SE521049C2 - Farmaceutiska kompositioner för förhindrande och behandling av cancerösa sjukdomar samt process för beredning av dessa - Google Patents

Description

20 25 30 35 521 049 _2_ oxiala celler och vissa typer av tumörer. Läkemedel som används i kemoterapi har också olika toxiska biverkningar. De kan skada det centrala nervsystemet, de hematopoietiska organen, slemhinnorna i mage och tarmar samt alla till- växande celler. Därutöver kan de också skada lever, njure, lunga och hjärt- muskler. Nästan alla verksamma antitumörmedel är immunosuppressiva [Proc.

Roy. Soc. Med., ä, 1063-1066 (1970)]. Många av dem har en teratogen eller carcinogen verkan, ibland kan de orsaka infertilitet eller öka frekvensen av metastaser. Det är svårt eller omöjligt att medelst kemoterapi påverka 60- 70 % av tumörerna, under behandlingen kan dessutom en resistens eller kors- resistens utvecklas.

Olyckligtvis har behandlingar som använder biologiska responsmodifie- rare som utnyttjar organismens egen försvarsmekanism liknande nackdelar eftersom de har visat sig verksamma endast vid ett litet antal tumörtyper och dessutom även har toxiska biverkningar [Harrison's Principles of internal Medicine, 12th ed., International Edition, McGraw-Hill, Inc., New York, Vol. 2, pp. 1587-1599 (1991)]. lnterferoner har också många och allvarliga biverk- ningar, bland annat till exempel kardiotoxicitet [Chest, 9_9, 557-561 (1991)].

Det hopp man fäst vid monoklonala antikroppar har heller inte förverkligats [Eur. J. Cancer, ä, 936-939 (1991)]. Trots att mer än fyrahundra registrera- de kliniska försök rörande immunoterapi har utförts sedan 1980, har ännu inte någon av dessa introducerats som en behandling för någon typ av cancer [J.R. Soc. Med., ü 321 (19911.

PCT-publikationen WO 86/025555 avser ett läkemedel som används vid behandling av cancerösa sjukdomar omfattande L-cystein, L-metionin, L-histi- din, L-fenylalanin, L-lysin, L-tryptofan, L-valin, L-leucin, L-treonin, L-äppelsyra och L-askorbinsyra. L-äppelsyra och L-askorbinsyra buffrar och stabiliserar i form av aktivatorer aminosyrorna i dessas sura form och på så sätt kan de åstadkomma en modifiering av blodets pH-värde i surhetsområden under 6.8.

Det finns inga data i denna publikation som visar ett tillväxtstopp av, eller ens en regression av, maligna tumörer.

Den publicerade japanska patentansökningen nr 62-135 421 avser en aminosyretransfusionslösning innehållande specifika aminosyror, L-isoleucin undantaget, som kan uppvisa en inhiberande verkan på tumörförökning. Den möjliga, men icke visade verkan av denna beredning kan vara baserad på aminosyrerestriktion av t ex isoleucin.

Syftet för föreliggande uppfinning är att ange farmaceutiska komposi- tioner omfattande naturliga substanser för att eliminera nackdelarna hos kända 10 15 20 25 30 35 521 049 _3_ kompositioner och förfaranden för tumörterapi, t.ex. toxicitet, låg specificitet och begränsad verksamhet.

Uppfinningen är baserad på identifikationen av ett passivt försvarssys- tem [i det följande kallad PADS, Passive Antitumour Defence System] mot tumörceller i olika organismer. Detta system kan förstöra uppkommande och redan existerande tumörceller. Substanserna som deltar i PADS är endogena och exogena naturliga substanser som förekommer i kretsloppet, dvs amino- syror, vitaminer, nukleinbaser, kolhydrater och cellmetaboliska produkter. Det har visat sig att åtminstone tre av dessa substanser vid samtidig användning - som är komponenter av kretsloppet och på så sätt kan nå och komma in i alla celler - synergistiskt ökar effekten av varandra och på så sätt kan förstöra tumörceller.

Uppfinningen är vidare baserad på insikten att det kommer att finnas en betydande kvalitativ skillnad mellan normala celler och tumörceller i deras uppträdande gentemot de ingående substanserna i PADS på grund av syner- gin, varigenom de två celltyperna kan skiljas från varandra. Medan det klassiska immunsystemet kan känna igen och selektivt förstöra tumörceller på grund av tumörcellernas yttre avvikelser från normala celler, kan den nya, identifierade passiva antitumörförsvarsmekanismen göra detsamma på grund av inre avvikelser.

Uppfinningen är vidare baserad på insikten att ovannämnda komposition selektivt orsakar en fatal metabolisk stress i cancerceller som beror på att kompositionens komponenter ökas i kretsloppet i en sådan grad att de tillförs tumörcellerna i alltför stor utsträckning. A Uppfinningen är slutligen baserad på insikten att en tumörförhindrande verkan eller antitumörverkan kan uppnås för olika slags tumörceller beroende på använd dosering och doseringssätt. l fall med olika typer av tumörer som i varierande grad skiljer sig från normala celler, kan den kvalitativa och kvan- titativa sammansättningen av den mest verksamma blandningen bestämmas med användande av synergin som kriterium.

Med utgångspunkt från föregående, avser uppfinningen farmaceutiska kompositioner för förhindrande och behandling av cancerösa sjukdomar som omfattar åtminstone tre aktiva föreningar som förekommer i kretsloppet: åtminstone en aminosyra, åtminstone en vitamin och åtminstone en kompo- nent vald ur gruppen bestående av adenin, Z-deoxi-D-ribos, D-mannos, D-glukosamin, äppelsyra, oxalättiksyra, adenosintrifosfat och/eller farmaceutiskt acceptabla salter av dessa, med förbehållet, att om kompositionen utöver aminosyrorlna) endast innehåller äppelsyra och en 10 15 20 25 30 35 521 049 _4,- vitamin, får vitaminen inte vara askorbinsyra. Kompositionerna kan även omfatta bärare, spädningsmedel och/eller andra hjälpmedel som normalt används i farmacin.

Kompositionen enligt uppfinningen kan omfatta L-metionin, L-tryptofan, L-tyrosin, L-fenylalanin, L-arginin, L-histidin, N-benzoylglycin och/eller ett salt av dessa som aminosyra och d-biotin, pyrodoxin, riboflavin, riboflavin-5'- fosfat, L-askorbinsyra, liponsyra (lipoic acid), orotsyra och/eller ett salt av dessa som vitamin.

En föredragen komposition enligt uppfinningen omfattar L-tryptofan, L-askorbinsyra, åtminstone en komponent vald ur gruppen omfattande adenin, 2-deoxi-D-ribos, D-glukosamin och/eller farmaceutiskt acceptabla salt av dessa.

En annan föredragen komposition enligt uppfinningen omfattar L-arginin, riboflavin-5'-fosfat, åtminstone en komponent vald ur gruppen bestående av D-mannos, äppelsyra, adenosintrifosfat och/eller farmaceutiskt acceptabla salter av dessa.

En annan föredragen komposition enligt uppfiningen omfattar 30-44 viktsprocent L-arginin, 27-35 viktsprocent riboflavin-5'-fosfat, 38-62 viktsprocent äppelsyra och/eller farmaceutiskt acceptabla salter av dessa.

Ytterligare en föredragen komposition enligt uppfinningen omfattar 0,002-70 viktsprocent av åtminstone en komponent vald ur gruppen beståen- de av L-metionin, L-tryptofan, L-tyrosin, L-fenylalanin, L-arginin, L-histidin, N- benzoylglycin och/eller salter av dessa såsom aminosyra, 0,0004-8O viktspro- cent av åtminstone en komponent vald bland gruppen bestående av d-biotin, pyridoxin, riboflavin, riboflavin-5'-fosfat, L-askorbinsyra, liponsyra, orotsyra och/eller salter av dessa såsom vitamin och 0,003-80 viktsprocent av åt- minstone en komponent vald ur gruppen bestående av adenin, 2-deoxi-D-ri- bos, D-mannos, D-glukosamin, äppelsyra, oxalättiksyra, adenosintrifosfat och/eller farmaceutiskt acceptabla salter av dessa.

En annan föredragen komposition enligt uppfiningen omfattar O,9-25 viktsprocent av L-metionin, O,8-19 viktsprocent av L-tryptofan, 1,1-48 viktsprocent L-arginin, O,9-46 viktsprocent d-biotin, 1,2-16 viktsprocent pyridoxin, 0,03-42 viktsprocent riboflavin-Sïfosfat, 0,05-18 viktsprocent D- glukosamin, 0,5-60 viktsprocent 2-deoxi-D-ribos, O,7-68 viktsprocent äppel- syra, O,6-4O viktsprocent D-mannos och/eller farmaceutiskt acceptabla salter av dessa.

En mycket verksam komposition enligt uppfinningen omfattar 0,005-34 viktsprocent L-metionin, 0,002-25 viktsprocent L-tryptofan, 0,02-23 vikts- 10 15 20 25 30 35 521 049 _5- procent L-tyrosin, 0,04-30 viktsprocent L-fenylalanin, 0,04-50 viktsprocent L-arginin, 0,03-34 viktsprocent L-histidin, 0,05-22 viktsprocent N-benzoyl- glycin, 0,01-60 viktsprocent d-biotin, 0,01-20 viktsprocent pyridoxin, 0,0004- 45 viktsprocent riboflavin, 0,0005-45 viktsprocent riboflavin-5'-fosfat, 0,003- 7O viktsprocent L-askorbinsyra, 0,004-l 5 viktsprocent liponsyra, 0,01-17 viktsprocent orotsyra, 0,001-10 viktsprocent adenin, 0,01- 63 viktsprocent 2- deoxi-D-ribos, 0,08-42 viktsprocent D-mannos, 0,05-20 viktsprocent D-glu- kosamin, 0,01-80 viktsprocent äppelsyra, 0,02-60 viktsprocent oxalättiksyra, 0,001-10 viktsprocent adenosintrifosfat och/eller farmaceutiskt acceptabla salter av dessa.

Ytterligare ett syfte för uppfinningen är en process för att bereda ovannämnda komposition vilket omfattar att, av de aktiva föreningar som förekommer i kretsloppet, blanda åtminstone en aminosyra, åtminstone en komponent vald ur gruppen bestående av adenin, 2-deoxi-D-ribos, D-mannos, D-glukosamin, äppelsyra, oxalättiksyra, adenosintrifosfat och/eller farma- ceutiskt acceptabla salter av dessa till en farmaceutisk komposition. Bärare, utspädningsmedel och/eller andra hjälpmedel som vanligen används inom farmacin kan också blandas med den aktiva kompositionen till en mängd som är nödvändig för att komplettera kompositionens vikt till 100 %.

En föredragen utföringsform av processen enligt uppfinningen omfattar att blanda L-tryptofan, L-askorbinsyra, åtminstone en komponent vald ur gruppen bestående av adenin, 2-deoxi-D-ribos, D-glukosamin och/eller farma- ceutiskt acceptabla salter av dessa för att ge en farmaceutisk komposition.

En annan föredragen utföringsform av förfarandet enligt uppfinningen omfattar att blanda L-arginin, riboflavin-5'-fosfat, åtminstone en komponent vald ur gruppen bestående av D-mannos, äppelsyra, adenosintrifosfat och/eller farmaceutiskt acceptabla salter av dessa att ge en farmaceutisk komposition.

En ytterligare föredragen version av utföringsformen av processen enligt uppfinningen omfattar att blanda 30-44 viktsprocent L-arginin, 27-35 vikts- procent riboflavin-5'-fosfat, 38-62 viktsprocent äppelsyra och/eller farma- ceutiskt acceptabla salter av dessa för att ge en farmaceutisk komposition.

En föredragen version av utföringsformen av processen enligt upp- finningen omfattar att blanda 0,002-70 viktsprocent av åtminstone en kompo- nent vald ur gruppen bestående av L-metionin, L-tryptofan, L-tyrosin, L-fenyl- alanin, L-arginin, L-histidin, N-benzoy/lglycin och/eller salter av dessa såsom aminosyra, 0,0004-80 viktsprocent av åtminstone en komponent vald ur gruppen bestående av d-biotin, pyridoxin, riboflavin, riboflavin-5'-fosfat, L- askorbinsyra, liponsyra, orotsyra och/eller salter av dessa såsom vitamin och 10 15 20 25 30 35 521 049 -5_ 0,003-80 viktsprocent av åtminstone en komponent vald ur gruppen bestå- ende av adenin, 2-deoxi-D-ribos, D-mannos, D-glukosamin, äppelsyra, oxal- ättiksyra, adenosintrifosfat och/eller farmaceutiskt acceptabla salter av dessa för att ge en farmaceutisk komposition.

En annan föredragen version av utföringsform av processen enligt upp- finningen omfattar att blanda O,9-25 viktsprocent L-metionin, 0,8-19 vikts- procent L-tryptofan, 1,1-48 viktsprocent L-arginin, O,9-46 viktsprocent d-biotin, 1,2-16 viktsprocent pyridoxin, 0,03-42 viktsprocent riboflavin-5'- fosfat, 0,05-18 viktsprocent D-glukosamin, 0,5-60 viktsprocent 2-deoxi-D- ribos, O,7-68 viktsprocent äppelsyra, 0,6-40 viktsprocent D-mannos och/eller farmaceutiskt acceptabla salter av dessa för att ge en farmaceutisk kompo- sition.

En synnerligen föredragen utföringsform enligt uppfinningen omfattar att blanda 0,005-34 viktsprocent av L-metionin, 0,002-25 viktsprocent L-tryp- tofan, 0,02-23 viktsprocent L-tyrosin, 0,04-30 viktsprocent L-fenylalanin, 0,04-50 viktsprocent L-arginin, 0,03-34 viktsprocent L-histidin, 0,05-22 viktsprocent N-benzoylglycin, 0,01-60 viktsprocent d-biotin, 0,01-2O vikts- procent pyridoxin, 0,0004-45 viktsprocent riboflavin, 0,0005-45 viktsprocent riboflavin-5'-fosfat, 0,003-70 viktsprocent L-askorbinsyra, 0,004-15 vikts- procent liponsyra, 0,01-17 viktsprocent orotsyra, 0,001-10 viktsprocent ade- nin, 0,01-63 viktsprocent 2-deoxi-D-ribos, 0,08-42 viktsprocent D-mannos, 0,05-20 viktsprocent D-glukosamin, 0,01-8O viktsprocent äppelsyra 0,02-60 viktsprocent oxalättiksyra, 0,001-10 viktsprocent adenosintrifosfat och/eller farmaceutiskt acceptabla salter av dessa för att ge en farmaceutisk kompo- sition.

För terapeutisk användning formuleras kompositionerna enligt upp- finningen lämpligen till farmaceutiska kompositioner på ett sådant sätt att kompositionerna transformeras till någon av de vanliga läkemedelsformule- ringarna efter att ha blandats med icketoxiska, inerta, fasta eller flytande bärare, utspädningsmedel, bindmedel och/eller andra tillsatser vanligen använda i den farmaceutiska industrin för enteral eller parenteral admini- stration. Bärare, utspädningsmedel och bindemedel som är lämpliga för ovan- nämnda behov är tex. vatten, gelatin, laktos, sackaros, stärkelse, pektin, stearinsyra, magnesiumstearat, talk, olika vegetabiliska oljor liksom glykoler såsom propylenglykol eller polyetylenglykol. Farmaceutiska tillsatser och hjälpmedel kan till exempel vara konserveringsmedel såsom metyl 4-hydroxi- bensoat, olika naturliga eller syntetiska emulsifierare, dispergerare och vätmedel, färg- och smakmedel, buffertsubstanser liksom även medel som 10 15 20 25 30 35 521 049 -7_ främjar sönderfall eller upplösning samt andra ämnen som förbättrar den önskade verkan.

Den normala läkemedelsformuleringen är orala kompositioner som bere- des genom användning av ovannämnda farmaceutiska tillsatser; dessa kompo- sitioner kan vara i fast form, till exempel tabletter, kapslar, pulver, dragéer, piller eller granulat, eller i flytande form, till exempel sirap, lösningar, emulsioner eller suspensioner, vidare rektala kompositioner såsom supposito- rier, liksom även parenterala kompositioner, tex. injicerbara lösningar eller infusioner.

Den föredragna dagliga dosen av kompositionerna enligt uppfinningen beror på flera faktorer såsom arten av sjukdomen som skall behandlas, pati- entens tillstånd, behandlingssätt etc. Den föredragna dagliga dosen uppgår till 30-3000 mg/kg kroppsvikt. Följaktligen är det lämpligt att dagligen administre- ra 1-4 tabletter, kapslar eller dragéer som vardera innehåller O,2-3 g av den aktiva kompositionen eller O,5-3 I infusionslösningar som innehåller 10-200 g/l av den aktiva kompositionen.

Uppfinningen avser vidare en metod för att förhindra och behandla cancerösa sjukdomar. Denna metod omfattar administrerandet av en terapeu- tiskt verksam mängd av kompositionen enligt uppfinningen till patienten som skall behandlas.

Uppfinningen kommer att beskrivas mer i detalj i följande tabeller, figurer och exempel. Cellerna som användes i följande experiment har erhållits från "American Type Culture Collection" (Rockville, MD, USA).

Tabell 1 visar den tumördödande verkan och den synergistiska samver- kan av komponenterna i kompositionerna enligt exemplen 1-20 omfattande fyra respektive fem aktiva komponenter, på Sp 2/O-Ag14 myelomceller (ATCC CRL 1581).

Tabell 2 visar, baserat på exemplen 21-37, ökningen av verkan av en komposition omfattande fem aktiva komponenter på Sp2/O-Ag14 celler när ytterligare komponenter tillsättes.

Figur 1 visar verkan och den synergistiska samverkan av komponenter i kompositioner omfattande fyra respektive fem aktiva komponenter enligt exemplen 1-20.

Figur 2 jämför verkan in vitro av kompositioner omfattande fem aktiva komponenter enligt exemplen 102-106 och av kompositioner omfattande 21 aktiva komponenter enligt exemplen 107-1 11 på Sp2/O-Ag14 musmyelom- celler jämfört med en korresponderande kontrollblandning. 10 15 20 25 30 35 521 049 -3_ Figur 3 visar verkan av kompositioner omfattande 21 aktiva komponenter enligt exempel 107 på Sp2/O~Ag14 musmyelomceller såsom funktion av tiden jämfört med obehandlade celler och med en lämplig kontrollblandning.

Figur 4 visar verkan in vitro av kompositioner omfattande 21 aktiva komponenter enligt exemplen 107-111 på K-562 humana erytroleukemiceller (ATCC CCL 243) jämfört med korresponderande kontrollblandningar.

Figur 5 visar verkan in vitro av kompositioner omfattande 21 aktiva komponenter enligt exemplen 107-111 på HeLa humana cervixepitelkarcinom- celler lATCC CCL 2) jämfört med verkan av korresponderande kontrollbland- ningar.

Figur 6 visar verkan in vitro av kompositioner omfattande 21 aktiva komponenter enligt exemplen 107-111 på HEp-2 humana epidermala strup- huvudkarcinomceller (ATCC CCL 23) jämfört med korresponderande kontroll- blandningar.

Figur 7 visar verkan in vitro av kompositioner omfattande 21 aktiva komponenter enligt exemplen 107-111 på normala Vero njurceller från Afri- kansk grön apa (ATCC CCL 81) jämfört med korresponderande kontrollbland- ningar.

Figur 8 visar verkan in vivo av kompositioner omfattande 21 aktiva komponenter enligt exempel 1 12 på en tumör som utvecklats från Sp2/O- Ag14 musmyelomceller injicerade intraperitonealt i BALB/c möss jämfört med en korresponderande kontrollgrupp.

Figur 9 visar verkan in vivo av kompositioner omfattande 21 aktiva komponenter enligt exempel 112 på en fast tumör som utvecklats under huden från HeLa humana cervixepitelkarcinomceller injicerade subkutant i BALB/c (nu/nu) möss jämfört med en korresponderande kontrollgrupp.

För experimenten användes följande media. l fallen med Sp2/O-Ag14 och K-562 celler, RPMl 1649 medium (Sigma Chemie GmbH, D-8024 Deisen- hofen, Germany, produktnummer: R 6504); i fallet med HEp-2, HeLa och Vero celler MEM medium (Sigma Chemie GmbH, produktnummer: M 4655).

Exempel 1-37 Till en apparat utrustad med en omrörare vägdes aktiva medel i kvantiteter som ges och visas i tabellerna 1 och 2, sedan tillsattes de mängder av natriumvätekarbonat, också givna i tabellerna 1 och 2, till den erhållna pulverblandningen, som är nödvändiga för att neutralisera de sura kompo- _ nenterna. Under kontinuerlig omrörning tillsättes ett lämpligt medium till 10 15 20 25 30 35 521 049 _g- blandningen för att komplettera kompositionens vikt till 100 %. Verkan av lösningar beredda på detta sätt kan ses i tabellerna 1 och 2 och i Figur 1.

Exempel 38-67 Man förfar enligt exempel 1-37 med skillnaden att lämpliga mängder av kaliumvätekarbonat användes i stället för natriumvätekarbonat för att neutra- lisera de sura komponenterna. Verkan av lösningar som beretts på detta sätt skiljer ej i något fall signifikant från verkan av lösningarna i exempel 1-37 som visas i tabellerna 1 och 2 respektive i Figur 1.

Exempel 68-97 Man förfar enligt exemplen 1-37 med skillnaden att lämpliga mängder av kalciumkarbonat användes i stället för natriumvätekarbonat för att neutra- lisera de sura komponenterna. Verkan av lösningar som beretts på detta sätt skiljer sig inte i något fall signifikant från verkan av lösningarna i exempel 1-37 som visas i tabellerna 1 och 2 respektive i Figur 1.

Exempel 98-101 Man förfar enligt exemplen 23, 24, 27 och 28 med skillnaden att 0,053 viktsprocent L-argininhydroklorid, 0,052 viktsprocent L-histidinhydroklorid, 0,009 viktsprocent L-metioninhydroklorid respektive 0,025 viktsprocent L- tyrosinhydroklorid användes i stället för L-arginin, L-histidin, L-metionin respektive L-tyrosin som användes i exemplen 23, 24, 27 respektive 28. Den korresponderande mängden natriumvätekarbonat var i varje fall 0,052 vikts- procent. Verkan av lösningar som beretts på detta sätt skiljer ej signifikant från verkan av lösningarna enligt exemplen 23, 24, 27, och 28 som visas i tabell 2.

Exempel 102 0,01 viktsprocent L-tryptofan, 0,034 viktsprocent 2-deoxi-D-ribos, 0,003 viktsprocent adenin, 0,065 viktsprocent äppelsyra, 0,007 viktsprocent L-askorbinsyra och 0,091 viktsprocent natriumvätekarbonat väges till en appa- rat utrustad med en omrörare. Därefter tillsättes ett lämpligt medium till denna blandning för att komplettera kompositionens vikt till 100 % under kontinu- erlig omrörning. Verkan av lösningen som beretts på detta sätt visas i Figur 2 för 100 % komposition.

Exepel 103 Man förfar enligt exempel 102 med skillnaden att endast 80 % av kvantiteterna av varje komponent väges in, Sedan tillsättes ett lämpligt medium till denna blandning för att komplettera kompositionens vikt till 100 %. Verkan av lösningen beredd på detta sätt visas i Figur 2 för 80 % kompo- sition. 10 15 20 25 30 35 521 049 _10- Exempel 104 Man förfar enligt exempel 102 med skillnaden att endast 60 % av kvantiteterna av varje komponent vägs in. Därefter tillsättes ett lämpligt medium till blandningen för att komplettera kompositionens vikt till 100 %.

Verkan av lösningen beredd på detta sätt visas i Figur 2 för 60 % kompo- sition, Exempel 105 Man förfar enligt exempel 102 med skillnaden att endast 40 % av kvantiteterna för varje komponent vägs in. Därefter tillsättes ett lämpligt medium till blandningen för att komplettera kompositionens vikt till 100 %.

Verkan av lösningen som beretts på detta sätt visas i Figur 2 för 40 % komposition.

Exempel 106 Man förfar enligt exempel 102 med skillnaden att endast 20 % av kvantiteterna av varje komponent vägs in. Därefter tillsättes ett lämpligt medium till denna blandning för att komplettera kompositionens vikt till 100 %. Verkan av lösningen som beretts på detta sätt visas i Figur 2 för 20 % komposition.

Exempel 107 Till en apparat utrustad med en omrörare vägdes 0,011 viktsprocent L- metionin, 0,01 viktsprocent L-tryptofan, 0,036 viktsprocent L-tyrosin, 0,041 viktsprocent L-fenylalanin, 0,044 viktsprocent L-arginin, 0,039 viktsprocent L- histidin, 0,089 viktsprocent N-benzoylglycin, 0,007 viktsprocent L-askorbin- syra, 0,012 viktsprocent d-biotin, 0,010 viktsprocent pyridoxin, 0,0004 vikts- procent riboflavin, 0,0006 viktsprocent riboflavin-5'-fosfat, 0,0006 vikts- procent liponsyra, 0,017 viktsprocent orotsyra, 0,003 viktsprocent adenin, 0,034 viktsprocent 2-deoxi-D-ribos, 0,090 viktsprocent D-mannos, 0,053 viktsprocent D-glukosamin, 0,065 viktsprocent äppelsyra, 0,040 viktsprocent oxalättiksyra, 0,0015 viktsprocent adenosintrifosfat och 0,087 viktsprocent natriumvätekarbonat. Under kontinuerlig omrörning tillsättes sedan ett lämpligt medium till denna blandning för att komplettera kompositionens vikt till 100 %. Verkan av lösningen som beretts på detta sätt visas i Figurerna 2, 3, 4, 5, 6 och 7 för 100 % komposition.

Exempel 108 Man förfar enligt exempel 107 med skillnaden att endast 80 % av kvan- titeterna för varje komponent vägs in. Sedan tillsättes ett lämpligt medium till denna blandning för att komplettera kompositionens vikt till 100 %. Verkan av 10 15 20 25 30 35 . . - . . . 521 049 _11- lösningen som beretts på detta sätt visas i figurerna 2, 3, 4, 5, 6, och 7 för 80 % komposition.

Exempel 109 Man förfara enligt exempel 107 med skillnaden att endast 60 % av kvantiteterna för varje komponent vägs in. Sedan tillsättes ett lämpligt medium till denna blandning för att komplettera kompositionens vikt till 100 %. Verkan av lösningen som beretts på detta sätt visas i figurerna 2, 3, 4, 5, 6 och 7 för 60 % komposition.

Exempel 110 Man förfar enligt exempel 107 med skillnaden att endast 40 % av kvantiteterna för varje komponent vägs in. Sedan tillsättes ett lämpligt medium till denna blandning för att komplettera kompositionens vikt till 100 %. Verkan av lösningen som beretts på detta sätt visas i figurerna 2, 3, 4, 5, 6, och 7 för 40 % av kompositionen.

Exempel 1 1 1 Man förfar enligt exempel 107 med skillnaden att endast 20 % av kvantiteterna för varje komponent vägs 10. Sedan tillsättes ett lämpligt medium till denna blandning för att komplettera kompositionens vikt till 100 %. Verkan av lösningen som beretts på detta sätt visas i figurerna 2, 3, 4, 5, 6, och 7 för 20 % komposition.

Exempel 112 Till en apparat utrustad med en omrörare vägdes 1,47 viktsprocent L- metionin, 1,01 viktsprocent L-tryptofan, 0,036 viktsprocent L-tyrosin, 1,63 viktsprocent L-fenylalanin, 1,71 viktsprocent L~arginin, 1,53 viktsprocent L- histidin, 0,18 viktsprocent L-bensoylglycin, 1,94 viktsprocent L-askorbinsyra, 1,21 viktsprocent d-biotin, 2,02 viktsprocent pyridoxin, 0,038 viktsprocent riboflavin, 0,05 viktsprocent riboflavin-5'-fosfat, 0,02 viktsprocent liponsyra, 0,09 viktsprocent orotsyra, 0,068 viktsprocent adenin, 1,32 viktsprocent 2-deoxi-D-ribos, 1,8 viktsprocent D-mannos, 1,1 viktsprocent D-glukosamin, 1,32 viktsprocent äppelsyra, 0,040 viktsprocent oxalättiksyra, 0,1 1 vikts- procent adenosintrifosfat, 1,34 viktsprocent natriumvätekarbonat och 0,04 viktsprocent kaliumvätekarbonat. Under kontinuerlig omrörning tillsattes 83,168 viktsprocent av en bufferlösning innehållande 0,02 viktsprocent KH2PO4 och 0,3 viktsprocent Na2HP04 till denna blandning. Verkan av lösning- en som beretts på detta sätt och som använts för behandling av djur visas i figurerna 8 och 9. 10 15 20 25 30 35 . .Hp 521 049 _12- Exempel 113 Till en blandare väges 20 viktsprocent L-tryptofan, 62 viktsprocent L- askorbinsyra och 18 viktsprocent D-glukosamin. Efter grundlig blandning användes den resulterande pulverblandningen för preventiva experiment.

Exempel 114 Man förfar enligt exempel 113 med skillnaden att 32 viktsprocent L-ar- ginin, 28 viktsprocent riboflavin-5'-fosfat och 40 viktsprocent äppelsyra an- vändes.

Exempel 115 Man förfar enligt exempel 113 med skillnaden att 23 viktsprocent L-tryptofan, 0,2 viktsprocent pyridoxin, 17,8 viktsprocent N-benzoylglycin och 59 viktsprocent oxalättiksyra användes.

Exempel 116 Man förfar enligt exempel 113 med skillnaden att 19 viktsprocent L-ty- rosin, 61 viktsprocent L-askorbinsyra, 0,2 viktsprocent adenin och 19,8 viktsprocent L-histidin användes.

Exempel 117 Man förfar enligt exempel 113 med skillnaden att 31 viktsprocent L-me- tionin, 53 viktsprocent d-biotin, 0,2 viktsprocent adenin och 15,8 viktsprocent orotsyra användes.

Exempel 118 Man förfar enligt exempel 113 med skillnaden att 27 viktsprocent L-fe- nylalanin, 33 viktsprocent riboflavin, 0,2 viktsprocent adenosintrifosfat och 39,8 viktsprocent D-mannos användes.

Exempel 119 Man förfar enligt exempel 1 13 med skillnaden att 32 viktsprocent L-his- tidin, 9 viktsprocent liponsyra och 59 viktsprocent 2-deoxi-D-ribos användes.

Exempel 120 Man förfar enligt exempel 113 med skillnaden att 12 viktsprocent L-ar- ginin, 11 viktsprocent pyridoxin och 77 viktsprocent äppelsyra användes.

Exempel 121 Till en blandare väges 10 viktsprocent L-metionin, 3 viktsprocent L-tryp- tofan, 0,2 viktsprocent L-tyrosin, 10,9 viktsprocent L-fenylalanin, 22,7 vikts- procent L-arginin, 10 viktsprocent L-histidin, 1,1 viktsprocent N-benzoylglycin, 11,9 viktsprocent L-askorbinsyra, 0,1 viktsprocent d-biotin, 0,2 viktsprocent pyridoxin, 0,05 viktsprocent riboflavin, 0,35 viktsprocent riboflavin-5'-fosfat, 0,1 viktsprocent liponsyra, 0,6 viktsprocent orotsyra, 0,3 viktsprocent adenin, 0,9 viktsprocent 2-deoxi-D-ribos, 11,5 viktsprocent D-mannos, 7 viktsprocent 10 15 20 25 30 35 521 049 _13- D-glukosamin, 8 viktsprocent äppelsyra, 0,4 viktsprocent oxalättiksyra och 0,7 viktsprocent adenosintrifosfat. Efter grundlig blandning användes den resulterande pulverblandningen för preventiva experiment.

Verkan av kompositionerna enligt exempel 1-37 och den synergistiska samverkan av de aktiva ingredienserna (jämfört med verkan av komponenterna visade ensamma) undersöktes på Sp2/0-Ag 14 musmyelomceller. l experimenten användes de nyaste metoderna som accepterats i veten- skapliga litteratur. l fallen med Sp2/O-Ag14 och K562 skördades de logarit- miskt tillväxande cellerna från mediet och suspenderades åter i en 90 håls- platta som användes för cellkulturer till en slutlig koncentration av 4x104 Sp2/O-Ag14 celler respektive 2x104 K562 celler i 250 ,ul lämpligt medium per hål som innehöll de testade materialen i de indikerade koncentrationerna. I fallet med HeLa, HEp-2 och Veroceller skördades de odlade cellerna från 75 % konfluenta vävnadsodlingskolvar med 0,2 % trypsin och suspenderades åter i ett lämpligt medium med en täthet på 105 celler/ml. Alikvoter (100,ul) fylldes i 96-håls mikroplatter och inkuberades under 24 timmar. Mediet hälldes sedan bort och ersattes med 250,ul innehållande de testade föreningarna i de indi- kerade koncentrationerna. Alla typer av celler tilläts tillväxa under 40 timmar.

Antalet viabla Sp2/O-Ag14 och K562 celler räknades sedan med hjälp av mik- roskop medelst trypanblåfärgsexklusionsförfarande. Överlevnaden av HeLa, HEp~-2 och Vero celler mättes genom att cellernas endogena, alkaliska fosfa- tasaktivitet uppskattades. Resultaten utvärderades med användning av Student's t-test. Värden som ges efter medelvärdena i tabellerna och tecknen i figurerna betyder "standardavvikelse från medelvärdet, standard error of mean" lSEM).

Den första kolumnen i tabell 1 anger exemplets numer, den andra anger antalet kontrollexperiment, medan mängderna av komponenterna som använ- des i experimenten, uttryckta i viktsprocent, anges i de sex följande kolumnerna. Kontrollblandningarna var sammansatta av korresponderande mängder av kemiskt liknande men farmakologiskt overksamma substanser som aktiv komposition (0,026 viktsprocent L-serin, 0,033 viktsprocent L-as- paragin, 0,029 viktsprocent L-valin, 0,018 viktsprocent L-alanin, 0,006 viktsprocent glycin, 0,59 viktsprocent trimetylglycin och 0,006 viktsprocent av L-prolin såsom aminosyror; 0,017 viktsprocent tiaminhydroklorid, 0,006 viktsprocent niacin, 0,019 viktsprocent natriumsalt av folsyra, 0,001 vikts- procent hemikalciumsalt av D-pantotensyra, 0,012 viktsprocent uracil och 0,0008 viktsprocent oktansyra såsom vitaminer; 0,003 viktsprocent hypoxan- tin, 0,038 viktsprocent Dl-lribos, 0,090 viktsprocent glukos, 0,055 vikt- 10 15 20 25 30 35 _. m. 521 049 _14- sprocent N-acetylglukosamin, 0,081 viktsprocent dinatriumalt av bärnstens- syra, 0,080 viktsprocent dinatriumalt av fumarsyra samt 0,0015 viktsprocent dinatriumsalt av guanosintrifosfat. Det två sista kolumnerna visar verkan av en komposition omfattande fyra respektive fem aktiva ingredienser och verkan av komponenterna per se (kontrollexperíment) dvs. antalet celler efter 48 timmars inkubation respektive mängden celler uttryckt som procenttal av mängden obehandlade celler (mängden obehandlade celler är 100 %). l exempelvis fallet med L-tryptofan visar de 2-4 kontrollexperimenten verkan på antalet celler av 0,002; 0,006 respektive 0,01 viktsprocent L-tryptofan enbart. l fallet med exemplen 2-4 visas verkan av L-tryptofan använd i samma mängder men till- sammans med de fyra andra aktiva ingredienserna.

Man kan se i data i de två sista kolumnerna i tabell 1 att, vid an- vändning av enbart en av de ovannämnda substanserna, så visade ingen av dem någon tumörcellsdödande verkan, en användning av L-tryptofan i de angivna mängderna gav till och med någon ökning av tillväxten av celler.

Samtidigt framgår också av värdena i respektive kolumner att varje substans på ett synergistiskt sätt ökade verkan av de andra fyra aktiva ingredienserna i proportion till sin mängd. 0,01 viktsprocent L-tryptofan ökade tex. verkan på 73,1 % hos de andra fyra aktiva ingredienserna till 92,3 %. Samma mängd L-tryptofan enbart (0,01 viktsprocent) utan de andra fyra komponenterna ökade till och med något cellernas tillväxt. Detta visar otvetydigt en synergiverkan.

Skillnaden mellan verkan av kompositioner omfattande fyra aktiva ingredienser (exempel 1, 5, 9, 13, och 17) och verkan av kompositioner innefattande den femte aktiva ingrediensen (exempel 4, 8, 12, 16, och 20) i de maximala mängder som användes här (till exempel 0,01 viktsprocent (L- tryptofan) var signifikant i samtliga fall (p<0,01). Alla substanser ökade således signikant verkan av övriga fyra komponenter.

I figur 1 visas synergieffekten av kompositionerna enligt exemplen 1-20 omfattande fem aktiva ingredienser, i vilken mängderna Sp2/0-Ag14-cellar uttryckta som procenttal av mängderna obehandlade celler (mängderna obehandlade celler är 100 %) visas på den vertikala axeln. På den horisontala axeln visas mängder, uttryckta i viktsprocent, av L-tryptofan, 2-deoxi-D-ribos, adenin, äppelsyra och L-askorbinsyra. Vita staplar visar cellmängderna uttryckta som procenttal av mängderna av obehandlade celler efter 48 timmars inkubation under användning av ovannämnda substanser var för sigoch de svarta staplarna visar resultaten som erhölls när de användes tillsammans med de övriga fyra aktiva komponenterna. 521 049 _ 15 _ Tabell 1 Effekten av kompositioner enligt uppfinningen och de individuella, aktiva ingredienserna på Sp2/O-Ag14 musmyelomceller E K X O 5 N MÄNGD AV KOMPONENTER I EFFEKT M T P R VlKT-% 5 o H L L ANDHlNG AV l % AV L 2- ASKOR- Na- ANTALET OBEHAND- L-TRYP- DEOXI- ADE- APPEL- BIN- BIKAR- CELLER LADE TOFAN RIBOS NlN SYRA SYRA BONAT (x 10') CELLER 1 ---- 0,034 0,003 0,065 0,007 0,091 15,9 1 1,2 26,9 1 2,0 1 59, 1 1 3,2 100,0 2 0,002 0,034 0,003 0,065 0,007 0,091 10, 7 1 2,9 18,1 1 4,8 2 0,002 ---- ---- ---- ---- ---- 61, 7 1 3, 0 104,4 1 5,0 3 0,006 0,034 0,003 0,065 0,007 0,091 6,0 1 1,4 10,1 1 2,4 3 0,006 ---- ---- ---- ---- --- 62,6 1 2,0 106,0 1 3,4 4 0,010 0,034 0,003 0,065 0,007 0,091 4,5 1 0,3 7,7 1 0,6 4 0,010 --~- ---- ---- ---- ---- 63,0 1 3,4 106,6 1 5,8 5 0,010 ~--- 0,003 0,065 0,007 0,091 14,8 1 0,4 25,1 1 0,7 5 59,1 1 3,2 100,0 6 0,010 0,013 0,003 0,065 0,007 0,091 12,2 1 0,3 20,6 1 0,6 e 0,013 59, 3 1 2,3 100,4 1 4,1 7 0,010 0,025 0,003 0,065 0,007 0,091 8,7 1 0,8 14,8 1 1,3 7 0,025 59,9 1 1,2 101,1 1 2, 2 8 0,010 0,034 0,003 0,065 0,007 0,091 4,5 1 0,3 7,7 1 0,6 s 0,034 59,0 1 3,2 99,9 1 5,9 9 0,010 0,034 ---- 0,065 0,007 0,091 12,6 1 1,3 21,4 1 2,3 9 59, 1 1 3,2 100,0 10 0,010 0,034 0,001 0,065 0,007 0,091 10,1 1 1,8 17,1 1 3,2 10 ---- ---- 0,001 ---- ---- ---- 60, 5 1 1,4 102,4 1 2, 5 11 0,010 0,034 0,002 0,065 0,007 0,091 7,9 1 1,7 13,4 1 2,9 1 1 0,002 sa, 2 1 1,3 98, 5 1 3,2 12 0,010 0,034 0,003 0,065 0,007 0,091 4,5 1 0,3 7,7 1 0,6 12 0,003 58,5 1 1,5 99,1 1 2,9 13 0,010 0,034 0. 003 ---- 0,007 0,007 16,6 1 1,2 28,1 1 2,1 13 59,1 1 3, 2 100,0 14 0,010 0,034 0,003 0,013 0,007 0,024 13,1 1 2,2 22,2 1 4,0 14 ---- ---- ---- 0,013 ---- --- 58, 7 :t 2,1 99, 3 1 3, 7 15 0,010 0,034 0,003 0,039 0,007 0,057 9,9 1 1,1 16,7 1 2,0 15 0,039 «-- 60,4 1 1,7 102,2 1 3,0 16 0,010 0,034 0,003 0,065 0,007 0,091 4,5 1 0,3 7,7 1 0,6 1 s 0,055 -- - 55,3 1 2,5 99,5 1 4,5 17 0,010 0,034 0.003 0,065 ---« 0,084 13,2 1 0,8 22,3 1 1.3 1 7 59,1 1 3,2 100,0 18 0,010 0,034 0,003 0,065 0,003 0,087 1 1,9 1 2,1 20,2 1 3,7 18 ---- ---- ---- ---- 0,003 ---- 58,2 1 1,4 98, 5 1 2, 5 19 0,010 0,034 0,003 0,065 0,005 0,089 6,8 1 2,0 11,6 1 3,5 19 «--- ---- ---- ---- 0,005 ---- 56, 7 1 2,1 96,0 1 3,7 20 0,010 0,034 0,003 0,065 0,007 0,091 4,5 1 0,3 7,7 1 0,6 20 ---- -- - ---- ---- 0,007 ---- 56,3 1 2,6 95,2 1 4,8 10 15 20 25 30 35 521 049 _15- Den olika graden av förändring (i fallet med L-tryptofan till och med i motsatt riktning) för de vita och svarta staplarna med ökande mängder av de individu- ella substanserna visar synergiverkan, och de svarta staplarna demonstrerar kompositionernas kraftigt tumördödande verkan.

Tabell 2 visar hur, baserat på exemplen 21-37, verkan av en komposi- tion omfattande fem aktiva komponenter kommer att öka när ytterligare kom- ponenter Iägges till i fallet med Sp2/0-Ag14-celler. l tabell 2 anges mängderna material uttryckta i viktsprocent och multiplicerade med 1000, siffrorna i tabellen bör således läsas multiplicerade med 104; i exempel 21, i fallet med L-tryptofan, anger siffran 6: 6x10'3, dvs. 0,006 viktsprocent. Förhållandena vid experimenten var samma som tidigare. l likhet med tabell 1 framgår även här av data i de två sista kolumnerna i tabell 2 (i antalet celler och i procent) att ingen av ovan nämnda substanser har någon celltillväxtminskande verkan vid användning var för sig, antalet celler jämfört med antalet obehandlade celler (Kontroll 21) ökade till och med något av inverkan av L-fenylalanin (Kontroll 22) L-arginin (Kontroll 23), L-histidin (Kontroll 24) och riboflavin (Kontroll 29). Det framgår också att samma substanser synergistiskt ökade verkan av kompositionen enligt exem- pel 21 använda i samma mängder. Utan förstärkande substanser var verkan av exempel 21 omfattande fem aktiva ingredienser i samtliga fall signifikant mindre än tillsammans med övriga föreningar.

Verkan av kompositionerna enligt exempel 107-111 omfattande 21 akti- va ingredienser har också jämförts med effekten av kompositionerna enligt exemplen 102-106 omfattande fem aktiva ingredienser varvid de gemen- samma aktiva ingredienserna förekommer i samma mängder. För att underlätta jämförbarheten med tidigare resultat användes Sp2/0-Ag14-celler och experi- mentförhållandena var samma som ovan. Resultaten visas i Figur 2. På den vertikala axeln visas ändringarna av cellmängderna uttryckta i procenttal av mängderna obehandlade celler. På den horisontala axeln visas ändringarna uttryckta i procent av kompositionerna (ändringar av mängderna av de aktiva ingredienserna). Kompositionen i exempel 102 omfattande 5 aktiva ingredien- ser betraktas som 100 %. 80 % kompositionen i exempel 103 innehåller såle- des varje komponent till en mängd av 80 %. I de fall kompositionerna om- fattar 21 aktiva ingredienser betraktas kompositionen i exempel 107 såsom 100 %. ,_ í.__2_....__.........4.-_-.-..-...-_.......,.. 521 049 _17- Tabell 2 11,, Effekten av kompositioner enligt uppfinningen och de individuella, aktiva ingredienserna på Sp/Z/O-Ag 14 musmyeiomceller iviAmcso Koii/WOSNENTER EFFEKT iviKTs %<><10*> ".".°>>=r,-z|ffr_-E'UTT3O eåääw” wzâššïäš < Q Z rrl m gi z I, (f) - 5 _; I! 'P1 "_ >_r_Z- OQm>-iANDRING mzo' -.Ü. >_ š -i 'n IJ Q OJ r Z Z Z ä Z 2 7< AV gg I > 3 > z o > w oBE- F. g 2 w (Q š š ä ANTÅLET HANDL f' 8 1); -4 Z > CELLER ' i (xmfi CELLER 21 6202394 54 - - - - - - - - - 496104 67.010.6 21---------------74.313.9100.0 22 620239 4 5441 - - - - - - - - 30.411.4 40.911.9 22 - - - - - - 41 - - - - - - - - 61.313.0109.414.0 23 6 20 2 39 4 33 - 44 - - - - - - - 33.611.1 45.411.5 23 - - _ _ - - - 44 - - - - - - - 76.611.3103.411.6 24 620 239 4 33 - - 39 - - - - - - 4o.110.7 540109 24 - - - - - - - - 39 - - - - - - 60.712.0106.712.7 25 6 20 2 39 4 54 - - - 12 - - - - - 31.211.7 42.012.2 25 - - _ _ - _ - - - 12 - - - - - 742126 999131 26 6 20 239 4 54 - - - - 10 - - - - 339112 45.611.6 26 - - - - - - - - - - 10 - - - - 676116 91.012.1 27 620 239 4 52 - - - - - 11 - - - 31.111.1 41.611.5 27 - - - - - - - - - 11 - - - 733127 967136 26 620 239 4 54 - - - - - - 36 - - 33.611.0 45.311.3 26 - - - - - - - - - 36 - - 706111 949116 29 6 20 2 39 4 54 - - - - - - 0.4 - 249121 33.612.6 29 - _ - _ _ _ - - - - - - 0.4 - 7691171036122 30 6 20 2 39 4 54 - - - - - 40 354116 476122 30 - _ - - - 40 72.4:1_3 974517 521 049 _13- Tabell 2 (forts) Effekten av kompositioner enligt uppfinningen och de individuella, aktiva ingredienserna på Sp/Z/O-Ag 14 musmyelomceller MÄNGD KOMPONENTER EFFEKT i vikTs % <><10'f*) 'T 'P > >= f z > c: o Z E C O -l Ü U 'U i> m “i Ö d, u: Ü ä rn x 3 g g F? gg gl _20 > E g 2 g æ .. xoïëäwošm 22 Ngg f" z O à -< :a I, U, 2 o O < I, :a |%Av š4fi. :væm>Sw§->>Av Fgâåš >ågfw šfG-“š ANTALET CBE' "_ .C o < > _ < - HANDL, m å» -1 Z Q 41 :ELLER 2 9 im CMR TI J> -l 21 6 20 2 39 4 54 - - - - - - - 498104 67.61o.6 21- - - - - - - - - - - - - 74.313.9100.0 31 6 20 2 39 4 54 1.5 - - - - - - 27.51o.5 55.311.1 31- - - - - - 1.5 - - - - - - 71.011.1 95.611.5 32 6 20 2 39 4 33 - 90 - - - - - .24.510.9 49.211.2 32 - - - - - - - 90 - - - - - 73.111.1 964115 33 6 20 2 39 4 33 - - 53 - - - - 20.110.6 40.311.1_ 33 - - - - - - - - 53 - - - - 71.711.3 965113 34 6 20 2 39 4 54 - - - 69 - - - 24.010.6 462106 34 - _ _ _ _ . - - - 69 - - - 74.211.6 996121 35 6 20 2 39 4 54 - - - - 0.6 - - 16.310.5 32.710] 35 - - - - - - - - - - 0.6 - - 73.s11.3 969113 36 6 20 2 39 4 52 - - - - - 0.6 - 23.a11.0 476113 36 - - - - - - - - - - 0.6 - 73.111.6 934121 37 6 20 2 39 4 54 - - - - - - 17 26.410.6 531106 37 _ - - - _ _ - - - - - - 17 700113 94.211.7 10 15 20 25 30 35 521 049 _19- För att utesluta möjligheten att den uppmätta verkan är ett resultat av en osmotisk effekt eller en aspecifik överbelastning av näringsämnen eller en aminosyreobalans, framställdes även kontrollblandningar. Dessa kontroll- blandningar innehöll substanser som i tidigare experiment visat sig overk- samma i PADS. Sammansättningen av kontrollblandningarna ges i samband med tabell 1. Resultaten som erhölls vid experiment med kompositionerna enligt exemplen 102-106 och 107-111 och med kontrollblandningarna visas i figur 2, i vilken linjen med tecken i form av ofyllda cirklar visar ändringen av cellmängden efter 48 timmars inkubation i fallet med kontrollblandningar, lin- jen med tecken i form av fyllda cirklar visar ändringen i fallet med kompo- sitioner omfattande fem aktiva ingredienser enligt exempel 102-106 och linjen med tecken i form av ofyllda trianglar visar ändringen i fallet med kompo- sitioner omfattande 21 aktiva ingredienser enligt exemplen 107-1 11. I expe- rimenten utförda med 100 % kompositionerna enligt exempel 102 och 107 som visas i Figur 2, användes de individuella ingredienserna i sådana mängder som inte väsentligt påverkar antal celler (såsom framgår av resultaten av de tidigare experimenten visade i tabellerna 1 och 2). Det framgår av Figur 2 att dessa komponenter har en signifikant antitumörpåverkan när de användes till- sammans. Detta faktum visar åter det synergistiska sättet för de aktiva ingre- diensernas samverkan. Det framgår även av figur 2 att kontrollblandningarna inte har någon väsentlig verkan på antalet celler. Med utgångspunkt från dessa experiment kan det således uteslutas att den uppmätta verkan är ett resultat av en osmotisk effekt eller en aspecifik överbelastning av närings- ämnen eller en aminosyreobalans. _ För att undersöka om motjoner har någon roll i kompositionernas verkan utfördes experiment i vilka K*-joner (exemplen 38-67) eller CaH-joner (exemplen 68-97) användes i stället för Nafljoner. Det fanns ingen signifikant skillnad mellan verkan av kompositioner i vilka olika motjoner användes, resul- taten var de facto exakt lika.

Verkan av 100 % kompositionen enligt exempel 107 på Sp2/0-Ag14- celler undersöktes som en funktion av tiden och jämfördes med 100 % kontrollblandning och med obehandlade celler. Experimentförhållandena var desamma som i föregående experiment bortsett från att i detta fall räknades cellerna inte endast efter 48 timmar utan även efter 6; 12; 24 och 36 timmar.

Resultaten av dessa kinetiska experiment visas i Figur 3. Antalet celler/mi visas på den vertikala axeln. Tiden anges i timmar på den horisontella axeln.

Linjen med tecken i form av ofyllda cirklar visar ändringen av cellantalet i fallet med obehandlade celler, linjen med tecken i form av fyllda cirklar visar änd- 10 15 20 25 30 35 521 049 -20_ ringen i fallet med kontrollblandning och linjen med tecken i form av fyllda trianglar visar ändringen i fallet med kompositioner enligt exempel 107 om- fattande 21 aktiva ingredienser som en funktion av tiden. Det framgår av figur 3 att kompositionen enligt uppfinningen är toxisk för tumörcellerna och or- sakar en minskning av deras antal med tiden medan kontrollblandningen inte har någon väsentlig effekt på cellantalet eftersom detta ökar exponentiellt med tiden och linjens form motsvarar formen för den linje som visar tillväxten av obehandlade celler. Kompositionen enligt uppfinningen hindrar således inte en- dast en celltillväxt utan har också en cytotoxisk verkan. Mängderna av de ak- tiva ingredienserna i ovannämnda komposition omfattande 21 substanser val- des så att komponenterna, använda individuellt, inte har någon signifikant effekt på tumöroeller. (Detta är naturligtvis sant i än högre grad för 80 %, 60 % kompositioner etc i vilka mängderna aktiva ämnen är 20 %, 40 % etc mindre). Eftersom samma kompositioner användes i samtliga in vitroexperi- ment, visar resultatet i samtliga fall de aktiva komponenternas synergistiska samverkan.

Ovannämnda resultat visar att effekten orsakas av den synergistiska verkan av substanser som valts i enlighet med de insikter på vilka uppfinning- en är baserad. Dessa resultat visar vidare att insikterna är korrekta. Eftersom de olika cancercellerna skiljer sig i varierande grad från normala celler, skiljer sig de mest verksamma, uppfinningsenliga kompositionerna mot cancerceller likaledes från varandra. Detta innebär att den mest lämpliga kompositionen kan väljas mot varje tumör med användning av den synergistiska tumörcelldö- dande verkan som kriterium. l preventivt syfte eller om arten av tumören inte kan fastställas eller på grund av tidsbrist används företrädesvis de generella kompositionerna omfattande 21 aktiva ingredienser. l följande experiment undersöktes således hur generell verkan av dessa kompositioner är och hur verksamma de är.

Verkan av kompositionerna omfattande tjugoen aktiva ingredienser en- ligt exempel 107-11 på K-562 humana erytroleukemiceller undersöktes och jämfördes med verkan av ovannämnda kontrollblandning. Resultaten av expe- rimenten visas i Figur 4. I likhet med Figur 2 visas ändringarna av cell- mängderna uttryckt i procenttal av mängden obehandlade celler på den verti- kala axeln. Ändringarna uttryckta i procent av kompositionen (ändringar av mängden aktiva ingredienser) visas på den horisontella axeln. Linjen med tecken i form av ofyllda cirklar visar verkan av kontrollblandningarna, medan linjen med tecken i form av fyllda cirklar visar verkan av kompositioner om- fattande 21 aktiva ingredienser. Det framgår av Figur 4 att kompositionerna 10 15 20 25 30 35 521 04-9 _21- enligt uppfinningarna även har en signifikant tumörcellsdödande verkan i fallet med K-562 humana erytroleukemiceller.

Sedan undersöktes verkan av kompositionerna enligt exemplen 107-111 omfattande tjugoen aktiva ingredienser för fall med HeLa humana, cervixepi- telkarcinomceller och Hep-2 humana, epidermala struphuvudkarcinomceller samt jämfördes med verkan av kontrollblandningen. Detta experiment var nöd- vändigt för att visa om tidigare resultat var generella och oberoende av störande inverkningar från det använda mediet, av suspensionsmetoden, av cellräkningen eller av detekteringen. Överlevnaden av HeLa, HEp-2 och Vero celler mättes genom att cellarnas endogena alkaliska fosfatasaktivitet upp- skattades. Kort efter inkubationstiden eliminerades icke vidhäftande (troligen skadade) celler medelst tvättning. Sedan tillsattes till varje hål 150,ug alkaliskt fosfatassubstrat (4-nitrofenylfostat, Sigmatabletter Nr 1 1 1-1 12) upplöst i 150,ul ny 10 %-ig dietanolaminbuffertlösning (pH 9,8). Plattorna inkuberades vid 30°C till dess absorbansen uppnådde ett värde på omkring 1 i fallet med obehandlade celler. Reaktionen stoppades genom tillsats av 50jul 3 M NaOH till varje hål. Absorbansen mättes vid 405 nm medelst en Dynatech ELISA mätapparat. Bakgrundsvärdena subtraherades från varje avläst värde. Resul- taten visas i Figur 5 (för fallet med HeLa celler) och i Figur 6 (för fallet med HEp-2 celler). l likhet med figurerna 2 och 4 visar den vertikala axeln i båda dessa figurer ändringen av cellmängderna uttryckta i procenttal av mängden obehandlade celler. Ändringen i cellantalet i dessa fall detekterades genom att mätning av extinktionen. Den horisontella axeln anger ändringarna uttryckta i % av kompositionerna (ändringarna i mängderna aktiva ingredienser). I både figur 5 och 6 anger linjerna med tecken i form av ofyllda cirklar verkan av kontrollblandningarna medan linjerna med tecken i form av fyllda cirklar visar effekten av kompositioner omfattande 21 aktiva ingredienser enligt exemplen 107-1 1 1. Det framgår av figurerna att kompositionerna är verksamma mot båda celltyperna. Detta resultat är desto värdefullare med tanke på att HEp-2 är känd som en "motståndskraftig celltyp" som är motståndskraftig mot miljö- faktorer [(American Type Culture Collection Catalogue of Cell Lines and Hybridomas, 5th ed., pp. 15-16 (1985ll.

I enlighet med de teoretiska basen för uppfinningen påverkar komposi- tionerna selektivt endast cancerceller. För att ytterligare bevisa denna tes undersöktes även verkan av kompositioner omfattande 21 aktiva ingredienser enligt exemplen 107-111 och av kontrollblandningar på normala celltyper, Vero njurceller från afrikansk grön apa. Resultaten av experimenten visas i Figur 7. Ändringen av mängden celler uttryckta i procenttal av mängden 10 15 20 25 30 35 521 049 _22- obehandlade celler visas på den vertikala axeln. Ändringarna uttryckta i procent av kompositionerna (ändringar av mängderna av de aktiva ingredien- serna) visas på den horisontella axeln. Linjen med tecken i form av ofyllda cirklar visar verkan av kontrollblandningarna medan linjen med tecken i form av fyllda cirklar visar verkan av kompositionerna omfattande 21 aktiva ingre- dienser enligt exemplen 107-11 1. Det framgår av Figur 7 att kompositionerna enligt uppfinningen inte utövar en cytotoxisk verkan på normala Verocelltyper, eftersom verkan på tillväxten av 100 % komposition enligt exempel 107, om den införts i ett tidsdiagram, skulle varit liknande den verkan som visas i Figur 3 för fallet med kontrollblandningar. Eftersom Vero är en snabbt tillväxande celltyp [American Type Culture Collection] [Catalogue of Cell Lines and Hybri- domas, 5th ed., pp. 45-46 (1985)] visar detta experiment att kompositionen enligt uppfinningen i motsats till cytostatika inte är toxisk för alla snabbt tillväxande celler, utan att kompositionen selektivt endast påverkar tumör- celler. Med utgångspunkt från ovannämnda resultat kan kompositionerna en- ligt uppfinningen betraktas som antineoplastiska beredningar och inte som cytotoxiska beredningar.

För att visa verksamheten in vivo av kompositionen enligt uppfinningen utfördes även farmakologiska experiment. Vid dessa experiment användes genomgående metoder och villkor accepterade i vetenskaplig litteratur.

Experimenten utfördes med Sp2/O-Ag14-celler. I experimenten användes 5-6 veckor gamla hcnmöss av typ BALB/c. Experimenten utfördes med två grupper vardera omfattande tio möss. I mössen injicerades intraperitonealt 5x104 Sp2/0-Ag14-celler suspenderade i 200,ul ofullständigt RPM) 1640 medium. Dagen för injektionen betraktades som experimentets 0 dag. Det antal celler som var nödvändigt för experimenten bestämdes medelst tumoro- genicitetstest. Behandlingen av djuren började 24 timmar efter injiceringen av cellerna (detta var experimentets första dag) och fortsatte under 10 efter varandra följande dagar. Kcntrollgruppen injicerades intraperitonealt med 200pl PBS (fosfatbuffrad saltlösning) vid varje behandling, medan den be- handlade gruppen injicerades intraperitonealt med motsvarande volym av en komposition enligt Exempel 112 omfattande 21 aktiva ingredienser.

Det mest verksamma behandlingssättet skulle ha varit en kontinuerlig infusion som håller koncentrationen av kompositionens komponenter på en relativt hög nivå. Av praktiska skäl användes en approximativt kontinuerlig periodisk behandling, dvs. djuren behandlades sex gånger per dag. Resultaten av experimenten visas i Figur 8. Antalet dagar som gått sedan experimentets början visas på den horisontella axeln. På den vertikala axeln visas över- 10 15 20 25 30 35 521 04-9 _23- Ievnadsvärdena i %, dvs antalet möss vid liv på ifrågavarande dag. 10 möss betyder sålunda 100 % och 8 möss 80 %. De vita staplarna visar överlevna- den för behandlade möss, svarta staplar överlevnaden för obehandlade möss.

Det framgår av figur 8 att inte någon obehandlad mus var vid liv på exem- pelvis den 16:e dagen och att samtliga behandlade möss fortfarande var vid liv. Alla obehandlade möss hade dött den 16:e dagen, de behandlade mössen först vid den 25:e dagen. Det framgår att en signifikant ökning i livslängden kan uppnås med hjälp av behandlingen. Medianen för överlevnadstiden var 21 dagar för den behandlade gruppen och 14 dagar för den icke behandlade gruppen. T/C-värdet i procent som beräknats ur dessa medianöverlevnadstiden (150 %) är mycket högre än de 125 % som erkännes som ett kriterium för verksamhet. Enligt litteraturen kan kompositionen, med utgångspunkt från detta värde, betraktas som en beredning med en kraftig antitumörverkan mot den givna celltypen.

I syfte att visa att ökningen av överlevnadstid är ett resultat av den toxiska verkan hos kompositionen enligt exempel 112 på tumörceller och inte av en kraftigt stärkande effekt, utfördes ett annat experiment i vilket 10-10 möss behandlades på samma sätt. Efter tio dagars behandlingstid avlägsnades cellerna från bukhålorna från båda grupperna av möss och räknades. Skillna- den mellan det genomsnittliga cellantalet l5,55x1O5 respektive 5,95x107) är signifikant lp<0,001) och visar verkan in vivo av kompositionen enligt upp- finningen.

För att ytterligare visa verkan hos kompositionen enligt uppfinningen och för att utesluta möjligheten att resultaten endast är en följd av en lokal effekt, cellerna fanns i bukhålan och behandlades intraperitonealt, utfördes ett annat experiment med kongenitalt immundefekta (thymusdeficienta) (nakna) möss som injicerades subkutant med fast human tumör. För experimentet användes HeLa-celler och 6-8 veckor gamla honmöss, BALB/c (nu/nu) och 5x1O6 celler injicerades subkutant i mössens nedre extremiteter. Behandlingen började med kompositionen enligt exempel 1 12 när storleken på tumörerna nått en genomsnittsvolym på 50 mma. Behandlingsschema, behandlingstid och lösningar (exempel 112) som användes vid behandlingen var samma som i föregående farmakologiska experiment. Storleken på tumörerna [längd (L), bredd (W), höjd (H)] mättes två gånger i veckan medelst digitala skjutmått (Mitutoyo, lnc., Tokyo, Japan). Tumörernas volym beräknades (beräknade medelst ekvationen LWH/2) liksom även den relativa tumörvolymen V,/VO (Eur.

J. Cancer.Clin. Oncol, gl, 1253-1260 l1988)] varvid V, är den aktuella tumörvolymen och V0 är tumörvolymen vid behandlingens början. Resultaten 10 15 20 25 30 35 521 049 _24- har sammanfattats i Figur 9. Medelvärdet av Vt/Vo visas på den vertikala axeln medan antalet dagar efter behandlingens inledning visas på den horisontella axeln. Linjen med tecken i form av ofyllda cirklar visar ökningen av den relativa tumörvolymen efter inledningen och efter behandlingen för fallet med kontrollmöss och linjen med tecken i form av fyllda cirklar visar detsamma för fallet med behandlade djur. Av figur 9 framgår att behandlingen avsevärt bromsade tillväxten av tumörerna. I fallet med kontrollmöss ökade tumörvoly- men tex. till det niofaldiga värdet under 16,5 dagar medan 33 dagar behövdes för att uppnå samma niofaldiga tillväxt i fallet med behandlade möss. T/C procenttalet beräknades också ur Vt/Vo värdena för behandlade grupper och kontrollgrupper. Värdena av T/C procenttalen var i samtliga fall under 42 % vilket är acceptabelt som kriterium på verkan [Europ. J. Cancer, 1_7_, 129-142 (1981)]. Experimentet visar återigen att kompositionerna enigt uppfinningen har en signifikant antitumörverkan. Resultaten är särskilt lovande med tanke på att vi var långt ifrån den optimala behandlingsproceduren och från den maximala tolererbara dosen på grund av tekniska problem, och att samma be- handlingar skulle kunna utföras mycket mera effektivt under kliniska för- hållanden (längre behandlingstid, permanent verkan medelst exempelvis infu- sion etc.). Ändring av kroppsvikten under en behandling är ett bra och allmänt an- vänt index för att karaktärisera behandlingens toxicitet; djurens vikt mättes därför under ovannämnda experiment. Enligt litteraturen skall beredningen betraktas som toxisk om den genomsnittliga kroppsvikten minskar med 10-15 % [Eur. J. Cancer. Clin. 0ncol., _2_l, 1253-1260 (1988)]. l vårt expe- riment var ändringen i genomsnittlig kroppsvikt -5,9i4,1 % i fallet med i kontrollgruppen och -6,6;t3,9 % i fallet med den behandlade gruppen. Det finns således ingen signifikant skillnad mellan de två grupperna och detta innebär att kompositionen enligt uppfinningen inte har några toxiska bi- verkningar.

För att visa användbarheten av kompositionen enligt uppfinningen i preventivt syfte behandlades 2-2 grupper av BALB/C möss (10 möss per grupp) på ett sådant sätt att de behandlade djurens mat blandades i ett för- hållande 1:1 med kompositionerna enligt exemplen 113-121 och djuren mata- des ad libitum. 5 dagar efter behandlingens början inokulerades båda grupper- na av djur med 1x104 Sp2/0-Agl4-celler. Behandlingen fortsatte under 100 dagar. Möss som matats med en blandning av kompositioner enligt exempel 113-121 och normal mat i förhållande 1:1 visade inga tecken på intraparente- ral tumörtillväxt när de dödades 100 dagar efter injicerandet av cellerna. 10 15 20 25 30 35 521 049 _25- Samtidigt varierade överlevnadstiderna hos kontrolldjuren i de olika experimentgrupperna mellan 21 och 26 dagar efter injicerandet av Sp2/O- Ag14-celler.

Beroende på dos och behandlingssätt kan kompositionerna enligt upp- finningen användas för att förebygga cancerösa sjukdomar, för att hämma utveckling av tumörer i fallen med AIDS och organtransplantationer, för att hindra uppkomsten av metastaser, och för adjuvant, kombinerad och direkt terapi av tumörpatienter.

De huvudsakliga fördelarna med kompositionerna enligt uppfinningen är de följande: a) Med användning av en adekvat dos kan kompositionerna insättas för förebyggande av cancerösa sjukdomar, för hämmande av uppkomsten av tumörer i fallen med AIDS och transplantationer, för att hindra uppkomst av metastaser och för direkt, adjuvant eller kombinerad behandling och bot av cancerösa sjukdomar. b) De är inte toxiska. Toxicitetsexperiment, baserade på mätning av förlust av kroppsvikt hos djuren, visade att kompositionerna inte är toxiska.

Enligt litteraturdata är toxiciteten hos de individuella komponenterna i kompositionerna mycket låg, och denna låga toxicitet minskar till och med när substanserna används tillsammans. Primater tolererar dessutom dessa sub- stanser bättre än de små djur som används för att bestämma toxicitetsvärden.

Med tanke på alla dessa fakta kan det sägas att kompositionerna bör betraktas såsom varande icke toxiska. cl De har inga eller endast försumbara biverkningar. En stor mängd observationer rörande komponenternas biverkningar har samlats eftersom nästan alla (utom Z-deoxi-D-ribos) har använts i någon slags terapi (i anticancerterapi endast askorbinsyra) eller såsom matkomplement. Enligt de erfarenheter som samlats vid dessa applikationer är det helt klart att kompositionerna praktiskt taget saknar biverkningar. d) De är selektiva. Selektiviteten visas medelst egna experiment som visar att kompositioner som är toxiska med avseende på olika cancerceller inte är toxiska med avseende på normala Vero celler, på experimentdjuren respek- tive på dessas normala celler. Denna selektivitet förstärkes av det faktum att det finns mycket fler normala celler än cancerceller och de senare cellerna ackumulerar komponenterna i kompositionerna medan upptagandet är reglerat i fallet med normala celler. e) De kan användas brett. Deras verkan är generell. Verkan av kompo- sitionerna undersöktes i fall med musmyelom (Sp2/O-Ag14) human erytroleu- 10 521 049 _25- kemi (K-562), humant cervixepitelkarcinom (HeLa) och human epidermalt struphuvudkarcinom (HEp-2). De celler representerar ett brett spektrum eftersom de innefattar både humana och animala tumörer och även bland de humana tumörerna finns en leukemi och två väsentligen skiljaktiga fasta tumörer. Resultaten som erhålls från experiment med dessa celltyper stöder utsagan ovan att kompositionerna har en allmän verkan och kan användas brett. f) De kan beredas utan svårigheter. Komponenterna i kompositionerna är substanser med låg molekylvikt och finns lätt tillgängliga, så att kompo- sitionerna är lätta att bereda. g) De är lösliga i vatten och således lätta att dosera.

Claims (29)

10 15 20 25 30 35 521 049 Q? Patentkrav

1. Kompositíon för förhindrande och behandling av cancerösa sjukdomar omfattande följande föreningar som förekommer i cirkulationssystemet: åtminstone en aminosyra, åtminstone en vitamin och adenin, 2-deoxi-D-ribos, D-mannos, äppelsyra, D-glukosamin, oxalättiksyra, adenosintrifosfat och/ eller farmaceutiskt godtagbara salter av dessa.

2. Kompositíon enligt patentkrav 1, vilken utöver de aktiva föreningarna, även omfattar bärare, utspädningsmedel och/ eller andra hjälpmedel som normalt användes inom farmacin.

3. Kompositíon enligt 1 eller 2, i vilken aminosyran är L-metionin, L-tryptofan, L- tyrosin, L-fenylalanin, L-arginin, L-histidin, N-bensoylglycin och /eller ett salt av dessa.

4. Kompositíon enligt något av föregående patentkrav i vilken vitaminen är d-biotin, pyridoxin, riboflavin, riboflavin-5'-fosfat, L-askorbinsyra, liponsyra, orotsyra och/ eller ett salt av dessa.

5. Kompositíon enligt något av föregående patentkrav omfattande L-tryptofan, L- askorbinsyra och/ eller farmaceutiskt godtagbara salter av dessa.

6. Kompositíon enligt något av föregående patentkrav omfattande L-arginin, riboflavin-5'-fosfat och/ eller farmaceutiskt godtagbara salter av dessa.

7. Kompositíon enligt något av föregående patentkrav omfattande 0,002-70 viktprocent av åtminstone en förening vald ur gruppen bestående av L-metionin, L- tryptofan, L-tyrosin, L-fenylalanin, L-arginin, L-histidin, N -bensoylglycin och /eller salter av dessa såsom aminosyra, 0,0004-80 viktprocent av åtminstone en förening vald ur gruppen bestående av d-biotin, pyridoxin, riboflavin, riboflavin-Sïfosfat, L- askorbinsyra, liponsyra, orotsyra och/ eller salter av dessa såsom vitamin samt 0,003-8O viktprocent av adenin, 2-deoxi-D-ribos, D-mannos, D-glukosamin, 10 15 20 25 30 521 Û49*~@ wwfl;1^:¿f§ 28' äppelsyra, oxalättiksyra, adenosintrifosfat och /eller farmaceutiskt godtagbara salter av dessa.

8. Komposition enligt något av föregående patentkrav omfattande 0,9-25 viktprocent L-metionin, 0,8-19 viktprocent L-tryptofan, 1, 1-48 viktprocent L- arginin, 0,9-46 viktprocent d-biotin, 1,2- 16 viktprocent pyridoxin, 0,03-42 viktprocent riboflavin-5'-fosfat, 0,05- 18 viktprocent D-glukosamin, 0,5-60 viktprocent Q-deoxi-D-ribos, O,7-68 viktprocent åppelsyra, 0,6-40 viktprocent D- mannos och/ eller farmaceutiskt godtagbara salter av dessa.

9. Komposition enligt något av patentkrav 1-7 omfattande 0,005-34 viktprocent L- metionin, 0,002-25 viktprocent L-tryptofan, 0,02-23 viktprocent L-tyrosin, 0,04-30 viktprocent L-fenylalanin, 0,04-50 viktprocent L-arginin, 0,03-34 viktprocent L- histidin, 0,05-22 viktprocent N-bensoylglycin, 0,01-60 viktprocent d-bíotín, 0,01-20 viktprocent pyridoxin, 0,0004-45 viktprocent riboflavin, 0,0005-45 viktprocent riboflavin-S-fosfat, 0,003-70 viktprocent L-askorbinsyra, 0,004-15 viktprocent liponsyra, 0,01- 17 viktprocent orotsyra, 0,001-10 viktprocent adenin, 0,01-63 viktprocent Q-deoxi-D-ribos, 0,08-42 viktprocent D-mannos, 0,05-20 viktprocent D- glukosamin, 0,01-80 viktprocent äppelsyra, 0,02-60 viktprocent oxalåttiksy-ra, 0,001-10 viktprocent adenosintrifosfat och/ eller farmaceutískt godtagbara salter av dessa.

10. Komposition enligt något av föregående patentkrav omfattande 30-44 viktprocent L-arginin, 27-35 viktprocent riboflavin-5'-fosfat, 38-62 viktprocent åppelsyra och/ eller farmaceutiskt godtagbara salter av dessa.

11. Process för att bereda en komposition enligt något av patentkrav 1-10, vilken omfattar blandandet av, bland de aktiva föreningar som förekommer i cirkulationssystemet, åtminstone en aminosyra, åtminstone en vitamin, adenin, 2- deoxi-D-ribos, D-mannos, D-glukosamin, âppelsyra, oxalättíksyra, adenosintrifosfat och om så önskas även bärare, utspådningsmedel och / eller andra hjälpmedel som normalt användes inom -armacin till en farrnaceutisk komposition, 10 15 20 25 30 35 . , . . . 1 521 Û49ïí¥HïKï¿= av

12. Process enligt patentkrav 11, vilken omfattar blandandet av L-tryptofan, L- askorbinsyra, adenin, Q-deoxi-D-ribos, D-glukosamin och /eller farmaceutiskt godtagbara salter av dessa för att ge en farmaceutisk komposition.

13. Process enligt patentkrav 11 eller 12, vilken omfattar blandandet av L-arginin, riboflavin-S-fosfat, D-mannos, adenosintrifosfat och/ eller farmaceutiskt godtagbara salter av dessa för att ge en farmaceutisk komposition.

14. Process enligt något av patentkrav 11-13, vilken omfattar blandandet av 30-44 viktprocent L-arginin, 27-35 viktprocent riboflavin-S-fosfat, 38-62viktprocent äppelsyra och / eller farmaceutiskt godtagbara salter av dessa för att ge en farmaceutisk komposition.

15. Process enligt patentkrav 1 1-14, vilken omfattar blandandet av 0,002-70 viktprocent av åtminstone en förening vald ur gruppen bestående av gruppen L- metionin, L-tryptofan, L-tyrosin, L-fenylalanin, L-arginín, L-histidin, N- bensoylglycín och/ eller salter av dessa såsom aminosyra, 0,0004-80 viktprocent av åtminstone en förening vald ur gruppen bestående av d-biotin, pyridoxin, riboflavin, riboflavin-5'-fosfat, L-askorbinsyra, liponsyra, orotsyra och/ eller salter av dessa såsom vitamin samt 0,003-80 viktprocent av adenin, Q-deoxi-D-ribos, D-mannos, D-glukosamin, åppelsyra, oxalåttiksyra, adenosintrifosfat och / eller farmaceutiskt godtagbara salter av dessa för att ge en farmaceutisk komposition.

16. Process enligt något av patentkrav 11-15, vilken omfattar blandandet av 0,9-25 viktprocent L-metionin, 0,8- 19 viktprocent L-tryptofan, 1,1-48 viktprocent L- arginin, 0,946 viktprocent d-biotin, 1,2-16 viktprocent pyridoxin, 0,03-42 viktprocent riboflavin-5-fosfat, 0,05- 18 viktprocent D-glukosamin, 0,5-60 viktprocent 2-deoxi-D-ribos, 0,7-68 viktprocent äppelsyra, 0,6-40 viktprocent D- mannos och / eller farmaceutiskt godtagbara salter av dessa för att ge en farmaceutisk komposition.

17. En process enligt något av atentkrav 11-16, *ailken omfattar blandandet av 0,005-34 viktprocent av L-metionin, 0,002-25 viktprocent L-tryptofan, 0,02-23 viktprocent L-tyrosín, 0,04-30 viktprocent L-fenylalanin, 0,04-50 viktprocent L- arginin, 0,03-34 viktprocent L-histídin, 0,05-22 viktprocent N-bensoylglycin, 0,01- 10 15 20 25 30 35 521 049 so 60 viktprocent d-biotin, 0,01-20 viktprocent pyridoxin, 0,0004-45 viktprocent riboflavin, 0,0005-45 viktprocent riboflavin-5'-fosfat, 0,003-70 viktprocent L- askorbinsyra, 0,004-15 viktprocent liponsyra, 0,01- 17 viktprocent orotsyra, 0,001- 1O viktprocent adenin, 0,01-63 viktprocent 2-deoxi-D-ribos, 0,08-42 viktprocent D- mannos, 0,05-2O viktprocent D-glukosamin, 0,01-8O viktprocent äppelsyra, 0,02- 6O viktprocent oxalättiksyra, 0,001- 10 viktprocent adenosintrifosfat och/ eller farmaceutiskt godtagbara salter av dessa för att ge en farmaceutisk komposition.

18. Komposition enligt patentkrav 1 för användning som medikament.

19. Komposition enligt patentkrav 18 för användning vid behandling av cancer.

20. Komposition enligt patentkrav 1 och farmaceutiska bärare och/ eller auxiliära medel för användning såsom medikament.

21. Komposition enligt patentkrav 21 för användning som antitumörmedel.

22. Komposition enligt patentkrav 1 för användning såsom adjuvant vid behandling aV CaflCef.

23. Kompositionen enligt patentkrav 1 i form av en tablett, dragé, suppositorie, kapsel eller infusionslösning för användning vid behandling av cancer.

24. Komposition enligt patentkrav 22 omfattande en terapeutiskt verksam mängd av produkten enligt patentkrav 1.

25. Kompositionen enligt patentkrav 24 omfattande 0,2-420 g av produkten enligt patentkrav 1.

26. Användning av komposition omfattande åtminstone tre aktiva föreningar som förekommer i cirkulationssystemet: åtminstone en aminosyra, åtminstone en vitamin och .fnminstone en fïrening vald ur gruppen bestående av adenin, 2-deoxi- D-ribos, D-mannos, D-glukosamin, oxalättiksyra, adenosintrifosfat och/ eller farrnaceutiskt godtagbara salter av dessa för tillverkning av ett läkemedel för behandling av cancer. 10 521 049 2/

27. Användning enligt patentkrav 26 för tillverkning av ett läkemedel i form av en tablett eller kapsel för oral administrering.

28. Användning enligt patentkrav 26 för tillverkning av ett läkemedel i form av en infusionslösning för parenteral administration.

29. Användning av komposition omfattande åtminstone tre aktiva föreningar som förekommer i cirkulationssystemet: åtminstone en aminosyra, åtminstone en vitamin och åtminstone en förening vald ur gruppen bestående av adenin, Z-deoxi- D-ribos, D-mannos, D-glukosamin, oxalättiksyra, adenosintrifosfat och/ eller farmaceutiskt godtagbara salter av dessa för tillverkning av ett läkemedel för oral administration i form av en tablett eller kapsel för att förhindra cancer.