KR102621205B1 - 옻 추출물, 장수버섯 추출물 및 고정차 추출물을 포함하는 항산화 및 항염증 효과를 가지는 조성물 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 옻 추출물, 장수버섯 추출물 및 고정차 추출물을 포함하는 조성물에 관한 것으로서, 본 발명에 따른 옻 추출물, 장수버섯 추출물 및 고정차 추출물을 포함하는 조성물은 세포독성이 없어 인체에 안전한 것으로 확인되었으며, 총 폴리페놀 및 플라보노이드, DPPH radical 소거능, ABTS radical 소거능, Nitric oxide 검사에서 뛰어난 효과를 가지는 바, 우수한 항산화 및 항염증의 효능이 우수하다. 이러한 결과는 산화적 스트레스를 억제하는 항산화 역할을 통해 항암, 항염증, 항노화 등의 효과가 뛰어날 것이라 기대된다. 또한, 항산화 성분 중 플라보노이드의 quercetin의 높은 함량이 염증의 대표적인 물질인 이산화탄소(nitric oxide, NO)의 감소에 영향을 주었을 것이라 사료된다. 이와 같은 결과는 본 발명의 조성물이 뛰어난 항산화제로서의 역할뿐만 아니라, 아토피, 천식 등의 염증성 질환 개선에도 도움을 줄 수 있을 것이라 기대된다.

Description

옻 추출물, 장수버섯 추출물 및 고정차 추출물을 포함하는 항산화 및 항염증 효과를 가지는 조성물 {An anti-oxidant and anti-inflammatory composition comprising extracts of lacquer tree, fluafomitella fraxinea and kudingcha}
본 발명은 옻 추출물, 장수버섯 추출물 및 고정차 추출물을 포함하는 조성물에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 옻 추출물, 장수버섯 추출물 및 고정차 추출물을 유효성분을 포함하는 항산화 및 항염증 효과를 가지는 건강기능성 조성물에 관한 것이다.
최근 생활과 소득 수준이 향상되면서 삶의 질을 향상시키기 위해 많은 관심이 높아지고 있다. 특히 노화와 각종 염증질환, 암의 대처 방안으로 항산화 물질을 비롯한 체내 질병과 대사를 위한 생리활성물질 개발에 대해 관심이 증대되었다 (KB Kim, et al., Journal of Nutrition and Health. 50(5);415-425(2017)). 생체 내에서 필요한 에너지 공급을 위해 생화학적 산화 반응은 끊임없이 일어나며 이 과정 중에 발생하는 유해산소라 불리어지는 활성산소 (reactive oxygen species, ROS)는 가장 안정한 형태의 산소인 삼중항산소가 산화, 환원과정에서 생성되는 일중항산소인 수퍼옥사이드 음이온(Superoxide anion), 하이드록실 라디칼(hydroxyl radical), 과산화수소(hydrogen peroxide)와 같은 불안정한 상태의 유리 라디칼(free radical) 및 과산화수소 (H2O2)로 불안정하고 산화력이 높아 생체물질과 쉽게 반응하기 때문에 인체 내에서 제거되지 못하면 산화적 스트레스 (oxidative stress)를 유발하게 된다. 이러한 산화적 스트레스는 염증반응과 연결되어 있으므로 여러 대사과정에서 지질과산화를 유도하고, 단백질, 세포막 및 DNA 등을 손상시켜 세포의 노화와 변형을 유도함으로써 뇌졸중, 암, 동맥경화, 알츠하이머병, 파킨슨병, 동맥경화증 등 다양한 질병을 유발한다 (Valko M, et al., Int J Biochem Cell Biol. 39:44-84(2007); 및 Halliwell B, et al., NY, USA. 968(1999)). 이렇게 생성된 활성탄소를 제거시켜 생체를 보호하는 생리학적 항산화 효소로는 수퍼옥사이드 디스무타제(superoxide dismutase, SOD), 카탈라제(catalase), 글루타치온-퍼옥시다제(glutathione-peroxidase, GSHpx) 및 글루타치온 S-트랜스퍼라제(glutathione S-transferase, GST) 등이 있으며, 저분자의 항산화제 혹은 유리 라디칼 소거역할을 하는 것으로 α-토코페롤, β-카로틴, 아스코브산 및 글루타치온 등이 알려져 있다 (Kim SM, et al., Life Sci. 90(21-22);874-882(2012)).
한편, 염증반응은 외부 물리적, 화학적 자극이나 세균감염에 대한 생체방어 반응으로 염증매개물질이라 불리는 산화질소(nitric oxide, NO), 종양괴사인자(tumor necrosis factor, TNF)-α, 인터루킨(IL)-1β, 과립구 마크로파지 콜로니 자극인사(Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor, GM-CSF), IL-6와 같은 다양한 염증성 사이토카인 (cytokine) 등을 생산 및 분비한다 (YC Yoo, et al., Journal of Life Science. 26(3);338-345(2016)). 또한, 염증 전사 인자인 핵 인자 카파(nuclear factor kappa) B (NF-κB)를 활성화시켜 유도성 산화질소 합성효소(inducible nitric oxide synthase, iNOS)와 사이클로옥시제나제(cyclooxygenase)-2 (COX-2)를 발현시키고, 프로스타글란딘 (Prostaglandin) E2(PGE2)를 생성하고 분비된 염증성 사이토카인 (cytokine) 은 다시 NF-κB를 활성화시켜 사이토카인 캐스케이드(cytokine cascade)를 증폭하여 염증상태를 확장시킨다. 특히 NO는 항박테리아, 항종양 등의 효과를 나타낼 수 있지만, 병리적 원인에 의해 과량 생성되어 분비되면 과도한 혈관 확장에 의하여 패혈성 쇼크 및 신경조직의 손상 등의 위험을 초래할 수 있다 (S Han, et al., Immunopharmacol. Immunotoxicol. 35;34-42(2013)). 이러한 염증성 사이토카인 (cytokine)과 염증 매개인자들은 염증과정에서 중요한 역할을 하고, 이들의 비정상적인 생성을 적절하게 조절하는 것이 염증성 질환의 치료법으로 제기되고 있다.
이에 본 발명자들은 항산화 및 항염증 효과를 가지면서 인체 부작용이 적은 새로운 천연물질을 개발하기 위해 계속 연구를 진행한 결과, 옻 추출물, 장수버섯 추출물 및 고정차 추출물의 혼합물이 세포 독성이 없으면서도 항산화 및 항염증에 탁월한 효과를 나타낸다는 사실을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.
본 발명에서 해결하고자 하는 기술적 과제는 천연물질을 포함하는 항산화 및 항염증 효과를 가지는 건강기능성 조성물을 제공하기 위한 것이다.
상기한 기술적 과제를 해결하기 위하여, 본 발명에서는 옻 추출물, 장수버섯 추출물 및 고정차 추출물을 유효성분으로 포함하는 것을 특징으로 하는 항산화 및 항염증 효과를 가지는 기능성 조성물을 제공한다.
바람직하게, 옻나무 추출물 90 내지 95 중량부, 장수버섯 추출물 1 내지 5 중량부 및 고정차 추출물 1 내지 5 중량부를 포함하는 것을 특징으로 한다.
바람직하게, 상기 옻나무 추출물은 옻나무를 열수추출한 다음 분말화하여 수득된 옻나무 열수추출물 분말인 것을 특징으로 한다.
바람직하게, 상기 장수버섯 추출물은 장수버섯 자실체 추출물인 것을 특징으로 한다.
상기 장수버섯 자실체 추출물은 장수버섯 자실체를 열수추출한 다음 분말화하여 수득된 장수버섯 자실체 열수추출물 분말인 것을 특징으로 한다.
바람직하게, 상기 고정차 추출물은 옻나무를 열수추출한 다음 분말화하여 수득된 고정차 열수추출물 분말인 것을 특징으로 한다.
이와 같이, 본 발명에 따른 옻 추출물, 장수버섯 추출물 및 고정차 추출물을 포함하는 조성물은 세포독성이 없어 인체에 안전한 것으로 확인되었으며, 총 폴리페놀 및 플라보노이드, DPPH radical 소거능, ABTS radical 소거능, Nitric oxide 검사에서 뛰어난 효과를 가지는 바, 우수한 항산화 및 항염증의 효능이 우수하다. 이러한 결과는 산화적 스트레스를 억제하는 항산화 역할을 통해 항암, 항염증, 항노화 등의 효과가 뛰어날 것이라 기대된다. 또한, 항산화 성분 중 플라보노이드의 quercetin의 높은 함량이 염증의 대표적인 물질인 이산화탄소(nitric oxide, NO)의 감소에 영향을 주었을 것이라 사료된다. 이와 같은 결과는 본 발명의 조성물이 뛰어난 항산화제로서의 역할뿐만 아니라, 아토피, 천식 등의 염증성 질환 개선에도 도움을 줄 수 있을 것이라 기대된다.
본 명세서에 첨부되는 다음의 도면들은 본 발명의 바람직한 실시예를 예시하는 것이며, 전술한 발명의 내용과 함께 본 발명의 기술사상을 더욱 이해시키는 역할을 하는 것이므로, 본 발명은 그러한 도면에 기재된 사항에만 한정되어 해석되어서는 아니 된다.
도 1은 본 발명의 옻 추출물, 장수버섯 추출물 및 고정차 추출물을 포함하는 조성물의 RAW 264.7 세포의 세포 활성을 나타낸 것이다.
도 2는 본 발명의 옻 추출물, 장수버섯 추출물 및 고정차 추출물을 포함하는 조성물의 다양한 농도에서의 DPPH 라디칼 소거능을 나타낸 것이다.
도 3은 본 발명의 옻 추출물, 장수버섯 추출물 및 고정차 추출물을 포함하는 조성물의 다양한 농도에서의 ABTS 라디칼 소거능을 나타낸 것이다.
도 4는 본 발명의 옻 추출물, 장수버섯 추출물 및 고정차 추출물을 포함하는 조성물의 다양한 농도에서의 NO 생성 억제 효과를 나타낸 것이다.
이하에서는 본 발명을 좀더 상세하게 설명한다.
본 발명에서는 옻 추출물, 장수버섯 추출물 및 고정차 추출물을 유효성분으로 포함하는 것을 특징으로 하는 항산화 및 항염증 효과를 가지는 건강기능성 조성물을 제공한다.
본 발명의 기능성 조성물의 유효성분인 옻나무(Rhusverniciflua STOKES)는 건칠(乾漆)이라고 부르며 '옻칠한다' 말에서 유래되었다.
옻은 각종 암과 난치병 치료에 매우 효과가 있다. 옻은 가장 훌륭한 방부제이며 살충제이므로 암의 근치를 위해서 쓰면 매우 좋은데, 옻독에 의해 소멸된 암균은 되살아나지 못하고 중화된 옻독은 인체의 색소를 파괴하지 않기 때문이다. 옻은 위장에서는 소화제가 되고 간에서는 어혈약이 되어 염증을 다스리며, 심장에서는 청혈제가 되어 제반심장병을 다스리고, 폐에서는 살충제가 되어 결핵균을 멸하며, 콩팥에서는 이수약(利水藥)이 되어 오장육부의 질병을 다스린다. 온몸의 신경통 및 관절염, 피부병 등에도 효능이 있다(정보섭 및 신민교, 향약대사전, 영림사,pp382-383,1998).
옻은 우리나라에서도 고조선때 이미 옻을 사용했다는 기록이 있다. 먹는 음식으로도 오래 전부터 효능을 인정받아 왔다. 중국 명나라때 의학서인 <본초강목>을 보면 "옻은 성미가 맵고 따뜻하며 독이 있다. 근육과 뼈를 강하게 하고 끊어진 상처를 낫게 하며 오장을 안정시켜 준다. 몸속의 벌레를 죽이며 어혈을 풀어주고 기침을 멎게 하며, 속이 결리고 맺힌 것은 낫게 하고 요통을 치료한다."고 나와 있다. 또한 <동의보감(東醫寶鑑)>에도 "옻나무는 적체를 풀고, 어혈과 부인병 등에 쓰인다" 라는 기록이 있다. 이처럼 옻나무는 독성물질인 우루시올이라는 성분이 들어 있어, 식품원료로 쓰지 못하도록 식약청에서 규제해 왔다. 그러다가 지난 2002년 그 독성을 제거한 제품에 대해서는 별도의 인정을 받아 사용하도록 하면서, 옻의 약리적인 성분이 곳곳에서 알려지기 시작했다. 일 예로 한국특허 제257,448호는 옻나무 추출물이 항암, 기관분화유도, 암세포 전이 혈관 형성억제 항산화 및 숙취해소를 위한 치료제 및 예방제로서 이용될 수 있다고 기재하고 있다.
이와 같은 다양한 약리효과를 가지고 있는 옻을 수액상태로 직접 섭취하는 경우에는 우루시올(urshiol)의 독성에 의해 발진, 가려움증 등 부작용이 나타난다.
옻의 약리 및 생리활성을 이용하기 위해 우루시올(urushiol)의 독성을 중화시키는 방법으로 옻을 고온에서 볶거나 밀폐된 가마에서 200℃ 이상의 고온으로 탄화하는 정제과정을 주로 사용하는데, 이러한 과정은 옻의 알레르기 유발성분이면서 약리활성 주성분인 우루시올을 증발시켜 옻의 약리작용을 없애는 결과를 초래한다.
한편, 허브차인 고정차(KuDingCha)(쿠딩차, 쿠딩티, 고차, 쿠차라고도 한다)가 심혈관계에 좋다고 알려져 있다. 이것은 일반적 차나 기능성 음료로서 중국에서 널리 소비되고 있다. 고정차의 모식물은 Ligustrumpedunciare, Ligustrumpurpurascens, Ligustrumjaponicum, Ligustrumrobustrum, Ilexcornuta, IlexkudinchaCJTseng(Aquifoliaceae), Ilexlatifolia, Cratoxylumprunifolium, Ehretiathyrsiflora, Photiniaserruiata 및 Ilexparaguariensis를 포함하는 쥐똥나무과(Ligustrum), 물푸레나무과(Oleaceae) 및 호랑가시나무과(Ilex), 감탕나무과(Aquifoliaceae)속에 속하는 약 10가지의 대부분 흔히 알려진 종들로 구성된다.
온수에서 추출한 이들 바탕식물로부터의 추출물이 차로서 소비된다. 동물연구에서 이들 종들 중 일부의 추출물이 혈액순환을 촉진하고, 혈압을 낮추고, 항산화 효과를 가지며, 혈장지질 수준을 감소시킨다는 것이 발견되었다. 예를 들어, 실험연구에서 고콜레스테롤 혈중 래트에 2주 동안 매일 500mg/일의 용량으로 Ilexparaguariensis의 수추출물을 위관영양법으로 제공한 결과, 콜레스테롤과 트리글리세리드의 혈장농도가 상당히 감소한 것으로 나타났다. 다른 연구에서는 1-3개월 동안 Ligustrumjaponicm 추출물을 매일 투여하는 것이고 콜레스테롤혈증 토끼에서 혈중 총콜레스테롤 수준을 감소시켰다. 그러나, 사람의 혈중 콜레스테롤 농도의 관리에 있어서 이차의 임상 이점은 아직 측정되지 않았다.
고정차의 생물학적 활성성분은 아직 측정되지 않았다. 여러 호랑가시나무과 종들의 수성 및 알코올잎 추출물은 많은 테르페노이드류, 플라보노이드류, 트리테르펜류, 페닐에타노이드글리코시드류, 카페오일 퀴닌산 및 이들의 유도체들을 함유한다. 이들 화합물 중 일부가 고정차의 콜레스테롤-저하효과에 관련되는데, 최근 연구에서는 Ilexkudingcha 및 Ilexmacropoda를 포함하는 두 종류의 고정차의 잎과 잔가지로부터 분리된다. 수의 모노테르펜 및 트리테르펜류 가아실-CoA:콜레스테롤 아실트랜스페라제(ACAT)의 활성을 시험관내 저해한다는 것이 밝혀졌다. ACAT 활성은 포유류에서 장으로부터 콜레스테롤 흡수의 조절과 지방산에 의한 콜레스테롤의 에스테르화에 중요하다. 간세포에서 ACAT의 저해는 간으로부터 초저밀도 리포단백질(VLDL) 입자와 같은, 아포리포단백질-B 함유 리포단백질의 분비를 감소시키는 것으로 나타났다.
또한, 장수버섯(Formitella fracinea)은 민주름버섯 목구멍장이버섯과에 속하는 담자균류로서 아카시재목버섯이라고도 명명되며 오래전부터 민간약재로 사용되어 왔다. 북한에서는 만년버섯, 일명 장수버섯을 이용해 간염주사약을 개발해 치료에 이용하고 있는 것으로 알려졌다. 이것은 특히 북한에서는 백두산 불로초라고도 하는 약용버섯으로 스테로이드 화합물 35%, 플라보노이드 15%, 배당체 2%쿠마린 8%, 알칼로이드 5%가 함유되어 있다. 특히 장수버섯은 만성B형 간염과 암, 신장염, 관절염을 비롯한 여러 가지 면역성 질병에 특효가 있으며 성욕을 높여주고 항산화 효과가 강한 것으로 밝혀졌다. 또한 장수버섯으로부터 유래된 항생제의 경우 부작용을 덜어주며 핵산합성을 촉진시켜 인체의 원상회복을 돕고 암환자를 치료한 결과 잔존 암세포의 전이를 억제해 성숙된 암조직의 생장도 현저히 억제시키는 것으로 밝혀졌다.
본 발명에서는 장수버섯의 자실체를 사용하는 것을 특징으로 한다.
본 발명의 용어 "추출물(extract)"은 생약을 적절한 침출액으로 짜내고 침출액을 증발시켜 농축한 제제를 의미하는 것으로, 이에 제한되지는 않으나, 추출처리에 의해 얻어지는 추출액, 추출액의 희석액 또는 농축액, 추출액을 건조하여 얻어지는 건조물, 이들의 조정제물 또는 정제물일 수 있다.
본 발명의 유효성분인 각 추출물은 당업계에 공지된 일반적인 추출방법, 분리 및 정제방법을 이용하여 제조할 수 있다. 상기 추출방법으로는 열탕 추출, 열수 추출, 냉침 추출, 환류 냉각 추출 또는 초음파 추출 등의 방법을 사용할 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다.
본 발명의 구체적인 실시양태에 따르면, 각 추출물은 천연 식물을 그대로 분쇄하여 사용하거나, 열풍건조기 또는 동결건조기를 이용하여 건조하여 분쇄한 후 추출용매, 예컨대 물, 탄소수 1~3개의 무수 또는 함수 저급 알콜 및 이들의 혼합용매로 이루어진 군에서 선택된 용매를 추출용매, 바람직하게는 물 또는 에탄올을 사용하여 추출할 수 있으며, 상기 추출 용매의 양은 천연 식물 건조 중량의 2 내지 20 중량배, 바람직하게는 5 내지 15 중량배로 할 수 있다.
구체적으로, 옻나무, 고정차 및 장수버섯 자실체 각각을 분쇄하여 90 내지 110℃의 정제수를 이용하여 50 내지 70분 동안 열추출한 다음 감압 여과 및 농축하여 각 옻나무 열수추출물, 고정차 열수추출물 및 장수버섯 자실체 열수추출물을 수득할 수 있다.
상기 옻나무 열수추출물, 고정차 열수추출물 및 장수버섯 자실체 열수추출물은 상기 수득된 추출액을 농축 및 동결건조를 통하여 수분을 완전히 제거시킨 것일 수 있으며, 상기 수분을 완전히 제거시킨 옻나무 열수추출물, 고정차 열수추출물 및 장수버섯 자실체 열수추출물은 분말형태로 사용하거나 상기 분말을 증류수 또는 통상의 용매에 녹여 사용할 수 있다.
본 명세서에서 용어 '유효성분으로 포함하는'이란 옻나무 열수추출물, 고정차 열수추출물 및 장수버섯 자실체 열수추출물의 효능 또는 활성을 달성하는데 충분한 양을 포함하는 것을 의미한다.
본 발명의 하나의 구현예에 따르면, 옻나무 추출물 90 내지 95 중량부, 장수버섯 추출물 1 내지 5 중량부 및 고정차 추출물 1 내지 5 중량부를 포함하는 것을 특징으로 한다.
본 발명에서 사용되는 용어 "예방"이란 본 발명에 따른 조성물의 투여에 의해 항산화 및 항염증과 관련된 질병의 발생, 확산 및 재발을 억제 또는 지연시키는 모든 행위를 의미하고, 본 발명에서 사용된 용어 "치료"란 본 발명의 조성물의 투여로 항산화 및 항염증과 관련된 질병의 진행이 지연 또는 멈춰 증세를 호전시키거나, 항산화 및 항염증으로 인해 이롭게 변경하는 모든 행위를 의미한다. 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자라면, 대한의학협회 등에서 제시된 자료를 참조하여 본 발명의 조성물이 효과가 있는 질환의 정확한 기준을 알고, 개선, 향상 및 치료된 정도를 판단할 수 있을 것이다.
본 발명의 일 구현예에 있어서, 상기 식품 조성물은 정제, 캡슐제, 분말, 과립, 액상, 환, 액제, 시럽, 즙, 현탁제, 유제, 또는 점적제 등이 될 수 있다. 예를 들어, 정제 또는 캡슐제의 형태로의 제제화를 위해, 유효 성분은 에탄올, 글리세롤, 물 등과 같은 경구, 무독성의 허용 가능한 불활성 담체와 결합될 수 있다. 또한, 원하거나 필요한 경우, 적합한 결합제, 윤활제, 붕해제 및 발색제 또한 혼합물로 포함될 수 있다. 적합한 결합제는 이에 제한되는 것은 아니나, 녹말, 젤라틴, 글루코스 또는 베타-락토오스와 같은 천연 당, 옥수수 감미제, 아카시아, 트래커캔스 또는 소듐올레이트와 같은 천연 및 합성 검, 소듐 스테아레이트, 마그네슘 스테아레이트, 소듐 벤조에이트, 소듐 아세테이트, 소듐 클로라이드 등을 포함한다. 붕해제는 이에 제한되는 것은 아니나, 녹말, 메틸 셀룰로스, 아가, 벤토니트, 잔탄검 등을 포함한다. 액상 용액으로 제제화되는 조성물에 있어서 허용 가능한 약학적 담체로는, 멸균 및 생체에 적합한 것으로서, 식염수, 멸균수, 링거액, 완충 식염수, 알부민 주사용액, 덱스트로즈 용액, 말토 덱스트린 용액, 글리세롤, 에탄올 및 이들 성분 중 1 성분 이상을 혼합하여 사용할 수 있으며, 필요에 따라 항산화제, 완충액, 정균제 등 다른 통상의 첨가제를 첨가할 수 있다. 또한 희석제, 분산제, 계면활성제, 결합제 및 윤활제를 부가적으로 첨가하여 수용액, 현탁액, 유탁액 등과 같은 주사용 제형, 환약, 캡슐, 과립 또는 정제로 제제화할 수 있다.
또한, 본 발명의 식품 조성물은 기능성 식품으로 이용하거나, 각종 식품에 첨가될 수 있다. 본 발명의 조성물을 첨가할 수 있는 식품으로는 예를 들어, 차류, 음료류, 육류, 초코렛, 젤리, 식품류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 사탕류, 아이스크림류, 알코올 음료류, 비타민 복합제 및 건강보조식품류 등이 있다.
또한, 상기 식품 조성물은 상기 유효성분 외에 여러 가지 영양제, 비타민, 광물 (전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제 (치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다.
본 발명의 건강 기능성 식품은 정제, 캅셀, 분말, 과립, 스틱 액상, 환 등의 형태로 제조 및 가공할 수 있다.
본 발명에서 건강기능식품이라 함은 건강기능식품에 관한 법률에 따른 인체에 유용한 기능성을 가진 원료나 성분을 사용하여 제조 및 가공한 식품을 말하며, 인체의 구조 및 기능에 대하여 영양소를 조절하거나 생리학적 작용 등과 같은 보건 용도에 유용한 효과를 얻을 목적으로 섭취하는 것을 의미한다.
본 발명의 건강기능식품은 통상의 식품 첨가물을 포함할 수 있으며, 식품 첨가물로서의 적합 여부는 다른 규정이 없는 한, 식품의약품안전청에 승인된 식품 첨가물 공전의 총칙 및 일반시험법 등에 따라 해당 품목에 관한 규격 및 기준에 의하여 판정한다.
상기 식품 첨가물 공전에 수재된 품목으로는 예를 들어, 케톤류, 글리신, 구연산칼슘, 니코틴산, 계피산 등의 화학적 합성물; 감색소, 감초추출물, 결정 셀룰로오스, 고량색소, 구아검 등의 천연첨가물; L-글루타민산나트륨제제, 면류첨가알칼리제, 보존료제제, 타르색소제제 등의 혼합제제류 등을 들 수 있다.
예를 들어, 정제 형태의 건강기능식품은 유효성분을 부형제, 결합제, 붕해제 및 다른 첨가제와 혼합한 혼합물을 통상의 방법으로 과립화한 다음, 활택제 등을 넣어 압축성형하거나, 상기 혼합물을 직접 압축 성형할 수 있다. 또한 상기 정제 형태의 건강기능식품은 필요에 따라 교미제 등을 함유할 수도 있다.
캅셀 형태의 건강기능식품 중 경질 캅셀제는 통상의 경질 캅셀에 본 발명의 유효성분을 부형제 등의 첨가제와 혼합한 혼합물을 충진하여 제조할 수 있으며, 연질 캅셀제는 상기 추출물을 부형제 등의 첨가제와 혼합한 혼합물을 젤라틴과 같은 캅셀기제에 충진하여 제조할 수 있다. 상기 연질 캅셀제는 필요에 따라 글리세린 또는 소르비톨 등의 가소제, 착색제, 보존제 등을 함유할 수 있다.
환 형태의 건강기능식품은 본 발명의 유효성분과 부형제, 결합제, 붕해제 등을 혼합한 혼합물을 기존에 공지된 방법으로 성형하여 조제할 수 있으며, 필요에 따라 백당이나 다른 제피제로 제피할 수 있으며, 또는 전분, 탈크와 같은 물질로 표면을 코팅할 수도 있다.
과립 형태의 건강기능식품은 본 발명의 유효성분과 부형제, 결합제, 붕해제 등을 혼합한 혼합물을 기존에 공지된 방법으로 입상으로 제조할 수 있으며, 필요에 따라 착향제, 교미제 등을 함유할 수 있다.
본 발명의 조성물의 제조에는 식품 조성물로서 본 발명에서 사용하는 유효성분 이외에도 통상적으로 사용되는 식품 조성물과 같이 여러 향미제 및 천연 탄수화물을 추가 성분으로 함유할 수 있고, 생리학적으로 허용되는 보조제를 사용할 수 있으며, 해당 보조제에는 부형제, 감미제, 피복제, 팽창제, 윤활제, 결합제 또는 향미제 등을 사용할 수 있다.
본 발명의 식품조성물은 기능성 식품으로 이용하거나, 각종 식품에 첨가될 수 있다. 본 발명에서 첨가한 조성물을 첨가할 수 있는 식품을 예를 들면, 초코렛류, 음료류, 식품류, 스낵류, 면류, 껌류, 사탕류 및 건강보조식품 등이 있다.
본 발명에서의 건강기능식품은 통상적으로 사용되는 식품 첨가물이 포함될 수 있으며, 식품 첨가물은 식품의약품안전청에서 승인된 식품 첨가물 공전의 총칙 및 일반시험법에 따라 규격 및 기준에 의하여 판정한다.
이와 같이, 본 발명에 따른 옻 추출물, 장수버섯 추출물 및 고정차 추출물을 포함하는 조성물은 세포독성이 없어 인체에 안전한 것으로 확인되었으며, 총 폴리페놀 및 플라보노이드, DPPH radical 소거능, ABTS radical 소거능, Nitric oxide 검사에서 뛰어난 효과를 가지는 바, 우수한 항산화 및 항염증의 효능이 우수하다. 이러한 결과는 산화적 스트레스를 억제하는 항산화 역할을 통해 항암, 항염증, 항노화 등의 효과가 뛰어날 것이라 기대된다. 또한, 항산화 성분 중 플라보노이드의 quercetin의 높은 함량이 염증의 대표적인 물질인 이산화탄소(nitric oxide, NO)의 감소에 영향을 주었을 것이라 사료된다. 이와 같은 결과는 본 발명의 조성물이 뛰어난 항산화제로서의 역할뿐만 아니라, 아토피, 천식 등의 염증성 질환 개선에도 도움을 줄 수 있을 것이라 기대된다.
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 실시예 등을 들어 상세하게 설명하기로 한다. 그러나, 본 발명에 따른 실시예들은 여러 가지 다른 형태로 변형될 수 있으며, 본 발명의 범위가 하기 실시예들에 한정되는 것으로 해석되어서는 안 된다. 본 발명의 실시예들은 당업계에서 평균적인 지식을 가진 자에게 본 발명을 보다 완전하게 설명하기 위해 제공되는 것이다.
재료
1) 시약
사용된 시약은 Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM : Gibco BRL Co., U.S.A.), fetal bovine serum(FBS : Invitrogen Co., U.S.A.), lipopolysaccharide(LPS : Sigma Co., U.S.A.), cell viability assay kit (Daeillab sevice, Korea), nitric oxide detection kit (Intron Biotechnology, Korea), ethanol (Merck Co., Germany), 1,1-diphenyl-2-picryl-hydrazyl (DPPH, Sigma Co., U.S.A.), 2,2'-azinobis-(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid) (ABTS, Sigma Co., U.S.A.), Folin-Ciocalteu's phenol reagent (Merck, Germany), gallic acid (Sigma Co., U.S.A), sodium carbonate (Sigma Co., U.S.A)에서 구입하여 사용하였다.
2) 기기
본 실험에 사용된 기기는 rotary vacuum evaporator ( B-480 Co., Switzerland), freeze dryer (EYELA FDU-540 Co., Japan), CO2 incubator (Forma scientific Co., U.S.A.), centrifuge (Sigma Co., U.S.A.), deep-freezer (Sanyo Co., Japan), ELISA reader (Molecular Devices Co., U.S.A.) 등을 이용하였다.
<제조예 1> 옻나무 추출물의 제조
옻나무 1kg을 정제수에 넣고 100℃에서 1시간 동안 열수추출하여 옻나무 열수 추출물을 수득하였다. 상기 추출물을 어드벤텍 2호(Advantec No. 2, 110mm) 여과지로 감압 여과하여 불용성 물질을 제거한 후 냉각 콘덴서가 장착된 농축기를 사용하여 40℃에서 감압 농축하였다. 감압 농축된 추출물의 용매를 완전히 제거하기 위하여 정제수 0.5ℓ를 넣어 현탁시킨 후 동결건조기를 이용하여 옻나무 추출물을 획득한 후 분쇄하여 옻나무 열수추출물 분말을 수득하였다.
<제조예 2> 장수버섯 추출물의 제조
장수버섯 자실체 1kg을 정제수에 넣고 100℃에서 1시간 동안 열수추출하여 장수버섯 자실체 열수 추출물을 수득하였다. 상기 추출물을 어드벤텍 2호(Advantec No. 2, 110mm) 여과지로 감압 여과하여 불용성 물질을 제거한 후 냉각 콘덴서가 장착된 농축기를 사용하여 40℃에서 감압 농축하였다. 감압 농축된 추출물의 용매를 완전히 제거하기 위하여 정제수 0.5ℓ를 넣어 현탁시킨 후 동결건조기를 이용하여 장수버섯 자실체 추출물을 획득한 후 분쇄하여 장수버섯 자실체 열수추출물 분말을 수득하였다.
<제조예 3> 고정차 추출물의 제조
고정차 1kg을 정제수에 넣고 100℃에서 1시간 동안 열수추출하여 고정차 열수 추출물을 수득하였다. 상기 추출물을 어드벤텍 2호(Advantec No. 2, 110mm) 여과지로 감압 여과하여 불용성 물질을 제거한 후 냉각 콘덴서가 장착된 농축기를 사용하여 40℃에서 감압 농축하였다. 감압 농축된 추출물의 용매를 완전히 제거하기 위하여 정제수 0.5ℓ를 넣어 현탁시킨 후 동결건조기를 이용하여 고정차 추출물을 획득한 후 분쇄하여 고정차 열수추출물 분말을 수득하였다.
<실시예 1>
상기 옻나무 열수추출물 분말 93 중량부, 장수버섯 자실체 열수추출물 분말 3 중량부 및 고정차 열수추출물 분말 4 중량부를 포함하는 조성물을 제조하였다.
<시험예 1> 세포독성 측정
RAW 264.7 세포는 96 well plate에 1.5×105 cells/well로 분주하여 24시간 동안 배양하였다. 실험을 하기 전에 새로운 배양액으로 교체하였고, 샘플을 각각 1, 10, 100, 200, 400 (㎍/㎖)의 농도로 처리하여 다시 24시간 동안 배양하였다. 배양 후 10 ㎕의 WST solution을 첨가하여 세포배양기 (37℃, 5% CO2)에서 30분간 반응시켰다. 반응 후 450 nm에서 흡광도의 변화를 측정하여 대조군에 대한 세포 생존율을 백분율로 표시하였다.
도 1은 본 발명의 옻 추출물, 장수버섯 추출물 및 고정차 추출물을 포함하는 조성물의 RAW 264.7 세포의 세포 활성을 나타낸 것으로서, 1, 10, 100, 200, 400u g/ml 농도로 세포를 24시간 처리한 경우의 세포 활성을 WST 분석으로 나타낸 것이다. 결과는 각각 3차 실험의 평균±SD로 나타내었다.
본 발명의 옻 추출물, 장수버섯 추출물 및 고정차 추출물을 포함하는 조성물의 RAW 264.7 세포주 세포 생존율을 측정한 결과, 대조군을 100.0±5.1%로 나타냈을 때, 1, 10, 100, 200, 400 (㎍/㎖) 농도에서 95.5±4.6%, 92.4±5.5%, 95.9±2.9%, 92.7±2.7%, 93.0±2.7%의 세포 생존율을 나타내어 모든 농도에서 90% 이상의 생존율을 나타내어 안전한 것으로 나타났다.
<시험예 2> 항산화 측정
(1) 총 페놀 함량 측정
총 페놀 함량은 추출 시료용액 1 ㎖에 50% Foiln-Ciocalteu's phenol reagent 0.5 ㎖를 가하여 실온에서 3분간 반응시켰다. 반응용액에 Na2CO3 포화용액 1 mL와 7.5 ㎖ 증류수를 차례로 혼합하여 30분간 정치시킨 뒤, 12,000 rpm에서 10분간 원심분리한 후 상청액을 취해 760 nm에서 흡광도를 측정하였다. 총 페놀 함량은 gallic acid를 표준물질로 이용하여 작성한 검량선에 따라 함량을 구하였으며 측정단위로는 GAE (Gallic acid equivalent)/g을 사용하였다.
본 발명의 옻 추출물, 장수버섯 추출물 및 고정차 추출물을 포함하는 조성물에 존재하는 총 페놀 함량을 gallic acid를 표준물질로 하여 측정한 결과, 하기 표 1과 같이 phenol 함량이 296.26±6.07 mg/g으로 나타났다.
(2) 총 플라보노이드 함량 측정
시료의 flavonoid 함량은 Nieva Moreno 등의 방법을 응용하여 측정하였다. 각 샘플 0.1 ㎖와 80% 에탄올 0.9 mL을 혼합한 혼합물 0.5 ㎖에 10% aluminium niatate와 1M potassium acetate 0.1 ㎖ 그리고 80% 에탄올 4.3 ㎖을 가하여 실온에 40분 방치한 뒤 415 nm에서 흡광도를 측정하였으며, quercetin을 이용하여 작성한 표준곡선으로부터 함량을 구하였다.
본 발명의 옻 추출물, 장수버섯 추출물 및 고정차 추출물을 포함하는 조성물에 존재하는 총 플라보노이드 함량을 quercetin을 표준물질로 하여 측정한 결과, 하기 표 2와 같이 플라보노이드 함량이 256.3±9.5 mg/g으로 나타났다.
(3) DPPH 소거능 측정
자유라디칼 소거 활성 시험은 안정한 자유라디칼 DPPH를 사용하는 방법으로 에탄올에 용해시킨 0.2mM의 DPPH 용액 150ul와 본 발명의 옻 추출물, 장수버섯 추출물 및 고정차 추출물을 포함하는 조성물 1, 10, 100, 200, 400 (㎍/㎖) 100ul를 각각 혼합하고, 37℃에서 30분간 반응시킨 후, 517nm에서 흡광도를 측정하였다. 대조군은 시료액 대신 증류수를 넣었으며, DPPH 용액대신 에탄올을 넣어 보정값을 얻었다. 자유라디칼 소거율은 하기 수학식 1에 따라 계산하였다. 비교를 위해 옻 추출물, 장수버섯 추출물 및 고정차 추출물을 각각 단독으로 사용하여 자유라디칼 소거율을 측정하였다.
도 2는 본 발명의 조성물의 다양한 농도에서의 DPPH 라디칼 소거능을 나타낸 것이다. 각 추출물은 37℃에서 30분간 DPPH 용액에서 배양되었다. 활성은 517nm 에서 흡광도에 따라 측정되었다. 결과는 각각 3차 실험의 평균±SD로 나타내었다.
DPPH 라디칼 소거능을 측정한 결과, 본 발명의 옻 추출물, 장수버섯 추출물 및 고정차 추출물을 포함하는 조성물은 1, 10, 100, 200, 400 (㎍/㎖) 농도에서 12.0±1.0%, 34.9±2.9%, 87.3±3.1%, 88.7±2.0% 89.3±0.2%로 나타나, 농도 의존적으로 라디칼 소거능의 증가를 나타내었다.
한편, 옻 추출물, 장수버섯 추출물 및 고정차 추출물을 각각 단독으로 사용한 경우에는 각각 14.5±3.3%, 15.6±1.5% 및 14.3±1.3%의 라디칼 소거능 효능을 나타내었다.
(4) ABTS 소거능 측정
ABTS assay 방법은 기존에 보고된 방법을 96 well plate에 맞게 수정하여 실시하였다. 본 발명의 옻 추출물, 장수버섯 추출물 및 고정차 추출물을 포함하는 조성물은 최종 농도가 1, 10, 100, 200, 400 (㎍/㎖)의 농도로 될 수 있게 희석시켰으며, ABTS 용액은 7.4 mM ABTS (2,2-azino-bis-(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid))와 2.6 mM potassium persulphate를 제조한 후, 암소에 하루 동안 방치하여 양이온 (ABTS·+)을 형성시킨 다음 734 nm에서 흡광도를 측정하여 흡광도 값이 1.5 이하가 나오도록 희석하고, 희석된 ABTS·+ 용액 150 ㎕와 강참액 추출물을 각각 5 ㎕ 혼합하고, 실온에서 10분간 반응시킨 후, 734 nm에서 흡광도를 측정하였다. 항산화능은 증류수를 대조군으로 하여 대조군에 대한 ABTS 라디칼 소거능을 백분율로 나타내었다. 비교를 위해 옻 추출물, 장수버섯 추출물 및 고정차 추출물을 각각 단독으로 사용하여 자유라디칼 소거율을 측정하였다.
도 3은 본 발명의 조성물의 다양한 농도에서의 ABTS 라디칼 소거능을 나타낸 것으로서, 각 추출물은 37℃에서 30분간 DPPH 용액에서 배양되었다. 활성은 732 nm에서 흡광도에 따라 측정되었다. 결과는 각각 3차 실험의 평균±SD로 나타내었다.
본 발명의 옻 추출물, 장수버섯 추출물 및 고정차 추출물을 포함하는 조성물의 ABTS 라디칼 소거능을 측정한 결과, 본 발명의 옻 추출물, 장수버섯 추출물 및 고정차 추출물을 포함하는 조성물은 1, 10, 100, 200, 400 (㎍/㎖) 농도에서 0.1±1.2%, 8.8±1.3%, 88.4±3.6%, 91.7±1.0%, 91.7±1.2%로 나타나, 농도 의존적으로 라디칼 소거능의 증가를 나타내었다.
한편, 옻 추출물, 장수버섯 추출물 및 고정차 추출물을 각각 단독으로 사용한 경우에는 각각 10.2±2.1%, 11.3±1.4% 및 9.5±1.6%의 라디칼 소거능 효능을 나타내었다.
<시험예 2> 항염증 측정
NO (Nitric oxide)의 농도는 배양액 내의 nitrite 농도를 Griess Reagent System을 이용하여 측정하였다. Raw 264.7 cells은 96well plates에 1x105 cells/well로 분주하여 24시간 동안 배양한 후, 조성물을 농도별로 처리하고, LPS 1 ㎍/㎖을 처리하여, 다시 24시간 동안 배양하였다. N1 buffer를 50 ul를 각 well에 처리한 후, 10분간 상온에서 암소반응 후, N2 buffer 50 ul를 각 well에 처리하고, 10분간 반응시킨 후, 540nm에서 흡광도를 측정하였다. Nitrite standard의 농도별 표준곡선을 이용하여 배양액의 NO 농도를 결정하였다.
도 4는 본 발명의 조성물의 다양한 농도에서의 NO 생성 억제 효과를 나타낸 것으로서, RAW264.7 세포에서 LPS-유도 NO 생성에 대한 조성물의 효과에 대한 것이다. RAW 264.7 세포를 각각 1, 10, 100, 200, 400 pg/ml 농도의 조성물과 LPS(1 yg/ml)에서 24시간 처리하였다. 결과는 각각 3차 실험의 평균±SD로 나타내었다.(결과의 유의성 *** : p<0.001).
본 발명의 옻 추출물, 장수버섯 추출물 및 고정차 추출물을 포함하는 조성물의 RAW 264.7 세포에서 NO 생성량을 측정한 결과, 대조군을 100.0±2.3%로 나타냈을 때 정상군은 45.0±6.3% 로 나타났으며, 본 발명의 조성물은 1, 10, 100, 200, 400 (㎍/㎖) 농도에서 85.1±4.0%, 83.5±3.4%, 48.7±4.2%, 37.1±6.3%, 30.2±1.2%,로 나타나, 대조군에 비하여 100, 200, 400 (㎍/㎖) 농도에서 유의성 있는 (*** : p<0.001) 감소를 나타내었다.
한편, 옻 추출물, 장수버섯 추출물 및 고정차 추출물을 각각 단독으로 사용한 경우에는 각각 80.5±5.3%, 82.1±2.5% 및 83.7±1.5%의 NO 생성 억제 효과를 나타내었다.
이상으로 본 발명의 특정한 부분을 상세히 기술하였는바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 이러한 구체적인 기술은 단지 바람직한 구현예일 뿐이며, 이에 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백하다. 따라서, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항과 그의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.

Claims (6)

  1. 옻 추출물, 장수버섯 추출물 및 고정차 추출물을 유효성분으로 포함하되,
    옻나무 추출물 93 중량부, 장수버섯 추출물 3 중량부 및 고정차 추출물 4 중량부를 포함하고,
    상기 옻나무 추출물은 옻나무를 90 내지 110℃의 정제수를 이용하여 50 내지 70분 동안 열수추출한 다음 분말화하여 수득된 옻나무 열수추출물 분말이며,
    상기 장수버섯 추출물은 장수버섯 자실체 추출물로서, 상기 장수버섯 자실체 추출물은 장수버섯 자실체를 90 내지 110℃의 정제수를 이용하여 50 내지 70분 동안 열수추출한 다음 분말화하여 수득된 장수버섯 자실체 열수추출물 분말이고,
    상기 고정차 추출물은 고정차를 90 내지 110℃의 정제수를 이용하여 50 내지 70분 동안 열수추출한 다음 분말화하여 수득된 고정차 열수추출물 분말인 것을 특징으로 하는 항산화 및 항염증 효과를 가지는 기능성 조성물.
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