KR102022263B1 - 육계, 유근피 및 오가피의 혼합 발효추출물을 포함하는 전립선 비대증 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물 - Google Patents

육계, 유근피 및 오가피의 혼합 발효추출물을 포함하는 전립선 비대증 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 육계, 유근피 및 오가피의 혼합 발효추출물을 포함하는 전립선 비대증 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 육계, 유근피 및 오가피의 혼합 발효추출물이 5-알파 리덕타아제를 저해하며, 전립선 무게 감소효과를 확인함으로써, 전립선 비대증의 예방 또는 개선용 건강식품의 소재로서 유용하게 사용될 수 있다.

Description

육계, 유근피 및 오가피의 혼합 발효추출물을 포함하는 전립선 비대증 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물{A composition comprising the fermented extract of Cinnamomum verum J. Presl, Ulmus davidiana var. japonica da and Acanthopanax sessiliflorum Seeman for preventing and treating benign prostatic hyperplasia}
본 발명은 육계, 유근피 및 오가피의 혼합 발효추출물을 포함하는 전립선 비대증 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물에 관한 것이다.
전립선 비대증은 전립선 이행대 부분의 평활근(smooth cell)과 상피세포(epithelial)의 과도한 증식으로 발생되며, 방광폐색으로 인한 빈뇨, 야간빈뇨, 지연뇨와 같은 배뇨 장애가 나타난다.
이러한 전립선비대증은 명확한 발병 원인에 대해 밝혀지지 않았으나, 혈액 내에서 테스토스테론(testosterone)이 과다하게 존재하면 전립선에서 5-알파환원효소(5α-reductase, 5AR) 에 의해 디하이드로테스토스테론(dehydrotestosterone, DHT)을 다량 합성하게 되고 합성된 DHT는 전립선 세포에 있는 안드로겐 수용체(androgen receptor, AR)에 결합하여 전립선 비대를 유발하는 것으로 보고되고 있다.
또한, 남성이 노화 되면서 남성 호르몬의 분비가 줄어들게 되고, 그로 인해 내분비계 균형을 유지하기 위해 전립선 세포의 안드로겐 수용체가 증가하게 되면, DHT가 더 많은이 결합함으로서 전립선의 비대가 유발하는 것으로 보고되고 있다.
이러한 전립선비대증의 치료방법은 전립선 크기를 줄여주는 5-알파 환원효소 억제와 전립선의 요도를 열어주는 알파차단제로 구분된다.
5-알파환원효소억제제가 주로 전립선비대증 치료제로 사용되는데, 시중에서는 피나스테리드(finasteride)와 두타스테리드(dutasteride)가 판매되고 있으며, 5-알파환원효소억제제가 디하이드로테스토스테론(dehydrotestosterone, DHT)읠 활성을 억제함으로써, 안드로겐 작용을 억제하여 전립선 크기를 줄이는 작용을 한다. 그러나 복용 후 효과가 나타날 때까지 시간이 오래 걸리고, 성기능을 감소시키는 부작용이 있다.
알파차단제는 전립선요도의 압력과 긴장을 낮추어주기 때문에 효과가 빠르게 나타나는 Terazosin와 Tamsulosin이 시판되고 있으나, 혈압을 떨어뜨리려, 이로 인해 어지럼증을 유발할 수 있으며, 무기력증, 두통 또는 시야 이상의 부작용이 있다.
따라서 부작용을 최소화하고 기능성을 극대화 할 수 있는 천연물을 이용한 전립선 비대증 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물의 개발이 필요한 실정이다.
육계(Cinnamomum verum J. Presl)는 혈관확장, 진정, 해열, 위염 등에 효과가 있으며 (Han, 1995)식욕부진, 소화불량, 감기, 위염, 혈액 순환 장애, 암, 염증의 약재로 사용되어 온 것으로 보고되고 있다 (Friesen et al, 1996). 또한 육계는 조골세포의 분열능, 단백질 생합성량, 콜라겐 생합성량을 유의 있게 증가시키는 것으로 보고되고 있다.
유근피(Ulmus davidiana var. japonica da)는 예로부터 종기나 종창에 효과가 있는 나무로 알려져 왔으며 최근에는 항산화 효과, 아질산염 제거능과 치과 카리에스에 대한 항세균 효과 및 항암효과에 대한 보고가 있다. 동의보감에서 유근피는 성질이 평하고 맛이 달고 독이 없으며 부드러워 대소변을 잘 통하게 하고 장, 위의 사열을 없애 장염에 효과가 있다고 기재되어 있다.
오가피(Acanthopanax sessiliflorum Seeman)는 예로부터 오래 마셔도 독이 없고 몸을 가볍게 하며 늙음을 견디게 한다는 효능이 알려져 민간 또는 한방에서 술로 우려내거나 물로 다려서 질병의 치료에 사용해왔다. 생약에서는 오가피나무의 뿌리, 줄기 및 껍질을 오가피라 부르며, 동의보감에서는 강장, 중풍, 신경통, 당뇨에 이용하였다고 기록되어 있다.
이와 같이 육계, 유근피 및 오가피의 기능성이 밝혀짐에도 불구하고 전립선 비대증에 대한 연구는 미흡한 실정이다.
따라서 이에 본 발명자는 천연물 중 5-알파환원효소(5α-reductase, 5AR) 억제 효능과 전립선 요도를 열어주는 α-차단제 효능을 보유한 약제를 스크리닝 한 결과, 상기 육계, 유근피 및 오가피의 혼합 발효추출물이 전립선 비대증을 예방 또는 개선하는데 효과적임을 발견하였고, 특히, 상기 혼합 발효 추출물을 함유하는 조성물을 전립선 비대 증상을 나타내는 사람을 대상으로 투여해본 결과 잔뇨감, 야간빈뇨, 뇨실금이 개선되는 것을 발견함으로써 본 발명을 완성하게 되었다.
선행특허문헌을 살펴보면, 황칠나무 추출물 또는 상기 추출물 유래의 화합물을 유효성분으로 포함하는 전립선 비대증의 예방 및 치료용 조성물(특허등록 제10-1454532호), 서리태 추출물을 포함하는 전립선 비대증의 예방 및 치료용 조성물(특허공개 제10-2016-0026553호), 미숙 떫은 감의 분획물을 이용한 전립선 비대증 예방 또는 치료용 조성물(특허등록 제10-1492713호)가 알려져 있다.
그러나 본 발명은 육계, 유근피 및 오가피를 추출하고, 이를 유산균을 이용하여 발효함으로써, 전립선 비대증 예방 또는 개선 효능을 증진시킨 건강기능성 식품 조성물을 제공하는 것으로 상기 선행특허문헌과는 상이하다.
대한민국 등록특허 제10-1454532호(2014.10.17) 대한민국 공개특허 제10-2016-0026553호(2016.03.09) 대한민국 등록특허 제10-1492713호(2015.02.05)
본 발명의 해결과제는, 육계, 유근피 및 오가피의 혼합 발효추출물을 포함하는 전립선 비대증 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 해결과제는, 발기부전, 성욕감소 및 사정량 감소 등의 부작용을 초래하지 않으면서, 5알파-리덕타아제(5α-reductase) 효소를 저해하여 혈액 내 디하이드로테스토스테론(dihydrotestosterone, DHT)의 활성을 저해함으로써, 전립선 비대증을 억제하는 효과를 나타냄으로 의약품 및 건강식품의 소재로서 유용하게 사용될 수 있는 육계, 유근피 및 오가피의 혼합 발효추출물의 새로운 용도에 관한 것이다.
본 발명은, 육계, 유근피 및 오가피의 혼합 발효추출물을 유효성분으로 함유하는 전립선 비대증을 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물이되, 상기 육계, 유근피 및 오가피의 혼합 발효추출물은 육계, 유근피 및 오가피를 중량비 기준으로 1:1:1로 혼합하고, 70%(w/v) 에탄올로 추출한 뒤, 락토바실루스 애시도필러스(Lactobacillus acidophilus)으로 발효하며 제조되고, 상기 육계, 유근피 및 오가피의 혼합 발효추출물의 경구투여 농도는 랫드 모델 기준으로 1일 100~300mg/kg이며, 상기 조성물은 5알파-리덕타아제(5α-reductase) 효소를 저해하고, 혈액 내 디하이드로테스토스테론(dihydrotestosterone, DHT)의 활성을 저해함으로써, 전립선 비대증을 억제하는 것을 특징으로 하는, 전립선 비대증을 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공함으로써 기술적 과제를 해결하고자 한다.
상술한 바와 같이, 본 발명의 육계, 유근피 및 오가피의 혼합 발효추출물이 전립선 5-알파 리덕타아제를 저해하며, 전립선 무게 감소효과를 확인함으로써, 전립선 비대증의 예방 또는 개선용 건강식품의 소재로서 유용하게 사용될 수 있다.
도 1은 육계, 유근피 및 오가피의 혼합 발효추출물의 제조 방법을 나타낸 도면이다.
도 2은 육계, 유근피 및 오가피의 혼합 발효추출물의 세포독성의 영향을 나타낸 도면이다.
도 3은 육계, 유근피 및 오가피의 혼합 발효추출물의 혈액 내 DHT 억제 효능을 나타낸 도면이다.
도 4는 육계, 유근피 및 오가피의 혼합 발효추출물의 5-alpha reductase Ⅱ 억제 효능을 나타낸 도면이다.
본 명세서 및 청구범위에 사용된 용어나 단어는 통상적이거나 사전적인 의미로 한정해서 해석되어서는 안 되며, 발명자는 그 자신의 발명을 가장 최선의 방법으로 설명하기 위해 용어의 개념을 적절하게 정의할 수 있다는 원칙에 입각하여 본 발명의 기술적 사상에 부합하는 의미와 개념으로 해석되어야만 한다.
따라서, 본 명세서에 기재된 실시예와 도면에 도시된 구성은 본 발명의 가장 바람직한 실시예에 불과할 뿐이고, 본 발명의 기술적 사상을 모두 대변하는 것은 아니므로, 본 출원시점에 있어서 이들을 대체할 수 있는 다양한 균등물과 변형 예들이 있을 수 있음을 이해하여야 한다.
이하, 도면을 참조하여 설명하기에 앞서, 본 발명의 요지를 드러내기 위해서 필요하지 않은 사항 즉 통상의 지식을 가진 당업자가 자명하게 부가할 수 있는 공지 구성에 대해서는 도시하지 않거나, 구체적으로 기술하지 않았음을 밝혀둔다.
본 발명의 실시예들은 육계, 유근피, 오가피의 혼합 발효추출물로 이루어진 건강기능식품 조성물을 제공한다.
육계(Cinnamomum verum J. Presl)는 혈관확장, 진정, 해열, 위염 등에 효과가 있으며 식욕부진, 소화불량, 감기, 위염, 혈액 순환 장애, 암, 염증의 약재로 알려져 있다. 또한, 위의 운동을 향상시키고 위액 분비를 촉진해 소화를 돕는다고 알려져 있다. 중추신경계 흥분을 진정시키고 수분대사를 조절하고 혈행을 좋게 해 장기의 기능을 향진시키는 작용이 있다고 알려져 있다. 또 몸을 따뜻하게 하는 효과가 있어서 감기나 유행성 독감, 후두염 등의 증상 완화효능을 보유하고 있다.
유근피(Ulmus davidiana var. japonica da)는 느릅나무과 느릅나무의 나무껍질 혹은 뿌리껍질로 우리나라 전역과 일본, 중국에 천연 분포한다. 소염과 항균작용을 해주는 세로토닌과 히스타민 성분이 함유되어 있어 종창이나 종기에 좋으며, 유근의 점액질을 피부에 바르거나 먹으면 피부에 탄력을 주고 매끄러워지는 효능이 있어 피부미용에 좋다. 또한 플라보노이드 성분이 함유되어 있어 염증을 잡아주고 활성산소를 억제하여 여드름, 비염에 효과적이다 이 외 붓기와 이뇨작용, 비만세포 활성억제에도 효력이 있는 것으로 알려져 있다.
오가피(Acanthopanax sessiliflorum Seeman)는 간과 신장의 기운을 보하여 힘줄과 뼈를 튼튼하게 하므로 사지마비, 구련, 허리와 무릎의 연약증상, 하지무력감, 골절상, 타박상, 부종 등에 쓰인다. 약리작용은 면역증강, 항산화, 항피로, 항고온, 항자극작용, 내분비기능조절, 혈압조절, 항방사능, 해독작용이 보고되었다.
본 발명자들은 육계, 유근피, 오가피의 혼합 추출물을 발효하여 제조한 혼합물은 시너지적 생물학적 활성을 가짐을 발견하였다.
실시예 1. 육계, 유근피 및 오가피의 혼합 추출물 제조방법
본 발명에 있어서, 용어 "추출물"은 상기 추출처리에 의하여 얻어지는 추출액, 상기 추출액의 희석액이나 농축액, 상기 추출액을 건조하여 얻어지는 건조물, 상기 추출액의 조정제물이나 정제물, 또는 이들의 혼합물 등, 추출액 자체 및 추출액을 이용하여 형성 가능한 모든 제형의 추출물을 포함한다.
상기 추출물을 제조하기 위하여, 통상의 기술자는 당업계에 공지된 임의의 적합한 방법을 사용할 수 있다 예를들어, 용매 추출법에 의할 수 있다 식물 전체 또는 임의의 부분을 분쇄한 다음, 추출 용매를 처리하여, 용매 추출물을 수득할 수 있다 분쇄 전에 건조 과정을 거친 다음 분쇄할 수도 있다 또한, 용매 추출물은 감압 증류 및 동결건조 또는 분무 건조과 같은 추가적인 과정에 의해 분말 상태로 제조될 수 있다.
육계, 유근피, 오가피의 혼합 추출물은 다음과 같은 방법으로 제조하였다.
1-1. 육계, 유근피 및 오가피를 0.5~1cm 로 분쇄하는 제1단계;
육계, 유근피, 오가피는 각각 경동시장에서 구입하여 사용하였다. 추출을 위한 전처리 단계로 건조, 절단 등의 전처리 방법을 사용할 수 있으며, 바람직하게는 이물질을 제거한 후, 0.5~1cm 크기로 분쇄하여 사용 하였다.
육계, 유근피 및 오가피를 세척하여 이물을 제거하고, 0.5~1cm 크기로 분쇄함으로써, 표면적을 증가시켜 유효성분의 추출이 용이할 수 있도록한다.
1-2. 상기 분쇄된 육계, 유근피 및 오가피를 중량비 1:1:1로 혼합하고, 70%(w/v)의 에탄올 용매로 추출하는 제 2단계;
추출 방법에는 용매 추출법, 수증기 증류법, 이산화탄소 초임계 추출법, 수증기 증류법, 마이크로 웨이브 공정 추출법, 퍼콜레이션 추출법 등의 다양한 추출 방법이 사용될 수 있으며, 바람직하게는 환류추출법을 이용할 수 있다.
추출 용매도 다양하게 선택될 수 있다. 추출 가능한 용매에는 물, C1 내지 C4의 저급 알코올, 에탄올, 메탄올, 지방유, 글리세린, 마유, 플로필렌글리콜, 에테르, 클로르포름, 석유에테르, 헥산, 벤젠, 메틸렌클로라이드, 에틸아세테이트, 아세톤, 부탄올 및 이소프로판올 등이 있으며, 바람직하게는 에탄올을 사용할 수 있다. 추출용매의 농도도 다양하게 선택될 수 있으며, 바람직하게는 물 또는 70~90%(w/v)의 알코올(에탄올)을 용매를 사용할 수 있다.
더욱 바람직하게는 70%(w/v)의 에탄올 용매로 추출한다. 이는 용매를 물로 사용할 경우보다, 육계, 유근피 오가피의 소수성물질과 친수성 물질 모두 용출 되기 용이하기 때문이다.
설계 조건에 따라 상기 분쇄된 육계, 유근피 및 오가피의 혼합 중량비는 1~3:1~3:1~4으로 설정될 수 있다.
본 발명에서는 상기 분쇄된 육계, 유근피 및 오가피의 혼합 중량비를 1:1:1, 2:1:1, 3:1:1, 1:2:1,1:3:1, 1:1:2, 1:1:3 으로 추출하여 실험하여 본 결과, 1:1:1로 혼합하여 추출한 혼합추출물의 in vitro 조건에서 테스토스테론 5알파-리덕타아제를 억제능이 높은 것을 확인 할 수 있었다. (실험예2)
따라서 바람직하게는 육계, 유근피, 오가피를 중량비 기준으로 1:1:1로 혼합하였다. 보다 구체적으로는 육계, 유근피 및 오가피 각 100g 씩 혼합하여 70% 에탄올 5L를 가하여 추출될 수 있다.
추출 진행시의 시간 및 온도 역시 설계 조건에 따라 달라질 수 있으며, 바람직하게는 95~100℃에서 6시간 추출할 수 있다.
1-3. 상기 추출된 육계, 유근피 및 오가피의 추출액을 여과하는 제 3단계;
1-2의 과정에서 제조한 육계, 유근피 및 오가피의 추출액을 여과한다.
여과 방법에는 침강법, 막 분리법, 원심분리법, 분별증류법, 분배법 등이 있으며, 이외에도 다양한 방법이 사용될 수 있다. 여과 진행시의 시간 및 온도는 설계 조건에 따라 달라질 수 있다. 바람직하게는 어드벤텍 2호(Advantec No 2, 110mm) 여과지를 이용하여 3번 거르는 과정을 수행할 수 있다.
1-4. 상기 여과된 육계, 유근피 및 오가피의 추출액을 감압농축 및 동결건조하는 제 4단계;
1-3의 과정에서 제조한 육계, 유근피 및 오가피의 추출액을 농축한다.
농축 방법에는 증발농축법, 냉동농축법, 막농축법, 건조농축법 등이 있으며, 다양한 방법이 사용될 수 있다. 바람직하게는 rotary evaporator(EYELA, Tokyo, Japan)를 사용하여 감압농축법을 사용할 수 있다. 농축 진행시의 시간 및 온도는 설계 조건에 따라 달라질 수 있다.
설계 조건에 따라 상기 기재된 공정 외에도 여과, 농축, 추출 등의 공정이 반복 실행될 수 있으며, 각 공정 전후에 발효, 냉동 등의 기타 공정이 추가로 실행될 수도 있다.
바람직하게는 1-2의 과정에서 제조한 육계, 유근피 및 오가피의 추출액을 감압농출하고, 농축액을 Ultra-Low temperature freezer(Nihon freezer, Japan)에서 동결시키고, 동결건조기(Labconco, USA)로 동결 건조하여 육계, 유근피 및 오가피의 혼합 추출물 얻었으며, 사용 때까지 -70℃에 보관하였다.
육계, 유근피 및 오가피의 혼합 추출액을 저온에서 감압농축함으로써, 유효성분의 농도를 증가시킬 수 있고, 낮은 온도에서 동결건조함으로써, 상기 추출물의 변성을 최소화 하여 효능이 우수한 육계, 유근피 및 오가피의 혼합 추출물을 제조할 수 잇다. 상기 감압농축 및 동결건조 과정에서 50℃를 넘기면 유효성분이 파괴 될 수 있음으로 낮은 온도에서 진행하는 것이 바람직하다.
바람직하게는 시판되는 육계, 유근피, 오가피를 입수하여 각각 0.5 cm로 분쇄한 후, 각각의 분쇄물을 중량비 기준으로 1:1:1로 혼합한다. 상기 육계, 유근피 및 오가피를 100g 씩 혼합한 혼합 분쇄물 300g을 70% 에탄올 5L를 첨가하여 95~100 ℃에서 6시간 추출하였다. 그 후, 추출액을 여과지로 여과하여 불용성 물질을 제거하고, 농축 장치로 45℃에서 감압 농축하였다. 감압 농축된 추출물의 용매를 완전히 제거하기 위하여 정제수 500mL를 넣어 현탁시킨 후, 동결건조기를 이용하여 건조하여 육계, 유근피 및 오가피의 혼합 추출물을 수득하였다.
실시예 2. 육계, 유근피 및 오가피의 혼합 발효추출물 제조방법
육계, 유근피 및 오가피의 혼합 발효추출물은 다음과 같은 방법으로 제조하였다. 상기 실시예 1의 방법으로 제조한 육계, 유근피 및 오가피의 혼합 추출액에 유산균을 이용하여 발효하고, 농축하여 육계, 유근피 및 오가피의 혼합 발효추출물 제조하였다.
2-1. 육계, 유근피 및 오가피를 0.5~1cm 로 분쇄하는 제1단계;
상기 단계는 실시예 1과 동일하게 진행하였다.
2-2. 상기 분쇄된 육계, 유근피 및 오가피를 중량비 1:1:1로 혼합하고, 70%(w/v)의 에탄올 용매로 추출하는 제 2단계;
상기 단계는 실시예 1과 동일하게 진행하였다.
2-3. 상기 추출된 육계, 유근피 및 오가피의 추출액을 여과하는 제 3단계;
상기 단계는 실시예 1과 동일하게 진행하였다.
2-4. 상기 여과된 육계, 유근피 및 오가피의 추출액에 프로바이오틱스 2%(w/v)을 첨가하고, 배양기에서 37℃로 24시간 동안 액상 발효시키는 제4단계;
프로바이오틱스(probiotics)는 다양한 미생물이 존재하는 사람의 장내에서 우세균으로 분포하고 체내 유익균의 성장을 촉진하는 생균활성제로써, 인체의 소화계에 공생하면서 섬유질 및 복합 단백질을 분해하여 중요한 영양성분으로 만드는 역할을 담당한다. 특히 장의 점막과 상피 세포에 강하게 결합할 수 있는 특성이 있어 정장 작용에 많은 도움을 준다. 또한, 프로바이오틱스는 대식세포의 증식을 촉진하여 대식세포(macrophage)의 장내 유해 세균에 대한 인지능력, 살균능력을 강화시킨다. 면역 관련 물질의 분비를 촉진하여 면역증강효과를 나타내는 것으로 알려져 있다.
프로바이오틱스의 종류는 다양하며, 락토바실루스 애시도필러스(Lactobacillus acidophilus), 엔테로코커스 페시움(Enterococcus facium), 락토바실러스 카이제(Lactobacillus casei),비피도 박테리움 롱검(Bifidobacterium longum)이 있다.
프로바이오틱스는 상기 균에서 선택하여 중량비 기준으로 2% 첨가하여 배양기에서 37℃로 24시간 동안 액상 발효한다.
프로바이오틱스를 중량비 기준으로 2% 첨가하는 이유는 2%보다 적게 첨가하면, 발효가 충분하지 않아 생물학적 활성이 나타나지 않으며, 더 많이 첨가하면 과발효되어 신맛이 강해지기 때문에 섭취하기 어렵다.
바람직하게는 락토바실루스 애시도필러스(Lactobacillus acidophilus)를 이용하여 발효한다.
Lactobacillus acidophillus는 장내에 서식하는, 막대기 모양의 유산간균으로 산에 강한 내산성을 가진다.
L. acidophillus는 천연 항생제를 만들어 내어 20종류 이상의 유해균 성장을 억제하고, 지방, 단백질의 소화 흡수를 돕는 효소를 활성화하며, 상기 육계, 유근피 및 오가피 추출물의 발효를 효율이 가장 높기 때문에 락토바실루스 애시도필러스(Lactobacillus acidophilus)를 사용하는 것이 가장 바람직하다. 또한, 섭취 시 장 내에서 비타민 B·K군을 합성하기 때문에 더욱 바람직하다.
상기 발효효율은 각각의 상기 4종의 프로바이오틱스 락토바실루스 애시도필러스(Lactobacillus acidophilus), 엔테로코커스 페시움(Enterococcus facium), 락토바실러스 카이제(Lactobacillus casei), 비피도 박테리움 롱검(Bifidobacterium longum)을 접종하여 발효한 각각의 발효 산물을 ph, 5알파-리덕타아제(5α-reductase) 효소엑제 효능, 점도, 텍스쳐, 색, 맛을 평가한 결과, 락토바실루스 애시도필러스(Lactobacillus acidophilus), 엔테로코커스 페시움(Enterococcus facium), 락토바실러스 카이제(Lactobacillus casei), 비피도 박테리움 롱검(Bifidobacterium longum)으로 기호도가 나타났다.
2-5. 상기 발효된 육계, 유근피 및 오가피의 추출액을 감압농축 및 동결건조하는 제 5단계;
상기 단계는 실시예 1의 감압농축 및 동결건조 단계와 동일하게 진행하였다.
바람직하게는 시판되는 육계, 유근피, 오가피를 입수하여 각각 0.5 cm로 분쇄한 후, 각각의 분쇄물을 중량비 기준으로 1:1:1로 혼합한다. 상기 육계, 유근피 및 오가피를 100g 씩 혼합한 혼합 분쇄물 300g을 70% 에탄올 5L를 첨가하여 95~100 ℃에서 6시간 추출하였다. 그 후, 상기 육계, 유근피 및 오가피의 추출액에 락토바실루스 애시도필러스(Lactobacillus acidophilus) 2%(w/v)을 접종하고, 배양기에서 37℃로 24시간 동안 액상 발효한다. 상기 발효액을 여과지로 여과하여 불용성 물질을 제거한 하고, 농축 장치로 45℃에서 감압 농축하였다. 감압 농축된 추출물의 용매를 완전히 제거하기 위하여 정제수 500mL를 넣어 현탁시킨 후, 동결건조기를 이용하여 건조하여 육계, 유근피 및 오가피의 혼합 발효추출물을 수득하였다.
실시예 3. 육계, 유근피 및 오가피의 혼합 발효추출물을 포함하는 건강기능식품 조성물
본 발명에서 용어 "건강기능식품”이란 인체에 유용한 기능성을 가진 원료나 성분을 사용하여 정제, 캅셀, 분말, 과립, 액상 및 환 등의 형태로 제조 및 가공한 식품을 말한다. 여기서 기능성이라 함은 인체의 구조 및 기능에 대하여 영양소를 조절하거나 생리학적 작용 등과 같은 보건용도에 유용한 효과를 얻는 것을 의미한다.
본 발명의 건강기능식품은 당업계에서 통상적으로 사용되는 방법에 의하여 제조가능하며, 상기 제조 시에는 당업계에서 통상적으로 첨가하는 원료 및 성분을 첨가하여 제조할 수 있다. 또한 일반 약품과는 달리 식품을 원료로 하여 약품의 장기 복용 시 발생할 수 있는 부작용 등이 없는 장점이 있고, 휴대성이 뛰어나, 본 발명의 건강기능식품은 전립선 비대증 억제 효과를 증진시키기 위한 보조제로 섭취가 가능하다.
유효성분의 혼합양은 사용 목적(예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로,식품의 제조 시에 본 발명에 따른 추출물은 원료 조성물 중 1 ~ 80 중량%, 바람직하게는 80 중량%의 양으로 첨가된다. 그러나 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하로도 사용될 수 있다.
상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다 상기 물질을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소세지, 빵, 쵸코렛, 캔디류, 스낵류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알콜 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강식품을 모두 포함한다.
본 발명의 건강식품에는 통상의 식품과 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물을 추가 성분으로서 함유될 수 있다.
상술한 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드, 말토스, 수크로스, 디사카라이드 및 덱스트린, 사이클로덱스트, 폴리사카라이드, 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨의 당알콜이다.
감미제로서는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제나, 사카린, 아스파탐과 같은 합성 감미제를 사용할 수 있다 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 g당 일반적으로 약 0.1 ~ 10 g 함유한다.
자일리톨은 감미효과로 단맛을 증진시켜, 섭취하기 용이하게 해주는 역활을 하며, 바람직하게는 1~5 중량부 함유한다.
구연산은 소변을 알칼리 상태로 바꾸기 때문에 결석 발생을 예방해 주며, 정혈과 살균작용을 함으로 추가적으로 첨가할 수 있으며, 바람직하게는 1~5중량부 함유한다.
생강즙은 혈관에 콜레스테롤이 쌓이는 것을 막아주고, 혈액순환을 촉진함으로 추가적으로 첨가할 수 있으며, 바람직하게는 1~5중량부 함유한다.
톳 분말은 노화예방, 성인병예방, 고혈압 등 혈관질환에 좋은 효능을 보유하고 있으며, 바람직하게는 1~5중량부 함유한다.
알로에 추출액은 세균과 곰팡이에 강한 살균력이 있고, 독소를 중화하는 알로에틴이 들어 있으며 궤양에 효과가 있으며, 알로에우르신 및 알로미틴을 함유하여 항암효능을 보유하고 있으며, 바람직하게는 1~5 중량부 함유한다.
바람직하게는 육계, 유근피 및 오가피의 혼합 발효추출물 50~80중량부, 자일리톨 5~20 중량부, 구연산 1~5중량부, 생강즙 5~10중량부, 톳분말 1~5 중랑부 및 알로에 추출액 1~10 중량부를 함유한다.
더욱 바람직하게는 육계, 유근피 및 오가피의 혼합 발효추출물 70중량부, 자일리톨 15 중량부, 구연산 5중량부, 생강즙 5중량부, 톳분말 5중량부, 알로에 추출액 10중량부를 함유한다.
바람직하게는 육계, 유근피 및 오가피의 혼합 발효추출물 60중량부, 자일리톨 15 중량부, 구연산 5중량부, 생강즙 5중량부, 톳분말 5중량부, 알로에 추출액 10중량부를 혼합하여 반죽하고, 섭취하기 쉬운 환으로 제조하였다.
실험예 1. 세포독성실험
세포독성(Cytotoxicity) 실험은 살아있는 세포의 미토콘드리아에 존재하는 숙신산 탈수소효소(succinic dehydrogenase)라는 효소가 MTT[3-(4,5-dimethyl-2-yl)-2, 5-diphenyl tetrazoli㎛ bromide]를 환원시켜 포르마잔(formazan)을 형성시킬 수 있음을 근거로 formazan의 농도를 측정함으로써 생존한 세포수를 측정하는 MTT방법을 이용하였다.
실험군으로는 상기 실시예 1에서 제조한 육계, 유근피 및 오가피의 추출물, 실시예 2에서 제조한 육계, 유근피 및 오가피의 발효추출물을 이용하였으며, 이의 비교군으로 동일한 방법으로 제조한 육계 추출물, 유근피 추출물, 오가피 추출물과 육계 발효추출물, 유근피 발효추출물, 오가피 발효추출물을 시료로 선정하여 실험하였다.
96 well microplate(Falcon)에 LNCaP 세포를 2x104 /ml 농도로 희석시킨 세포 부유액 90㎕씩을 각각 넣었다. 그리고 48시간 후에 측정하고자 하는 약물을 10㎕씩 넣고 이때 약물대신 PBS(phosphate buffered saline)를 넣어 세포의 대조군으로 삼고, 세포 대신 배양액만을 넣어 blank로 삼았다.
잘 흔든 후, 3 일간 37℃, 5％ CO2 배양기에서 배양한 후 모든 well에 MTT 용액(5mg/ml PBS, Sigma) 10㎕를 가해주고, 다시 37℃, 5％ CO2에서 4시간 더 배양하여 MTT가 환원되도록 하였다. 4-5시간 후 각 well에서 80㎕씩 버린 다음 150㎕ DMSO를 넣고 10분 동안 쉐이킹(shaking)해서 생성된 formazan 결정을 DMSO로 잘 녹여서 microplate reader (Bio-Tek, USA)를 이용하여 540nm에서 흡광도를 측정하였다.
도 2은 육계, 유근피 및 오가피의 혼합 발효추출물의 세포독성의 영향을 나타낸 도면이다.
상기 시료의 전립선암 세포주(LNCaP)에서 세포독성을 실시한 결과, 1000㎍/ml의 농도까지 95％ 이상의 생존율을 보였다. 따라서 전립선암 LNCaP 세포에서 모두 세포독성이 없는 것을 확인하였다.
실험예 2. 급성독성실험
6 주령의 특정병원체부재(Specific pathogen-free, SPF) SD계 랫드를 사용하여 급성독성실험을 실시하였다. 각 그룹당 5마리씩의 동물에 본 발명의 제조예 1에서 7을 5000 ㎎/㎏의 용량으로 1회 경구투여 하였다.
실험군으로는 상기 실시예 1에서 제조한 육계, 유근피 및 오가피의 추출물, 실시예 2에서 제조한 육계, 유근피 및 오가피의 발효추출물을 이용하였으며, 이의 비교군으로 동일한 방법으로 제조한 육계 추출물, 유근피 추출물, 오가피 추출물과 육계 발효추출물, 유근피 발효추출물, 오가피 발효추출물을 시료로 선정하여 실험하였다.
실험 물질 투여 후 동물의 폐사여부, 임상증상 및 체중변화를 관찰하고 혈액학적 검사와 혈액생화학적 검사를 실시하였으며, 부검하여 육안으로 강장기와 흉강 장기의 이상여부를 관찰하였다.
본 실험 수행 결과, 실험 물질을 투여한 모든 동물에서 특기할 만한 임상증상이나 폐사된 동물은 없었으며, 체중변화, 혈액검사, 혈액생화학 검사 및 부검 소견 등에서도 독성변화는 관찰되지 않았다.
이상의 결과, 본 발명의 추출물은 랫드에서 각각 5000 ㎎/㎏ 까지도 독성변화를 나타내지 않았으며, 경구투여 최소치사량 (LD50)은 5000㎎/㎏ 이상인 안전한 물질로 판단되었다.
실험예 3. 육계, 유근피 및 오가피의 혼합 중량비에 따른 테토스테론 5알파-리덕타아제 억제능 분석
테스토스테론 5알파-리덕타아제 억제능을 분석하기 위해서 Male Sprague Dawley rat(350-400 g)의 전립선을 적출하고 생리식염수로 1회 세척하고 4배의 phosphate buffer를 넣어 균질화하였다. 균질액은 다시 4 ℃, 5,000 rpm에서 5분간 원심분리하여 상등액 만을 취하여 실험에 사용하였다. 실험은 Bradford assay를 이용한 단백질 양을 근거로 20 g 기준으로 실시하였으며, 5-alpha reductase Ⅱ 활성 측정은 래트의 전립선 균질액을 사용한 경우, rat 5-alpha reductase Ⅱ ELISA kit(Cusabio) 의 매뉴얼을 따랐다. 즉, 20 g의 균질액과 실험군 시료의 추출물을 30분 동안 실온에서 반응시키고, 테스토스테론(testosterone, TCI, Tokyo Chemical Industry Co,Ltd, Tokyo, Japan)을 2 nM 처리하여 1시간 동안 37 ℃ incubator(Multiroom incubator, JS Research Inc, Gongju, Korea)에서 반응시켰다. 양성대조군인 피나스테라이드(finasteride)는 사전실험을 통하여 10 M으로 사용되었다 Microplate spectrophotometer를 이용하여 450 nm 파장에서 흡광도를 측정하고 그 측정값을 테스토스테론군을 100%로 하여 백분율로 표기하였다
실험군으로 분쇄된 육계, 유근피 및 오가피의 혼합 중량비를 1:1:1, 2:1:1, 3:1:1, 1:2:1, 1:3:1, 1:1:2, 1:1:3 으로 추출하여 실험하여 본 결과, 1:1:1로 혼합하여 추출한 혼합추출물의 in vitro 조건에서 테스토스테론 5알파-리덕타아제를 억제능이 높은 것을 확인 할 수 있었다.
따라서 분쇄된 육계, 유근피 및 오가피의 혼합 중량비는 1:1:1로 혼합하여 추출하는 것이 가장 바람직하다.

육계, 유근피 및 오가피의 혼합 중량비
억제능(%)
1:1:1 28.9
2:1:1 20.5
3:1:1 21.2
1:2:1 10.5
1:3:1 12.5
1:1:2 11.5
1:1:3 15.5
실험예 3. 프로바이오틱스 발효균주에 따른 테토스테론 5알파-리덕타아제 억제능 분석
프로바이오틱스의 발효균주에 따른 테스토스테론 5알파-리덕타아제 억제능을 분석하기 위해서
각각의 4종의 프로바이오틱스 락토바실루스 애시도필러스(Lactobacillus acidophilus), 엔테로코커스 페시움(Enterococcus facium), 락토바실러스 카이제(Lactobacillus casei), 비피도 박테리움 롱검(Bifidobacterium longum)를 육계, 유근피 및 오가피의 중량 혼합비를 1:1:1로 혼합하여 추출한 추출물에 접종하여 배양기에서 37℃에서 24시간 동안 발효하였다.
각각의 균주로 발효한 발효 산물의 테토스테론 5알파-리덕타아제 억제능을 상기 실험예 2의 방법으로 동일하게 분석한 결과, 락토바실루스 애시도필러스(Lactobacillus acidophilus), 엔테로코커스 페시움(Enterococcus facium), 락토바실러스 카이제(Lactobacillus casei), 비피도 박테리움 롱검(Bifidobacterium longum)으로 억제능이 높게 나타났다.

접종균주
억제능(%)

락토바실루스 애시도필러스
(Lactobacillus acidophilus)
51.9

엔테로코커스 페시움
(Enterococcus facium)
37.5

락토바실러스 카이제
(Lactobacillus casei)
31.2

비피도 박테리움 롱검
(Bifidobacterium longum)
30.4
실험예 4. 전립선비대유도 래트에서의 전립선무게의 변화
전립선의 무게 증가는 전립선 비대증의 주요한 증상 중 하나이므로, 각 추출물의 전립선 비대증에 대한 효과를 분석하기 위하여, 다음과 같은 실험을 수행하였다.
실험군으로는 상기 실시예 1에서 제조한 육계, 유근피 및 오가피의 추출물, 실시예 2에서 제조한 육계, 유근피 및 오가피의 발효추출물을 이용하였으며, 이의 비교군으로 동일한 방법으로 제조한 육계 추출물, 유근피 추출물, 오가피 추출물과 육계 발효추출물, 유근피 발효추출물, 오가피 발효추출물을 시료로 선정하여 실험하였다.
정상대조군(normal control group), 전립선비대 유발군(Benign Prostate Hypertrophy, BPH group), 양성대조군인 finasteride((주)한올제약) 투여군(positive control group) 및 전립선비대유발군에 상기 시료를 투여한 실험군과 비교군으로 나누어 실험군에는 6주령 SD rat 수컷 6마리에 testosterone propionate(3mg/kg, 삼일제약, 한국)를 테스토스테론 농도가 3mg/ml가 되도록 조제한 올리브오일을 3mg/kg의 용량으로 30일간 피하로 주사하였다. 정상군은 테스토스테론 투여를 위해 기제로 사용한 올리브오일만을 피하로 주사하였다. 이후 다시 30일간 전립선비대 유발군, 양성대조군 및 실험군, 비교군 모두에게 테스토스테론을 3mg/kg을 피하로 주사하여 지속적으로 전립선비대를 유발하였다.
정상대조군과 전립선비대 유발군은 식염수, 전립선비대 유발군에 상기 실험군과 비교군 시료를 0, 100, 300, 500 mg/kg 용량으로 경구투여를 시행하였다. 6주 후 마취기를 이용하여 마취 후 수술대 위에서 하복부에 종절개를 시행해 전체 전립선을 절제한 후 무게를 측정하였다.
그 결과, 아래 [표 3]에서 확인할 수 있는 바와 같이, 전립선 무게는 전립선비대 유발군의 경우 정상대조군에 비해 2배 이상 증가하는 것으로 나타났다.
양성 대조약인 finasteride 투여군의 경우 전립선 무게가 전립선비대 유발군에 비해 유의성 있게 감소한 것으로 나타났으며, 실시예 1과 실시예 2군에서도 유의성 있게 감소하였다.
그러나 프로바이오틱스로 발효한 실시예 2에서 효능이 더 상승되는 것을 확인 할 수 있었다.
또한, 비교군인 육계 추출물, 유근피 추출물, 오가피 추출물과 육계 발효추출물, 유근피 발효추출물, 오가피 발효추출물은 전립선 무게가 감소하였으나, 상기 실시예 1, 2에 대비하여 효능이 미미한 것으로 나타났다.
따라서 이는 육계, 유근피 및 오가피의 혼합 발효추출물을 제조함으로써, 생물학적 시너지 효과를 나타낸 것으로 사료된다.
실시예 2를 랫드 기준으로 100~300mg/kg 경구투여하는 군의 전립선 무게가 전립선 비대 유발군에 대비하여 바람직하게 감소하였으나, 오히려 500mg/kg 군에서는 100mg/kg에 대비하여 효능이 감소하는 것을 확인할 수 있었다.
따라서 바람직한 투여용량은 실시예 2를 랫드 기준으로 100~300mg/kg 경구투여하는 것이다.
전립선 무게(g)
정상대조군(NC) 0.24±0.05
전립선 비대 유발군(BPT) 0.68±0.03
양성대조군(finasteride) 0.45±0.04*
육계 추출물 육계 발효추출물 0.60±0.03 0.57±0.03*
유근피 추출물 유근피 발효추출물 0.63±0.03 0.62±0.03
오가피 추출물 오가피 발효추출물 0.65±0.03 0.64±0.03
실시예 1 100mg/kg 0.54±0.08*
실시예 1 300mg/kg 0.56±0.05*
실시예 1 500mg/kg 0.58±0.05*
실시예 2 100mg/kg 0.45±0.05*
실시예 2 300mg/kg 0.42±0.05*
실시예 2 500mg/kg 0.48±0.05*
실험예 5. 혈액에서의 디히드로테스토스테론(dihydrotestosterone, DHT) 억제
상기 실험예 3에서 진행한 래트의 혈액을 심장채혈로 채취되었으며, 실온에서 30분 동안 정치한 후 3,000rpm에서 원심분리하였다. 분리된 혈장에서의 testosterone의 측정은 ELASA assay kit(Bio Vendor, Bruno, Czzecho)로 측정되었으며 측정값은 testosterone standard로 측정된 그래프를 이용하여 계산하였으며 단위는 pg/mL로 표기하였다.
혈장에서의 DHT는 ELASA assay로 측정되었다 혈장 50 ㎕을 goat-anti-rabbit antibody가 미리 coated된 96well microplate에 HRP-conjugated DHT와 DHT-specific antibody와 함께 1시간동안 실온에서 shaking incubation을 실시하였다.
Incubation 후 기질용액을 첨가하고 15분 후 황산용액으로 반응 을 멈춘 후 450 nm에서 10분이내에 시료별 차이를 측정하였다. 측정값의 계산은 DHT 기준액으로 그린 standard 그래프를 이용하였으며 BPH군에 대한 백분율(%)로 표기하였다.
도 3은 육계, 유근피 및 오가피의 혼합 발효추출물의 혈액 내 DHT 억제 효능을 나타낸 도면이다.
상기 실험의 결과, 전립선비대유도 랫드의 혈장으로부터 DHT level을 측정한 결과, 실시예 2에 따라 제조한 혼합 발효추출물의 투여군에서 양성대조군인 Finasteride 투여군 보다 우수한 억제효과를 나타내었다.
실험예 6. 전립선 조직에서 5-alpha reductase II 억제
5-알파 리덕타아제(5-α-reductase, 5αRD)는 2종류(제1형, 제2형)의 동종효소가 있으며 두 가지 모두 testosterone을 DHT로 변화시키는 효소이다 제1형은 피지선, 표피, 모낭의 각질형성세포(keratinocytes), 모유두세포, 땀샘에 주로 분포하며, 제2형은 두피 모낭의 모근초(root sheaths), 부고환, 정관, 정낭(seminal vesicle), 전립선, 태아 생식기의 피부에 주로 분포한다. 5-α-reductase type1은 전립선에서의 분포와 활성은 크지 않지만 간과 피부에 많이 존재하며, 5-α-reductase type2의 경우는 주로 전립선에서 두드러진 활성과 분포를 보인다
전립선비대를 유도한 래트에서 억제효과를 측정하기 위해 적출한 전립선 무게의 8배의 완충용액(PBS pH 74,10mM)을 첨가한 후 4℃를 유지하는 환경에서 Ultra-Turrax(T10 basic, IKA, Germany)로 1분간 균질화하였다.
균질액은 4℃에서 5,000rpm으로 5분간 원심분리(Biofuge stratos, Kendro Laboratory Products, Germany) 하여 상등액을 취하여 효소원으로 사용하였다 5-alpha reductase II의 저해능을 측정하기 위해서 ELISA assay kit(Cusabio, Germany)를 이용하였으며, 460nm에서 측정하고 측정값의 계산은 기준액으로 그린 standard그래프를 이용하여 구하고 BPH군에 대한 백분율(%)로 표기하였다.
도 4는 육계, 유근피 및 오가피의 혼합 발효추출물의 5-alpha reductase Ⅱ 억제 효능을 나타낸 도면이다.
상기 실험의 결과, 전립선비대유도 랫드의 전립선조직에서 5-alpha reductase II 활성(SRD5A2의 활성)을 측정한 결과, BPH군의 효소활성을 100%로 표기할 때, 실시예 2의 100~300mg/kg 투여군에서 약 49% 억제율을 보였으며, 이는 모두 양성 대조군인 Finasteride 투여군(46%억제)과 상응하는 억제효과였다.
실험예 7. 전립선 기능 개선 효과에 대한 효능평가
본 발명자는 40~60대 전립선 비대 증상을 보유한 남성을 대상으로 본 실시예 1과 실시예 2의 조성물을 실시예 3에 따라 건강기능식품 조성물로 제조하여, 섭취하기로 하였다.
실시예 1군은 육계, 유근피 및 오가피의 혼합 추출물 60중량부, 자일리톨 15 중량부, 구연산 5중량부, 생강즙 5중량부, 톳분말 5중량부, 알로에 추출액 10중량부를 혼합하여 반죽하고, 섭취하기 쉬운 환으로 제조하였다.
실시예 2군은 육계, 유근피 및 오가피의 혼합 발효추출물 60중량부, 자일리톨 15 중량부, 구연산 5중량부, 생강즙 5중량부, 톳분말 5중량부, 알로에 추출액 10중량부를 혼합하여 반죽하고, 섭취하기 쉬운 환으로 제조하였다.
45명을 대상으로 대조군으로 시판되고 있는 Finasteride과 실시예 1군과 실시예 2군을 1개월간 투여 한 후 설문지를 다시 작성하도록 하여 본 조성물이 전립선질환에 미치는 영향을 분석하였다.
상기 환제의 복용 전과 후 질문에 대한 회답을 점수화하여 전립선 비대증에 수반되는 임상 증상의 개선 작용을 확인하였다. 개선 정도를 (0~5)로 나타내어 합산하여 판정한다.
실험에 대한 결과, 본원발명에 따라 실시예 2군이 투여전과 투여 1개월 후 점수를 비교해본 결과 실시예 1군과 대비하여 유의한 차이로 전립선비대증상이 개선된 것을 확인할 수 있다. 또한, 양성 대조군인 Finasteride에 대비하여 전립선비대증에 의한 병증 개선 효능이 더 우수한 것을 확인하였다.

개선 사항
대조군
Finasteride
실시예 1 군
실시예 2 군

소변이 자주 마려운 증상(빈뇨) 개선
3
2
4

아랫배에 힘을 주어야 소변이 가능
한 증상(복압배뇨) 개선
3
2
4

소변이 중간에 끊기는 증상(단축뇨) 개선
3
2
4

소변줄기가 가는 증상(세뇨, 약뇨) 개선
3
2
4

소변을 봐도 개운치 않고 또 보고 싶은 증상(잔뇨감) 개선
3
1
5

소변이 마려우면 참지 못하는 증상(요절박) 개선
2
1
4

자다가 일어나 소변을 보는 증상(야간빈뇨) 개선
2
1
4

Claims (2)

  1. 육계, 유근피 및 오가피를 분쇄하는 제1 단계;
    상기 분쇄된 육계, 유근피 및 오가피를 중량비 1:1:1로 혼합한 다음, 70% 에탄올로 추출하는 제2 단계;
    상기 제2 단계의 추출액을 여과하는 제3 단계;
    상기 제3 단계의 여과액에 락토바실루스 애시도필러스(Lactobacillus acidophilus)를 첨가하여 발효시키는 제4 단계를 포함하여 구성되고,
    상기 육계, 유근피 및 오가피의 혼합 발효추출물의 경구투여 농도는 랫드 모델 기준으로 1일 300mg/kg인 것을 특징으로 하는 육계, 유근피 및 오가피 혼합 발효 추출물의 제조방법.
  2. 청구항 1에 따른 제조방법에 의하여 제조된 육계, 유근피 및 오가피 혼합 발효 추출물을 유효성분으로 함유하는 전립선 비대증 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물로서,
    상기 추출물은 5알파-리덕타아제(5α-reductase)를 저해하여 혈액 내 디하이드로테스토스테론(dihydrotestosterone)의 활성을 저해하는 것을 특징으로 하는, 전립선 비대증 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물.
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