KR101143432B1 - 백굴채 추출물을 함유하는 미백 화장료 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 백굴채(Chelidonium Majus L., 애기똥풀) 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 미백 화장료 조성물에 관한 것으로서, 백굴채를 유기용매로 추출한 후 이의 건조물을 인지질로 리포좀화시키고 이에 유용성 성분을 포함하는 다중리포좀을 제조하여 활성성분의 손실없이 장기간 안정하게 피부 미백 효과가 있는 화장료의 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명에 따르면, 본 발명의 백굴채 추출물은 세포증식, 항산화 효과를 가질뿐만 아니라, Tyrosinase 활성억제, Melanin 생성억제 효과로 인한 피부 미백 효과를 갖는다.

백굴채, Tyrosinase 활성억제, Melanin 생성억제, 미백, 다중리포좀

Description

백굴채 추출물을 함유하는 미백 화장료 조성물{Cosmetic composition including an extract of Chelidonium Majus L. having skin whitening effect)}

본 발명은 미백 화장료 조성물에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 세포증식, 항산화, 멜라닌 생성억제 등 미백작용을 갖는 백굴채(Chelidonium Majus L., 애기똥풀) 추출물을 함유하는 화장료 조성물, 및 상기 백굴채 추출물을 인지질 등으로 미세입자화시킨 리포좀을 함유하는 화장료 조성물과 이의 제조방법에 관한 것이다.

피부는 인체의 일차 방어막으로써 체내의 제기관을 온도 및 습도 변화와 자외선, 공해물질 등 외부환경의 자극으로부터 보호해 주며, 체온조절 등의 생체 항상성 유지에 중요한 역할을 하고 있다. 그러나, 일반적으로 자외선에 피부가 노출되면 피부 표피가 검게 된다. 이는 멜라노사이트내에서 멜라닌이 합성되고 방출되는 것에 기인하며, 구체적으로는 세포 내의 티로신(Tyrosine)을 기질로 티로시나아제(Tyrosinase)라는 효소가 작용하여 도파퀴논(DOPAquinone)을 생성시키고, 이러한 도파퀴논으로부터 자발적인 산화 반응을 거쳐 멜라닌이 생성된다.

따라서, 피부가 검게 되는 것을 막기 위해서는 상기 멜라닌 생성 과정 중의 일부 반응을 저해함으로써 즉, 티로시나아제 활성 억제 및 멜라닌 생성을 억제하는 방법이 가장 일반적이므로 이러한 효과를 나타내기 위해서는 효과가 우수하며 부작용이 없고 비용이 저렴한 물질의 개발 및 그 물질을 함유하며 사용이 용이한 화장료의 개발이 필수적이다.

이를 위해 종래에는 하이드로퀴논(Hydroquinone), 아스코르브산(Ascorbic acid), 코직산(Kojic acid), 글루타치온, 상백피 추출물, 알부틴(Arbutin)을 비롯한 다양한 추출물들이 이용되어 왔다. 이 중에서 아스코르브산, 상백피 추출물, 코직산, 글루타치온 등은 피부 흑색화나 피부병의 치료에 사용되어 왔지만, 피부의 안전성과 화장료 제형의 안정성에 문제점을 가지고 있어 그 사용이 제한되어 왔다. 또한 하이드로퀴논은 기미 치료가 목적인 약물로서 이미 미국 시장에서 판매되고 있지만 피부 자극성이 있고, 아스코르브산은 광, 열에 대한 안정성의 문제와 사용 비용이 높으므로 사용상에 어려움이 있다.

따라서 효능을 유지하면서도 피부에 안전한 성분들을 발견하고자 할 노력의 일환으로 천연 추출물을 화장품 원료로 사용하는 연구가 계속되어 왔다. 그러나 이러한 기존의 화장품 원료들은 대부분 천연 추출물을 단순히 첨가하여 제조한 단순유화 타입 또는 겔 타입의 제품들로써, 화장료 내에 피부가 필요로 하는 양의 추출물을 배합하기가 어렵고 또한 보존 시 활성이 저하되거나 피부도포 시 유효성분의 지속력 및 피부 침투정도 등에 한계가 있는 결점을 갖고 있다.

이에, 본 발명자들은 상기 종래기술들의 문제점들을 극복하고 티로시나아제 활성 억제 및 멜라닌 생성 억제 효과가 우수한 물질을 개발하기 위해 노력한 결과 상기한 문제점을 해결하면서 유해 화학물질이 가미되지 않은 천연물에서 추출하여 안전하며 부작용이 없는 백굴채 추출물을 리포좀화시켜 화장료 조성물에 함유할 경우, 장기간 활성의 손실 없이 안정되게 보존할 수 있으며 우수한 피부 침투력을 나타내면서 안정성 및 안전성에 문제가 없는 백굴채 추출물의 다중리포좀을 함유하는 화장료 조성물을 제공할 수 있음을 확인하고, 본 발명을 완성하게 되었다.

따라서, 본 발명의 주요 목적은 티로시나아제 활성 억제 및 멜라닌 생성 억제 효과가 우수한 백굴채 추출물을 함유하는 피부 미백 화장료 조성물을 제공하는 데 있다.

본 발명의 다른 목적은 화장료 조성물에 함유할 경우, 장기간 활성의 손실 없이 안정되게 보존할 수 있으며 우수한 피부 침투력을 나타내면서 안정성 및 안전성에 문제가 없는 백굴채 추출물의 다중리포좀 제조방법을 제공하는데 있다.

본 발명의 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 백굴채(Chelidonium Majus L.) 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부미백 개선용 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명의 화장료 조성물에 있어서, 바람직하게는 상기 백굴채 추출물은 건조된 백굴채의 중량비에 대하여 추출용매를 1～15배 중량으로 가한 후, 냉각 콘덴서가 장치되어 용매가 증발되는 것을 방지한 상태에서 50～100℃에서 3～24시간 동안 가열하거나 4～30℃에서 3～20일간 침적시켜 유효성분을 추출하는 것을 특징으로 한다. 상기 온도범위 또는 상기 기간 미만이면 유효성분이 충분히 추출되지 못하며, 상기 온도범위 또는 기간을 초과하면 비효율적이며 불필요한 성분이 추출될 우려가 있다.

본 발명의 화장료 조성물에 있어서, 바람직하게는 상기 추출용매는 물, 에탄올, 메탄올, 에틸아세테이트, 글리세린, 에틸렌글리콜, 부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 함수 에탄올, 함수 메탄올, 함수 글리세린, 함수 에틸렌글리콜, 함수 부틸렌글리콜, 함수 프로필렌글리콜로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상임을 특징으로 한다. 상기 추출용매는 2종 이상이 혼합되거나 순차적으로 사용될 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물에 있어서, 바람직하게는 상기 백굴채 추출물은 리포좀화되어 다중리포좀의 형태로 함유되는 것을 특징으로 한다.

본 발명의 화장료 조성물에 있어서, 바람직하게는 상기 백굴채 추출물 또는 백굴채 추출물 함유 다중리포좀은 화장료 조성물 총 중량에 대하여 1～25중량%로 함유되는 것을 특징으로 한다. 상기 하한 중량% 미만이면 본 발명의 피부 미백 개선효과가 약해지며 상한 중량%를 초과하면 본래 화장료 조성물의 성상이나 품질을 손상시킬 수 있다.

본 발명의 다른 목적을 달성하기 위해, 본 발명은 백굴채 추출물, 정제수, 지질, 다가알코올 및 기타 화장료 성분들을 함유하는 혼합물을 마이크로플루다이져에 통과시키는 단계, 400-450 메쉬 여과포로 여과하여 평균입경 200㎚이하의 백굴채 추출물의 리포좀을 수득하는 단계; 상기 백굴채 추출물의 리포좀에 다가알코올의 지방산 에스테르를 첨가하여 균질화하는 단계; 및 다시 마이크로플루다이져에 통과시켜 평균입경 200㎚이하의 유백색 반투명의 다중리포좀을 얻는 단계를 포함하는 백굴채 추출물 함유 다중리포좀의 제조방법을 제공한다.

본 발명의 다중리포좀 제조방법에 있어서, 바람직하게는 상기 지질은 베타시토스테롤과 그 유도체, 콜레스테롤의 스테롤류와 세라마이드, 레시친, 지방산으로 이루어진 인지질에서 선택된 1종 또는 2종 이상으로 조성물 총 중량에 대하여 2～15중량%의 양으로 함유되는 것임을 특징으로 한다.

본 발명의 다중리포좀 제조방법에 있어서, 바람직하게는 상기 다가알코올은 글리세린, 1,3-부틸렌글리콜 및 프로필렌글리콜에서 선택된 1종으로 조성물 총 중량에 대하여 5～20중량%의 양으로 함유되는 것을 특징으로 한다.

본 발명의 다중리포좀 제조방법에 있어서, 바람직하게는 상기 다가알코올의 지방산 에스테르는 해바라기씨 오일, 마카데미아넛 오일, 그레이프 씨드 오일, 및 메도폼 씨드 오일로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상으로 조성물 총 중량에 대하여 5～25중량%의 양으로 함유되는 것을 특징으로 한다.

이상 설명한 바와 같이, 본 발명의 백굴채 추출물 또는 그 다중리포좀을 함유하는 화장료 조성물은 세포 증식 효과, 항산화 효과뿐만 아니라, 티로시나아제 활성억제 및 멜라닌 생성 억제 효과를 가지는 것으로, 종래의 피부 미백 화장료에 비해 전반적인 피부 미백의 효과가 우수하며 안정성에 문제가 없는 화장료 조성물을 제공할 수 있다.

이하, 본 발명을 보다 구체적으로 설명한다.

본 발명은 티로시나아제 활성 억제 및 멜라닌 생성 억제 효과가 우수한 물질을 찾고자 자연의 여러 가지 천연 물질들을 검색한 결과, 백굴채 추출물이 티로시나아제 활성 억제 및 멜라닌 생성 억제 효과가 우수한 효능을 나타냄을 발견하여 티로시나아제 활성 억제 및 멜라닌 생성을 억제 효과를 줌으로써 피부 미백효과가 있는 백굴채 추출물의 다중리포좀을 함유하는 피부 미백 화장료 조성물을 제공한다.

백굴채(Chelidonium Majus L.)는 양귀비과(Papaveraceae)의 식물로 줄기를 자르면 진노랑의 유액이 나오기 때문에 애기똥풀이라는 이름을 갖게 되었다. 씨아똥, 젖풀이라고도 불리며 한의학에서는 백굴채(白屈菜)라고 한다. 학명의 Chelidonium은 희랍어 chelidon(제비)에서 유래했는데 그 이유는 제비 새끼가 태어나면 눈에 이물질이 많아 눈을 뜨지 못하는데 이때 어미가 젖풀의 줄기를 입으로 꺾어 거기서 나오는 유액으로 어린 새끼의 눈을 씻어준다고 한다. 성분으로는 알칼로이드, 베르베린(berberine), 첼레리스린(Chelerythrine), 첼리도닌(Chelidonine), 시트라산, 포름산, 말산, 니코틴산, 프로토핀(Protopin), 산구이나린(Sanguinarine) 등이 포함되어 있으며, 한의학과 민간에서 피부병, 각종 암, 눈병, 관절염, 무좀, 위염, 위경련, 위궤양, 간염, 복통, 소화기 질병에 써왔다 [약초의 성분과 이용, 일월서각. 1994. 과학백과사전 출판사편, 중약 대사전, 도서출판 정담, 중약 대사전 편찬위원회,1997].

본 발명에 사용되는 백굴채 추출물은 약재상으로부터 구입한 백굴채를 세절한 후 그 건조 중량의 1～15배 중량의 물, 탄소수 1～4개의 저급 알코올 또는 이들 저급 알코올과 물과의 혼합용매, 에틸아세테이트, 글리세린, 에틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 부틸렌글리콜로 이루어진 군으로부터 중에서 선택된 추출용매를 첨가하여 4～30℃에서 3～20일간 침적시켜 유효성분을 추출한 후, 감압 농축기로 농축하여 추출물을 얻는다.

또 다른 추출 방법으로는, 백굴채를 세절한 후 그 건조 중량의 1～15배 중량의 물, 탄소수 1～4의 저급 알코올 또는 이들 저급 알코올과 물과의 혼합용매, 에틸아세테이트, 글리세린, 에틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 부틸렌글리콜로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 용매를 사용한다. 이어서 용매가 증발되는 것을 방지하기 위해 냉각 콘덴서를 구비한 추출기로 50～100℃에서 3～24시간 동안 가열 추출한 다음, 감압농축기로 농축하여 추출물을 얻는다.

바람직하게는, 본 발명의 화장료 조성물은 지질, 다가알코올 및 백굴채 추출물로 이루어진 평균입경 200㎚이하의 리포좀; 및 다가알코올의 지방산 에스테르등 유용성 성분을 함유하는 다중리포좀을 함유한다.

본 발명에서 백굴채 추출물을 리포좀화시키기 위한 물질로 지질이 사용되며, 지질의 친유?친수성 비는 리포좀화시킬 백굴채 추출물과 물에서 상기 지질이 라멜라를 형성하기 위하여 습윤시킬 수 있는 비율이다. 본 발명에서 사용할 수 있는 지질의 구체적인 예로는 베타시토스테롤과 그 유도체, 콜레스테롤의 스테롤류와 세라마이드, 레시친, 지방산 등의 인지질을 포함한다. 또한, 상기 지질은 조성물 총 중량에 대하여 2.0～15.0중량%의 양으로 사용된다.

또한, 본 발명에서 사용되는 다가알코올의 구체적인 예로는 글리세린, 1,3-부틸렌글리콜 또는 프로필렌글리콜 등이 있으며, 조성물 총 중량에 대하여 5.0～20.0중량%의 양으로 사용된다.

또한, 본 발명의 백굴채 추출물을 함유하는 리포좀을 분산시키기 위하여 다가알코올의 지방산 에스테르 계통의 천연오일이 사용되며, 다가알코올의 지방산 에스테르의 구체적인 예로는 해바라기씨 오일, 마카데미아넛 오일, 포도씨 오일, 메도폼 씨드 오일 등이 있다. 상기 다가알코올의 지방산 에스테르는 조성물 총 중량에 대하여 5.0～25.0중량%의 양으로 사용되며, 또한 초산토코페롤과 같은 산화방지제와 함께 사용할 수도 있다.

한편, 본 발명의 화장료 조성물에 함유되는 다중리포좀은 먼저 정제수, 지질, 백굴채 추출물, 다가 알코올 및 기타 화장료 성분들을, 마이크로플루다이져에 통과시키고, 보다 구체적으로 상기 성분들을 먼저 80℃로 가온시켜 균질화한 후, 마이크로플루다이져에 통과시키고, 이후에 400~450 메쉬 여과포로 여과하여 평균입경 200 nm이하의 백굴채 추출물의 리포좀을 수득하는 단계; 및 상기 백굴채 추출물의 리포좀에 다가알코올의 지방산 에스테르인 유용성 성분 등을 첨가하여 균질화한 후, 다시 마이크로플루다이져에 통과시켜 평균입경 200㎚이하의 유백색 반투명의 다중리포좀을 얻는 단계로 제조된다.

본 발명에 의한 화장료 조성물은 상기 평균입경이 200㎚이하로 마이크로 캡슐화된 백굴채 추출물을 함유하기 때문에 경피흡수성이 매우 뛰어나며, 지질에 의해 형성된 리포좀내에 백굴채 추출물이 존재하기 때문에 활성의 손실이 없이 장기 간 보존할 수 있다.

상기 백굴채 추출물 함유 다중리포좀은 이중막 또는 삼중막의 라멜라 형태를 가지며, 각 막층 사이에 백굴채 추출물 또는 기타 다른 화장료 성분들이 포함되어 있을 수 있으며 백굴채 추출물의 건조중량으로서 1.0～15.0중량%의 양으로 첨가할 수 있다. 또한, 상기 백굴채 추출물 함유 다중리포좀은 피부미백 화장료 조성물 총 중량에 대하여 1.0～25.0중량%의 양으로 첨가할 수 있다.

상기 제조방법에 의한 백굴채 추출물은 안정한 상태에서 활성의 손실없이 화장료에 배합되고, 또한 피부에 적용 시 침투성을 향상시킴으로써 백굴채 추출물이 갖는 미용효과를 충분히 발휘할 수 있는 유화타입의 화장료를 제조할 수 있다.

또한, 본 발명의 티로시나아제 활성 억제 및 멜라닌 생성 억제 효과로 인한 피부 미백 화장료 조성물은 그 제형에 있어서 특별히 한정되는 바가 없으며, 예를 들면, 화장수, 로션, 크림, 에센스, 또는 피부점착 타입의 제형을 갖는 화장료 조성물일 수 있다.

또한, 각 제형의 티로시나아제 활성 억제 및 멜라닌 생성 억제 효과의 피부 미백 화장료 조성에 있어서, 상기의 백굴채 추출물 외에 다른 성분들을 기타 피부 개선 화장료의 제형 또는 사용목적 등에 따라 임의로 선정하여 배합할 수 있다.

이하, 실시예, 제조예, 제형예 및 비교예를 들어 본 발명의 구성 및 효과를 상세히 설명하나, 본 발명이 이들에만 한정되는 것은 아니다.

백굴채 추출물의 제조

실시예 1.

백굴채 200g 중량을 메틸알코올 2㎏에 넣고 냉각 콘덴서가 달린 추출기에서 65～75℃로 5시간 가열 추출한 후 300메쉬 여과지로 여과하고, 1주일간 방치하여 침전물을 에드벤텍 5번 여과지와 와트만 GFC 47mm 여과지로 2번 여과하였다. 그리고 감압 농축기를 이용하여 50℃에서 완전히 농축하여 건조 중량 23.25g을 얻었다.

실시예 2.

백굴채 200g 중량을 70% 함수에탄올 2㎏에 넣고 냉각 콘덴서가 달린 추출기에서 80～90℃로 5시간 가열 추출한 후 300메쉬 여과지로 여과하고, 1주일간 방치하여 침전물을 에드벤텍 5번 여과지와 와트만 GFC 47mm 여과지로 2번 여과하였다. 그리고 감압 농축기를 이용하여 50℃에서 완전히 농축하여 건조 중량 21.71g을 얻었다.

실시예 3.

백굴채 200g 중량을 50% 함수에탄올 2㎏에 넣고 냉각 콘덴서가 달린 추출기에서 80～95℃로 5시간 가열 추출한 후 300메쉬 여과지로 여과하고, 1주일간 방치하여 침전물을 에드벤텍 5번 여과지와 와트만 GFC 47mm 여과지로 2번 여과하였다. 그리고 감압 농축기를 이용하여 50℃에서 완전히 농축하여 건조 중량 20.33g을 얻었다.

실시예 4.

백굴채 200g 중량을 30% 함수에탄올 2㎏에 넣고 냉각 콘덴서가 달린 추출기에서 80～100℃로 5시간 가열 추출한 후 300메쉬 여과지로 여과하고, 1주일간 방치하여 침전물을 에드벤텍 5번 여과지와 와트만 GFC 47mm 여과지로 2번 여과하였다. 그리고 감압 농축기를 이용하여 50℃에서 완전히 농축하여 건조 중량 20.19g을 얻었다.

실시예 5.

백굴채 200g 중량을 70% 함수에탄올 2㎏에 넣고 실온에서 10일간 침적시켜 추출한 후 300메쉬 여과지로 여과하고, 1주일간 방치하여 침전물을 에드벤텍 5번 여과지와 와트만 GFC 47mm 여과지로 2번 여과하였다. 그리고 감압 농축기를 이용하여 50℃에서 완전히 농축하여 건조 중량 21.93g을 얻었다.

실시예 6.

백굴채 200g 중량을 50% 함수에탄올 2㎏에 넣고 실온에서 10일간 침적시켜 추출한 후 300메쉬 여과지로 여과하고, 1주일간 방치하여 침전물을 에드벤텍 5번 여과지와 와트만 GFC 47mm 여과지로 2번 여과하였다. 그리고 감압 농축기를 이용하여 50℃에서 완전히 농축하여 건조 중량 20.41g을 얻었다.

실시예 7.

백굴채 200g 중량을 30% 함수에탄올 2㎏에 넣고 실온에서 10일간 침적시켜 추출한 후 300메쉬 여과지로 여과하고, 1주일간 방치하여 침전물을 에드벤텍 5번 여과지와 와트만 GFC 47mm 여과지로 2번 여과하였다. 그리고 감압 농축기를 이용하여 50℃에서 완전히 농축하여 건조 중량 22.12g을 얻었다.

실시예 8.

백굴채 200g 중량을 메틸알코올 2㎏에 넣고 실온에서 10일간 침적시켜 추출한 후 300메쉬 여과지로 여과하고, 1주일간 방치하여 침전물을 에드벤텍 5번 여과지와 와트만 GFC 47mm 여과지로 2번 여과하였다. 그리고 감압 농축기를 이용하여 50℃에서 완전히 농축하여 건조 중량 22.69g을 얻었다.

실시예 9.

백굴채 200g 중량을 메틸알코올 2㎏에 넣고 냉각 콘덴서가 달린 추출기에서 65～75℃로 5시간 가열 추출한 후 300메쉬 여과지로 여과하고, 1주일간 방치하여 침전물을 에드벤텍 5번 여과지와 와트만 GFC 47mm 여과지로 2번 여과하였다. 그리고 감압 농축기를 이용하여 50℃에서 완전히 농축한 후 이 농축액에 물 1㎏를 가하고 다시 디에틸에테르 1㎏를 가하여 잘 섞어준 후 두 층으로 완전히 분리시킨다. 하층인 수층에 다시 1㎏의 에틸아세테이트를 가하여 잘 섞어준 후 두 층으로 완전 히 분리시켜 에틸아세테이트 층을 감압 농축기를 이용하여 50℃로 완전히 농축하여 건조 중량 12.07g를 얻었다.

실험예 1. 백굴채 추출물의 세포증식효과

상기 실시예 2에서 제조된 백굴채 추출물 건조분말에 대하여 세포배양을 이용한 세포 증식 효과를 측정하였다.

1) 실험방법

세포 독성 및 증식 실험을 다음과 같은 방법으로 실시하였다. 배양하고 있는 세포(파이브로블라스트,3T3)를 96 웰 마이크로플레이트에 5,000세포/웰로 분주하여 30분간 항온조에서 배양하고, 시료를 농도 별 각각 0.01, 0.05, 0.1, 0.5(%,W/V))로 투여하여 72시간동안 배양하였다. 그리고 티아졸린블루(Thiazoline blue)를 투여하고 4시간동안 추가 배양을 하였다. 배양액을 모두 버리고 마이크로플레이트의 각 웰에 반응 정지액을 가하고 5분간 교반한 후, 570㎚에서 흡광도를 측정하였다. 대조군은 시료 주입량만큼 10% 우태아혈청(Fetal Bovine Serum, FBS) 배지를 투여하여 세포 성장의 최적 조건으로 동시배양을 하였으며, 대조군의 세포증식을 100%로 하고 시료 투입 실험군의 세포 증식율을 계산하였으며, 비교예로 알부틴을 사용하였다.

2) 실험결과

세포증식 효과는 계산식1에 의해 산출되었고, 그 결과는 하기 표 1에 나타 내었으며, 도1의 그래프로 도식화하였다.

<백굴채 추출물의 세포증식효과>

각 시료의 농도(%)	세포 증식율(%)
	백굴채 추출물	알부틴
대조군	100	100
0.01	113.34	109.74
0.05	125.94	115.90
0.10	131.77	120.68
0.50	140.25	129.14

삭제

표 1에 나타난 바와 같이, 세포 성장 최적 조건에서의 세포 증식을 100%로 하였을 때, 백굴채 추출물 농도 0.5%(W/V)에서 140.25%의 세포 증식 효과를 나타내었다. 또한, 세포 증식 효과가 있음은 백굴채 추출물이 세포에 대한 독성이 없다는 것을 의미하는 것으로, 상기 세포 증식효과 실험으로부터 본 발명의 백굴채 추출물의 우수한 세포증식 효과와 더불어 세포독성이 없는 안전한 것임을 확인할 수 있었고 미백 효과가 있는 알부틴과 세포 증식 및 독성효과를 비교한 결과 알부틴의 세포 증식효과는 미미하였으나 백굴채 추출물은 우수한 세포 증식 효과가 있음을 확인 할 수 있었다.

실험예 2. 백굴채 추출물의 자유라디칼 소거 효과

상기 실시예 2에서 제조된 백굴채 추출물 건조분말에 대하여 자유라디칼 소거효과를 측정하였다.

1)실험방법

DPPH(1,1-디페닐-2피크릴-히드라질)방법(참조:Blois.M.S.Nature 181,1190,1958)을 사용하여 실험을 수행하였으며, DPPH는 시그마(SIGMA)사의 것을 사용하였다. 0.2mM DPPH 메탄올 용액 1ml에 여러 농도(0.001, 0.003, 0.006% w/v)의 백굴채 추출물 또는 비타민 C에 에탄올 또는 메탄올 용액 2ml를 첨가하고 잘 교반한 후 실온에서 10분간 반응을 시킨다. 그리고 517nm에서 흡광도를 측정하였으며, 이때 대조군으로 백굴채 추출물 대신 정제수를 사용하였다.

하기 수학식 2을 이용하여 자유라디칼 소거효과를 구하고 자유라디칼을 50% 소거하는 시료의 농도를 산출하였다.

2) 시험결과

자유라디칼소거효과는 계산식 2에 의해 산출되었고, 그 결과를 하기 표 2에 기재하였다

<백굴채 추출물의 자유라디칼 소거 효과 >

실험물질	최종실험농도(%)	자유라디칼소거율(%)	SC50(%)
실시예 1	0.006	92.20	0.0036
실시예 2	0.006	95.13	0.0012
실시예 3	0.006	92.09	0.0032
실시예 4	0.006	92.78	0.0028
실시예 5	0.006	90.31	0.0038
실시예 6	0.006	91.28	0.0035
실시예 7	0.006	92.98	0.0026
실시예 8	0.006	92.51	0.0028
실시예 9	0.006	93.85	0.0019
비타민 C	0.003	91.28	0.0009

SC_{50 :} 자유라디칼을 50% 소거하는 시료의 농도(50% Scavenging Concentration)

표 2에서 확인할 수 있는 바와 같이 실시예 2의 백굴채 추출물의 자유라디칼 50% 소거 농도(SC₅₀)는 0.0012%이고 비타민 C는 0.0009% 이었다. 그러나 비타민의 안정성이 떨어지는 것을 고려한다면 백굴채 추출물의 자유라디칼 소거 효과가 우수하다는 것을 알 수 있다. 자유라디칼의 소거 효과는 항산화 효과로 대변할 수 있으므로 멜라닌 생성의 과정 중에서 도파의 자동산화를 억제하는 효과가 있다고 할 수 있다.

실험예 3. 백굴채 추출물의 티로시나제활성 억제효과

상기 실시예 2에서 제조된 백굴채 추출물 건조분말에 대하여 티로시나제 활성 억제 효과를 측정하였다.

1) 실험방법

효소 티로시나제는 버섯류에서 추출한 것으로 시그마(SIGMA)사의 것을 사용하였다. 먼저 기질인 티로신을 증류수에 0.3mg/ml의 용액으로 만들어서 그 용액을 1ml씩 시험관에 넣고, 여기에 포타슘-포스페이트 완충용액(0.1M, pH 6.8) 1ml와 각각의 시료 0.9ml를 넣은 뒤 37℃ 항온조에서 10분 동안 반응시켰다. 이때 대조군은 각 시료 대신 용매만을 0.9ml 넣었다. 이 반응액에 2500unit/ml 의 티로시나제용액 0.1ml씩을 넣고 다시 37℃ 항온조에서 10분 동안 반응시켰다. 이 반응액이 든 시험관을 얼음물 속에 넣어서 급냉시켜 반응을 중지시키고 광전 분광분석계로 파장 475nm에서의 흡광도를 측정하였다. 각각 시료의 티로시나제 활성 억제효과를 계산하였으며, 비교예로 알부틴을 사용하였다.

2) 시험결과

티로시나아제 활성억제효과는 계산식 3에 의해 산출되었고, 그 결과는 하기 표 3에 나타내었으며, 도 2의 그래프로 도식화하였다.

<백굴채 추출물의 티로시나아제 활성억제 효과>

시료명	실험농도(%, W/V)
	0.07	0.10	0.50	1.00
실시예 2	28.83%	42.87%	81.25%	98.82%
알부틴	22.41%	38.58%	74.23%	95.22%

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백굴채 추출물의 IC₅₀(Inhibition Concentration 50)은 0.27% 농도인데 반하여 알부틴의 IC₅₀은 0.37%농도 였다.

실험예 4. 백굴채 추출물의 멜라닌 생성억제 효과

상기 실시예 2에서 제조된 백굴채 추출물 건조분말에 대하여 세포배양을 이용한 멜라닌 생성 억제 효과를 측정하였다.

1) 실험방법

세포는 BL6 멜라노사이트를 사용하여 실험하였다. 96 웰 마이크로플레이트 (96 well micro plate)에 5,000/웰(well) 의 BL6 멜라노사이트를 분주하고, 24시간 후에 시료를 농도 별로 처리한 후 72시간 후에 멜라닌 생성량을 475nm에서 흡광도를 측정하였으며, 대조군은 세포를 제외한 시료와 배지로 하여 동시에 측정 하였다. 결과는 멜라닌 생성억제 효과를 알부틴과 비교하였다.

2) 시험결과

멜라닌 생성억제효과는 하기 표 4에 나타내었으며, 도 3의 그래프로 도식화하였다.

<백굴채 추출물의 멜라닌 생성 억제 효과>

시료명	실험농도(%, W/V)
	0.025	0.05	0.10	0.25
실시예 2	113.45%	125.55%	129.11%	134.67%
알부틴	109.34%	115.19%	117.28%	122.41%

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표 4에서 확인할 수 있는 바와 같이 백굴채 추출물의 멜라닌 생성 억제 효과가 알부틴보다 우수한 것으로 나타났다.

제조예 1.

하기 표 5의 조성으로 실시예 2의 백굴채 추출물 분말을 함유하는 다중리포좀을 제조하였다.

번호	원료	함량(중량%)
1	백굴채 추출물	10.00
2	베타시토스테롤	1.80
3	레시친	2.00
4	세라마이드	1.00
5	세테스-5	2.50
6	콜레스테롤	1.80
7	스테아르산	1.50
8	디이에이세틸포스페이트	0.60
9	글리세린	10.00
10	해바라기씨 오일	15.0
11	방부제	미량
12	정제수	잔량

<제조방법>

성분 2～7을 포함하는 지질과 성분 1, 8, 9 및 12를 혼합하고 80℃에서 균질화하여 마이크로플루다이져를 통과한 후, 400-450 메쉬 여과포로 여과하고, 성분 10을 서서히 첨가하여 균질화한 다음, 다시 마이크로플루다이져에 재차 통과시킨 후, 성분 11 을 투입하여 분산시켜 안정화하고 숙성시켜 백굴채 추출물 함유 다중리포좀을 제조하였다.

백굴채 추출물을 이용한 화장품 제조

제형예 1.

하기 표 6의 조성으로 상기 제조예 1을 함유하는 화장수(스킨로션)의 제형예는 다음과 같다.

번호	원 료	제형예 1
1	제조예 1	5.0
2	글리세린	3.0
3	부틸렌글리콜	2.0
4	프로필렌글리콜	2.0
5	폴리옥시에칠렌(60) 경화피마자유	1.0
6	에탄올	10.0
7	트리에탄올아민	0.1
8	방부제	미량
9	향료	미량
10	정제수	잔량

<제조방법>

성분 2～4, 7, 8 및 10을 순서대로 투입하여 교반하면서 용해시킨다. 다음, 성분 5를 60℃정도로 가열하여 용해시킨 후, 여기에 성분 6 및 9를 투입 완전용해시킨 후 제조부에 투입교반한다. 마지막으로 성분 1을 투입하여 충분히 교반한 뒤 숙성시켜 제조한다.

제형예 2.

하기 표 7의 조성으로 상기 제조예 1을 함유하는 로션의 제형예는 다음과 같다.

번호	원 료	제형예 2
1	제조예 1	10.0
2	밀납	1.0
3	폴리솔베이트 60	1.5
4	솔비탄세스퀴올레이트	0.5
5	미네랄오일	10.0
6	소르비탄 스테아레이트	1.0
7	친유형 모노스테아린산 글리세린	0.5
8	스테아린산	1.5
9	글리세릴스테아레이트/피이지-100 스테아레이트	1.0
10	프로필렌글리콜	3.0
11	카보머	0.1
12	트리에탄올아민	0.1
13	방부제	미량
14	향료	미량
15	정제수	잔량

<제조방법>

성분 10, 11, 13, 및 15를 혼합교반하면서 80～85℃ 사이로 가열하여 제조부에 투입한 후, 유화기를 작용시켜 성분 2~9, 및 12를 80～85℃ 사이로 가열하여 투입한 뒤 유화한다. 유화가 끝나면 교반기를 이용하여 교반하면서 45℃까지 냉각한 뒤, 성분 14를 투입하고 35℃에서 성분 1을 투입하여 25℃까지 냉각한 뒤 숙성시켜 제조한다.

제형예 3.

하기 표 8의 조성으로 상기 제조예 1을 함유하는 크림의 제형예는 다음과 같다.

번 호	원 료	제형예 3
1	제조예 1	10.0
2	스테아린산	1.5
3	세틸알콜	2.0
4	친유형 모노스테아린산 글리세린	1.0
5	폴리옥시에틸렌 솔비탄모노스테아레이트	0.5
6	솔비탄세스퀘올레이트	0.5
7	글리세릴스테아레이트/피이지 100-스테아레이트	1.5
8	밀납	2.0
9	미네랄오일	10.0
10	스쿠알란	5.0
11	카보머	0.2
12	부틸렌글리콜	5.0
13	글리세린	5.0
14	트리에탄올아민	0.2
15	방부제	미량
16	향료	미량
17	정제수	잔량

<제조방법>

성분 11～13, 15 및 17을 혼합교반하면서 80～85℃ 사이로 가열하여 제조부에 투입한 후, 유화기를 작용시켜 성분 2~10 및 14를 80~85℃ 사이로 가열하여 투입한 뒤 유화한다. 다음, 유화가 끝나면 교반기를 이용하여 교반하면서 45℃까지 냉각한 뒤, 성분 16를 투입하고 35℃에서 성분 1을 투입하여 다음, 25℃까지 냉각한 뒤 숙성시켜 제조한다.

제형예 4.

하기 표 9의 조성으로 상기 제조예 1을 함유하는 에센스의 제형예는 다음과 같다.

번 호	원 료	제형예 4	비교예 4
1	제조예 1	15.0	-
2	스테아린산	1.0	1.0
3	밀납	1.5	1.5
4	친유형 모노스테아린산 글리세린	0.5	0.5
5	폴리솔베이트 60	1.5	1.5
6	솔비탄세스퀘올레이트	0.5	0.5
7	글리세릴스테아레이트/피이지 100-스테아레이트	1.0	1.0
8	해바라기씨오일	8.0	8.0
9	스쿠알란	5.0	5.0
10	카보머	0.2	0.2
11	부틸렌글리콜	6.0	6.0
12	글리세린	5.0	5.0
13	트리에탄올아민	0.2	0.2
14	콜라겐	2.0	2.0
15	방부제	미량	미량
16	향료	미량	미량
17	정제수	잔량	잔량

<제조방법>

성분 10～12, 15 및 17을 혼합교반하면서 80～85℃ 사이로 가열하여 제조부에 투입한 후, 유화기를 작용시켜 성분 2～9 및 13을 80～85℃ 사이로 가열하여 투입한 뒤 유화한다. 다음, 유화가 끝나면 교반기를 이용하여 교반하면서 45℃까지 냉각한 뒤, 성분 16를 투입하고 35℃까지 냉각되면 성분 1 및 14를 투입하여 교반한 다음, 25℃까지 냉각한 뒤 숙성시켜 제조한다.

실험예 5. 피부미백 개선효과

상기 제형예 4 및 비교예 4의 에센스에 대한 피부 도포시 피부미백 개선효과를 확인하기 위하여 다음과 같은 임상 확인 실험을 하였다. 20~55세의 여성층으로서 평소 피부상태가 밝지 못한 피부의 소유자 40명을 대상으로 피부미백 개선상태를 조사하였다. 동일인에게 안면 왼쪽 부분에는 상기 제형예 4의 에센스를, 안면 오른쪽 부분에는 비교예 4의 에센스를 1일 아침, 저녁으로 2회 20일간 피부에 도포하게 한 후, 피부미백 개선을 확인하기 위하여 피부상태 정도를 측정하였다. 그 결과를 하기 표 10에 나타내었다.

< 피부미백 개선도>

조사항목		피부미백 개선효과
		인원수	%
처방예 4	매우 만족	18	45.0
	만족	14	35.0
	보통이다	8	20.0
	불만족	-	-
비교예 3	매우 만족	-	-
	만족	9	22.5
	보통이다	25	62.5
	불만족	6	15.0

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상기 표 10에서 알 수 있는 바와 같이, 백굴채 추출물을 첨가하여 제조한 제형예 4의 화장료가 비교예 4보다 피부미백 개선효과가 우수하다는 것을 알 수 있었다.

도 1은 본 발명에 따른 백굴채 추출물의 세포증식 효과를 보여주는 그래프이다.

도 2는 본 발명에 따른 백굴채 추출물의 티로시나제 활성억제 효과를 보여주는 그래프이다.

도 3은 본 발명에 따른 백굴채 추출물의 멜라닌 생성억제 효과를 보여주는 그래프이다.

Claims (10)

1. 백굴채(Chelidonium Majus L.) 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부미백 개선용 화장료 조성물.
2. 제 1항에 있어서, 상기 백굴채 추출물은 건조된 백굴채의 중량비에 대하여 추출용매를 1～15배 중량으로 가한 후, 냉각 콘덴서가 장치되어 용매가 증발되는 것을 방지한 상태에서 50～100℃에서 3～24시간 동안 가열하거나 4～30℃에서 3～20일간 침적시켜 유효성분을 추출하는 것을 특징으로 하는 피부미백 개선용 화장료 조성물.
3. 제 2항에 있어서, 상기 추출용매는 물, 에탄올, 메탄올, 에틸아세테이트, 글리세린, 에틸렌글리콜, 부틸렌글리콜, 프로피렌글리콜, 함수 에탄올, 함수 메탄올, 함수 글리세린, 함수 에틸렌글리콜, 함수 부틸렌글리콜, 함수 프로필렌글리콜로 이루어진 군에서 선택된 1종이상임을 특징으로 하는 피부미백 개선용 화장료 조성물.
4. 제 1항에 있어서, 상기 백굴채 추출물은 리포좀화되어 다중리포좀의 형태로 함유되는 것을 특징으로 하는 피부미백 개선용 화장료 조성물.
5. (a) 백굴채 추출물, 정제수, 지질, 다가알코올및 기타 화장료 성분들을 함유하는 혼합물을 마이크로플루다이져에 통과시키는 단계;

   (b) 400-450 메쉬여과포로 여과하여 평균입경 200㎚이하의 백굴채 추출물의 리포좀을 수득하는 단계;

   (c) 상기 백굴채 추출물의 리포좀에 다가알코올의 지방산 에스테르를 첨가하여 균질화하는 단계; 및

   (d) 다시 마이크로플루다이져에 통과시켜 평균입경 200㎚이하의 유백색 반투명의 다중리포좀을 얻는 단계를 포함하는 백굴채 추출물 함유 다중리포좀의 제조방법.
6. 제 5항에 있어서, 상기 지질은 베타시토스테롤, 콜레스테롤의 스테롤류와 세라마이드, 레시친, 지방산으로 이루어진 인지질에서 선택된 1종 또는 2종 이상으로 화장료 조성물 총 중량에 대하여 2～15중량%의 양으로 함유되고,

   상기 다가알코올은 글리세린, 1,3-부틸렌글리콜 및 프로필렌글리콜에서 선택된 1종으로 화장료 조성물 총 중량에 대하여 5～20중량%의 양으로 함유되며,

   상기 다가알코올의 지방산 에스테르는 해바라기씨 오일, 마카데미아넛 오일, 포도씨 오일, 및 메도폼 씨드 오일로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상으로 화장료 조성물 총 중량에 대하여 5～25중량%의 양으로 함유되는 것을 특징으로 하는 백굴채 추출물 함유 다중리포좀의 제조방법.
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