KR100363779B1

KR100363779B1 - 암질환의예방및치료를위한제약조성물과그의제조방법

Info

Publication number: KR100363779B1
Application number: KR1019950702773A
Authority: KR
Inventors: 쿨크사르기울라
Original assignee: 이뮤날케이에프티.
Priority date: 1993-11-09
Filing date: 1994-11-08
Publication date: 2003-03-06
Also published as: FI953369A; AU682735B2; JPH08508045A; ES2094702A1; CA2151826A1; AU1074995A; PL177981B1; FI953369A0; RU2138257C1; NL9420013A; AT408414B; DE4498692T1; DE69429806T2; DE69429806D1; ATA900894A; CN1116406A; HU9303171D0; HU213677B; ES2094702B1; SE9502474D0

Abstract

본 발명은 암 질환의 예방 및 치료를 위한 제약 조성물과 그의 제조 방법에 관한 것이다. 본 발명의 조성물은 순환계에서 발생하는 3 이상의 활성 화합물; 1 이상의 아미노산, 1 이상의 비타민 및, 아데닌, 2-데옥시-D-리보스, D-만노스, D-글루코사민, 말산, 옥살아세트산 및 아데노신 트리포스페이트로 이루어진 군에서 선택된 1 이상의 물질로 이루어진다.

본 발명의 조성물은 독성 효과없이 암 질환의 예방, AIDS 및 이식의 경우에 종양 형성의 억제, 방전이 형성 저해 및 암 질환의 직접적, 보조적 또는 병용 처치 및 치료에 적용할 수 있다.

Description

암 질환의 예방 및 치료를 위한 제약 조성물과 그의 제조방법

본 발명은 암 질환의 예방 및 치료를 위한 제약 조성물과 그의 제조 방법에 관한 것이다.

암 치료요법에 있어서, 가장 흔히 사용하는 방법은 외과수술, 방사선 및 화학요법 치료이다[The Pharmacological Basis of Therapeutics, Pergamon Press, Inc., New York, pp. 1202-1263(1990) ; Harrison's Principles of Internal Medicine, 12th ed., International Edition, McGraw-Hill, Inc., New York, Vol. 2, pp. 1587-1599(1991); Scientific American Medicine, Scientific American, Inc., New York, Vol. 2, 12(V), pp. 1-14(1984)]. 방사선 요법에 있어서, 널리 사용되는 이온화 뿐만 아니라, 방사선 요법 및 화학요법과 병행하여 광선요법, 국소 과온증을 특별한 경우 예를들면, 피부암에 이용한다. 그의 효과, 유래 및 구조에 의해 분류하면 화학요법중에는 알킬화제, 식물성 알카로이드, 항생물질, 항대사물, 기타 치료제(예를들면, 아스파라기나제) 및 종종 사용되는 기타 호르몬도 발견할 수 있다. 화학요법에서 최근에 사용되는 방법은 다음과 같다: 병용 화학요법; 독성을 감소시키기 위해 화학요법 의약을 장기간동안 소량 정맥 또는 동맥내 주입; 약제내성을 극복하기 위한 다량 투여 화학요법 및 골수의 자가이식과 병용하는 동종 요법; 생물학적 반응 조절제와 병용하는 화학요법제; 더 확대된 범위로의 보조제또는 신보조제 화학요법의 사용. 가장 흔히 사용되는 생물학적 반응 조절제는, 인터페론, 종양 괴사 인자, 예를들면 인터루킨-2와 같은 림프카인, 및 모노클로날 항체 등이다. 기타 식이요법, 다소 밝혀진 혈청 제제 및 정신작용 효과를 이용하는 Simonton 방법은 종양 질환의 치료에 현재 적용되는 방법들이나 이들의 효과는 아직 증명되지 않았다.

상기한 참고문헌들에 상세히 기재된 현재 사용되는 방법들의 가장 특징적인 단점은 독성, 상당한 부작용, 낮은 종양 특이성, 내성의 발생 및 효과의 한정된 범위 등이다. 암 치료에 사용되는 대부분의 세포독성 의약들은 종양 분열 세포와 정상 분열 세포를 구별하지 못한다; 그러므로, 살아있는 숙주조직(예를들면, 골수, 장)에 회복 불가능한 손상을 주지 않기 위해, 의약은 존재하는 종양 세포 전부를 완전히 제거하는데는 부족하다고 일반적으로 증명된 투여량을 투여하여야 한다[Pharmac. Ther., 49, 43-54(1991)]. 방사선 요법은 방사선 손상을 유발할 수 있고 동시에 저산소증 세포 및 어떤형태의 종양에는 효과가 없다. 화학요법에 사용되는 약물은 또한 다양한 유해한 부작용을 갖는다. 이들은 중추 신경계, 해마 토포에틱(haematopoietic) 기관, 위의 점막, 장 및 모든 분열 세포에 손상을 입힐 수 있다. 뿐만 아니라, 이들은 간, 콩팥, 허파 및 심장 근육에도 손상을 줄 수 있다. 거의 모든 효과적인 항종양제는 면역억제성이다[Proc. Roy. Soc. Med.,63,1063-1066(1970)]. 이들 대부분이 기형 또는 발암 효과를 가지며, 때때로 불임을 유발하거나 종양의 재발 빈도를 증가시킨다. 화학요법으로 종양의 60 내지 70%에 영향을 미치는 것은 어렵거나 불가능하고, 또한 치료 동안에 내성이나 교차-내성이 발생될수도 있다.

불행히도, 개체 자체의 방어 메카니즘을 이용하는 생물학적 반응 조절제를 사용하는 치료에도 유사한 단점이 있는데, 이것은 이들이 몇 종류의 종양에만 효과가 있을 뿐만 아니라, 또한 유해한 부작용을 가지기 때문이다[Harrison's Principles of internal Medicine, 12th ed., International Edition, McGraw-Hill, Inc., New York, Vol. 2, pp. 1587-1599(1991)]. 인터페론도 또한 다른 것들 사이에서 많은 심각한 부작용, 예를들면 심장독성 등을 갖는다[Chest,99,557-561(1991)]. 마찬가지로, 모노클로날 항체에 대한 희망도 실현되지 못하였다[Eur. J. Cancer,27,936-939(1991)]. 1980년부터, 면역요법에 대한 4백건 이상의 등록된 임상시험이 실시되었음에도 불구하고, 아직 어느 누구도 어떠한 형태의 암에 대한 치료방법도 소개하지 못했다[J. R. Soc. Med., 84, 321(1991)].

PCT 공개 특허 제 WO 86/025555호는 L-시스테인, L-메티오닌, L-히스티딘, L-페닐알라닌, L-리신, L-트립토판, L-발린, L-루신, L-트레오닌, L-말산 및 L-아스코르브산으로 이루어진 암 질환의 치료에 사용하는 의약에 관한 것이다. 활성화제인 L-말산 및 L-아스코르브산은 그의 산 형태 내에서 아미노산을 완충 및 안정화하는데, 그리하여 이들은 6.8 미만의 산도 범위로 혈액 pH값을 조절한다. 상기한 공보에는 악성 종양의 성장 정지 또는 심지어 후퇴를 입증할만한 데이타가 전혀 없다.

공개된 일본 특허출원 제62-135421호는 종양증식에 억제작용을 나타낼 수 있는, L-이소루신을 제외한 특정 아미노산들을 함유하는 아미노산 수액에 관한 것이다. 이러한 제조물의 가능하지만 증명되지 않은 효과는 예를들면 이소로이신과 같은 아미노산 제한에 기초한다.

본 발명의 목적은 종래의 조성물 및 종양 치료 방법의, 예를들면 독성, 낮은 특이성 및 효과의 제한된 범위 등의 단점을 제거하기 위한 천연 물질로 이루어진 제약 조성물을 제조하는 것이다.

본 발명은 상이한 개체내의 종양 세포에 대한 수동 방어 시스템[이하, 수동 항종양 방어 시스템(PADS)이라 함]의 인식에 기초한 것이다. 이러한 시스템은 생겨나는 종양 세포 및 이미 자란 종양 세포를 제거할 수 있다. PADS에 참여하는 물질은 순환계에서 발생하는 내인생 또는 외인생 천연 물질 즉, 아미노산, 비타민, 핵산의 염기, 탄화수소 및 세포-대사 생성물이다. 순환계 성분이므로 모든 세포에 도달하여 들어갈 수 있는 상기한 물질 3이상을 함께 사용하면, 각각의 효과가 상승적으로 증가하여 즉 종양 세포를 제거할 수 있음을 발견하였다.

또한, 본 발명은 상승작용으로 인하여 PADS의 참여자에 대한 그들의 행동에 있어서 정상 세포와 종양 세포 사이에 상당한 질적 차이가 있고, 그로인해 두 종류의 세포가 구별될 수 있다는 인식에 기초한다. 전통적인 면역 시스템은 정상 세포의 외적인 차이로 종양 세포를 인식하고 선택적으로 파괴할 수 있는 반면에, 최근에 알려진 수동 항종양 방어 메카니즘은 내적인 차이로 동일한 일을 할 수 있다.

본 발명은 또한 순환계에서 종양 세포에 과잉공급되는 정도로 상기한 성분들의 농도가 증가함으로써 상기한 조성물이 선택적으로 암 세포에 치명적인 대사 압력을 일으킨다는 인식에 기초하였다.

또한, 본 발명은 투여량 및 투여 방법에 따라, 상이한 종양 세포에서 종양 예방 또는 항종양 효과를 얻을 수 있다는 인식에 기초하였다. 여러 가지 면에서 정상 세포와 다른, 다양한 종류의 종양의 경우에는, 표준으로서 상승효과를 사용하여 가장 효과적인 혼합물의 질적 및 양적 조성물을 결정할 수 있다.

상기한 것에 기초하여, 본 발명은 순환계에서 발생하는 3 이상의 활성 화합물; 1 이상의 아미노산, 1 이상의 비타민 및 아데닌, 2-데옥시-D-리보스, D-만노스, D-글루코사민, 말산, 옥살아세트산, 아데노신 트리포스페이트 및/또는 제약적으로 허용가능한 이들의 염으로 이루어진 군에서 선택된 1 이상의 물질로 이루어진 조성물로, 상기 조성물이 아미노산 이외에 말산과 비타민만을 함유한다면, 상기 비타민은 아스코르브산 이외의 것인 암 질환의 예방 및 치료를 위한 제약 조성물에 관한 것이다. 조성물은 또한 제약업에서 일반적으로 사용되는 담체, 희석제 및/또는 기타 보조제로 이루어진다.

본 발명에 따른 조성물은 아미노산으로서 L-메티오닌, L-트립토판, L-티로신, L-페닐알라닌, L-아르기닌, L-히스티딘, N-벤조일글리신 및/또는 이들의 염 및 비타민으로서 d-비오틴, 피리독신, 리보플라빈, 리보플라빈-5'-포스페이트, L-아스코르브산, 리포산, 오로트산 및/또는 이들의 염으로 이루어진다.

본 발명에 따른 바람직한 조성물은 L-트립토판, L-아스코르브산, 및 아데닌, 2-데옥시-D-리보스, D-글루코사민 및/또는 제약적으로 허용가능한 이들의 염으로 이루어진 군에서 선택된 1 이상의 물질로 이루어진다.

본 발명에 따른 다른 바람직한 조성물은 L-아르기닌, 리보플라빈-5'-포스페이트, 및 D-만노스, 말산, 아데노신 트리포스페이트 및/또는 제약적으로 허용가능한 이들의 염으로 이루어진 군에서 선택된 1 이상의 물질로 이루어진다.

본 발명에 따른 다른 바람직한 조성물은 L-아르기닌 30 내지 44 중량%, 리보플라빈-5'-포스페이트 27 내지 35 중량%, 말산 38 내지 62 중량% 및/또는 제약적으로 허용가능한 이들의 염으로 이루어진다.

본 발명에 따른 더욱 바람직한 조성물은 L-메티오닌, L-트립토판, L-티로신, L-페닐알라닌, L-아르기닌, L-히스티딘, N-벤조일글리신 및/또는 이들의 염으로 이루어진 군에서 선택되는 1 이상의 아미노산 0.002 내지 70 중량%, d-비오틴, 피리독신, 리보플라빈, 리보플라빈-5'-포스페이트, L-아스코르브산, 리포산, 오로트산 및/또는 이들의 염으로 이루어진 군에서 선택된 1 이상의 비타민 0.0004 내지 80중량% 및 아데닌, 2-데옥시-D-리보스, D-만노스, D-글루코사민, 말란, 옥살아세트산, 아데노신 트리포스 페이트 및/또는 제약적으로 허용가능한 이들의 염으로 이루어진 군에서 선택된 1 이상의 물질 0.003 내지 80 중량%로 이루어진다.

본 발명에 따른 다른 바람직한 조성물은 L-메티오닌 0.9 내지 25 중량%, L-트립토판 0.8 내지 19 중량%, L-아르기닌 1.1 내지 48 중량%, d-비오틴 0.9 내지 46 중량%, 피리독신 1.2 내지 16 중량%, 리보플라빈-5'-포스페이트 0.03 내지 42 중량%, D-글루코사민 0.05 내지 18 중량%, 2-데옥시-D-리보스 0.5 내지 60 중량%, 말산 0.7 내지 68 중량%, D-만노스 0.6 내지 40 중량% 및/또는 제약적으로 허용가능한 이들의 염으로 이루어진다.

본 발명에 따른 매우 효과적인 조성물은 L-메티오닌 0.005 내지 34 중량%,L-트립토판 0.002 내지 25 중량%, L-티로신 0.02 내지 23 중량%, L-페닐알라닌 0.04 내지 30 중량%, L-아르기닌 0.04 내지 50 중량%, L-히스티딘 0.03 내지 43 중량%, N-벤조일글리신 0.05 내지 22 중량%, d-비오틴 0.01 내지 60 중량%, 피리독신 0.01 내지 20 중량%, 리보플라빈 0.0004 내지 45 중량%, 리보플라빈-5'-포스페이트 0.0005 내지 45 중량%, L-아스코르브산 0.003 내지 70 중량%, 리포산 0.004 내지 15 중량%, 오로트산 0.01 내지 17 중량%, 아데닌 0.001 내지 10 중량%, 2-데옥시-D-리보스 0.01 내지 63 중량%, D-만노스 0.08 내지 42 중량%, D-글루코사민 0.05 내지 20 중량%, 말산 0.01 내지 80 중량%, 옥살아세트산 0.02 내지 60 중량%, 아데노신 트리포스페이트 0.001 내지 10 중량% 및/또는 제약적으로 허용가능한 이들의 염으로 이루어진다.

본 발명의 다른 목적은 순환계에서 발생하는 활성 화합물 중에서 1 이상의 아미노산, 1 이상의 비타민 및, 아데닌, 2-데옥시-D-리보스, D-만노스, D-글루코스, 말산, 옥살아세트산, 아데노신 트리포스페이트 및/또는 제약적으로 허용가능한 이들의 염으로 이루어진 군에서 선택된 1 이상의 물질을 혼합하여 제약 조성물을 제조하는 것으로 이루어진 상기한 조성물의 제조방법에 관한 것이다. 또한, 제약업에서 일반적으로 사용하는 담체, 희석제 및/또는 기타 보조제를 조성물의 중량을 100% 추가하는데 필요한 양으로 활성 조성물과 혼합할 수 있다.

본 발명의 방법의 바람직한 구현예는 L-트립토판, L-아스코르브산 및 아데닌, 2-데옥시-D-리보스, D-글루코사민 및/또는 제약적으로 허용가능한 이들의 염으로 이루어진 군에서 선택된 1 이상의 물질을 혼합하여 제약 조성물을 제조하는 것으로 이루어진다.

본 발명의 방법의 다른 바람직한 구현예는 L-아르기닌, 리보플라빈-5'-포스페이트, D-만노스, 말산, 아데노신 트리포스페이트 및/또는 제약적으로 허용가능한 이들의 염으로 이루어진 군에서 선택된 1 이상의 물질을 혼합하여 제약 조성물을 제조하는 것으로 이루어진다.

본 발명의 방법의 또 다른 바람직한 구현예는 L-아르기닌 30 내지 44 중량%, 리보플라빈-5'-포스페이트 27 내지 35 중량%, 말산 38 내지 62 중량% 및/또는 제약적으로 허용가능한 이들의 염을 혼합하여 제약 조성물을 제조하는 것으로 이루어진다.

본 발명의 방법의 바람직한 구현예는 L-메티오닌, L-트립토판, L-티로신, L-페닐알라닌, L-아르기닌, L-히스티딘, N-벤조일글리신 및/또는 이들의 염으로 이루어진 군에서 선택되는 1 이상의 아미노산 0.002 내지 70 중량%, d-비오틴, 피리독신, 리보플라빈, 리보플라빈-5'-포스페이트, L-아스코르브산, 리포산, 오로트산 및/또는 이들의 염으로 이루어진 군에서 선택된 비타민 0.0004 내지 80중량% 및 아데닌, 2-데옥시-D-리보스, D-만노스, D-글루코사민, 말산, 옥살아세트산, 아데노신 트리포스페이트 및/또는 제약적으로 허용가능한 이들의 염으로 이루어진 군에서 선택된 1 이상의 물질 0.003 내지 80 중량%를 혼합하는 것으로 이루어진다.

본 발명의 방법의 다른 바람직한 구현예는 L-메티오닌 0.9 내지 25 중량%, L-트립토판 0.8 내지 19 중량%, L-아르기닌 1.1 내지 48 중량%, d-비오틴 0.9 내지 46 중량%, 피리독신 1.2 내지 16 중량%, 리보플라빈-5'-포스페이트 0.03 내지 42중량%, D-글루코사민 0.05 내지 18 중량%, 2-데옥시-D-리보스 0.5 내지 60 중량%, 말산 0.7 내지 68 중량%, D-만노스 0.6 내지 40 중량% 및/또는 제약적으로 허용가능한 이들의 염을 혼합하여 제약 조성물을 제조하는 것으로 이루어진다.

본 발명의 방법의 매우 바람직한 구현예는 L-메티오닌 0.005 내지 34 중량%, L-트립토판 0.002 내지 25 중량%, L-티로신 0.02 내지 23 중량%, L-페닐알라닌 0.04 내지 30 중량%, L-아르기닌 0.04 내지 50 중량%, L-히스티딘 0.03 내지 43 중량%, N-벤조일글리신 0.05 내지 22 중량%, d-비오틴 0.01 내지 60 중량%, 피리독신 0.01 내지 20 중량%, 리보플라빈 0.0004 내지 45 중량%, 리보플라빈-5'-포스페이트 0.0005 내지 45 중량%, L-아스코르브산 0.003 내지 70 중량%, 리포산 0.004 내지 15 중량%, 오로트산 0.01 내지 17 중량%, 아데닌 0.001 내지 10 중량%, 2-데옥시-D-리보스 0.01 내지 63 중량%, D-만노스 0.08 내지 42 중량%, D-글루코사민 0.05 내지 20 중량%, 말산 0.01 내지 80 중량%, 옥살아세트산 0.02 내지 60 중량%, 아데노신 트리포스페이트 0.001 내지 10 중량% 및/또는 제약적으로 허용가능한 이들의 염을 혼합하여 제약 조성물을 제조하는 것으로 이루어진다.

치료에 사용하기 위해, 본 발명의 조성물은 장내 또는 비경구 투여를 위해 제약업에서 일반적으로 사용하는 비독성의 불활성 고체 또는 액체 담체, 희석제, 결합제 및/또는 기타 첨가제와 혼합한 후, 이들을 일반적인 약제 제형으로 변형시키는 방법에 의해 제약 조성물로 적절하게 제조된다. 이에 적합한 담체, 희석제 및 결합제로는 예를들면 물, 젤라틴, 락토오스, 사카로스, 전분, 펙틴, 스테아르산, 마그네슘 스테아레이트, 탈트, 다양한 식물성 오일 뿐만 아니라 프로필렌 글리콜또는 폴리에틸렌 글리콜과 같은 글리콜 등이 있다. 제약 첨가물 및 보조제는, 예를들면 메틸 4-히드록시 벤조에이트와 같은 방부제, 다양한 천연 또는 합성 에멀젼화제, 분산제 및 습윤제, 착색제 및 향미제, 완충 물질 뿐만 아니라 분해 및 용해를 촉진하는 물질 및 기타 바람직한 효과를 개선시키는 물질 등이다.

일반적인 의약 조성물은 상기한 제약적 첨가물을 사용하여 제조된 경구용 조성물이다; 이러한 조성물은, 예를들면, 정제, 캡슐제, 산제, 당의정제, 환제 또는 과립 등의 고상형, 시럽제, 용액제, 에멀젼제, 또는 현탁액 등의 액상형이 될 수 있다; 또한, 좌약 등의 직장용 조성물 뿐만 아니라, 예를들면, 주사용 용액제나 주입물 등의 비경구용 조성물도 가능하다.

본 발명에 따른 조성물의 바람직한 일일 투여량은 치료되는 질환의 특성, 환자의 상태, 치료 방법 등의 몇가지 인자에 의존한다. 바람직한 일일 투여량은 체중 1kg 당 30 내지 3000mg이다. 따라서, 1일 투여량은 각각 활성 조성물 0.2 내지 3g을 함유하는 정제, 캡슐제 또는 당의정제 1 내지 4개, 또는 활성 조성물 10 내지 200g/ℓ를 함유하는 주입 용액제 0.5 내지 3ℓ가 적당하다.

또한, 본 발명은 암 질환의 예방 및 치료 방법에 관한 것이다. 이러한 방법은 본 발명에 따른 조성물의 치료학적으로 유효한 양을 치료될 환자에게 투여하는 것으로 이루어진다.

본 발명은 다음의 표, 도면 및 실시예에 의하여 더욱 상세히 설명될 것이다. 하기 실험에서 사용된 세포들은 "American Type Culture Collection" (Rockville, MD, USA)으로부터 제공받았다.

표 1은 Sp2/0-Ag14 골수종 세포(ATCC CRL 1581)에 대한 각각 4개 및 5개의 유효 성분으로 이루어진 실시예 1 내지 20의 조성물 성분의 종양 세포 제거 효과 및 상승적인 협동 작용을 나타낸 것이다.

표 2는 실시예 21 내지 37에 기초하여, 성분을 더 첨가하였을 때 Sp2/0-Ag14 세포에 대한 5개의 유효 성분으로 이루어진 조성물의 효과의 증가를 나타낸 것이다.

제 1도는 실시예 1 내지 20에 따르는 각각 4개 및 5개의 유효 성분으로 이루어진 조성물의 성분의 효과 및 상승적인 협동 작용을 나타낸 것이다.

제 2도는 Sp2/0-Ag14 마우스 골수종 세포에 대한 실시예 102 내지 106에 따른 5개의 유효 성분으로 이루어진 조성물 및 실시예 107 내지 111에 따른 21개의 유효 성분으로 이루어진 조성물의 생체내 효과를 상응하는 조절 혼합물과 비교한 것이다.

제 3도는 Sp2/0-Ag14 마우스 골수종 세포에 대한 실시예 107에 따른 21개의 유효 성분으로 이루어진 조성물의 효과를 시간의 함수로서 치료되지 않은 세포 및 적당한 조절 혼합물과 비교한 것이다.

제 4도는 K-562 사람 적백혈병 세포(ATCC CCL 243)에 대한 실시예 107 내지 111에 따른 21개 유효 성분으로 이루어진 조성물의 생체내 효과를 상응하는 조절 혼합물과 비교한 것이다.

제 5도는 HeLa 사람 상피성 경관암(ATCC CCL 2)에 대한 실시예 107 내지 111에 따른 21개 유효 성분으로 이루어진 조성물의 생체내 효과를 상응하는 조절 혼합물과 비교한 것이다.

제 6도는 HEp-2 사람 유표피암 후두 세포(ATCC CCL 23)에 대한 실시예 107 내지 111에 따른 21개 유효 성분으로 이루어진 조성물의 생체내 효과를 상응하는 조절 혼합물과 비교한 것이다.

제 7도는 Vero 아프리카산 녹색 원숭이 신장 세포(ATCC CCL 81)에 대한 실시예 107 내지 111에 따른 21개 유효 성분으로 이루어진 조성물의 생체내 효과를 상응하는 조절 혼합물과 비교한 것이다.

제 8도는 BALB/c 마이스에 i.p. 주입된 Sp2/0-Ag14 마우스 골수종 세포에 대한 자란 종양에서의 실시예 112에 따른 21개 유효 성분으로 이루어진 조성물의 시험관내 효과를 상응하는 조절 혼합물과 비교한 것이다.

제 9도는 BALB/c(nu/nu) 마이스에 s.c. 주입된 HeLa 사람 상피성 경관암으로부터 피부밑에 자란 고체성 종양에 대한 실시예 112에 따른 21개 유효 성분으로 이루어진 조성물의 시험관내 효과를 상응하는 조절 혼합물과 비교한 것이다.

실험에서는 다음의 매질이 사용되었다: Sp2/0-Ag14 및 K-562 세포에서는 RPMI 1640 매질(Sigma Chemie GmbH, D-8024 Deisenhofen, 독일, 제품번호: R 6504), HEp-2, HeLs 및 Vero 세포에서는 MEM매질((Sigma Chemie GmbH, 제품 번호: M 4655)

실시예 1 내지 37

준비된 초자안에 교반기를 사용하여 표 1과 2에 나타낸 주어진 양의 활성화제를 혼합하고, 얻어진 산제 혼합물에 산형 성분의 중성화에 필요한 표 1과 2에 주어진 양의 탄산수소나트륨을 첨가하였다. 교반을 계속하면서, 조성물의 중량이 100% 추가되도록 적당한 매질을 혼합물에 첨가하였다. 이러한 방법으로 제조된 용액의 효과를 표 1, 표 2 및 제 1도에 나타내었다.

실시예 38 내지 67

산형 성분을 중성화하기 위해 탄산수소나트륨 대신, 적당량의 탄산 수소칼륨을 사용하는 것을 제외하고는 실시예 1 내지 37와 동일한 방법을 사용하였다. 이러한 방법으로 제조된 용액의 효과는 표 1, 표 2 및 제 1도에 각각 나타낸 실시예 1 내지 37의 용액의 효과와 거의 동일하다.

실시예 68 내지 97

산형 성분을 중성화하기 위해 탄산수소나트륨 대신, 적당량의 탄산칼슘을 사용하는 것을 제외하고는 실시예 1 내지 37와 동일한 방법을 사용하였다. 이러한 방법으로 제조된 용액의 효과는 표 1, 표 2 및 제 1도에 각각 나타낸 실시예 1 내지 37의 용액의 효과와 거의 동일하다.

실시예 98 내지 101

실시예 23, 24, 27 및 28에서 사용된 L-아르기닌, L-히스티딘, L-메티오닌 및 L-티로신 대신에, 각각 L-아르기닌 염산 0.053 중량%, L-히스티딘 염산 0.052 중량%, L-메티오닌 염산, L-티로신 염산 0.025 중량%을 사용하는 것을 제외하고는 실시예 23, 24, 27 및 28과 동일한 방법을 사용하였다. 이러한 방법으로 제조된 용액의 효과는 표 2에 나타낸 실시예 23, 24, 27 및 28의 용액의 효과와 거의 동일하다.

실시예 102

준비된 초자안에 교반기를 사용하여 L-트립토판 0.01 중량%, 2-데옥시-D-리보스 0.034 중량%, 아데닌 0.003 중량%, 말산 0.065 중량%, L-아스코르브산 0.007 중량% 및 탄산수소나트륨 0.091 중량%를 혼합하였다. 그런다음, 교반을 계속하면서, 조성물의 중량이 100% 추가되도록 적당한 매질을 상기한 혼합물에 첨가하였다. 이러한 방법으로 제조된 용액의 효과를 제 2도의 100% 조성물에 나타내었다.

실시예 103

각 조성물을 단지 80%만 혼합하는 것을 제외하고는 실시예 102와 동일한 방법을 사용하였다. 그런다음 조성물의 중량이 100% 추가되도록 적당한 매질을 상기한 혼합물에 첨가하였다. 이러한 방법으로 제조된 용액의 효과를 제 2도의 80% 조성물에 나타내었다.

실시예 104

각 조성물을 단지 60%만 혼합하는 것을 제외하고는 실시예 102와 동일한 방법을 사용하였다. 그런다음 조성물의 중량이 100% 추가되도록 적당한 매질을 상기한 혼합물에 첨가하였다. 이러한 방법으로 제조된 용액의 효과를 제 2도의 60% 조성물에 나타내었다.

실시예 105

각 조성물을 단지 40%만 혼합하는 것을 제외하고는 실시예 102와 동일한 방법을 사용하였다. 그런다음 조성물의 중량이 100% 추가되도록 적당한 매질을 상기한 혼합물에 첨가하였다. 이러한 방법으로 제조된 용액의 효과를 제 2도의 40% 조성물에 나타내었다.

실시예 106

각 조성물을 단지 20%만 혼합하는 것을 제외하고는 실시예 102와 동일한 방법을 사용하였다. 그런다음 조성물의 중량이 100% 추가되도록 적당한 매질을 상기한 혼합물에 첨가하였다. 이러한 방법으로 제조된 용액의 효과를 제 2도의 20% 조성물에 나타내었다.

실시예 107

준비된 초자안에 교반기를 사용하여 L-메티오닌 0.001 중량%, L-트립토판 0.01 중량%, L-티로신 0.036 중량%, L-페닐알라닌 0.041 중량%, L-아르기닌 0.004 중량%, L-히스티딘 0.039 중량%, N-벤조일글리신 0.089 중량%, L-아스코르브산 0.007 중량%, d-비오틴 0.012 중량%, 피리독신 0.010중량%, 리보플라빈 0.0004 중량%, 리보플라빈-5'-포스페이트 0.0006 중량%, 리포산 0.0006 중량%, 오로트산 0.017 중량%, 아데닌 0.003중량%, 2-데옥시-D-리보스 0.034 중량%, D-만노스 0.090 중량%, D-글루코사민 0.053 중량%, 말산 0.065 중량%, 옥살아세트산 0.040 중량%, 아데노신 트리포스페이트 0.0015 중량% 및 탄산수소나트륨 0.087 중량%를 혼합하였다. 그런다음, 교반을 계속하면서, 조성물의 중량이 100% 추가되도록 적당한 매질을 상기한 혼합물에 첨가하였다. 이러한 방법으로 제조된 용액의 효과는 제 2도, 제 3도, 제 4도, 제 5도, 제 6도 및 제 7도의 100% 조성물에 나타내었다.

실시예 108

각 조성물을 단지 80%만 혼합하는 것을 제외하고는 실시예 107와 동일한 방법을 사용하였다. 그런다음 조성물의 중량이 100% 추가되도록 적당한 매질을 상기한 혼합물에 첨가하였다. 이러한 방법으로 제조된 용액의 효과를 제 2도, 제 3도, 제 4도, 제5 도, 제 6도 및 제 7도의 80% 조성물에 나타내었다.

실시예 109

각 조성물을 단지 60%만 혼합하는 것을 제외하고는 실시예 107와 동일한 방법을 사용하였다. 그런다음 조성물의 중량이 100% 추가되도록 적당한 매질을 상기한 혼합물에 첨가하였다. 이러한 방법으로 제조된 용액의 효과를 제 2도, 제 3도, 제 4도, 제5 도, 제 6도 및 제 7도의 60% 조성물에 나타내었다.

실시예 110

각 조성물을 단지 40%만 혼합하는 것을 제외하고는 실시예 107와 동일한 방법을 사용하였다. 그런다음 조성물의 중량이 100% 추가되도록 적당한 매질을 상기한 혼합물에 첨가하였다. 이러한 방법으로 제조된 용액의 효과를 제 2도, 제 3도, 제 4도, 제5 도, 제 6도 및 제 7도의 40% 조성물에 나타내었다.

실시예 111

각 조성물을 단지 20%만 혼합하는 것을 제외하고는 실시예 107와 동일한 방법을 사용하였다. 그런다음 조성물의 중량이 100% 추가되도록 적당한 매질을 상기한 혼합물에 첨가하였다. 이러한 방법으로 제조된 용액의 효과를 제 2도, 제 3도, 제 4도, 제5 도, 제 6도 및 제 7도의 20% 조성물에 나타내었다.

실시예 112

준비된 초자안에 교반기를 사용하여 L-메티오닌 1.47 중량%, L-트립토판1.01 중량%, L-티로신 0.036 중량%, L-페닐알라닌 1.63 중량%, L-아르기닌 1.71 중량%, L-히스티딘 1.53 중량%, N-벤조일글리신 0.18 중량%, L-아스코르브산 1.94 중량%, d-비오틴 1.21 중량%, 피리독신 2.02 중량%, 리보플라빈 0.038 중량%, 리보플라빈-5'-포스페이트 0.05 중량%, 리포산 0.02 중량%, 오로트산 0.09 중량%, 아데닌 0.068 중량%, 2-데옥시-D-리보스 1.32 중량%, D-만노스 1.8 중량%, D-글루코사민 1.1 중량%, 말산 1.32 중량%, 옥살아세트산 0.040 중량%, 아데노신 트리포스페이트 0.11 중량%, 탄산수소나트륨 1.34 중량% 및 탄산수소칼륨 0.04 중량%를 혼합하였다. 그런다음, 교반을 계속하면서, KH₂PO₄0.02 중량% 및 Na₂HPO₄0.3 중량%를 함유하는 완충제 83.168 중량%를 상기한 혼합물에 첨가하였다. 이러한 방법으로 제조되어 동물의 치료에 사용된 용액의 효과를 제 8도 및 제 9도에 나타내었다.

실시예 113

혼합기 안에 L-트립토판 20 중량%, L-아스코르브산 62 중량% 및 D-글루코사민 18 중량%를 혼합하였다. 완전히 혼합한 후, 생성물인 산제 혼합물을 예방실험에 사용하였다.

실시예 114

L-아르기닌 32 중량%, 리보플라빈-5' 포스페이트 28 중량% 및 말산 40 중량%를 사용하는 것을 제외하고는 실시예 113과 동일한 방법을 사용하였다.

실시예 115

L-트립토판 23 중량%, 피리독신 0.2 중량%, N-벤조일글리신 17.8 중량% 및옥살아세트산 59 중량%를 사용하는 것을 제외하고는 실시예 113과 동일한 방법을 사용하였다.

실시에 116

L-티로신 19 중량%, L-아스코르브산 61 중량%, 아데닌 0.2 중량% 및 L-히스티딘 19.8 중량%를 사용하는 것을 제외하고는 실시예 113과 동일한 방법을 사용하였다.

실시예 117

L-메티오닌 31 중량%, d-비오틴 53 중량%, 아데닌 0.2 중량% 및 오로트산 15.8 중량%를 사용하는 것을 제외하고는 실시예 113과 동일한 방법을 사용하였다.

실시예 118

L-페닐알라닌 27 중량%, 리보플라빈 33 중량%, 아데닌 트리포스페이트 0.2 중량% 및 D-만노스 39.8 중량%를 사용하는 것을 제외하고는 실시예 113과 동일한 방법을 사용하였다.

실시예 119

L-히스티딘 32 중량%, 리포산 9 중량% 및 2-데옥시-D-리보스 59 중량%를 사용하는 것을 제외하고는 실시예 113과 동일한 방법을 사용하였다.

실시예 120

L-아르기닌 12 중량%, 피리독신 11 중량% 및 말산 77 중량%를 사용하는 것을 제외하고는 실시예 113과 동일한 방법을 사용하였다.

실시예 121

혼합기안에 L-메티오닌 10 중량%, L-트립토판 3 중량%, L-티로신 0.2 중량%, L-페닐알라닌 10.9 중량%, L-아르기닌 22.7 중량%, L-히스티딘 10 중량%, N-벤조일글리신 1.1 중량%, L-아스코르브산 11.9 중량%, d-비오틴 0.1 중량%, 피리독신 0.2 중량%, 리보플라빈 0.05 중량%, 리보플라빈-5'-포스페이트 0.35 중량%, 리포산 0.1 중량%, 오로트산 0.6 중량%, 아데닌 0.3 중량%, 2-데옥시-D-리보스 0.9 중량%, D-만노스 11.5 중량%, D-글루코사민 7 중량%, 말산 8 중량%, 옥살아세트산 0.4 중량% 및 아데노신 트리포스페이트 0.7 중량%를 혼합하였다. 완전히 혼합한 후, 생성물인 산제 혼합물을 예방실험에 사용하였다.

실시예 1 내지 37의 조성물의 효과 및 유효 성분(단독으로 존재하는 성분의 효과와 비교)의 상승적인 협동작용은 Sp2/0-Ag14 마우스 골수종 세포에서 조사되었다.

실험에 있어는 과학 문헌에 의해 공인된 가장 최근의 방법이 사용되었다. Sp2/0-Ag14와 K562 선의 경우에 있어서, 대수적으로 성장한 세포는 매질로부터 채취되어, 세포 배양을 위해 사용된 96-웰 플레이트에, 표시된 농도로 시험된 물질을 함유하는 웰마다 Sp2/0-Ag14 세포 4×10⁴및 K562 세포 2×10⁴의 최종 농도로 250㎕의 적당한 매질에 재현탁되었다. HeLa, HEp-2 및 Vero 세포의 경우에는, 배양된 세포는 트립신 0.2%를 함유하는 75% 융합 조직 배양 플라스크로부터 채취되었고, 적당한 매질에서 105 세포/mℓ의 밀도로 재현탁되었다. 부분표본(100㎕)은 96 웰 마아크로 플레이트로 분배되어 24 시간동안 배양되었다. 그런다음, 매질을 제거하고,표시된 농도로 시험된 물질을 함유하는 새로운 매질 250㎕로 교체하였다. 모든 종류의 세포는 48시간동안 증식되었다. 생존가능한 Sp2/0-Ag14 및 K562 세포의 수는 트립판 청색 염료 배타법을 사용하여 현미경적으로 측정되었다. HeLa, HEp-2 및 Vero 세포의 생존수는 세포의 내생적 알칼린 포스파타아제 활동도를 평가함으로써 측정되었다. 생성물은 Student's t-테스트를 사용하여 측정되었다. 표에서의 평균값후의 데이타와 도면의 기호는 "평균의 표준 오차"(SEM)를 의미한다.

표 1의 제 1열은 실시예 번호를 나타내고, 제 2열은 조절 실험의 번호를 나타내며, 다음의 6개 열에서는 실험에서 사용된 중량%로 표시된 성분의 양을 나타내었다. 조절 혼합물은 활성 조성물로서 화학적으로는 유사하나 약제학적으로 효과가 없는 물질(아미노산으로서 L-세린 0.026 중량%, L-아스파라긴 0.033 중량%, L-발린 0.029 중량%, L-알라닌 0.018 중량%, 글리신 0.006 중량%, 트리메틸글리신 0.059 중량% 및 L-프롤린 0.006 중량%; 비타민으로서 티아민 염산 0.017 중량%, 니아신 0.006 중량%, 폴산소디움염 0.019 중량%, D-판토텐산 헤미칼슘염 0.001 중량%, 우라실 0.012 중량%, 옥타노산 0.0008 중량%; 하이포크산틴 0.003 중량%, D(-)리보스 0.038 중량%, 글루코스 0.090 중량%, N-아세틸 글루코사민 0.055 중량%, 숙신산 디소디움염 0.081 중량%, 푸마릭산 디소디움염 0.080 중량% 및 구아노신 트리포스페이트 트리소디움 염 0.015 중량%) 동일량으로 구성하였다. 마지막 두개 열은 4개 및 5개 유효 성분, 각각으로 이루어진 조성물의 효과 및 성분 그 자체(조절 실험), 즉 각각 48 시간 배양 후의 세포수 및 치료되지 않은 세포량에 백분율로 표시된 세포량의 효과를 나타내었다(치료되지 않은 세포의 양이 100%). 예를들면, L-트립토판의 경우에는, 제 2 내지 제 4 조절 실험은 세포수로 L-트립토판의 0.002; 0.006 및 0.01 중량%, 각각의 효과를 나타낸다. 실시예 2 내지 4의 경우에는, 동일한 양으로 사용되나 4개의 유효성분과 함께 투여되지 않은 L-트립토판의 효과를 나타내었다.

표 1의 마지막 두 열의 데이타로부터 상기한 물질을 단독 사용시 암-세포-제거 효과를 나타내는 것은 그중에 아무것도 없다는 것을 볼수 있다; 사실상, 주어진 양의 L-트립토판을 사용하여 세포의 증식이 약간 증가하였다. 동시에, 문제의 열의 데이타로부터 모든 물질은 다른 4개의 유효 성분의 효과를 상승적인 방법으로 그것의 양에 비례하여 증가시킨다는 것을 알 수 있다. 예를들면, L-트립토판 0.01 중량%는 다른 4개 유효 성분의 효과를 73.1%에서 92.3%로 증가시켰다. 동일량(0.01 중량%)의 L-트립토판은 다른 4개의 성분 없이, 세포의 증식을 약간 증가시켰다. 이것은 상조적 효과를 명백히 증명한다.

4개의 유효 성분(실시예 1, 5, 9, 13 및 17)으로 이루어진 조성물과 여기에서(예를들면, L-트립토판 0.01 중량%의 경우에서) 최대량으로 사용된 5개번째 유효 성분(실시예 4, 8, 12, 16 및 20)으로 이루어진 조성물의 효과간의 차이는 모든 경우에서 상당하고(p<0.01), 즉 모든 물질들은 다른 4개 성분의 효과를 상당히 증가시켰다.

[표 1]

Sp2/0-Ag14 마우스 골수종 세포에 대한 본 발명의 조성물 및 각 유효 성분의효과

5개 유효 성분으로 이루어진 실시예 1 내지 20 의 조성물의 상조적 효과를 제 1도에 나타내었고, 여기에서 치료되지 않은 세포의 쌍(치료되지 않은 세포의 양이 100%)에 백분율로 표시된 Sp2/0-Ag14 세포의 양을 세로축에 나타내었다. 가로축에는 중량%로 표시된 L-티립토판, 2-데옥시-D-리보스, 아데닌, 말산 및 L-아스코르브산의 양을 나타내었다. 백색 열에는 상기한 물질을 단독으로 사용하여 48 시간 치료 후에 치료되지 않은 세포에 백분율로 표시된 세포의 양을 나타내었고, 흑색 열에는 그것들을 다른 4개의 유효 성분과 함께 사용하였을 때 얻어진 결과를 나타내었다. 각 물질의 증가량에 따른 백색 및 흑색 열의 차이의 변화는(심지어 반대 방향의 L-티립토판의 경우에 있어서) 상조적 효과를 증명하고, 흑색 열은 조성물의 강력한 종양-세포-제거 효과를 뒷받침한다.

실시예 21 내지 37에 기초하여, 표 2는 5개 유효 성분으로 이루어진 조성물의 효과가 Sp2/0-Ag14 세포의 경우에 다른 조성물이 첨가될 때 얼마나 증가할 것인가를 나타낸다. 표 2에는 중량%로 표시되고 1000을 곱한 물질의 양을 나타내었는데, 즉 표의 숫자는 10^-3을 곱해서 읽어야 한다; 예를들면 실시예 21에서 L-티립토판의 경우에는 숫자 6은 6×10^-3을 의미하며, 즉 0.006 중량%이다. 실험상태는 이전실험과 동일하였다.

여기에서는 또한 표 1과 유사하게, 표 2의 마지막 두 열의 데이타(세포수, 치료되지 않은 %)로부터 상기한 물질을 단독으로 사용하면 세포-증식-감소 효과가 나타나지 않고, 뿐만 아니라 L-페닐알라닌(조절예 22), L-아르기닌(조절예 23), L-히스티딘(조절예 24) 및 리보플라빈(조절예 29)의 효과에 의해, 치료되지 않은 세포(조절예 21)의 수와 비교되는 세포의 수가 약간 증가하였다는 것을 알 수 있다. 또한, 동일한 물질을 동일한 양으로 사용할 때, 실시예 21의 조성물의 효과는 상승적으로 증가한다는 것을 알 수 있다. 약효물질 없이, 5개 유효 성분으로 이루어진 실시예 21의 조성물의 효과는 모든 경우에서 다른 조성물과 함께 사용한 것보다 상당히 떨어진다.

또한, 21개 유효 성분으로 이루어진 실시예 107 내지 111의 조성물의 효과 및 일반적인 유효 성분과 동일량을 갖는 5개 유효 성분으로 이루어진 실시예 102 내지 106의 조성물의 효과를 비교하였다. 초기의 결과와 비교하기 위해, 또한 Sp2/0-Ag14 세포를 사용하였고 실험 상태는 이전 실험에서와 동일하였다. 결과는 제 2도에 나타내었다. 세로축에는 치료되지 않은 세포의 양에 백분률로 표시된 세포량의 변화를 나타내었다. 가로축에는 %로 표시한 조성물의 변화량(유효 성분의 변화량)을 나타내었다. 5개 유효 성분으로 이루어진 실시예 102의 조성물은 100%로 간주되었다. 즉, 실시예 103의 80% 조성물은 각 성분의 80%의 양을 함유한다. 21개 유효 성분으로 이루어진 조성물의 경우에는 실시예 107의 조성물을 100%로 간주되었다.

[표 2]

Sp2/0-Ag14 마우스 골수종 세포에 대한 본 발명의 조성물및 각 유효성분의효과

측정된 효과가 삼투압 효과, 특정 영양물의 과중 또는 아미노산 불균형의 결과라는 가능성을 배제하기 위해, 조절 혼합물을 제조하였다. 이러한 조절 혼합물들은 이전 실험에서 PADS에서 비효과적이라고 증명된 물질을 함유한다. 조절 혼합물의 조성물은 표 1과 함께 나타내었다. 실시예 102 내지 106 및 107 내지 111의 조성물과 조절 혼합물을 사용한 실험으로부터 얻어진 결과를 제 2도에 나타내었고, 여기에서 열린 원(○)의 표시가 있는 선은 조절 혼합물의 경우에 48 시간 치료 후 세포 양의 변화를 나타내고, 채워진 원(●)의 표시가 있는 선은 실시예 102 내지 106의 5개 유효 성분으로 이루어진 조성물의 경우의 변화를 나타내며, 열린 삼각형(∇)의 표시가 있는 선은 실시예 107 내지 111의 21개 유효 성분으로 이루어진 조성물의 경우의 변화를 나타낸다. 실시예 102 및 107의 100% 조성물을 사용하여 실시하고 제 2도에 나타낸 실험에 있어서, 각각의 유효 성분들은 실질적으로 세포의 수에 영향을 주지 않는 양이 사용되었다(표 1 및 표 2에 나타낸 초기 실험의 결과로부터 알 수 있는 바와 같이). 제 2도로부터 이러한 성분들이 함께 사용될 때 상당한 항종양 효과를 갖는다는 것을 알 수 있다. 이러한 사실은 유효 성분의 상승적인 방법의 협동 작용을 다시 한번 증명하였다. 또한, 제 2도로부터 조절 혼합물이 세포의 수에 어떠한 실질적인 효과도 발휘하지 않는다는 것을 알 수 있다. 즉, 이러한 실험에 기초하여, 측정된 효과가 삼투압 효과 또는 특정 영양분의 과중 또는 아미노산 불균형의 결과라는 것을 배제할 수 있다.

상대이온이 조성물의 효과에 어떠한 역활을 하는지를 알아내기 위해, Na⁺⁺이온 대신에 K⁺(실시예 38 내지 67) 또는 Ca⁺⁺(실시예 68 내지 97)이온을 사용하여 실험을 실시하였다. 다른 상대이온을 사용한 조성물의 효과간에는 상당한 차이점은 없었고, 사실상 결과는 완전히 동일하였다.

실시예 107의 100% 조성물의 효과를 시간에 따라 Sp2/0-Ag14 세포에서 조사하였고 100% 조절 혼합물 및 치료되지 않은 세포와 비교하였다. 실험 상태는 세포를 48 시간뿐 아니라 6, 12, 24, 및 36 시간 후에 측정하는 경우를 제외하고는 이전 실험에서와 동일하였다. 이러한 동적 실험의 결과를 제 3도에 나타내었다. 세로축에는 세포 수/mℓ를 나타내었다. 가로축에는 시간을 시(Hours)로 나타내었다. 열린 원의 표시가 있는 선은 치료되지 않은 세포의 경우에 세포의 변화수를 나타내고, 채워진 원의 표시가 있는 선은 조절 혼합물의 경우에 변화수를 나타내며, 채워진 삼가형(▼)의 표시가 있는 선은 21개 유효 성분으로 이루어진 실시예 107의 조성물의 경우에 시간에 따른 변화수를 나타낸다. 제 3도로부터 조절 혼합물은 시간에 따른 치료되지 않은 세포의 증식을 나타내는 선의 모양과 일치하여 지수함수적으로 증가하기 때문에, 조절 혼합물이 세포수에 어떠한 실질적인 효과도 미치지 않는 반면에, 본 발명에 따른 조성물은 종양 세포에 유독하여 시간에 따라 세포수를 감소시킨다를 것을 알 수 있다. 즉, 본 발명의 조성물은 세포 증식을 억제할 뿐만 아니라, 세포독소 효과를 갖는다. 21개 물질로 이루어진 상기한 조성물내의 유효 성분의 양은 종양 세포가 개별적으로 발생시 상당한 효과를 나타내지 않도록 선택된다(물론, 이것은 활성제의 양이 20%, 40% 정도 적은 80%, 60% 등의 조성물에 잘 맞는다.). 모든 생체내 실험에서 동일한 조성물을 사용하였기 때문에, 결과는 모든 경우에서 유효 성분의 상승적인 협동 작용을 증명한다.

상기한 결과는 효과가 본 발명의 토대를 이루는 생각에 따라 선택된 물질의 상조 작용에 의해 유도된다는 것을 뒷받침한다. 또한, 이러한 결과는 상기한 생각이 옳음을 증명한다. 다양한 암 세포가 여러가지 면에서 정상 세포와 구별되기 때문에, 암 세포에 대한 본 발명의 가장 효과적인 조성물들은 각각 매우 다르다. 이것은 모든 종양에 대해 가장 적당한 조성물은 종양-세포-제거 효과를 표준으로 사용하여 선택할 수 있다는 것을 의미한다. 그러나, 예방을 위해 또는 종양의 형태를 입증할 수 없을 때나 만기가 되었을 때, 21개 유효 성분으로 이루어진 일반적인 조성물을 사용하는 것이 바람직하다. 즉, 다음의 실험에서는, 이러한 조성물들의 효과가 얼마나 일반적인지, 그리고 그것의 효율이 얼마나 되는지를 조사하였다.

21개 유효 성분으로 이루어진 실시예 107 내지 111의 조성물의 효과를 K-562 사람 적백혈병 세포에서 조사하였고, 상기한 조절 혼합물의 효과와 비교하였다. 이 실험의 결과를 제 4도에 나타내었다. 제 2도와 유사하게, 치료되지 않은 세포양에 백분율로 표시된 세포수의 변화를 세로축에 나타내었다. 가로축에는 %로 표시된 조성물의 변화(유효 성분의 변화량)를 나타내었다. 열린 원이 표시된 선은 조절 혼합물의 효과를 나타낸 것이고, 채워진 원이 표시된 선은 21개 유효 성분으로 이루어진 조성물의 효과를 나타낸 것이다. 제 4도로부터 본 발명의 조성물이 K-562 사람 적백혈병 세포에서도 역시 중요한 종양-세포-제거-효과를 갖는다는 것을 알 수 있다.

그리고 나서, 21개 유효 성분으로 이루어진 실시예 107 내지 111의 조성물의 효과를 HeLa 사람 상피성 경관암 세포 및 HEp-2 사람 상피성 후두암 세포에서 조사하였고 조절 혼합물의 효과와 비교하였다. 이러한 실험은 이전의 결과가 일반적이었는지 그리고 사용된 매질, 현탁 방법, 측정 및 관측의 섭동 효과와 관련이 없는지 여부를 나타내는데 필수적이었다. HeLa, HEp-2 및 Vero 세포의 생존수는 세포의내성의 알칼린 포스파타아제 활동도를 평가함으로써 측정하였다. 요약하면, 치료기간 후, 비-부착(아마, 손상된) 세포를 세척하여 제거하였다. 그런다음, 각각에 신선한 10% 디에탄올아민 완충제(pH 9.8) 150㎕에 용해된 알칼린 포스파타아제 기질(4-니트로페닐포스페이트, Sigma사 정제 번호 111-112) 150㎍을 잘 첨가하였다. 치료되지 않은 세포의 경우에 흡광도가 약 1의 값에 도달할 때까지 플레이트를 30℃에서 배양하였다. 각각에 3M NaOH 50㎕를 잘 첨가함으로써 반응을 중지시켰다. 흡광도는 Dynatech ELISA 판독기를 사용하여 405nm에서 측정되었다. 바탕값은 각 도수로부터 뺐다. 결과를 제 5도(HeLa 세포의 경우) 및 제 6도(HEp-2 세포의 경우)에 나타내었다. 제 2도 및 제 4도와 유사하게, 양 도면에서, 세로축은 치료되지 않은 세포의 양에 백분율로 표시된 세포의 변화량을 나타낸다. 이러한 경우에 세포수의 변화는 흡광을 측정하여 관측하였다. 가로축은 조성물의 %로 표시된 변화를 나타낸다(유효 성분의 변화량). 제 5도 및 제 6도에서 열린 원이 표시된 선은 조절 혼합물의 효과를 나타내고, 채워진 원이 표시된 선은 21개 유효 성분으로 이루어진 실시예 107 내지 111의 조성물의 효과를 나타낸다. 이러한 도면들로부터 조성물들이 양 세포 선들에 대해 효과적이라는 것을 알 수 있다. 이러한 결과는 HEp-2가 환경 효과에 저항력이 있는 "하디(hardy) 세포 선"으로 알려진 것을 고려하면 더욱 가치가 있다[(American Type Culture Collection Catalogue of Cell Lines And Hydridomas, 5th ed. , pp. 15-16(1985)].

본 발명의 이론적인 기초에 따라, 조성물은 선택적으로 단지 암 세포에만 효과가 있다. 이러한 문제를 더욱 증명하기 위해, 21개 유효 성분으로 이루어진 실시예 107 내지 111의 조성물의 효과 및 조절 혼합물의 효과를 정상적 세포선 Vero 아프리카산 녹색 원숭이 신장 세포에서 조사하였다. 실험의 결과는 제 7도 나타내었다. 가로축은 치료되지 않은 세포의 세포수에 백분율로 표시된 세포의 변화수를 나타내었다. 가로축에는 조성물의 %로 표시된 변화(유효 성분의 변화량)를 나타내었다. 열린 원의 표시가 있는 선은 조절 혼합물의 효과를 나타내고 채워진 원의 표시가 있는 선은 21개 유효 성분으로 이루어진 실시예 107 내지 111의 조성물의 효과를 나타낸다. 제 7도로부터, 실시예 107의 100% 조성물의 증식에서의 효과를, 시간에 대해 나타내면, 조절 혼합물의 경우에 제 3도에서 보이는 것과 유사하기 때문에, 본 발명의 조성물이 정상적 Vero 세포선에 세포 독성 효과를 나타내지 않는다는 것을 알 수 있다. 빠른 증식 세포선이 되는 Vero를 사용한[American Type Culture Collection Catalogue of Cell Lines and Hybridomas, 5th ed., pp. 45-46(1985)], 이 실험은 세포활동억제와는 반대로, 본 발명의 조성물은 모든 빠른 증식 세포에는 유독하지 않고, 단지 종양 세포에만 선택적으로 영향을 미친다는 것을 것을 증명한다. 상기한 결과에 기초하여 본 발명에 따른 조성물을 세포독성 제조물이 아닌 안티네오플라스틱 제조물로 간주할 수 있다.

본 발명에 따른 조성물의 시험관내 효과를 증명하기 위해, 또한 약제학적 실험을 실시하였다. 이들 실험 과정에서는 항상 과학 문헌에서 입증된 방법 및 조건을 사용하였다. 실험은 Sp2/0-Ag14 세포를 사용하여 실시하였다. 실험에서 5 내지 6주된 암컷 BALB/c 마우스를 사용하였다. 실험은 각각 10마리 마우스로 이루어진 두개의 그룹을 사용하여 실시하였다. 불완전한 RPMI 1640 매질 200㎕에 현탁된5×10⁴Sp2/0-Ag14 세포를 마우스에 i.p. 주입하였다. 주입일은 실험일로 계산하지 않았다. 실험에 필요한 세포수는 발암성 테스트로 결정하였다. 동물의 치료는 세포의 주입후 24시간 후에 시작하였고(이를 실험의 첫날로 간주한다) 10일 계속되었다. 조절 그룹은 매 치료마다 PBS(인산 완충된 식염액) 200㎕를 사용하여 i.p. 주입하였고, 반면에 치료 그룹은 상기한 것과 동일한 양의 21개 유효 성분으로 이루어진 실시예 112의 조성물을 i.p. 주입하였다.

치료의 가장 효과적인 방법은 적당히 높은 농도로 조성물의 성분 농도를 유지하면서 계속적으로 주입하는 것이다. 실제적인 어려움 때문에, 거의 지속적이고, 정기적인 치료를 하였는데 즉, 동물들을 하루에 6회씩 치료하였다. 실험의 결과를 제 8도에 나타내었다. 세로축에는 생존% 값 즉, 실험일동안에 살아있는 마우스의 수를 나타내었다. 즉, 각각 10 마우스는 100%를 의미하고, 8 마우스는 80%를 의미한다. 백색열은 치료된 마우스의 생존수를 나타내고, 흑색열은 치료되지 않은 마우스의 생존수를 나타낸다. 제 8도로부터 예를들면 16번째 일에는 치료되지 않은 마우스는 한 마리도 살지 못했고 치료된 마우스는 계속 살아 남았다는 것을 알 수 있다. 치료되지 않은 마우스는 모두 16번째 일에 죽었고, 치료된 마우스는 25번째 일에 죽었다. 치료로 인해 수명에서 상당한 증가가 이루어짐을 알 수 있다. 중간 생존 시간은 치료 그룹에서는 21일이었고 치료되지 않은 그룹에서는 14일이었다. 이러한 중간 치료 시간으로부터 계산된 T/C % 값(150%)는 효과에서의 표준으로서 인정된 125% 보다 월등히 높다. 문헌에 따라, 이러한 값에 기초하여 본 발명의 조성물을 주어진 세포선에 대해 강력한 항암 효과를 가진 제조물로 생각할 수 있다.

생존 기간 연장이 강한 강장 효과의 결과가 아니라 종양 세포에서의 실시예 112의 조성물의 독성 효과의 결과임을 증명하기 위해, 다른 실험을 실시하였다. 10-10 마우스를 동일한 방법으로 치료하였다. 치료 기간 10일 후에, 두 그룹의 마우스의 복부강(腔)으로부터 세포를 재거한 뒤 측정하였다. 평균 세포 수들(5.55×10⁵및 5.95×10⁷)사이의 차이는 현저하며(p<0.001), 본 발명에 따른 조성물의 시험관내 효과를 증명하였다.

본 발명의 조성물의 효과를 다시 증명하고, 결과가 단지 국소 효과에 기인하는 것이라는 가능성을 배제하기 위해(세포는 복부강에 있는 것이고 i.p. 치료되었다), 사람 고상 종양을 s.c. 주입한 선천적으로 면역 결핍의 (흉선 결핍) (누드) 마우스를 사용하여 다른 실험을 실시하였다. 실험을 위해, HeLa 세포와 6 내지 8 주 된 암컷 BALB/c(nu/nu) 마우스를 사용하였고, 5×10⁶세포를 마우스의 하부 사지에 s.c. 투여하였다. 종양의 크기가 50㎣의 평균 체적에 이르렀을때 실시예 112의 조성물을 사용하여 치료를 개시하였다. 치료 일정은, 치료 시간 및 치료에 사용된 용액(실시예 112)은 이전의 약제학적 실험에서와 동일하였다. 종양의 크기 [(길이(L) , 폭(W), 높이(H)]는 디지탈 캘리퍼스(Mitutoyo, Inc., Tokyo, Japan)를 사용하여 주 2회 측정하였다. 종양의 체적(방정식 LWH/2에 의해 계산)은 및 V_t는 실제 종양 체적이고, V_o는 치료가 시작될 때의 종양 체적인 상대 종양 체적 V_t/V_o[Eur. J. Cancer. Clin. Oncol.,21, 1253-1260(1988)]을 계산하였다. 결과는 제 9도에 요약되어 있다. 세로축에는 V_t/V_o의 평균값을 나타내었고, 가로축에는 치료를 개시한 후의 일수를 나타내었다. 열린 원이 표시된 선은 조절예 마우스의 경우에 치료를 시작한 후에 상대 종양 체적 증가를 나타내고 채워진 원이 표시된 선은 치료된 동물의 경우를 나타낸다. 제 9도로부터 치료가 종양의 성장을 상당히 늦춘다는 것을 알 수 있다. 예를들면 조절예 마우스의 경우에는 종양 체적이 16.5일 동안에 9배로 증가한 반면, 치료된 마우스의 경우에는 동일하게 9배로 성장하기 위해서는 33일이 필요하다. 치료된 그룹과 조절 그룹의 V_t/V_o값으로부터 T/C %를 계산하였다. T/C% 값은 효과의 표준으로서 적합한 모든 경우에 42% 이하이다[Europ. J. Cancer,17, 129-142 (1981)]. 이 실험은 본 발명의 조성물이 상당한 항암 효과를 갖는다는 것을 다시 한번 보여준다. 결과는 기술적인 문제로 인하여 본 발명자들에 최적의 치료 과정 및 최대로 허용가능한 투여량으로부터 벗어나는 것과 동일한 치료는 임상 상태에서 더욱 효과적으로 실시될 수 있다(예를들면 주입등에 의한 장기 치료 기간, 영구 효과)는 것을 고려하면 특히 가능성이 있다.

치료동안의 체중 변화는 장점이고 치료의 독성을 특성화하기 위해 일반적으로 사용되는 색인이다; 그로므로, 동물의 체중은 상기한 실험동안에 측정되었다. 문헌에 따라, 평균 체중이 10 내지 15% 감소할 때, 제조물이 유독한 것으로 간주한다[Eur, J. Cancer, Clin. Oncol., 21, 1253-1260(1988)]. 본 실험에서는, 평균 체중의 변화는 조절 그룹의 경우에는 -5.9±4.1%이었고, 치료되는 그룹의 경우에는 -6.6±3.9%였다. 즉, 두 그룹간에 현저한 차이는 없고 이것은 본 발명에 따른 조성물이 독성의 부-효과를 갖지 않는다는 것을 의미한다.

본 발명의 조성물의 예방적인 유용성을 증명하기 위해, BALB/c 마우스(그룹당 10마이) 2-2 그룹을 치료되는 동물의 먹이를 실시예 113 내지 121의 조성물들을 1:1의 비로 혼합하고 동물들에게 임의로 공급하는 방법으로 치료하였다. 치료를 시작한지 5일 후에, 1×10⁴Sp2/0-Ag14 세포를 양쪽 동물 그룹에 i.p. 접종하였다. 치료는 100일 동안 계속되었다. 실시예 113 내지 121의 조성물의 1-1 혼합물을 사용하여 사육된 마우스 및 정상적인 먹이를 사용하여 사육된 마우스는 100일 동안 세포를 주입할때 i.p. 종양 성장의 증거를 나타내지 않았다. 동시에 다른 실험 그룹에서의 조절 동물의 생존 기간은 Sp2/0-Ag14 세포의 주입에 따라 21일 내지 26일의 범위였다.

투여량 및 치료 방법에 의존하여 본 발명의 조성물은 암 질환의 예방, AIDS 및 기관 이식의 경우에 발생하는 종양의 억제, 암전이 형성의 방해 및 보조제, 결합제 및 종양성 환자의 직접적인 치료에 사용할 수 있다.

본 발명에 따른 조성물의 주요한 장점은 다음과 같다:

a) 적당한 투여량의 조성물을 사용하면, 암 질환의 예방, AIDS 및 기관 이식의 경우에 형성되는 종양의 억제, 암전이 형성의 방해 및 암 질환의 직접적, 보조적 또는 병용 처치 및 치료에 사용할 수 있다.

b) 본 발명의 조성물은 유독하지 않다. 동물의 체중감소 측정에 기초한 독성실험은 조성물이 유독하지 않음을 증명하였다. 문헌 데이타에 따라, 조성물의 각 성분의 독성은 매우 낮으며, 심지어 이러한 저독성은 이러한 물질이 함께 사용되면 감소한다. 뿐만 아니라, 독성값을 결정하기 위해 사용되는 작은 동물들보다 영장류는 이러한 물질들에 더 큰 내성이 있다. 이러한 사실을 고려하면, 조성물은 유독하지 않은 것으로 간주될 수 있다.

c) 본 발명의 조성물은 부작용가 없거나 무시할만하다. 조성물의 대부분이(2-데옥시-D-리보스를 제외하고) 다수 치료 또는 식품 보충제로 사용되어 왔기 때문에(아스코르브산은 항암 치료에만 사용) 많은 관찰은 성분의 부작용을 뒷받침해 왔다. 이러한 사용으로 축적된 경험에 따라, 조성물이 실제적으로 부작용가 없음이 더욱 명확해진다.

d) 본 발명의 조성물은 선택성이 있다. 이러한 선택성은 다양한 암 세포에 유독한 조성물이 정상 Vero 세포, 실험 동물 또는 그의 정상 세포 각각에 대해서는 독성이 없다고 나타난 본 실험에 의해 증명된다. 이러한 선택성은 암 세포보다 정상 세포가 훨씬 많고, 정상 세포의 경우에는 그의 연도(uptake)가 조절되는 반면, 암 세포는 조성물의 성분을 축적한다는 사실에 의해 더욱 강화된다.

e) 본 발명의 조성물은 넓게 사용될 수 있고 그의 효과는 일반적이다. 조성물의 효과는 마우스 골수종(Sp2/0-Ag14), 사람 적백혈병(K562), 사람 상피성 경관암(HeLa) 및 사람 상피성 후두암(HEp-2) 세포선에서 조사되었다. 이러한 세포는 그것들이 사람 및 동물 종양을 포함하고 심지어 사람 종양 백혈병 및 두개의 크게 다른 고상 종양으로부터 나타나기 때문에 넓은 스펙트럼을 나타낸다. 이러한 세포선을 사용한 실험으로부터 얻어진 결과는 조성물이 일반적으로 효과를 갖고 넓게 사용가능하다는 상기한 문제를 지지한다.

f) 본 발명의 조성물은 어떠한 어려움 없이 제조할수 있다. 조성물의 성분은 저분자량을 갖는 용이하게 이용할 수 있는 물질이고, 그러므로 조성물은 제조하는데 용이하다.

g) 본 발명의 조성물은 물에 용해되어 즉 투여하기가 용이하다.

Claims

순환계에서 발생하는 하기 활성 화합물: 1 이상의 아미노산; 1 이상의 비타민; 및 아데닌, 2-데옥시-D-리보스, D-만노스, D-글루코사민, 말산, 옥살아세트산, 아데노신 트리포스페이트 및 제약적으로 허용가능한 이들의 염으로 이루어진 군에서 선택된 1 이상의 물질;로 이루어진 조성물로서, 상기 조성물이 아미노산 이외에 말산과 비타민만을 함유하는 경우, 상기 비타민은 d-비오틴, 피리독신, 리보플라빈, 리보플라빈-5'-포스페이트, 리포산, 오로트산 및 이들의 염으로부터 선택된 하나 이상의 비타민인, 암 질환의 예방 및 치료를 위한 제약 조성물.
제 1항에 있어서, 상기 조성물은 활성 화합물 이외에 제약업에서 사용되는 담체, 희석제, 또는 다른 보조제를 더 포함하는 암 질환의 예방 및 치료를 위한 제약 조성물.
제 1항에 있어서, 상기 아미노산은 L-메티오닌, L-트립토판, L-티로신, L-페닐알라닌, L-아르기닌, L-히스티딘, N-벤조일글리신 및 이들의 염에서 선택되는 하나 또는 둘 이상의 아미노산인 암 질환의 예방 및 치료를 위한 제약 조성물.
제 1항에 있어서, 상기 비타민은 d-비오틴, 피리독신, 리보플라빈, 리보플라빈-5'-포스페이트, L-아스코르브산, 리포산, 오로트산 및 이들의 염에서 선택되는하나 또는 둘 이상의 비타민인 암 질환의 예방 및 치료를 위한 제약 조성물.
제 1항에 있어서, L-트립토판, L-아스코르브산, 및 아데닌, 2-데옥시-D-리보스, D-글루코사민 및 제약적으로 허용가능한 이들의 염으로 이루어진 군에서 선택된 1 이상의 물질로 이루어지는 암 질환의 예방 및 치료를 위한 제약 조성물.
제 1항에 있어서, L-아르기닌, 리보플라빈-5'-포스페이트, 및 D-만노스, 말산, 아데노신 트리포스페이트, 및 제약적으로 허용가능한 이들의 염으로 이루어진 군에서 선택된 1 이상의 물질로 이루어지는 암 질환의 예방 및 치료를 위한 제약 조성물.
제 1항에 있어서, L-메티오닌, L-트립토판, L-티로신, L-페닐알라닌, L-아르기닌, L-히스티딘, N-벤조일글리신 및 이들의 염으로 이루어진 군에서 선택되는 1 이상의 아미노산 0.002 내지 70 중량%, d-비오틴, 피리독신, 리보플라빈, 리보플라빈-5'-포스페이트, L-아스코르브산, 리포산, 오로트산 및 이들의 염으로 이루어진 군에서 선택된 1 이상의 비타민 0.0004 내지 80 중량%, 및 아데닌, 2-데옥시-D-리보스, D-만노스, D-글루코사민, 말산, 옥살아세트산, 아데노신 트리포스페이트 및 제약적으로 허용가능한 이들의 염으로 이루어진 군에서 선택된 1 이상의 물질 0.003 내지 80 중량%로 이루어진 암 질환의 예방 및 치료를 위한 제약 조성물.
제 1항에 있어서, L-메티오닌 0.9 내지 25 중량%, L-트립토판 0.8 내지 19 중량%, L-아르기닌 1.1 내지 48 중량%, d-비오틴 0.9 내지 46 중량%, 피리독신 1.2 내지 16 중량%, 리보플라빈-5'-포스페이트 0.03 내지 42 중량%, D-글루코사민 0.05 내지 18 중량%, 2-데옥시-D-리보스 0.5 내지 60 중량%, 말산 0.7 내지 68 중량%, D-만노스 0.6 내지 40 중량% 및 제약적으로 허용가능한 이들의 염으로 이루어진 암 질환의 예방 및 치료를 위한 제약 조성물.
제 1항에 있어서, L-메티오닌 0.005 내지 34 중량%, L-트립토판 0.002 내지 25 중량%, L-티로신 0.02 내지 23 중량%, L-페닐알라닌 0.04 내지 30 중량%, L-아르기닌 0.04 내지 50 중량%, L-히스티딘 0.03 내지 34 중량%, N-벤조일글리신 0.05 내지 22 중량%, d-비오틴 0.01 내지 60 중량%, 피리독신 0.01 내지 20 중량%, 리보플라빈 0.0004 내지 45 중량%, 리보플라빈-5'-포스페이트 0.0005 내지 45 중량%, L-아스코르브산 0.003 내지 70 중량%, 리포산 0.004 내지 15 중량%, 오로트산 0.01 내지 17 중량%, 아데닌 0.001 내지 10 중량%, 2-데옥시-D-리보스 0.01 내지 63 중량%, D-만노스 0.08 내지 42 중량%, D-글루코사민 0.05 내지 20 중량%, 말산 0.01 내지 80 중량%, 옥살아세트산 0.02 내지 60 중량%, 아데노신 트리포스페이트 0.001 내지 10 중량% 및 제약적으로 허용가능한 이들의 염으로 이루어진 암 질환의 예방 및 치료를 위한 제약 조성물.
제 1항에 있어서, L-아르기닌 25 내지 35 중량%, 리보플라빈-5'-포스페이트22 내지 32 중량%, 말산 또는 제약적으로 허용가능한 이의 염 33 내지 43 중량%로 이루어진 암 질환의 예방 및 치료를 위한 제약 조성물.
순환계에서 발생하는 활성 화합물 중에서 1 이상의 아미노산, 1 이상의 비타민 및, 아데닌, 2-데옥시-D-리보스, D-만노스, D-글루코사민, 말산, 옥살아세트산, 아데노신 트리포스페이트로 이루어진 군에서 선택된 1 이상의 물질, 및 제약업에서 제약 조성물에 일반적으로 사용하는 담체, 희석제 또는 다른 보조제를 혼합하는 것으로 이루어진 제 1항의 조성물의 제조방법.
제 11항에 있어서, L-트립토판, L-아스코르브산, 및 아데닌, 2-데옥시-D-리보스, D-글루코사민 및 제약적으로 허용가능한 이들의 염으로 이루어진 군에서 선택된 1 이상의 물질을 혼합하여 제약 조성물을 제조하는 것으로 이루어진 방법.
제 11항에 있어서, L-아르기닌, 리보플라빈-5'-포스페이트, 및 D-만노스, 말산, 아데노신 트리포스페이트 및 제약적으로 허용가능한 이들의 염으로 이루어진 군에서 선택된 1 이상의 물질을 혼합하여 제약 조성물을 제조하는 것으로 이루어진 방법.
제 11항에 있어서, L-아르기닌 25 내지 35 중량%, 리보플라빈-5'-포스페이트 22 내지 32 중량%, 말산 또는 제약적으로 허용가능한 이의 염 33 내지 43 중량%를혼합하여 제약 조성물을 제조하는 것으로 이루어진 방법.
제 12항에 있어서, L-메티오닌, L-트립토판, L-티로신, L-페닐알라닌, L-아르기닌, L-히스티딘, N-벤조일글리신 및 이들의 염으로 이루어진 군에서 선택되는 1 이상의 아미노산 0.002 내지 70 중량%, d-비오틴, 피리독신, 리보플라빈, 리보플라빈-5'-포스페이트, L-아스코르브산, 리포산, 오로트산 및 이들의 염으로 이루어진 군에서 선택된 1 이상의 비타민 0.0004 내지 80 중량% 및 아데닌, 2-데옥시-D-리보스, D-만노스, D-글루코사민, 말산, 옥살아세트산, 아데노신 트리포스페이트 및 제약적으로 허용가능한 이들의 염으로 이루어진 군에서 선택된 1 이상의 물질 0.003 내지 80 중량%를 혼합하여 제약 조성물을 제조하는 것으로 이루어진 방법.
제 11항에 있어서, L-메티오닌 0.9 내지 25 중량%, L-트립토판 0.8 내지 19 중량%, L-아르기닌 1.1 내지 48 중량%, d-비오틴 0.9 내지 46 중량%, 피리독신 1.2 내지 16 중량%, 리보플라빈-5'-포스페이트 0.03 내지 42 중량%, D-글루코사민 0.05 내지 18 중량%, 2-데옥시-D-리보스 0.5 내지 60 중량%, 말산 0.7 내지 68 중량%, D-만노스 0.6 내지 40 중량% 및 제약적으로 허용가능한 이들의 염을 혼합하여 제약 조성물을 제조하는 것으로 이루어진 방법.
제 11항에 있어서, L-메티오닌 0.005 내지 34 중량%, L-트립토판 0.002 내지 25 중량%, L-티로신 0.02 내지 23 중량%, L-페닐알라닌 0.04 내지 30 중량%, L-아르기닌 0.04 내지 50 중량%, L-히스티딘 0.03 내지 43 중량%, N-벤조일글리신 0.05 내지 22 중량%, d-비오틴 0.01 내지 60 중량%, 피리독신 0.01 내지 20 중량%, 리보플라빈 0.0004 내지 45 중량%, 리보플라빈-5'-포스페이트 0.0005 내지 45 중량%, L-아스코르브산 0.003 내지 70 중량%, 리포산 0.004 내지 15 중량%, 오로트산 0.01 내지 17 중량%, 아데닌 0.001 내지 10 중량%, 2-데옥시-D-리보스 0.01 내지 63 중량%, D-만노스 0.08 내지 42 중량%, D-글루코사민 0.05 내지 20 중량%, 말산 0.01 내지 80 중량%, 옥살아세트산 0.02 내지 60 중량%, 아데노신 트리포스페이트 0.001 내지 10 중량% 및 제약적으로 허용가능한 이들의 염을 혼합하여 제약 조성물을 제조하는 것으로 이루어진 방법.
제 1항에 있어서, 상기 조성물은 암 치료 보조제로서 사용하기 위한 조성물.
제 1항에 있어서, 상기 조성물은 정제, 당의정제, 좌약제, 캡슐제 또는 주사용 용액제 형태로 암 치료에 사용하기 위한 조성물.
제 1항에 따른 조성물을 포함하는 암 치료용 약제.
제 20항에 있어서, 상기 약제는 정제 또는 캡슐제 형태인 경구적 투여용 약제.
제 20항에 있어서, 상기 약제는 주사용 용액제 형태인 비경구적 투여용 약제.
정제 또는 캡슐제 형태의 경구 투여를 위한, 제 1항에 따른 조성물을 포함하는 암 예방용 약제.