KR20130074807A - 서사향을 함유하는 화장품 - Google Patents

Abstract

본 발명은 서사향추출물을 함유하는 화장품에 관한 것으로서, 사향쥐로부터 얻은 사향추출물(서사향)을 포함하는 화장품을 제공한다.
본 발명의 서사향추출물을 함유하는 화장품에 의하면, 항염, 항균과 피부신진대사를 촉진시키고 진피 중의 모세혈관이 풍부하며, 분비기관의 분비를 왕성하게 하고, 신경연계 조직 중 레티쿨린(피부에서 발견된 섬유소 중의 하나), 섬유질, 콜라겐 섬유와 같은 탄성섬유를 많이 함유하고 있어, 피부 항노화와 모이스춰라이징에 비교적 좋은 치료 효과를 가지고 있다.

Description

서사향을 함유하는 화장품{COSMETICS HAVING MUSKRAT MUSK}

본 발명은 사향쥐로부터 얻은 사향추출물(서사향)을 함유하는 화장품에 관한 것이다.

아토피성 피부염은 아토피 알러지를 가진 사람에게서 나타나는 질환으로, 가려움이 매우 심한 습진, 두껍고 거칠어지는 피부, 재발되는 만성피부염 등의 증상을 보인다. 최근 환경오염물질의 노출이 증가하고 있어 아토피성 피부염 환자의 수는 날로 증가하고 있으며, 어린이의 20% 정도가 아토피성 피부염에 시달리고 있다. 한국에서의 피부 면역질환 발병률은 매년 증가하고 있어, 일례로 2004년 현재 아토피성 피부염으로 병원을 찾은 사람은 120여만 명이고 이 가운데 유아(1~4세)는 52만 7000 여명으로 나타나 전체 유아의 18%를 차지하였다. 아토피성 피부염은 유전적, 면역학적, 환경적 요인이 관여한다고 알려져 있다.

아토피성 피부염은 대부분 IgE와 연관된 면역기전에 의해 발병되는데, T 세포 이상에 의한 면역반응이 관여한다는 보고가 많으며, T 헬퍼세포 (Th cell)의 역할이 중요하다고 알려져 있다. T 헬퍼세포에는 T 헬퍼1형(Th1) 세포와 T 헬퍼2형(Th2) 세포가 포함된다. Th1 세포가 분비하는 사이토카인은 세포 매개형 면역반응에 관여하고, Th2 세포가 분비하는 사이토카인은 항체면역반응을 담당한다. 아토피성 피부염 병변에서 T 세포가 많이 발견되는데, 이 중에서 Th2 세포에 의해 분비되는 사이토카인이 아토피 발병에 중요한 역할을 한다. Th2 세포가 분비하는 IL-4, IL-13은 IgE 생성을 촉진하며, IL-5는 호염구 반응을 증진시킨다(International Immunology 2004, 16(8), p1155-1160).

Th2 사이토카인 뿐만 아니라 Th1 사이토카인인 인터페론-감마도 아토피성 피부염에 중요한 역할을 한다(Journal of Clinical Investigation 1999, 103(8), p1103-1111). 아토피성 피부염의 진전에 따라 면역반응이 달라지며, 급성 아토피성 피부염에는 Th2 세포가 관여하고, 만성 아토피성 피부염에는 Th1이 관여한다고 보고되었다. 즉, 초기에는 Th2에서 분비하는 IL-4와 IL-3가 중요하게 작용하는데, 가려움증이 생기면서 긁기 시작하면 Th1 세포가 증가한다(Journal of Clinical Investigation 2004, 113, pp651-657). Leung 등에 따르면, 집먼지 진드기 알러겐에 의한 아토피성 피부염은 두 단계로 진전되는데, 초기 단계는 Th2세포에 의하여 IL-4가 주로 생성되며, 24~48시간 뒤에는 Th1 세포에 의하여 인터페론- 감마가 생성된다(Lancet 2003, 361, p151~160). 따라서 효과적으로 아토피성 피부염을 예방, 치료 또는 개선하기 위해서는 Th1세포와 Th2 세포 모두에 영향을 미쳐 IL-4 및 인터페론-감마의 생성을 억제할 수 있는 물질 또는 조성물이 효율적일 수 있다.

NF-kB는 염증을 일으키는 유전자 발현 기구를 작동시켜 면역반응이나 염증반응에 관여하는 TNF(tumor necrosis factor), IL-1(interleukin-1), IL-6, IL-8, GM-CSF, Inos(inducible nitric oxide synthase), ICAM-1(intercellular adhesion molecule 1), E-selectin, MHC class I, II 분자 등의 발현을 증가시키는 전사인자로 알려져 있다. 따라서 NF-kB의 활성 조절이 만성 및 급성 염증 질환의 치료에 유용하게 사용될 수 있으며, NF-kB 억제제는 아토피성 피부염 치료효과를 나타낼 수 있다.

아토피성 피부염 치료제로는 면역억제제인 사이클로스포린 에이, FK-506, 스테로이드계 화합물 등이 사용되고 있다. 그러나 사이클로스포린 에이는 고혈압, 신독성, 약물상호작용 등의 심각한 부작용을 나타낸다. 스테로이드 기반 물질들은 심각한 부작용 때문에 의약품 외에 사용이 극히 제한되고 있으며. 실제로 일반적으로 널리 사용되고 있는 스테로이드계 아토피 치료제의 경우, 그 효과에 비해 높은 부작용 때문에 시장규모가 계속 축소되고 있다. FK-506은 호르몬 교란이 염려되는 것으로 알려져 있다. 따라서 이러한 부작용을 없애고 효능이 뛰어난 새로운 약제의 개발을 위하여 신규 아토피 개선제의 탐색 및 개발이 필요한 실정이다.

따라서 천연약재로서 아토피 치료용 조성물의 개발이 시도되고 있으며, 문주란 추출물(한국공개특허 제2007-3365호), 향나무 추출물(등록특허 제10-0614676호), 산양유 추출물(등록특허 제10-0719761호)등이 보고되었으며, 생지황, 강활, 형개, 방풍, 창출, 천궁 등 다수의 약재를 포함하는 조성물(등록특허 제10-0682048호)이 있으나, Th1 및 Th2 세포를 동시에 억제하며, 더불어 NF-kB 억제효과를 갖는 약재에 대한 연구는 희박한 실정이다.

사향은 천연 동물성 향료로서 무스크(Musk)라고도 한다. 사향은 높은 산지에서 사향노루의 사향선에서 분비되는 향즙을 건조한 것을 포함하여, 사향소, 사향고양이, 사향쥐 등이 주로 사향을 포함하고 있으며, 특히 사향쥐의 사향(서사향)이 이물질이 적고 우수한 효능을 나타내는 것으로 알려져 있다. 사향쥐는 물에 사는 초식동물로 기억력이 아주 뛰어나 중국에서는 지혜를 상징하는 길상의 동물로 삼았다는 전설도 있다. 사향쥐의 주요 서식처는 북아메리카, 시베리아, 중국, 북한 등이며, 주로 초식이며, 수초가 무성한 물가에서 서식하고 수컷만 사향을 분비하며 생후 2년차부터 사향을 채취한다.

사향의 효과는 본초강목 및 동의학 등에 효과가 잘 알려져 있다. 사향의 주성분은 무색의 기름 같은 액체 무스콘(Muscone)이며 보통 IPM에 녹여 추출한다. 사향은 죽은 사람도 살린다는 속설이 말해주듯 옛날부터 생약으로 강심, 흥분, 진정제로 사용되었으며, 또 기절했을 때 정신을 들게 하는 약으로 내복되었고, 특히 막힌 기운을 통하게 한다 해서 중풍이나 전신마비 등에 상비약으로 쓰였다.

사향의 약리 작용으로는 항염, 항균, 혈액순환계통에 대한작용, 남성 호르몬에 대한 작용 등 다양한 효과가 확인되었다. 사향의 주 생산 동물인 사향노루가 멸종위기 동물로 지정되고 사향고양이는 사스(Sars)의 주 매개 동물로 밝혀져 중국에서 대량 포획, 살 처분 되어 사실상 사육이 불가능하므로 유일하게 머스크랫(사향쥐)에서 채취되는 서사향(鼠麝香)이 노루사향을 대체할 새로운 천연물질로 떠오르고 있다.

본 발명은 상기한 바와 같은 문제점을 해결하기 위하여 안출된 것으로서, 사향쥐로부터 얻은 사향추출물(서사향)을 포함하는 화장품을 제공하는데 있다.

본 발명의 서사향추출물을 함유하는 화장품은, 사향쥐로부터 얻은 사향추출물(서사향)을 포함하는 화장품을 제공한다.

본 발명의 서사향추출물을 함유하는 화장품에 의하면, 항염, 항균과 피부신진대사를 촉진시키고 진피 중의 모세혈관이 풍부하며, 분비기관의 분비를 왕성하게 하고, 신경연계 조직 중 레티쿨린(피부에서 발견된 섬유소 중의 하나), 섬유질, 콜라겐 섬유와 같은 탄성섬유를 많이 함유하고 있어, 피부 항노화와 모이스춰라이징에 비교적 좋은 치료 효과를 가지고 있다.

이하, 본 발명의 바람직한 실시예를 상세히 설명하기로 한다. 아울러 본 발명을 설명함에 있어서, 관련된 공지 구성 또는 기능에 대한 구체적인 설명이 본 발명의 요지를 흐릴 수 있다고 판단되는 경우에는 그 상세한 설명을 생략한다.

[실시예]

머스크랫(사향쥐)은 포유류 쥐목 비단털쥐과로서 학명은 Ondatra zibethicus이다. 체형은 타원형이며 몸길이는 약 35㎝정도이고, 꼬리는 25㎝, 체중은 약 2㎏이다. 생활서식지는 수초가 무성한 소택지와 호수이고, 주 활동은 봄에서 늦가을까지이며, 겨울에는 활동이 적으나 동면은 하지 않는다.

머스크랫은 초식동물로 나무껍질, 수초, 갈대뿌리, 배추, 홍당무를 먹고, 일부일처제의 형태로 사육하고 있으나, 서사향 채취를 위하여 수컷을 분리하여 사육하고 번식을 위해서는 야생에서와 같이 일부다처제로 사육하는 방법이 연구되고 있다. 생물학적 특징은 머스크랫 수컷의 하복부에 위치하는 향낭에서 부생식선을 통해 번식에 의한 발정증상으로 서사향을 분비한다. 서사향은 살색의 액체로서 향긋한 향을 내며, 수컷 한 마리가 1년에 평균 4∼5g을 생산한다. 중국문헌과 북한보고서에 의하면 서사향은 사향노루의 사향과 약효가 비슷하여 대체사향으로 연구가 진행되고 있고, 약제로의 개발로 진행 중에 있는 것으로 알려져 있다.

사향의 약리적 작용으로는 발한과 이뇨를 촉진하고 중추신경계를 흥분시키며, 특히 호흡중추와 심장의 중추신경을 흥분시켜 정신이 혼미한 환자를 소생시키는 것을 돕는 작용이 있다. 그 외 염증은 초기에서 중기에 걸쳐 항염증, 항균작용이 있으며, 혈액순환계통에 대한 작용, 자궁흥분작용, 항암작용, 강심, 진정, 호흡개선, 혈압강하, 항스트레스 등이 있는 것으로 알려져 있다.

사향은 고급 한약품의 필수적인 약재로서 우리나라에서는 우황청심원, 구심, 기응환, 사향소합원, 공진단 등에 사용되고 있다. 또한 약침요법에서도 사향은 소중한 약재로 경락약침액의 기제로 사용되고 있으며, 약침용법의 대중화로 최근 사향 관련 약침에 대한 논문이 많이 보고되고 있다. 대표적인 한방원료로 사용되는 사향노루의 사향은 사향노루 수컷의 배꼽과 생식기 중간 복부에 있는 향낭을 건조한 것으로, 난원형 혹은 타원형으로 직경이 약 3㎝만한 크기까지 이르러 30g 정도인 것도 있다.

사향성분 중 주성분은 강하고 특이한 향기가 있는 muscone으로 화학 구조식은 C₁₆H₃₀O으로 사향 향내가 나는 무색의 점성이 있는 유상액체로 분자량 238, 끓는점 328℃이며, 330℃에서는 일부 분해된다. 물에는 잘 녹지 않으나, 알코올에는 잘 녹는다.

하지만 사향은 Convention on International Trade in Endangered Species of Wild Fauna and Flora(CITES: 멸종 위기에 처한 동ㅇ식물의 국제 무역에 관한 조약; 일명 워싱턴 조약(Washington Convention))을 통하여 엄격하게 세계적 희귀동물로서 보호받고 있어서 도축을 통한 사향의 채취는 금지되어져 있다. 따라서 사향 대체물질의 개발이 절실히 요구되어져 합성 muscone을 개발하였으나, 2005년 미국에서는 합성 muscone이 환경호르몬물질을 함유하여 인체에 악영향을 미친다는 연구가 보고되어 인공사향의 사용에 대한 논란이 있었으며, 대표적 합성사향인 musk ambrett는 인체 내에서의 잠재적 감광성으로 인해서 유럽에서 사용이 규제되다가 결국에는 1995년부터 사용이 금지되었다. 인공합성사향은 염소계 화학물질과 비슷하게 다양한 종류의 반응을 나타나며, 높은 흡착성 유기화합물(HHCB(5.9)와 ANTN(5.7))로 지방에 대한 농축정도가 높아 지방이 풍부한 조직에서 높은 축적률을 나타내며, 해양포유류의 지방에서 높게 나타나고 있다. 미국에서는 인공합성사향이 가정폐수 등의 유입으로 계류, 강, 호수에 다량 축적되어 있고, 이를 농업용수로 이용함으로써 농업토양에 축적될 위험이 있다고 보고된 바 있어 차세대 환경오염 물질로 지적되어 있다. 또한 대체물질 사용의 Civetone〔(Z)-9-cycloheptadecen-1-one〕은 영묘향의 주성분으로 사향고양이의 배꼽 주위의 생식선에서 분비되는 노란 액상 내분비물을 지칭하는 용어이며, 이 분비물은 상기의 고양이들을 감금상태에 두었다가 생식선에 규칙적인 자극을 줌으로서 인위적으로 얻어내는 물질이다. 하지만 사향고양이는 SARS 발생원으로 알려져 중국에서는 도살, 살처분하고 있어 생산 공급이 어려운 현실이다.

따라서 사향노루와 사향고양이에서의 사향과 영묘향 채취가 어렵고, 인공합성사향 또한 생체와 환경에 심각한 문제를 야기시킴으로 대체 사향의 개발은 아주 시급하다. 천연사향의 채취 어려움과 인공합성사향의 문제점을 해결하기 위하여 새로운 사향대체물질을 개발하는 방안으로 머스크랫 서사향을 사향의 대체물질로 개발을 한다면, 중추신경계에 대한 작용, 호흡 및 순화기계통에 대한 영향, 자궁에 대한 작용, 항균, 항염증 작용, 피부염 치료제로서의 효능과 고부가가치를 갖는 가축으로 사육농가에서 호응도도 높을 것으로 예상되며, 앞으로 고부가가치를 창출할 수 있어 현재 어려운 축산여건을 타개하는데 큰 도움이 될 것으로 생각된다. 또한, 서사향을 의약품을 비롯하여 향장품 또는 기능성 식품의 개발에 관한 연구로 의약품선도물질 개발이라는 측면에서 볼 때 다양한 천연자원에서 생리활성 물질을 탐색하고자 하는 시도는 매우 중요하다.

이에 대한 항혈전 활성물질의 탐색으로서 혈액의 응고를 억제하는 활성을 말한다. 혈액의 응고계는 다단계의 혈액응고를 가지므로 미세한 혈액응고 유발에도 이를 증폭하여 민감하게 반응한다. 혈액응고 기작은 혈관벽에 혈소판이 점착, 응집하여 혈소판 혈전을 중심으로 수많은 인자들의 여러 단계반응을 거쳐 혈전이 형성되는 것이다.

혈전은 정맥 및 동맥에서 혈액순환을 방해하여 조직으로의 영양공급 및 산소공급을 차단함으로써 뇌출혈, 뇌혈전, 심부전, 심근경색, 동맥경화 등 대표적인 성인병의 원인이 된다. 현재까지 혈전성 질환예방과 치료에 heparin, coumarin, aspirin, urokinase 등의 다양한 항응고제, 항혈소판제, 혈전용해제 등이 사용되고 있으나, 이들은 가격이 매우 높을 뿐 아니라 출혈성 부작용과 위장장해 및 과민반응 등으로 그 사용이 한정되고 있는 실정이다.

혈관벽 손상과 같은 혈액응고 유발은 내인계 경로를 통하여 혈액을 응고시키며, 또한 외상 등에 의한 유발은 외인계 경로를 통하여 혈액을 응고 시킨다. 내인계 유발에 의한 혈액응고 시간은 APTT(Activated Partial Thromboplastin Time)로 측정하며, 외인계 유발에 의한 혈액응고 시간은 PT(Prothrombin Time)로 측정한다. 또한 thrombin에 의해 fibrinogen이 fibrin으로 되는 일반적 대사경로로서, 이는 TT(Thrombin Time)으로 측정한다. 서사향 추출물에서 항혈전 활성은 thrombin inhibition에 준한 시험으로 측정하였다.

본 실험에서는 머스크랫의 서사향을 채취하여 서사향의 일반성분과 주요구성성분을 조사하였고, 항혈전 활성 물질분리와 활성검정을 실시하였으며, 서사향을 이용한 사향대체 물질개발에 기초자료를 제공하고자한다.

[실험예 1]

<서사향의 일반적인 성분을 분석하는 실험>

1) 시료 및 시약

이러한 서사향은 머스크랫 수컷의 하복부에 위치하는 향낭에서 부생식선을 통해 분비되는 것을 채취한 것으로, 사향과 함께 (주)사향나라에서 공급받아 사용하였다. 시약으로는 Albumin bovine serum(sigma Co., USA), D(+)-Glucose 98%(JUNSEI), Ultrospec 4000(Pharmacia Biotech), NaCl, CuSO₄ㅇ5H₂0, KNaC₄H₄O₆ㅇH₂O (Rochell시약), NaOH, KI 등을 사용하였다. 그 밖의 용매로는 chloroform, methanol, ethanol, ethylacetate, n-hexane 등을 사용하였다.

2) 실험방법

일반성분은 AOAC법에 의하여 수분은 Oven 건조법, 지방은 Folch 추출법, 단백질은 Buiret법, 회분은 직접회화법, 총당함량은 페놀-황산법으로 측정하여 조사하였다.

가) 수분함량 측정

수분함량 측정은 Oven 건조법으로 서사향 0.5g을 준비된 은박지 수기에 넣어 102℃에서 24시간 건조하고, Dessicator에 방냉 한 뒤에 무게를 측정하였다.

WHC(%):보수력 = [(전수분-유리수분)/전수분] ×100

나) 조회분 측정

서사향 1g을 도가니에 넣어 600℃ 화로에서 2시간 동안 태우고, 200℃ 이하로 내려가면 도가니를 꺼내어 dessicator에 넣고 30분간 방냉하여 무게를 측정하였다.

조회분(%) = 회화로 남은 시료무게 × 100/시료무게

다) 조지방 측정

서사향 1g에 시료의 20배가 되는 chloroform/methanol 혼합용액(2:1) 20㎖으로 1시간 동안 지질을 추출하여, 여과지(Whatman No.1)를 이용하여 여과하였다. 여과액에 0.9% NaCl 용액을 0.2배 첨가한 후, 1시간 동안 정치하여 chloroform/methanol/H₂O 혼합용액(3:47:48) 10㎖로 세척하여 상층액인 methanol을 최대한 제거한 뒤 하층액인 chloroform을 건조시켜 무게를 측정하였다.

라) 단백질 측정

단백질의 측정은 Buiret법에 의한 방법으로 CuSO₄ㅇ5H₂0(3g) + KNaC₄H₄O₆ㅇH₂O (Rochell시약 9g)을 500㎖의 0.2N NaOH 용액에 용해시키고, 이에 KI 5g을 첨가한 후, 0.2N NaOH 용액을 가하여 1ℓ로 만든다. 단백질 표준용액과 서사향 시료는 saline(8.5g/ℓ)으로 용해시켜 Vol. 1㎖로 하여, 시약 3㎖를 넣어 최종 Vol. 4㎖로 한 다음 27℃에서 20분간 방치한 다음, 540㎚에서 측정한 후 검량곡선을 작성하여 단백질함량을 측정하였다.

마) 총당함량 측정

총당함량 측정은 페놀-황산법에 의한 방법으로 서사향 1g/10㎖ 시료를 사용하여 Phenol 5%(0.5㎖)를 가하고 진한 황산 2.5㎖을 가하여 혼합하여 최종 Vol. 4㎖으로 27℃에서 10분간 방치하여 488㎚에서 측정하였다. 이때 검량곡선은 glucose를 표준물질로 작성하여 함량을 측정하였다.

[실험예 2]

<서사향과 사향의 성분 분석 실험>

서사향 1g을 50㎖ mass flask에 넣고, 일정량의 클로로포름을 넣어 흔들어 준 다음 클로로포름을 50㎖의 눈금선까지 정확히 조정하여 검액으로 한다. 사향노루 사향은 대한약전외한약(생약)규격집의 방법을 병행하여 2g/50㎖를 조제하였다.

표준품으로 dl-muscone 과 normuscone은 (주)우리켐테크에서 구입하였으며, Civetone 표준물질은 Dr. Ehrenstorfer GmbH, Germany에서 구입하여 사용하였다. dl-muscone 20㎎과 normuscone 20㎎을 50㎖ mass flask에 혼합한 후 눈금선까지 클로로포름을 채운 다음 표준검액으로 하였으며, 각 성분의 함량은 표준품의 면적과 비교계산으로 조사하였다. 성분함량을 조사하기 위하여 GC/MS분석을 실시하였으며, GC-MS는 Agilent 6890 GC에 연결된 Agilent 5973 MS를 사용하였고, carrier gas는 He gas를 1㎖/min의 속도로 흘려보냈다. 사용된 column은 HP-5MS (30m×0.25㎜×0.25㎛)였고, 컬럼에서 분리된 물질은 GC에 장착된 MSD(Mass Selective Detector)로 검출하였으며, 확인되어진 TIC(total ion chromatogram)는 Wiley275 library의 mass spectrum data base로 동정하였다. 분석조건은 아래 표 1에 나타내었다.

[실험예 3]

<서사향으로부터 순차적으로 용매를 추출하여 분석하는 실험>

1) 시료 및 시약

서사향은 (주)사향나라에서 공급 받아 실험에 사용하였고, 서사향의 muscone과 normuscone 함량을 측정하기 위해서 (주)우리켐테크에서 dl-muscone과 normuscone을 구입하여 사용했으며, Civetone 표준물질은 Dr. Ehrenstorfer GmbH, Germany에서 구입하여 사용하였다. 실험에 사용된 용매는 chloroform, methanol, ethanol, ethylacetate, n-hexane 등을 사용하였다.

2) 용매추출

서사향을 머스크랫으로부터 깨끗이 채취하고, 암냉소에 보관하여 순차적 유기용매 추출실험에 이용하였다. 서사향 10g을 삼각플라스크에 넣고, 서사향의 중량 기준으로 5배량(50㎖)의 에탄올을 넣어 150rpm에서 24시간동안 진탕추출을 실시한 후 47,488×g로 원심분리를 실시하여, 상등액을 회수하여 농축하였다. 잔여물에 EtOAc를 50㎖를 넣고, 에탄올 추출과 같은 방법으로 반복 추출하여 EtOAc 추출물을 얻었다. 다시 남은 잔여물에 Hexane을 50㎖ 첨가하여 에탄올 추출과 동일하게 반복 추출하여 Hexane 추출물을 얻었고, 마지막 잔여물은 H₂O로 추출하여 추출물을 얻었다.

3) 서사향 에탄올(ethanol) 추출물의 성분분석

서사향 1g을 50㎖ mass flask에 넣고 일정량의 에탄올을 넣어 흔들어 준 다음 에탄올을 50㎖의 눈금선까지 정확히 조정하여 검액으로 한다. normuscone은 200㎎을 정밀히 달아 50㎖ mass flask에 넣은 후 눈금선까지 chloroform로 채운 다음 표준용액으로 해서 GC-MS분석에는 1㎕ injection 하여 분석 하였다. Civetone은 100ng/㎕를 1㎕을 injection하여 분석하였다. 서사향의 주요성분 normuscone과 civetone 및 dihydrocivetone의 함량은 표준품의 면적과 비교계산으로 조사하였다.

[실험예 4]

<서사향으로부터 향기성분을 추출하여 분석하는 실험>

1) 시료 및 시약

서사향, dl-muscone, normuscone 및 Civetone 표준물질은 상기와 동일하며, 포집 용매는 ethylether을 사용하였고, 향기 추출장치는 동시 연속 수증기 증류추출장치(Likens & Nickerson type simultaneous steam distillation and extraction apparatus, SDE)를 사용하였다.

2) 실험방법

서사향 1g에 증류수 200㎖를 혼합하여 이를 휘발성 향기성분의 추출용 시료로 사용하였다. 휘발성 향기성분의 추출은 Schultz 등의 방법에 따라 개량된 연속수증기 증류 추출장치(하기 그림 1)에서 ethylether 30㎖를 사용하여 상압하에서 3시간 동안 추출하였다. 이때 순환수조를 통하여 4℃의 냉수를 공급하면서 향기성분을 얻었다. 추출 후 용매층만을 분리하여 37℃상압 하에서 4℃ 냉각수를 공급하며 회전식 진공 농축기로 농축하여 용매를 제거하고, 이를 GC-MS의 분석시료로 하였다(그림 2). GC-MS분석은 Table 2 조건에서 oven 온도프로그램을 70℃에서 3분간 유지시킨 후 분당 15℃로 승온하여 240℃에서 3분간으로 변경하여 분석하였다.

[그림 1]

[그림 2]

[실험예 5]

<서사향으로부터 Dihydrocivetone 순수 분리 실험>

1) 시료 및 시약

(주)사향나라에서 공급 받은 서사향 50g을 실험에 사용하였다. 시료의 추출 및 성분 분리에 chloroform, methanol, ethanol, ethylacetate, n-hexane 및 acetonitrile 등의 용매를 사용하였다. 분리 정제를 위해서 각종 Chromatography를 사용하였고, open column chromatography에 사용한 Normal phase silica gel은 Merck(germany) silica gel(230∼400mesh, ASTM)을 사용하였고, Reverse phase silica gel은 Wako(Japan) RP-18(63∼212㎛)을 사용하였다. Thin layer chromatography(이하 TLC라고 함)는 Merck 25 DC-Alufolien Kieselgel 60 F₂₅₄(20ㅧ20㎝, 0.2㎜)를 사용하고, RP-TLC는 Merck DC-Alufolien RP-18 F_254s(20ㅧ20㎝, 0.2㎜)를 사용하였다. 구조분석을 위한 NMR은 300㎒ FT-NMR spectrometer(JNM-AL, JEOL, Japan)으로 측정하였고, NMR용 CDCl₃은 Aldrich 제품을 사용하였다.

2) 실험방법

서사향 50g을 ethanol로 추출하여 추출물을 1차 순상 column chromatography를 이용하여 물질을 분획하였다. 컬럼 충진물은 순상 silica gel을 이용하였으며, 이동상으로서의 용매조성은 hexane과 EtOAc 비율을 100:0에서 1:1까지 높여가며 87개의 분획물을 얻었다. 얻어진 분획물의 물질 패턴을 알아보기 위하여 TLC를 실시하였으며, 전개용매로는 hexane과 ether(10:1.5)를 이용하였다. 또한 분획물 물질패턴 확인은 단파장 자외선등(254㎚)과 장파장 자외선등(365㎚)으로 확인하였다. 확인된 물질의 패턴에 기초하여 이동거리가 비슷한 물질을 그룹으로 하여 6개의 그룹 M1-1∼6으로 나누었다. M1 그룹 중 M1-2에 대하여 2차 순상 column chromatography를 수행하였다. 이때 이동상으로서의 용매의 조성은 hexane과 EtOAc 비율을 100:0에서 1:1까지 높여가며 136개의 분획물을 얻었다. 얻어진 분획물에 대한 물질의 패턴확인은 1차 컬럼에서와 동일한 방법으로 수행하였으며, 물질의 패턴별로 8개의 그룹 M2-1∼8로 나누었다. M2 그룹중 M2-3을 3차 역상 column chromatography를 수행하였다. 컬럼의 충진물은 역상 silica gel을 이용하였으며, 이동상의 용매조성은 MeCN과 H₂0 비율을 2:1에서 1:0까지 높여가며 170개의 분획물을 얻었다. 얻어진 분획물의 물질패턴확인은 RP-TLC로 하였으며, 전개용매로는 MeCN과 H₂0(50:1)로 전개한 후 TLC plate를 10% 황산용액을 처리한 후 열을 가하여 발색되는 반점들로 물질의 패턴을 재확인하여 8개의 그룹 M3-1∼8로 나누었다(그림 3). 분리된 그룹 중 TLC 상에서 단일 물질 패턴으로 확인된 M3-6을 이용하여 GC-MS분석하였다.

[그림 3]

[실험예 6]

<서사향으로부터 normuscone의 순수분리 실험>

서사향의 주요성분인 normuscone을 순수분리과정으로 상기 그림 3에서 보는 것과 같은 방법으로 분리하였으며, 그 중 M3-3그룹의 물질들이 normuscone 표준품의 Rf와 일치하여, M3-3그룹의 물질을 농축하여 RP-TLC로 normuscone을 순수분리하였다. 물질의 순도를 알아보기 위하여 RP-TLC 재확인과 GC/MS분석을 실시하여 조사하였다. 구조동정은 GC/MS의 분자량과 GC/MS library의 quality 및 fragmentation을 비교하여 동정하였다.

[실험예 7]

<서사향으로부터 Dihydrocivetol 순수분리 실험>

서사향으로부터 분리정제한 1차의 M1-5 분획물을 이용하여 역상 column chromatography를 실시하였다. 컬럼 충진물은 역상 silica gel을 이용하였으며, 이동상으로서의 용매조성은 Acetonitrile과 H₂O 비율을 20:1에서 Acetonitrile 100%까지 높여가며 196개의 분획물을 얻었다. 얻어진 분획물의 물질패턴은 동일한 방법으로 RP-TLC를 사용하여 10개의 그룹, MC-1∼10로 나누었다. 그 중 MC-4를 RP-TLC를 실시하여 MC-4-1과 MC-4-2로 분리하였으며(그림 4), MC-4-1을 순수분리하여 GC/MS 분석으로 purity 확인하고, 단리된 화합물의 구조는 NMR은 500MHz, Varian unity Inova 500 spectrometer로 구조 동정하였다.

[그림 4]

[실험예 8]

<서사향의 항혈전활성 실험>

1) 항혈전활성물질 탐색

가) 시료 및 시약

항혈전 활성 실험의 시료는 순차적 용매추출에서 얻어진 각 용매추출물을 사용하였으며, 유기용매는 ethanol, ethylacetate, dimethylsulfoxide, hexane을 사용하였고, 항혈전 활성 실험에는 Fibrinogen(Sigma Co., USA), Thrombin(T46481KU- 59NIH unit/㎎ soild Sigma Co., USA), Aspirin(Sigma Co., USA), 그리고 buffer는 borate buffer(0.05M Na₂BO₄O_7, 0.2M H₃BO₃ or NaCl. pH 7.8)를 사용하였다. Thrombin time 측정은 Thrombotimer 2(Behnk Elektronik, Germany)를 사용하였다.

나) 실험방법

Thrombin time(TT)측정은 1 unit Thrombin 50㎕와 일정한 농도의 시료로 DMSO 10㎕로 녹여 borate buffer 40㎕를 튜브에 첨가 하여 37℃에서 5분간 가온 한 후, Fibrinogen 200㎕을 첨가하여 응고가 될 때까지의 시간을 Thrombotimer 2로 측정하였다(그림 5). 대조구로는 시료용해에 사용한 DMSO를 사용하였고, 시료 대조구로는 Aspirin을 사용하여 시료의 항혈전 활성을 측정하였다. 트롬빈 저해에 따른 항혈전 활성은 3회 이상 반복한 실험의 평균치로 나타내었으며, 시료 첨가후의 응고시간을 용매 대조구의 응고시간으로 나눈 값에 100을 곱하여 %로 나타내었다. 이 실험방법은 인위적으로 Thrombin을 첨가해 줌으로서 fibrinogen이 fibrin으로 바꾸어 thrombin의 활성을 억제함으로써 항혈전 활성이 나타난다는 것을 의미한다.

[그림 5]

2) 서사향으로부터 항혈전 활성물질 순수분리

가) 시료 및 시약

(주)사향나라에서 공급 받은 서사향 50g을 실험에 사용하였다. 추출용매로는 n-hexane, ethylacetate, methaol 등을 사용하였다. 분리정제를 위해서 Open Column chromatography를 사용하였고 normal phase silica gel은 Merck, silica gel(germany, 230∼400mesh, ASTM)을 사용하였고, Reverse phase silica gel은 Wako, RP-18(Japan, 63∼212㎛)을 사용하였다. Thin layer chromatography는 Merck 25 DC-Alufolien Kieselgel 60 F₂₅₄(20ㅧ20㎝, 0.2㎜)를 사용하고, RP-TLC는 Merck DC-Alufolien RP-18 F_254s(20ㅧ20㎝, 0.2㎜)를 사용하였다. 항혈전 활성 실험에 사용된 기기는 항혈전 활성물질 탐색에 사용한 기기와 동일하다.

나) 서사향으로부터 항혈전물질 분리정제

서사향 50g을 ethanol로 추출 후 에탄올 추출물로하여 1차 순상 column chromatography를 이용하여 물질을 분획하였으며, 이동상의 용매조성은 hexane과 EtOAc 비율을 400:1에서 1:1까지 높여가며 116개의 분획물을 얻었다. 얻어진 분획물의 물질패턴을 알아보기 위하여 TLC를 실시하였으며, 전개용매로는 hexane과 ether(10:1.5)를 이용하였다. 또한, 분획물 물질패턴 확인은 단파장 자외선등(254㎚)과 장파장 자외선등(365㎚)으로 확인한 후, TLC plate를 10% 황산용액을 처리한 후 열을 가하여 발색되는 반점들로 물질의 패턴을 재확인하였다. 확인된 물질의 패턴에 기초하여 이동거리가 비슷한 물질을 그룹으로 하여 7개의 그룹 B1-1∼7로 나누었다. B1 그룹 중 B1-5를 이용하여, 2차 순상 column chromatography를 수행하였다. 이때 이동상의 용매조성은 hexane과 EtOAc 비율을 70:1에서 0:1까지 높여가며 172개의 분획물을 얻었다. 얻어진 분획물에 대한 물질의 패턴확인은 1차 컬럼에서와 동일한 방법으로 수행하였으며, 확인된 물질의 패턴에 기초하여 이동거리가 비슷한 물질 별로 9개의 그룹 B2-1∼9로 나누었다. B2 그룹중 B2-6을 3차 역상 column chromatography를 수행하였다. 이동상의 용매조성은 MeCN과 H₂0 비율을 20:1에서 100:0까지 높여가며 230개의 분획물을 얻었다. 얻어진 분획물의 물질패턴확인은 전개용매를 MeCN과 H₂0(50:1)을 사용한 RP-TLC로 하였으며, 물질의 분류는 1차 컬럼과 동일한 방법으로 수행하여 7개의 그룹 B3-1∼7로 나누었다(그림 6).

[그림 6]

상기 그림 6의 B2-6물질이 항혈전 활성이 높게 나타남으로서 RP-column chromatography실시하여 B3-4과 B3-5을 얻었다. 이 두 물질의 분자량과 구조 동정을 하기 위하여, GC-MS와 NMR분석을 실시하였다. GC-MS는 JEOL의 JMS700 mass spectrophotometer를 사용하였고, NMR은 500MHz, Varian unity Inova 500 spectrometer을 사용하여 분석을 실시하였다.

3) 항혈전 활성물질의 Methylation

항혈전 활성을 갖는 물질 B3-4와 B3-5를 NMR분석 결과 fatty acid로 확인되어, 두 물질을 methylation하여 분자량을 재확인하였다. Methylation은 H₂SO₄:MeOH :Toluene (1:20:10)의 용액을 시료와 혼합하여 69∼70℃에 1시간 가열한다. 이 혼합용액 2배 비율의 H₂O과 Na₂SO₄(H₂SO₄와 동일비율)를 첨가하여 1분간 교반한 후 층 분리가 되면 hexane층을 분리하여 tube에 옮기고, Na₂SO₄를 첨가하여 수분을 제거하였다(그림 7). 수분이 제거된 hexane층을 농축 후 GC/MS를 이용하여 분석하였다.

[그림 7]

[실험예 9]

<서사향의 항산화 활성 실험>

서사향 ethanol 추출물의 분리정제 과정에서(그림 3) M1-3 분획물을 2차 순상 column chromatography를 hexane과 EtOAc 비율을 500:1에서 1:1까지 높여가며 80개의 분획물을 얻었다. 획득한 분획물의 물질패턴을 알아보기 위하여 TLC를 실시하였으며, 전개용매로는 hexane과 ether(10:1.5)를 이용하였다.

그 TLC plate에 항산화 활성을 알아보기 위해 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl radical(DPPH, Japan)를 사용하여 항산화활성을 검정하였다.

다음에는 사향쥐로부터 얻은 사향추출물(서사향)을 포함하는 각종 화장품을 제조하는 예를 하기에서 설명한다.

[제조예 1] 천연 서사향 BB(Blemish Balm) 크림

1) 정제수 51.06 중량%

2) 티티늄디옥사이드 7.70 중량%

3) 에칠헥실메톡시신나메이트 7.00 중량%

4) 디프로필렌글라이콜 5.00 중량%

5) 옥토크릴렌 5.00 중량%

6) 사이클로펜타실록산 4.08 중량%

7) 디메치콘 3.60 중량%

8) 사이클로헥사실록산 2.25 중량%

9) 헥실라우레이트 2.00 중량%

10) 프로필렌글라이콜 2.00 중량%

11) 알부틴 2.00 중량%

12) 라우릴피이지-8디메치콘 1.80 중량%

13) 탤크 0.91 중량%

14) 폴리글리세릴-4이소스테아레이트 0.80 중량%

15) 비즈왁스 0.80 중량%

16) 디메치콘/비닐디메치콘크로스폴리머 0.70 중량%

17) 디스테아디모늄헥토라이트 0.70 중량%

18) 마그네슘스테아레이트 0.30 중량%

19) 트리에톡시카프릴릴실란 0.25 중량%

20) 알루미나 0.20 중량%

21) 프로필렌카보네이트 0.15 중량%

22) 레시틴 0.10 중량%

23) 소듐하이알루로네이트 0.10 중량%

24) 아데노신 0.04 중량%

25) 황색산화철 0.44 중량%

26) 흑색산화철 0.26 중량%

27) 적색산화철 0.24 중량%

28) 조합향료 0.20 중량%

29) 메칠파라벤 0.22 중량%

30) 프로필파라벤 0.08 중량%

31) 서사향 0.02 중량%

[제조예 2] 모이스춰 크림

1) 정제수 63.74 중량%

2) 글리세린 6.20 중량%

3) 카프릴릭/카프릭트리글리세라이드 4.70 중량%

4) 네오펜틸글라이콜디카프레이트 3.65 중량%

5) 세테아릴알코올 3.50 중량%

6) 알부틴 2.00 중량%

7) 에칠헥실팔미테이트 2.50 중량%

8) 에탄올 1.60 중량%

9) 디메치콘 1.30 중량%

10) 옥틸도데실미리스테이트 1.20 중량%

11) 디이소스테아릴말레이트 1.20 중량%

12) 피이지-100스테아레이트 0.75 중량%

13) 글리세릴스테아레이트 0.75 중량%

14) 모근추출물 0.50 중량%

15) 부틸렌글라이콜 0.50 중량%

16) 폴리글리세릴-3메칠글루코오스디스테아레이트 0.40 중량%

17) 서사향 0.02 중량%

18) 디프로필렌글라이콜 0.40 중량%

19) 세테아릴글루코사이드 0.30 중량%

20) 디메치콘크로스폴리머 0.30 중량%

21) 디메치콘/비닐디메치콘크로스폴리머 0.30 중량%

22) 트리-C14-15알킬시트레이트 0.30 중량%

23) 프로필렌글라이콜 0.18 중량%

24) 글리세릴아크릴레이트/아크릴릭애씨드코폴리머 0.10 중량%

25) 사이클로펜타실록산 0.55 중량%

26) 디메치콘올 0.50 중량%

27) 하이드로제네이티드레시틴 0.50 중량%

28) 하이드로제네이티드식물성오일 0.50 중량%

29) 아크릴레이트/C10-30알킬아크릴레이트크로스폴리머 0.50 중량%

30) 잔탄검 0.40 중량%

31) 포타슘하이드록사이드 0.20 중량%

32) 아데노신 0.04 중량%

33) 메칠파라벤 0.20 중량%

34) 프로필파라벤 0.10 중량%

35) 디소듐이디티에이 0.02 중량%

36) 향료 0.10 중량%

[제조예 3] 에멀젼

1) 정제수 60.57 중량%

2) 글리세린 7.00 중량%

3) 부틸렌글라이콜 6.00 중량%

4) 카프릴릭/카프릭트리글리세라이드 4.00 중량%

5) 에칠헥실팔미테이트 3.50 중량%

6) 하이드로제네이티드폴리데센 3.50 중량%

7) 알부틴 2.00 중량%

8) 세테아릴알코올 1.80 중량%

9) 사이클로펜타실록산 1.70 중량%

10) 사이클로헥사실록산 1.30 중량%

11) 네오펜틸글라이콜디카프레이트 1.10 중량%

12) 쉐어버터 1.10 중량%

13) 소듐하이알루로네이트 1.00 중량%

14) 트리-C14-15알킬시트레이트 0.90 중량%

15) 글리세릴스테아레이트 0.75 중량%

16) 피이지-100스테아레이트 0.75 중량%

17) 서사향 0.02 중량%

18) 세테아릴글루코사이드 0.58 중량%

19) 폴리글리세릴-3메칠글루코오스디스테아레이트 0.55 중량%

20) 트레할로스 0.50 중량%

21) 폴리글루타믹애씨드 0.25 중량%

22) 류코노스톡/무발효여과물 0.20 중량%

23) 디메친콘올 0.20 중량%

24) 레시틴 0.17 중량%

25) 스테아릴애씨드 0.17 중량%

26) 카보머 0.10 중량%

27) 아데노신 0.04 중량%

28) 잔탄검 0.03 중량%

29) 아크릴레이트/C10-30알킬아크릴레이트크로스폴리머 0.030 중량%

30) 포타슘하이드록사이드 0.03 중량%

31) 디소듐이디티에이 0.02 중량%

32) 향료 0.14 중량%

[제조예 4] 에센스

1) 정제수 81.75 중량%

2) 글리세린 4.00 중량%

3) 디프로필렌글라이콜 3.20 중량%

4) 알부틴 2.00 중량%

5) 에탄올 2.00 중량%

6) 하이드로제네이티드레시틴 2.00 중량%

7) 소듐하이알루로네이트 1.50 중량%

8) 베타인 1.00 중량%

9) 서사향 0.02 중량%

10) 폴리글루타믹애씨드 0.75 중량%

11) 류코노스톡/무발효여과물 0.75 중량%

12) 피이지-60하이드로제네이티드캐스터오일 0.50 중량%

13) 아크릴레이트/C10-30알킬아크릴레이트크로스폴리머 0.10 중량%

14) 아데노신 0.04 중량%

15) 포타슘하이드록사이드 0.03 중량%

16) 잔탄검 0.10 중량%

17) 디소듐이디티에이 0.02 중량%

18) 메칠파라벤 0.20 중량%

19) 향료 0.04 중량%

[제조예 5] 스킨토너

1) 정제수 70.75 중량%

2) 디프로필렌글라이콜 7.00 중량%

3) 글리세린 5.80 중량%

4) 에탄올 3.00 중량%

5) 알부틴 2.00 중량%

6) 하이드로제네이티드레시틴 2.50 중량%

7) 트레할로스 1.20 중량%

8) 피이지-32 1.20 중량%

9) 부틸렌글라이콜 1.00 중량%

10) 서사향 0.02 중량%

11) 모근추출물 0.75 중량%

12) 폴리글루타믹애씨드 0.75 중량%

13) 류코노스톡/무발효여과물 0.60 중량%

14) 베타인 0.80 중량%

15) 글리세릴아크릴레이트/아크릴릭애씨드코폴리머 0.55 중량%

16) 프로필렌글라이콜 0.40 중량%

17) 글리세레스-26, 0.60 중량%

18) 피피지-26부테스-32, 0.04 중량%

19) 피이지-40하이드로제네이티드캐스터오일 0.10 중량%

20) 아데노신 0.04 중량%

21) 메칠파라벤 0.20 중량%

22) 아크릴레이트/C10-30알킬아크릴레이트크로스폴리머 0.10 중량%

23) 레시틴 0.17 중량%

24) 암모늄아크릴로일디메칠타우레이트/브이피코폴리머 0.33 중량%

25) 포타슘하이드록사이드 0.04 중량%

26) 디소듐이디티에이 0.02 중량%

27) 향료 0.04 중량%

다음에는, 본 발명의 서사향을 함유한 화장품이 피부에 미치는 영향에 대하여 하기 실험을 통해 입증한다.

1. 실험방법

- 재료 샘플 : 서사향은 길림성 특산 연구소 사향쥐향 향료 새 제품연구 과제조에서 제공, 채집시간은 6~8월에 인공활체 취향방법으로 채집하여 냉동실(-18℃)에 저장한다. 서사향향 향료제품은 사향쥐 향선 분비물을 분자수식(2차 가공)하여 만든 제품이다. 이는 길림성물산연구소에서 제공하였다.

- 실험동물 : 집토끼 - 암수컷, 체중은 (2.5~3.0KG). Guinea pig - 암수컷, 체중은 (250~300g). The outbred line - 곤명종 소백쥐 암수컷, 체중20-24g. 이는 길림성 뻬??의과대학 동물실험 센터에서 제공.

2. 실험 결과

1) 소백쥐 70마리, 암수컷 각각 절반, 체중 20ㅁ2.0g임의로 7조로 나눈다. 매조 10마리 동물이 2일 동안 온정된 후, 제 1조는 공백 대조 조이고 소백쥐에게 동체 증류수를 바른다. 제 2, 3, 4조를 분별하여 향선분비물을 고, 중, 저농도 산량에 따라 나눈다. 분별하여 각조의 매 쥐마다 향선분비물과 서사향 향료를 바른다. 조를 나눈 후의 동물들의 털을 일본 탈모제로 약 2~2.5cm 제거한다. 그리고 3일 사육한다. 각조에 부동한 농도를 바른다. 표 2를 보라. 분별하여 30일 바른다. 그리고 소백쥐의 향을 바른 곳의 피부변화와 활동정황을 관찰하고 기록한다. 실험 후 동물을 5일간 계속 온정시킨다. 각조의 소백쥐에 피부 파피실험을 진행한다. 이상의 조로 나눈 조의 쥐를 탈모처의 중심에 직경이 5mm로 수술 가위로 오려 낸다. 그리하여 피부 파피모형을 만든다. 알콜(70%)로 소독하여 이튿날 표의 용량대로 각 조별로 하루에 5번 바른다. 다시한번 피부 변화 활동정황을 관찰하고 기록한다. 그 후 전부 수컷 소쥐를 번식시키는데 투입한다. 그리고 향선분비물과 서사향 향료가 번식성능과 태아기형변이에 대한 작용을 관찰한다.

외관 검사의결과는 표명하기를 전부 소쥐는 먹고 마시는 것이 정상이고 활동이 자유롭다. 피부가 손상받지 않은 조의 쥐는 대조조와 실험조는 모두 피부가 유합되고, 어떠한 독 부작용이 나타나지 않았다. 번식에 투입된 소쥐의 성 활동은 정상, 암컷 소쥐는 모두 임신, 산 쥐수와 어린쥐 무게는 대조 조와 현저한 차이가 없다. 표 3를 보라. 외관과 해부검사한결과 기형 변이가 일어나지 않았다. 향선 분비물과 사향쥐향 향료는 기형을 초래하는 작용이 없다.

향선분비물과 서사향 향료가 소쥐 피부독성, 파피 피부유합에 대한 작용

조별	약제 량	동물수(마리)	피부반응	파피유합	활동정황
대조조	1.0	10	빛남, 매끌	유합, 주름접힘	활동자유
향선분비물1	0.2	10	빛남, 매끌, 포만	유합	활동자유
향선분비물2	0.5	10	빛남, 매끌, 포만	유합	활동자유
향선분비물3	0.8	10	빛남, 매끌, 포만	유합	활동자유
서사향 향료1	0.2	10	빛남, 매끌, 포만	유합	활동자유
서사향 향료2	0.5	10	빛남, 매끌, 포만	유합	활동자유
서사향 향료3	0.8	10	빛남, 매끌, 포만	유합	활동자유

서사향과 서사향 향료가 소쥐 번식과 태아 기형을 초래하는데 대한 작용

조별	약제 량	동물수(마리)	어린쥐 산량	기형 변이수	활동정황
대조조	1.0	10	6.2ㅁ0.2	무	자유
향선분비물1	0.2	10	7.4ㅁ0.3	무	자유
향선분비물2	0.5	10	6.5ㅁ0.2	무	자유
향선분비물3	0.8	10	5.9ㅁ0.3	무	자유
서사향 향료1	0.2	10	6.1ㅁ0.2	무	자유
서사향 향료2	0.5	10	6.8ㅁ0.3	무	자유
서사향 향료3	0.8	10	7.1ㅁ0.4	무	자유

2) 향선분비물과 서사향 향료가 집토끼의 피부자극성에 대한 영향

집토끼 50마리를 암수컷 구분하지 않고 체중이 2.5~3kg인 것을 7조로 나눈다. 제 1조는 공백 대조 조로서 동 체적수(증류수)를 바르고, 제 2, 3, 4조는 분별하여 향선분비물 1, 2, 3을 바르고 제 5, 6, 7조는 분별하여 서사향 향료조로 한다. 매 실험 집토끼의 향선분비물과 서사향 향료 약제량은 표 4를 보라. 분별하여 각조의 집토끼를 고정하여 등에 10ㅧ6cm의 면적 2개를 향선분비물과 서사향 향료를 30일 바른다. 관찰결과는 실험받은 집토끼의 실험부위는 변화 없다. 반응강도 판정 표준은 표 5를 보라.

향선분비물과 서사향 향료가 집토끼의 피부자극성에 대한 영향

조별	약제 량(g)	동물수(마리)	체중	약 바른 수(일)	피부자극강도
대조조	2.0	10	2.8ㅁ0.2	30	무
향선분비물1	1.0	10	2.9ㅁ0.1	30	무
향선분비물2	1.5	10	2.7ㅁ0.3	30	무
향선분비물3	2.0	10	2.8ㅁ0.2	30	무
서사향 향료1	1.0	10	2.6ㅁ0.3	30	무
서사향 향료2	1.5	10	2.9ㅁ0.2	30	무
서사향 향료3	2.0	10	2.8ㅁ0.1	30	무

피부 자극실험 반응 강도 판정표준

분급	국부
무자극	이상 개변이 없다.
경도자극	충혈, 홍반
중도자극	홍반, 소량출혈, 수종, 소량 papule, 소 수포형성
엄중자극	홍반, 피하 papule, 수종, 대 수포 형성, 표피탈락, 궤양형성 등

관찰결과가 표명하기를 약을 바른 후 48시간 동안 관찰한 결과, 집토끼 피부 부위는 향선분비물과 서사향 향료의 각 종량에 대한 각조의 집토끼 피부에 대해 아무 이상한 현상이 없다. 피부에 아무 독성자극이 없다. 30일 사용 후 활동, 먹이 채식이 정상이다. 사용이 안전하다. 30일 후 죽여 약을 바른 피부부위를 취하여 병현장 section검사를 하였다. 약을 바른 부위는 아무 이상 개변이 없다. 암을 초래하는 변화도 없다. 용량을 많이 쓴 조의 향선분비물과 서사향 향료도 아무 자극과 암을 초래하는 작용이 없다.

3) 향선 분비물과 서사향 향료가 guinea pig의 과민반응에 대한 영향

guinea pig 35마리, 체중은 250~300g, 암수컷 구분하지 않고 취하고 임의로 7조로 나눈다.

분별하여 각조의 guinea pig 등에 두개의 6×4cm면적 피부를 탈모한다. 동시에 알콜과 요오드로 소독한다. 탈모 처리한 guinea pig를 제 1조는 대조조이다. 제 1조에 동체적의 증류수를 바른다. 제 2, 3, 4조에 사향쥐 분비물 0.2, 0.5, 0.8g을 바르고, 제 5, 6, 7조에 서사향 향료 0.2, 0.5, 0.8g을 바른다. 각조 동물에 연속 5일간 바른다. 실험받은 guinea pig의 약 바른 부위의 변화를 관찰한다. 판정 표준은 아래와 같다.

- : 이상 반응이 없다.

ㅁ : crouch，piloerection, 기타 이상이 없다.

+ : 코를 뜯는다. Piloerection, 불안, 호흡급박, 경도 cyanosis

++ : Piloerection, 호흡이 현저히 곤란, yanosis, 사지무력, 복부를 땅에 붙여 긴다.

+++ : 사망

약을 바른 후 관찰에 의하면 향선분비물과 서사향 향료는 아무런 이상 표현이 없다. 향선분비물과 서사향 향료를 바르는 것을 중지 7일 후 다시 향선 분비물과 향료로 3일을 공격(동일한 향으로 동일한 방법으로 자극)하여서 향선분비물과 향료가 guinea pig에게 아무런 과민 반응이 없다는 것을 관찰한다. 그리하여 진일보 증명하기를 향선분비물과 서사향 향료분비물의 사용이 안전하고 관민 등 불량한 반응이 없다.

4) 향선분비물과 향료가 소백쥐 정맥에 일차성 주사에 대한 급성독성 관찰

체중이 31ㅁ2.6g인 소백쥐 20마리를 매조에 10마리씩 두 조로 나눈다. 매 쥐마다 caudal vein에 정맥 주사를 놓는다. 약은 향선분비물과 향료 0.8g(최대 주사량이다)이다. 그리하여 향선분비물과 향료의 독성반응을 관찰한다.

결과가 표명하기를 두 조의 쥐에 약을 주입 후 사망하는 현상이 나타나지 않았다. 다른 것은 주사 후 쥐는 불안한 표현을 하였고, 부동하게 활동감소가 나타났다. 그 다음날 활동이 정상적이였고 7일 관찰 후 한마리도 죽는 쥐가 없었다.

3. 토론과 소결

서사향 향료는 수컷 성령 사향쥐의 향선 분비물을 정제 가공하여 만든 것이다. 진옥산등 사람들은 서사향과 천연사향 약리활성비교연구(1988년(중약 통보))에서 서사향과 천연사향이 항염, tolerance(내성) hypoxia(저산소증), 심률을 늦추고, 형압과 총 periphery항력내리는 등 활성은 모두 천연 사향하고 비슷하다는 것을 간술하였다. 그러나 서사향은 독특한 myocardial oxygen consumption을 낮추고 피 산소를 이용하는 생물 활성을 감소시키는 작용으로 관심병, 심장부담 과중에 대한 임상치료와 혈전 등을 치료하는데 양호한 응용 전경을 보여주었다. 서사향은 천연동물향료로써 일용화학공업, 보건 식품공업과 의약공업에 응용된다. 동물성 향료로써 사회에 응용하기 위해서는 먼저 그의 안전성을 요해해야 한다. 이 실험연구를 통해 서사향 향료는 소쥐, 집토끼, guinea pig 등 실험동물체에 아무런 독부작용과 불량반응이 없다. 서사향 향료는 아무런 독성이 없는 것이 아래 방면에서 체현된다.

1) 피부에 탈모나 파피 피부나 아무런 독성이 없을 뿐만 아니라 양호한 활성이 있다. 예를 들어 피하지방, 혈관, 섬유 등은 더 풍부해지고 아주 좋은 moisturizing 작용이 있다.

2) 향선 분비물과 서사향 향료는 소쥐의 번식 성능에 아무런 영향이 없다. 이 실험을 통해 향선분비물과 서사향 향료는 소백쥐의 성활동에 영향이 없을 뿐더러 교배한 쥐는 순리롭게 어린쥐를 낳았다. 반대로 향선분비물과 서사향 향료는 수컷 소백쥐의 성선발육을 촉진시키고 전열선의 저정낭의 무게를 증가, 향선분비물과 서사향 향료는 성활동과 번식성능에는 독성작용이 없다.

3) 향선분비물과 서사향 향료는 기변과 암을 초래하는 작용이 없다.

실험을 통해 향선분비물과 서사향 향료를 장기간 사용(30일)하면 쥐가 낳은 어린 쥐는 아무런 기형과 암을 초래하지 않았다.

4) 향선분비물과 서사향 향료는 과민반응이 없고 guinea pig의 실험을 통해 한 번에 연속 5번 바른 후 아무런 과민증상이 없었다. 한 달후 다시 공격해도 과민이 나타나지 않았다. 이는 성분분석과 향선 분비물과 서사향 향료 중에 대분자 펩타이드와 단백질을 발견하지 못한 결과와 부합된다.

5) 향선 분비물과 향료는 피부와 내장 주요장기 조직에 아무런 병리 개변이 없다. 이상의 연구를 통해서 서사향은 향료 응용 외에 이상적인 moisturizing 보건제품이다. 응용 중에 아무런 독부작용이 없고 동물향료원료로 사용되어 향료 essence 항업과 기타 항업에 응용될 수 있다.

이상에서와 같이, 본 발명의 상세한 설명에서 구체적인 실시예에 관해 설명하였으나, 본 발명의 기술이 당업자에 의하여 용이하게 변형 실시될 가능성이 자명하며, 이러한 변형된 실시예들은 본 발명의 특허청구범위에 기재된 기술사상에 포함된다할 것이다.

Claims (5)

1. 정제수 51.06 중량%, 티티늄디옥사이드 7.70 중량%, 에칠헥실메톡시신나메이트 7.00 중량%, 디프로필렌글라이콜 5.00 중량%, 옥토크릴렌 5.00 중량%, 사이클로펜타실록산 4.08 중량%, 디메치콘 3.60 중량%, 사이클로헥사실록산 2.25 중량%, 헥실라우레이트 2.00 중량%, 프로필렌글라이콜 2.00 중량%, 알부틴 2.00 중량%, 라우릴피이지-8디메치콘 1.80 중량%, 탤크 0.91 중량%, 폴리글리세릴-4이소스테아레이트 0.80 중량%, 비즈왁스 0.80 중량%, 디메치콘/비닐디메치콘크로스폴리머 0.70 중량%, 디스테아디모늄헥토라이트 0.70 중량%, 마그네슘스테아레이트 0.30 중량%, 트리에톡시카프릴릴실란 0.25 중량%, 알루미나 0.20 중량%, 프로필렌카보네이트 0.15 중량%, 레시틴 0.10 중량%, 소듐하이알루로네이트 0.10 중량%, 아데노신 0.04 중량%, 황색산화철 0.44 중량%, 흑색산화철 0.26 중량%, 적색산화철 0.24 중량%, 조합향료 0.20 중량%, 메칠파라벤 0.22 중량%, 프로필파라벤 0.08 중량%, 및 서사향 0.02 중량%로 이루어진 것을 특징으로 하는 서사향을 함유하는 천연 서사향 BB 크림.
2. 정제수 63.74 중량%, 글리세린 6.20 중량%, 카프릴릭/카프릭트리글리세라이드 4.70 중량%, 네오펜틸글라이콜디카프레이트 3.65 중량%, 세테아릴알코올 3.50 중량%, 알부틴 2.00 중량%, 에칠헥실팔미테이트 2.50 중량%, 에탄올 1.60 중량%, 디메치콘 1.30 중량%, 옥틸도데실미리스테이트 1.20 중량%, 디이소스테아릴말레이트 1.20 중량%, 피이지-100스테아레이트 0.75 중량%, 글리세릴스테아레이트 0.75 중량%, 모근추출물 0.50 중량%, 부틸렌글라이콜 0.50 중량%, 폴리글리세릴-3메칠글루코오스디스테아레이트 0.40 중량%, 서사향 0.02 중량%, 디프로필렌글라이콜 0.40 중량%, 세테아릴글루코사이드 0.30 중량%, 디메치콘크로스폴리머 0.30 중량%, 디메치콘/비닐디메치콘크로스폴리머 0.30 중량%, 트리-C14-15알킬시트레이트 0.30 중량%, 프로필렌글라이콜 0.18 중량%, 글리세릴아크릴레이트/아크릴릭애씨드코폴리머 0.10 중량%, 사이클로펜타실록산 0.55 중량%, 디메치콘올 0.50 중량%, 하이드로제네이티드레시틴 0.50 중량%, 하이드로제네이티드식물성오일 0.50 중량%, 아크릴레이트/C10-30알킬아크릴레이트크로스폴리머 0.50 중량%, 잔탄검 0.40 중량%, 포타슘하이드록사이드 0.20 중량%, 아데노신 0.04 중량%, 메칠파라벤 0.20 중량%, 프로필파라벤 0.10 중량%, 디소듐이디티에이 0.02 중량%, 및 향료 0.10 중량%로 이루어진 것을 특징으로 하는 서사향을 향유하는 모이스춰 크림.
3. 정제수 60.57 중량%, 글리세린 7.00 중량%, 부틸렌글라이콜 6.00 중량%, 카프릴릭/카프릭트리글리세라이드 4.00 중량%, 에칠헥실팔미테이트 3.50 중량%, 하이드로제네이티드폴리데센 3.50 중량%, 알부틴 2.00 중량%, 세테아릴알코올 1.80 중량%, 사이클로펜타실록산 1.70 중량%, 사이클로헥사실록산 1.30 중량%, 네오펜틸글라이콜디카프레이트 1.10 중량%, 쉐어버터 1.10 중량%, 소듐하이알루로네이트 1.00 중량%, 트리-C14-15알킬시트레이트 0.90 중량%, 글리세릴스테아레이트 0.75 중량%, 피이지-100스테아레이트 0.75 중량%, 서사향 0.02 중량%, 세테아릴글루코사이드 0.58 중량%, 폴리글리세릴-3메칠글루코오스디스테아레이트 0.55 중량%, 트레할로스 0.50 중량%, 폴리글루타믹애씨드 0.25 중량%, 류코노스톡/무발효여과물 0.20 중량%, 디메친콘올 0.20 중량%, 레시틴 0.17 중량%, 스테아릴애씨드 0.17 중량%, 카보머 0.10 중량%, 아데노신 0.04 중량%, 잔탄검 0.03 중량%, 아크릴레이트/C10-30알킬아크릴레이트크로스폴리머 0.030 중량%, 포타슘하이드록사이드 0.03 중량%, 디소듐이디티에이 0.02 중량%, 및 향료 0.14 중량%로 이루어진 것을 특징으로 하는 서사향을 함유하는 에멀젼.
4. 정제수 81.75 중량%, 글리세린 4.00 중량%, 디프로필렌글라이콜 3.20 중량%, 알부틴 2.00 중량%, 에탄올 2.00 중량%, 하이드로제네이티드레시틴 2.00 중량%, 소듐하이알루로네이트 1.50 중량%, 베타인 1.00 중량%, 서사향 0.02 중량%, 폴리글루타믹애씨드 0.75 중량%, 류코노스톡/무발효여과물 0.75 중량%, 피이지-60하이드로제네이티드캐스터오일 0.50 중량%, 아크릴레이트/C10-30알킬아크릴레이트크로스폴리머 0.10 중량%, 아데노신 0.04 중량%, 포타슘하이드록사이드 0.03 중량%, 잔탄검 0.10 중량%, 디소듐이디티에이 0.02 중량%, 메칠파라벤 0.20 중량%, 및 향료 0.04 중량%로 이루어진 것을 특징으로 하는 서사향을 함유하는 에센스.
5. 정제수 70.75 중량%, 디프로필렌글라이콜 7.00 중량%, 글리세린 5.80 중량%, 에탄올 3.00 중량%, 알부틴 2.00 중량%, 하이드로제네이티드레시틴 2.50 중량%, 트레할로스 1.20 중량%, 피이지-32 1.20 중량%, 부틸렌글라이콜 1.00 중량%, 서사향 0.02 중량%, 모근추출물 0.75 중량%, 폴리글루타믹애씨드 0.75 중량%, 류코노스톡/무발효여과물 0.60 중량%, 베타인 0.80 중량%, 글리세릴아크릴레이트/아크릴릭애씨드코폴리머 0.55 중량%, 프로필렌글라이콜 0.40 중량%, 글리세레스-26, 0.60 중량%, 피피지-26부테스-32, 0.04 중량%, 피이지-40하이드로제네이티드캐스터오일 0.10 중량%, 아데노신 0.04 중량%, 메칠파라벤 0.20 중량%, 아크릴레이트/C10-30알킬아크릴레이트크로스폴리머 0.10 중량%, 레시틴 0.17 중량%, 암모늄아크릴로일디메칠타우레이트/브이피코폴리머 0.33 중량%, 포타슘하이드록사이드 0.04 중량%, 디소듐이디티에이 0.02 중량%, 및 향료 0.04 중량%로 이루어진 것을 특징으로 하는 서사향을 함유하는 스킨토너.