우 본 발명의 식물 추출물은 25∼50% 알코올 용액을 포함하여도 좋다.

본 발명에 따른 식물 추출물을 화장품 재료로 사용하는 경우에는 이를 통상의 화장품용 부형제 또는 담체를 사용하여 조성한 용액이나 크림, 로션에 사용할 수 있다. 본 발명에서 사용되는 상기의 식물 추출물은 화장품 재료에 일반적으로 사용되는 각종 기재 및 첨가제 또는 유기 용매, 예들들어, 에탄올, 이소프로필 알코올, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌 글리콜, 디프로필렌 글리콜, 라우릴 알코올, 세탄올, 스테아릴 알코올, 올레일 알코올 및 기타 각종 동, 식물성 오일 등을 사용하여 용해성, 혼화성, 사용성 등을 좋게 할 수 있다. 따라서, 상기 식물 추출물은통상의 각종 화장료 기재 및 첨가제 등과 배합하여 크림, 로션, 유연 화장수 등의 각종 화장료 형태로 광범위하게 제공할 수 있다. 또한, 상기 식물 추출물에 보습제로서 공지된 다가알코올, 에틸렌디아민테트라아세트산 이나트륨, 젖산, 젖산 나트륨 및 정제수 등을 가하여 피부 질환 및 활성 산소를 억제하여 피부의 노화의 원인이 되는 주름살을 예방, 완화할 수 있다. 또한, 이들은 수성 알코올 또는 올레오일 알코올 로션, 겔, 액성 점성의 에멀젼, 크림 또는 수용성 분산액의 형태내에서 부분적으로 존재할 수 있다. 이들 화장품용 조성물은 통상적인 방법에 의해 제조될 수 있으며, 부가적으로는 적외선 흡수제, 수화제, 유리 라디칼 저해제, 에멀리언트, 격리제 들과 같은 기타의 활성 성분을 포함해도 좋으며, 보존제, 향료 들과 같은 성분을 포함해도 좋다.

상기 각종 화장료의 형태는 용액, 에멀젼, 오일, 연고, 왁스, 겔, 졸, 파우더 등으로 적용이 가능하다. 따라서, 상기 추출물들은 각종 화장품 형태에 다양하게 적용될 수 있다.

본 발명의 화장료에 배합되는 상기 식물 추출물의 배합량은 그 사용 형태에 따라 변화 가능하기 때문에 특별히 한정할 필요는 없으나, 상기 각 건조 추출물의 전체 중량을 기준으로 0.001-10 중량%가 적절하고, 예컨대 크림제로 사용할 경우 식물 추출물의 함량은 약 0.05%의 함량으로 사용하는 것이 좋다.

본 발명에 따른 식물 추출물의 화장품용 재료의 조성의 예를 들면 다음의 표 1에 나타낸 바와 같다.

본 발명에 따른 화장료 재료용 추출물의 조성(1)

성 분	함 량
엑디스테로이드류(엑디스테론 및 투르게스테론)	2%
이리도이드류	20%
식물 추출물의 기타 성분	28%
알코올	50%

또한, 25% 식물 추출물-용매를 500 그램의 양으로 사용하는 경우, 이 형태의 제제는 다음의 표 2에 나타낸 바의 성분을 유효 성분으로 함유하는 것도 바람직하다.

본 발명에 따른 화장료 재료용 추출물의 조성(2)

성 분	함량
엑디스테로이드류(2%)	엑디스테론	0.58%
	투르게스테론	0.58%
	2,2-Ac-시아스테론(cyasteron)	0.40%
	엑디스테론의 2,3-모노아세토니드	0.25%,
	2,3-엑디존	0.12%,
	시아스테론	0.04%
	아주가스테론	미량
이리도이드류(7%)	8-0-Ac-가르파지드	4.50%
	가르파지드	2.40%

또한, 본 발명에 따른 식물 추출물은 칼로리 함량이 낮고, 탄소 성분을 포함하고 있지 않으므로 강장 식품이나 음료용 재료로 사용될 수 있다.

본 발명에 따른 강장 식품 및 음료용 재료로 사용되는 식물 추출물은 특히 다음과 같은 효과를 가진다.

1. 여성의 모유 분비량를 증가시키며, 유방선을 개선시킨다.

2. 스트레스 자극에 대한 적응 능력을 증가시킨다.

3. 육체적 및 정신적 노동 동안 피로도를 감소시킨다.

4. 간 및 위장관의 기능적 조건에 이로운 효과를 갖는다(강장 효과).

이와 같이 상기 식물 추출물은 생물학적 효능 및 안정성 면에서 매우 탁월한 잇점을 제공하므로, 또다른 일면에 있어서 본 발명은 상기 엑디스테로이드류와 이리도이드류를 유효 성분으로 함유하는 식품 또는 음료용 조성물을 제공한다.

식품 또는 음료용 조성물에 사용되는 식물 추출물의 원액의 성분은 다음의 함량으로 사용하는 것이 좋다.

본 발명에 따른 추출물의 식품 및 음료의 조성 (1000 kg 당)

성 분	함 량
본발명의 실시예에 의한식물 추출물	20 kg
분말-감미제	330 kg
에틸 알코올	100 리터
식품용 색소	2 kg
향료	적당량
레몬산	158 kg
물	나머지 1000 kg까지

본 발명의 식물 추출물을 함유한 음료 또는 식품에 있어서, 감미제로서는 통상의 감미제를 사용할 수 있으며, 예를 들면, 합성 또는 천연의 비발효성 당 등을 특별한 제한 없이 사용할 수 있으며, 이들 중 대표적인 것의 예로는 삭카린나트륨, 아스파탐, 락토오스, 말토오스, 자이리톨 등을 들 수 있으며, 이들 감미제는 본 발명의 식물 추출물을 포함하는 식품 또는 음료 조성물의 전체 중량을 기준으로 0.05 내지 1 중량% 사용하는 것이 바람직하다. 특히, 식물 스테비아(Stevia)-honey 잎으로부터의 감미제를 감미료로서 사용해도 좋다. 분말 감미제는 스테비아 식물로부터 처리된 것이 가장 바람직한데, 이 경우, 감미 효과는 수크로오스의 것보다 50배 이상 뛰어나다. 향료 및 색소는 만들고자 하는 제품에 따라 다양하게 조합하여 사용할 수 있다.

본 발명의 식물 추출물을 특히 음료수의 형태로 제공할 경우에는 추출물의 원액의 사용 비율은 제조된 음료 0.5 리터당 2 그램을 포함하는 것이 바람직하다. 음료 중 한 성분은 강장 식품 첨가제인 식물 추물물로서 인삼 추출물과 유사한 효과를 가지나, 부작용은 전혀 없다. 따라서, 본 발명의 음료 또는 식품용 조성물은 환경친화적 조성물을 제공할 수 있다. 수행된 시험 결과에 의하면, 음료 또는 식품용 식물 추출물은 당뇨병 환자에서 혈당 농도를 증가시키지 않으며 유효 성분인 엑디스테로이드와 이리도이드류를 포함하는 식물 추출물의 덕택으로 원기회복 효과를 가지고 있다. 특히, 본 발명에 따른 저칼로리, 탄소불포함, 음료 또는 식물 추출물은 또한 체중 과다의 사람에게 추천되며 피로회복에 대한 강장 식품 또는 음료용 조성물로서 사용된다. 유효 성분의 투여량은 음료가 특별한 엄격한 투여용량을 요하지 않는 방식으로 선택되며, 각 0.5 리터로 3병까지 마시는 것을 권유한다.

이하, 본 발명을 하기 실시예 및 시험예에 의해 상세히 설명한다.

단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.

<실시예 1> 엑디스테로이드와 이리도이드를 함유하는 식물 추출물의 제조 1

아주가 투르케스타니카(Ajuga turkestanica)의 지상부 10kg 을 분쇄한 후 원료 분쇄물을 추출기에 넣고 90% 에탄올 50ℓ를 투입하였다. 에탄올에 의한 추출 과정을 5회 반복한 다음, 알코올 추출물이 5ℓ가 될 때까지 가열 농축시켰다. 농축된 알코올 추출물 5ℓ에 물 5 ℓ를 투입하고 벤졸로 4회 처리하여 형성된 지용성 부분을 제거하였다. 이때, 벤졸의 사용량은 매회 5ℓ이었다. 이어, 에탄올의 농도가 40%가 될 때까지 처리된 수용액에 에탄올을 첨가한 후, 공극 크기 10,000 달톤의 울트라 멤브레인 여과기를 사용하여 여과하였다. 분자량 10,000 이상의 고분자 물질이 제거된 여액을 고형분 함량으로 70%까지 농축하고, 에탄올을 이용하여 고형분 함량이 50%가 되도록 희석하여 엑디스테로이드류와 이리도이드류 등을 함유하는 식물 추출물(건조 상태: 600g)을 수득하였다.

수득된 추출물이 함유하는 엑디스테로이드류와 이리도이드류의 조성 및 조성비를 결정하기 위해, 엑디스테로이드류의 경우에는 클로로포름:메탄올:아세톤 시스템의 클로마토그래피 플레이트 위에 추출물 시료를 분배하여 위치시키고 엑디스테로이드류를 플레이트로부터 추출하여 241nm의 파장에서 분광 광도계(spectrophotometer)로 분석하였으며, 이리도이드류의 경우에는 광열량분석법(photocalorimetric method)에 따른 이리도이드류와 H₃PO₄와 바닐린과의 색깔 반응을 통해 수득된 용액을 540 nm의 파장에서 분광 광도계로 분석하였다. 그 결과를 하기 표 4에 나타내었다.

본 발명에 따른 추출물의 성분 조성

	성분	조성비(중량%)
엑디스테로이드류(4.3%)	엑디스테론	1.2-1.3
	투르케스테론	1.2-1.3
	2,2-Ac-시아스테론	0.9
	2,3-모노아세토니드(monoacetonid)엑디스테론	0.6
	2,3-엑디존	0.3
	시아스테론	0.13
	아주가스테론	0.014
	아주갈락톨	0.008
이리도이드류(22-25%)	8-0-Ac-가르파지드	16.7-17.0
	가르파지드	6.0-9.0

<실시예 2> 엑디스테로이드와 이리도이드를 함유하는 식물 추출물의 제조 2

90% 에탄올 대신에 85% 에탄올을 사용하여 추출한 것을 제외하고는 상기 실시예 1과 동일한 방법을 수행하여 엑디스테로이드 및 이리도이드류를 함유하는 액상의 식물 추출물(건조 상태: 650g)을 얻었다.

<실시예 3> 엑디스테로이드와 이리도이드를 함유하는 식물 추출물의 제조 3

90% 에탄올 대신에 80% 에탄올을 사용하여 추출한 것을 제외하고는 상기 실시예 1과 동일한 방법을 수행하여 엑디스테로이드와 이리도이드류를 함유하는 액상의 식물 추출물(건조 상태: 700g)을 얻었다.

<실시예 4> 엑디스테로이드와 이리도이드를 함유하는 식물 추출물의 제조 4

벤졸로 5회 처리한 것을 제외하고는 상기 실시예 1과 동일한 방법을 수행하여 엑디스테로이드와 이리도이드류를 함유하는 액상의 식물 추출물(건조 상태: 700g)을 얻었다.

<실시예 5> 엑디스테로이드와 이리도이드를 함유하는 식물 추출물의 제조 5

벤졸로 5회 처리하고, 공극 크기 20,000 달톤의 울트라멤브레인 여과기를 사용하여 여과한 것을 제외하고는 상기 실시예 1과 동일한 방법을 수행하여 엑디스테로이드와 이리도이드류를 함유하는 액상의 식물 추출물(건조 상태: 850g)을 얻었다.

<실시예 6> 엑디스테로이드와 이리도이드를 함유하는 식물 추출물의 제조 6

아주가 투르케스타니카(Ajuga turkestanica)의 싹만을 사용한 것을 제외하고는 상기 실시예 1과 동일한 방법으로 수행하여 엑디스테로이드와 이리도이드류를 함유하는 액상의 식물 추출물(건조 상태: 650g)을 얻었다. 실시예 1과 동일한 방식으로 수득된 추출물의 함량을 조사하였다. 그 결과를 아래의 표 5에 나타낸다.

식물 추출물에 대한 성분 조성

분석 항목	함 량
엑디스테론 농도	1.0±0.05%
투르케스테론 농도	1.0±0.05%
이리도이드류 농도	10%
건조 잔사	50±2.5%
재(ash)	<4%
에탄올	50±2.5%(액상에서)
추출물 타입	물-에탄올

<비교예>

공극 크기 5,000 달톤의 울트라 멤브레인 여과기를 사용하여 여과한 것을 제외하고는 상기 실시예 1과 동일한 방법을 수행하여 엑디스테로이드와 이리도이드류를 함유하는 액상의 식물 추출물(건조 상태: 550g)을 얻었다.

수득된 추출물이 함유하는 엑디스테로이드류와 이리도이드류의 조성 및 조성비를 상기한 바에 측정한 결과, 사용하는 여과기의 공극 크기를 작게함으로써 유효 성분인 이리도이드류의 상당량이 유실되었음을 확인할 수 있었다.

이하, 본 발명에서 시험된 식물 추출물은 특별히 언급하지 않는 한 실시예 1의 방법에 의해 추출된 식물 추출물을 사용하였다.

<실험예 1> 본 발명 식물 추출물의 수면 감소 효과 실험

본 발명의 식물 추출물이 강장효과를 갖는지 확인하기 위하여, 각 그룹 당 10 마리의 웅성 래트(10-20g)에 공지의 수면제인 클로랄리 하이드라스(chlorali hydras)를 체중 1kg 당 300mg 씩, 헥사날럼(hexanalum)을 체중 1kg 당 75mg 씩 복강 주사한 후, 실시예 1에서 얻은 추출물을 체중 1kg 당 10mg 씩 주사하여 수면 감소 효과를 조사하였다. 비교군으로는 강장 효과가 가장 우수한 것으로 알려진 세 개의 테르펜 배당체(three-terpene glycoside)를 주성분으로 하는 공지의 강장제인 사파랄럼(saparalum) 20mg을 사용하였으며, 그 결과를 하기 표 6에 나타내었다.

수면 감소 효과

	클로날리 하이드라스	헥사날럼
	수면시간(분)	편차	효과(%)	수면시간(분)	편차	효과(%)
대조군	56.7 ±2.9			63.5 ±3.6
본 발명의추출물	33.5 ±3.2	< 0.001	-40.9	42.6 ±3.9	< 0.001	-32.9
비교군(사파랄럼)	43.2 ±3.0	0.05	-15.3	50.2 ±1.5	< 0.02	-17.4

상기 결과로부터 알 수 있듯이, 본 발명의 추출물은 공지의 강장제인 사파랄럼에 비해 높은 수면 감소 효과를 나타내어 강장 효과가 우수함을 확인할 수 있었다.

<실험예 2> 본 발명 식물 추출물의 조건 반사에 대한 효과

본 발명의 추출물이 조건 반사에 대한 반응성에 미치는 영향을 조사하기 위하여, 웅성 래트 각 10 마리에 대해 실시예 1의 추출물을 10 mg/kg 또는 50 mg/kg의 투여량으로 경구투여 하였다. 대조군으로는 사파랄럼 20 mg/kg을 사용하였으며, 벨 전기자극에 대해 나타나는 반응 횟수를 측정하여 반응성을 조사하였고, 그 결과를 하기 표 7에 나타내었다.

조건반사에 대한 효과 실험

	투여량(mg/kg)	조건반사반응시간(분)	편차	효과(%)
대조군	-	63.5 ±2.1	-	-
본 발명의추출물	10	44.5 ±2.2	< 0.001	-29.9
본 발명의추출물	50	45.2 ±1.8	< 0.001	-28.4
비교군(사파랄럼)	20	49.0 ±2.8	< 0.25	-12.5

상기 결과로부터 알 수 있는 바와 같이, 본 발명의 추출물은 반응시간을 매우 단축시켰으며, 그 정도는 공지의 강장제인 사파랄럼에 비해 우수하였다.

<실험예 3> 스트레스에 대한 순응, 완화 효과

본 발명의 추출물이 스트레스에 대한 순응, 완화 효과를 갖는지 확인하기 위하여, 150-180mg의 웅성 래트를 16 시간 동안 고정시킴으로써 움직이지 못하게 하여 스트레스를 유발하였다. 상기와 같은 조건하에서는 스트레스로 인해 흉선 및 지라가 위축되고, 부신이 비대해지며, 부신 내부의 콜레스테롤과 아스코르브 산의 농도가 줄어드는 것으로 알려져 있다. 본 발명의 추출물이 스트레스에 대한 반응에 미치는 영향을 조사하기 위해 실시예 1의 추출물을 래트에 10 mg/kg 씩 경구 투여한 후 16 시간 동안 고정시키고, 이후 실험 동물로부터 흉선, 지라, 부신을 각각 분리하였다. 분리한 흉선, 지라 및 부신의 중량을 측정하고, 왼쪽 부신 내부의 아스코르브 산 농도와 오른쪽 부신 내부의 콜레스테롤 양을 측정하였으며, 그 결과를 하기 표 8에 나타내었다.

스트레스 순응, 완화 효과

	정상상태	대조군	본 발명의추출물(10 mg/kg)	가시오갈피추출물(10 mg/kg)
부신 중량(mg/100g)	18.8 ±0.32	31.6 ±1.8	19.0 ±0.92	23.2 ±1.3
흉선 중량(mg/100g)	274 ±15	174 ±6.7	262 ±4.8	210 ±12
지라(mg%)	759 ±38	401 ±38	698 ±27	524 ±31
부신내부의 아스코르브산(mg%)	368 ±22	264 ±6.5	348 ±19	291 ±6.8
부신내부의콜레스테롤(mg%)	2968 ±131	1118 ±65	2603 ±157	1670 ±173

상기 결과로부터 알 수 있듯이, 본 발명의 추출물을 투여한 경우 약물 투여 없이 스트레스만을 가한 대조군에 비해 흉선의 중량은 36.5%, 지라의 중량은 47.2% 감소하였으며, 부신은 68.1% 증가하였고, 부신 내부의 콜레스테롤과 아스콜르브산 농도는 각각 28.3%와 62.4% 감소하였으며, 이는 스트레스를 가하지 않은 정상적인 상태일 때와 거의 유사한 값이다. 따라서 본 발명의 추출물이 과도한 스트레스에 효과적으로 대응할 수 있도록 하는 효과가 있음을 알 수 있다.

<실험예 4> 동적 활동 능력에 미치는 영향 조사

본 발명의 식물 추출물이 동적 활동 능력에 미치는 영향을 조사하기 위하여 19-20g의 웅성 마우스에 대해 실험하였다.

먼저, 폐쇄 수직 카메라가 장착되고 전기 모터에 의해 구동되는 경사진 로프(rope)로 구성되는 기구를 사용하여 마우스를 계속적으로 운동시키고 전류의 흐름이 관찰되지 않는 완전한 피로 상태(complete fatigue)에 이를 때까지의 운동시간을 측정하였다. 이때, 내부카메라는 상하 6 m/min의 속도로 움직이게 하였다.

한편, 두 번째 실험으로 마우스가 죽을 때까지 강압적으로 수영을 하게 하였다. 그 결과를 하기 표 9에 나타내었다.

실험종류	투여방법	실험군	투여량	운동시간(분)	편차	효과(%)
달리기	1회 주사	대조군	-	31.2 ±3.7	-
		추출물	10	46.9 ±3.5	< 0.01	50.3
		사파랄럼	20	38.4 ±2.2	< 0.02	23.8
	7일간	대조군	-	28.0 ±2.4	-
		추출물	10	49.5 ±4.0	< 0.001	76.7
		사파랄럼	20	45.0 ±2.2	< 0.01	29
수영	1회 주사	대조군	-	286 ±20.2	-
		추출물	10	446 ±49.7	< 0.01	55.9
		사파랄럼	20	346 ±12.8	< 0.50	7.7
	7일간	대조군	-	303 ±18.7	-
		추출물	10	509 ±27.2	< 0.001	67.9
		사파랄럼	20	418 ±18.2	< 0.001	35.3

상기 표 9에 나타난 바와 같이, 실험 시작 1시간 전에 본 발명의 추출물을 1회 경구 투여한 실험군에서는 상당한 활동 능력 향상이 있음을 확인하였다. 구체적으로 완전 피로 상태에 이르도록 달리기를 시킨 경우 운동시간은 50.3% 증가하였으며, 이것은 공지의 강장제인 사파랄럼을 투여한 경우 단지 23.8% 증가한 것에 비할 때 놀라운 효과라 할 수 있다. 또한 실험 시작 1주일 전부터 계속하여 본 발명의 추출물을 경구 투여한 실험군의 경우 보다 향상된 효과를 나타내었다.

<실험예 5> 본 발명 식물 추출물이 모유 분비에 미치는 효과 실험

본 시험은 50mg/kg 의 복용량으로 70일 동안 경구 주사한 암컷 쥐에서 수행하였다. 비교용으로 여왕벌의 우유를 함유한 공지의 약, 아필락(Apilak)을 사용하였다. 유선은 암컷 쥐의 지방 조직 80%, 선 조직 10% 및 연결 조직 10%를 형성하였다. 유선의 형태학적 재구성 및 내분비선의 강력한 발달이 임신 14일 후부터 시작하였다. 출생전 내분비 조직의 점유율은 65%에 도달하였다. 내분비 조직의 부피는 사육 10일에 70%에 도달하였다. 내분비 조직 1 부당 폐포의 양은 65에 도달하였고 폐포의 평균 직경은 62.2 mm이었다. 아필락을 주사한 후, 폐포의 직경은 64mm 에 도달하였다. 대조적으로 본 발명의 식물 추출물을 주사한 후, 직경은 90 mm에 도달하였다. 따라서, 본 발명의 식물 추출물을 함유하는 제제는 분비 과정의 활성화 때문만이 아니라 새로운 구조적 단위-폐포의 형성 때문에도 모유의 분비를 촉진한다. 이러한 결과는 본 발명의 제제가 시험된 암컷 쥐의 수유를 아필락에 비하여 2배 정도 증가시킴을 의미하는 것이다. 본 발명의 식물 추출물을 함유하는 제제는 수유의 증가 및 유방선의 개선과 강장 및 생체 자극 효과를 가진 것으로 나타났다.

<실험예 6> 본 발명 추출물의 흡수 효과 및 급성 독성에 관한 연구

본 발명에 따른 식물 추출물의 흡수 효과 및 급성 독성의 연구는 암컷 및 수컷 백색 마우스 및 쥐를 대상으로 하여 시료를 경구 투여에 의해 시험하였다. 약물을 피험동물 체중 kg 당 5,000mg 내지 20,000mg의 투여량으로 주사하였다. 동물들의 관찰은 14일 동안 수행하였다. 최대의 가능한한 투여량인 20,000mg에서 제제는 동물의 치사를 일으키지 않았다. 최대 주사했을 때 중독의 상태는 4-6 시간 동안 통상의 조건의 약간의 우울을 나타내는 특징이 있었다. 추가의 시험일에 있어서도 통상 조건의 동물들은 정상이었다. 따라서, 본 발명의 식물 추출물은 급성 독성의 변수에 의해서는 IV 클라스의 활성 물질과는 전혀 관련이 없다.

<실험예 7> 식물 추출물의 누적 효과에 대한 연구

시험은 암수 모두의 흰 쥐에서 28일 동안 Lim's 법에 따라 수행하였다. 제제를 1000 mg/kg의 투여량으로 경구 주사하고 매 5일 마다 그 양을 1.5배씩 증가시켰다. 동물의 일반적인 상태, 혈액학적 및 혈액의 생화학적 징후는 정상 범위로 유지되었다. 따라서, 제제는 반복된 주사후에도 체내에 잔류하지 않는 것으로 밝혀졌다.

<실험예 8> 국소 자극 효과에 관한 시험

시험은 토끼를 대상으로 눈의 결합낭에 식물 추출물의 건조 분말 50 mg을 주사하고, 피부에 20회 50%의 농도의 용매를 4 시간 동안 적용하여 수행하였다. 2-3 시간 후에 점막의 약간 불그스레함이 사라졌다. 피부에 제제를 다수회 적용했을 때에 어떠한 변화도 관찰되지 않았다.

<실험예 9> 앨러지 효과에 대한 시험

시험 제제를 다음의 스케쥴에 따라 기니아 피그에 100 mg/kg 및 1000 mg/kg의 투여량으로 주사하였다: 첫회 주사는 피하에 적용하고, 두 번째 다음의 주사는 2일째에 둔부 대역의 근육내에 행하였다. 최종 투여량은 감작 14일째에 정맥내에 주사하였다. 과민 쇼크의 징후는 관찰되지 않았다. 수행된 시험 결과 활성적인 피부 감작의 결정은 제제의 앨러지 효과의 부재를 입증하였다.

<실험예 10> 본 발명 추출물의 섬유아세포의 콜라겐 합성 촉진 효과

인체 섬유아 세포를 24-웰 평판 배양기에서 배양한 후 실시예 1의 식물 추출물을 배양 배지에 순차적으로 희석하여 첨가하였다. 배양 3일째 10 % 우태아 혈청(BFS)이 함유된 DMEM 배지(Sigma)를 각 웰당 0.5 ㎖씩 첨가한 후 L[2,3,4,5-³H]-프롤린 10 μCi를 첨가하였다. 24 시간 후 각 웰에 들어있는 배지와 세포들을 모아 5 % 트리클로로아세트산 (TCA; Trichloroacetic acid) 용액에 넣어 세척한 후 2개의 시험관에 분주하고, 1개의 시험관에는 타입 I 콜라게나제 (type I collagenase) 1 unit/㎕를 넣고 37 ℃ 온도에서 90분간 배양하였으며, 다른 시험관은 4 ℃에서 보관하였다. 그 후 모든 시험관에 50 % TCA를 0.05 ㎖씩 첨가하고 4 ℃에서 20분간 방치한 다음 각각 12,000 rpm에서 10 분간 원심 분리하여 각각의 상등액과 침전물을 액체 신틸레이션 계수기 (LSC; Liquid Scintillation Counter)로 DPM (decay per minute) 값을 얻어 하기 수학식 1에 의거하여 식물 추출물을 처리하지 않은 대조군과 비교하여 식물 추출물을 처리한 실험군의 콜라겐 합성능을 계산하였다. 그 결과를 하기 표 10에 나타내었다.

시료 농도 (%)	콜라겐 합성능 (%)
1 x 10-9	3
1 x 10-8	4
1 x 10-7	15
1 x 10-6	24
1 x 10-5	29
1 x 10-4	34
1 x 10-3	41
1 x 10-2	44

상기 표 10에서 알 수 있는 바와 같이 엑디스테로이드류 (ecdysteroids)와 이리도이드류 (iridoids)를 주성분으로 함유하는 식물 추출물을 처리한 섬유아 세포는 처리하지 않은 대조군에 비하여 최고 약 44 % 정도 향상된 섬유아 세포 콜라겐 생합성 촉진 효능을 나타내었다.

<실험예 11> 본 발명 추출물의 피부 교원 단백질 생합성 촉진 효과

표 11와 같이 제조된 식물 추출물(실시예 1)을 함유하는 크림을 각각 생후 4∼6 주령된 부모 생쥐의 등에 2주 동안 하루에 두 번씩 도포하였다. 2주 후 부모 생쥐를 부검하여 조직을 얻은 후 콜라겐 섬유 단백질의 항원-항체 반응을 이용한ELISA를 통해 식물 추출물의 생체내 교원질 섬유 단백질 생성에 미치는 영향을 측정하였다. 비교군으로는 실시예 1의 식물 추출물을 제외한 모든 성분이 동일한 크림을 제조하여 사용하였다. 그 결과는 표 12와 같다.

성 분	조성(중량%)
식물 추출물(실시예1)	0.1
밀납	10.0
폴리솔베이트:60	1.5
피이지 60 정제 피마자유	2.0
솔비탄세스퀴올레이트	0.5
유동 파라핀	10.0
스쿠알란	5.0
카프릴럭/카프릭트리글리세라이드	5.0
글리세린	5.0
부틸렌글리콜	3.0
프로필렌글리콜	3.0
트리에탄올아민	0.2
방부제, 색소, 향료	적량
정제수	나머지

생약 추출물의 농도	교원질 섬유 생합성율 (%)
0.02 중량 %	123
0.1 중량 %	137
0.2 중량 %	152
대조군 *	100
비교군 **	57
* 대조군은 비교예를 처리하고 자외선을 조사하지 않은 것임** 비교군은 비교예 처리처리고 자외선을 조사한 것임

상기 표 12와 같이 엑디스테로이드류와 이리도이드류를 주성분으로 함유하는 식물 추출물을 함유한 크림을 피부에 도포하였을 때 도포하지 않은 대조군에 비하여 최고 약 52 % 정도 향상된 교원질 섬유 생합성율 증가 효과를 나타내었다.

<실험예 12> 본 발명 추출물의 피부 자극실험

본원 발명의 식물 추출물 (실시예 1)의 피부 자극정도를 실험하기 위하여 20∼30세의 건강한 여성 30명을 대상으로 CTFA 가이드라인 (The Cosmetic, Toiletory and Fragrance Association. Inc. Washington, D.C., 20036, 1991)에 따라 피부 자극실험을 수행하였다. 핀 챔버(Finn Chamber)에 준비된 시험물질 (1 % in Patch base) 20 ㎕를 적하시킨 후 70 % 에탄올로 세척한 다음 건조시킨 시험부위인 등 부위에 얹어 미세한 구멍을 가진 테이프(micropore tape)로 고정시켰다. 첩포는 24시간 동안 도포하고, 첩포를 제거한 후 유성 펜(marking pen)으로 시험 부위를 표시하고 30 분, 24 시간 후에 각 시험 부위의 피부반응을 관찰하여 국제 접촉 피부염 연구회 (International Contact Dermatitis Research Group: ICDRG)의 규정에 따라 판정하였다. 하기 수학식 2를 이용하여 평균 반응도를 계산하였으며, 그 결과를 하기 표 13에 나타내었다. 또한, 평균 반응도를 기초로 하여 피부 자극정도를 다음의 4등급으로 분류하였다.

* 피부자극 판정 기준 :

Ⅰ 등급 : MS < 1 (무자극) Ⅱ 등급 : 1 ≤MS < 3 (경자극)

Ⅲ 등급 : 3 ≤MS < 5 (중자극) Ⅳ 등급 : MS ≥ 5 (강자극)

시험 물질	30 분 후	24 시간 후	평균반응도(n=30)	판정등급
	±	+			++	+++	±	+	++	+++
시험군(농도 1%)	2	-	-	-	-	-	-	-	0.93	Ⅰ
대조군*	-	-	-	-	-	-	-	-	0	Ⅰ
대조군*: 시험 물질을 넣지 않고 피부 자극 실험한 실험군

상기 표 13와 같이 본 발명의 엑디스테로이드류와 이리도이드류를 주성분으로 함유하는 식물 추출물은 피부 자극이 없음을 확인할 수 있었다. 이상의 실험에서 본 발명의 식물 추출물은 피부 자극이 없으면서 피부세포 증식 및 콜라겐의 생합성을 촉진하는 물질임을 알 수 있었다.

<제조예 1> 화장수 제조 조성

본 발명의 추출물을 포함하는 바람직한 화장수의 조성의 예는 다음과 같다.

실시예 1의 추출물 : 0.1 중량%

글리세린(glycerin) : 3.0 중량%

소르비톨(sorbitol) : 2.0 중량%

구연산 인산염(citric acid phosthate salt) : 0.1 중량%

아연 p-페놀 설포네이트(Zinc p-phenol sulfonate), 향료, 폴리옥시에틸렌, 보존제 : 충분한 량

에탄올 : 15 중량%

증류수 : 나머지

<제조예 2> 로션의 제조 조성

본 발명의 추출물을 포함하는 로션의 바람직한 조성예는 다음과 같다.

실시예 1의 추출물 : 0.2 중량%

글리세레스(glycereth)-12 : 3.0 중량%

붕산 나트륨 10수화물(sodium borate decahydrate) : 1.4 중량%

미네랄 오일 : 7.0 중량%

세틸 에스테르(cetyl esters) : 1.0 중량%

세틸 알콜(cetyl alcohol) : 0.7 중량%

스테아릴 알콜(stearyl alcohol) : 0.5 중량%

스테아르 산(stearic acid) : 2.0 중량%

기타 향료, 색소, 보존제 : 충분한 량

증류수 : 나머지

<제조예 3> 화장용 크림의 제조 조성

본 발명의 추출물을 포함하는 화장용 유성/수성(O/W) 에멀젼 크림의 바람직한 조성예는 다음과 같다.

실시예 1의 추출물 : 0.5 중량%

스테아르 산 : 4.0 중량%

세틸 알콜 : 0.5 중량%

미네랄 오일 : 20.0 중량%

DEA-세틸 포스페이트 : 2.0 중량%

기타 향료, 색소, 보존제 : 충분한 량

증류수 : 나머지

본 발명에 따른 식물 추출물은 엑디스테로이드류와 이리도이드류를 동시에 함유하고, 특히 10,000 내지 20,000 이상의 분자량을 갖는 고분자 물질을 함유하고 있지 않으므로 안정된 생물학적 제제를 제공하는 것이 가능하므로 의약, 화장품, 식품 및 음료용 조성물을 제공하기 위한 최적의 함량을 제공한다. 이들 조성물은 여성의 모유 생산을 촉진하거나, 강장 효과를 가지며, 단백질의 생합성을 촉진하는 등, 순수한 엑디스테로이드류만에서는 관찰되지 않았던 여러 가지의 새로운 효능을 갖는다.

Claims (18)

1. 아주가 투르케스타니카 추출물을 유효성분으로 하는 화장용 조성물.
2. 제 1항에 있어서, 상기 추출물은 엑디스테로이드와 이리도이드를 1:3 내지 1:10의 질량비로 함유하고 있는 것을 특징으로 하는 화장용 조성물.
3. 제 2항에 있어서, 상기 추출물은 엑디스테로이드와 이리도이드를 1:5의 질량비로 함유하고 있는 것을 특징으로 하는 화장용 조성물.
4. 제 2항에 있어서, 상기 엑디스테로이드는 엑디스테론(ecdysteron)과 투르케스테론(turkesteron)을 주성분으로 하고, 상기 두 성분의 질량비가 1:0.5∼1: 2인 것을 특징으로 하는 화장용 조성물.
5. 제 4항에 있어서, 상기 엑디스테로이드는 엑디스테론과 투르케스테론을 주성분으로 하고, 상기 두 성분의 질량비가 1:1인 것을 특징으로 하는 화장용 조성물.
6. 제 1항에 있어서, 상기 추출물의 엑디스테로이드 함량은 추출물의 중량을 기준으로 4.3-4.6%인 것을 특징으로 하는 화장용 조성물.
7. 제 1항에 있어서, 상기 추출물의 이리도이드 함량은 추출물의 중량을 기준으로 22.7-26%인 것을 특징으로 하는 화장용 조성물.
8. 제 1항에 있어서, 상기 추출물이 전체 조성물의 0.001 내지 10 중량%를 차지하는 것을 특징으로 하는 화장용 조성물.
9. 제 6항 또는 제 7항에 있어서, 상기 엑디스테로이드는 추출물의 중량을 기준으로 엑디스테론 1.2-1.3%, 투르케스테론 1.2-1.3%, 2,2-Ac-시아스테론 0.9%, 2,3-모노아세토니드(monoacetonid) 엑디스테론 0.6%, 2,3-엑디존 0.3%, 시아스테론 0.13%, 아주가스테론 0.014%, 아주갈락톨 0.008%를 포함하며, 상기 이리도이드는 추출물의 중량을 기준으로 8-0-ac-가르파지드 16.7-17.0% 및 가르파지드 6.0-9.0%를 포함하는 것을 특징으로 하는 화장용 조성물.
10. 1) 아주가 투르케스타니카의 분쇄물을 에탄올로 추출한 후, 가열 농축하여 에탄올을 제거하는 단계;

    2) 단계 1에서 생성된 추출물 잔사를 물로 희석한 후 클로로포름 또는 벤젠으로 처리하여 지용성 성분을 제거하는 단계; 및

    3) 단계 2에서 얻어진 수용성 부분을 에탄올로 희석한 다음 20,000 달톤 이상의 분자량을 갖는 고분자 물질을 제거할 수 있는 공극 크기의 멤브레인으로 여과(membrane filtration)하는 단계를 포함하는 아주가 투르케스타니카 추출물의 제조방법.
11. 제 10항에 있어서, 단계 1의 에탄올을 가열 농축하여 제거하는 과정은 25-60℃에서 이루어지는 것을 특징으로 하는 추출물의 제조방법.
12. 제 10항에 있어서, 단계 1 및 단계 3의 에탄올은 80-90% 에탄올인 것을 특징으로 하는 추출물의 제조방법.
13. 제 10항에 있어서, 단계 3의 멤브레인 여과는 10,000 달톤 이상의 분자량을 갖는 고분자 물질을 제거할 수 있는 공극 크기의 멤브레인으로 수행하는 것을 특징으로 하는 추출물의 제조방법.
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