KR101884660B1 - 프로폴리스, 로얄젤리 및 꿀을 포함하는 천연물의 효소추출물을 함유하는 화장료 조성물 - Google Patents

프로폴리스, 로얄젤리 및 꿀을 포함하는 천연물의 효소추출물을 함유하는 화장료 조성물 Download PDF

Info

Publication number
KR101884660B1
KR101884660B1 KR1020180056935A KR20180056935A KR101884660B1 KR 101884660 B1 KR101884660 B1 KR 101884660B1 KR 1020180056935 A KR1020180056935 A KR 1020180056935A KR 20180056935 A KR20180056935 A KR 20180056935A KR 101884660 B1 KR101884660 B1 KR 101884660B1
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
production example
cosmetic composition
honey
propolis
cacao
Prior art date
Application number
KR1020180056935A
Other languages
English (en)
Inventor
한상근
은소희
이대우
김다애
Original Assignee
한국콜마주식회사
(주)더마랩
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 한국콜마주식회사, (주)더마랩 filed Critical 한국콜마주식회사
Priority to KR1020180056935A priority Critical patent/KR101884660B1/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR101884660B1 publication Critical patent/KR101884660B1/ko

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/96—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
    • A61K8/98—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution of animal origin
    • A61K8/987—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution of animal origin of species other than mammals or birds
    • A61K8/988—Honey; Royal jelly, Propolis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/19—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing inorganic ingredients
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/96—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
    • A61K8/97—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution from algae, fungi, lichens or plants; from derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • A61Q19/08—Anti-ageing preparations

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Birds (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Gerontology & Geriatric Medicine (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Cosmetics (AREA)

Abstract

본 발명은 프로폴리스, 로얄젤리 및 꿀을 가수분해 효소 처리하여 얻은 혼합추출물과 카바, 강황 및 카카오씨를 특정한 용매로 추출하고 효소 처리하여 얻은 혼합추출물을 유효성분으로 함유하여 우수한 염증 완화, 항산화 및 보습효과를 나타내는 화장료 조성물에 관한 것이다.

Description

프로폴리스, 로얄젤리 및 꿀을 포함하는 천연물의 효소추출물을 함유하는 화장료 조성물{Cosmetic composition containing the enzymatic extracts of natural substances comprising propolis, royal jelly and honey}
본 발명은 프로폴리스, 로얄젤리 및 꿀을 포함하는 천연물의 효소추출물을 함유하는 화장료 조성물에 관한 것으로, 구체적으로는 프로폴리스, 로얄젤리 및 꿀을 가수분해 효소 처리하여 얻은 혼합추출물과 카바, 강황 및 카카오씨를 특정한 용매로 추출하고 효소 처리하여 얻은 혼합추출물을 유효성분으로 함유하여 우수한 염증 완화, 항산화 및 보습효과를 나타내는 화장료 조성물에 관한 것이다.
최근 웰빙 트랜드가 모든 분야에서 중요시되고 있는 사회로 변화하고 있는 가운데 천연물 소재 화장품에 대한 관심도 높아지고 있다. 최근 천연추출물을 안정화시키거나, 독성을 줄이는 안정한 유도체로 전환시켜 효과를 높이고자 하는 시도가 많아지고 있다. 일예로 효소를 이용한 생물전환(Bio-conversion) 방법이 개발되고 있다. 인체 세포에 흡수가 용이한 저분자 물질로 전환되거나, 불안정하거나 불활성인 형태에서 활성 형태로 전환되어 흡수되기도 한다. 미생물이나 효소를 이용하여 천연추출물의 효능을 극대화시키거나, 안전성 문제를 해결하기 위한 시도는 다양한 식품, 화장품 약품 등의 개발에 있어서 중요한 의미를 갖는다.
피부 노화의 원인에는 내적 원인과 외적 원인이 있다. 피부는 외부 환경에 노출되어 있어서 외적인 인자의 영향으로 노화가 진행되는 경우가 많으며, 이 들 중에는 자외선에 의한 손상, 외부 유해 환경 성분, 각종 스트레스로 인한 내부 요인이 포함된다. 이러한 인자들에 의하여 피부 각질층의 수분이 감소하여 피부가 건조해지고 표면이 거칠어지면서 갈라지게 된다. 수분 손실이 되면 각질이 탈락되면서 외부에 노출되기 용이하게 되면서 자극에 대한 염증 및 피부질환이 유발된다. 건조한 피부는 면역기능이 약화되어 가려움증 및 아토피 피부염 등의 알러지가 유발되기 쉬워진다. 그러므로 피부의 수분 손실을 방지하는 것은 중요하다. 인체의 60~70%가 수분으로 이루어져 있으나, 외부 자극으로 인해 수분을 공기 중으로 빼앗기게 되어 피부는 수분을 잃게 되며, 이로 인해 수분 부족과 피부 탄력 저하 등 피부 노화가 시작 된다. 염증 반응은 조직에 해롭거나 해로울 가능성이 있는 요인들로부터 생체를 보호하는 생리적 반응이다. 과다 염증에 의해 유발되는 단백질 분해효소들에 의해 세포 및 결합조직이 손상을 입고 피부탄력을 감소시켜 주름의 원인이 되며 이로 인해 빠른 피부 노화를 초래한다. 따라서 과다 염증에 의해 생성되는 단백질 및 지질 분해 효소들을 억제하여 손상되는 세포들을 보호함으로서 피부 노화를 억제할 수 있다.
산화스트레스는 단백질 분해효소의 활성화, 탄력섬유인 콜라겐과 엘라스틴 절단, 히아루론산 절단 등의 생체 구성 성분들의 손상을 야기하며, 피부 염증 유발 및 피부 면역기능을 억제시켜 세균 감염증 또는 발암율의 증가를 가져온다. 따라서 활성산소 생성을 억제하고 활성산소로 인한 염증 반응 억제 및 피부 보습력을 증가시켜 피부세포를 보호하여야 한다. 페놀계 합성 항산화제로 널리 사용되고 있는 BHA(butylated hydroxy anisol)와 BHT(butylated hydroxytolunene)는 그 효과와 경제성 때문에 많이 사용해 왔지만 안전성에 의심을 받고 있다. 따라서 인체에 안전한 천연 항산화제에 대한 개발이 요구되고 있다.
프로폴리스, 로얄젤리, 꿀은 항염, 항산화, 면역증강 효과가 우수하여 건강식품으로 널리 이용되지만, 최근 화장품의 원료로 많이 사용되고 있다. 대한민국 공개특허 제2016-0148174호 "프로폴리스 복합 추출물을 함유하는 화장료 조성물"에는 '프로폴리스 추출물, 꿀 추출물, 로얄젤리 추출물, 황금 추출물 및 홍삼 추출물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물'이 개시되어 있다. 대한민국 공개특허 제2016-0009933호 "화장료 조성물"에는 '봉독, 프로폴리스, 로얄젤리 및 벌꿀 성분을 함유하는 화장료 조성물'이 개시되어 있다.
본 발명자들은 프로폴리스, 로얄젤리 및 꿀의 피부개선활성을 증진시키고자 하는 연구를 하였으며, 이들을 가수분해효소 처리하고, 특정한 방법에 의하여 제조되는 카바카바, 강황 및 카카오씨 혼합추출물과 함께 사용하는 경우에 피부염증완화, 항산화 및 피부보습효과가 크게 증진되는 것을 확인하여 본 발명을 완성하였다.
본 발명은 프로폴리스, 로얄젤리 및 꿀을 포함하는 천연물의 효소추출물을 함유하여 우수한 염증완화, 항산화 및 보습효과를 나타내는 화장료 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.
상기 목적을 달성하기 위하여 본 발명에 따르면 가수분해 효소처리 프로폴리스, 로얄젤리 및 꿀의 혼합추출물과 카바카바, 강황 및 카카오씨의 효소추출물을 유효성분으로서 화장료 조성물 전체 중량에 대하여 0.1~10 중량% 함유하는 화장료 조성물이 제공된다.
상기 가수분해 효소는 바람직하게는 β-글루코시다아제이다.
상기 카바카바, 강황 및 카카오씨의 효소추출물은 패각 용해액을 추출용매로 하여 얻어진 카바카바, 강황 및 카카오씨의 혼합추출물을 가수분해효소, 더욱 바람직하게는 β-글루코시다아제로 가수분해하여 제조되는 것이다.
상기 가수분해 효소처리 프로폴리스, 로얄젤리 및 꿀의 혼합추출물은 프로폴리스, 로얄젤리 및 꿀이 각각 1~2:1~2:3~5의 중량비율로 혼합되어 제조되는 것이며, 더욱 바람직하게는 1:2:5의 중량비율로 혼합되어 제조되는 것이다.
상기 카바카바, 강황 및 카카오씨의 효소추출물은 카바카바, 강황 및 카카오씨가 각각 1~3:1~3:1~3의 중량비율로 혼합되어 제조되는 것이며, 더욱 바람직하게는 1:3:2의 중량비율로 혼합되어 제조되는 것이다.
상기 가수분해 효소처리 프로폴리스, 로얄젤리 및 꿀의 혼합추출물과 카바카바, 강황 및 카카오씨의 효소추출물은 각각 1~2:1~2의 중량비율로 함유되는 것이 바람직하다.
상기 패각 용해액은 패각을 1000~1500℃에서 10~30분간 소성시키는 단계; 100~2000 매쉬(mesh) 크기로 분쇄하는 단계; 패각분말을 정제수에 첨가하고 100~120℃에서 5~30분 가열하는 단계; 및 필터로 분말을 분리시키는 단계를 포함하는 제조방법에 의하여 제조된다. 상기 추출용매로서의 패각 용해액은 pH 8~10인 것이 바람직하다.
상기 화장료 조성물은 염증완화용, 항산화용 또는 피부보습용 화장료 조성물이다.
본 발명에 따른 효소처리 프로폴리스, 로얄젤리 및 꿀의 혼합추출물과 카바카바, 강황 및 카카오씨의 효소추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물은 천연 추출물을 함유하여 안전하며, 그 상승작용에 의하여 우수한 염증완화, 항산화 및 보습효과를 나타낸다.
이하, 본 발명을 더욱 상세하게 설명한다.
"프로폴리스(propolis)"는 꿀벌이 자신의 생존과 번식을 위해 여러 식물에서 뽑아낸 수지와 같은 물질을 자신의 침, 효소 등과 섞어서 만든 물질로서, 유기물 및 미네랄을 다량 함유하며, 미네랄, 비타민, 아미노산, 지방, 유기산, 플라보노이드 등은 세포대사에 중요한 역할을 한다. 프로폴리스는 항암성, 화상 치유능, 습진, 아토피성 피부염 및 무좀 등과 같은 진균류에 의한 피부병 치유 효과가 보고되었으며, 그 외에도, 호르몬 자극 활동, 비타민 p의 작용에 의한 괴혈병 치료, 고혈압 환자의 혈압강하작용, 생체 호르몬의 균형 유지 등 다양한 효과가 규명된 바 있다.
"로얄젤리"는 꿀벌 유충의 영양 섭취에 사용되는 꿀벌의 분비물로, 젊은 일벌의 머리 부분에 잇는 인두선에서 분비되며, 단백질, 당질이 주요 구성으로서, 비타민 A, B1, B2 가 풍부하고 수분, 지질, 당질, 회분, 효소, 호르몬, 스테로이드 등을 함유한다. 로얄젤리는 피부에 도포시 피부 표면의 수분을 적당하게 유지시키고, 피부의 대사를 증가시켜 탄력을 개선시키며, 항염증 작용을 통해 피부 트러블을 예방하는 효과가 있는 것으로 알려져 있다.
"꿀"은 꿀벌이 여러 식물의 꽃으로부터 수집한 화밀과 화분을 그들의 식량으로 전환하여 저장한 것을 지칭하는 것으로, 글루코오스(glucose)와 프락토오스(fructose), 탄수화물, 무기질, 식물성 색소, 효소 및 화분 등을 함유하고 있다. 꿀은 오랜 기간 자양 강장, 진정, 해독, 피로회복, 위장장애, 기침, 피부 건조, 습진, 변비, 신경쇠약, 혈당 감소, 대사 균형 유지 등에 사용되어 왔다. 미용 및 건강에 유익한 효과를 가지며, 비타민 B군, 특히 B6이 풍부하게 함유하고 있는 것으로 알려져 있다.
본 발명에서는 상기 프로폴리스, 로얄젤리 및 꿀을 가수분해 효소로 처리하여 활성성분을 강화시켜 사용하는 것을 특징으로 한다. 또한 상기 가수분해 효소 처리 프로폴리스, 로얄젤리 및 꿀의 혼합추출과 함께 패각 용해액으로 추출 후 가수분해하여 제조되는 천연식물추출물을 유효성분으로 사용하는 것을 특징으로 한다.
"카바카바(Piper Methysticum)"는 일찍부터 멀미 치료제로 알려져 있었으며, 뿌리 부분으로부터 추출한 카바락톤의 경우 진정 효과나 수면 유도 효과가 있어 다양한 의약품으로 응용이 되고 있다. 대한민국 공개특허 제2004-005958호에는 활성 카바락톤을 포함하는 의약용 연고가 개시되어 있는데, 카바(Piper methysticum Forst)의 뿌리줄기로부터 유래된 1,8-디하이드로카와인 및 1,8-디하이드로메티스티신을 첨가하여 통증을 완화시키는 효과를 나타낸다고 기재되어 있다.
"강황(Curcumia longa)"은 잎 뒷면에 작은 가시 솜털 같은 꽃이 봄에 핑크색을 띄우고 자라며 열대 아시아가 원산으로서 국내에서는 강황 속 식물이 자생하지 않으며 열대 각 지방 및 중국의 남부지방에 자생하거나 재배되는 생강과의 다년생 초본이다. 본초학에서는 강황을 생약으로 사용 시 성질이 따듯해서 혈액순환을 촉진시키고 통증을 제거하는 효과가 탁월하다고 하였다. 또한 몇몇 나라에서는 전통적으로 염증을 치료하는데 사용해 왔다. 강황에 함유된 생리활성물질인 커큐민(curcumin)은 항산화, 항염증, 항바이러스 효능이 우수한 것으로 알려진 바 있다.
"카카오(Theobroma Cacao (Cocoa))" 나무는 벽오동과의 상록 교목으로 높이는 5~10m이며, 잎은 어긋나고 긴 타원형이다. 꽃은 6월에 연한 붉은색의 오판화로 피고 열매는 삭과로 누런색이나 짙은 갈색으로 10월에 익는다. 카카오씨는 가공하여 코코아, 초콜릿의 원료로 쓰이며 코코아나무(Theobroma cacao)라고 부르기도 한다. 노화를 방지하는 항산화 물질인 에피카테킨, 카테킨, 탄닌, 카카오폴리페놀, 비타민 E 등을 함유하고 있다. 카카오씨에 함유되어 있는 항산화 물질은 프리라디칼을 제거하고 그 독성으로부터 몸을 지키는 작용을 한다.
본 발명은 가수분해 효소처리 프로폴리스, 로얄젤리 및 꿀의 혼합추출물과 카바카바, 강황 및 카카오씨의 효소추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 일 구체예에 따르면, 상기 가수분해 효소처리 프로폴리스, 로얄젤리 및 꿀의 혼합추출물은 다음과 같이 제조된다.
먼저, 프로폴리스, 로얄젤리, 꿀을 물, 탄소수 1~4의 저급 알코올, 에틸아세테이트, 글리세린, 에틸렌글리콜, 프로필렌글리콜 및 부틸렌글리콜로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 용매로 추출한다. 추출원물인 프로폴리스, 로얄젤리, 꿀을 혼합하여 추출할 수도 있고, 각각의 추출물을 제조한 후 혼합할 수도 있다. 이어서, 상기 프로폴리스, 로얄젤리 및 꿀 혼합추출물을 가수분해효소, 바람직하게는 β-글루코시다아제로 처리하여 가수분해물을 얻는다. 이때, 상기 프로폴리스, 로얄젤리 및 꿀은 각각 1~2:1~2:3~5의 중량비율로 혼합하며, 바람직하게는 1:2:5의 중량비율로 혼합한다.
상기 비율로 혼합한 후 가수분해물을 제조함으로써 활성성분이 강화되어 더욱 우수한 피부개선활성을 나타내었다.
상기 가수분해 효소를 처리한 프로폴리스, 로얄젤리 및 꿀의 혼합추출물은 프로폴리스, 로얄젤리 및 꿀의 혼합추출물에 비하여 우수한 피부염증완화, 항산화 및 피부보습활성을 나타내지만, 상기 추출물과 함께 카바카바, 강황 및 카카오씨의 효소추출물을 유효성분으로서 함유하는 경우에 더욱 우수한 활성을 나타내었다.
본 발명의 일 구체예에 따르면 상기 카바카바, 강황 및 카카오씨의 효소추출물은 다음과 같이 제조된다.
먼저, 카바카바의 잎, 뿌리, 줄기의 혼합물, 강황 및 카카오씨를 패각 용해액을 추출용매로 사용하여 추출물을 제조한다. 상기 패각 용해액은 용출(溶出)된 패각의 유용성분을 함유하는 알칼리성 용액으로서, 본 발명의 일 구체예에 따르면 다음과 같은 방법으로 제조된다. 먼저, 패각을 고온으로 소성하여 분말화하고, 정제수에 상기 분말을 함침시키고 가열하여 강알카리 용액을 제조한다. 보다 구체적으로는 먼저 굴, 모시조개 및 전복으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 하나의 패류의 껍질(貝殼)을 1000~1500℃에서 10~30분간 소성시켜 100~2000 매쉬(mesh) 크기로 분쇄한다. 상기 패각분말을 10~20배 부피의 정제수에 넣어 100~120℃에서 5~30분 가열한다. 여과를 통해 고형 분말을 제거하여 여액을 얻는다. 상기 패각 용해액은 pH 8~10, 더욱 바람직하게는 pH 10의 강알칼리성을 나타내는 것을 사용한다.
상기 패각 용해액으로 추출한 카바카바, 강황 및 카카오씨의 혼합추출물을 다시 가수분해효소, 바람직하게는 β-글루코시다아제를 처리하여 효소추출물을 제조한다. 이때, 상기 카바카바, 강황 및 카카오씨의 효소추출물은 카바카바, 강황 및 카카오씨가 각각 1~3:1~3:1~3의 중량비율로 혼합되어 제조되는 것이며, 1:3:2의 중량비율로 혼합되어 제조되는 경우에 가장 우수한 염증완화, 항산화 및 피부보습활성을 나타내었다.
유효성분으로서의 상기 가수분해 효소처리 프로폴리스, 로얄젤리 및 꿀의 혼합추출물과 카바카바, 강황 및 카카오씨의 효소추출물은 화장료 조성물 전체 중량에 대하여 0.1~10 중량% 함유된다. 이때, 상기 가수분해 효소처리 프로폴리스, 로얄젤리 및 꿀의 혼합추출물과 카바카바, 강황 및 카카오씨의 효소추출물은 각각 1~2:1~2의 중량비율로, 더욱 바람직하게는 1:2의 중량비율로 함유된다.
본 발명의 상기 가수분해 효소처리 프로폴리스, 로얄젤리 및 꿀의 혼합추출물과 카바카바, 강황 및 카카오씨의 효소추출물은 그 상승작용에 의하여 염증과 관련된 인자의 발현 억제효과(시험예 2, 6), 보습과 관련된 인자의 발현 증가 효과(시험예 3, 4, 7, 8), 항산화 효능(시험예 5, 9)에 있어서 우수하게 나타났다.
상기 화장료 조성물은 염증완화용, 항산화용 또는 피부보습용 화장료로 유용하게 사용될 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물은 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조 될 수 있으며, 그 예로는 화장수, 크림, 에센스, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 팩, 바디 로션, 바디 오일, 바디 젤, 샴푸, 린스, 헤어 컨디셔너, 헤어 젤, 화운데이션, 립스틱, 마스카라, 메이크업 베이스 등을 들 수 있다.
[실시예]
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 실시예를 들어 상세하게 설명하기로 한다. 다만 하기의 실시예는 본 발명의 내용을 예시하는 것일 뿐 본 발명의 범위가 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 실시예는 당업계에서 평균적인 지식을 가진 자에게 본 발명을 보다 완전하게 설명하기 위해 제공되는 것이다.
제조예 1: 프로폴리스추출물의 제조
프로폴리스(호주(원산지), Threespears nutritional PTY (브랜드), 미래바이오텍(수입업체))에 추출용매로서 70% 함수 에탄올 5배 중량을 넣고 냉각 콘덴서가 달린 추출기(Cosmos-660, 경서기계)에서 80~100℃로 가열하여 2 시간씩 총 3회 추출하였다.
위의 방법으로 추출한 뒤 3일간 실온에서 방치하여 침전물을 300메쉬 여과지로 여과하고, 침전물을 에드벤텍 5번 여과지와 와트만 GFC 150mm 여과지로 2번 여과하였다. 그리고 감압 농축기(Coolace CCA-1100, EYELA)를 이용하여 40~50℃의 온도에서 농축한 후 스프레이 드라이어(B-290, BUCHI사)를 이용하여 인렛(Inlet) 온도 180℃, 흡입기(Aspirator) 효율 100%(35㎤/시간), 펌프(Pump) 효율 25%(7.5㎖/분), 노즐클리너 4(Nozzle Cleaner 4) 및 유량계(Rotameter):30㎜(357리터/시간)의 조건으로 건조시켜 표제의 추출분말 10g을 얻었다.
제조예 2: 로얄젤리 추출물의 제조
로얄젤리(스페인(원산지), Inner velyc(브랜드) 두손에약초(수입업체))에 추출용매로서 70% 함수 에탄올 5배 중량을 넣고 냉각 콘덴서가 달린 추출기(Cosmos-660, 경서기계)에서 80~100℃로 가열하여 2 시간씩 총 3회 추출하였다.
위의 방법으로 추출한 뒤 3일간 실온에서 방치하여 침전물을 300메쉬 여과지로 여과하고, 침전물을 에드벤텍 5번 여과지와 와트만 GFC 150mm 여과지로 2번 여과하였다. 그리고 감압 농축기(Coolace CCA-1100, EYELA)를 이용하여 40~50℃의 온도에서 농축한 후 스프레이 드라이어(B-290, BUCHI사)를 이용하여 인렛(Inlet) 온도 180℃, 흡입기(Aspirator) 효율 100%(35㎤/시간), 펌프(Pump) 효율 25%(7.5㎖/분), 노즐클리너 4(Nozzle Cleaner 4) 및 유량계(Rotameter):30㎜(357리터/시간)의 조건으로 건조시켜 표제의 추출분말 10g을 얻었다.
제조예 3: 꿀 추출물의 제조
아카시아 꿀 원액을 중량 대비 10배의 물에 넣고 잘 저어주면서 90~95℃에서 2시간 동안 추출 및 냉각 후 에드벤텍 5번 여과지와 와트만 GFC 150mm 여과지로 2번 여과하였다. 그리고 감압 농축기(Coolace CCA-1100, EYELA)를 이용하여 40~50℃의 온도에서 농축한 후 스프레이 드라이어(B-290, BUCHI사)를 이용하여 인렛(Inlet) 온도 180℃, 흡입기(Aspirator) 효율 100%(35㎤/시간), 펌프(Pump) 효율 25%(7.5㎖/분), 노즐클리너 4(Nozzle Cleaner 4) 및 유량계(Rotameter):30㎜(357리터/시간)의 조건으로 건조시켜 표제의 추출분말 10g을 얻었다.
제조예 4~6: 카바카바, 강황 및 카카오씨 효소추출물의 제조
건조 후 분쇄된 카바카바의 잎, 뿌리, 줄기 혼합물, 강황 및 카카오씨를 하기 표 1의 중량비로 혼합(총100g)한 후, 추출용매로서 70% 함수 에탄올 5배 중량을 넣고 냉각 콘덴서가 달린 추출기(Cosmos-660, 경서기계)에서 80~100℃로 가열하여 2 시간씩 총 3회 추출하였다.
위의 방법으로 추출한 뒤 3일간 실온에서 방치하여 침전물을 300메쉬 여과지로 여과하고, 침전물을 에드벤텍 5번 여과지와 와트만 GFC 150mm 여과지로 2번 여과하였다. 그리고 감압 농축기(Coolace CCA-1100, EYELA)를 이용하여 40~50℃의 온도에서 농축한 후 스프레이 드라이어(B-290, BUCHI사)를 이용하여 인렛(Inlet) 온도 180℃, 흡입기(Aspirator) 효율 100%(35㎤/시간), 펌프(Pump) 효율 25%(7.5㎖/분), 노즐클리너 4(Nozzle Cleaner 4) 및 유량계(Rotameter):30㎜(357리터/시간)의 조건으로 건조시켜 표제의 추출분말 10g을 얻었다.
추출분말 10g을 아세테이트 버퍼(acetate buffer, pH 4.0) 500ml와, β-글루코시다아제 효소 25ml을 넣어 55℃에서 100rpm으로 4시간 동안 반응시켰다. 다음으로 90℃로 5분간 가온하여 효소 반응을 완료한 후 반응물을 진공 농축하였다. 농축물은 60℃에서 30시간 건조하였다. 위의 방법으로 추출한 뒤 3일간 실온에서 방치하여 침전물을 300메쉬 여과지로 여과하고, 침전물을 에드벤텍 5번 여과지와 와트만 GFC 150mm 여과지로 2번 여과하였다. 그리고 감압 농축기(Coolace CCA-1100, EYELA)를 이용하여 40~50℃의 온도에서 농축한 후 스프레이 드라이어(B-290, BUCHI사)를 이용하여 인렛(Inlet) 온도 180℃, 흡입기(Aspirator) 효율 100%(35㎤/시간), 펌프(Pump) 효율 25%(7.5㎖/분), 노즐클리너 4(Nozzle Cleaner 4) 및 유량계Rotameter): 30㎜(357리터/시간)의 조건으로 건조시켜 효소추출물을 얻었다.
중량비 카바카바 강황 카카오씨
제조예 4 1 1 1
제조예 5 2 1 3
제조예 6 1 3 2
제조예 7: 패각 분말 및 용해액 제조
굴 패각 1kg을 1200℃ 직, 간접 열로 30분간 소성시켜 분쇄기로 패각을 200매쉬로 분쇄하였다. 굴 패각 분말을 10배 부피의 정제수에 넣어, 100℃의 열로 30분 가열하였다. 필터로 고형 분말을 분리시켜 패각 용해액을 얻었다.
제조예 8~10: 효소처리 프로폴리스, 로얄젤리 및 꿀 혼합추출물의 제조
상기 제조예 1 내지 3의 프로폴리스추출물 분말, 로얄젤리추출물 분말, 꿀 추출물 분말을 하기 표 2의 중량비로 혼합(총100g)한 후, 아세테이트 버퍼(acetate buffer, pH 4.0) 500ml와, β-글루코시다아제 효소 25ml을 넣어 55℃에서 100rpm으로 4시간 동안 반응시켰다. 다음으로 90℃로 5분간 가온하여 효소 반응을 완료한 후 반응물을 진공 농축하였다. 농축물은 60℃에서 30시간 건조하였다. 위의 방법으로 추출한 뒤 3일간 실온에서 방치하여 침전물을 300메쉬 여과지로 여과하고, 침전물을 에드벤텍 5번 여과지와 와트만 GFC 150mm 여과지로 2번 여과하였다. 그리고 감압 농축기(Coolace CCA-1100, EYELA)를 이용하여 40~50℃의 온도에서 농축한 후 스프레이 드라이어(B-290, BUCHI사)를 이용하여 인렛(Inlet) 온도 180℃, 흡입기(Aspirator) 효율 100%(35㎤/시간), 펌프(Pump) 효율 25%(7.5㎖/분), 노즐클리너 4(Nozzle Cleaner 4) 및 유량계Rotameter): 30㎜(357리터/시간)의 조건으로 건조시켜 혼합추출물을 얻었다.
중량비 프로폴리스 로얄젤리 꿀
제조예 8 1 1 3
제조예 9 2 1 3
제조예 10 1 2 5
제조예 11~13: 패각 용해액을 이용한 카바카바, 강황 및 카카오씨 혼합추출물의 제조
추출기에 정제수로 세척한 뒤 건조한 카바카바의 잎, 뿌리 및 줄기 혼합물, 강황, 카카오씨를 하기 표 3의 중량비로 혼합(총1kg)하고 상기 제조예 7의 패각 용해액(pH 10)을 10배 부피량을 가하여 추출기(Cosmos-660, 경서기계)에서 80~100℃로 가열하여 2 시간씩 총 3회 추출하였다. 위의 방법으로 추출한 뒤 3일간 실온에서 방치하여 얻은 침전물을 300메쉬 여과지로 여과하고, 침전물을 에드벤텍 5번 여과지와 와트만 GFC 150mm 여과지로 2번 여과하였다. 그리고 감압 농축기(Coolace CCA-1100, EYELA)를 이용하여 40~50℃의 온도에서 농축한 후 스프레이 드라이어(B-290, BUCHI사)를 이용하여 인렛(Inlet) 온도 180℃, 흡입기(Aspirator) 효율 100%(35㎤/시간), 펌프(Pump) 효율 25%(7.5㎖/분), 노즐클리너 4(Nozzle Cleaner 4) 및 유량계(Rotameter):30㎜(357리터/시간)의 조건으로 건조시켜 혼합추출물을 얻었다.
중량비 카바카바 강황 카카오씨
제조예 11 1 1 1
제조예 12 2 1 3
제조예 13 1 3 2
제조예 14~16: 카바카바, 강황 및 카카오씨 효소추출물의 제조
제조예 11~13에서 제조한 추출물을 아세테이트 버퍼(acetate buffer, pH 4.0) 500ml와, β-글루코시다아제 효소 25ml을 넣어 55℃에서 100rpm으로 4시간 동안 반응시켰다. 다음으로 90℃로 5분간 가온하여 효소 반응을 완료한 후 반응물을 진공 농축하였다. 농축물은 60℃에서 30시간 건조하였다. 위의 방법으로 추출한 뒤 3일간 실온에서 방치하여 침전물을 300메쉬 여과지로 여과하고, 침전물을 에드벤텍 5번 여과지와 와트만 GFC 150mm 여과지로 2번 여과하였다. 그리고 감압 농축기(Coolace CCA-1100, EYELA)를 이용하여 40~50℃의 온도에서 농축한 후 스프레이 드라이어(B-290, BUCHI사)를 이용하여 인렛(Inlet) 온도 180℃, 흡입기(Aspirator) 효율 100%(35㎤/시간), 펌프(Pump) 효율 25%(7.5㎖/분), 노즐클리너 4(Nozzle Cleaner 4) 및 유량계Rotameter): 30㎜(357리터/시간)의 조건으로 건조시켜 표제의 효소추출물을 얻었다.
시험예 1: 세포 독성 여부 확인
MTT assay법은 MTT [3-(4,5-dimethythiasol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide] 시약이 세포 내로 흡수된 후 미토콘드리아의 숙신산 탈수소효소(succinate dehydrogenase)에 의해 포마잔(formazan)을 형성하는데 이 물질의 세포 내 축적은 미토콘드리아의 활성, 넓게는 세포의 활성을 의미하는 것으로써 세포의 생존율을 측정하는 대표적인 방법이다.
각각의 유전자 발현을 확인하기 위해 세포를 1×105cell/well의 밀도로 96 well에 200㎕ 배지와 함께 분주한 뒤 5% CO2, 37℃ incubator에서 24시간 배양한 후 배지를 버리고 PBS로 씻어준 다음 같은 양의 배지와 PBS에 녹인 시료를 0.1%에서 5.0%까지 다양한 농도에 따라 각 well에 처리하여 24시간 배양하였다. 배양이 끝나기 4시간 전에 PBS에 녹인 5㎎/㎖ MTT를 20㎕씩 각 well에 첨가하고 알루미늄 호일로 차광시킨 후 3간 동안 5% CO2 및 37℃ 조건의 incubator에서 배양하였다. 배양액을 제거하고 DMSO용액 200㎕를 첨가하여 37℃ incubator에서 1시간 반응 시킨 후 ELISA reader를 이용하여 570nm에서 흡광도를 측정하여 비교하였다. 세포 생존율은 하기 식에 의해 산출되었고, 그 결과는 하기 표 4에 나타내었다.
세포생존율(%)=시료첨가군의 흡광도/대조군의흡광도×100
구분 세포 생존율(%)
0.1% 0.5 % 1 %
제조예 1 100 101 100
제조예 2 100 101 100
제조예 3 100 100 100
제조예 4 101 100 100
제조예 5 100 100 101
제조예 6 100 101 100
제조예 7 101 100 100
제조예 8 100 100 101
제조예 9 100 101 100
제조예 10 101 100 100
제조예 11 100 100 101
제조예 12 100 101 100
제조예 13 101 100 100
제조예 14 100 101 100
제조예 15 101 100 100
제조예 16 100 100 101
상기 표 4의 결과에서 보는 바와 같이, 상기 제조예의 추출물들을 적용한 시료 모두 높은 세포생존율이 확인됨에 따라 세포 독성에는 영향을 미치지 않는 것으로 확인되었고, 이에 안전에는 문제가 없는 것을 확인하였다.
시험예 2: 염증매개인자 발현 억제효과 확인
RAW264.7 세포를 10% FBS가 첨가된 DMEM 배지를 이용하여 5×105 cell/well로 조절한 후, 12 well plate에 접종하고 18시간 동안 배양하였다. 배양한 뒤 12시간 동안 기아상태를 유지시킨 후, LPS 10ng/mL와 시료를 처리하고 24시간 동안 배양하였다. 배양된 세포에서 RNA를 추출하여 Reverse transcription polymerase chain reaction(RT-PCR)을 통해 TNF-α의 발현 억제율을 확인하였다. TNF-α 발현 억제율은 하기 식에 의해 산출되었고, 그 결과는 하기 표 5에 나타내었다. 대조군으로는 덱사메타손(Dexamethason)을 사용하였다.
TNF-α 발현억제율(%)=(시료 TNF-α 발현양/대조군 TNF-α 발현양)×100
구분 TNF-α 발현억제율(%)
0.1% 0.5 % 1 %
제조예 1 70.1 71.32 72.3
제조예 2 65.2 69.5 71.2
제조예 3 66.8 71.2 72.5
제조예 4 72.0 73.5 74.4
제조예 5 71.2 72.0 72.0
제조예 6 65.2 72.0 72.0
제조예 7 64.2 72.0 72.0
제조예 8 63.5 72.0 72.0
제조예 9 67.5 72.0 72.0
제조예 10 75.5 76.5 77.5
제조예 11 68.5 69.5 69.3
제조예 12 70.3 72.5 73.5
제조예 13 69.5 71.4 73.5
제조예 14 68.1 68.8 72.5
제조예 15 67.5 69.5 72.9
제조예 16 79.56 81.5 83.6
Dexamethason 73.2 73.2 75.6
상기 표 5에서 확인되는 바와 같이 0.1(wt/v)% 농도에서 시험한 시료 모두에서 TNF-α 억제 효과를 확인할 수 있었다. 그 중에서도 제조예 10의 효소처리 프로폴리스, 로얄젤리 및 꿀 혼합추출물과 제조예 16의 카바카바, 강황 및 카카오씨 효소추출물에서 가장 우수한 TNF-α 억제 효과를 나타내었다.
시험예 3: 보습관련인자 발현 증가효과 확인
CCD-986Sk 세포를 10% FBS가 첨가된 IMDM 배지를 이용하여 5×105 cell/well로 조절한 후 12 well plate에 접종하고 18시간 동안 배양하였다. 배양한 뒤 시료를 처리하고 24시간 동안 배양하였다. 배양된 세포에서 RNA를 추출하여 Reverse transcription polymerase chain reaction(RT-PCR)을 통해 Hyaluronan Synthase-3(HAS-3)의 발현 증가율을 확인하였다. HAS-3 발현 증가율은 하기 식에 의해 산출되었고, 그 결과는 하기 표 6에 나타내었다. 대조군으로는 히알루론산(Hyaluronic Acid)을 사용하였다.
HAS-3 발현증가율(%)=(시료 HAS-3 발현양/대조군 HAS-3 발현양)×100
구분 HAS-3 증가율(%)
0.1% 0.5 % 1 %
제조예 1 72.5 73.5 74.6
제조예 2 69.5 72.1 73.5
제조예 3 66.3 68.2 70.2
제조예 4 68.5 69.4 71.2
제조예 5 72.4 73.2 74.5
제조예 6 68.4 69.4 71.0
제조예 7 70.2 71.4 72.4
제조예 8 65.8 64.7 69.2
제조예 9 68.5 69.4 72.5
제조예 10 73.5 78.5 80.4
제조예 11 68.5 72.5 75.5
제조예 12 72.5 76.5 77.5
제조예 13 69.5 69.5 70.5
제조예 14 70.5 72.5 74.2
제조예 15 69.5 73.5 74.6
제조예 16 72.5 75.6 82.5
Hyaluronic Acid 73.2 73.2 75.6
상기 표 6에서 확인되는 바와 같이 제조예 10과 제조예 16에서 가장 우수한 HAS-3 증가율을 나타내었다.
시험예 4: 히알루로니다제의 활성 억제 효과 확인
히알루로니다제 활성억제 효과를 측정하였으며 모르간 엘손(Morgan-Elson)법을 응용한 방법이다. 히알루로니다제의 최종 효소 활성을 400NF unit/㎖, HA의 최종농도를 0.4㎎/㎖로 하고 활성제인 Compound 48/80 완충(buffer) 용액(0.1㎎/㎖)을 사용하여 불활성형 히알루로니다제의 활성화 단계의 저해작용을 중심으로 히알루로니다제 활성을 측정하였다. 시료는 완충용액(buffer)에 용해하여 시료 용액으로 하고 대조군은 시료 용액 대신에 완충 용액을 사용하였다. 대조군으로는 히알루론산(Hyaluronic Acid)을 사용하였다. 히아루로니다아제의 활성 저해율(%)은 아래의 수학식으로 계산하였다.
히알루로니다제 활성 저해울(%)= [(A-B)/A]×100
A : 시료를 첨가하지 않은 웰의 효소 활성
B : 시료를 첨가한 웰의 효소 활성
구분 히아루로니다제 활성 억제 효과(%)
0.1% 0.5 % 1 %
제조예 1 30.5 38.5 55.8
제조예 2 29.7 33.5 49.5
제조예 3 23.5 30.2 41.2
제조예 4 33.5 36.5 55.8
제조예 5 30.5 35.6 59.6
제조예 6 32.5 33.5 58.8
제조예 7 33.4 35.6 56.8
제조예 8 39.8 41.2 55.5
제조예 9 40.2 41.5 58.6
제조예 10 41.5 42.5 60.5
제조예 11 46.5 47.5 58.8
제조예 12 45.6 55.5 59.5
제조예 13 49.3 56.3 60.5
제조예 14 52.3 62.3 65.2
제조예 15 55.3 58.9 62.3
제조예 16 70.8 72.5 78.6
Hyaluronic Acid 73.2 73.2 75.6
상기 표 8에서 확인되는 바와 같이 제조예 10과 제조예 16에서 가장 우수한 활성억제효과를 나타내었다.
시험예 5: 항산화 효과 시험
항산화 효능을 확인하기 위하여 프리라디칼 소거능을 시험하였다. 0.1 mL에 4.1×10-5M의 DPPH용액 0.9 mL를 가한 후 상온에서 30분간 반응시켜 517 nm에서 흡광도를 측정하였다. 대조군으로는 L-ascorbic acid(100㎍/㎖)를 사용하였으며, 각 시료의 라디칼 소거능은 아래의 식에 의해 라디칼 소거능으로 계산하여 나타내었다.
Figure 112018049001322-pat00001
구분 라디칼 소거능 (%)
0.1% 0.5 % 1 %
제조예 1 55.5 58.5 61.2
제조예 2 58.5 59.5 61.5
제조예 3 57.2 59.2 63.2
제조예 4 59.5 60.1 64.5
제조예 5 60.2 61.5 63.5
제조예 6 61.5 62.5 66.5
제조예 7 62.7 62.8 63.5
제조예 8 65.5 66.8 69.5
제조예 9 66.5 66.8 70.5
제조예 10 72.5 75.6 76.5
제조예 11 73.5 74.5 76.8
제조예 12 73.5 74.6 76.5
제조예 13 74.5 76.8 78.5
제조예 14 75.6 76.3 74.5
제조예 15 77.5 78.5 79.5
제조예 16 75.6 79.5 81.5
L-ascorbic acid
(100㎍/㎖)		 85.6
상기 표 9에서 확인되는 바와 같이 제조예 9와 제조예 15에서 가장 우수한 라디칼소거능을 나타내었다.
실시예 1~3: 혼합물의 제조
가장 우수한 효과를 나타내는 제조예 10의 효소처리 프로폴리스, 로얄젤리 및 꿀 혼합추출물과 제조예 16의 카바카바, 강황 및 카카오씨 효소추출물을 선택하고 하기 표 10의 비율로 혼합하여 혼합물을 제조하였다.
중량비 제조예 10 제조예 16
실시예 1 1 1
실시예 2 2 1
실시예 3 1 2
시험예 6: 염증매개인자 발현 억제효과 확인
상기 실시예의 혼합물에 대하여 아래와 같이 상기 시험예 2와 동일한 방법으로 염증완화효과를 확인하였다. RAW264.7 세포를 10% FBS가 첨가된 DMEM 배지를 이용하여 5×105 cell/well로 조절한 후, 12 well plate에 접종하고 18시간 동안 배양하였다. 배양한 뒤 12시간 동안 기아상태를 유지시킨 후, LPS 10ng/mL와 시료를 처리하고 24시간 동안 배양하였다. 배양된 세포에서 RNA를 추출하여 Reverse transcription polymerase chain reaction(RT-PCR)을 통해 TNF-α의 발현 억제율을 확인하였다. TNF-α 발현 억제율은 하기 식에 의해 산출되었고, 그 결과는 하기 표 11에 나타내었다. 대조군으로는 덱사메타손(Dexamethason)을 사용하였다.
TNF-α 발현억제율(%)=(시료 TNF-α 발현양/대조군 TNF-α 발현양)×100
구분 TNF-α 발현억제율(%)
0.1% 0.5 % 1 %
실시예 1 71.5 75.6 78.9
실시예 2 75.6 78.5 79.5
실시예 3 80.6 82.6 85.7
Dexamethason 73.2 73.2 75.6
상기 표 11에서 확인되는 바와 같이 대조군과 비교해 볼 때, 실시예 1 내지 3은 우수한 TNF-α 발현억제율을 나타내었으며, 그 중에서도 제조예 10의 효소처리 프로폴리스, 로얄젤리 및 꿀 혼합추출물과 제조예 16의 카바카바, 강황 및 카카오씨 효소추출물을 1:2의 중량비율로 혼합한 실시예 3의 혼합물에서 가장 우수한 염증완화효과를 나타내었다. 상기 시험예 2의 제조예 10과 제조예 16의 효과와 비교해 볼 때, 큰 상승효과가 있음을 알 수 있다.
시험예 7: 보습관련인자 발현 증가효과 확인
CCD-986Sk 세포를 10% FBS가 첨가된 IMDM 배지를 이용하여 5×105 cell/well로 조절한 후 12 well plate에 접종하고 18시간 동안 배양하였다. 배양한 뒤 시료를 처리하고 24시간 동안 배양하였다. 배양된 세포에서 RNA를 추출하여 Reverse transcription polymerase chain reaction(RT-PCR)을 통해 Hyaluronan Synthase -3(HAS-3)의 발현 증가율을 확인하였다. HAS-3 발현 증가율은 하기 식에 의해 산출되었고, 그 결과는 하기 표 12에 나타내었다. 대조군으로는 히알루론산(Hyaluronic Acid)을 사용하였다.
HAS-3 발현증가율(%)=(시료 HAS-3 발현양/대조군 HAS-3 발현양)×100
구분 HAS-3 증가율(%)
0.1% 0.5 % 1 %
실시예 1 75.6 81.5 83.5
실시예 2 76.5 83.5 84.6
실시예 3 82.5 85.8 88.5
Hyaluronic Acid 73.2 73.2 75.6
상기 표 12에서 확인되는 바와 같이 상기 시험예 3의 결과와 비교해 볼 때, 실시예 1 내지 3에서 더욱 우수한 HAS-3 증가율을 나타내었다.
시험예 8: 히알루로니다제의 활성 억제 효과 확인
히알루로니다제 활성억제 효과를 측정하였으며 모르간 엘손(Morgan-Elson)법을 응용한 방법이다. 히알루로니다제의 최종 효소 활성을 400NF unit/㎖, HA의 최종농도를 0.4㎎/㎖로 하고 활성제인 Compound 48/80 완충(buffer) 용액(0.1㎎/㎖)을 사용하여 불활성형 히알루로니다제의 활성화 단계의 저해작용을 중심으로 히알루로니다제 활성을 측정하였다. 시료는 완충용액(buffer)에 용해하여 시료 용액으로 하고 대조군은 시료 용액 대신에 완충 용액을 사용하였다. 대조군으로는 히알루론산(Hyaluronic Acid)을 사용하였다. 히알루로니다아제의 활성 저해율(%)은 아래의 수학식으로 계산하였다.
히알루로니다제 활성 저해울(%)= [(A-B)/A]×100
A : 시료를 첨가하지 않은 웰의 효소 활성
B : 시료를 첨가한 웰의 효소 활성
구분 히알루로니다제 활성 억제 효과(%)
0.1% 0.5 % 1 %
실시예 1 75.6 78.6 81.2
실시예 2 72.3 80.2 82.3
실시예 3 80.5 83.5 86.3
Hyaluronic Acid 73.2 73.2 75.6
상기 표 13에서 확인되는 바와 같이 실시예 1 내지 3은 우수한 보습활성을 나타내었으며, 그 중에서도 실시예 3이 가장 우수한 효과를 나타내었다.
시험예 9: 항산화 효과 시험
항산화 효능을 확인하기 위하여 프리라디칼 소거능을 시험하였다. 0.1 mL에 4.1×10-5M의 DPPH용액 0.9 mL를 가한 후 상온에서 30분간 반응시켜 517 nm에서 흡광도를 측정하였다. 대조군으로는 L-ascorbic acid(100㎍/㎖)를 사용하였으며, 각 시료의 라디칼 소거능은 아래의 식에 의해 라디칼 소거능으로 계산하여 나타내었다.
Figure 112018049001322-pat00002
구분 라디칼 소거능(%)
0.1% 0.5 % 1 %
실시예 1 75.6 78.9 81.4
실시예 2 79.5 80.1 81.5
실시예 3 82.4 85.6 90.5
L-ascorbic acid
(100㎍/㎖)		 85.6
상기 표 14에서 확인되는 바와 같이 실시예 1 내지 3에서 우수한 항산화효과를 나타내었다.
실시예 4: 세럼의 제조
상기 실시예 3의 혼합물을 함유한 세럼을 하기의 표 15의 조성 및 함량으로 통상의 방법에 따라 제조하였다.
원료 함량(중량%)
실시예 3의 혼합물 1.0
밀납 1.0
폴리솔베이트 60 1.5
솔비탄 세스퀴올레이트 0.5
미네랄 오일 10.0
소르비탄 스테아레이트 0.5
친유형 모노스테아린산 글리세린 1.0
스테아린산 1.5
글리세릴스테아레이트/피이지-400 스테아레이트 1.0
프로필렌글리콜 3.0
카르복시폴리머 0.1
트리에탄올아민 0.1
페녹시에탄올 적량
정제수 To 100
실시예 5: 크림의 제조
상기 실시예 3의 혼합물을 함유한 크림을 하기의 표 16의 조성 및 함량으로 통상의 방법에 따라 제조하였다.
원료 함량(중량%)
실시예 3의 혼합물 1.0
시어버터 2.0
폴리솔베이트 60 1.5
솔비탄 세스퀴올레이트 0.8
미네랄 오일 10.0
디메치콘 3.0
소르비탄 스테아레이트 0.5
친유형 모노스테아린산 글리세린 1.0
세테아릴알코올 2.0
글리세릴스테아레이트/피이지??400 스테아레이트 1.0
프로필렌글리콜 3.0
카르복시폴리머 0.25
트리에탄올아민 0.25
페녹시에탄올 적량
정제수 To 100
시험예 10: 제형안정도 확인
상기 실시예 4, 5로 제조한 제형에 대하여 실온(25℃), 냉장(4℃) 및 항온(50℃)으로 일정하게 유지되는 실내, 냉장고 및 인큐베이터에서 불투명 초자 용기에 담아 12주 동안 보관 및 관찰(변색, 변취 및 분리)하며, 안정성을 확인 하였다. 결과는 표 17에 나타내었다.
온도조건 안정성 확인(변색, 변취 및 분리)
실시예 4 실시예 5
실온(25℃) 0 0
냉장(4℃) 0 0
항온(50℃) 0 0
< 제형 안정 등급 >
0: 변화 없음 1: 미세한 변화 2: 변화 3: 극심한 변화
상기 표에서 나타낸 바와 같이 실시예 4, 5 제형 모두 25℃, 4℃ 및 0℃ 온도 조건하에서 변색 변취 및 분리 현상이 나타나지 않고 안정함이 확인되었다.

Claims (10)

  1. 가수분해 효소처리 프로폴리스, 로얄젤리 및 꿀의 혼합추출물과 카바카바, 강황 및 카카오씨의 효소추출물을 유효성분으로서 화장료 조성물 전체 중량에 대하여 0.1~10 중량% 함유하는 화장료 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 상기 가수분해 효소는 β-글루코시다아제인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
  3. 제1항에 있어서, 상기 카바카바, 강황 및 카카오씨의 효소추출물은 패각 용해액을 추출용매로 하여 얻어진 카바카바, 강황 및 카카오씨의 혼합추출물을 β-글루코시다아제로 가수분해하여 제조되는 것임을 특징으로 하는 화장료 조성물.
  4. 제1항에 있어서 상기 가수분해 효소처리 프로폴리스, 로얄젤리 및 꿀의 혼합추출물은 프로폴리스, 로얄젤리 및 꿀이 각각 1~2:1~2:3~5의 중량비율로 혼합되어 제조되는 것임을 특징으로 하는 화장료 조성물.
  5. 제1항에 있어서, 상기 카바카바, 강황 및 카카오씨의 효소추출물은 카바카바, 강황 및 카카오씨가 각각 1~3:1~3:1~3의 중량비율로 혼합되어 제조되는 것임을 특징으로 하는 화장료 조성물.
  6. 제1항에 있어서, 상기 가수분해 효소처리 프로폴리스, 로얄젤리 및 꿀의 혼합추출물과 카바카바, 강황 및 카카오씨의 효소추출물은 각각 1~2:1~2의 중량비율로 함유되는 것임을 특징으로 하는 화장료 조성물.
  7. 제3항에 있어서, 상기 패각 용해액은 패각을 1000~1500℃에서 10~30분간 소성시키는 단계; 100~2000 매쉬(mesh) 크기로 분쇄하는 단계; 패각분말을 정제수에 첨가하고 100~120℃에서 5~30분 가열하는 단계; 및 필터로 분말을 분리시키는 단계를 포함하는 제조방법에 의하여 제조되는 것으로서, pH 8~10인 것임을 특징으로 하는 화장료 조성물.
  8. 제1항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 피부 염증완화용임을 특징으로 하는 화장료 조성물.
  9. 제1항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 항산화용임을 특징으로 하는 화장료 조성물.
  10. 제1항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 보습용임을 특징으로 하는 화장료 조성물.
KR1020180056935A 2018-05-18 2018-05-18 프로폴리스, 로얄젤리 및 꿀을 포함하는 천연물의 효소추출물을 함유하는 화장료 조성물 KR101884660B1 (ko)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020180056935A KR101884660B1 (ko) 2018-05-18 2018-05-18 프로폴리스, 로얄젤리 및 꿀을 포함하는 천연물의 효소추출물을 함유하는 화장료 조성물

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020180056935A KR101884660B1 (ko) 2018-05-18 2018-05-18 프로폴리스, 로얄젤리 및 꿀을 포함하는 천연물의 효소추출물을 함유하는 화장료 조성물

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR101884660B1 true KR101884660B1 (ko) 2018-08-29

Family

ID=63434879

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020180056935A KR101884660B1 (ko) 2018-05-18 2018-05-18 프로폴리스, 로얄젤리 및 꿀을 포함하는 천연물의 효소추출물을 함유하는 화장료 조성물

Country Status (1)

Country Link
KR (1) KR101884660B1 (ko)

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110882207A (zh) * 2019-12-23 2020-03-17 北京蜜慕科技有限公司 一种用于皮肤修护的精华液制备工艺与方法
WO2022035026A1 (ko) * 2020-08-12 2022-02-17 한국콜마주식회사 프로폴리스 발효추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화, 항염증 또는 피부 개선용 화장료 조성물
KR20220036265A (ko) * 2020-09-15 2022-03-22 한국콜마주식회사 로얄젤리의 락토바실러스 발효 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물
KR20220036436A (ko) * 2020-09-15 2022-03-23 코스맥스 주식회사 미세먼지로 인한 피부자극 완화 및 피부 개선용 화장료 조성물

Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2006025790A (ja) * 2004-06-17 2006-02-02 Morikawa Kenkoudou Kk プロポリスの水への可溶化方法
KR101395727B1 (ko) * 2013-10-11 2014-05-15 주식회사 스킨네이처 피록톤올아민을 유효성분으로 함유하는 피부 질환 예방 및 개선용 화장료 조성물
KR20160037612A (ko) * 2014-09-29 2016-04-06 주식회사 삼양사 로얄젤리를 포함하는 피부 보습 증진용 조성물
KR20160148174A (ko) * 2015-06-16 2016-12-26 주식회사 아미코스메틱 프로폴리스 복합 추출물을 함유하는 화장료 조성물
KR20170136956A (ko) * 2016-06-02 2017-12-12 주식회사 엘지생활건강 혼합 추출물을 포함하는 화장료 조성물
KR101810231B1 (ko) * 2016-04-01 2017-12-18 주식회사 아미코스메틱 프로폴리스 미세침 분말을 함유하는 화장료 조성물
KR20180027307A (ko) * 2016-09-05 2018-03-14 (주) 태일 항산화 효과를 가지는 화장료 조성물

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2006025790A (ja) * 2004-06-17 2006-02-02 Morikawa Kenkoudou Kk プロポリスの水への可溶化方法
KR101395727B1 (ko) * 2013-10-11 2014-05-15 주식회사 스킨네이처 피록톤올아민을 유효성분으로 함유하는 피부 질환 예방 및 개선용 화장료 조성물
KR20160037612A (ko) * 2014-09-29 2016-04-06 주식회사 삼양사 로얄젤리를 포함하는 피부 보습 증진용 조성물
KR20160148174A (ko) * 2015-06-16 2016-12-26 주식회사 아미코스메틱 프로폴리스 복합 추출물을 함유하는 화장료 조성물
KR101810231B1 (ko) * 2016-04-01 2017-12-18 주식회사 아미코스메틱 프로폴리스 미세침 분말을 함유하는 화장료 조성물
KR20170136956A (ko) * 2016-06-02 2017-12-12 주식회사 엘지생활건강 혼합 추출물을 포함하는 화장료 조성물
KR20180027307A (ko) * 2016-09-05 2018-03-14 (주) 태일 항산화 효과를 가지는 화장료 조성물

Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110882207A (zh) * 2019-12-23 2020-03-17 北京蜜慕科技有限公司 一种用于皮肤修护的精华液制备工艺与方法
WO2022035026A1 (ko) * 2020-08-12 2022-02-17 한국콜마주식회사 프로폴리스 발효추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화, 항염증 또는 피부 개선용 화장료 조성물
KR20220020669A (ko) 2020-08-12 2022-02-21 한국콜마주식회사 프로폴리스 발효추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화, 항염증 또는 피부 개선용 화장료 조성물
KR20220036265A (ko) * 2020-09-15 2022-03-22 한국콜마주식회사 로얄젤리의 락토바실러스 발효 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물
KR20220036436A (ko) * 2020-09-15 2022-03-23 코스맥스 주식회사 미세먼지로 인한 피부자극 완화 및 피부 개선용 화장료 조성물
KR102416652B1 (ko) 2020-09-15 2022-07-06 코스맥스 주식회사 미세먼지로 인한 피부자극 완화 및 피부 개선용 화장료 조성물
KR102534977B1 (ko) * 2020-09-15 2023-05-22 한국콜마주식회사 로얄젤리의 락토바실러스 발효 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR101884660B1 (ko) 프로폴리스, 로얄젤리 및 꿀을 포함하는 천연물의 효소추출물을 함유하는 화장료 조성물
KR101059471B1 (ko) 피부 노화 방지용 화장료 조성물
KR101451981B1 (ko) 난초 발효 추출물을 함유하는 피부 기능 개선 조성물
KR101697146B1 (ko) 큰엉겅퀴로부터 실리마린의 고효율 추출하는 방법
KR101501433B1 (ko) 비알코올성 지방간 질환의 예방 및 치료용 조성물
KR101452770B1 (ko) 유산균 발효액을 함유하는 항산화, 미백 및 주름개선 효과를 갖는 화장료 조성물
KR101321854B1 (ko) 효소 처리 블래더랙 및 꿀풀 혼합추출물을 유효성분으로 함유하는 주름개선 및 피부 탄력증진용 화장료조성물
KR101828584B1 (ko) 참여로, 가래나무, 도깨비 부채 및 모과나무의 복합추출물을 포함하는 항산화 또는 미백용 조성물
KR102354412B1 (ko) 혼합 꽃 추출물의 유산균 발효물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물
KR101458887B1 (ko) 히카마, 콜리플라워, 말로우 및 아이슬란드 이끼 천연 복합추출물을 유효성분으로 함유하는 항산화, 보습, 피부 자극 완화 효과를 갖는 피부 개선용 화장료 조성물
KR101930264B1 (ko) 현호색, 캣츠클로, 센티드제라늄, 아그리모니, 인동덩굴, 개박하 및 솔잣나무 복합추출물을 유효성분으로 함유하는 피지생성 억제 및 여드름 개선용 화장료 조성물
KR101178594B1 (ko) 하수오 추출물, 대추 추출물 및 황촉규 추출물을 함유하는 피부보습용 화장료 조성물
KR101333676B1 (ko) 달맞이꽃, 갈근, 솔잎 및 유근피 혼합추출물을 포함하는 모공축소 및 피지분비 억제용 화장료조성물
KR101794006B1 (ko) 식물 추출물을 포함하는 염증 개선용 조성물
KR101582974B1 (ko) 카사바 덩이줄기 효소추출물 및 피버퓨 추출물을 유효성분으로 함유하는 보습 및 염증 완화용 화장료 조성물
KR20150057333A (ko) 구상나무 추출물을 포함하는 비만 예방 또는 개선용 조성물
KR101769755B1 (ko) 엘라스테이즈 저해 효능이 향상된 류코노스톡 메센테로이데스 gfc 160704 균주, 상기 균주 또는 이의 배양액을 포함하는 주름 개선용 화장료 조성물 및 이의 제조 방법
KR102137136B1 (ko) 호박 가수분해 추출물, 구약감자 가수분해 추출물, 강황 추출물 및 카카오닙스 추출물을 포함하는 조성물
KR20160081205A (ko) 산수국 추출물을 포함하는 비만 예방 또는 개선용 조성물
KR101954275B1 (ko) 골드키위 껍질 및 용과 껍질의 복합 추출물을 유효 성분으로 함유하는 화장료 조성물 및 이의 제조 방법
KR20140054951A (ko) 발효 한방 혼합 추출물이 함유된 미백 화장료 조성물
KR101960571B1 (ko) 살구 추출물의 제조방법, 이로부터 제조된 살구 추출물 및 이를 유효 성분으로 포함하는 기능성 피부미용 또는 화장료 조성물
KR100981344B1 (ko) 피부 노화 방지용 화장료 조성물
KR100768830B1 (ko) 숙취 해소 및 항산화 활성을 가지는 개느삼 추출물
KR101889344B1 (ko) 패각 용해액을 추출용매로 하여 얻어진 오크라, 여주 및 노니 복합추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물

Legal Events

Date Code Title Description
E701 Decision to grant or registration of patent right
GRNT Written decision to grant