KR100919852B1 - 해방풍 추출물을 유효성분으로 함유하는 부종 또는 피부염예방 및 치료용 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 해방풍(Glehnia littoralis Fr. Schmidt et Miquel) 추출물을 유효성분으로 함유하는 부종 또는 피부염 예방 및 치료용 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 물, 알코올 또는 이들의 혼합물을 용매로 하여 추출되는 해방풍 추출물은 생체 내에 존재하는 염증성 매개체인 사이토카인 조절인자들의 생산 또는 분비를 억제하고, 독성 등 부작용이 없으므로 부종 또는 염증 증상을 수반하는 다양한 피부염 예방 및 치료용 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.

Description

해방풍 추출물을 유효성분으로 함유하는 부종 또는 피부염 예방 및 치료용 조성물{A composition for the prevention and treatment of edema or dermatitis containing Glehnia littoralis Fr. Schmidt et Miquel extract as an active ingredient}

본 발명은 해방풍(Glehnia littoralis Fr. Schmidt et Miquel) 추출물을 유효성분으로 함유하는 부종 또는 피부염 예방 및 치료용 조성물에 관한 것이다.

염증은 조직의 손상이나 외부로부터의 자극 또는 다양한 감염원에 대한 생체조직의 방어 반응의 하나로, 국소 혈관과 체액 내의 각종 염증 매개 인자 및 다양한 면역 세포가 유기적인 상호작용을 통해 효소 활성화, 염증매개물질 분비, 체액 및 세포 침윤, 이동, 조직의 변질과 과증식 등 일련의 복합적인 병리 현상이다. 염증반응의 과정은, 초기에 대식세포가 상처부위로 모여들어 침입한 세균을 공격한 후, 상처부위에 혈장이 축적되고 혈류가 증가하고, 궁극적으로는 발열, 홍반, 부종, 통증 현상 등의 외적 증상이 일어나게 된다. 이러한 염증 반응이 지속적으로 또는 과도하게 일어나면 오히려 질환의 주요 병리현상(과민성 알러지 질환, 만성 염증 질환)으로 진행되며, 심각한 이상 장애를 초래하게 된다.

대부분의 염증 질환의 치료제로서 빈번하게 사용되고 있는 제제인 비스테로이드 소염 진통제(non-steroidal anti-inflammatory drugs, NSAIDS)는 시클로옥시게나제(cyclooxygenase, COX)라고 하는 아라키돈산(arachidonic acid)로부터 프로스타글란딘(prostaglandin)의 생합성에 관여하는 효소 활성을 억제함으로써, 항염증 작용을 나타내는데, 이러한 제제는 위장관 장애, 간장애, 신기능 장애 등의 각종 부작용을 야기하기 때문에 장기간의 사용에 있어서 제약이 따르는 실정이다. 따라서 부작용이 거의 없어 장기간 사용하는데 무리가 없으면서 항염증 효능에 탁월한 새로운 소염 진통제의 개발이 널리 요구되고 있으며, 이는 최근 천연 자원으로부터의 효능 검증을 통한 소재 개발 연구가 활성화되고 있는 이유이기도 하다.

해방풍(Glehnia littoralis Fr. Schmidt et Miquel)은 미나리과(Umbelliferae)에 속한 다년생 초본으로 우리나라의 해안가 모래땅에 자생하는 다년초이다. 주로 여름·가을철에 채취하여 지상경과 수근을 제거하고 뿌리 및 뿌리줄기를 약용부위로 사용하며, 과거로부터 해방풍은 기침과 가래를 없애는 데 탁월한 효력이 있는 약초로, 그 뿌리는 폐를 튼튼하게 하는 데 특효가 있어, 폐결핵, 폐염 기관지염, 가래, 기침 등 모든 호흡기 질병에 뛰어난 효력을 발휘한다고 알려져 왔으며, 기침, 기관지염, 폐결핵 등에 효과가 있는 것으로 보고된 바가 있다(중약대사전, 1986; 운곡본초학, 2004). 또한, 해방풍의 성분 중 트리테르페노이드(triterpenoid), 스티그마스테롤(stigmasterol), 베타-시토스테롤(β-sitosterol), 알칼로이드(alkaloid), 전분(starch)이 함유되었으며 이 성분들은 기관의 점막을 치료하고 분비물을 증가시켜 그에 의해 거담작용을 발생케 하고 탁월한 해열작용이 있다고 명시되어 있다(중화인민공화국 약전, 2005). 그러나, 해방풍 추출물이 피부 염증 질환에 효과가 있다는 것에 대해서는 아직까지 연구가 진행되거나 명시된 보고가 없다.

또한, 상기 해방풍은 최근 환경변화와 급격한 해안개발에 의해 집단 서식지의 감소로 멸종위기에 직면해 있어 환경부, 산림청, 문화재청 등에서 멸종위기 또는 보호식물로 지정한 식물이기에, 이러한 전통 문화유산인 멸종위기 한약자원의 효능 검증을 통한 지속적 이용기반 확립 및 응용소재 개발을 통해 희귀 전통 한약자원 유래 고부가가치 상품의 창출 및 고유자원의 우수성 확보, 나아가 국가경쟁력 향상 및 친환경적인 기능성 소재개발 기반 구축에 큰 기여를 할 수 있다.

이에, 본 발명자들은 해방풍 추출물이 염증성 매개체인 사이토카인(cytokine)의 생성을 억제하며, 포볼 미리스테이트 아세테이트(phorbol myristate acetate, TPA)로 유도한 동물 피부 염증 질환 모델에서 염증 억제 효능이 있음을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.

본 발명의 목적은 해방풍 추출물을 유효성분으로 함유하는 부종 또는 피부염 예방 및 치료제, 건강식품 및 화장품을 제공하는 것이다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 물, 알코올 또는 이들의 혼합물을 용매로 하여 추출된 해방풍 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부염 예방 및 치료제를 제공한다.

또한, 본 발명은 상기 해방풍 추출물을 유효성분으로 함유하는 부종 예방 및 치료제를 제공한다.

또한, 본 발명은 약학적으로 유효한 양의 상기 해방풍 추출물을 개체에 투여하는 단계를 포함하는 부종 또는 피부염 치료 방법을 제공한다.

또한, 본 발명은 약학적으로 유효한 양의 상기 해방풍 추출물을 개체에 투여하는 단계를 포함하는 부종 또는 피부염 예방 방법을 제공한다.

또한, 본 발명은 상기 해방풍 추출물을 유효성분으로 함유하는 부종 또는 피부염 예방 및 개선용 건강식품을 제공한다.

아울러, 본 발명은 상기 해방풍 추출물을 유효성분으로 함유하는 부종 또는 피부염 예방 및 개선용 화장품을 제공한다.

본 발명의 해방풍 추출물은 포볼 미리스테이트 아세테이트(phorbol myristate acetate, TPA)로 유도한 염증동물모델에서 증가된 인터루킨(Interleukin-1β, IL-1β) 및 종양 괴사 인자(tumor necrosis factor-α, TNF-α) 등의 혈청 내 사이토카인 수치를 대조군 수준으로 유의하게 낮추고, 이에 수반되는 표피 과증식 증상을 완화시키며, 혈관 투과성을 낮추는 등 염증반응을 억제시키므로, 부종, 또는 과민증, 알러지성 피부염, 접촉성 피부염, 아토피성 피부염, 피부 알러지 또는 두드러기와 같은 다양한 피부염 예방 및 치료용 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.

도 1은 해방풍 에탄올 수용액 추출물에 의해 염증 모델 마우스의 혈청 내 염증 유발 인자인 사이토카인 IL-1β의 생성이 억제되는 것을 나타내는 그래프이고,

도 2는 해방풍 에탄올 수용액 추출물에 의해 염증 모델 마우스의 혈청 내 염증 유발 인자인 사이토카인 TNF-α의 생성이 억제되는 것을 나타내는 그래프이고,

도 3은 해방풍 에탄올 수용액 추출물에 의해 염증 모델 마우스의 귀에 유발된 부종의 두께가 감소되는 것을 나타내는 그래프이고,

도 4는 해방풍 에탄올 수용액 추출물에 의해 염증 모델 마우스 귀에 유발된 부종의 무게가 감소되는 것을 나타내는 그래프이고,

도 5는 해방풍 에탄올 수용액 추출물에 의해 염증 모델 마우스 귀에 유발된 부종지수가 감소되는 것을 나타내는 그래프이고,

도 6은 해방풍 에탄올 수용액 추출물에 의해 염증 모델 마우스의 귀조직에 유발된 면역세포의 침윤과 표피 과다증식의 억제 효능을 나타내는 그림이고,

도 7은 해방풍 에탄올 수용액 추출물에 의해 만성 염증 모델 마우스의 귀에 유발된 부종의 두께가 감소되는 것을 나타내는 그래프이고,

도 8은 해방풍 에탄올 수용액 추출물에 의해 만성 염증 모델 마우스 귀에 유발된 부종지수가 감소되는 것을 나타내는 그래프이고,

도 9는 해방풍 에탄올 수용액 추출물에 의해 초염산 유도에 의한 혈관 투과성 항진이 억제되는 것을 나타내는 그래프이다.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.

본 발명의 해방풍 추출물은 하기의 단계들을 포함하는 제조방법에 의해 제조된다:

1) 건조한 해방풍(Glehnia littoralis Fr. Schmidt et Miquel)을 추출용매를 가하여 추출하는 단계;

2) 단계 1)의 추출물을 식힌 후 여과하는 단계; 및

3) 단계 2)의 여과한 추출물을 감압농축한 후 건조하는 단계,

상기 제조방법에 있어서, 단계 1)의 해방풍은 재배한 것 또는 시판되는 것 등 제한 없이 사용할 수 있다. 상기 해방풍은 뿌리 또는 뿌리줄기를 모두 이용할 수 있으나 뿌리를 사용하는 것이 바람직하다.

상기 추출용매는 물, 알코올 또는 이들의 혼합물을 사용하는 것이 바람직하다. 상기 알코올로는 C₁ 내지 C₄ 저급 알코올을 이용하는 것이 바람직하며, 저급 알코올로는 에탄올 또는 메탄올을 이용하는 것이 바람직하다. 상기 추출용매를 건조된 해방풍 분량에 5 내지 15배 첨가하여 추출하는 것이 바람직하며, 10배 첨가하여 추출하는 것이 더욱 바람직하다. 추출온도는 40 ~ 80 ℃인 것이 바람직하며, 50 ~ 60 ℃인 것이 더욱 바람직하나 이에 한정하지 않는다. 또한, 추출시간은 2 ~ 6 시간인 것이 바람직하며, 2 시간이 더욱 바람직하나 이에 한정하지 않는다. 아울러, 추출 회수는 1 내지 5회인 것이 바람직하며, 3회 반복 추출하는 것이 더욱 바람직하나 이에 한정되는 것은 아니다.

상기 제조방법에 있어서, 단계 3)의 감압농축은 회전진공농축기를 이용하는 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다. 또한, 건조는 열풍건조, 진공건조 또는 동결건조를 모두 이용할 수 있으며, 이 중 동결건조하는 것이 바람직하나 이에 한정되는 것은 아니다.

본 발명은 물, 알코올 또는 이들의 혼합물을 용매로 하여 추출된 해방풍 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부염 예방 및 치료제를 제공한다.

상기 피부염은 과민증, 알러지성 피부염, 접촉성 피부염, 아토피성 피부염, 피부 알러지 또는 두드러기인 것을 특징으로 한다.

본 발명에서는 해방풍 추출물이 혈청 내 사이토카인 발현 억제 효능이 있는지 알아보기 위해, 해방풍 추출물들을 복용한 마우스의 혈청 내에서 생체 면역 시스템에서 염증 유발 인자인 사이토카인 IL-1β 및 TNF-α 발현 정도를 ELISA 방법으로 측정하였다. 그 결과, 본 발명의 해방풍 추출물들을 처리하였을 때 IL-1β 및 TNF-α의 생성을 억제하는 효과를 나타냄으로써 상기 해방풍 추출물들이 염증성 사이토카인 억제에 영향을 준다는 것을 확인할 수 있었다(도 1 및 도 2 참조).

본 발명에서는 해방풍 추출물의 항염증 효능을 조직병리학적으로 분석하기 위해, 상기 피부 부종 및 염증을 유발한 마우스를 희생시킨 후, 귀조직을 적출하여 동결절편기를 사용하여 얇은 절편으로 자른 후 H&E 염색을 시행하하여 관찰하였다. 그 결과, 해방풍 추출물을 투여한 경우, TPA를 처리에 의해 유발된 면역세포의 침윤과 표피 과다 증식의 효과적인 억제 효능을 관찰할 수 있었으며, 이는 양성대조군인 인도메타신의 억제 효과와도 상당히 대등할 만한 정도였음을 확인하였다(도 6 참조).

본 발명에서는 해방풍 추출물이 혈관 투과성을 낮추는 효능이 있는지 알아보았다. 마우스에 해방풍 추출물을 경구투여하고, 에반스 블루(Evans blue) 생리식염수로 정맥주사 한 후, 아세트산(acetic acid)을 복강 내에 주사하고, 개복하여 복강 내를 생리식염수로 세척하여 씻어내고, 그 액을 유리섬유(glass wool)로 여과한 여과액 중의 색소량을 분광분석기를 사용하여 측정하였다. 그 결과, 해방풍 추출물은 혈관투과성 항진에 대하여 유의성 있는 억제 효과를 나타내었다(도 9 참조).

본 발명은 물, 알코올 또는 이들의 혼합물을 용매로 하여 추출된 해방풍 추출물을 유효성분으로 함유하는 부종 예방 및 치료제를 제공한다.

본 발명에서는 해방풍 추출물이 부종을 억제하는지 알아보기 위해, 테레프탈산(12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate, TPA)의 국소적 적용 및 반복적인 적용으로 급성 및 만성의 피부 부종 및 염증을 유발한 마우스를 각각 제조하여, 해방풍 추출물을 투여하였다. 그 결과, 본 발명의 해방풍 추출물을 처리하였을 때 대조군에 비해 부종의 두께, 무게 및 지수가 감소함을 나타냄으로써 상기 해방풍 추출물이 탁월한 항염증 활성을 가지고 있음을 확인할 수 있었다(도 3, 도 4, 도 5, 도 7 및 도 8 참조).

본 발명의 상기 해방풍 추출물을 의약품으로 사용하는 경우, 추가로 동일 또는 유사한 기능을 나타내는 유효성분을 1종 이상 함유할 수 있다.

상기 해방풍 추출물은 임상 투여 시에 경구 또는 비경구로 투여가 가능하며 일반적인 의약품 제제의 형태로 사용될 수 있다.

즉, 본 발명의 해방풍 추출물은 실제 임상 투여 시에 경구 및 비경구의 여러 가지 제형으로 투여될 수 있는데, 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 본 발명의 해방풍 추출물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(Calcium carbonate), 수크로스(Sucrose) 또는 락토오스(Lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁용제로는 프로필렌글리콜(Propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.

본 발명의 해방풍 추출물의 투여량은 환자의 체중, 연령, 성별, 건강상태, 식이, 투여시간, 투여방법, 배설율 및 질환의 중증도에 따라 그 범위가 다양하며, 일일 투여량은 해방풍 추출물의 양을 기준으로 0.1 내지 100 ㎎/㎏이고, 바람직하게는 30 내지 80 ㎎/㎏이고, 더욱 바람직하게는 50 내지 60 mg/kg이며, 하루 1 ~ 6 회 투여될 수 있다.

본 발명의 해방풍 추출물은 단독으로, 또는 수술, 방사선 치료, 호르몬 치료, 화학 치료 및 생물학적 반응 조절제를 사용하는 방법들과 병용하여 사용할 수 있다.

본 발명의 해방풍 추출물은 마우스에 경구 투여하여 급성 및 반복 독성 실험을 수행한 결과, 경구 투여 독성시험에 의한 50 % 치사량(LD₅₀)은 적어도 2 g/kg 이상인 안전한 물질로 판단된다.

또한, 본 발명은 약학적으로 유효한 양의 상기 해방풍 추출물을 개체에 투여하는 단계를 포함하는 부종 또는 피부염 치료 방법을 제공한다.

또한, 본 발명은 약학적으로 유효한 양의 상기 해방풍 추출물을 개체에 투여하는 단계를 포함하는 부종 또는 피부염 예방 방법을 제공한다.

또한, 본 발명은 상기 해방풍 추출물을 유효성분으로 함유하는 부종 또는 피부염 예방 및 개선용 건강식품을 제공한다.

본 발명의 상기 해방풍 추출물을 식품첨가물로 사용하는 경우, 상기 해방풍 추출물을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효 성분의 혼합양은 그의 사용 목적(예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 식품 또는 음료의 제조시에 본 발명의 조성물은 원료에 대하여 15 중량부 이하, 바람직하게는 10 중량부 이하의 양으로 첨가된다. 그러나, 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다.

상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 물질을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소세지, 빵, 쵸코렛, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알콜 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강식품을 모두 포함한다.

본 발명의 건강음료 조성물은 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드, 말토스, 슈크로스와 같은 디사카라이드, 및 덱스트린, 사이클로덱스트린과 같은 폴리사카라이드, 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 감미제로서는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제나, 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 ㎖당 일반적으로 약 0.01 ~ 0.04 g, 바람직하게는 약 0.02 ~ 0.03 g 이다.

상기 외에 본 발명의 해방풍 추출물은 여러가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그밖에 본 발명의 해방풍 추출물은 천연 과일쥬스, 과일쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 혼합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 크게 중요하진 않지만 본 발명의 조성물 100 중량부당 0.01 ~ 0.1 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.

아울러, 본 발명은 상기 해방풍 추출물을 유효성분으로 함유하는 부종 또는 피부염 예방 및 개선용 화장품을 제공한다.

본 발명의 해방풍 추출물을 화장품으로 사용하는 경우, 상기 해방풍 추출물을 유효성분으로 함유하여 제조되는 화장품은 일반적인 유화 제형 및 가용화 제형의 형태로 제조할 수 있다. 유화 제형의 화장품으로는 영양화장수, 크림, 에센스 등이 있으며, 가용화 제형의 화장품으로는 유연화장수가 있다.

적합한 화장품의 제형으로는 예를 들면 용액, 겔, 고체 또는 반죽 무수 생성물, 수상에 유상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 현탁액, 마이크로에멀젼, 마이크로캡슐, 미세과립구 또는 이온형(리포좀), 비이온형의 소낭 분산제의 형태, 크림, 스킨, 로션, 파우더, 연고, 스프레이 또는 콘실 스틱의 형태로 제공될 수 있다. 또한, 포말(foam)의 형태 또는 압축된 추진제를 더 함유한 에어로졸 조성물의 형태로도 제조될 수 있다.

또한, 상기 화장품은 본 발명의 해방풍 추출물에 추가로 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉쇄제 및 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 화장품에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 화장품학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다.

이하, 본 발명을 실시예, 실험예 및 제제예에 의하여 상세히 설명한다.

단, 하기 실시예, 실험예 및 제제예는 본 발명을 구체적으로 예시하는 것이며, 본 발명의 내용이 실시예, 실험예 및 제제예에 의해 한정되는 것은 아니다.

< 실시예 > 해방풍 추출물 제조

<1-1> 해방풍 에탄올 수용액 추출물

본 실험에 사용한 해방풍(Glehnia littoralis Fr. Schmidt et Miquel)은 강원도 고성군 토성면 금화정리에서 채집하여 건조하였다. 이후 분쇄한 상태의 해방풍 뿌리 100 g을 1 리터의 70% 에탄올 수용액을 가하여 잘 교반한 다음, 열을 가해 50 내지 60 ℃를 유지하는 추출온도에서 2시간 동안 환류 추출한 후 여액을 분리하였고, 50 ~ 55 ℃에서 생약추출물을 감압농축한 후, 동결건조시켜 생약조성물 분말 엑스 11g ~ 12g을 얻었다.

<1-2> 해방풍 물 추출물

추출용매로 70% 에탄올 수용액 대신 물을 사용한 것을 제외하고, 상기 실시예 <1-1>의 추출방법과 동일하게 추출하여 추출물 7g ~ 8g을 제조할 수 있었다.

<1-3> 해방풍 에탄올 추출물

추출용매로 70% 에탄올 수용액 대신 100% 에탄올을 사용한 것을 제외하고, 상기 실시예 <1-1>의 추출방법과 동일하게 추출하여 추출물 12 g을 제조할 수 있었다.

<1-4> 해방풍 메탄올 추출물

추출용매로 70% 에탄올 수용액 대신 100% 메탄올을 사용한 것을 제외하고, 상기 실시예 <1-1>의 추출방법과 동일하게 추출하여 추출물 11 g을 제조할 수 있었다.

< 실험예 1> TPA 유도에 의한 급성 피부 염증 모델에서 해방풍 추출물에 의한 항염증 효능 실험

<1-1> 마우스 동물 준비

염증 동물 모델로 가장 많이 사용되고 있는 동물 실험 모델인, 5주령의 C57BL/6J 마우스 수컷(㈜대한바이오링크)을 1주일간 환경에 적응하도록 하였으며, 총 40마리의 마우스를 총 4군으로 나누어 각 군당 10마리씩 무작위 분배하여 실험에 사용하였다. 피부 염증은 6주령된 마우스의 오른쪽 귀에 TPA(12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate)(2.5ug/20ul acetone)의 국소적 적용으로 피부 부종 및 염증 모델을 유발하였다. 왼쪽 귀는 음성 대조군으로 사용되었으며 부형제(20ul 아세톤)를 투여하였다. 해방풍 추출물들(400 mg/kg) 투여군에는 TPA 적용 1시간 전에 복강 투여하였다. 양성대조군 그룹에는 TPA 적용 1시간 전에 인도메타신(10 mg/kg)을 투여하였으며, 음성대조군 그룹에는 생리식염수가 같은 방법으로 투여하였다.

<1-2> 혈청 내 사이토카인 발현 분석

상기 <실시예 1>의 해방풍 에탄올 수용액 추출물, 물 추출물, 에탄올 추출물 및 메탄올 추출물을 각각 복용한 마우스들의 혈청 내에서 생체 면역 시스템에서 염증 유발 인자인 사이토카인 IL-1β 및 TNF-α 발현 패턴을 분석하기 위해서 각 군의 마우스들로부터 혈청을 채취하여 ELISA 방법(R&D사)으로 측정하였다. 모든 시료는 정량 전까지 -20℃ 이하에 보관하였다.

구분	IL-1β 생성억제	TNF-α 생성억제
해방풍 에탄올수용액 추출물	41.95%	46.70%
해방풍 물 추출물	38.50%	42.25%
해방풍 에탄올 추출물	40.25%	44.55%
해방풍 메탄올 추출물	41.25%	42.90%

상기 실험 수행의 결과, 모든 해방풍 추출물이 사이토카인 IL-1β 및 TNF-α 의 생성을 억제하는 것을 확인하였다. 특히, 해방풍 에탄올 수용액 추출물을 투여하는 경우 IL-1β 생성 억제는 41.95%, TNF-α의 생성 억제는 46.7%의 생성 억제 효과를 나타내어 가장 염증성 사이토카인 억제에 영향을 준다는 것을 확인할 수 있었다(도 1 및 도 2 참조). 이에, 하기 실험에는 해방풍 에탄올 수용액만을 이용하였다.

<1-3> 부종 지표 분석

염증은 6시간 동안 방치하였고, 그 이후 실험 동물은 희생하였다. 각 귀로부터 6mm 직경의 평원반 단편을 얻어 무게와 부종 두께를 측정하였다. TPA를 처리한 실험군 마우스의 부종 두께는 약 0.34 mm이었으나, 해방풍 추출물(Glehnia littoralis extract, GLE)로 처리되었을 때 부종두께는 약 0.25 mm으로 49.7%가 감소했다. TPA를 처리한 실험군 마우스의 부종 무게 또한, 16mg에서 14mg으로 감소되었다. 부종지수로 확인해 본 결과에서도, 해방풍 추출물을 처리하였을 때 약 44.5%로 부종지수가 감소하였다. 이러한 결과로, 해방풍 추출물이 본 실험모델에서 탁월한 항염증 활성을 가지고 있음을 확인할 수 있었다(도 3, 도 4 및 도 5 참조).

<1-4> 조직병리학적 분석

염증은 6시간 동안 방치하였고, 그 이후 실험 동물을 희생시킨 후, 귀조직을 적출하여 동결절편기를 사용하여 얇은 절편으로 자른 후 H&E 염색을 시행하였다. 그 결과, 대조군(A)에 비해서 TPA 처리한 실험군(B)의 피부 조직에서 표피 조직의 과증식과 비후에 의한 병적 발육 현상을 관찰할 수 있었고, 다형백혈구의 이동 또는 침윤 현상 등의 부종 및 염증 반응이 과도하게 유발되었음을 확인할 수 있었다. 반면, 해방풍 추출물(C)의 투여한 그룹에서는 TPA를 처리한 실험군(B)에 의해 유발된 면역세포의 침윤과 표피 과다 증식의 효과적인 억제 효능을 관찰할 수 있었으며, 이는 양성대조군인 인도메타신(D)의 억제 효과와도 상당히 대등할 만한 정도였다(도 6 참조).

< 실험예 2> 지속적인 TPA 유도에 의한 만성 피부 염증 모델에서 해방풍 추출물에 의한 항염증 효능 실험

<2-1> 동물 준비

염증 동물 모델로 가장 많이 사용되고 있는 동물 실험 모델인, 5주령의 C57BL/6J 마우스 수컷(㈜대한바이오링크)을 1주일간 환경에 적응하도록 하였으며, 총 40마리의 마우스를 총 4군으로 나누어 각 군당 10마리씩 무작위 분배하여 실험에 사용하였다. 피부 염증은 6주령된 마우스의 오른쪽 귀에 TPA(12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate)(2.5ug/20ul acetone)의 국소적 적용으로 피부 부종 및 염증 모델을 유발하였으며, 격일마다 1회씩 처리하였고, 총 5회 시행하여 만성 모델을 유발하였다. 왼쪽 귀는 음성 대조군으로 사용되었으며 부형제 (20ul 아세톤)를 투여하였다. 해방풍 추출물(400 mg/kg) 투여 그룹은 매일 일정한 시간에 복강 투여하였고 총 10일간 투여하였으며, 양성대조군 그룹에는 인도메타신(10 mg/kg)이, 음성대조군 그룹에는 생리식염수가 같은 방법으로 투여되었다.

<2-2> 부종 지표 분석

염증은 실험예 <2-1>에서 상기한 바와 같이 총 10일간 동안 만성 염증 모델이 시행되었고, 그 이후 실험 동물은 희생되었다. 각 귀로부터 6mm 직경의 평원반 단편을 얻어 부종 두께 및 부종지수를 측정하였다. TPA를 처리한 실험군 마우스의 부종 두께는 약 0.48 mm이었으나, 해방풍 추출물로 처리되었을 때 부종두께는 약 0.39 mm으로 33.46%가 감소했다. 부종지수로 확인해 본 결과에서도, 해방풍 추출물을 처리하였을 때 약 33%로 부종지수가 감소하였다. 상기 결과, 해방풍 추출물이 만성 염증 모델에서도 탁월한 항염증 효능을 가지고 있음을 확인할 수 있었다(도 7 및 도 8 참조).

< 실험예 3> 초산 유도에 의한 혈관 투과성 항진 억제 실험

체중 19 ~ 21g의 ICR 계 웅성 마우스 10마리를 1군으로 하여 총 30마리를 무작위적 배분하여 실험하였다. 해방풍 추출물(400mg/kg)을 경구투여하고, 20분 후에 2.5% 에반스 블루(Evans blue) 생리식염수 0.1ml/10g을 꼬리정맥으로 주사하였다. 정맥주사 20분 후에 0.6% 아세트산(acetic acid) 0.1ml/10g을 복강 내에 주사하고, 20분 후에 개복하여 복강 내를 5ml 의 생리식염수로 세척하여 씻어내고, 그 액을 유리섬유(glass wool)로 여과하였다. 여과액 중의 색소량을 분광분석기를 사용하여 590nm의 흡광도에서 측정하였다. 그 결과, 해방풍 추출물은 혈관투과성 항진에 대하여 유의성 있는 억제 효과(약 23%)를 나타내었다(도 9 참조).

< 실험예 4> 해방풍 추출물의 독성 시험

실험 동물인 마우스를 사용하여 해방풍 추출물의 급성 독성 시험 및 반복 독성 시험을 실시하였다. 일반적으로 급성 독성 시험에서는 체중 kg당 1g이상 투여시 사망이나 이상증상이 없으면 안전성이 있는 물질로 분류되는데, 실험 결과 해방풍 추출물은 안전함을 확인할 수 있었다.

반복 독성 시험을 위해서 수컷 C57BL6/J 마우스를 열 마리씩 세 군으로 나누어서 매일 500 mg/kg, 1000 mg/kg, 2000 mg/kg 체중의 용량으로 해방풍 추출물을 4주간 투여하였고, 대조군은 물을 투여하였다. 독성의 징후는 체중의 변화, 혈청 생화학적 분석, 조직학적 검사를 통해서 4주 동안 확인하였다. 반복 독성 시험 결과, 해방풍 추출물은 최대 투여 용량인 2000 mg/kg의 농도에서도 사망 예를 전혀 관찰할 수 없었으며, 사료량, 체중 감소 혹은 증가, 운동성 감소, 운동 실조, 호흡곤란, 털빠짐과 같은 이상 증상이 일어나지 않았다. 또한, 조직검사, 혈액검사 등에서도 전혀 유의한 이상을 발견할 수 없었기에 실험적으로 안전한 약물임을 증명할 수 있었다. 체중 및 육안 관찰 결과 어떠한 비정상적인 체중의 변화도 관찰되지 않았고, 혈청을 이용한 생화학 검사 결과 AST, ALT, 글루코즈(Glucose) 및 콜레스테롤(Cholesterol) 등의 수치에 있어서 어떤 이상 징후도 보이지 않았으며, 조직 검사 결과 간, 신장, 비장 및 흉선의 조직에서 어떤 이상도 발견되지 않았다.

하기에 본 발명의 조성물을 위한 제제예를 예시한다.

< 제제예 1> 약학적 제제의 제조

본 발명의 해방풍 추출물을 포함하는 약학적 제제는 다음과 같이 제조하였다.

1. 산제의 제조

실시예 <1-1>의 추출물 2g

유당 1g

상기의 성분을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조하였다.

2. 정제의 제조

실시예 <1-1>의 추출물 100㎎

옥수수전분 100㎎

유 당 100㎎

스테아린산 마그네슘 2㎎

상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조하였다.

3. 캡슐제의 제조

실시예 <1-1>의 추출물 100㎎

옥수수전분 100㎎

유 당 100㎎

스테아린산 마그네슘 2㎎

상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 캡슐제의 제조방법에 따라서 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.

4. 환의 제조

실시예 <1-1>의 추출물 1 g

유당 1.5 g

글리세린 1 g

자일리톨 0.5 g

상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 방법에 따라 1 환 당 4 g이 되도록 제조하였다.

5. 과립의 제조

실시예 <1-1>의 추출물 150 ㎎

대두 추출물 50 ㎎

포도당 200 ㎎

전분 600 ㎎

상기의 성분을 혼합한 후, 30% 에탄올 100 ㎎을 첨가하여 섭씨 60℃에서 건조하여 과립을 형성한 후 포에 충진하였다.

< 제제예 2> 식품의 제조

본 발명의 해방풍 추출물을 포함하는 식품들을 다음과 같이 제조하였다.

1. 밀가루 식품의 제조

본 발명의 실시예 <1-1>의 추출물 0.5 ~ 5.0 중량를 밀가루에 첨가하고, 이 혼합물을 이용하여 빵, 케이크, 쿠키, 크래커 및 면류를 제조하여 건강 증진용 식품을 제조하였다.

2. 유제품(dairy products)의 제조

본 발명의 실시예 <1-1>의 추출물 5 ~ 10 중량%를 우유에 첨가하고, 상기 우유를 이용하여 버터 및 아이스크림과 같은 다양한 유제품을 제조하였다.

3. 선식의 제조

현미, 보리, 찹쌀, 율무를 공지의 방법으로 알파화시켜 건조시킨 것을 배전한 후 분쇄기로 입도 60메쉬의 분말로 제조하였다. 검정콩, 검정깨, 들깨도 공지의 방법으로 쪄서 건조시킨 것을 배전한 후 분쇄기로 입도 60메쉬의 분말로 제조하였다. 본 발명의 실시예 <1-1>의 추출물을 진공 농축기에서 감압농축하고, 분무, 열풍건조기로 건조하여 얻은 건조물을 분쇄기로 입도 60메쉬로 분쇄하여 건조분말을 얻었다.

상기에서 제조한 곡물류, 종실류 및 실시예 <1-1>의 추출물의 건조분말을 다음의 비율로 배합하여 제조하였다.

곡물류(현미 30중량%, 율무 15중량%, 보리 20중량%),

종실류(들깨 7중량%, 검정콩 8중량%, 검정깨 7중량%),

실시예 <1-1>의 추출물의 건조분말(3 중량%),

영지(0.5중량%),

지황(0.5중량%)

< 제제예 3> 음료의 제조

1. 건강음료의 제조

실시예 <1-1>의 추출물 1000 ㎎

구연산 1000 ㎎

올리고당 100 g

매실농축액 2 g

타우린 1 g

정제수를 가하여 전체 900 ㎖

통상의 건강음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1 시간 동안 85℃에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 2 ℓ용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관한 다음 본 발명의 건강음료 조성물 제조에 사용한다.

상기 조성비는 비교적 기호 음료에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 수요계층, 수요국가, 사용 용도 등 지역적, 민족적 기호도에 따라서 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.

2. 야채쥬스의 제조

본 발명의 실시예 <1-1>의 추출물 5g을 토마토 또는 당근 쥬스 1,000㎖에 가하여 건강 증진용 야채쥬스를 제조하였다.

3. 과일쥬스의 제조

본 발명의 실시예 <1-1>의 추출물 1g을 사과 또는 포도 쥬스 1,000㎖에 가하여 건강 증진용 과일쥬스를 제조하였다.

< 제제예 4>: 화장품의 제조

본 발명의 해방풍 추출물을 유효성분으로 함유하는 부종 또는 피부염 예방 및 개선용 화장품을 제조할 수 있다. 본 발명자들은 상기 화장품으로 영양화장수, 크림, 에센스 등의 유화 제형의 화장품 및 유연화장수 등의 가용화 제형의 화장품을 제조하였다.

<1-1> 유화 제형의 화장품 제조

표 1에 기재된 조성으로 유화제형의 화장품을 제조하였다. 제조 방법은 하기와 같다.

1) 1 내지 9의 원료를 혼합한 혼합물을 65∼70℃로 가열하였다.

2) 10의 원료를 상기 단계 1)의 혼합물에 투입하였다.

3) 11 내지 13의 원료의 혼합물을 65∼70℃로 가열하여 완전히 용해시켰다.

4) 상기 단계 3)을 거치면서, 상기 2)의 혼합물을 서서히 첨가하여 8,000 rpm에서 2∼3분간 유화시켰다.

5) 14의 원료를 소량의 물에 용해시킨 후 상기 단계 4)의 혼합물에 첨가하고 2분간 더 유화시켰다.

6) 15 내지 17의 원료를 각각 평량한 후 상기 단계 5)의 혼합물에 넣고 30초간 더 유화시켰다.

7) 상기 단계 6)의 혼합물을 유화 후 탈기과정을 거쳐 25∼35℃로 냉각시킴으로써 유화제형의 화장품을 제조하였다.

유화 제형 1, 2, 3의 조성

조성		유화제형 1	유화제형 2	유화제형 3
1	스테아린 산	0.3	0.3	0.3
2	스테알리 알콜	0.2	0.2	0.2
3	글리세릴 모노스테아레이트	1.2	1.2	1.2
4	밀납	0.4	0.4	0.4
5	폴리옥시에틸렌솔비탄 모노라우린산 에스테르	2.2	2.2	2.2
6	파라옥시안식향산 메틸	0.1	0.1	0.1
7	파라옥시안식향산 프로필	0.05	0.05	0.05
8	세틸에틸헥사노에이트	5	5	5
9	트리글리세라이드	2	2	2
10	사이클로메티콘	3	3	3
11	증류수	~ 100	~ 100	~ 100
12	농글리세린	5	5	5
13	트리에탄올아민	0.15	0.15	0.15
14	폴리아크릴산 중합체	0.12	0.12	0.12
15	색소	0.0001	0.0001	0.0001
16	향	0.10	0.10	0.10
17	실시예 <1-1>의 추출물	0.0001	1	10

<1-2> 가용화 제형의 화장품 제조

표 2에 기재된 조성으로 가용화 제형의 화장품을 제조하였다. 제조 방법은 하기와 같다.

1) 2 내지 6의 원료를 1의 원료(정제수)에 넣고 아직믹서를 이용하여 용해시켰다.

2) 8 내지 11의 원료를 7의 원료(알코올)에 넣고 완전용해시켰다.

3) 상기 단계 2)의 혼합물을 상기 단계 1)의 혼합물에 서서히 첨가하면서 가용화시켰다.

가용화 제형 1, 2, 3의 조성

조성		가용화 제형 1	가용화 제형 2	가용화 제형 3
1	정제수	~ 100	~ 100	~ 100
2	농글리세린	3	3	3
3	1,3-부틸렌글리콜	2	2	2
4	EDTA-2Na	0.01	0.01	0.01
5	색소	0.0001	0.0002	0.0002
6	실시예 <1-1>의 추출물	0.1	5	5
7	알코올(95%)	8	8	8
8	파라옥시안식향산 메틸	0.1	0.1	0.1
9	폴리옥시에틸렌하이드로제네이디트에스테르	0.3	0.3	0.3
10	향	0.15	0.15	0.15
11	사이클로메티콘	-	-	0.2

Claims (13)

1. 삭제
2. 삭제
3. 삭제
4. 삭제
5. 삭제
6. 삭제
7. 삭제
8. 물, 알코올 또는 이들의 혼합물을 용매로 하여 추출된 해방풍 추출물을 유효성분으로 함유하는 부종 예방 및 치료제.
9. 약학적으로 유효한 양의 해방풍 추출물을 인간을 제외한 포유류에 투여하는 단계를 포함하는 부종 치료 방법.
10. 약학적으로 유효한 양의 해방풍 추출물을 인간을 제외한 포유류에 투여하는 단계를 포함하는 부종 예방 방법.
11. 물, 에탄올 또는 이들의 혼합물을 용매로 하여 추출된 해방풍 추출물을 유효성분으로 함유하는 부종 예방 및 개선용 건강식품.
12. 삭제
13. 물, 에탄올 또는 이들의 혼합물을 용매로 하여 추출된 해방풍 추출물을 유효성분으로 함유하는 부종 예방 및 개선용 화장품.