KR102533040B1 - 황백나무 껍질, 삼백초, 굴피나무 열매 및 감잎 추출물의 발효물을 유효성분으로 하는 항산화 또는 항염증 화장료 조성물 및 그의 제조방법 - Google Patents

황백나무 껍질, 삼백초, 굴피나무 열매 및 감잎 추출물의 발효물을 유효성분으로 하는 항산화 또는 항염증 화장료 조성물 및 그의 제조방법 Download PDF

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Abstract

본 발명은 황백나무 껍질, 삼백초, 굴피나무 열매 및 감잎을 혼합하여 추출된 복합 추출물의 발효물 및 이의 제조방법에 관한 것으로, 본 발명의 복합 추출물의 발효물은 대식세포에서 LPS로 유도된 NO 생성 증가를 억제하고, DPPH, ABTS 및 SOD 라디칼 생성을 저해하는 효과를 나타낼 수 있으므로, 항염증 또는 항산화 기능성 화장료 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.

Description

황백나무 껍질, 삼백초, 굴피나무 열매 및 감잎 추출물의 발효물을 유효성분으로 하는 항산화 또는 항염증 화장료 조성물 및 그의 제조방법{Composition for antioxidation or anti-inflammation comprising fermented extracts of Phellodendron amurense bark, Saururus chinensis, Platycarya strobilacea fruit and Diospyros kaki leaf as active ingredients, and method for preparing the same}
본 발명은 황백나무 껍질, 삼백초, 굴피나무 열매 및 감잎을 혼합하여 추출된 복합 추출물의 발효물 및 이의 제조방법과 상기 복합 추출물의 발효물을 유효성분으로 포함하는 항산화 또는 항염증용 조성물에 관한 것이다.
우리 인체는 외부 환경과 밀접하게 접하고 있고 자외선이나 환경 오염, 화학 물질, 세제, 꽃가루 등의 노출로 인해 쉽게 민감화 되는 것은 기지의 사실이다. 이러한 외부 환경에 의해 노출된 피부는 활성 산소 종에 쉽게 노출되고, 발생된 활성 산소 종은 정상적인 세포 조직이나 세포막을 공격하게 되어 피부는 결국 염증 (inflammation)을 일으키게 된다. 염증화된(inflammated) 조직은 피부에 단백질이나 유전자 물질 등을 파괴하여 주름 등을 형성하는 등 피부 노화가 일어난다.
피부노화의 가장 큰 원인은 프리 라디칼(free radical), 즉 활성 산소이다. 프리 라디칼의 생성 원인을 보면 외적으로는 자외선, 공해, 합성세제 등이며, 내부적 요인으로는 염증, 세포 파괴, 심리적 스트레스 등이다. 최근 자외선(UV-B 및 UV-A) 에 의한 피부세포 손상의 주 원인은 역시 활성 산소이며, 이는 태양광선 노출시 피부에서 생성되어 피부 단백질의 변성 및 지질의 과산화를 통하며, 피부염 및 광발암 등을 일으킬 수 있다고 보고 되어 있다. 생체 피부 세포가 노령화 되면서 피부 세포중의 과산화물의 수치가 급격히 증가한다. 활성산소에 의해 세포(또는 세포막)의 구성성분이 과산화물질로 되고 단백질 손상이 일어난다면 세포 또는 세포막은 기능을 원활히 수행할 수 없게 된다. 따라서 이들의 기능적, 구조적 손상으로 인해 주름이 생기게 되며 이들로 인해 노화가 촉진된다고 알려져 있다.
염증반응은 인체에 외부 병원체 등의 각종 외부 물질의 침입을 식별하고 이를 제거하여 항상성을 유지하는 자기방어체계인 1차적 면역반응이며, 대식세포는 대표적인 염증 매개물질인 산화 질소(nitric oxide, NO) 생성에 관여한다. 활성산소의 하나인 NO는 염증 반응 시에 iNOS(inducible NO synthase)에 의해 과도하게 생성되어 염증을 심화시키게 된다. 또한, 대식세포에 그람 음성세균의 세포외막에 존재하는 내독소 LPS(lipopolysaccharide)에 의해 TNF-α(tumor necrosis factor-α), IL-1β(interleukin-1β) 및 IL-6(interleukin-6) 등과 같은 사이토카인의 분비를 증가시킨다. 또한 iNOS에 의해 생성되는 NO와 COX-2(cyclooxygenase-2)에 의해 생성되는 PGE2(prostaglandin E2) 등의 염증유발인자들도 생성된다. 이러한 염증유발인자들은 NO와 ROS의 생성을 더 자극하게 되어 염증 반응이 과도해지며 이러한 현상은 만성 염증 질환의 원인이 되며, 피부 조직에도 심각한 손상을 가져온다.
이처럼, 과다 염증에 의해 유발되는 단백질 분해 효소들에 의해 세포 및 결합조직이 손상을 입고 결합조직의 손상은 피부의 탄력을 감소시켜 주름의 원인이 될 뿐 아니라 나아가 빠른 피부 노화를 초래하게 된다. 그러므로 활성산소를 억제하는 것은 피부노화 화장료에 중요한 요소이다. 따라서 다양한 만성 염증 질환 및 피부 노화의 예방 및 치료를 위하여 항산화 및 항염증 효과가 있는 기능성 소재의 개발이 중요시되고 있다.
이에, 본 발명자들은 항산화 및 항염증 효과가 있는 기능성 소재를 연구한 결과, 황백나무 껍질, 삼백초, 굴피나무 열매 및 감잎 추출물의 발효물이 산화 라디칼 및 산화질소의 생성을 억제하는 효과를 나타낼 수 있음을 확인하여 본 발명을 완성하였다.
대한민국공개특허 제10-2020-0090573호
본 발명의 목적은 항산화 및 항염증 효과를 가지는, 황백나무 껍질, 삼백초, 굴피나무 열매 및 감잎 추출물의 발효물의 제조방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 항산화 또는 항염증용 화장료 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 항산화 또는 항염증용 식품 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 항염증용 약학 조성물을 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위하여,
본 발명은 황백나무 껍질, 삼백초, 굴피나무 열매 및 감잎을 혼합하여 혼합물을 준비하는 단계(단계 1); 단계 1의 혼합물을 증기로 가열하여 찐 다음 건조하는 공정을 3회 반복하여 삼증삼포 건조물을 얻는 단계(단계 2); 단계 2의 삼증삼포 건조물을 추출하여 추출물을 얻는 단계(단계 3); 및 단계 3의 추출물을 발효하여 발효물을 얻는 단계(단계 4);를 포함하는, 항산화 및 항염증 효과를 가지는, 황백나무 껍질, 삼백초, 굴피나무 열매 및 감잎 추출물의 발효물의 제조방법을 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 제조방법으로 제조된 황백나무 껍질, 삼백초, 굴피나무 열매 및 감잎 추출물의 발효물을 유효성분으로 포함하는, 항산화 또는 항염증용 화장료 조성물을 제공한다.
나아가, 본 발명은 상기 제조방법으로 제조된 황백나무 껍질, 삼백초, 굴피나무 열매 및 감잎 추출물의 발효물을 유효성분으로 포함하는, 항산화 또는 항염증용 식품 조성물을 제공한다.
더 나아가, 본 발명은 상기 제조방법으로 제조된 황백나무 껍질, 삼백초, 굴피나무 열매 및 감잎 추출물의 발효물을 유효성분으로 포함하는, 항염증용 약학 조성물을 제공한다.
본 발명의 황백나무 껍질, 삼백초, 굴피나무 열매 및 감잎 추출물의 발효물은 대식세포에서 LPS로 유도된 NO 생성 증가를 억제하고, DPPH, ABTS 및 SOD 라디칼 생성을 저해하는 효과를 나타낼 수 있으므로, 항염증 또는 항산화 기능성 화장료 조성물, 식품 조성물 및 약학 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.
도 1은 본 발명에 따른 황백나무 껍질, 삼백초, 굴피나무 열매 및 감잎 추출물의 발효물(복합 추출물의 발효물)의 제조 공정을 나타낸 모식도이다.
도 2는 본 발명에 따른 복합 추출물의 발효물의 세포독성 유무를 확인하기 위하여, 복합 추출물의 발효물의 처리 농도별 RAW 264.7 세포의 세포 생존율(cell viability)을 MTT assay 분석을 통해 측정한 결과를 나타낸 그래프이다.
도 3은 RAW 264.7 세포에 염증 유발 물질인 LPS 처리 후의 세포(LPS; 우측) 및 대조군 세포(control, CON; 좌측)를 촬영한 사진이다.
도 4는 본 발명에 따른 복합 추출물의 발효물의 항염증 효능을 확인하기 위하여, 복합 추출물의 발효물의 처리 농도별 RAW 264.7 세포의 LPS로 유발된 NO 생성에 미치는 영향을 분석한 결과를 나타낸 그래프이다.
이하, 본 발명을 상세히 설명한다.
본 명세서에서 사용되는 용어 (terminology)들은 본 발명의 바람직한 실시예를 적절히 표현하기 위해 사용된 용어들로서, 이는 사용자, 운용자의 의도 또는 본 발명이 속하는 분야의 관례 등에 따라 달라질 수 있다.
따라서, 본 용어들에 대한 정의는 본 명세서 전반에 걸친 내용을 토대로 내려져야 할 것이다. 명세서 전체에서, 어떤 부분이 어떤 구성요소를 "포함"한다고 할 때, 이는 특별히 반대되는 기재가 없는 한 다른 구성요소를 제외하는 것이 아니라 다른 구성 요소를 더 포함할 수 있는 것을 의미한다.
본 명세서 전체에 걸쳐, 특정 물질의 농도를 나타내기 위하여 사용되는 '%'는 별도의 언급이 없는 경우, 고체/고체는 (w/w) %, 고체/액체는 (w/v) %, 그리고 액체/액체는 (v/v) %이다.
본 발명에서 사용되는 모든 기술용어는, 달리 정의되지 않는 이상, 본 발명의 관련 분야에서 통상의 당업자가 일반적으로 이해하는 바와 같은 의미로 사용된다. 또한 본 명세서에는 바람직한 방법이나 시료가 기재되나, 이와 유사하거나 동등한 것들도 본 발명의 범주에 포함된다.
일 측면에서, 본 발명은 황백나무 껍질, 삼백초, 굴피나무 열매 및 감잎을 혼합하여 혼합물을 준비하는 단계(단계 1);
단계 1의 혼합물을 증기로 가열하여 찐 다음 건조하는 공정을 3회 반복하여 삼증삼포 건조물을 얻는 단계(단계 2);
단계 2의 삼증삼포 건조물을 추출하여 추출물을 얻는 단계(단계 3); 및
단계 3의 추출물을 발효하여 발효물을 얻는 단계(단계 4);를 포함하는, 항산화 및 항염증 효과를 가지는, 황백나무 껍질, 삼백초, 굴피나무 열매 및 감잎 추출물의 발효물의 제조방법을 제공한다.
본 발명의 황백나무 껍질은 황백나무(Phellodendron amurense)의 껍질(수피)를 의미한다. 황백나무는, 운향과(藝香科)의 넓은 잎 큰키나무로 낙엽활엽교목의 일종이며 일명 황벽나무 또는 황경피나무라고도 불린다. 황백나무는 그 껍질(황백피; Phellodendron Bark)를 주로 약용으로 사용하는데, 혈당저하, 장내 미생물 조절, 살균 등의 효과가 있는 것으로 알려져 있다.
본 발명의 삼백초는 삼백초(Saururus chinensis)의 전초(全草)를 의미한다. 삼백초는 물가에서 자라는 삼백초과(三白草)의 여러해살이풀로서, 한방에서 약초로 널리 쓰이는데, 전초(全草)를 말려 약재로 사용하며, 암, 해독, 소종, 황달, 변비 등에 효과가 있는 것으로 알려져 있다.
본 발명의 굴피나무 열매는 굴피나무(Platycarya strobilacea)의 열매를 의미한다. 굴피나무는 가래나무과(Juglandaceae)에 속하는 활엽교목으로서, 잎은 독성이 있어 외용약으로, 열매와 줄기는 달여서 약용으로 사용해 왔다. 한방에서는 열매를 화향수과(化香樹果)라고 하여 근육통, 복통, 치통, 습진, 종창 등의 치료에 사용해왔으며, 탈모, 관절염, 해독 등에도 효과가 있는 것으로 알려져 있다.
본 발명의 감잎은 감나무(Diospyros kaki)의 잎을 의미한다. 본초강목에서는 감잎의 효능이 혈액, 심장과 관련이 높아 순환기 질환예방, 당뇨, 피부질환 치료에 사용했다고 전해지며, 감잎에 함유된 다당성분이 면역력 증진과 항종양에도 효과가 있다는 연구결과가 보고된 바 있다.
본 발명의 실시예에서는, 본 발명에 따른 제조방법으로 제조된 황백나무 껍질, 삼백초, 굴피나무 열매 및 감잎 추출물의 발효물을 "복합 추출물의 발효물"로 기재하였다.
본 발명의 황백나무 껍질, 삼백초, 굴피나무 열매 및 감잎은 직접 채취하여 사용할 수 있고, 통상의 각 원료를 시중에서 구입하여 사용할 수 있다.
본 발명의 제조방법에 있어서, 상기 단계 1은 혼합물 전체 중량 대비, 황백나무 껍질 5-25 중량%, 삼백초 40-60 중량%, 굴피나무 열매 5-25 중량% 및 감잎 10-30 중량% 혼합하는 것일 수 있다. 바람직하게는, 혼합물 전체 중량 대비, 황백나무 껍질 10-20 중량%, 삼백초 45-55 중량%, 굴피나무 열매 10-20 중량% 및 감잎 15-25 중량% 혼합하는 것일 수 있다.
본 발명의 제조방법에 있어서, 상기 단계 1은 황백나무 껍질, 삼백초, 굴피나무 열매 및 감잎을 혼합하여 혼합물을 준비하기 전에 각 원료를 세척 및 건조하는 단계를 추가로 포함할 수 있다.
본 발명의 제조방법에 있어서, 상기 단계 2는 100 내지 150℃의 증기로 10 내지 120 분간 가열하여 찐 다음 건조하는 것일 수 있고, 바람직하게는 110 내지 130℃의 증기로 20 내지 60 분간 가열하여 찐 다음 건조하는 것일 수 있다. 상기 건조는 이에 제한되지는 않으나, 실온(1 내지 35℃) 또는 음지에서 건조하는 것일 수 있다.
본 발명에서 사용되는 용어 '삼증삼포'는, 상기 증숙(증기로 가열하여 찜) 및 건조를 3회 반복하는 공정을 의미하는 것일 수 있고, 혼합물을 증기로 가열하여 찌기 전에 에탄올 및 물(정제수) 혼합용매에 침전시키는 공정을 추가로 포함하는 것일 수 있다. 상기 혼합용매는 에탄올 및 정제수가 1:99 내지 20:80의 부피비율로 혼합된 에탄올 수용액일 수 있고, 보다 바람직하게는 에탄올 및 정제수가 10:90의 부피비율로 혼합된 10% 에탄올 수용액일 수 있다. 상기 침전은 1 내지 10시간 침전시키는 것일 수 있고, 바람직하게는 2 내지 6시간 침전시키는 것일 수 있다. 상기 삼증삼포는 각 원료의 물성을 부드럽게 하고 약성을 강화하고자 수행하는 공정일 수 있다.
본 발명에서 사용되는 용어 "추출물(extract)"은 추출 대상 원료를 그대로 또는 분쇄하여 적절한 용매를 사용하여 침출액으로 수득하고 침출액을 증발시켜 농축한 제제를 의미하는 것으로, 이에 제한되지는 않으나, 추출처리에 의해 얻어지는 추출액, 추출액의 희석액 또는 농축액, 추출액을 건조하여 얻어지는 건조물, 이들의 조정제물 또는 정제물일 수 있다. 본 발명에 있어서 황칠나무 추출물은 추출, 분획 또는 정제의 각 단계에서 얻어지는 모든 추출액, 분획 및 정제물, 그들의 희석액, 농축액 또는 건조물을 모두 포함하는 개념이다.
상기 추출물을 추출하기 위한 적절한 용매로는 약학적으로 허용되는 유기용매라면 어느 것을 사용해도 무방하며, 물 또는 유기용매를 사용할 수 있으며, 이에 제한되지는 않으나, 예를 들어, 정제수, 메탄올 (methanol), 에탄올 (ethanol), 프로판올 (propanol), 이소프로판올 (isopropanol), 부탄올 (butanol) 등을 포함하는 탄소수 1 내지 4의 알코올, 아세톤 (acetone), 에테르 (ether), 벤젠 (benzene), 클로로포름 (chloroform), 에틸아세테이트 (ethyl acetate), 메틸렌클로라이드 (methylene chloride), 헥산 (hexane) 및 시클로헥산(cyclohexane) 등의 각종 용매를 단독으로 혹은 혼합하여 사용할 수 있다. 추출 방법으로는 열수추출법, 냉침추출법, 환류냉각추출법, 용매추출법, 수증기증류법, 초음파추출법, 용출법, 압착법 등의 방법 중 어느 하나를 선택하여 사용할 수 있다. 또한, 목적하는 추출물은 추가로 통상의 분획 공정을 수행할 수도 있으며, 통상의 정제방법을 이용하여 정제될 수도 있다.
본 발명의 제조방법에 있어서, 상기 단계 3의 추출물은 물(정제수)을 추출 용매로 이용하여, 열수 추출하여 수득되는 것일 수 있다. 상기 열수 추출은 상기 단계 2의 건조물 중량 대비 1 내지 30배 부피의 정제수를 가하여 80 내지 99℃의 온도에서 2 내지 10시간 추출하는 것일 수 있고, 바람직하게는 5 내지 20배 부피의 정제수를 가하여 85 내지 95℃의 온도에서 4 내지 6시간 추출하는 것일 수 있다.
본 발명의 제조방법에 있어서, 상기 단계 4는 사카로마이시스 세레비시에(Saccharomyces cerevisiae) 및 락토바실러스 플란타럼(Lactobacillus plantarum)로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 균주를 이용하여 발효하는것일 수 있고, 바람직하게, 상기 단계 4는 사카로마이시스 세레비시에를 이용하여 1차 발효하는 단계; 및 락토바실러스 플란타럼을 이용하여 2차 발효하는 단계;를 포함하는 방법으로 발효하는 것일 수 있다.
본 발명의 일실시예에 따르면, 상기 1차 발효는 32 내지 36℃의 온도에서 16 내지 26시간 발효하는 것이고, 상기 2차 발효는 32 내지 36℃의 온도에서 52 내지 58시간 발효하는 것일 수 있다. 상기 1차 발효 및 2차 발효는 정해진 목적물(대사생성물)을 수득하기 위해 수행하는 공정일 수 있다.
본 발명의 일실시예에 따르면, 상기 1차 발효는 단계 3에서 수득된 액상 상태의 추출물(추출액)의 총 부피량 대비 포도당 1 내지 3% 및 효모 추출물 0.5 내지 2%를 포함하는 배지를 사용 및 1.0×108 내지 1.0×1010cfu/㎖의 사카로마이시스 세레비시에 균주를 추출액 총 부피량 대비 0.05 내지 0.2% 투여하여 이루어지는 것일 수 있다.
본 발명의 일실시예에 따르면, 상기 2차 발효는 1차 발효를 종료시키는 과정 없이, 1차 발효가 진행되는 동안 추가적으로 2차 발효를 진행시키는 것일 수 있고, 상기 2차 발효는 단계 3의 추출액의 총 부피량 대비 포도당 1 내지 3% 및 효모 추출물 0.5 내지 2%를 포함하는 배지를 사용 및 1.0×108 내지 1.0×1010cfu/㎖의 락토바실러스 플란타럼 균주를 단계 3의 추출액 총 부피량 대비 0.05 내지 0.2% 투여하여 이루어지는 것일 수 있다.
본 발명의 제조방법에 있어서, 상기 단계 4 이후에 발효물을 원심분리, 정제, 농축 및 살균하는 공정을 추가로 수행할 수 있다.
본 발명의 일실시예에서는 본 발명에 따른 제조방법에 의해 제조된 복합 추출물의 발효물이 대식세포에서 LPS로 유도된 NO 생성 증가를 억제하여 항염증용 조성물로 유용하게 사용될 수 있음을 입증하였고, DPPH, ABTS 및 SOD 라디칼 생성을 저해하는 효과를 확인하여, 항산화용 조성물로 유용하게 사용될 수 있음을 입증하였다(실시예 1 내지 3 참조).
또한, 일 측면에서, 본 발명은 본 발명에 따른 상기 제조방법으로 제조된 황백나무 껍질, 삼백초, 굴피나무 열매 및 감잎 추출물의 발효물을 유효성분으로 포함하는, 항산화 또는 항염증용 화장료 조성물을 제공한다.
본 발명은 본 발명에 따른 상기 제조방법으로 제조된 황백나무 껍질, 삼백초, 굴피나무 열매 및 감잎 추출물의 발효물을 유효성분으로 포함하는, 산화 반응 또는 염증 반응에 의한 피부 손상 및 노화 예방 또는 개선용 화장료 조성물을 제공한다.
본 발명에 있어서, 상기 화장료 조성물은 NO 생성 증가를 억제 및 DPPH, ABTS 및 SOD 라디칼 생성을 억제함으로써 항산화 또는 항염증 효과를 발휘하는 것일 수 있고, 산화 반응 또는 염증 반응을 억제함으로써 피부를 보호하고, 산화 반응 또는 염증 반응에 의한 피부 손상 및 피부 노화를 예방 또는 개선시키는 효과를 발휘하는 것일 수 있다.
본 발명에 따른 화장료 조성물은 화장수, 영양로션, 영양크림, 수분크림, 마사지크림, 에센스, 페이스트, 마스크팩, 패치, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 클렌저, 오일, 파운데이션, 메이크업 베이스, 왁스 및 스프레이로 구성된 군으로부터 선택되는 1종 이상의 제형인 것일 수 있다. 상기한 성분 이외의 다른 성분들은 기타 제형 또는 사용 목적 등에 따라 당업자가 어려움 없이 적의 선정하여 배합할 수 있다.
일 구현예에서, 상기 화장료 조성물은, 국소 적용에 적합한 모든 제형으로 제공될 수 있다. 예를 들면 용액, 겔, 고체 또는 반죽 무수 생성물, 수상에 유상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 현탁액, 마이크로에멀젼, 마이크로캡슐, 미세과립구 또는 이온형(리포좀), 비이온형의 소낭 분산제의 형태, 크림, 스킨, 로션, 오일, 파우더, 연고, 스프레이 또는 콘실 스틱의 형태로 제공될 수 있다. 또한, 포말(foam)의 형태 또는 압축된 추진제를 더 함유한 에어로졸 조성물의 형태로도 제조될 수 있다.
또한, 상기 화장료 조성물은 본 발명의 상기 발효물에 추가로 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉쇄제 및 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 화장품에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 화장품 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다. 이들 보조제는 화장품학 분야에서 일반적으로 사용되는 양으로 도입된다.
본 발명의 화장료 조성물에 있어서, 통상적으로 함유되는 화장료 조성물에 본 발명의 상기 발효물이 0.001 내지 50 중량%, 바람직하게는 0.01 내지 10 중량%의 양으로 첨가될 수 있다.
본 발명에 따른 발효물을 피부 외용제로 사용하는 경우, 추가로 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉쇄제 및 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 피부용 외용제에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 피부 과학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다. 또한, 상기 성분들은 피부 과학 분야에서 일반적으로 사용되는 양으로 도입될 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물은 단독 또는 중복하여 사용하거나, 본 발명 이외의 다른 화장료 조성물과 중복하여 사용할 수 있다. 또한 본 발명에 따른 화장료 조성물은 통상적인 사용방법에 따라 사용될 수 있으며, 사용자의 피부 상태 또는 취향에 따라 그 사용횟수를 달리할 수 있다.
일 구현예에서, 본 발명은 상기 화장료 조성물을 유효한 양으로 개체에게 국소 도포하는 단계를 포함하는, 산화 반응 또는 염증 반응에 의한 피부 손상 및 노화를 예방 또는 개선하는 방법을 제공한다.
본 발명에서 “예방”이란 본 발명에 따른 조성물의 투여에 의해 산화 또는 염증 반응에 의하여 유발되는 피부 손상, 피부 노화, 피부 세포 사멸 등의 증상 또는 피부 질환의 발병을 지연시키는 모든 행위를 의미하고, “개선”이란 본 발명에 따른 조성물의 투여에 의해 산화 또는 염증 반응에 의하여 유발되는 증상 또는 질환과 관련된 파라미터, 예를 들면 증상의 정도를 감소시키는 모든 행위를 의미한다.
상기, "개체"란, 상기 증상이 발병하였거나 발병할 수 있는 인간을 포함한 원숭이, 소, 말, 양, 돼지, 닭, 칠면조, 메추라기, 고양이, 개, 마우스, 쥐, 토끼 또는 기니아 피그를 포함한 모든 동물을 의미하는 것일 수 있고, 본 발명의 화장료 조성물을 개체에게 투여함으로써 상기 증상들을 효과적으로 예방 또는 개선시킬 수 있다.
본 발명에서 용어 "유효한 양"은 화장품에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 산화 또는 염증 반응에 의해 유발되는 피부의 손상, 노화 등의 증상을 개선시키기에 충분한 양을 의미하며, 유효 용량 수준은 개체 종류 및 손상정도, 자극정도, 노화정도, 연령, 성별, 유효성분의 활성, 유효성분에 대한 민감도, 도포 시간, 도포 기간, 동시 사용되는 다른 유효성분을 포함한 요소 및 기타 화장품 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다.
나아가, 본 발명의 일 측면에서, 본 발명에 따른 상기 제조방법으로 제조된 황백나무 껍질, 삼백초, 굴피나무 열매 및 감잎 추출물의 발효물을 유효성분으로 포함하는, 항산화 또는 항염증용 식품 조성물을 제공한다.
본 발명의 조성물을 식품 조성물로 사용하는 경우, 상기 발효물을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용할 수 있고, 통상의 방법에 따라 적절하게 사용할 수 있다.
상기 조성물은 유효성분 이외에 식품학적으로 허용 가능한 식품보조첨가제를 포함할 수 있으며, 유효성분의 혼합량은 사용목적(예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다.
본 발명에서 사용되는 용어 "식품보조첨가제"란 식품에 보조적으로 첨가될 수 있는 구성요소를 의미하며, 각 제형의 건강기능식품을 제조하는데 첨가되는 것으로서 당업자가 적절히 선택하여 사용할 수 있다. 식품보조첨가제의 예로는 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 충진제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등이 포함되지만, 상기 예들에 의해 본 발명의 식품보조첨가제의 종류가 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 식품 조성물은 건강기능식품을 포함하는 의미인 것일 수 있다. 본 발명에서 사용되는 용어 "건강기능식품"이란 인체에 유용한 기능성을 가진 원료나 성분을 사용하여 정제, 캅셀, 분말, 과립, 액상 및 환 등의 형태로 제조 및 가공한 식품을 말한다. 여기서 '기능성'이라 함은 인체의 구조 및 기능에 대하여 영양소를 조절하거나 생리학적작용 등과 같은 보건용도에 유용한 효과를 얻는 것을 의미한다.
본 발명의 건강기능식품은 통상의 기술분야에서 통상적으로 사용되는 방법에 의하여 제조 가능하며, 상기 제조 시에는 통상의 기술분야에서 통상적으로 첨가하는 원료 및 성분을 첨가하여 제조할 수 있다. 또한 상기 건강기능식품의 제형 또한 건강기능식품으로 인정되는 제형이면 제한 없이 제조될 수 있다.
본 발명의 식품용 조성물은 다양한 형태의 제형으로 제조될 수 있으며, 일반약품과는 달리 식품을 원료로 하여 약품의 장기 복용 시 발생할 수 있는 부작용 등이 없는 장점이 있고, 휴대성이 뛰어나, 본 발명의 건강기능식품은 관련 질환의 치료제의 효과를 증진 시키기 위한 보조제로 섭취가 가능하다.
또한, 본 발명의 조성물이 사용될 수 있는 건강식품의 종류에는 제한이 없다. 아울러 본 발명의 발효물을 유효성분으로 포함하는 조성물은 당업자의 선택에 따라 건강기능식품에 함유될 수 있는 적절한 기타 보조 성분과 공지의 첨가제를 혼합하여 제조할 수 있다.
첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소세지, 빵, 쵸코렛, 캔디류, 스낵류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림 류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알콜 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 본 발명에 따른 발효물을 주성분으로 하여 제조한 즙, 차, 젤리 및 주스 등에 첨가하여 제조할 수 있다.
더 나아가, 일 측면에서, 본 발명은 본 발명에 따른 상기 제조방법으로 제조된 황백나무 껍질, 삼백초, 굴피나무 열매 및 감잎 추출물의 발효물을 유효성분으로 포함하는, 항염증용 약학 조성물을 제공한다.
일 측면에서, 본 발명은 본 발명에 따른 상기 제조방법으로 제조된 황백나무 껍질, 삼백초, 굴피나무 열매 및 감잎 추출물의 발효물을 유효성분으로 포함하는, 염증성 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.
본 발명에 있어서, 상기 약학 조성물은 산화질소(NO)의 생성을 억제함으로써, 항염증 효과 및 염증성 질환을 예방 또는 치료하는 효과를 발휘하는 것일 수 있다.
일 구현예에서, 염증성 질환은 염증성 피부질환, 크론병, 홍반병, 당뇨병, 천식, 알레르기성 및 비-알레르기성 비염, 만성 및 급성 비염, 아토피, 류마티스 관절염, 하시모토 갑상선염, 악성빈혈, 에디슨씨 병, 제1형 당뇨, 루프스, 만성피로증후군, 섬유근육통, 갑상선기능저하증과 항진증, 경피증, 궤양성 위염, 급성 및 만성 신장염, 급성 및 만성 간염, 만성 폐쇄성 폐질환, 폐섬유증, 베체트병, 염증성 장질환, 다발성 경화증, 근막 질환, 바이러스 감염 (예컨대, C형 감염), 박테리아 감염, 곰팡이 감염, 화상, 외과적 또는 치과적 수술에 의한 상처, 프로스타글라딘 E 과다 증후군, 아테롬성 동맥 경화증, 통풍, 관절염, 류머티즘성 관절염, 강직성 척추염, 중증 근무력증, 메니에르 증후군 (Meniere's syndrome), 길리안-바레 증후군 (Guilian-Barre syndrome), 쇼그렌 증후군(Sjogren's syndrome), 백반증, 자궁내막증, 건선, 백반증, 전신성 경피증 및 궤양성 대장으로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나일 수 있다.
상기 “치료”는 치료하고자 하는 대상(또는 개체) 또는 세포의 천연 과정을 변경시키기 위하여 임상적으로 개입하는 모든 행위를 의미하며, 임상 병리 상태가 진행되는 동안 또는 이를 예방하기 위하여 수행할 수 있다. 목적하는 치료 효과는 질병의 발생 또는 재발을 예방하거나, 증상을 완화시키거나, 질병에 따른 모든 직접 또는 간접적인 병리학적 결과를 저하시키거나, 전이를 예방하거나, 질병 진행 속도를 감소시키거나, 질병 상태를 경감 또는 일시적 완화시키거나, 예후를 개선시키는 것을 포함할 수 있다.
본 발명에서, 용어 "예방"이란 본 발명에 따른 약학적 조성물의 투여에 의해 염증 또는 염증성 질환의 발생, 확산 및 재발을 억제 또는 지연시키는 모든 행위를 의미한다.
상기, "개체"란, 상기 질환이 발병하였거나 발병할 수 있는 인간을 포함한 원숭이, 소, 말, 양, 돼지, 닭, 칠면조, 메추라기, 고양이, 개, 마우스, 쥐, 토끼 또는 기니아 피그를 포함한 모든 동물을 의미하는 것일 수 있고, 본 발명의 약학 조성물을 개체에게 투여함으로써 상기 질환들을 효과적으로 예방 또는 치료할 수 있다.
상기 조성물은 경구적 전달, 비경구적 전달의 형태로 투여될 수 있다. 상기 조성물은 전신 또는 국소 투여될 수 있으며, 상기 투여는 경구 투여 및 비경구 투여를 포함할 수 있다. 상기 조성물은 적절한 투여 형태를 제공하도록 적합한 양의 약학적으로 허용되는 비히클 또는 담체와 함께 제형화될 수 있다.
상기 약학 조성물은 약학 조성물의 제조에 사용되는 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다. 상기 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 또는 광물유를 들 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
또한, 상기 약학 조성물은 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제제화 하여 사용할 수 있다.
경구 투여를 위한 고형제제는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 사용될 수 있고, 상기 고형제제는 상기 추출물에 적어도 하나 이상의 부형제, 예컨대, 전분, 칼슘카보네이트, 수크로스, 락토오스, 또는 젤라틴 등을 혼합하여 조제할 수 있다. 또한, 상기 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트, 탈크 같은 윤활제가 사용될 수 있다.
경구 투여를 위한 액상 제제는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 사용될 수 있고, 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 외에 여러 가지 부형제, 예컨대 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 사용될 수 있다.
비경구 투여를 위한 제제는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 사용될 수 있다.
상기 비수성용제, 현탁제는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르가 사용될 수 있다. 상기 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴이 사용될 수 있다.
일 구현예에서, 상기 약학 조성물은 약제학적으로 유효한 양이 대상체에 투여될 수 있다. 상기 “약제학적으로 유효한 양”은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 유효 용량 수준은 환자의 질환의 종류, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료 기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다.
일 구현예에서, 상기 약학 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고, 종래의 치료제와 순차적으로 또는 동시에 투여될 수 있으며, 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기 요소들을 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 바람직하며, 이는 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.
하기의 실시예를 통하여 본 발명을 보다 상세하게 설명한다. 그러나 하기 실시예는 본 발명의 내용을 구체화하기 위한 것일 뿐 이에 의해 본 발명이 한정되는 것은 아니다.
실시예 1. 황백나무 껍질, 삼백초, 굴피나무 열매 및 감잎 복합 추출물의 발효물의 제조
황백나무 껍질, 삼백초, 굴피나무 열매 및 감잎을 구입하여, 각 원료를 정제수에 세척한 후, 건조하였다. 황백나무 껍질, 삼백초, 굴피나무 열매 및 감잎 각각의 건조물을 혼합하여 혼합물을 수득하였다. 이때, 상기 혼합물 전제 중량 대비, 각 원료의 건조물을 하기 표 1의 중량%가 되도록 배합하여 혼합물을 제조하였다.
원료명 배합비율(중량%)
황백나무 껍질 15%
삼백초 50%
굴피나무 열매 15%
감잎 20%
혼합물(총 중량) 100%
상기 배합비율로 배합된 혼합물을 에탄올 10% 및 정제수 90%의 부피비율로 혼합한 용액(10% 에탄올 수용액)에 3~5시간 침전시킨 후 꺼내어 통풍이 잘 되는 음지에서 반건조 하였다(삼증삼포 공정 1). 반건조된 혼합물을 110℃ 이상의 증기로 30 내지 50 분간 가열한(찐) 후 건조하였다(삼증삼포 공정 2). 상기 공정 1 및 공정 2를 추가로 2회 반복함으로써, 총 3회 증기로 가열하여 찌고 건조하는 삼증삼포를 수행하였다.
삼증삼포 수행이 완료 후, 건조된 혼합물 중량 대비 5 내지 20배 부피의 정제수를 가하고, 85 내지 95℃의 온도에서 4 내지 6시간 열수 추출하여 추출물을 수득하였다.
추출로 수득된 액상 상태의 추출물(추출액)을 6brix로 희석하거나 농축한 다음, 지정된 배지(추출액 총량의 포도당 2%, 효모추출물 1%)를 투여하고 살균한 후, 종균으로 1.0×109cfu/㎖의 사카로마이시스 세레비시에(Saccharomyces cerevisiae)를 추출액 총량의 0.1% 투여하여 무산소로 교반하며 34℃의 온도에서 18시간 동안 1차 발효하였다. 발효과정을 조정하기 위하여, 1차 발효가 진행되는 중간인 18~24시간 후 2차로 지정된 배지(추출액 총량의 포도당 2%, 효모추출물 1%)와 종균으로 1.0×109cfu/㎖의 락토바실러스 플란타럼(Lactobacillus plantarum)을 추출액 총량의 0.1% 투여하고, 무산소로 교반하며 34℃의 온도에서 56시간 동안 2차 발효하였다.
상기 총 72시간 동안 1차 발효 및 2차 발효를 수행하여 수득된 결과물을 원심분리하여, 상등액을 취한 다음, 얻어진 상등액을 다시 0.22μm의 필터에 여과시켰다. 여과하여 정제된 액상을 40℃ 이하의 온도에서 40brix로 진공농축하였다. 농축된 액상을 95℃의 온도에서 30 내지 90분 동안 살균하여, 최종 발효물(황백나무 껍질, 삼백초, 굴피나무 열매 및 감잎 추출물의 발효물; 이하, "복합 추출물의 발효물"이라 표기)을 수득하였다.
상기 복합 추출물의 발효물의 제조공정도는 도 1에 나타내었다.
실시예 2. 복합 추출물의 발효물의 항염증 효능 및 세포독성 분석
2-1. 세포 배양
실험에 사용한 RAW 264.7 (TIB-71; ATCC, USA) 대식세포는 American type cell collection (ATCC, USA)로부터 구입하였으며, 사용한 배지는 DMEM (Dulbecco's Modified Eagle's Medium; Gibco, USA) 배지에 10% FBS (Fetal Bovine Serum; Gibco, USA)와 1%의 페니실린 (Penicillin; 100 U/mL)/스트렙토사이신 (Streptocycin; 100 μg/mL)을 첨가한 후, 37℃, 5% CO2 조건 하에서 배양, 사용하였다.
2-2. MTT assay를 통한 세포 독성 및 세포 생존율 분석
황백나무 껍질, 삼백초, 굴피나무 열매 및 감잎 추출물의 발효물(복합 추출물의 발효물)의 세포 독성 유무를 확인하기 위하여, 복합 추출물의 발효물 시료에 대한 생존율을 MTT ([3-(4,5-methylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide], Sigma Chemical Co., St. Louis MO, USA) 방법으로 실험하였다. 세포는 5Х103 세포/웰의 농도로 96-웰 플레이트에 분주하고 24시간 배양 후 배지를 제거하였다. 여기에 새로운 DMEM (10%FBS, 1% Penicillin (100 U/mL)/Streptocycin (100 μg/mL)) 100 μL에 농도별로 희석한 시료를 각각 첨가하여 24시간 배양한 다음 MTT 용액 (5 mg/ mL) 10 μL를 각 well에 첨가하고 4시간 동안 37℃, 5% CO2 배양하였다. 배지를 제거하고 100 μL/well의 Dimethylsulfoxide (DMSO; Sigma Chemical Co., St. Louis MO, USA)를 넣어 세포내에 생성된 포르마잔(formazan)을 15분간 교반하여 용출한 후, ELISA reader를 이용하여 590 nm에서 흡광도를 측정하여, 세포 생존률(cell viability rate)을 계산하였다.
RAW 264.7세포에 상기 복합 추출물의 발효물을 10, 100, 250, 500 μg/mL의 농도로 처리한 후 MTT assay에 의한 세포 생존률(cell viability rate)를 측정한 결과, 100 μg/mL에서 세포독성을 보이지 않았으며, 5000 μg/mL에서도 80% 이상의 세포생존율을 보이는 바 세포독성은 크게 없는 것을 확인하였다(도 2).
2-3. 산화질소(nitric oscide, NO) 생성 억제 효능 분석
황백나무 껍질, 삼백초, 굴피나무 열매 및 감잎 혼합물의 추출 발효물(복합 추출물의 발효물)에 대한 항염증 효능을 확인하기 위하여, RAW 264.7 세포를 5Х105 세포/웰의 농도로 6-웰 플레이트에 분주한 다음 24시간 배양 후 배지를 제거하였다. 여기에 새로운 DMEM (10% FBS, 1% Penicillin (100 U/mL)/Streptocycin (100 μg/mL))배지에 농도별로 희석한 시료(복합 추출물의 발효물)를 1시간 동안 전처리한 뒤 LPS (1 μg/mL) 처리하여 24시간 동안 37℃, 5% CO2 인큐베이터에서 배양하였다. 시료 처리 24 시간 후에 세포배양 상등액 50 μL 와 Griess 시약(1% sulfanilamide + 0.1% α-naphthylamide in 2.5% phosphoric acid) 50 μL 를 혼합하여 96 웰 플레이트에서 10 분 동안 반응시킨 후 ELISA reader 를 이용하여 540 nm에서 흡광도를 측정하였다. 결과는 NaNO2로 스탠다드 곡선(Standard curve)을 작성하여 세포배양 상등액에 함유되어 있는 NO의 값을 계산하였다.
RAW 264.7 세포에 염증 유발 물질인 LPS 처리시 NO 생성이 증가하는 것을 확인하였으며(도 2 및 도 3), RAW 264.7 세포에 상기 복합 추출물의 발효물을 각각 100, 250 μg/mL의 농도로 처리한 후, LPS에 의해 유도된 NO 생성 억제능을 측정 비교한 결과, 농도 의존적으로 NO생성을 억제하는 것으로 나타나, 본 발명의 복합 추출물의 발효물이 항염증 효능이 있음을 확인하였다(도 3).
실시예 3. 복합 추출물의 발효물의 항산화 효능 분석
3-1. 시약 및 시료 준비
항산화 효능 분석을 위해, 하기 표 2의 시약을 구입하여 사용하였고, 물 (H2O)은 EXL® water Purification system (VIVAGEN, KOREA)로 정제한 것을 사용하였다.
시약명 제품명 구입처
2,2-Diphenyl-1-picrylhydrazyl D9132 Sigma-Aldrich
L-ascorbic acid 120505a Megazyme
SOD Assay Kit(OxiTecTM) BO-SOD-500 BIOMAX
2,2'-Azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid) diammounium salt A1888 Sigma-Aldrich
(±)6-6-Hydroxy-2,5,7,8-tetra-methylchromane-2-carboxylic acid 238813 Sigma-Aldrich
Dimethyl sulfoxoxide D4540 Sigma-Aldrich
Ethyl Alcohol HPLC Grade Honeywell Burdick & Jackson®
본 발명의 실시예 1의 방법으로 제조된 복합 추출물의 발효물은, 3일동안 동결건조하여 시료로 사용하였다. 이때 기존 시료 무게는 0.86 g 이었으며, 동결 건조 후의 무게는 0.74 g 이었다. 동결건조된 시료는 DMSO 1 mL을 첨가하여 100 mg/mL의 농도로 추출한 뒤 serial dilution하여 1 mg/mL의 농도로 사용하였다.
3-2. DPPH, ABTS 및 SOD 라디칼 소거능 분석
황백나무 껍질, 삼백초, 굴피나무 열매 및 감잎 혼합물의 추출 발효물(복합 추출물의 발효물)에 대한 항산화 효능을 평가하기 위하여, DPPH (2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl), ABTS(2,2'-Azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid) diammounium salt) 및 SOD (Superoxide dismutase) assay를 실시하였다.
DPPH assay 평가를 위해, 96 웰 플레이트에 SMP 20 μL, 0.5mM DPPH 용액 80 μL를 순서대로 넣고 30 분간 상온방치 후 ELISA 517 nm에서 흡광도를 측정하여, 하기 수학식 1의 방법으로 DPPH 라디칼 소거능(DPPH radical scavenging activity)을 계산하였다.
[수학식 1]
Figure 112021089324597-pat00001
ABTS assay 평가를 위해, 각 SMP 웰에 10uL를 넣고 ABTS+ 용액 90 μL를 넣은뒤 암(dark)조건에서 37℃에서 30 분간 인큐베이션하여, ELISA 734 nm에서 흡광도를 측정한 다음, 하기 수학식 2의 방법으로 ABTS 라디칼 소거능(ABTS radical scavenging activity)을 계산하였다.
[수학식 2]
Figure 112021089324597-pat00002
SOD assay 평가를 위해, 각 SMP 웰에 20 μL를 넣고 WST 용액을 200 μL를 첨가하였다. Blank2와 blank3의 well dp dilution buffer 를 각각 20uL씩 넣어준 뒤 blank1과 SMP well에 enzyme working solution를 각각 20 μL씩 첨가하였다. 플레이트를 37℃에서 20 분간 인큐베이션한 뒤 450 nm 에서 흡광도를 측정하였다. Blank1의 흡광도값이 0.7≤blank1≤1.0이 나오는 반응시간을 확인하고자 kinetic mode 로 흡광도 값을 측정하였다. 하기 수학식 3의 방법으로 SOD 라디칼 소거능(SOD radical scavenging activity)을 계산하였다.
[수학식 3]
Figure 112021089324597-pat00003
양성대조군(PC)으로는 Vitamin C를 사용하였으며, 복합 추출물(LS1)의 발효물에 대한 항산화 활성 평가로서 DPPH, ABTS 및 SOD의 라디칼 소거능에 대한 분석 결과는 하기 표 3에 나타난 바와 같다.
Sample ID Radical scavenging activities 1) (%)
DPPH ABTS SOD
PC 92.55±0.12 99.71±0.65 -
LS1 64.44±2.93 59.99±5.18 90.53±0.56
※PC : positive control(Vitamin C μg/mL)
※LS1: Herb Complex Extract Ferment Filtrate(1 mg/mL)
1) Values were presented to mean±standard deviation as triplicate assays (RSD ≤0%).
상기 표 3에 나타난 바와 같이, 본 발명의 실시예 1의 방법으로 제조된 복합 추출물의 발효물은 우수한 항산화 활성을 가짐을 확인하였다.
이제까지 본 발명에 대하여 그 바람직한 실시예들을 중심으로 살펴보았다. 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자는 본 발명이 본 발명의 본질적인 특성에서 벗어나지 않는 범위에서 변형된 형태로 구현될 수 있음을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 개시된 실시예들은 한정적인 관점이 아니라 설명적인 관점에서 고려되어야 한다. 본 발명의 범위는 전술한 설명이 아니라 특허 청구범위에 나타나 있으며, 그와 동등한 범위 내에 있는 모든 차이점은 본 발명에 포함된 것으로 해석되어야 할 것이다.

Claims (10)

  1. 황백나무 껍질, 삼백초, 굴피나무 열매 및 감잎을 혼합하여 혼합물을 준비하는 단계(단계 1);
    단계 1의 혼합물을 증기로 가열하여 찐 다음 건조하는 공정을 3회 반복하여 삼증삼포 건조물을 얻는 단계(단계 2);
    단계 2의 삼증삼포 건조물을 열수 추출하여 추출물을 얻는 단계(단계 3); 및
    단계 3의 추출물을 발효하여 발효물을 얻는 단계(단계 4);를 포함하는, 항산화 및 항염증 효과를 가지는, 황백나무 껍질, 삼백초, 굴피나무 열매 및 감잎 추출물의 발효물의 제조방법.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 단계 1은 혼합물 전체 중량 대비, 황백나무 껍질 5-25 중량%, 삼백초 40-60 중량%, 굴피나무 열매 5-25 중량% 및 감잎 10-30 중량% 혼합하는 것인, 제조방법.
  3. 제1항에 있어서,
    상기 단계 2는 100 내지 150℃의 증기로 10 내지 120 분간 가열하여 찐 다음 건조하는 것인, 제조방법.
  4. 제1항에 있어서,
    상기 단계 2는 혼합물을 증기로 가열하여 찌기 전에 에탄올 및 물 혼합용매에 침전시키는 공정을 추가로 포함하는 것인, 제조방법.
  5. 삭제
  6. 제1항에 있어서,
    상기 단계 4는 사카로마이시스 세레비시에(Saccharomyces cerevisiae) 및 락토바실러스 플란타럼(Lactobacillus plantarum)로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 균주를 이용하여 발효하는 것인, 제조방법.
  7. 제6항에 있어서,
    상기 단계 4는 사카로마이시스 세레비시에를 이용하여 1차 발효하는 단계; 및 락토바실러스 플란타럼을 이용하여 2차 발효하는 단계;를 포함하는 것인, 제조방법.
  8. 제1항 내지 제4항 및 제6항 중 어느 한 항의 제조방법으로 제조된 황백나무 껍질, 삼백초, 굴피나무 열매 및 감잎 추출물의 발효물을 유효성분으로 포함하는, 항산화 또는 항염증용 화장료 조성물.
  9. 삭제
  10. 제1항 내지 제4항 및 제6항 중 어느 한 항의 제조방법으로 제조된 황백나무 껍질, 삼백초, 굴피나무 열매 및 감잎 추출물의 발효물을 유효성분으로 포함하는, 항염증용 약학 조성물.
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대한본초학회. Vol.30. No.1.pp.11-18
식품위생안전학회지. Vol.36 No.2 pp.196-203

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