KR100351213B1 - 펩타이드 부갑상선 호르몬 유사체 및 이를 포함하는 약제학적 조성물 - Google Patents

펩타이드 부갑상선 호르몬 유사체 및 이를 포함하는 약제학적 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 hPTH(1-34) 및 hPTHrP(1-34)의 사이클릭 및 어사이클릭 유사체, 상기 펩타이드 화합물을 함유하는 약제학적 조성물 및 신체내에서 칼슘 조절과 관련된 질환을 치료하는 방법에 관한 것이다.

Description

펩타이드 부갑상선 호르몬 유사체 및 이를 포함하는 약제학적 조성물{Peptide parathyroid hormone analogs and pharmaceutical compositions comprising the same}
사람 부갑상선 호르몬(hPTH)은 칼슘 항상성의 주요 조절제인 84개의 아미노산 단백질이다. 부갑상선 호르몬-관련된 단백질(hPTHrP)은 hPTH에 대한 N-말단 상동체를 갖는 139 내지 171개의 아미노산 단백질이다. hPTH 및 hPTHrP의 N-말단 단편, 특히 아미노산 1번 내지 34번으로 이루어진 것은 어버이 호르몬의 완전한 생물학적 활성을 보유한다.
hPTH(1-34)는 하기 아미노산 서열을 갖는다:
Ser-Val-Ser-Glu-Ile-Gln-Leu-Met-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-Met-Glu-
Arg-Val-Glu-Trp-Leu-Arg-Lys-Lys-Leu-Gln-Asp-Val-His-Asn-Phe(서열 1).
hPTHrP는 하기 아미노산 서열을 갖는다:
Ala-Val-Ser-Glu-His-Gln-Leu-Leu-His-Asp-Lys-Gly-Lys-Ser-Ile-Gln-Asp-Leu-Arg-
Arg-Arg-Phe-Phe-Leu-His-His-Leu-Ile-Ala-Glu-Ile-His-Thr-Ala(서열 2).
hPTH의 생물학적 활성은 2개의 2차 메신저 시스템: G-단백질 커플링된 아데닐릴 사이클라제(AC) 및 G-단백질 커플링되고 커플링되지 않은 단백질 키나제 C(PKC) 활성의 활성화에 반영된다. N-말단 단편 hPTH(1-34)OH 및 hPTH(1-31)NH2는 사람 및 난소척제시킨 래트 각각에서 골 형성과 관련하여 동화작용성인 것으로 입증되어 있다. 이러한 골 성장의 증가는 아데닐릴 사이클라제 활성의 자극과 결부되어 있는 것으로 입증되어 있다. 상기 N-말단 단편의 유사체는 칼슘저혈증; 골다공증; 골감소증; 및 골다공증 및 골감소증과 관련된 장애, 예를 들어, 부갑상선기능항진증, 부갑상선기능감퇴증 및 쿠싱 증후군; 글루코코르티코이드- 및 면역억제제-유도된 골감소증; 및 골절 및 재골절 수복을 포함한 골 세포 칼슘 조절과 관련된 생리학적 상태의 치료에 대해 상당한 치료효능을 갖는다.
또한, hPTH(1-34)의 N-말단으로부터의 6개까지의 아미노산 잔기의 결실은 생성된 유사체의 아데닐릴 사이클라제 자극활성을 현저하게 감소시키는 한편 수용체 결합에는 거의 영향을 미치지 않는 것으로 입증되어 있다. 따라서, N-말단에서부터 6개까지의 아미노산 잔기가 절단된 hPTH(1-34) 유사체는 PTH의 작용을 억제하고, 따라서 과잉 PTH를 특징으로 하는 장애, 예를 들어, 부갑상선기능항진증 및 부갑상선기능항진증-관련된 칼슘과혈발증, 악성 칼슘과혈증, 신부전증 및 고혈압증의 치료에 유용하다.
hPTH(1-27) 내지 (1-34)의 어사이클릭 유사체는 미국 특허 제4,086,196호에 기술되어 있다. hPTH(1-34) 및 hPTHrP(1-34)의 어사이클릭 유사체는 미국 특허 제5,589,452호에 기술되어 있다. [Nle8, Nle18, Tyr34또는 Phe34]hPTH(1-34)는 미국 특허 제4,656,250호에 기술되어 있다. [Nle8, Nle18, Tyr34]hPTH(1-34) 및 이의 N-절단된 유도체는 미국 특허 제4,771,1124호 및 제4,423,037호에 기술되어 있다. PTH(1-34)의 이외의 어사이클릭 유사체는 미국 특허 제5,723,577호 및 제5,434,246호, WO 97/02834, EPA 561 412-A1, EPA 747 817-A2, WO-94/02510, WO9603437 및 WO9511988-A1에 기술되어 있다. hPTH(1-29)NH2내지 hPTH(1-31)NH2및 [Leu27]hPTH(1-28)NH2내지 [Leu27]hPTH(1-33)NH2는 미국 특허 제5,556,940호에 기술되어 있다. PTH의 N-말단-절단된 유사체를 포함한 PTH 수용체의 어사이클릭 길항제는 미국 특허 제5,446,130호, 제5,229,489호, 제4,771,124호 및 제4,423,037호에 기술되어 있다.
hPTH 및 hPTHrP의 사이클릭 및 비사이클릭 유사체는 기술되어 있다. 사이클로(Lys26-Asp30)[Leu27]hPTH(1-34)NH2및 사이클로(Lys27-Asp30)hPTH(1-34)NH2는 미국 특허 제5,556,940호에 기술되어 있다. 사이클로(Lys26-Asp30)[Leu27]hPTH(1-31)NH2, 사이클로(Glu22-Lys26)[Leu27]hPTH(1-31)NH2및 사이클로(Lys27-Asp30)hPTH(1-31)NH2는문헌[참조: Barbier, et al., J. Med. Chem,1997, 40, 1373]에 기술되어 있다. hPTH(1-34) 또는 hPTHrP(1-34)의 모노사이클릭 및 비사이클릭 유도체는 특허 문서 WO 96/40193, DE19508672-A1, 및 문헌[참조: A. Bisello, et al., in Biochemistry1997, 36, 3293]에 기술되어 있다. PTH 수용체의 강력한 길항제인 사이클로(Lys13-Asp17)hPTHrP(7-34)NH2는 문헌[참조: M. Chorev, et al., Biochemistry1991, 30, 5698]에 기술되어 있다. 또한, 칸메라(Kanmera) 등은 일련의 hPTHrP의 아미드-함유 유사체를 문헌[참조: Peptide Chemistry 1993: Okada, Y., ed.: Protein Research Foundation, Osaka,1994, 321-324]에 기술하고 있다.
발명의 요약
본 발명은 화학식 I의 사이클릭 펩타이드 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 전구약물에 관한 것이다.
X-A10-A11-A12-A13-A14-A15-A16-A17-A18-A19-A20-A21-A22-A23-A24-A25-A26-A27-Y
상기식에서,X는,
(a) R1a-A0-A1-A2-A3-A4-A5-A6-A7-A8-A9-,
(b) R1a-A2-A3-A4-A5-A6-A7-A8-A9-,
(c) R1b-A3-A4-A5-A6-A7-A8-A9-,
(d) R1a-A4-A5-A6-A7-A8-A9-,
(e) R1a-A5-A6-A7-A8-A9-,
(f) R1a-A6-A7-A8-A9-,
(g) R1a-A7-A8-A9-,
(h) R1a-A8-A9-,
(i) R1a-A9- 및
(j) R1a-로 이루어진 그룹으로부터 선택되고;
Y는,
(a) -R3,
(b) -A28-R3,
(c) -A28-A29-R3,
(d) -A28-A29-A30-R3,
(e) -A28-A29-A30-A31-R3,
(f) -A28-A29-A30-A31-A32-R3,
(g) -A28-A29-A30-A31-A32-A33-R3및
(h) -A28-A29-A30-A31-A32-A33-A34-R3로 이루어진 그룹으로 선택되고;
R1a는 H, 알킬, 아르알킬 또는 -COR2이고;
R1b는 R1a또는 식또는의 그룹이고;
R2는 알킬, 알케닐, 알키닐, 아릴 또는 아르알킬이고;
R3은 식 A35-OR4또는 A35-NR4R5의 그룹이고;
R4및 R5는 독립적으로 H 또는 저급 알킬이고;
R6또는 R9는 독립적으로 H 또는 알킬이고;
R7은 알킬이고;
R8은 H, 알킬 또는 COR2이고;
R10은 H 또는 할로겐이고;
R11은 알킬 또는 아르알킬이고;
m은 1, 2 또는 3이고;
n은 3 또는 4이고;
A0은 존재하지 않거나 1 내지 6개의 아미노산 잔기의 펩타이드이고;
A1은 Ser, Ala, Gly 또는 D-Pro, 또는 이의 등가 아미노산이고;
A2는 Ala, Val 또는 Gly, 또는 이의 등가 아미노산이고;
A3은 Ala, Ser, Gly 또는 D-Pro, 또는 이의 등가 아미노산이고;
A4는 Glu, Ala 또는 Gly, 또는 이의 등가 아미노산이고;
A5는 Ile, His, Ala 또는 Gly, 또는 이의 등가 아미노산이고;
A6은 Ala, Gln, Gly 또는 D-Pro, 또는 이의 등가 아미노산이고;
A7은 Ala, Leu 또는 Gly, 또는 이의 등가 아미노산이고;
A8은 Leu, Nle, Gly 또는 D-Pro, 또는 이의 등가 아미노산이고;
A9는 His, Ala, D-Pro 또는 Gly, 또는 이의 등가 아미노산이고;
A10은 Ala, Asn, Asp, Cys, 호모-Cys, Glu, Gly, Lys, Orn, Ser, Thr, D-Pro, -NHCH((CH2)mNH2)CO- 또는 -NHCH[(CH2)nCO2H]CO-이고;
A11은 Ala, Gly, Leu 또는 Lys, 또는 이의 등가 아미노산이고;
A12는 Ala 또는 Gly, 또는 이의 등가 아미노산이고;
A13은 Ala, Asn, Asp, Cys, 호모-Cys, Glu, Gly, Lys, Orn, Ser, Thr, -NHCH((CH2)mNH2)CO- 또는 -NHCH[(CH2)nCO2H]CO-이고;
A14는 Ala, Asn, Asp, Cys, 호모-Cys, Glu, Gly, His, Lys, Orn, Ser, Thr, D-Pro, -NHCH((CH2)mNH2)CO- 또는 -NHCH[(CH2)nCO2H]CO-이고;
A15는 Ala, Gly, Ile, D-Pro 또는 Leu, 또는 이의 등가 아미노산이고;
A16은 Asn, Ala, Gly, D-Pro 또는 Gln, 또는 이의 등가 아미노산이고;
A17은 Ala, Asn, Asp, Cys, 호모-Cys, Glu, Gly, Lys, Orn, Ser, Thr, D-Pro, -NHCH((CH2)mNH2)CO- 또는 -NHCH[(CH2)nCO2H]CO-이고;
A18은 Asp, Cys, 호모-Cys, Glu, His, Leu, Lys, Orn, Nle, Ser, Thr, -NHCH((CH2)mNH2)CO- 또는 -NHCH[(CH2)nCO2H]CO-이고;
A19는 Arg 또는 Glu, 또는 이의 등가 아미노산이고;
A20은 Arg 또는 이의 등가 아미노산이고;
A21은 Arg, Asp, Cys, 호모-Cys, Glu, Lys, Orn, Ser, Thr, Val, -NHCH((CH2)mNH2)CO- 또는 -NHCH[(CH2)nCO2H]CO-이고;
A22는 Asp, Cys, 호모-Cys, Glu, His, Lys, Orn, Phe, Ser, Thr, -NHCH((CH2)mNH2)CO- 또는 -NHCH[(CH2)nCO2H]CO-이고;
A23은 Leu, Phe 또는 Trp, 또는 이의 등가 아미노산이고;
A24는 Leu 또는 이의 등가 아미노산이고;
A25는 Arg, Asp, Cys, 호모-Cys, Glu, His, Lys, Orn, D-Pro, Ser, Thr, -NHCH((CH2)mNH2)CO- 또는 -NHCH[(CH2)nCO2H]CO-이고;
A26은 Asp, Cys, 호모-Cys, Glu, His, Lys, Orn, Ser, Thr, -NHCH((CH2)mNH2)CO- 또는 -NHCH[(CH2)nCO2H]CO-이고;
A27은 Leu 또는 Lys, 또는 이의 등가 아미노산이고;
A28은 Ile 또는 Leu, 또는 이의 등가 아미노산이고;
A29는 Ala, Asp, Cys, 호모-Cys, Glu, Gln, Lys, Orn, Ser, Thr, -NHCH((CH2)mNH2)CO- 또는 -NHCH[(CH2)nCO2H]CO-이고;
A30은 Asp, Cys, 호모-Cys, Glu, Gly, Lys, Orn, Ser, Thr, -NHCH((CH2)mNH2)CO- 또는 -NHCH[(CH2)nCO2H]CO-이고;
A31은 Ile, Leu 또는 Val, 또는 이의 등가 아미노산이고;
A32는 His 또는 이의 등가 아미노산이고;
A33은 Asn 또는 Thr, 또는 이의 등가 아미노산이고;
A34는 Ala 또는 Phe, 또는 이의 등가 아미노산이고;
A35는 존재하지 않거나 1 내지 4개의 아미노산의 펩타이드이고;
하나 이상의 다음 아미노산 잔기 쌍, A10과 A14, A13과 A17, A14와 A18, A17과 A21, A18과 A22, A21과 A25, A25와 A29및 A26과 A30의 측쇄는 아미드, 에스테르, 디설파이드 또는 란티오닌 결합을 통해 결합하여 가교를 형성시키고, 각각의 다음 아미노산잔기, A10, A13, A14, A17, A18, A21, A22, A25, A26, A29및 A30의 측쇄는 많아야 하나의 가교의 형성에 기여하는데; 단, 다음 아미노산 잔기 쌍, A13과 A17또는 A26과 A30의 측쇄가 아미드, 디설파이드 또는 란티오닌 결합을 통해 결합하여 가교를 형성시킬 경우, 하나 이상의 다음 아미노산 잔기 쌍, A10과 A14, A14와 A18, A17과 A21, A18과 A22, A21과 A25및 A25와 A29의 측쇄 또한 아미드, 에스테르, 디설파이드 또는 란티오닌 결합을 통해 결합한다.
또 다른 국면에서, 본 발명은 화학식 II의 펩타이드 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 전구약물에 관한 것이다.
X-A10-A11-A12-A13-A14-A15-A16-A17-A18-A19-A20-A21-A22-A23-A24-A25-A26-A27-Y
상기식에서,X는,
(a) R1a-A0-A1-A2-A3-A4-A5-A6-A7-A8-A9-,
(b) R1a-A2-A3-A4-A5-A6-A7-A8-A9-,
(c) R1b-A3-A4-A5-A6-A7-A8-A9-,
(d) R1a-A4-A5-A6-A7-A8-A9-,
(e) R1a-A5-A6-A7-A8-A9-,
(f) R1a-A6-A7-A8-A9-,
(g) R1a-A7-A8-A9-,
(h) R1a-A8-A9-,
(i) R1a-A9- 및
(j) R1a-로 이루어진 그룹으로부터 선택되고;
Y는,
(a) -R3,
(b) -A28-R3,
(c) -A28-A29-R3,
(d) -A28-A29-A30-R3,
(e) -A28-A29-A30-A31-R3,
(f) -A28-A29-A30-A31-A32-R3,
(g) -A28-A29-A30-A31-A32-A33-R3및
(h) -A28-A29-A30-A31-A32-A33-A34-R3로 이루어진 그룹으로 선택되고;
R1a는 H, 알킬, 아르알킬 또는 -COR2이고;
R1b는 R1a또는 식또는의 그룹이고;
R2는 알킬, 알케닐, 알키닐, 아릴 또는 아르알킬이고;
R3은 식 A35-OR4또는 A35-NR4R5의 그룹이고;
R4및 R5는 독립적으로 H 또는 저급 알킬이고;
R6또는 R9는 독립적으로 H 또는 알킬이고;
R7은 알킬이고;
R8은 H, 알킬 또는 COR2이고;
R10은 H 또는 할로겐이고;
R11은 알킬 또는 아르알킬이고;
A0은 존재하지 않거나 1 내지 6개의 아미노산 잔기의 펩타이드이고;
A1은 Ser, Ala, Gly 또는 D-Pro, 또는 이의 등가 아미노산이고;
A2는 Ala, Val 또는 Gly, 또는 이의 등가 아미노산이고;
A3은 Ala, Ser, Gly 또는 D-Pro, 또는 이의 등가 아미노산이고;
A4는 Glu, Ala 또는 Gly, 또는 이의 등가 아미노산이고;
A5는 Ile, His, Ala 또는 Gly, 또는 이의 등가 아미노산이고;
A6은 Ala, Gln, Gly 또는 D-Pro, 또는 이의 등가 아미노산이고;
A7은 Ala, Leu 또는 Gly, 또는 이의 등가 아미노산이고;
A8은 Leu, Nle, Gly 또는 D-Pro, 또는 이의 등가 아미노산이고;
A9는 His, Ala, Gly 또는 D-Pro, 또는 이의 등가 아미노산이고;
A10은 Ala, Asn, Gly, Lys, Asp, 또는 D-Pro, 또는 이의 등가 아미노산이고;
A11은 Ala, Gly, Leu 또는 Lys, 또는 이의 등가 아미노산이고;
A12는 Ala 또는 Gly, 또는 이의 등가 아미노산이고;
A13은 Ala, Gly 또는 Lys, 또는 이의 등가 아미노산이고;
A14는 Ala, Gly, His, Ser, Asp, Lys 또는 D-Pro, 또는 이의 등가 아미노산이고;
A15는 Ala, Gly, Ile, D-Pro 또는 Leu, 또는 이의 등가 아미노산이고;
A16은 Asn, Ala, Gly, D-Pro 또는 Gln, 또는 이의 등가 아미노산이고;
A17은 Ala, Asp, Gly, Ser, Lys 또는 D-Pro, 또는 이의 등가 아미노산이고;
A18은 Lys 또는 이의 등가 아미노산이고;
A19는 Arg 또는 Glu, 또는 이의 등가 아미노산이고;
A20은 Arg 또는 이의 등가 아미노산이고;
A21은 Arg, Lys, Asp 또는 Val, 또는 이의 등가 아미노산이고;
A22는 Asp, Lys, Orn 또는 Glu, 또는 이의 등가 아미노산이고;
A23은 Leu, Phe 또는 Trp, 또는 이의 등가 아미노산이고;
A24는 Leu 또는 이의 등가 아미노산이고;
A25는 Arg, His, Asp, Lys 또는 Glu, 또는 이의 등가 아미노산이고;
A26은 Lys 또는 His, 또는 이의 등가 아미노산이고;
A27은 Leu 또는 Lys, 또는 이의 등가 아미노산이고;
A28은 Ile 또는 Leu, 또는 이의 등가 아미노산이고;
A29는 Ala, Asp, Glu 또는 Gln, 또는 이의 등가 아미노산이고;
A30은 Asp, Lys 또는 Glu, 또는 이의 등가 아미노산이고;
A31은 Ile, Leu 또는 Val, 또는 이의 등가 아미노산이고;
A32는 His 또는 이의 등가 아미노산이고;
A33은 Asn 또는 Thr, 또는 이의 등가 아미노산이고;
A34는 Ala 또는 Phe, 또는 이의 등가 아미노산이고;
A35는 존재하지 않거나 1 내지 4개의 아미노산의 펩타이드이다.
본 발명의 펩타이드 화합물은 유용한 특성, 보다 특히 약제학적 특성을 갖는다. 이들은 특히 아데닐릴 사이클라제 활성의 부수된 자극의 존재 또는 부재하에부갑상선 호르몬 수용체에 결합하는 화합물에 의해 조절가능한 질환 상태를 치료하는데 유용하다. 따라서, 본 발명은 또한 펩타이드 화합물 및 상기 펩타이드 화합물을 함유하는 약제학적 조성물의 약제학적 용도에 관한 것이다.
본 발명은 펩타이드 화합물 및 이의 제조 방법, 상기 화합물을 함유하는 약제학적 조성물 및 부갑상선 호르몬 수용체 상에서 효능제 또는 길항제에 의해 조절가능한 생리학적 상태의 치료에서의 이의 용도에 관한 것이다. 보다 특히, 본 발명은 펩타이드 부갑상선 호르몬 유사체 및 펩타이드 부갑상선 호르몬 관련된 단백질 유사체에 관한 것이다.
상기한 바와 같이 및 명세서 전체를 통해, 하기 용어는 달리 지시하지 않는 한 하기 의미를 갖는 것으로 이해하여야 한다.
용어의 정의
'환자'는 사람 및 이외의 포유동물 둘다를 포함한다.
'알킬'은 쇄내에 약 1 내지 약 20개의 탄소원자를 갖는 직쇄 또는 측쇄일 수 있는 지방족 탄화수소 그룹을 의미한다. 측쇄란 하나 이상의 저급 알킬 그룹이 선형 알킬 쇄에 결합되어 있음을 의미한다. '저급 알킬'은 직쇄 또는 측쇄일 수 있는 쇄내의 약 1 내지 4개의 탄소원자를 의미한다. 알킬 그룹의 예로는 메틸, 에틸, n- 및 이소-프로필, n-, 2급-, 이소- 및 3급-부틸 등이 있다.
'알케닐'은 탄소-탄소 이중 결합을 함유하고 쇄내에 약 2 내지 약 20개의 탄소원자를 갖는 직쇄 또는 측쇄일 수 있는 지방족 탄화수소 그룹을 의미한다. '저급 알케닐'은 직쇄 또는 측쇄일 수 있는 쇄내의 약 2 내지 4개의 탄소원자를 의미한다. 예시적인 알케닐 그룹은 에테닐, 프로페닐, n-부테닐, i-부테닐, 3-메틸부트-2-에닐, n-펜테닐, 헵테닐, 옥테닐, 사이클로헥실부테닐 및 데세닐을 포함한다.
'알키닐'은 탄소-탄소 삼중 결합을 함유하고 쇄내에 약 2 내지 약 20개의 탄소원자를 갖는 직쇄 또는 측쇄일 수 있는 지방족 탄화수소 그룹을 의미한다. '저급 알키닐'은 직쇄 또는 측쇄일 수 있는 쇄내의 약 2 내지 4개의 탄소원자를 의미한다. 예시적인 알키닐 그룹은 에티닐, 프로피닐, n-부티닐, 3-메틸부트-2-이닐, n-펜티닐, 헵티닐, 옥티닐 및 데시닐을 포함한다.
'알킬렌'은 2개의 수소원자의 제거에 의해 직쇄 또는 측쇄 포화 탄화수소로부터 유도된 2가 그룹, 예를 들어, 메틸렌, 1,2-에틸렌, 1,1-에틸렌, 1,3-프로필렌, 2,2-디메틸프로필렌 등을 의미한다.
'아르알킬'은 알킬렌을 통해 모 분자 잔기에 결합되어 있는 아릴 그룹을 의미한다. 바람직한 아르알킬은 저급 알킬 잔기를 함유한다. 대표적인 아르알킬 그룹은 벤질, 2-펜에틸, 나프탈렌메틸 등을 포함한다. 바람직한 아르알킬 그룹은 벤질이다.
'아릴'은 탄소수 6 내지 약 14, 바람직하게는 탄소수 약 6 내지 약 10의 방향족 모노사이클릭 또는 멀티사이클릭 환 시스템을 의미한다. 아릴은 알킬, 하이드록시, 할로겐 및 할로알킬로부터 선택된 하나 이상의 치환체로 임의로 치환될 수 있다. 대표적인 아릴 그룹은 페닐 및 나프틸을 포함한다.
'아미노산'은 본원에 정의된 바와 같은 천연 및 비천연 아미노산으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산을 의미한다. 아미노산은 측쇄내의 치환체에 따라 중성, 양성 또는 음성일 수 있다. '중성 아미노산'은 비하전된 측쇄 치환체를 함유하는 아미노산을 의미한다. 예시적인 중성 아미노산은 알라닌, 발린, 로이신,이소로이신, 프롤린, 페닐알라닌, 트립토판, 메티오닌, 글리신, 세린, 트레오닌 및 시스테인을 의미한다. '양성 아미노산'은 측쇄 치환체가 생리학적 pH에서 양성으로 하전된 아미노산을 의미한다. 예시적인 양성 아미노산은 라이신, 아르기닌 및 히스티딘을 의미한다. '음성 아미노산'은 측쇄 치환체가 생리학적 pH에서 순 음성 전하를 갖는 아미노산을 의미한다. 예시적인 음성 아미노산은 아스파르트산 및 글루탐산을 포함한다. 바람직한 아미노산은 α-아미노산이다. 가장 바람직한 아미노산은 α-탄소에서 L 입체화학을 갖는 α-아미노산이다.
'천연 아미노산'은 알라닌, 발린, 로이신, 이소로이신, 프롤린, 페닐알라닌, 트립토판, 메티오닌, 글리신, 세린, 트레오닌, 시스테인, 티로신, 아스파라긴, 글루타민, 라이신, 아르기닌, 히스티딘, 아스파르트산 및 글루탐산으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 α-아미노산을 의미한다.
'비천연 아미노산'은 핵산 코돈이 아닌 아미노산을 의미한다. 예시적인 비천연 아미노산은, 예를 들어, 천연 α-아미노산의 D-이성체, 예를 들어, 상기한 바와 같은 D-프롤린(D-P, D-Pro); Aib(아미노부티르산), bAib(3-아미노이소부티르산), Nva(노르발린), β-Ala, Aad(2-아미노아디프산), bAad(3-아미노아디프산), Abu(2-아미노부티르산), Gaba(γ-아미노부티르산), Acp(6-아미노카프로산), Dbu(2,4-디아미노부티르산), γ-아미노피멜산, TMSA(트리메틸실릴-Ala), aIle(알로-이소로이신), Nle(노르로이신), 3급-Leu, Cit(시트룰린), Orn(오르니틴, O), Dpm(2,2'-디아미노피멜산), Dpr(2,3-디아미노프로피온산), α- 또는 β-Nal, Cha(사이클로헥실-Ala), 하이드록시프롤린, Sar(사르코신) 등; 사이클릭 아미노산; Nα-알킬화 아미노산, 예를 들어, MeGly(Nα-메틸글리신), EtGly(Nα-에틸글리신) 및 EtAsn(Nα-에틸아스파라긴); 및 α-탄소가 2개의 측쇄 치환체를 보유하는 아미노산을 포함한다.
'펩타이드' 및 '폴리펩타이드'는 단량체가 아미드 결합을 통해 함께 결합되어 있는 아미노산 잔기인 중합체를 의미한다. 본 발명의 바람직한 펩타이드 화합물은 α-아미노산을 포함하는 것이다. '펩타이드 화합물'은 본원에 정의된 바와 같은 펩타이드를 포함하는 화합물을 의미한다.
'아미노산 잔기'는 본 발명의 펩타이드 화합물에 혼입되어 있는 각각의 아미노산 단위를 의미한다.
천연 및 비천연 아미노산 및 본원에 사용된 이의 잔기의 명칭은 문헌[참조: 'Nomenclature of α-Amino Acids(Recommendations, 1974)' Biochemistry, 14(2), (1975)]에 기재되어 있는 바와 같은 유기 화학의 명명법 IUPAC 위원회 및 생화학 명명법 IUPAC-IUB 위원회에 의해 제안된 명명 약정에 따른다. 본 명세서 및 첨부된 청구의 범위에서 사용된 아미노산 및 이의 잔기의 명칭 및 약어가 기록된 것과 상이한 범위로, 명칭 및 약어를 변화시킴은 명백할 것이다.
"등가 아미노산"은 감지할 수 있는 기능 정도의 손실없이 본 발명에 따른 펩타이드 화합물내에서 다른 아미노산으로 치환될 수 있는 아미노산을 의미한다. 이러한 변화를 이루는데 있어서, 유사한 아미노산의 치환은 측쇄 치환체의 상대적인 유사성을 기준으로, 예를 들어, 본원에 기술된 바와 같은 크기, 전하, 소수성, 수친화성 및 친수성과 관련하여 이루어진다. 개별적인 아미노산의 하기 리스트를 사용할 경우 어구 "또는 이의 등가 아미노산"은 리스트에 포함된 개별적인 아미노산 각각의 등가물을 의미한다.
본원에 참고 문헌으로 인용된 미국 특허 제4,554,101호에 상술된 바와 같이, 하기 친수성 값을 아미노산 잔기에 부여하였다: Arg(+3.0); Lys(+3.0); Asp(+3.0); Glu(+3.0); Ser(+0.3); Asn(+0.2); Gln(+0.2); Gly(0); Pro(-0.5); Thr(-0.4); Ala(-0.5); His(-0.5); Cys(-1.0); Met(-1.3); Val(-1.5); Leu(-1.8); Ile(-1.8); Tyr(-2.3); Phe(-2.5); 및 Trp(-3.4). 아미노산 잔기를 유사한 친수성 값(예를 들어, ±2.0의 값 이내)을 갖는 다른 것으로 치환시킬 수 있으며 여전히 생물학적으로 등가 폴리펩타이드를 수득할 수 있음은 물론이다.
유사한 방식으로, 수친화성 지표에서의 유사성을 기준으로 하여 치환시킬 수 있다. 각각의 아미노산 잔기에 이의 소수성 및 전하 특성을 기준으로 한 수치환성 지표를 지정하였다. 이들 수친화성 지표 값은 다음과 같다: Ile(+4.5); Val(+4.2); Leu(+3.8); Phe(+2.8); Cys(+2.5); Met(+1.9); Ala(+1.8); Gly(-0.4); Thr(-0.7); Ser(-0.8); Trp(-0.9); Tyr(-1.3); Pro(-1.6); His(-3.2); Glu(-3.5); Gln(-3.5); Asp(-3.5); Asn(-3.5); Lys(-3.9); 및 Arg(-4.5). 수친화성 지표를 기준으로 하여 치환시킬 경우, ±2.0 이내의 값이 바람직하다.
본 발명의 펩타이드 화합물에서, 2개의 아미노산 잔기를 결합시키는 에스테르, 아미드, 디설파이드 또는 란티오닌 결합은 측쇄 작용기내에서 형성된다. 이와 같이, 아미드는 산성 아미노산 잔기의 측쇄 카복실 그룹과 염기성 아미노산 잔기의측쇄 아미노 그룹 사이에 형성된다. 바람직한 산성 아미노산 잔기는 Asp, Glu, -NHCH[(CH2)3CO2H]CO- 및 -NHCH[(CH2)4CO2H]CO-를 포함하며, Asp가 가장 바람직하다. 바람직한 염기성 아미노산 잔기는 His, Lys, Orn, -NHCH(CH2NH2)CO- 및 -NHCH[(CH2)2NH2]CO-를 포함하며, Lys가 가장 바람직하다.
에스테르 결합은 상기한 바와 같은 산성 아미노산 잔기의 측쇄 카복실 그룹과 Ser, Thr, Tyr 등, 특히 바람직하게는 Ser 및 Thr과 같은 아미노산 잔기의 측쇄 하이드록시 그룹 사이에 형성된다.
디설파이드는 측쇄 설프하이드릴 그룹을 함유하는 아미노산 잔기로부터 형성된다. Cys가 디설파이드 결합의 형성에 특히 바람직하다. 란티오닌 가교는 상응하는 디설파이드의 탈황화에 의해 형성된다.
상기한 바와 같이 형성된 아미드, 에스테르, 디설파이드 또는 란티오닌 결합으로부터 생성된 가교내의 원자의 수는 측쇄의 길이 및 결합의 종류(즉, 아미드, 에스테르, 디설파이드 또는 란티오닌)에 따라 달라질 수 있다. 가교는 바람직하게는 4 내지 12개, 보다 바람직하게는 6 내지 10개의 원자를 포함한다. 가교에 함유되어 있는 보다 더 바람직한 원자수는 7개이고, 이 가교는 바람직하게는 Lys와 Asp 잔기의 측쇄 작용기 사이에 아미드 결합을 포함한다.
본 발명의 대표적인 펩타이드 화합물은, 예를 들어, '사이클로' 다음의 둥근 괄호내의 결합된 아미노산 잔기 및 각 괄호내에 있는 천연 서열로부터의 치환된 아미노산을 함유하는 사이클로(K18-D22)[A1,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2로서 나타낸다. hPTH는 사람 부갑상선 호르몬을 나타내고 hPTHrP는 사람 부갑상선 호르몬 단백질을 나타낸다. 두번째 둥근 괄호내의 숫자는 N-말단에서 시작하는, 펩타이드 화합물내의 아미노산 잔기의 수를 의미한다(즉, hPTH의 처음 31개 아미노산).
본 발명의 펩타이드 화합물을 염기성 잔기로 치환시킬 경우, 산 부가염이 형성되고 이는 단지 사용하기에 보다 편리한 형태이고; 실제로 염 형태의 사용은 본래 유리 염기 형태의 사용에 이른다. 산 부가염을 제조하는데 사용할 수 있는 산은 바람직하게는 유리 염기와 합할 경우에 약제학적으로 허용되는 염, 즉, 음이온이 염의 약제학적 용량에서 환자에게 무독성인 염을 생성시키는 것을 포함하므로, 유리 염기의 고유의 유리한 효과는 음이온으로 인한 부작용에 의해 손상되지 않는다. 상기 염기성 화합물의 약제학적으로 허용되는 염이 바람직하더라도, 예를 들어, 염을 단지 정제 및 확인의 목적으로만 형성시킬 경우, 또는 염을 이온 교환 과정에 의해 제조하는데 있어서 중간체로서 사용할 경우, 비록 특정 염 그 자체가 중간체 생성물로서만 바람직하더라도 모든 산 부가염이 유리 염기 형태의 공급원으로서 유용하다. 본 발명의 범주내에서 약제학적으로 허용되는 염은 하기 산으로부터 유도되는 것들이다: 무기산, 예를 들어, 염산, 황산, 인산 및 설팜산; 및 유기산, 예를 들어, 아세트산, 시트르산, 락트산, 타르타르산, 말론산, 메탄설폰산, 에탄설폰산, 벤젠설폰산, p-톨루엔설폰산, 사이클로헥실설팜산, 퀸산 등. 상응하는 산 부가염은 하이드로할라이드, 예를 들어, 하이드로클로라이드 및 하이드로브로마이드, 설페이트, 포스페이트, 니트레이트, 설파메이트, 아세테이트, 시트레이트, 락테이트, 타르타레이트, 말로네이트, 옥살레이트, 살리실레이트, 프로피오네이트, 석시네이트, 푸마레이트, 말레에에트, 메릴렌-비스-β-하이드록시나프토에이트, 겐티세이트, 메실레이트, 이세티오네이트 및 디-p-톨루오일타르트레이트, 메탄설포네이트, 에탄설포네이트, 벤젠설포네이트, p-톨루엔설포네이트, 사이클로헥실설파메이트 및 퀴네이트를 각각 포함한다.
본 발명의 추가의 국면에 따라, 본 발명의 펩타이드 화합물의 산 부가염은 유기 염기와 적합한 산과의 반응에 의해, 공지된 방법의 응용 또는 적용에 의해 제조한다. 예를 들어, 본 발명의 펩타이드 화합물의 산 부가염은 유리 염기를 수성 또는 수성-알콜 용액 또는 적합한 산을 함유하는 이외의 적합한 용매에 용해시킨 다음 용액의 증발에 의해 염을 분리시킴으로써, 또는 유리 염기와 유기 용매 중의 산을 반응시킴으로써 제조하는데, 여기서, 염은 직접 분리하거나 용액의 농축에 의해 수득할 수 있다.
바람직한 산 부가염은 트리플루오로아세테이트, 아세테이트 및 하이드로클로라이드이다. 아세테이트 및 테트라하이드로클로라이드 염이 특히 바람직하다.
본 발명의 펩타이드 화합물은 공지된 방법의 응용 또는 적용에 의해 염으로부터 재생시킬 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 모 펩타이드 화합물을 알칼리, 예를 들어, 수성 중탄산나트륨 용액 또는 수성 암모니아 용액을 사용한 처리에 의해 이들의 산 부가염으로부터 재생시킬 수 있다.
본 발명의 펩타이드 화합물을 산성 잔기로 치환시킬 경우, 염기 부가염이 형성될 수 있고 이는 단지 사용하기에 보다 편리한 형태이고; 실제로 염 형태의 사용은 본래 유리 산 형태의 사용에 이른다. 염기 부가염을 제조하는데 사용할 수 있는 염기는 바람직하게는 유리 산과 합할 경우에 약제학적으로 허용되는 염, 즉, 양이온이 염의 약제학적 용량에서 동물 유기체에게 무독성인 염을 생성시키는 것을 포함하므로, 유리 산의 고유의 유리한 효과는 양이온으로 인한 부작용에 의해 손상되지 않는다. 본 발명의 범주내에서, 예를 들어, 알칼리 및 알칼리 토금속 염을 포함한 약제학적으로 허용되는 염은 하기 염기로부터 유도되는 것들이다: 수소화나트륨, 수산화나트륨, 수산화칼륨, 수산화칼슘, 수산화알루미늄, 수산화리튬, 수산화마그네슘, 수산화아연, 암모니아, 트리메틸암모니아, 트리에틸암모니아, 에틸렌디아민, n-메틸-글루카민, 라이신, 아르기닌, 오르니틴, 콜린, N,N'-디벤질에틸렌디아민, 클로로프로카인, 디에탄올아민, 프로카인, n-벤질펜에틸아민, 디에틸아민, 피페라진, 트리스(하이드록시메틸)-아미노메탄, 수산화테트라메틸암모늄 등.
본 발명의 펩타이드 화합물의 금속 염은 수성 또는 유기 용매 중의 선택된 금속의 수소화물, 수산화물, 탄산염 또는 유사한 반응성 화합물을 펩타이드 화합물의 유리 산 형태와 접촉시킴으로써 수득할 수 있다. 사용된 수성 용매는 물일 수 있거나 이는 물과 유기 용매, 바람직하게는 알콜, 예를 들어, 메탄올 또는 에탄올, 케톤, 예를 들어, 아세톤, 지방족 에테르, 예를 들어, 하이드로푸란, 또는 에스테르, 예를 들어, 에틸 아세테이트와의 혼합물일 수 있다. 이러한 반응은 통상적으로 주위 온도에서 수행할 수 있으나, 이들은, 경우에 따라, 가열하에 수행할 수 있다.
본 발명의 펩타이드 화합물의 아민 염은 수성 또는 유기 용매 중의 아민을 펩타이드 화합물의 유리 산 형태와 접촉시킴으로써 수득할 수 있다. 적합한 수성 용매는 물 및 물과 알콜, 예를 들어, 메탄올 또는 에탄올, 에테르, 예를 들어, 테트라하이드로푸란, 니트릴, 예를 들어, 아세토니트릴, 또는 케톤, 예를 들어, 아세톤과의 혼합물을 포함한다. 아미노산 염은 유사하게 제조할 수 있다.
본 발명의 펩타이드 화합물의 염기 부가염은 공지된 방법의 응용 또는 적용에 의해 염으로부터 재생시킬 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 모 펩타이드 화합물은 산, 예를 들어, 염산을 사용한 처리에 의해 이들의 염기 부가염으로부터 재생시킬 수 있다.
자체로 또한 활성 화합물로서도 유용한, 본 발명의 펩타이드 화합물의 염은, 예를 들어, 당해 분야의 숙련가에게 익히 공지된 기술에 의해 염과 모 펩타이드 화합물, 부생성물 및/또는 출발 물질의 용해도 차이를 이용하여 펩타이드 화합물을 정제하는데 유용하다.
'약제학적으로 허용되는 에스테르'는 생체내에서 가수분해될 수 있는 에스테르를 의미하고 인체에서 용이하게 분해되어 모 펩타이드 화합물 또는 이의 염을 남기는 것들을 포함한다. 적합한 에스테르 그룹은, 예를 들어, 약제학적으로 허용되는 지방족 카복실산, 특히 알칸산, 알켄산, 사이클로알칸산 및 알칸디온산으로부터 유도된 것을 포함하고, 여기서, 각각의 알킬 또는 알케닐 잔기는 유리하게는 6개 이하의 탄소원자를 갖는다. 특정 에스테르의 예는 포르메이트, 아세테이트, 프로피오네이트, 부티레이트, 아크릴레이트 및 에틸석시네이트를 포함한다.
'전구약물'은, 예를 들어, 혈액내에서의 가수분해에 의해 생체내에서 신속하게 변형되어 모 펩타이드 화합물을 생성시키는 화합물을 의미한다. '약제학적으로 허용되는 전구약물'은 가능한 경우 본 발명의 펩타이드 화합물의 약제학적으로 허용도는 에스테르, 및 양쪽성이온 형태를 포함한, 안전한 의학적 판단의 범주내에서 부당한 독성, 자극, 알레르기성 반응 등의 부재하에 환자에서 약제학적 사용에 적합하고 의도된 용도에 유효한 화합물을 포함한다. 본 발명에 따른 약제학적으로 허용되는 전구약물은 본원에 참조로 인용되어 있는 문헌[참고: T. Higuchi 및 V. Stella,Pro-drugs as Novel Delivery Systems, Vol. 14 of the A.C.S. Symposium Series, 및 Edward B. Roche, ed.,Bioreversible Carriers in Drug Design, American Pharmaceutical Association and Pergamon Press, 1987]에 기술되어 있다.
'용매화물'은 본 발명의 화합물과 하나 이상의 용매 분자와의 물리학적 결합을 의미한다. 이러한 물리학적 결합은 수소 결합을 포함한 이온 및 공유 결합의 정도를 변화시킴을 포함한다. 특정 예에서, 용매화물은, 예를 들어, 하나 이상의 용매 분자를 결정질 고체의 결정 격자내에 혼입시킬 경우, 분리시킬 수 있다. '용매화물'은 2가지 용액-상 및 분리가능한 용매화물을 포함한다. 대표적인 용매화물은 에탄올레이트, 메탄올레이트 등을 포함한다. '수화물'은 용매 분자가 H2O인 용매화물이다.
본 발명의 펩타이드 화합물은 펩타이드 화합물의 주쇄내에 키랄성 중심과 함께 비대칭성 중심을 함유할 수 있다. 이들 비대칭성 중심은 독립적으로 R 또는 S배위일 수 있다. 특정의 화학식 I의 펩타이드 화합물은 기하학적 이성을 나타낼 수 있음은 당해 분야의 숙련가에게 자명하다. 기하학적 이성체는 알케닐 잔기를 갖는 본 발명의 펩타이드 화합물의 시스 및 트랜스 형태를 포함한다. 본 발명은 개별적인 기하학적 이성체 및 입체이성체 및 이의 혼합물을 포함한다.
이러한 이성체는 공지된 방법, 예를 들어, 크로마토그래피 기술 및 재결정화 기술의 응용 또는 적용에 의해 이의 혼합물로부터 분리할 수 있거나, 이들은, 예를 들어, 본원에 기술된 방법의 응용 또는 적용에 의해 이들의 중간체의 적합한 이성체로부터 각각 제조한다.
바람직한 양태
본 발명의 범주내에 포함되는 것으로 간주되는 펩타이드 화합물은 다음을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다:
사이클로(K18-D22)[A1,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 3);
[A1,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 4);
사이클로(K18-D22)[A1,2,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 5);
사이클로(K18-D22)[A1,3,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 6);
사이클로(K18-D22)[A1,4,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 7);
사이클로(K18-D22)[A1,5,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 8);
사이클로(K18-D22)[A1,6,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 9);
사이클로(K18-D22)[A1,7,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 10);
사이클로(K18-D22)[A1,9,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 11);
사이클로(K18-D22)[A1,10,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 12);
사이클로(K18-D22)[A1,11,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 13);
사이클로(K18-D22)[A1,12,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 14);
사이클로(K18-D22)[A1,13,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 15);
사이클로(K18-D22)[A1,14,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 16);
사이클로(K18-D22)[A1,15,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 17);
사이클로(K18-D22)[A1,16,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 18);
사이클로(K18-D22)[A1,17,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 19);
사이클로(K18-D22)[G1,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 20);
사이클로(K18-D22)[A1,G2,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 21);
사이클로(K18-D22)[A1,G3,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 22);
사이클로(K18-D22)[A1,G4,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 23);
사이클로(K18-D22)[A1,G5,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 24);
사이클로(K18-D22)[A1,G6,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 25);
사이클로(K18-D22)[A1,G7,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 26);
사이클로(K18-D22)[A1,G8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 27);
사이클로(K18-D22)[A1,G9,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 28);
사이클로(K18-D22)[A1,G10,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 29);
사이클로(K18-D22)[A1,G11,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 30);
사이클로(K18-D22)[A1,G13,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 31);
사이클로(K18-D22)[A1,G14,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 32);
사이클로(K18-D22)[A1,G15,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 33);
사이클로(K18-D22)[A1,G16,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 34);
사이클로(K18-D22)[A1,G17,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 35);
사이클로(K18-D22)[D-P1,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 36);
사이클로(K18-D22)[A1,D-P3,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 37);
사이클로(K18-D22)[A1,D-P6,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 38);
사이클로(K18-D22)[A1,D-P7,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 39);
사이클로(K18-D22)[A1,D-P9,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 40);
사이클로(K18-D22)[A1,D-P10,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 41);
사이클로(K18-D22)[A1,D-P14,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 42);
사이클로(K18-D22)[A1,D-P15,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 43);
사이클로(K18-D22)[A1,D-P16,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 44);
사이클로(K18-D22)[A1,D-P17,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 45);
사이클로(K18-D22)[A1,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-34)NH2(서열 46);
사이클로(D18-K22)[A1,Nle8,D18,K22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 47);
사이클로(O18-D22)[A1,Nle8,O18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 48);
사이클로(D18-O22)[A1,Nle8,D18,O22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 49);
사이클로(K18-E22)[A1,Nle8,K18,E22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 50);
사이클로(O18-E22)[A1,Nle8,O18,E22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 51);
사이클로(K18-D22)[A1,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-30)NH2(서열 52);
사이클로(K18-D22)[A1,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-29)NH2(서열 53);
사이클로(K18-D22)[A1,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-28)NH2(서열 54);
사이클로(K18-D22)[A1,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-27)NH2(서열 55);
사이클로(K18-D22)[K18,D22,L27]hPTH(10-31)NH2(서열 56);
사이클로(K18-D22)[K18,D22,L27]hPTH(9-31)NH2(서열 57);
사이클로(K18-D22)[Nle8,K18,D22,L27]hPTH(8-31)NH2(서열 58);
사이클로(K18-D22)[Nle8,K18,D22,L27]hPTH(7-31)NH2(서열 59);
사이클로(K18-D22)[Nle8,K18,D22,L27]hPTH(6-31)NH2(서열 60);
사이클로(K18-D22)[Nle8,K18,D22,L27]hPTH(5-31)NH2(서열 61);
사이클로(K18-D22)[Nle8,K18,D22,L27]hPTH(4-31)NH2(서열 62);
사이클로(K18-D22)[Nle8,K18,D22,L27]hPTH(3-31)NH2(서열 63);
사이클로(K18-D22)[Nle8,K18,D22,L27]hPTH(2-31)NH2(서열 64);
사이클로(K18-D22)[Nle8,K18,D22,L27]hPTH(7-34)NH2(서열 65);
사이클로(K10-D14)[A1,Nle8,18,K10,D14,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 66);
사이클로(K14-D18)[A1,Nle8,K14,D18,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 67);
사이클로(K17-D21)[A1,Nle8,18,K17,D21,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 68);
사이클로(K21-D25)[A1,Nle8,18,K21,D25,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 69);
사이클로(K25-D29)[A1,Nle8,18,K25,D29,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 70);
사이클로(K18-D22)[K18,D22]hPTHrP(1-34)NH2(서열 71);
사이클로(K18-D22)[K18,26,30,D22,L23,28,31, E25,29]hPTHrP(1-34)NH2(서열 72);
비사이클로(K13-D17,K18-D22)[A1,Nle8,D17,22,K18,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 73);
비사이클로(K18-D22,K26-D30)[A1,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 74);
비사이클로(K13-D17,K18-D22)[A1,Nle8,D17,22,K18,L27]hPTH(1-34)NH2(서열 75);
사이클로(K18-D22)[K18-D22]hPTHrP(7-34)NH2(서열 77);
비사이클로(K13-D17,K18-D22)[Nle8,K,D17,22,L27]hPTH(7-34)NH2(서열 78);
비사이클로(K18-D22,K26-D30)[Nle8,K18,D22,L27]hPTH(7-34)NH2(서열 79); 및
트리사이클로(K13-D17,K18-D22,K26-D30)[A1,Nle8,K18,D17,22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 80);
또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 전구약물.
바람직한 화학식 2의 사이클릭 펩타이드 화합물은 한 쌍의 아미노산 잔기의 측쇄로부터 형성된 가교가 다른 쌍의 아미노산 잔기의 측쇄들 간에 형성된 가교와 중첩되지 않는 화학식 I을 갖는다.
보다 바람직한 화학식 3의 펩타이드 화합물은 A10이 Ala, Asn, Asp, Gly 또는 Lys이고; A13이 Ala, Gly 또는 Lys이고; A14가 Ala, Asp, Gly, His, Lys 또는 Ser이고; A17이 Ala, Asp, Gly, Lys 또는 Ser이고; A18이 Asp, Leu, Lys, Orn 또는 Nle이고; A21이 Arg, Asp, Lys 또는 Val이고; A22가 Asp, Glu, Lys, Orn 또는 Phe이고; A25가 Arg, Asp, Glu, His 또는 Lys이고; A26이 His 또는 Lys이고; A29가 Ala, Asp, Glu 또는 Gln이고; A30이 Asp, Glu 또는 Lys이고;
하나 이상의 다음 아미노산 잔기 쌍, A10과 A14, A13과 A17, A14와 A18, A17과 A21, A18과 A22, A21과 A25, A25와 A29및 A26과 A30의 측쇄는 아미드 결합을 통해 결합하여 가교를 형성시키고, 각각의 다음 아미노산 잔기, A10, A13, A14, A17, A18, A21, A22, A25, A26, A29및 A30의 측쇄는 많아야 하나의 중첩되지 않는 가교의 형성에 기여하는데; 단,
(a) 다음 아미노산 잔기 쌍, A13과 A17의 측쇄가 아미드 결합을 통해 결합하여 가교를 형성시킬 경우, 하나 이상의 다음 아미노산 잔기 쌍, A18과 A22, A21과 A25및 A25와 A29의 측쇄 또한 아미드 결합을 통해 결합하여 가교를 형성시키고;
(b) 다음 아미노산 잔기 쌍, A26과 A30의 측쇄가 아미드 결합을 통해 결합하여 가교를 형성시킬 경우, 하나 이상의 다음 아미노산 잔기 쌍, A10과 A14, A14와 A18, A17과 A21, A18과 A22및 A21과 A25의 측쇄 또한 아미드 결합을 통해 결합하여 가교를 형성시키고;
(c) 다음 아미노산 잔기 쌍, A13과 A17또는 A26과 A30의 측쇄는 아미드 결합을 통해 결합하여 가교를 형성시킬 경우, 하나 이상의 다음 아미노산 잔기 쌍, A18과 A22및 A21과 A25의 측쇄 또한 아미드 결합을 통해 결합하여 가교를 형성시키는 화학식 2를 갖는다.
또 다른 보다 바람직한 화학식 4의 사이클릭 펩타이드 화합물은 R1a가 H이고 Y가 NH2인 상기 화학식 3을 갖는다.
본 발명의 특정 사이클릭 펩타이드 화합물은 부갑상선 호르몬 수용체에 대해 효능제 활성을 가져, 칼슘저혈증; 골다공증; 골감소증; 및 골다공증 및 골감소증과 관련된 장애, 예를 들어, 부갑상선기능항진증, 부갑상선기능감퇴증 및 쿠싱 증후군; 글루코코르티코이드- 및 면역억제제-유도된 골감소증; 및 골절 및 재골절 수복을 포함한 골 세포 칼슘 조절과 관련된 생리학적 상태의 치료에 유용하다.
바람직한 화학식 5의 사이클릭 펩타이드 효능제 화합물은 X가,
(a) R1a-A1-A2-A3-A4-A5-A6-A7-A8-A9-,
(b) R1a-A2-A3-A4-A5-A6-A7-A8-A9- 또는
(c) R1a-A3-A4-A5-A6-A7-A8-A9-인 상기 화학식 4를 갖는다.
보다 바람직한 화학식 6의 사이클릭 펩타이드 효능제 화합물은 A1이 Ala, Gly 또는 D-Pro이고, R8이 Nle이고 A27이 Leu인 화학식 5를 갖는다.
또 다른 보다 바람직한 화학식 7의 사이클릭 펩타이드 효능제 화합물은,
(i) A10 및 A14의 측쇄가 아미드 결합을 통해 결합하여 가교를 형성시키거나;
(ii) A14및 A18의 측쇄가 아미드 결합을 통해 결합하여 가교를 형성시키거나;
(iii) A17 및 A21의 측쇄가 아미드 결합을 통해 결합하여 가교를 형성시키거나;
(iv) A18 및 A22의 측쇄가 아미드 결합을 통해 결합하여 가교를 형성시키거나;
(v) A21 및 A25의 측쇄가 아미드 결합을 통해 결합하여 가교를 형성시키거나;
(vi) A25 및 A29의 측쇄가 아미드 결합을 통해 결합하여 가교를 형성시키거나화학식 6을 갖는다.
또 다른 보다 바람직한 사이클릭 펩타이드 효능제 화합물은 A10이 Asp 또는 Lys이고; A13이 Lys이고; A14가 Asp 또는 Lys이고; A17이 Asp 또는 Ser이고; A18이 Nle이고; A21이 Arg 또는 Val이고; A22가 Glu 또는 Phe이고; A25가 Arg 또는 His이고; A26이 Lys 또는 His이고; A29가 Ala 또는 Gln이고; A30이 Asp 또는 Glu이고; A10과 A14의 측쇄가 아미드 결합을 통해 결합하여 가교를 형성시키는 상기 식(i)을 갖는다.
또 다른 보다 바람직한 사이클릭 펩타이드 효능제 화합물은 A10이 Asn 또는 Asp이고; A13이 Lys이고; A14가 Asp 또는 Lys이고; A17이 Asp 또는 Ser이고; A18이 Nle이고; A21이 Arg 또는 Val이고; A22가 Glu 또는 Phe이고; A25가 Arg 또는 His이고; A26이 His 또는 Lys이고; A29가 Ala 또는 Gln이고; A30이 Asp 또는 Glu이고; A14와 A18의 측쇄가 아미드 결합을 통해 결합하여 가교를 형성시키는 상기 식(ii)를 갖는다.
또 다른 보다 바람직한 사이클릭 펩타이드 효능제 화합물은 A10이 Asn 또는 Asp이고; A13이 Lys이고; A14가 His 또는 Ser이고; A17이 Asp 또는 Ser이고; A18이 Nle이고; A21이 Asp 또는 Lys이고; A22가 Glu 또는 Phe이고; A25가 Arg 또는 His이고; A26이 His 또는 Lys이고; A29가 Ala 또는 Gln이고; A30이 Asp 또는 Glu이고; A17와 A21의 측쇄가 아미드 결합을 통해 결합하여 가교를 형성시키는 상기 식(iii)을 갖는다.
또 다른 보다 바람직한 사이클릭 펩타이드 효능제 화합물은 A10이 Asn 또는 Asp이고; A13이 Lys이고; A14가 His 또는 Ser이고; A17이 Asp 또는 Ser이고; A18이 Asp, Lys 또는 Orn이고; A21이 Arg 또는 Val이고; A22가 Asp, Glu, Lys 또는 Orn이고; A25가 Arg 또는 His이고; A26이 His 또는 Lys이고; A29가 Ala 또는 Gln이고; A30이 Asp 또는 Glu이고; A18과 A22의 측쇄가 아미드 결합을 통해 결합하여 가교를 형성시키는 상기 식(iv)를 갖는다.
또 다른 보다 바람직한 사이클릭 펩타이드 효능제 화합물은 A10이 Asn 또는 Asp이고; A13이 Lys이고; A14가 His 또는 Ser이고; A17이 Asp 또는 Ser이고; A18이 Nle이고; A21이 Asp 또는 Lys이고; A22가 Glu 또는 Phe이고; A25가 Asp 또는 Lys이고; A26이 His 또는 Lys이고; A29가 Ala 또는 Gln이고; A30이 Asp 또는 Glu이고; A21과 A25의 측쇄가 아미드 결합을 통해 결합하여 가교를 형성시키는 상기 식(v)를 갖는다.
또 다른 보다 바람직한 사이클릭 펩타이드 효능제 화합물은 A10이 Asn 또는Asp이고; A13이 Lys이고; A14가 His 또는 Ser이고; A17이 Asp 또는 Ser이고; A18이 Nle이고; A21이 Arg 또는 Val이고; A22가 Glu 또는 Phe이고; A25가 Asp 또는 Lys이고; A26이 His 또는 Lys이고; A29가 Asp 또는 Lys이고; A30이 Asp 또는 Glu이고; A25와 A29의 측쇄가 아미드 결합을 통해 결합하여 가교를 형성시키는 상기 식(vi)을 갖는다.
또 다른 보다 바람직한 화학식 8의 사이클릭 펩타이드 효능제 화합물은,
(vii) A13과 A17의 측쇄가 아미드 결합을 통해 결합하고 A18과 A22의 측쇄가 아미드 결합을 통해 결합하여 가교를 형성시키거나;
(viii) A18과 A22의 측쇄가 아미드 결합을 통해 결합하고 A26과 A30의 측쇄가 아미드 결합을 통해 결합하여 가교를 형성시키는 상기 화학식 6을 갖는다.
또 다른 보다 바람직한 사이클릭 펩타이드 효능제 화합물은 A10이 Asn 또는 Asp이고; A13이 Lys 또는 Asp이고; A14가 His 또는 Ser이고; A17이 Lys 또는 Asp이고; A18이 Lys 또는 Asp이고; A21이 Val 또는 Arg이고; A22가 Glu, Lys 또는 Asp이고; A25가 Arg 또는 His이고; A26이 His 또는 Lys이고; A29가 Ala 또는 Gln이고; A30이 Asp 또는 Glu이고; A13과 A17의 측쇄가 아미드 결합을 통해 결합하여 가교를 형성시키고 A18과 A22의 측쇄가 아미드 결합을 통해 결합하여 가교를 형성시키는 상기 식(vii)을 갖는다.
또 다른 보다 바람직한 사이클릭 펩타이드 효능제 화합물은 A10이 Asn 또는Asp이고; A13이 Lys이고; A14가 His 또는 Ser이고; A17이 Ser 또는 Asp이고; A18이 Lys 또는 Asp이고; A21이 Val 또는 Arg이고; A22가 Glu, Lys 또는 Asp이고; A25가 Arg 또는 His이고; A26이 Lys 또는 Asp이고; A29가 Ala 또는 Gln이고; A30이 Lys 또는 Asp이고; A18과 A22의 측쇄가 아미드 결합을 통해 결합하여 가교를 형성시키고 A26과 A30의 측쇄가 아미드 결합을 통해 결합하여 가교를 형성시키는 상기 식(viii)을 갖는다.
또 다른 보다 바람직한 화학식 9의 사이클릭 펩타이드 효능제 화합물은, A13과 A17의 측쇄가 아미드 결합을 통해 결합하고 A18과 A22의 측쇄가 아미드 결합을 통해 결합하고 A26과 A30의 측쇄가 아미드 결합을 통해 결합하여 가교를 형성시키는 상기 화학식 6을 갖는다.
또 다른 보다 바람직한 화학식 10의 사이클릭 펩타이드 효능제 화합물은 A10이 Asn 또는 Asp이고; A13이 Lys 또는 Asp이고; A14가 His 또는 Ser이고; A17이 Lys 또는 Asp이고; A18이 Lys 또는 Asp이고; A21이 Val 또는 Arg이고; A22가 Glu, Lys 또는 Asp이고; A25가 Arg 또는 His이고; A26이 Lys 또는 Asp이고; A29가 Ala 또는 Gln이고; A30이 Lys 또는 Asp인 상기 화학식 9를 갖는다.
보다 바람직한 본 발명의 사이클릭 펩타이드 효능제 화합물은 다음을 포함한다:
사이클로(K18-D22)[A1,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 3);
사이클로(K18-D22)[A1,2,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 5);
사이클로(K18-D22)[A1,3,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 6);
사이클로(K18-D22)[A1,4,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 7);
사이클로(K18-D22)[A1,5,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 8);
사이클로(K18-D22)[A1,6,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 9);
사이클로(K18-D22)[A1,7,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 10);
사이클로(K18-D22)[A1,9,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 11);
사이클로(K18-D22)[A1,10,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 12);
사이클로(K18-D22)[A1,11,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 13);
사이클로(K18-D22)[A1,12,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 14);
사이클로(K18-D22)[A1,13,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 15);
사이클로(K18-D22)[A1,14,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 16);
사이클로(K18-D22)[A1,15,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 17);
사이클로(K18-D22)[A1,16,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 18);
사이클로(K18-D22)[A1,17,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 19);
사이클로(K18-D22)[G1,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 20);
사이클로(K18-D22)[A1,G2,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 21);
사이클로(K18-D22)[A1,G3,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 22);
사이클로(K18-D22)[A1,G4,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 23);
사이클로(K18-D22)[A1,G5,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 24);
사이클로(K18-D22)[A1,G6,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 25);
사이클로(K18-D22)[A1,G7,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 26);
사이클로(K18-D22)[A1,G8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 27);
사이클로(K18-D22)[A1,G9,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 28);
사이클로(K18-D22)[A1,G10,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 29);
사이클로(K18-D22)[A1,G11,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 30);
사이클로(K18-D22)[A1,G13,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 31);
사이클로(K18-D22)[A1,G14,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 32);
사이클로(K18-D22)[A1,G15,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 33);
사이클로(K18-D22)[A1,G16,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 34);
사이클로(K18-D22)[A1,G17,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 35);
사이클로(K18-D22)[D-P1,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 36);
사이클로(K18-D22)[A1,D-P3,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 37);
사이클로(K18-D22)[A1,D-P6,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 38);
사이클로(K18-D22)[A1,D-P7,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 39);
사이클로(K18-D22)[A1,D-P9,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 40);
사이클로(K18-D22)[A1,D-P10,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 41);
사이클로(K18-D22)[A1,D-P14,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 42);
사이클로(K18-D22)[A1,D-P15,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 43);
사이클로(K18-D22)[A1,D-P16,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 44);
사이클로(K18-D22)[A1,D-P17,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 45);
사이클로(K18-D22)[A1,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-34)NH2(서열 46);
사이클로(D18-K22)[A1,Nle8,D18,K22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 47);
사이클로(O18-D22)[A1,Nle8,O18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 48);
사이클로(D18-O22)[A1,Nle8,D18,O22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 49);
사이클로(K18-E22)[A1,Nle8,K18,E22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 50);
사이클로(O18-E22)[A1,Nle8,O18,E22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 51);
사이클로(K18-D22)[A1,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-30)NH2(서열 52);
사이클로(K18-D22)[A1,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-29)NH2(서열 53);
사이클로(K18-D22)[A1,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-28)NH2(서열 54);
사이클로(K18-D22)[A1,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-27)NH2(서열 55);
사이클로(K18-D22)[Nle8,K18,D22,L27]hPTH(3-31)NH2(서열 63);
사이클로(K18-D22)[Nle8,K18,D22,L27]hPTH(2-31)NH2(서열 64);
사이클로(K10-D14)[A1,Nle8,18,K10,D14,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 66);
사이클로(K14-D18)[A1,Nle8,K14,D18,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 67);
사이클로(K17-D21)[A1,Nle8,18,K17,D21,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 68);
사이클로(K21-D25)[A1,Nle8,18,K21,D25,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 69);
사이클로(K25-D29)[A1,Nle8,18,K25,D29,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 70);
사이클로(K18-D22)[K18,D22]hPTHrP(1-34)NH2(서열 71);
사이클로(K18-D22)[K18,26,30,D22,L23,28,31, E25,29]hPTHrP(1-34)NH2(서열 72);
비사이클로(K13-D17,K18-D22)[A1,Nle8,D17,22,K18,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 73);
비사이클로(K18-D22,K26-D30)[A1,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 74); 및
트리사이클로(K13-D17,K18-D22,K26-D30)[A1,Nle8,K18,D17,22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 80);
또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 전구약물.
보다 더 바람직한 본 발명의 사이클릭 펩타이드 효능제 화합물은 다음을 포함한다:
사이클로(K18-D22)[A1,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 3);
사이클로(K18-D22)[A1,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-34)NH2(서열 46);
사이클로(K18-D22)[A1,3,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 6);
사이클로(K18-D22)[A1,6,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 9);
사이클로(K18-D22)[A1,10,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 12);
사이클로(K18-D22)[A1,11,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 13);
사이클로(K18-D22)[A1,12,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 14);
사이클로(K18-D22)[A1,13,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 15);
사이클로(K18-D22)[A1,14,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 16);
사이클로(K18-D22)[A1,15,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 17);
사이클로(K18-D22)[A1,16,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 18);
사이클로(K18-D22)[A1,17,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 19);
사이클로(K18-D22)[G1,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 20);
사이클로(K18-D22)[A1,G2,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 21);
사이클로(K18-D22)[A1,G3,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 22);
사이클로(K18-D22)[A1,G10,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 29);
사이클로(K18-D22)[A1,G13,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 31);
사이클로(K18-D22)[A1,G16,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 34);
사이클로(K18-D22)[A1,G17,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 35);
사이클로(K18-D22)[D-P1,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 36);
사이클로(D18-K22)[A1,Nle8,D18,K22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 47);
사이클로(O18-D22)[A1,Nle8,O18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 48);
사이클로(D18-O22)[A1,Nle8,D18,O22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 49);
사이클로(K18-E22)[A1,Nle8,K18,E22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 50);
사이클로(O18-E22)[A1,Nle8,O18,E22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 51);
사이클로(K18-D22)[A1,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-30)NH2(서열 52);
사이클로(K18-D22)[A1,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-29)NH2(서열 53);
사이클로(K18-D22)[A1,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-28)NH2(서열 54);
사이클로(K10-D14)[A1,Nle8,18,K10,D14,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 66);
사이클로(K14-D18)[A1,Nle8,K14,D18,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 67);
사이클로(K17-D21)[A1,Nle8,18,K17,D21,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 68);
사이클로(K21-D25)[A1,Nle8,18,K21,D25,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 69);
사이클로(K25-D29)[A1,Nle8,18,K25,D29,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 70);
사이클로(K18-D22)[K18,D22]hPTHrP(1-34)NH2(서열 71);
사이클로(K18-D22)[K18,26,30,D22,L23,28,31, E25,29]hPTHrP(1-34)NH2(서열 72);
비사이클로(K13-D17,K18-D22)[A1,Nle8,D17,22,K18,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 73);
비사이클로(K18-D22,K26-D30)[A1,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 74); 및
트리사이클로(K13-D17,K18-D22,K26-D30)[A1,Nle8,K18,D17,22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 80);
또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 전구약물.
한층 보다 더 바람직한 사이클릭 펩타이드 효능제 화합물은 다음을 포함한다:
사이클로(K18-D22)[A1,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 3);
사이클로(K18-D22)[A1,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-34)NH2(서열 46);
사이클로(K18-D22)[A1,10,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 12);
사이클로(K18-D22)[A1,12,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 14);
사이클로(K18-D22)[A1,13,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 15);
사이클로(K18-D22)[A1,14,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 16);
사이클로(K18-D22)[A1,16,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 18);
사이클로(K18-D22)[A1,17,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 19);
사이클로(K18-D22)[A1,G3,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 22);
사이클로(K18-D22)[A1,G13,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 31);
사이클로(K18-D22)[A1,G16,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 34);
사이클로(K18-D22)[A1,G17,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 35);
사이클로(K18-D22)[D-P1,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 36);
사이클로(D18-K22)[A1,Nle8,D18,K22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 47);
사이클로(K18-E22)[A1,Nle8,K18,E22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 50);
사이클로(O18-E22)[A1,Nle8,O18,E22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 51);
사이클로(K18-D22)[A1,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-30)NH2(서열 52);
사이클로(K14-D18)[A1,Nle8,K14,D18,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 67);
사이클로(K18-D22)[K18,D22]hPTHrP(1-34)NH2(서열 71);
비사이클로(K13-D17,K18-D22)[A1,Nle8,D17,22,K18,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 73);
비사이클로(K18-D22,K26-D30)[A1,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 74); 및
트리사이클로(K13-D17,K18-D22,K26-D30)[A1,Nle8,K18,D17,22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 80);
또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 전구약물.
또 다른 한층 보다 더 바람직한 사이클릭 펩타이드 화합물은 비사이클로(K13-D17,K26-D30)[A1,Nle8,18,D17,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 76), 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 전구약물이다.
본 발명의 특정 사이클릭 펩타이드 화합물은 PTH의 작용을 억제한다. 이러한 사이클릭 펩타이드 길항제 화합물은 과잉 PTH를 특징으로 하는 장애, 예를 들어, 부갑상선기능항진증 및 부갑상선기능항진증-관련된 칼슘과혈발증, 악성 칼슘과혈증, 신부전증 및 고혈압증의 치료에 유용하다.
바람직한 화학식 10의 사이클릭 펩타이드 길항제 화합물은 X가,
(a) R1a-A4-A5-A6-A7-A8-A9-,
(b) R1a-A5-A6-A7-A8-A9-,
(c) R1a-A6-A7-A8-A9-,
(d) R1a-A7-A8-A9-,
(e) R1a-A8-A9-,
(f) R1b-A9- 및
(g) R1b-인 상기 화학식 6을 갖는다.
보다 바람직한 화학식 11의 사이클릭 펩타이드 길항제 화합물은 A8이 Nle이고 A27이 Leu인 상기 화학식 10을 갖는다.
또 다른 보다 바람직한 화학식 12의 사이클릭 펩타이드 길항제 화합물은, A18과 A22의 측쇄가 아미드 결합을 통해 결합하여 가교를 형성시키는 상기 화학식 11을 갖는다.
또 다른 보다 바람직한 화학식 13의 사이클릭 펩타이드 길항제 화합물은 A10이 Asn 또는 Asp이고; A13이 Lys이고; A14가 His 또는 Ser이고; A17이 Asp 또는 Ser이고; A18이 Asp, Lys 또는 Orn이고; A21이 Arg 또는 Val이고; A22가 Asp, Glu, Lys 또는 Orn이고; A25가 Arg 또는 His이고; A26이 His 또는 Lys이고; A29가 Ala 또는 Gln이고; A30이 Asp 또는 Glu인 상기 화학식 12를 갖는다.
보다 바람직한 사이클릭 펩타이드 길항제 화합물은 다음을 포함한다:
사이클로(K18-D22)[K18,D22,L27]hPTH(10-31)NH2(서열 56);
사이클로(K18-D22)[K18,D22,L27]hPTH(9-31)NH2(서열 57);
사이클로(K18-D22)[Nle8,K18,D22,L27]hPTH(8-31)NH2(서열 58);
사이클로(K18-D22)[Nle8,K18,D22,L27]hPTH(7-31)NH2(서열 59);
사이클로(K18-D22)[Nle8,K18,D22,L27]hPTH(6-31)NH2(서열 60);
사이클로(K18-D22)[Nle8,K18,D22,L27]hPTH(5-31)NH2(서열 61);
사이클로(K18-D22)[Nle8,K18,D22,L27]hPTH(4-31)NH2(서열 62);
사이클로(K18-D22)[Nle8,K18,D22,L27]hPTH(7-34)NH2(서열 65); 및
사이클로(K18-D22)[K18-D22]hPTHrP(7-34)NH2(서열 77);
또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 전구약물.
본 발명의 특정 사이클릭 펩타이드 화합물은 부갑상선 호르몬 수용체에 대해 효능제 활성을 가지므로, 칼슘저혈증; 골다공증; 골감소증; 및 골다공증 및 골감소증과 관련된 장애, 예를 들어, 부갑상선기능항진증, 부갑상선기능감퇴증 및 쿠싱 증후군; 글루코코르티코이드- 및 면역억제제-유도된 골감소증; 및 골절 및 재골절 수복을 포함한 골 세포 칼슘 조절과 관련된 생리학적 상태의 치료에 유용하다.
바람직한 화학식 14의 어사이클릭 펩타이드 효능제 화합물은 R1a가 H이고 Y가 NH2인 화학식 II의 펩타이드 화합물이다.
보다 바람직한 화학식 15의 어사이클릭 효능제 화합물은 X가,
(a) R1a-A1-A2-A3-A4-A5-A6-A7-A8-A9-,
(b) R1a-A2-A3-A4-A5-A6-A7-A8-A9- 또는
(c) R1a-A3-A4-A5-A6-A7-A8-A9-인 상기 화학식 14를 갖는다.
또 다른 보다 바람직한 화학식 16의 어사이클릭 펩타이드 효능제 화합물은 A1이 Ser, Ala, Gly 또는 D-Pro이고; A2가 Ala, Val 또는 Gly이고; A3이 Ala, Ser, Gly 또는 D-Pro이고; A4가 Glu, Ala 또는 Gly이고; A5가 Ile, His, Ala 또는 Gly이고; A6이 Ala, Gln, Gly 또는 D-Pro이고; A7이 Ala, Leu 또는 Gly이고; A8이 Leu, Nle, Gly 또는 D-Pro이고; A9가 His, Ala, Gly 또는 D-Pro이고; A10이 Ala, Asn,Gly, Asp 또는 D-Pro이고; A11이 Ala, Gly, Leu 또는 Lys이고; A12가 Ala 또는 Gly이고; A13이 Ala, Gly 또는 Lys이고; A14가 Ala, Gly, His, Ser 또는 D-Pro이고; A15가 Ala, Gly, Ile 또는 D-Pro이고; A16이 Asn, Ala, Gly, D-Pro 또는 Gln이고; A17이 Ala, Asp, Gly, Ser 또는 D-Pro이고; A18이 Lys이고; A19가 Arg 또는 Glu이고; A20이 Arg이고; A21이 Arg 또는 Val이고; A22가 Asp, Lys, Orn 또는 Glu이고; A23이 Leu, Phe 또는 Trp이고; A24가 Leu이고; A25가 Arg 또는 His이고; A26이 Lys 또는 His이고; A27이 Leu 또는 Lys이고; A28이 Ile 또는 Leu, 또는 이의 등가 아미노산이고; A29가 Ala 또는 Glu이고; A30이 Asp 또는 Glu이고; A31이 Ile, Leu 또는 Val이고; A32가 His이고; A33이 Asn 또는 Thr이고; A34가 Ala 또는 Phe인 상기 화학식 15를 갖는다.
또 다른 보다 바람직한 화학식 17의 어사이클릭 펩타이드 효능제 화합물은 A1이 Ala, Gly 또는 D-Pro이고; A8이 Nle이고; A22가 Asp이고; A27이 Leu인 상기 화학식 16을 갖는다.
또 다른 보다 바람직한 화학식 18의 어사이클릭 펩타이드 효능제 화합물은 X가 R1a-A1-A2-A3-A4-A5-A6-A7-A8-A9-인 상기 화학식 17을 갖는다.
보다 더 바람직한 어사이클릭 펩타이드 효능제 화합물은[A1,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 4), 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 전구약물이다.
본 발명이 본원에 인용된 본 발명의 바람직한 국면의 모든 적합한 조합을 포함한다.
펩타이드 화합물의 합성
본 발명의 펩타이드 화합물은 펩타이드 합성의 분야에 숙련가에게 공지된 기술에 의해 합성할 수 있다. 고체 상 펩타이드 합성의 경우, 다수의 기술의 요약은 문헌[참조: J.M. Stewart 및 J.D. Young, Solid Phase Peptide Synthesis, W.H. Freeman Co.(San Francisce), 1963 및 J. Meienhofer, Hormonal Proteins and Peptides, vol. 2, p. 26, Academic Press(New York), 1973]에서 찾아볼 수 있다. 전형적인 용액 합성의 경우, 문헌[참조: G. Schroder 및 K. Lupke, The Peptides, vol. 1, Academic Press(New York), 1965]을 참조한다.
일반적으로, 상기 방법은 하나 이상의 아미노산 또는 적합하게 보호된 아미노산의 증대하는 펩타이드 쇄에의 연속적인 첨가를 포함한다. 통상적으로, 제1 아미노산의 아미노 또는 카복실 그룹을 적합한 보호 그룹에 의해 보호시킨다. 다음, 보호되거나 유도화된 아미노산을 불활성 고체 지지체에 결합시키거나 적합하게 보호된 상보적(아미노 또는 카복실) 그룹을 갖는 서열내의 다음 아미노산을 아미드 결합을 형성시키기에 적합한 조건하에 첨가함으로써 용액내에서 이용할 수 있다.다음, 보호 그룹을 상기 새롭게 가해진 아미노산 잔기로부터 제거한 다음, 다음 아미노산(적합하게 보호됨)을 가한다. 모든 목적하는 아미노산을 적합한 서열내에 결합시킨 후, 잔류하는 보호 그룹(및 특정 고체 지지체)을 후속적으로 또는 동시에 제거하여 최종 펩타이드 화합물을 수득한다. 상기 일반적 과정의 단순 개질에 의해, 하나 이상의 아미노산을, 예를 들어, 보호된 트리펩타이드를 적합하게 보호된 디펩타이드와 (키랄성 중심을 라세미화시키지 않는 조건하에서) 커플링시킴으로써 동시에 증대하는 쇄에 가하여, 탈보호 후, 펜타펩타이드 등을 형성시킬 수 있다.
본 발명의 펩타이드 화합물을 제조하는 바람직한 방법은 고체 상 펩타이드 합성을 포함한다.
이러한 특히 바람직한 방법에서, 알파-아미노 작용은 산 또는 염기 민감성 그룹에 의해 보호한다. 이러한 보호 그룹은 펩타이드 결합 형성의 조건에 대해 안정하면서, 증대하는 펩타이드 쇄의 파괴 또는 여기에 함유되어 있는 키랄성 중심의 라세미화를 일으키지 않으면서 용이하게 제거할 수 있는 특성을 가져야만 한다. 적합한 보호 그룹은 9-플루오레닐메틸옥시카보닐(Fmoc), t-부틸옥시카보닐(Boc), 벤질옥시카보닐(Cbz), 비페닐이소프로필옥시카보닐, t-아밀옥시카보닐, 이소보르닐옥시카보닐, (α,α)디메틸-3,5-디메톡시벤질옥시카보닐, o-니트로페닐설페닐, 2-시아노-t-부틸옥시카보닐 등이다. 9-플루오레닐메틸옥시카보닐(Fmoc) 보호 그룹이 바람직하다.
특히 바람직한 측쇄 보호 그룹은, 라이신 및 아르기닌에서와 같은 측쇄 아미노 그룹의 경우: 2,2,5,7,8-펜타메틸크로만-6-설포닐(pmc), 니트로, p-톨루엔설포닐, 4-메톡시벤젠설포닐, Cbz, Boc, Alloc(알릴옥시카보닐) 및 아다만틸옥시카보닐이고; 티로신의 경우: 벤질, o-브로모벤질옥시카보닐, 2,6-디클로로벤질, 이소프로필, t-부틸(t-Bu), 사이클로헥실, 사이클로페닐 및 아세틸(Ac)이고; 세린의 경우: t-부틸, 벤질 및 테트라하이드로피라닐이고; 히스티딘의 경우: 트리틸, 벤질, Cbz, p-톨루엔설포닐 및 2,4-디니트로페닐이고; 트립토판의 경우: 포르밀 및 Boc이고; 아스파라긴 및 글루타민의 경우: Trt(트리틸)이고; 아스파르트산 및 글루탐산의 경우: O-t-Bu 및 OAllyl이다.
본 발명의 사이클릭 펩타이드 화합물은 바람직하게는 아미드, 에스테르, 디설파이드 또는 란티오닌 가교를 함유하는 목적하는 완전한 펩타이드 화합물의 단편(사이클릭 펩타이드 화합물)을 완전한 펩타이드 화합물의 수지-결합된 아미노산 또는 펩타이드 부분에 커플링시키기 전에 각각 제조하고 정제하는 단편-기초된 접근법을 사용하여 제조한다. 사이클릭 펩타이드 단편은 본원에 기술된 바와 같은 전형적인 용액 상 합성 기술 또는 고체 상 펩타이드 합성 방법론을 이용하여 제조한다. 다음, 완전한 펩타이드 화합물의 합성을 잔류하는 아미노산 잔기의 수지-결합된 사이클릭 펩타이드에의 연속적 첨가; 추가의 사이클릭 또는 어사이클릭 펩타이드 단편의 수지-결합된 사이클릭 펩타이드에의 첨가; 또는 이들의 조합에 의해 수행한다. 단편-기초된 접근법을 이용한 사이클릭 펩타이드 hPTH 유사체의 제조는 본원에 참고로 인용된, 1998년 4월 15일자로 출원된 미국 특허 일련 번호 제60/081897호에 기술되어 있다.
R1c가또는인 본 발명의 펩타이드를 본원에 참고로 인용된 문헌[참조: R. Waelchli et al., Tetrahedron Lett.,6(10), 1151-1156(1996)]에 기술된 방법을 이용하여 제조한다.
다음 비제한적인 실시예는 본 발명의 신규한 펩타이드의 제조 방법을 추가로 예시한다.
일반적 방법:
펩타이드 화합물은 표준 Fmoc 고체-상 펩타이드 합성(SPPS) 방법론을 이용하는 프로테인 테크놀로지스, 인코포레이티드(Protein Technologies, Inc.) 제조의 PS3 자동 고체 상 펩타이드 합성기(Automated Solid Phase Peptide Synthersizer) 상에서 제조한다. Fmoc-보호된 아미노산은 어드밴스 켐테크(Advance ChemTech: Louisville, KY, USA), 바켐(Bachem: Torrance, CA, USA) 또는 젠 헤미칼스 아게(Senn Chemicals AG: Dielsdorf, Switzerlane)에서 구입하고 아래에 기재한다: Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Asp(OtBu)-OH, Fmoc-Asp(OAllyl), Fmoc-Cys(Acm)-OH, Fmoc-Cys(Trt)-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Glu(OAllyl)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Lys(Alloc)-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Orn(Alloc)-OH, Fmoc-Phe-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Thr(tBu)-OH, Fmoc-Trp(Boc)-OH 및 Fmoc-Val-OH.
아미노산 분석은 바켐 바이오사이언스(BACHEM Bioscience: King of Prussia, PA)에 의해 수행하고 아미노산 잔기: 실측치(예상치)로서 보고한다.
서열 분석은 마이크로케미칼 퍼실러티(Microchemical Facility: Emory University School of Medicine, Atlanta, GA)에서 수행한다.
아미드-가교의 제조
아미드-가교된 사이클릭 펩타이드 화합물은 상기한 바와 같은 활성화제의 존재하에 산성 아미노산 잔기의 측쇄 카복실 그룹과 염기성 아미노산 잔기의 측쇄 아미노 그룹 사이에 아미드 결합을 형성시킴으로써 제조한다. 바람직한 산성 아미노산 잔기는 Asp, Glu, -NHCH[(CH2)3CO2H]CO- 및 -NHCH[(CH2)4CO2H]CO-를 포함하고, Asp가 가장 바람직하다. 바람직한 염기성 아미노산 잔기는 His, Lys, Orn, -NHCH(CH2NH2)CO- 및 -NHCH[(CH2)2NH2]CO-를 포함하고, Lys가 가장 바람직하다.
사이클릭 펩타이드 화합물에 대한 펩타이드 전구체가 하나 이상의 산성 또는 염기성 아미노산 잔기를 함유하는 경우에서, 추가의 산성 또는 염기성 아미노산에 대한 보호 그룹은 환화시킬 아미노산을 선택적으로 탈보호시킬 수 있도록 선택한다. 바람직하게는, 목적하는 산성 및 염기성 아미노산 잔기를 동시에 탈보호시킨다. 또한, 선택된 염기성 및 산성 아미노산 잔기를 탈보호시키는데 사용하는 시약에 대해 안정한 것 이외에, 잔류하는 아미노산 잔기에 대한 보호 그룹이 사용되는 환화 조건에 대해 안정하도록 선택한다.
측쇄 보호 그룹과 관련하여 사용할 경우에 용어 '직교성'은 분자 상에 2가지 이상의 부류의 보호 그룹이 존재하고, 각각의 부류 대부분이 특정 조건하에 광학적으로 제거되고 이외의 부류에서 보호 그룹을 제거하는데 사용하는 조건에 대해 안정한, 본원에 기술된 상태를 의미한다. 이와 같이 특정의 하나를 이외의 모든 것은 그대로 두면서 특정 부류의 모든 보호 그룹을 제거할 수 있다.
목적하는 직교성을 갖는 바람직한 보호 그룹은 환화시킬 산성 아미노산의 경우: 알릴이고; 환화시킬 염기성 아미노산의 경우: 알릴옥시카보닐(alloc)이고; 추가의 산성 아미노산 잔기의 경우: 3급-부틸(tBu)이고; 추가의 염기성 아미노산 잔기의 경우: 3급-부틸옥시카보닐(Boc)이다.
알릴 및 알릴옥시카보닐 보호 그룹은 팔라듐, 바람직하게는 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐(0)을 사용한 처리에 의해 동시에 제거한다. 다음, 아미드 가교의 형성을 아미드 결합 형성에 대해 본원에 기술한 바와 같이 달성한다.
에스테르 가교의 제조
에스테르-가교된 사이클릭 펩타이드 화합물을 산성 아미노산 잔기의 측쇄 카복실 그룹과 하이드록실-함유 아미노산 잔기의 측쇄 하이드록실 그룹의 측쇄 사이에 에스테르 결합을 형성시킴으로써 제조한다. 바람직한 산성 아미노산 잔기는 Asp, Glu, -NHCH[(CH2)3CO2H]CO- 및 -NHCH[(CH2)4CO2H]CO-를 포함하고, Asp가 가장 바람직하다. 바람직한 측쇄 하이드록실 그룹 함유 아미노산 잔기는 Ser, Thr, Tyr 등을 포함하고, Ser 및 Thr이 특히 바람직하다. 에스테르 결합의 형성은 아미드가교의 형성에 대해 상기한 방법 및 시약을 사용하여 달성한다.
디설파이드 가교의 제조
디설파이드-가교된 사이클릭 펩타이드 화합물은 측쇄 설프하이드릴 그룹을 함유하는 아미노산 잔기, 특히 바람직하게는 Cys 사이에 디설파이드 결합을 형성시킴으로써 제조한다. 측쇄 설프하이드릴 잔기에 대해 바람직한 보호 그룹은 트리틸(Trt) 및 아세트아미도메틸(Acm)이다. 디설파이드-가교된 사이클릭 펩타이드 화합물에 대해 완전히 보호된 펩타이드 전구체의 디메틸포름아미드(DMF) 중의 산화제, 예를 들어, 탈륨 트리플루오로아세테이트[Tl(CF3CO2)3]를 사용한 처리는 Trt 또는 Acm 보호 그룹의 선택적 제거 및 수반된 디설파이드 결합 형성을 초래한다.
란티오닌 가교의 제조
상기한 디설파이드-가교된 유사체의 란티오닌계 변형체를 문헌[참조: Harp 및 Gleason, J. Org. Chem.1971, 36, 73-80]에 기술된 탈황화 방법을 이용하여 디설파이드로부터 제조한다. Cys(Trt) 또는 Cys(Acm)[또는 Homocys 유도체]의 산화성 제거 및 디설파이드 가교 형성 이후, 펩타이드를 적합한 용매 중의 트리스(디에틸아미노)포스핀으로 처리한다. 추천된 세척에 이어서, 잔류하는 측쇄 보호 그룹을 상기한 바와 같이 제거한다. 다음, 조 펩타이드 화합물을 역상 액체 크로마토그래피를 이용하여 정제한다.
실시예 1
사이클로(K18-D22)[A1,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 3)
Ala-Val-Ser-Glu-Ile-Gln-Leu-Nle-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-(Lys-Glu-
Arg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Val 아미드
방법 A:
링크 아미드 MBHA 수지(Rink Amide MBHA Resin: Nova Biochem, La Jolla, CA, USA)(0.75g, 0.41mmol)를 반응 용기에 로딩시키고 DMF(10mL)를 사용하여 10분 동안 팽윤시킨다. 다음, N-말단 Fmoc 보호 그룹을 DMF(15mL) 중의 20% 피페리딘 용액을 사용하여 5분에 걸쳐 제거한다. 수지를 DMF(15mL)로 6회 세척한 다음, 0.4M N-메틸모르폴린(NMM)/DMF(15mL) 중의 Fmoc-Val-OH(0.34g, 1.0mmol) 및 HBTU(0.38g, 1.0mmol)를 함유하는 용액으로 20분에 걸쳐 처리한다. 제1 아미노산 커플링 이후, 수지를 DMF(15mL)로 3회 세척한다. 탈보호/커플링 과정을 하기 아미노산 잔기를 사용하여 반복한다: Fmoc-Asp(OtBu)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Trp(Boc)-OH, Fmoc-Asp(OAllyl)-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Lys(Alloc)-OH. 수지-결합된 펩타이드를 기기로부터 제거한 다음, DMF(50mL)로 5회, THF(50mL)로 5회 및 디에틸 에테르(50mL)로 5회 세척한다. 공기 건조 후, 수지를 37:2:1 클로로포름/아세트산/NMM(40mL)에 질소 분위기하에 현탁시킨다. 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐(0)(2.8g, 2.4mmol)을 가한 다음, 불균질 혼합물을 주위 온도에서 2시간 동안 온화하게 교반한다. 생성된 균질 용액을 여과시킨 다음, 수지를 0.5% 디이소프로필에틸아민/DMF(100mL), 0.5% 나트륨 디에틸디티오카보네이트/DMF(100mL) 및 DMF(200mL)로 연속적으로 세척한다. Lys18및 Asp22의 측쇄간의 환화를 무수 DMF(20mL) 중의 HBTU(0.26g, 0.62mmol), HOBT(0.08g, 0.62mmol) 및 NMM(0.14mL, 1.23mmol)을 사용하여 2시간에 걸쳐 수행한 다음; 상기 환화 단계를 재차 수행한다. 용매를 제거한 다음 수지를 DMF(100mL), THF(100mL) 및 디에틸 에테르(100mL)로 연속적으로 세척하고 공기 건조시킨다.
상기 수지-결합된 펩타이드의 분획(0.46g, 약 0.1mmol)을 자동 합성기로 회수하여 잔류하는 17개의 아미노산 잔기를 하기 순서로 상기한 바와 같이 가한다: Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Nle-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Val-OH 및 Fmoc-Ala-OH. N-말단 Fmoc 보호 그룹을 20% 피페리딘/DMF 용액(15mL)을 사용하여 5분에 걸쳐 제거한다. 수지-결합된 펩타이드를 기기로부터 제거한 다음, DMF(100mL), THF(100mL) 및 디에틸 에테르(100mL)로 연속적으로 세척한다. 공기-건조된 수지를 물(0.5mL), 티오아니솔(0.5mL), 페놀(0.75g) 및 에탄디티올(0.25mL)을 함유하는 TFA 10mL에 현탁시킨다. 2시간 후에, TFA 용액을 0℃에서 3급-부틸메틸 에테르(60mL)내로 여과시켜 조펩타이드의 침전을 초래한다. 수지를 TFA(2mL)로 세척하고 이를 펩타이드 혼합물에 가한다. 펩타이드 혼합물을 2500rpm에서 5분 동안 원심분리한 다음 따라낸다. 조 백색 고체를 디에틸 에테르(30mL)에 재현탁시키고, 원심분리하고 따라낸다. 상기 세척 과정을 4회 반복하고 생성된 펩타이드를 진공하에 건조시키고, 0.1% TFA를 함유하는 물(50mL)에 용해시키고 동결 건고시킨다.
조 펩타이드를 DYNAMAX-60A 반분취 1' C18 칼럼이 장착된 Rainin HPLC 시스템을 사용하는 역상 고성능 액체 크로마토그래피에 의해 정제한다. 이동 상을 물(0.1% TFA)로 개시하고 60% ACN(0.08% TFA)/물(0.1% TFA)에 30분에 걸쳐 램핑시킨다. 약 23분에 용출되는 순수한 분획을 합하고 동결 건조시켜 정제된 펩타이드 40mg을 수득한다. IS-MS: 3634(M+). 아미노산 분석: Asp/Asn: 3.86(4); Ser: 1.85(2); Glu/Gln: 4.00(4); Gly: 0.98(1); Ala: 0.97(1); Val: 2.86(3); Ile: 0.95(1); Leu: 6.49(6); Nle: 0.91(1); Lys: 2.75(3); His: 2.06(2); Arg: 2.09(2); Trp: 측정되지 않음(1). 아미드 가교의 위치는 에드만 분해 및 트립신 분해 지도화에 의해 확인한다.
방법 B:
링크 아미드 MBHA 수지(Nova Biochem, La Jolla, CA, USA)(0.75g, 0.41mmol)를 반응 용기에 로딩시키고 DMF(10mL)를 사용하여 10분 동안 팽윤시킨다. 다음, N-말단 Fmoc 보호 그룹을 DMF(17mL) 중의 20% 피페리딘 용액을 사용하여 5분에 걸쳐 제거한다. 수지를 DMF(17mL)로 6회 세척한 다음, 0.4M N-메틸모르폴린(NMM)/DMF(8mL) 중의 Fmoc-Val-OH(0.34g, 1.0mmol) 및 HBTU(0.38g, 1.0mmol)를 함유하는 용액으로 20분에 걸쳐 처리한다. 제1 아미노산 커플링 이후, 수지를 DMF(17mL)로 3회 세척한다. 탈보호/커플링 과정을 하기 아미노산 잔기를 사용하여 반복한다: Fmoc-Asp(OtBu)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Trp(Boc)-OH, Fmoc-Asp(OAllyl)-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Lys(Alloc)-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH. 수지-결합된 펩타이드를 기기로부터 제거한 다음, DMF(50mL)로 5회, THF(50mL)로 5회 및 디에틸 에테르(50mL)로 5회 세척한다. 공기 건조 후, 수지를 37:2:1 클로로포름/아세트산/NMM(40mL)에 질소 분위기하에 현탁시킨다. 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐(0)(1.0g, 0.86mmol)을 가한 다음, 불균질 혼합물을 주위 온도에서 2시간 동안 온화하게 교반한다. 생성된 균질 용액을 여과시킨 다음, 수지를 0.5% 디이소프로필에틸아민/DMF(100mL), 0.5% 나트륨 디에틸디티오카보네이트/DMF(100mL) 및 DMF(200mL)로 연속적으로 세척한다. Lys18및 Asp22의 측쇄간의 환화를 무수 DMF(20mL) 중의 HBTU(0.23g, 0.62mmol), HOBT(0.08g, 0.62mmol) 및 NMM(0.13mL, 1.23mmol)을 사용하여 2시간에 걸쳐 수행한 다음; 상기 환화 단계를 재차 수행한다. 용매를 제거한 다음 수지를 DMF(100mL), THF(100mL) 및 디에틸 에테르(100mL)로 연속적으로 세척하고 공기 건조시킨다.
수지-결합된 펩타이드(약 2.2g)를 자동 합성기로 회수하여 잔류하는 14개의 아미노산 잔기를 하기 순서로 상기한 바와 같이 가한다: Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Nle-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Val-OH 및 Fmoc-Ala-OH. N-말단 Fmoc 보호 그룹을 20% 피페리딘/DMF 용액(17mL)을 사용하여 5분에 걸쳐 제거한다. 수지-결합된 펩타이드를 기기로부터 제거한 다음, DMF(100mL), THF(100mL) 및 디에틸 에테르(100mL)로 연속적으로 세척한다. 공기-건조된 수지를 물(2.0mL), 티오아니솔(2.0mL), 페놀(3.0g) 및 에탄디티올(1.0mL)을 함유하는 TFA 10mL에 현탁시킨다. 2시간 후에, TFA 용액을 0℃에서 3급-부틸메틸 에테르(160mL)내로 여과시켜 조 펩타이드의 침전을 초래한다. 수지를 TFA(2mL)로 세척하고 이를 펩타이드 혼합물에 가한다. 펩타이드 혼합물을 2500rpm에서 5분 동안 원심분리한 다음 따라낸다. 조 백색 고체를 디에틸 에테르(120mL)에 재현탁시키고, 원심분리하고 따라낸다. 상기 세척 과정을 4회 반복하고 생성된 펩타이드를 진공하에 건조시키고, 0.1% TFA를 함유하는 물(100mL)에 용해시키고 동결 건고시킨다.
조 펩타이드를 상기한 바와 같은 역상 고성능 액체 크로마토그래피에 의해 정제하여 물질 261mg을 수득하는데, 이는 질량 스펙트럼 및 HPLC 분석에 의해 방법 A에 의해 제조된 진정한 샘플과 동일한 것으로 나타난다. 또한, 방법 B에 의해 수득된 물질은 ROS 17.2/8 세포 cAMP 검정(상기 참조)에서의 시험관내 분석으로 방법 A에 의해 제조된 것과 동일하다.
방법 C:
링크 아미드 MBHA 수지(Nova Biochem, La Jolla, CA, USA)(0.75g, 0.41mmol)를 반응 용기에 로딩시키고 DMF(10mL)를 사용하여 10분 동안 팽윤시킨다. 다음, N-말단 Fmoc 보호 그룹을 DMF(17mL) 중의 20% 피페리딘 용액을 사용하여 5분에 걸쳐 제거한다. 수지를 DMF(17mL)로 6회 세척한 다음, 0.4M N-메틸모르폴린(NMM)/DMF(8mL) 중의 Fmoc-Val-OH(0.34g, 1.0mmol) 및 HBTU(0.38g, 1.0mmol)를 함유하는 용액으로 20분에 걸쳐 처리한다. 제1 아미노산 커플링 이후, 수지를 DMF(17mL)로 3회 세척한다. 탈보호/커플링 과정을 하기 아미노산 잔기를 사용하여 반복한다: Fmoc-Asp(OtBu)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Trp(Boc)-OH, Fmoc-Asp(OAllyl)-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Lys(Alloc)-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Nle-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Val-OH 및 Fmoc-Ala-OH. 수지-결합된 펩타이드를 기기로부터 제거한 다음, DMF(50mL)로 5회, THF(50mL)로 5회 및 디에틸 에테르(50mL)로 5회 세척한다. 공기 건조 후, 수지를 37:2:1 클로로포름/아세트산/NMM 용액(40mL)에 질소 분위기하에 현탁시킨다. 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐(0)(1.0g, 0.86mmol)을 가한 다음, 불균질 혼합물을 주위 온도에서 2시간 동안 온화하게 교반한다. 생성된 균질 용액을 여과시킨 다음, 수지를 0.5% 디이소프로필에틸아민/DMF(100mL), 0.5% 나트륨 디에틸디티오카보네이트/DMF(100mL) 및 DMF(200mL)로 연속적으로 세척한다. Lys18및 Asp22의 측쇄간의 환화를 무수 DMF(20mL) 중의 HBTU(0.23g, 0.62mmol), HOBT(0.08g, 0.62mmol) 및 NMM(0.13mL, 1.23mmol)을 사용하여 2시간에 걸쳐 수행한 다음; 상기 환화 단계를 재차 수행한다. 용매를 제거한 다음 수지를 DMF(100mL), THF(100mL) 및 디에틸 에테르(100mL)로 연속적으로 세척하고 공기 건조시킨다.
N-말단 Fmoc 보호 그룹을 20% 피페리딘/DMF 용액(17mL)을 사용하여 5분에 걸쳐 제거한다. 수지-결합된 펩타이드를 기기로부터 제거한 다음, DMF(100mL), THF(100mL) 및 디에틸 에테르(100mL)로 연속적으로 세척한다. 공기-건조된 수지를 물(2.0mL), 티오아니솔(2.0mL), 페놀(3.0g) 및 에탄디티올(1.0mL)을 함유하는 TFA 10mL에 현탁시킨다. 2시간 후에, TFA 용액을 0℃에서 3급-부틸메틸 에테르(160mL)내로 여과시켜 조 펩타이드의 침전을 초래한다. 수지를 TFA(2mL)로 세척하고 이를 펩타이드 혼합물에 가한다. 펩타이드 혼합물을 2500rpm에서 5분 동안 원심분리한 다음 따라낸다. 조 백색 고체를 디에틸 에테르(120mL)에 재현탁시키고, 원심분리하고 따라낸다. 상기 세척 과정을 4회 반복하고 생성된 펩타이드를 진공하에 건조시키고, 0.1% TFA를 함유하는 물(100mL)에 용해시키고 동결 건고시킨다.
조 펩타이드를 상기한 바와 같은 역상 고성능 액체 크로마토그래피에 의해 정제하여 정제된 펩타이드를 수득하는데, 이는 질량 스펙트럼 및 HPLC 분석에 의해 방법 A 및 B에 의해 제조된 진정한 샘플과 동일한 것으로 나타난다. 또한, 방법 C에 의해 수득된 물질은 ROS 17.2/8 세포 cAMP 검정(상기 참조)에서의 시험관내 분석으로 방법 A 및 B에 의해 제조된 것과 동일하다.
방법 D
표제 화합물의 단편-기초된 합성은 본원에 참고로 인용된, 1998년 4월 15일자로 출원된 미국 특허 일련 번호 제60/081897호에 기술되어 있다.
실시예 2
[A1,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 4)
Ala-Val-Ser-Glu-Ile-Gln-Leu-Nle-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-Lys-Glu-
Arg-Val-Asp-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Val 아미드
링크 아미드 MBHA 수지(Nova Biochem, La Jolla, CA, USA)(0.75g, 0.41mmol)를 반응 용기에 로딩시키고 DMF(10mL)를 사용하여 10분 동안 팽윤시킨다. 다음, N-말단 Fmoc 보호 그룹을 DMF(17mL) 중의 20% 피페리딘 용액을 사용하여 5분에 걸쳐 제거한다. 수지를 DMF(17mL)로 6회 세척한 다음, 0.4M N-메틸모르폴린(NMM)/DMF(8mL) 중의 Fmoc-Val-OH(0.34g, 1.0mmol) 및 HBTU(0.38g, 1.0mmol)를 함유하는 용액으로 20분에 걸쳐 처리한다. 제1 아미노산 커플링 이후, 수지를 DMF(17mL)로 3회 세척한다. 탈보호/커플링 과정을 하기 아미노산 잔기를 사용하여 반복한다: Fmoc-Asp(OtBu)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Trp(Boc)-OH, Fmoc-Asp(OAllyl)-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Lys(Alloc)-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Nle-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Val-OH 및 Fmoc-Ala-OH. 수지-결합된 펩타이드를 기기로부터 제거한 다음, DMF(50mL)로 5회, THF(50mL)로 5회 및 디에틸 에테르(50mL)로 5회 세척한다. 공기 건조 후, 수지의 분획(1.5g, ~0.25mmol)을 37:2:1 클로로포름/아세트산/NMM 용액(20mL)에 질소 분위기하에 현탁시킨다. 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐(0)(0.5g, 0.43mmol)을 가한 다음, 불균질 혼합물을 주위 온도에서 2시간 동안 온화하게 교반한다. 생성된 균질 용액을 여과시킨 다음, 수지를 0.5% 디이소프로필에틸아민/DMF(100mL), 0.5% 나트륨 디에틸디티오카보네이트/DMF(200mL), DMF(200mL), THF(100mL), 디에틸 에테르(100mL)로 연속적으로 세척하고 공기 건조시킨다.
N-말단 Fmoc 보호 그룹을 20% 피페리딘/DMF 용액(20mL)을 사용하여 5분에 걸쳐 제거한다. 수지-결합된 펩타이드를 기기로부터 제거한 다음, DMF(100mL), THF(100mL) 및 디에틸 에테르(100mL)로 연속적으로 세척한다. 공기-건조된 수지를 물(1.0mL), 티오아니솔(1.0mL), 페놀(1.5g) 및 에탄디티올(0.5mL)을 함유하는 TFA 20mL에 현탁시킨다. 2시간 후에, TFA 용액을 0℃에서 3급-부틸메틸 에테르(160mL)내로 여과시켜 조 펩타이드의 침전을 초래한다. 수지를 TFA(2mL)로 세척하고 이를펩타이드 혼합물에 가한다. 펩타이드 혼합물을 2500rpm에서 5분 동안 원심분리한 다음 따라낸다. 조 백색 고체를 디에틸 에테르(120mL)에 재현탁시키고, 원심분리하고 따라낸다. 상기 세척 과정을 4회 반복하고 생성된 펩타이드를 진공하에 건조시키고, 0.1% TFA를 함유하는 물(100mL)에 용해시키고 동결 건고시킨다.
조 펩타이드를 상기한 바와 같은 역상 고성능 액체 크로마토그래피에 의해 정제하여 최종의, 정제된 생성물 75mg을 수득한다. IS-MS: 3652(M+). 아미노산 분석: Asp/Asn: 4.00(4); Ser: 1.78(2); Glu/Gln: 3.92(4); Gly: 0.95(1); Ala: 0.95(1); Val: 3.03(3); Ile: 0.90(1); Leu: 6.36(6); Nle: 0.90(1); Lys: 3.06(3); His: 2.01(2); Arg: 2.04(2); Trp: 측정되지 않음(1). 펩타이드의 1차 서열은 에드만 분해에 의해 확인한다.
실시예 3 내지 18
방법 A를 사용하고 K18-D22아미드 가교로 종결시켜 미리 제조한 수지-결합된 펩타이드의 분획(0.46g, ~0.1mmol)을 Advanced ChemTech 496 MBS 기기의 96-웰 블록의 17개의 3mL-웰 사이에 고르게 분배한다. 각각의 웰에서, N-말단 Fmoc 보호 그룹을 20% 피페리딘/DMF 용액(0.5mL)을 사용하여 제거한다. L-알라닌을 표준 Fmoc-커플링 조건(커플링 단계당 0.5mmol Fmoc-아미노산; 잔기당 3회 커플링)을 사용하여 17개의 N-말단 위치 각각에서 규칙적으로 치환시킨, 17개의 PTH 유사체 모두의 독립적 제조를 가능하게 하는 합성 프로그램을 사용한다. 프로그램화된 합성의 완료 이후, PTH 유사체를 탈보호시키고 시약 K(1.0mL/웰)를 사용하여 2시간에걸쳐 수지로부터 제거한다. 다음, 분해 용액을 각각 주위 온도에서 디에틸 에테르(8mL)에 가한다. 디에틸 에테르 중의 침전된 펩타이드의 생성된 불균질 혼합물을 원심분리한 다음, 상등액을 조 펩타이드로부터 따라내 버린다. 고체 펩타이드를 디에틸 에테르(8mL)의 5개 분획으로 연속적으로 세척한 다음 진공하에 건조시킨다. 백색 고체를 0.1% TFA를 함유하는 물(2mL)에 용해시키고, 동결시키고 건조시킨다.
펩타이드를 칭량하고, 이온-스프레이 질량 분광분석법에 의해 분석하고, cAMP의 형성을 자극하는 이들의 능력을 기술한 방법(하기 참조)을 사용하여 ROS 17.2/8 세포에서 검정한다.
실시예 3
사이클로(K18-D22)[A1,2,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 5)
Ala-Ala-Ser-Glu-Ile-Gln-Leu-Nle-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-(Lys-Glu-Arg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Val 아미드
IS-MS = 3605(M+)
실시예 4
사이클로(K18-D22)[A1,3,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 6)
Ala-Val-Ala-Glu-Ile-Gln-Leu-Nle-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-(Lys-Glu-Arg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Val 아미드
IS-MS = 3617(M+)
실시예 5
사이클로(K18-D22)[A1,4,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 7)
Ala-Val-Ser-Ala-Ile-Gln-Leu-Nle-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-(Lys-Glu-
Arg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Val 아미드
IS-MS = 3575(M+)
실시예 6
사이클로(K18-D22)[A1,5,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 8)
Ala-Val-Ser-Glu-Ala-Gln-Leu-Nle-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-(Lys-Glu-
Arg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Val 아미드
IS-MS = 3591(M+)
실시예 7
사이클로(K18-D22)[A1,6,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 9)
Ala-Val-Ser-Glu-Ile-Ala-Leu-Nle-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-(Lys-Glu-Arg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Val 아미드
IS-MS = 3576(M+)
실시예 8
사이클로(K18-D22)[A1,7,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 10)
Ala-Val-Ser-Glu-Ile-Gln-Ala-Nle-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-(Lys-Glu-Arg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Val 아미드
IS-MS = 3591(M+)
실시예 9
사이클로(K18-D22)[A1,8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 81)
Ala-Val-Ser-Glu-Ile-Gln-Leu-Ala-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-(Lys-Glu-
Arg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Val 아미드
IS-MS = 3591(M+)
실시예 10
사이클로(K18-D22)[A1,9,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 11)
Ala-Val-Ser-Glu-Ile-Gln-Leu-Nle-Ala-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-(Lys-Glu-
Arg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Val 아미드
IS-MS = 3567(M+)
실시예 11
사이클로(K18-D22)[A1,10,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 12)
Ala-Val-Ser-Glu-Ile-Gln-Leu-Nle-His-Ala-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-(Lys-Glu-
Arg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Val 아미드
IS-MS = 3590(M+)
실시예 12
사이클로(K18-D22)[A1,11,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 13)
Ala-Val-Ser-Glu-Ile-Gln-Leu-Nle-His-Asn-Ala-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-(Lys-Glu-
Arg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Val 아미드
IS-MS = 3591(M+)
실시예 13
사이클로(K18-D22)[A1,12,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 14)
Ala-Val-Ser-Glu-Ile-Gln-Leu-Nle-His-Asn-Leu-Ala-Lys-His-Leu-Asn-Ser-(Lys-Glu-
Arg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Val 아미드
IS-MS = 3647(M+)
실시예 14
사이클로(K18-D22)[A1,13,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 15)
Ala-Val-Ser-Glu-Ile-Gln-Leu-Nle-His-Asn-Leu-Gly-Ala-His-Leu-Asn-Ser-(Lys-Glu-
Arg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Val 아미드
IS-MS = 3576(M+)
실시예 15
사이클로(K18-D22)[A1,14,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 16)
Ala-Val-Ser-Glu-Ile-Gln-Leu-Nle-His-Asn-Leu-Gly-Lys-Ala-Leu-Asn-Ser-(Lys-Glu-
Arg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Val 아미드
IS-MS = 3567(M+)
실시예 16
사이클로(K18-D22)[A1,15,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 17)
Ala-Val-Ser-Glu-Ile-Gln-Leu-Nle-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Ala-Asn-Ser-(Lys-Glu-
Arg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Val 아미드
IS-MS = 3591(M+)
실시예 17
사이클로(K18-D22)[A1,16,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 18)
Ala-Val-Ser-Glu-Ile-Gln-Leu-Nle-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Ala-Ser-(Lys-Glu-
Arg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Val 아미드
IS-MS = 3590(M+)
실시예 18
사이클로(K18-D22)[A1,17,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 19)
Ala-Val-Ser-Glu-Ile-Gln-Leu-Nle-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ala-(Lys-Glu-
Arg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Val 아미드
IS-MS = 3617(M+)
실시예 19 내지 34
방법 A를 사용하고 K18-D22아미드 가교로 종결시켜 미리 제조한 수지-결합된 펩타이드의 분획(0.46g, ~0.1mmol)을 Advanced ChemTech 496 MBS 기기의 96-웰 블록의 17개의 3mL-웰 사이에 고르게 분배한다. 각각의 웰에서, N-말단 Fmoc 보호 그룹을 20% 피페리딘/DMF 용액(0.5mL)을 사용하여 제거한다. 글리신을 표준 Fmoc-커플링 조건(커플링 단계당 0.5mmol Fmoc-아미노산; 잔기당 3회 커플링)을 사용하여 17개의 N-말단 위치 각각에서 규칙적으로 치환시킨, 17개의 PTH 유사체 모두의 독립적 제조를 가능하게 하는 합성 프로그램을 사용한다. 프로그램화된 합성의 완료 이후, PTH 유사체를 탈보호시키고 시약 K(1.0mL/웰)를 사용하여 2시간에 걸쳐 수지로부터 제거한다. 다음, 분해 용액을 각각 주위 온도에서 디에틸 에테르(8mL)에 가한다. 디에틸 에테르 중의 침전된 펩타이드의 생성된 불균질 혼합물을 원심분리한 다음, 상등액을 조 펩타이드로부터 따라내 버린다. 고체 펩타이드를 디에틸 에테르(8mL)의 5개 분획으로 연속적으로 세척한 다음 진공하에 건조시킨다. 백색 고체를 0.1% TFA를 함유하는 물(2mL)에 용해시키고, 동결시키고 건조시킨다.
펩타이드를 칭량하고, 이온-스프레이 질량 분광분석법에 의해 분석하고, cAMP의 형성을 자극하는 이들의 능력을 기술한 방법(하기 참조)을 사용하여 ROS 17.2/8 세포에서 검정한다.
실시예 19
사이클로(K18-D22)[G1,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 20)
Gly-Val-Ser-Glu-Ile-Gln-Leu-Nle-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-(Lys-Glu-Arg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Val 아미드
IS-MS = 3619(M+)
실시예 20
사이클로(K18-D22)[A1,G2,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 21)
Ala-Gly-Ser-Glu-Ile-Gln-Leu-Nle-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-(Lys-Glu-
Arg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Val 아미드
IS-MS = 3591(M+)
실시예 21
사이클로(K18-D22)[A1,G3,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 22)
Ala-Val-Gly-Glu-Ile-Gln-Leu-Nle-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-(Lys-Glu-
Arg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Val 아미드
IS-MS = 3603(M+)
실시예 22
사이클로(K18-D22)[A1,G4,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 23)
Ala-Val-Ser-Gly-Ile-Gln-Leu-Nle-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-(Lys-Glu-
Arg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Val 아미드
IS-MS = 3561(M+)
실시예 23
사이클로(K18-D22)[A1,G5,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 24)
Ala-Val-Ser-Glu-Gly-Gln-Leu-Nle-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-(Lys-Glu-
Arg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Val 아미드
IS-MS = 3577(M+)
실시예 24
사이클로(K18-D22)[A1,G6,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 25)
Ala-Val-Ser-Glu-Ile-Gly-Leu-Nle-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-(Lys-Glu-
Arg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Val 아미드
IS-MS = 3562(M+)
실시예 25
사이클로(K18-D22)[A1,G7,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 26)
Ala-Val-Ser-Glu-Ile-Gln-Gly-Nle-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-(Lys-Glu-
Arg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Val 아미드
IS-MS = 3577(M+)
실시예 26
사이클로(K18-D22)[A1,G8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 27)
Ala-Val-Ser-Glu-Ile-Gln-Leu-Gly-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-(Lys-Glu-
Arg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Val 아미드
IS-MS = 3577(M+)
실시예 27
사이클로(K18-D22)[A1,G9,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 28)
Ala-Val-Ser-Glu-Ile-Gln-Leu-Nle-Gly-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-(Lys-Glu-
Arg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Val 아미드
IS-MS = 3553(M+)
실시예 28
사이클로(K18-D22)[A1,G10,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 29)
Ala-Val-Ser-Glu-Ile-Gln-Leu-Nle-His-Gly-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-(Lys-Glu-
Arg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Val 아미드
IS-MS = 3576(M+)
실시예 29
사이클로(K18-D22)[A1,G11,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 30)
Ala-Val-Ser-Glu-Ile-Gln-Leu-Nle-His-Asn-Gly-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-(Lys-Glu-
Arg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Val 아미드
IS-MS = 3577(M+)
실시예 30
사이클로(K18-D22)[A1,G13,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 31)
Ala-Val-Ser-Glu-Ile-Gln-Leu-Nle-His-Asn-Leu-Gly-Gly-His-Leu-Asn-Ser-(Lys-Glu-
Arg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Val 아미드
IS-MS = 3562(M+)
실시예 31
사이클로(K18-D22)[A1,G14,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 32)
Ala-Val-Ser-Glu-Ile-Gln-Leu-Nle-His-Asn-Leu-Gly-Lys-Gly-Leu-Asn-Ser-(Lys-Glu-
Arg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Val 아미드
IS-MS = 3553(M+)
실시예 32
사이클로(K18-D22)[A1,G15,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 33)
Ala-Val-Ser-Glu-Ile-Gln-Leu-Nle-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Gly-Asn-Ser-(Lys-Glu-
Arg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Val 아미드
IS-MS = 3577(M+)
실시예 33
사이클로(K18-D22)[A1,G16,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 34)
Ala-Val-Ser-Glu-Ile-Gln-Leu-Nle-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Gly-Ser-(Lys-Glu-
Arg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Val 아미드
IS-MS = 3576(M+)
실시예 34
사이클로(K18-D22)[A1,G17,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 35)
Ala-Val-Ser-Glu-Ile-Gln-Leu-Nle-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Gly-(Lys-Glu-
Arg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Val 아미드
IS-MS = 3603(M+)
실시예 35 내지 51
방법 A를 사용하고 K18-D22아미드 가교로 종결시켜 미리 제조한 수지-결합된 펩타이드의 분획(0.46g, ~0.1mmol)을 Advanced ChemTech 496 MBS 기기의 96-웰 블록의 17개의 3mL-웰 사이에 고르게 분배한다. 각각의 웰에서, N-말단 Fmoc 보호 그룹을 20% 피페리딘/DMF 용액(0.5mL)을 사용하여 제거한다. D-프롤린을 표준 Fmoc-커플링 조건(커플링 단계당 0.5mmol Fmoc-아미노산; 잔기당 3회 커플링)을 사용하여 17개의 N-말단 위치 각각에서 규칙적으로 치환시킨, 17개의 PTH 유사체 모두의 독립적 제조를 가능하게 하는 합성 프로그램을 사용한다. 프로그램화된 합성의 완료 이후, PTH 유사체를 탈보호시키고 시약 K(1.0mL/웰)를 사용하여 2시간에 걸쳐 수지로부터 제거한다. 다음, 분해 용액을 각각 주위 온도에서 디에틸 에테르(8mL)에 가한다. 디에틸 에테르 중의 침전된 펩타이드의 생성된 불균질 혼합물을 원심분리한 다음, 상등액을 조 펩타이드로부터 따라내 버린다. 고체 펩타이드를 디에틸 에테르(8mL)의 5개 분획으로 연속적으로 세척한 다음 진공하에 건조시킨다. 백색 고체를 0.1% TFA를 함유하는 물(2mL)에 용해시키고, 동결시키고 건조시킨다.
펩타이드를 칭량하고, 이온-스프레이 질량 분광분석법에 의해 분석하고, cAMP의 형성을 자극하는 이들의 능력을 기술한 방법(하기 참조)을 사용하여 ROS 17.2/8 세포에서 검정한다.
실시예 35
사이클로(K18-D22)[D-P1,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 36)
D-Pro-Val-Ser-Glu-Ile-Gln-Leu-Nle-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-(Lys-
Glu-Arg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Val 아미드
IS-MS = 3659(M+)
실시예 36
사이클로(K18-D22)[A1,D-P2,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 82)
Ala-D-Pro-Ser-Glu-Ile-Gln-Leu-Nle-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-(Lys-
Glu-Arg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Val 아미드
IS-MS = 3631(M+)
실시예 37
사이클로(K18-D22)[A1,D-P3,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 37)
Ala-Val-D-Pro-Glu-Ile-Gln-Leu-Nle-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-(Lys-
Glu-Arg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Val 아미드
IS-MS = 3643(M+)
실시예 38
사이클로(K18-D22)[A1,D-P4,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 83)
Ala-Val-Ser-D-Pro-Ile-Gln-Leu-Nle-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-(Lys-
Glu-Arg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Val 아미드
IS-MS = 3601(M+)
실시예 39
사이클로(K18-D22)[A1,D-P5,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 84)
Ala-Val-Ser-Glu-D-Pro-Gln-Leu-Nle-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-(Lys-
Glu-Arg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Val 아미드
IS-MS = 3617(M+)
실시예 40
사이클로(K18-D22)[A1,D-P6,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 38)
Ala-Val-Ser-Glu-Ile-D-Pro-Leu-Nle-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-(Lys-
Glu-Arg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Val 아미드
IS-MS = 3602(M+)
실시예 41
사이클로(K18-D22)[A1,D-P7,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 39)
Ala-Val-Ser-Glu-Ile-Gln-D-Pro-Nle-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-(Lys-
Glu-Arg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Val 아미드
IS-MS = 3617(M+)
실시예 42
사이클로(K18-D22)[A1,D-P8,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 85)
Ala-Val-Ser-Glu-Ile-Gln-Leu-D-Pro-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-(Lys-
Glu-Arg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Val 아미드
IS-MS = 3617(M+)
실시예 43
사이클로(K18-D22)[A1,D-P9,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 40)
Ala-Val-Ser-Glu-Ile-Gln-Leu-Nle-D-Pro-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-(Lys-
Glu-Arg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Val 아미드
IS-MS = 3593(M+)
실시예 44
사이클로(K18-D22)[A1,D-P10,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 41)
Ala-Val-Ser-Glu-Ile-Gln-Leu-Nle-His-D-Pro-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-(Lys-
Glu-Arg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Val 아미드
IS-MS = 3616(M+)
실시예 45
사이클로(K18-D22)[A1,D-P11,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 86)
Ala-Val-Ser-Glu-Ile-Gln-Leu-Nle-His-Asn-D-Pro-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-(Lys-
Glu-Arg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Val 아미드
IS-MS = 3617(M+)
실시예 46
사이클로(K18-D22)[A1,D-P12,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 87)
Ala-Val-Ser-Glu-Ile-Gln-Leu-Nle-His-Asn-Leu-D-Pro-Lys-His-Leu-Asn-Ser-(Lys-
Glu-Arg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Val 아미드
IS-MS = 3673(M+)
실시예 47
사이클로(K18-D22)[A1,D-P13,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 88)
Ala-Val-Ser-Glu-Ile-Gln-Leu-Nle-His-Asn-Leu-Gly-D-Pro-His-Leu-Asn-Ser-(Lys-
Glu-Arg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Val 아미드
IS-MS = 3602(M+)
실시예 48
사이클로(K18-D22)[A1,D-P14,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 42)
Ala-Val-Ser-Glu-Ile-Gln-Leu-Nle-His-Asn-Leu-Gly-Lys-D-Pro-Leu-Asn-Ser-(Lys-
Glu-Arg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Val 아미드
IS-MS = 3593(M+)
실시예 49
사이클로(K18-D22)[A1,D-P15,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 43)
Ala-Val-Ser-Glu-Ile-Gln-Leu-Nle-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-D-Pro-Asn-Ser-(Lys-
Glu-Arg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Val 아미드
IS-MS = 3617(M+)
실시예 50
사이클로(K18-D22)[A1,D-P16,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 44)
Ala-Val-Ser-Glu-Ile-Gln-Leu-Nle-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-D-Pro-Ser-(Lys-
Glu-Arg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Val 아미드
IS-MS = 3616(M+)
실시예 51
사이클로(K18-D22)[A1,D-P17,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 45)
Ala-Val-Ser-Glu-Ile-Gln-Leu-Nle-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-D-Pro-(Lys-
Glu-Arg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Val 아미드
IS-MS = 3643(M+)
실시예 52
사이클로(K18-D22)[A1,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-34)NH2(서열 46)
Ala-Val-Ser-Glu-Ile-Gln-Leu-Nle-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-(Lys-Glu-Arg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Val-His-Asn-Phe 아미드
상기 펩타이드를 상기한 방법(방법 B)과 유사한 방식으로 제조한다. 링크아미드 MBHA 수지(0.5mmol)를 반응 용기내에 유입한 다음, 이를 프로테인 테크놀로지스 PS3 자동 펩타이드 합성기에 제공한다. 하기 아미노산을 Fmoc-염기 SPPS와 일치하는 방식으로 연속적으로 가한다: Fmoc-Phe-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Asp(OtBu)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Trp(Boc)-OH, Fmoc-Asp(OAllyl)-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Lys(Alloc)-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH 및 Fmoc-Leu-OH. 상기한 바와 같이, 수지-결합된 펩타이드를 Lys(Alloc) 및 Asp(OAllyl) 잔기의 Pd-매개된 측쇄 탈보호 및 후속적인 분자내 측쇄-대-측쇄 환화용 기기로부터 제거한다. 기술한 후처리 과정 이후, 아미드-함유 수지-결합된 펩타이드를 합성 완결용 기기로 회수한 다음 하기 아미노산을 연속적으로 가한다: Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Nle-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Val-OH 및 Fmoc-Ala-OH. 수지-결합된 펩타이드를 기기로부터 제거하고 N-말단 Fmoc 보호 그룹을 20% 피페리딘/DMF 용액(17mL)을 사용하여 5분에 걸쳐 제거한다. 수지-결합된 펩타이드를 DMF(100mL), THF(100mL) 및 디에틸 에테르(100mL)로 연속적으로 세척한다. 공기-건조된 수지를 물(2.0mL), 티오아니솔(2.0mL), 페놀(3.0g) 및 에탄디티올(1.0mL)을 함유하는 TFA 40mL에 현탁시킨다. 2시간 후에, TFA 용액을 0℃에서 3급-부틸메틸 에테르(160mL)내로 여과시켜 조 펩타이드의 침전을 초래한다. 펩타이드 혼합물을 2500rpm에서 5분 동안 원심분리한 다음 따라낸다. 조 백색 고체를 디에틸 에테르(120mL)에 재현탁시키고, 원심분리하고 따라낸다. 상기 세척 과정을 4회 반복하고 생성된 펩타이드를 진공하에 건조시키고, 0.1% TFA를 함유하는 물(100mL)에 용해시키고 동결 건고시킨다.
조 펩타이드를 역상 고성능 액체 크로마토그래피에 의해 정제하여 최종의 정제된 펩타이드 320mg을 백색 고체로서 수득한다. IS-MS: 4032(M+). 아미노산 분석: Asp/Asn: 5.00(5); Ser: 1.63(2); Glu/Gln: 3.81(4); Gly: 0.90(1); Ala: 0.85(1); Val: 2.71(3); Ile: 0.84(1); Leu: 6.35(6); Nle: 0.77(1); Phe: 1.07(1); Lys: 2.90(3); His: 2.80(2); Arg: 1.96(2); Trp: 측정되지 않음(1).
실시예 53
사이클로(D18-K22)[A1,Nle8,D18,K22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 47)
Ala-Val-Ser-Glu-Ile-Gln-Leu-Nle-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-(Asp-Glu-
Arg-Val-Lys)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Val 아미드
상기 펩타이드를 상기한 방법(방법 C)과 유사한 방식으로 제조한다. 링크 아미드 MBHA 수지(0.5mmol)를 반응 용기내에 유입한 다음, 이를 프로테인 테크놀로지스 PS3 자동 펩타이드 합성기에 제공한다. 하기 아미노산을 Fmoc-염기 SPPS와 일치하는 방식으로 연속적으로 가한다: Fmoc-Val-OH, Fmoc-Asp(OtBu)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH,Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Trp(Boc)-OH, Fmoc-Lys(Alloc)-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Asp(OAllyl)-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Nle-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Val-OH 및 Fmoc-Ala-OH. 상기한 바와 같이, 수지-결합된 펩타이드를 Lys(Alloc) 및 Asp(OAllyl) 잔기의 Pd-매개된 측쇄 탈보호 및 후속적인 분자내 측쇄-대-측쇄 환화용 기기로부터 제거한다. N-말단 Fmoc 보호 그룹을 20% 피페리딘/DMF 용액(17mL)을 사용하여 5분에 걸쳐 제거한다. 수지-결합된 펩타이드를 DMF(100mL), THF(100mL) 및 디에틸 에테르(100mL)로 연속적으로 세척한다. 공기-건조된 수지를 물(2.0mL), 티오아니솔(2.0mL), 페놀(3.0g) 및 에탄디티올(1.0mL)을 함유하는 TFA 40mL에 현탁시킨다. 2시간 후에, TFA 용액을 0℃에서 3급-부틸메틸 에테르(160mL)내로 여과시켜 조 펩타이드의 침전을 초래한다. 펩타이드 혼합물을 2500rpm에서 5분 동안 원심분리한 다음 따라낸다. 조 백색 고체를 디에틸 에테르(120mL)에 재현탁시키고, 원심분리하고 따라낸다. 상기 세척 과정을 4회 반복하고 생성된 펩타이드를 진공하에 건조시키고, 0.1% TFA를 함유하는 물(100mL)에 용해시키고 동결 건고시킨다.
조 펩타이드를 상기한 바와 같은 역상 고성능 액체 크로마토그래피에 의해 정제하여 최종의 정제된 펩타이드 252mg을 백색 고체로서 수득한다. IS-MS: 3634(M+). 아미노산 분석: Asp/Asn: 3.97(4); Ser: 1.88(2); Glu/Gln: 3.95(4);Gly: 1.00(1); Ala: 0.99(1); Val: 2.91(3); Ile: 0.87(1); Leu: 6.57(6); Nle: 0.80(1); Lys: 2.90(3); His: 2.12(2); Arg: 2.05(2); Trp: 측정되지 않음(1).
실시예 54
사이클로(O18-D22)[A1,Nle8,O18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 48)
Ala-Val-Ser-Glu-Ile-Gln-Leu-Nle-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-(Orn-Glu-Arg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Val 아미드
상기 펩타이드를 상기한 방법(방법 C)과 유사한 방식으로 제조한다. 링크 아미드 MBHA 수지(0.5mmol)를 반응 용기내에 유입한 다음, 이를 프로테인 테크놀로지스 PS3 자동 펩타이드 합성기에 제공한다. 하기 아미노산을 Fmoc-염기 SPPS와 일치하는 방식으로 연속적으로 가한다: Fmoc-Val-OH, Fmoc-Asp(OtBu)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Trp(Boc)-OH, Fmoc-Asp(OAllyl)-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Orn(Alloc)-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Nle-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Val-OH 및 Fmoc-Ala-OH. 상기한 바와 같이, 수지-결합된 펩타이드를 Orn(Alloc) 및 Asp(OAllyl) 잔기의 Pd-매개된 측쇄탈보호 및 후속적인 분자내 측쇄-대-측쇄 환화용 기기로부터 제거한다. N-말단 Fmoc 보호 그룹을 20% 피페리딘/DMF 용액(17mL)을 사용하여 5분에 걸쳐 제거한다. 수지-결합된 펩타이드를 DMF(100mL), THF(100mL) 및 디에틸 에테르(100mL)로 연속적으로 세척한다. 공기-건조된 수지를 물(2.0mL), 티오아니솔(2.0mL), 페놀(3.0g) 및 에탄디티올(1.0mL)을 함유하는 TFA 40mL에 현탁시킨다. 2시간 후에, TFA 용액을 0℃에서 3급-부틸메틸 에테르(160mL)내로 여과시켜 조 펩타이드의 침전을 초래한다. 펩타이드 혼합물을 2500rpm에서 5분 동안 원심분리한 다음 따라낸다. 조 백색 고체를 디에틸 에테르(120mL)에 재현탁시키고, 원심분리하고 따라낸다. 상기 세척 과정을 4회 반복하고 생성된 펩타이드를 진공하에 건조시키고, 0.1% TFA를 함유하는 물(100mL)에 용해시키고 동결 건고시킨다.
조 펩타이드를 상기한 바와 같은 역상 고성능 액체 크로마토그래피에 의해 정제하여 최종의 정제된 펩타이드 251mg을 백색 고체로서 수득한다. IS-MS: 3620(M+). 아미노산 분석: Asp/Asn: 4.00(4); Ser: 1.76(2); Glu/Gln: 3.98(4); Gly: 0.98(1); Ala: 0.95(1); Val: 2.94(3); Ile: 0.88(1); Leu: 6.52(6); Nle: 0.84(1); Lys: 2.03(3); His: 1.94(2); Arg: 2.01(2); Trp: 측정되지 않음(1).
실시예 55
사이클로(D18-O22)[A1,Nle8,D18,O22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 49)
Ala-Val-Ser-Glu-Ile-Gln-Leu-Nle-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-(Asp-Glu-Arg-Val-Orn)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Val 아미드
상기 펩타이드를 상기한 방법(방법 C)과 유사한 방식으로 제조한다. 링크 아미드 MBHA 수지(0.5mmol)를 반응 용기내에 유입한 다음, 이를 프로테인 테크놀로지스 PS3 자동 펩타이드 합성기에 제공한다. 하기 아미노산을 Fmoc-염기 SPPS와 일치하는 방식으로 연속적으로 가한다: Fmoc-Val-OH, Fmoc-Asp(OtBu)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Trp(Boc)-OH, Fmoc-Orn(Alloc)-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Asp(OAllyl)-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Nle-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Val-OH 및 Fmoc-Ala-OH. 상기한 바와 같이, 수지-결합된 펩타이드를 Orn(Alloc) 및 Asp(OAllyl) 잔기의 Pd-매개된 측쇄 탈보호 및 후속적인 분자내 측쇄-대-측쇄 환화용 기기로부터 제거한다. N-말단 Fmoc 보호 그룹을 20% 피페리딘/DMF 용액(17mL)을 사용하여 5분에 걸쳐 제거한다. 수지-결합된 펩타이드를 DMF(100mL), THF(100mL) 및 디에틸 에테르(100mL)로 연속적으로 세척한다. 공기-건조된 수지를 물(2.0mL), 티오아니솔(2.0mL), 페놀(3.0g) 및 에탄디티올(1.0mL)을 함유하는 TFA 40mL에 현탁시킨다. 2시간 후에, TFA 용액을 0℃에서 3급-부틸메틸 에테르(160mL)내로 여과시켜 조 펩타이드의 침전을 초래한다. 펩타이드 혼합물을 2500rpm에서 5분 동안 원심분리한 다음 따라낸다. 조 백색 고체를 디에틸 에테르(120mL)에 재현탁시키고, 원심분리하고 따라낸다. 상기 세척 과정을 4회 반복하고 생성된 펩타이드를 진공하에 건조시키고, 0.1% TFA를 함유하는 물(100mL)에 용해시키고 동결 건고시킨다.
조 펩타이드를 상기한 바와 같은 역상 고성능 액체 크로마토그래피에 의해 정제하여 최종의 정제된 펩타이드 414mg을 백색 고체로서 수득한다. IS-MS: 3620(M+). 아미노산 분석: Asp/Asn: 4.00(4); Ser: 1.81(2); Glu/Gln: 3.93(4); Gly: 0.99(1); Ala: 0.97(1); Val: 2.67(3); Ile: 0.87(1); Leu: 6.39(6); Nle: 0.79(1); Lys: 1.98(3); His: 1.97(2); Arg: 1.97(2); Trp: 측정되지 않음(1).
실시예 56
사이클로(K18-E22)[A1,Nle8,K18,E22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 50)
Ala-Val-Ser-Glu-Ile-Gln-Leu-Nle-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-(Lys-Glu-Arg-Val-Glu)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Val 아미드
상기 펩타이드를 상기한 방법(방법 C)과 유사한 방식으로 제조한다. 링크 아미드 MBHA 수지(0.5mmol)를 반응 용기내에 유입한 다음, 이를 프로테인 테크놀로지스 PS3 자동 펩타이드 합성기에 제공한다. 하기 아미노산을 Fmoc-염기 SPPS와 일치하는 방식으로 연속적으로 가한다: Fmoc-Val-OH, Fmoc-Asp(OtBu)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Trp(Boc)-OH, Fmoc-Glu(OAllyl)-OH,Fmoc-Val-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Lys(Alloc)-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Nle-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Val-OH 및 Fmoc-Ala-OH. 상기한 바와 같이, 수지-결합된 펩타이드를 Lys(Alloc) 및 Glu(OAllyl) 잔기의 Pd-매개된 측쇄 탈보호 및 후속적인 분자내 측쇄-대-측쇄 환화용 기기로부터 제거한다. N-말단 Fmoc 보호 그룹을 20% 피페리딘/DMF 용액(17mL)을 사용하여 5분에 걸쳐 제거한다. 수지-결합된 펩타이드를 DMF(100mL), THF(100mL) 및 디에틸 에테르(100mL)로 연속적으로 세척한다. 공기-건조된 수지를 물(2.0mL), 티오아니솔(2.0mL), 페놀(3.0g) 및 에탄디티올(1.0mL)을 함유하는 TFA 40mL에 현탁시킨다. 2시간 후에, TFA 용액을 0℃에서 3급-부틸메틸 에테르(160mL)내로 여과시켜 조 펩타이드의 침전을 초래한다. 펩타이드 혼합물을 2500rpm에서 5분 동안 원심분리한 다음 따라낸다. 조 백색 고체를 디에틸 에테르(120mL)에 재현탁시키고, 원심분리하고 따라낸다. 상기 세척 과정을 4회 반복하고 생성된 펩타이드를 진공하에 건조시키고, 0.1% TFA를 함유하는 물(100mL)에 용해시키고 동결 건고시킨다.
조 펩타이드를 상기한 바와 같은 역상 고성능 액체 크로마토그래피에 의해 정제하여 최종의 정제된 펩타이드 95mg을 백색 고체로서 수득한다. IS-MS: 3648(M+). 아미노산 분석: Asp/Asn: 3.00(3); Ser: 1.70(2); Glu/Gln: 4.75(5); Gly: 0.93(1); Ala: 0.89(1); Val: 2.80(3); Ile: 0.89(1); Leu: 6.16(6); Nle:0.87(1); Lys: 2.99(3); His: 1.86(2); Arg: 1.90(2); Trp: 측정되지 않음(1).
실시예 57
사이클로(O18-E22)[A1,Nle8,O18,E22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 51)
Ala-Val-Ser-Glu-Ile-Gln-Leu-Nle-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-(Orn-Glu-Arg-Val-Glu)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Val 아미드
상기 펩타이드를 상기한 방법(방법 C)과 유사한 방식으로 제조한다. 링크 아미드 MBHA 수지(0.5mmol)를 반응 용기내에 유입한 다음, 이를 프로테인 테크놀로지스 PS3 자동 펩타이드 합성기에 제공한다. 하기 아미노산을 Fmoc-염기 SPPS와 일치하는 방식으로 연속적으로 가한다: Fmoc-Val-OH, Fmoc-Asp(OtBu)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Trp(Boc)-OH, Fmoc-Glu(OAllyl)-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Orn(Alloc)-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Nle-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Val-OH 및 Fmoc-Ala-OH. 상기한 바와 같이, 수지-결합된 펩타이드를 Orn(Alloc) 및 Glu(OAllyl) 잔기의 Pd-매개된 측쇄 탈보호 및 후속적인 분자내 측쇄-대-측쇄 환화용 기기로부터 제거한다. N-말단Fmoc 보호 그룹을 20% 피페리딘/DMF 용액(17mL)을 사용하여 5분에 걸쳐 제거한다. 수지-결합된 펩타이드를 DMF(100mL), THF(100mL) 및 디에틸 에테르(100mL)로 연속적으로 세척한다. 공기-건조된 수지를 물(2.0mL), 티오아니솔(2.0mL), 페놀(3.0g) 및 에탄디티올(1.0mL)을 함유하는 TFA 40mL에 현탁시킨다. 2시간 후에, TFA 용액을 0℃에서 3급-부틸메틸 에테르(160mL)내로 여과시켜 조 펩타이드의 침전을 초래한다. 펩타이드 혼합물을 2500rpm에서 5분 동안 원심분리한 다음 따라낸다. 조 백색 고체를 디에틸 에테르(120mL)에 재현탁시키고, 원심분리하고 따라낸다. 상기 세척 과정을 4회 반복하고 생성된 펩타이드를 진공하에 건조시키고, 0.1% TFA를 함유하는 물(100mL)에 용해시키고 동결 건고시킨다.
조 펩타이드를 상기한 바와 같은 역상 고성능 액체 크로마토그래피에 의해 정제하여 최종의 정제된 펩타이드 237mg을 백색 고체로서 수득한다. IS-MS: 3634(M+). 아미노산 분석: Asp/Asn: 3.09(3); Ser: 1.74(2); Glu/Gln: 5.02(5); Gly: 0.97(1); Ala: 0.93(1); Val: 2.95(3); Ile: 0.88(1); Leu: 6.44(6); Nle: 0.85(1); Lys: 2.06(2); His: 1.89(2); Arg: 1.98(2); Trp: 측정되지 않음(1).
실시예 58
사이클로(K18-D22)[A1,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-30)NH2(서열 52)
Ala-Val-Ser-Glu-Ile-Gln-Leu-Nle-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-(Lys-Glu-Arg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp 아미드
상기 펩타이드를 상기한 방법(방법 C)과 유사한 방식으로 제조한다. 링크 아미드 MBHA 수지(0.5mmol)를 반응 용기내에 유입한 다음, 이를 프로테인 테크놀로지스 PS3 자동 펩타이드 합성기에 제공한다. 하기 아미노산을 Fmoc-염기 SPPS와 일치하는 방식으로 연속적으로 가한다: Fmoc-Asp(OtBu)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Trp(Boc)-OH, Fmoc-Asp(OAllyl)-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Lys(Alloc)-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Nle-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Val-OH 및 Fmoc-Ala-OH. 상기한 바와 같이, 수지-결합된 펩타이드를 Lys(Alloc) 및 Asp(OAllyl) 잔기의 Pd-매개된 측쇄 탈보호 및 후속적인 분자내 측쇄-대-측쇄 환화용 기기로부터 제거한다. N-말단 Fmoc 보호 그룹을 20% 피페리딘/DMF 용액(17mL)을 사용하여 5분에 걸쳐 제거한다. 수지-결합된 펩타이드를 DMF(100mL), THF(100mL) 및 디에틸 에테르(100mL)로 연속적으로 세척한다. 공기-건조된 수지를 물(2.0mL), 티오아니솔(2.0mL), 페놀(3.0g) 및 에탄디티올(1.0mL)을 함유하는 TFA 40mL에 현탁시킨다. 2시간 후에, TFA 용액을 0℃에서 3급-부틸메틸 에테르(160mL)내로 여과시켜 조 펩타이드의 침전을 초래한다. 펩타이드 혼합물을 2500rpm에서 5분 동안 원심분리한 다음 따라낸다. 조 백색 고체를 디에틸 에테르(120mL)에 재현탁시키고, 원심분리하고 따라낸다. 상기 세척과정을 4회 반복하고 생성된 펩타이드를 진공하에 건조시키고, 0.1% TFA를 함유하는 물(100mL)에 용해시키고 동결 건고시킨다.
조 펩타이드를 역상 고성능 액체 크로마토그래피에 의해 정제하여 최종의 정제된 펩타이드 53mg을 백색 고체로서 수득한다. IS-MS: 3534(M+). 아미노산 분석: Asp/Asn: 4.00(4); Ser: 1.71(2); Glu/Gln: 3.89(4); Gly: 0.93(1); Ala: 0.92(1); Val: 1.87(3); Ile: 0.90(1); Leu: 6.46(6); Nle: 0.82(1); Lys: 2.89(3); His: 2.01(2); Arg: 2.03(2); Trp: 측정되지 않음(1).
실시예 59
사이클로(K18-D22)[A1,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-29)NH2(서열 53)
Ala-Val-Ser-Glu-Ile-Gln-Leu-Nle-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-(Lys-Glu-Arg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln 아미드
상기 펩타이드를 상기한 방법(방법 C)과 유사한 방식으로 제조한다. 링크 아미드 MBHA 수지(0.5mmol)를 반응 용기내에 유입한 다음, 이를 프로테인 테크놀로지스 PS3 자동 펩타이드 합성기에 제공한다. 하기 아미노산을 Fmoc-염기 SPPS와 일치하는 방식으로 연속적으로 가한다: Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Trp(Boc)-OH, Fmoc-Asp(OAllyl)-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Lys(Alloc)-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH,Fmoc-Leu-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Nle-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Val-OH 및 Fmoc-Ala-OH. 상기한 바와 같이, 수지-결합된 펩타이드를 Lys(Alloc) 및 Asp(OAllyl) 잔기의 Pd-매개된 측쇄 탈보호 및 후속적인 분자내 측쇄-대-측쇄 환화용 기기로부터 제거한다. N-말단 Fmoc 보호 그룹을 20% 피페리딘/DMF 용액(17mL)을 사용하여 5분에 걸쳐 제거한다. 수지-결합된 펩타이드를 DMF(100mL), THF(100mL) 및 디에틸 에테르(100mL)로 연속적으로 세척한다. 공기-건조된 수지를 물(2.0mL), 티오아니솔(2.0mL), 페놀(3.0g) 및 에탄디티올(1.0mL)을 함유하는 TFA 40mL에 현탁시킨다. 2시간 후에, TFA 용액을 0℃에서 3급-부틸메틸 에테르(160mL)내로 여과시켜 조 펩타이드의 침전을 초래한다. 펩타이드 혼합물을 2500rpm에서 5분 동안 원심분리한 다음 따라낸다. 조 백색 고체를 디에틸 에테르(120mL)에 재현탁시키고, 원심분리하고 따라낸다. 상기 세척 과정을 4회 반복하고 생성된 펩타이드를 진공하에 건조시키고, 0.1% TFA를 함유하는 물(100mL)에 용해시키고 동결 건고시킨다.
조 펩타이드를 상기한 바와 같은 역상 고성능 액체 크로마토그래피에 의해 정제하여 최종의 정제된 펩타이드 100mg을 백색 고체로서 수득한다. IS-MS: 3419(M+). 아미노산 분석: Asp/Asn: 2.85(3); Ser: 1.73(2); Glu/Gln: 3.98(4); Gly: 1.00(1); Ala: 0.98(1); Val: 2.00(2); Ile: 0.93(1); Leu: 6.47(6); Nle: 0.97(1); Lys: 2.99(3); His: 2.09(2); Arg: 1.99(2); Trp: 측정되지 않음(1).
실시예 60
사이클로(K18-D22)[A1,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-28)NH2(서열 54)
Ala-Val-Ser-Glu-Ile-Gln-Leu-Nle-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-(Lys-Glu-Arg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu 아미드
상기 펩타이드를 상기한 방법(방법 C)과 유사한 방식으로 제조한다. 링크 아미드 MBHA 수지(0.5mmol)를 반응 용기내에 유입한 다음, 이를 프로테인 테크놀로지스 PS3 자동 펩타이드 합성기에 제공한다. 하기 아미노산을 Fmoc-염기 SPPS와 일치하는 방식으로 연속적으로 가한다: Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Trp(Boc)-OH, Fmoc-Asp(OAllyl)-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Lys(Alloc)-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Nle-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Val-OH 및 Fmoc-Ala-OH. 상기한 바와 같이, 수지-결합된 펩타이드를 Lys(Alloc) 및 Asp(OAllyl) 잔기의 Pd-매개된 측쇄 탈보호 및 후속적인 분자내 측쇄-대-측쇄 환화용 기기로부터 제거한다. N-말단 Fmoc 보호 그룹을 20% 피페리딘/DMF 용액(17mL)을 사용하여 5분에 걸쳐 제거한다. 수지-결합된 펩타이드를 DMF(100mL), THF(100mL) 및 디에틸 에테르(100mL)로 연속적으로 세척한다. 공기-건조된 수지를 물(2.0mL), 티오아니솔(2.0mL), 페놀(3.0g) 및 에탄디티올(1.0mL)을 함유하는 TFA 40mL에 현탁시킨다. 2시간 후에, TFA 용액을 0℃에서 3급-부틸메틸 에테르(160mL)내로 여과시켜 조 펩타이드의 침전을 초래한다. 펩타이드 혼합물을 2500rpm에서 5분 동안 원심분리한 다음 따라낸다. 조 백색 고체를 디에틸 에테르(120mL)에 재현탁시키고, 원심분리하고 따라낸다. 상기 세척 과정을 4회 반복하고 생성된 펩타이드를 진공하에 건조시키고, 0.1% TFA를 함유하는 물(100mL)에 용해시키고 동결 건고시킨다.
조 펩타이드를 상기한 바와 같은 역상 고성능 액체 크로마토그래피에 의해 정제하여 최종의 정제된 펩타이드 51mg을 백색 고체로서 수득한다. IS-MS: 3291(M+). 아미노산 분석: Asp/Asn: 2.81(3); Ser: 1.71(2); Glu/Gln: 2.86(3); Gly: 0.97(1); Ala: 1.00(1); Val: 1.93(2); Ile: 0.91(1); Leu: 6.30(6); Nle: 0.92(1); Lys: 2.88(3); His: 2.03(2); Arg: 1.93(2); Trp: 측정되지 않음(1).
실시예 61
사이클로(K18-D22)[A1,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-27)NH2(서열 55)
Ala-Val-Ser-Glu-Ile-Gln-Leu-Nle-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-(Lys-Glu-Arg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu 아미드
상기 펩타이드를 상기한 방법(방법 C)과 유사한 방식으로 제조한다. 링크아미드 MBHA 수지(0.5mmol)를 반응 용기내에 유입한 다음, 이를 프로테인 테크놀로지스 PS3 자동 펩타이드 합성기에 제공한다. 하기 아미노산을 Fmoc-염기 SPPS와 일치하는 방식으로 연속적으로 가한다: Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Trp(Boc)-OH, Fmoc-Asp(OAllyl)-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Lys(Alloc)-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Nle-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Val-OH 및 Fmoc-Ala-OH. 상기한 바와 같이, 수지-결합된 펩타이드를 Lys(Alloc) 및 Asp(OAllyl) 잔기의 Pd-매개된 측쇄 탈보호 및 후속적인 분자내 측쇄-대-측쇄 환화용 기기로부터 제거한다. N-말단 Fmoc 보호 그룹을 20% 피페리딘/DMF 용액(17mL)을 사용하여 5분에 걸쳐 제거한다. 수지-결합된 펩타이드를 DMF(100mL), THF(100mL) 및 디에틸 에테르(100mL)로 연속적으로 세척한다. 공기-건조된 수지를 물(2.0mL), 티오아니솔(2.0mL), 페놀(3.0g) 및 에탄디티올(1.0mL)을 함유하는 TFA 40mL에 현탁시킨다. 2시간 후에, TFA 용액을 0℃에서 3급-부틸메틸 에테르(160mL)내로 여과시켜 조 펩타이드의 침전을 초래한다. 펩타이드 혼합물을 2500rpm에서 5분 동안 원심분리한 다음 따라낸다. 조 백색 고체를 디에틸 에테르(120mL)에 재현탁시키고, 원심분리하고 따라낸다. 상기 세척 과정을 4회 반복하고 생성된 펩타이드를 진공하에 건조시키고, 0.1% TFA를 함유하는 물(100mL)에 용해시키고 동결 건고시킨다.
조 펩타이드를 상기한 바와 같은 역상 고성능 액체 크로마토그래피에 의해 정제하여 최종의 정제된 펩타이드 65mg을 백색 고체로서 수득한다. IS-MS: 3178(M+). 아미노산 분석: Asp/Asn: 2.74(3); Ser: 1.75(2); Glu/Gln: 2.88(3); Gly: 0.95(1); Ala: 1.00(1); Val: 1.94(2); Ile: 0.93(1); Leu: 5.16(5); Nle: 0.88(1); Lys: 2.84(3); His: 2.01(2); Arg: 1.93(2); Trp: 측정되지 않음(1).
실시예 62
사이클로(K18-D22)[K18,D22,L27]hPTH(10-31)NH2(서열 56)
Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-(Lys-Glu-Arg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Val 아미드
상기 펩타이드를 상기한 방법(방법 B)과 유사한 방식으로 제조한다. 링크 아미드 MBHA 수지(0.5mmol)를 반응 용기내에 유입한 다음, 이를 프로테인 테크놀로지스 PS3 자동 펩타이드 합성기에 제공한다. 하기 아미노산을 Fmoc-염기 SPPS와 일치하는 방식으로 연속적으로 가한다: Fmoc-Val-OH, Fmoc-Asp(OtBu)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Trp(Boc)-OH, Fmoc-Asp(OAllyl)-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Lys(Alloc)-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH 및 Fmoc-Leu-OH. 상기한 바와 같이, 수지-결합된 펩타이드를 Lys(Alloc) 및 Asp(OAllyl) 잔기의 Pd-매개된 측쇄 탈보호 및 후속적인 분자내 측쇄-대-측쇄 환화용 기기로부터 제거한다. 기술한 후처리 과정 이후, 아미드-함유 수지-결합된 펩타이드를 합성 완결용 기기로 회수한 다음 하기 아미노산을 연속적으로 가한다: Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Leu-OH 및 Fmoc-Asn(Trt)-OH. 다음, 수지-결합된 펩타이드의 분획(~50mg)을 기기로부터 제거하고 N-말단 Fmoc 보호 그룹을 20% 피페리딘/DMF 용액(1mL)을 사용하여 5분에 걸쳐 제거한다. 수지-결합된 펩타이드를 DMF(10mL), THF(10mL) 및 디에틸 에테르(10mL)로 연속적으로 세척한다. 공기-건조된 수지를 상기한 비율로 물, 티오아니솔, 페놀 및 에탄디티올을 함유하는 TFA 2mL에 현탁시킨다. 2시간 후에, TFA 용액을 0℃에서 3급-부틸메틸 에테르(8mL)내로 여과시켜 조 펩타이드의 침전을 초래한다. 펩타이드 혼합물을 2500rpm에서 5분 동안 원심분리한 다음 따라낸다. 조 백색 고체를 디에틸 에테르(10mL)에 재현탁시키고, 원심분리하고 따라낸다. 상기 세척 과정을 4회 반복하고 생성된 펩타이드를 진공하에 건조시키고, 0.1% TFA를 함유하는 물(10mL)에 용해시키고 동결 건고시킨다. IS-MS: 2642(M+).
실시예 63
사이클로(K18-D22)[K18,D22,L27]hPTH(9-31)NH2(서열 57)
His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-(Lys-Glu-Arg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Val 아미드
상기 펩타이드를 상기한 방법(방법 B)과 유사한 방식으로 제조한다. 링크 아미드 MBHA 수지(0.5mmol)를 반응 용기내에 유입한 다음, 이를 프로테인 테크놀로지스 PS3 자동 펩타이드 합성기에 제공한다. 하기 아미노산을 Fmoc-염기 SPPS와 일치하는 방식으로 연속적으로 가한다: Fmoc-Val-OH, Fmoc-Asp(OtBu)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Trp(Boc)-OH, Fmoc-Asp(OAllyl)-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Lys(Alloc)-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH 및 Fmoc-Leu-OH. 상기한 바와 같이, 수지-결합된 펩타이드를 Lys(Alloc) 및 Asp(OAllyl) 잔기의 Pd-매개된 측쇄 탈보호 및 후속적인 분자내 측쇄-대-측쇄 환화용 기기로부터 제거한다. 기술한 후처리 과정 이후, 아미드-함유 수지-결합된 펩타이드를 합성 완결용 기기로 회수한 다음 하기 아미노산을 연속적으로 가한다: Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH 및 Fmoc-His(Trt)-OH. 다음, 수지-결합된 펩타이드의 분획(~50mg)을 기기로부터 제거하고 N-말단 Fmoc 보호 그룹을 20% 피페리딘/DMF 용액(1mL)을 사용하여 5분에 걸쳐 제거한다. 수지-결합된 펩타이드를 DMF(10mL), THF(10mL) 및 디에틸 에테르(10mL)로 연속적으로 세척한다. 공기-건조된 수지를 상기한 비율로 물, 티오아니솔, 페놀 및 에탄디티올을 함유하는 TFA 2mL에 현탁시킨다. 2시간 후에, TFA 용액을 0℃에서 3급-부틸메틸 에테르(8mL)내로 여과시켜 조 펩타이드의 침전을 초래한다. 펩타이드 혼합물을 2500rpm에서 5분 동안 원심분리한 다음 따라낸다. 조 백색 고체를 디에틸 에테르(10mL)에 재현탁시키고, 원심분리하고 따라낸다. 상기 세척 과정을 4회 반복하고 생성된 펩타이드를 진공하에 건조시키고, 0.1% TFA를 함유하는 물(10mL)에 용해시키고 동결 건고시킨다. IS-MS: 2780(M+).
실시예 64
사이클로(K18-D22)[Nle8,K18,D22,L27]hPTH(8-31)NH2(서열 58)
Nle-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-(Lys-Glu-Arg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Val 아미드
상기 펩타이드를 상기한 방법(방법 B)과 유사한 방식으로 제조한다. 링크 아미드 MBHA 수지(0.5mmol)를 반응 용기내에 유입한 다음, 이를 프로테인 테크놀로지스 PS3 자동 펩타이드 합성기에 제공한다. 하기 아미노산을 Fmoc-염기 SPPS와 일치하는 방식으로 연속적으로 가한다: Fmoc-Val-OH, Fmoc-Asp(OtBu)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Trp(Boc)-OH, Fmoc-Asp(OAllyl)-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Lys(Alloc)-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH 및 Fmoc-Leu-OH. 상기한 바와 같이, 수지-결합된 펩타이드를 Lys(Alloc) 및 Asp(OAllyl) 잔기의 Pd-매개된 측쇄 탈보호 및 후속적인 분자내 측쇄-대-측쇄 환화용 기기로부터 제거한다. 기술한 후처리 과정 이후, 아미드-함유 수지-결합된 펩타이드를 합성 완결용 기기로 회수한 다음 하기 아미노산을 연속적으로 가한다: Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH 및 Fmoc-Nle-OH. 다음, 수지-결합된 펩타이드의 분획(~50mg)을 기기로부터 제거하고 N-말단 Fmoc 보호 그룹을 20% 피페리딘/DMF 용액(1mL)을 사용하여 5분에 걸쳐 제거한다. 수지-결합된 펩타이드를 DMF(10mL), THF(10mL) 및 디에틸 에테르(10mL)로 연속적으로 세척한다. 공기-건조된 수지를 상기한 비율로 물, 티오아니솔, 페놀 및 에탄디티올을 함유하는 TFA 2mL에 현탁시킨다. 2시간 후에, TFA 용액을 0℃에서 3급-부틸메틸 에테르(8mL)내로 여과시켜 조 펩타이드의 침전을 초래한다. 펩타이드 혼합물을 2500rpm에서 5분 동안 원심분리한 다음 따라낸다. 조 백색 고체를 디에틸 에테르(10mL)에 재현탁시키고, 원심분리하고 따라낸다. 상기 세척 과정을 4회 반복하고 생성된 펩타이드를 진공하에 건조시키고, 0.1% TFA를 함유하는 물(10mL)에 용해시키고 동결 건고시킨다. IS-MS: 2892(M+).
실시예 65
사이클로(K18-D22)[Nle8,K18,D22,L27]hPTH(7-31)NH2(서열 59)
Leu-Nle-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-(Lys-Glu-Arg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Val 아미드
상기 펩타이드를 상기한 방법(방법 B)과 유사한 방식으로 제조한다. 링크 아미드 MBHA 수지(0.5mmol)를 반응 용기내에 유입한 다음, 이를 프로테인 테크놀로지스 PS3 자동 펩타이드 합성기에 제공한다. 하기 아미노산을 Fmoc-염기 SPPS와 일치하는 방식으로 연속적으로 가한다: Fmoc-Val-OH, Fmoc-Asp(OtBu)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Trp(Boc)-OH, Fmoc-Asp(OAllyl)-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Lys(Alloc)-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH 및 Fmoc-Leu-OH. 상기한 바와 같이, 수지-결합된 펩타이드를 Lys(Alloc) 및 Asp(OAllyl) 잔기의 Pd-매개된 측쇄 탈보호 및 후속적인 분자내 측쇄-대-측쇄 환화용 기기로부터 제거한다. 기술한 후처리 과정 이후, 아미드-함유 수지-결합된 펩타이드를 합성 완결용 기기로 회수한 다음 하기 아미노산을 연속적으로 가한다: Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Nle-OH 및 Fmoc-Leu-OH. 다음, 수지-결합된 펩타이드의 분획(~50mg)을 기기로부터 제거하고 N-말단 Fmoc 보호 그룹을 20% 피페리딘/DMF 용액(1mL)을 사용하여 5분에 걸쳐 제거한다. 수지-결합된 펩타이드를 DMF(10mL), THF(10mL) 및 디에틸 에테르(10mL)로 연속적으로 세척한다. 공기-건조된 수지를 상기한 비율로 물, 티오아니솔, 페놀 및 에탄디티올을 함유하는 TFA 2mL에 현탁시킨다. 2시간 후에, TFA 용액을 0℃에서 3급-부틸메틸 에테르(8mL)내로 여과시켜 조 펩타이드의 침전을 초래한다. 펩타이드 혼합물을 2500rpm에서 5분 동안 원심분리한 다음 따라낸다. 조 백색 고체를 디에틸 에테르(10mL)에 재현탁시키고, 원심분리하고 따라낸다. 상기 세척 과정을 4회 반복하고 생성된 펩타이드를 진공하에 건조시키고, 0.1% TFA를 함유하는 물(10mL)에용해시키고 동결 건고시킨다. IS-MS: 3006(M+).
실시예 66
사이클로(K18-D22)[Nle8,K18,D22,L27]hPTH(6-31)NH2(서열 60)
Gln-Leu-Nle-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-(Lys-Glu-Arg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Val 아미드
상기 펩타이드를 상기한 방법(방법 B)과 유사한 방식으로 제조한다. 링크 아미드 MBHA 수지(0.5mmol)를 반응 용기내에 유입한 다음, 이를 프로테인 테크놀로지스 PS3 자동 펩타이드 합성기에 제공한다. 하기 아미노산을 Fmoc-염기 SPPS와 일치하는 방식으로 연속적으로 가한다: Fmoc-Val-OH, Fmoc-Asp(OtBu)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Trp(Boc)-OH, Fmoc-Asp(OAllyl)-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Lys(Alloc)-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH 및 Fmoc-Leu-OH. 상기한 바와 같이, 수지-결합된 펩타이드를 Lys(Alloc) 및 Asp(OAllyl) 잔기의 Pd-매개된 측쇄 탈보호 및 후속적인 분자내 측쇄-대-측쇄 환화용 기기로부터 제거한다. 기술한 후처리 과정 이후, 아미드-함유 수지-결합된 펩타이드를 합성 완결용 기기로 회수한 다음 하기 아미노산을 연속적으로 가한다: Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Nle-OH, Fmoc-Leu-OH 및 Fmoc-Gln(Trt)-OH. 다음, 수지-결합된 펩타이드의 분획(~50mg)을 기기로부터 제거하고 N-말단 Fmoc 보호 그룹을 20% 피페리딘/DMF 용액(1mL)을 사용하여 5분에 걸쳐 제거한다. 수지-결합된 펩타이드를 DMF(10mL), THF(10mL) 및 디에틸 에테르(10mL)로 연속적으로 세척한다. 공기-건조된 수지를 상기한 비율로 물, 티오아니솔, 페놀 및 에탄디티올을 함유하는 TFA 2mL에 현탁시킨다. 2시간 후에, TFA 용액을 0℃에서 3급-부틸메틸 에테르(8mL)내로 여과시켜 조 펩타이드의 침전을 초래한다. 펩타이드 혼합물을 2500rpm에서 5분 동안 원심분리한 다음 따라낸다. 조 백색 고체를 디에틸 에테르(10mL)에 재현탁시키고, 원심분리하고 따라낸다. 상기 세척 과정을 4회 반복하고 생성된 펩타이드를 진공하에 건조시키고, 0.1% TFA를 함유하는 물(10mL)에 용해시키고 동결 건고시킨다. IS-MS: 3135(M+).
실시예 67
사이클로(K18-D22)[Nle8,K18,D22,L27]hPTH(5-31)NH2(서열 61)
Ile-Gln-Leu-Nle-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-(Lys-Glu-Arg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Val 아미드
상기 펩타이드를 상기한 방법(방법 B)과 유사한 방식으로 제조한다. 링크 아미드 MBHA 수지(0.5mmol)를 반응 용기내에 유입한 다음, 이를 프로테인 테크놀로지스 PS3 자동 펩타이드 합성기에 제공한다. 하기 아미노산을 Fmoc-염기 SPPS와 일치하는 방식으로 연속적으로 가한다: Fmoc-Val-OH, Fmoc-Asp(OtBu)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Trp(Boc)-OH, Fmoc-Asp(OAllyl)-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Lys(Alloc)-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH 및 Fmoc-Leu-OH. 상기한 바와 같이, 수지-결합된 펩타이드를 Lys(Alloc) 및 Asp(OAllyl) 잔기의 Pd-매개된 측쇄 탈보호 및 후속적인 분자내 측쇄-대-측쇄 환화용 기기로부터 제거한다. 기술한 후처리 과정 이후, 아미드-함유 수지-결합된 펩타이드를 합성 완결용 기기로 회수한 다음 하기 아미노산을 연속적으로 가한다: Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Nle-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH 및 Fmoc-Ile-OH. 다음, 수지-결합된 펩타이드의 분획(~50mg)을 기기로부터 제거하고 N-말단 Fmoc 보호 그룹을 20% 피페리딘/DMF 용액(1mL)을 사용하여 5분에 걸쳐 제거한다. 수지-결합된 펩타이드를 DMF(10mL), THF(10mL) 및 디에틸 에테르(10mL)로 연속적으로 세척한다. 공기-건조된 수지를 상기한 비율로 물, 티오아니솔, 페놀 및 에탄디티올을 함유하는 TFA 2mL에 현탁시킨다. 2시간 후에, TFA 용액을 0℃에서 3급-부틸메틸 에테르(8mL)내로 여과시켜 조 펩타이드의 침전을 초래한다. 펩타이드 혼합물을 2500rpm에서 5분 동안 원심분리한 다음 따라낸다. 조 백색 고체를 디에틸 에테르(10mL)에 재현탁시키고, 원심분리하고 따라낸다. 상기 세척 과정을 4회 반복하고 생성된 펩타이드를 진공하에 건조시키고, 0.1% TFA를 함유하는 물(10mL)에 용해시키고 동결 건고시킨다. IS-MS: 3247(M+).
실시예 68
사이클로(K18-D22)[Nle8,K18,D22,L27]hPTH(4-31)NH2(서열 62)
Glu-Ile-Gln-Leu-Nle-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-(Lys-Glu-Arg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Val 아미드
상기 펩타이드를 상기한 방법(방법 B)과 유사한 방식으로 제조한다. 링크 아미드 MBHA 수지(0.5mmol)를 반응 용기내에 유입한 다음, 이를 프로테인 테크놀로지스 PS3 자동 펩타이드 합성기에 제공한다. 하기 아미노산을 Fmoc-염기 SPPS와 일치하는 방식으로 연속적으로 가한다: Fmoc-Val-OH, Fmoc-Asp(OtBu)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Trp(Boc)-OH, Fmoc-Asp(OAllyl)-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Lys(Alloc)-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH 및 Fmoc-Leu-OH. 상기한 바와 같이, 수지-결합된 펩타이드를 Lys(Alloc) 및 Asp(OAllyl) 잔기의 Pd-매개된 측쇄 탈보호 및 후속적인 분자내 측쇄-대-측쇄 환화용 기기로부터 제거한다. 기술한 후처리 과정 이후, 아미드-함유 수지-결합된 펩타이드를 합성 완결용 기기로 회수한 다음 하기 아미노산을 연속적으로 가한다: Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Nle-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH 및 Fmoc-Glu(OtBu)-OH. 다음, 수지-결합된 펩타이드의 분획(~50mg)을 기기로부터 제거하고 N-말단 Fmoc 보호 그룹을 20% 피페리딘/DMF 용액(1mL)을 사용하여 5분에 걸쳐 제거한다. 수지-결합된 펩타이드를 DMF(10mL), THF(10mL) 및 디에틸 에테르(10mL)로 연속적으로 세척한다. 공기-건조된 수지를 상기한 비율로 물, 티오아니솔, 페놀 및 에탄디티올을 함유하는 TFA 2mL에 현탁시킨다. 2시간 후에, TFA 용액을 0℃에서 3급-부틸메틸 에테르(8mL)내로 여과시켜 조 펩타이드의 침전을 초래한다. 펩타이드 혼합물을 2500rpm에서 5분 동안 원심분리한 다음 따라낸다. 조 백색 고체를 디에틸 에테르(10mL)에 재현탁시키고, 원심분리하고 따라낸다. 상기 세척 과정을 4회 반복하고 생성된 펩타이드를 진공하에 건조시키고, 0.1% TFA를 함유하는 물(10mL)에 용해시키고 동결 건고시킨다. IS-MS: 3377(M+).
실시예 69
사이클로(K18-D22)[Nle8,K18,D22,L27]hPTH(3-31)NH2(서열 63)
Ser-Glu-Ile-Gln-Leu-Nle-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-(Lys-Glu-Arg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Val 아미드
상기 펩타이드를 상기한 방법(방법 B)과 유사한 방식으로 제조한다. 링크 아미드 MBHA 수지(0.5mmol)를 반응 용기내에 유입한 다음, 이를 프로테인 테크놀로지스 PS3 자동 펩타이드 합성기에 제공한다. 하기 아미노산을 Fmoc-염기 SPPS와 일치하는 방식으로 연속적으로 가한다: Fmoc-Val-OH, Fmoc-Asp(OtBu)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH,Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Trp(Boc)-OH, Fmoc-Asp(OAllyl)-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Lys(Alloc)-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH 및 Fmoc-Leu-OH. 상기한 바와 같이, 수지-결합된 펩타이드를 Lys(Alloc) 및 Asp(OAllyl) 잔기의 Pd-매개된 측쇄 탈보호 및 후속적인 분자내 측쇄-대-측쇄 환화용 기기로부터 제거한다. 기술한 후처리 과정 이후, 아미드-함유 수지-결합된 펩타이드를 합성 완결용 기기로 회수한 다음 하기 아미노산을 연속적으로 가한다: Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Nle-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH 및 Fmoc-Ser(tBu)-OH. 다음, 수지-결합된 펩타이드의 분획(~50mg)을 기기로부터 제거하고 N-말단 Fmoc 보호 그룹을 20% 피페리딘/DMF 용액(1mL)을 사용하여 5분에 걸쳐 제거한다. 수지-결합된 펩타이드를 DMF(10mL), THF(10mL) 및 디에틸 에테르(10mL)로 연속적으로 세척한다. 공기-건조된 수지를 상기한 비율로 물, 티오아니솔, 페놀 및 에탄디티올을 함유하는 TFA 2mL에 현탁시킨다. 2시간 후에, TFA 용액을 0℃에서 3급-부틸메틸 에테르(8mL)내로 여과시켜 조 펩타이드의 침전을 초래한다. 펩타이드 혼합물을 2500rpm에서 5분 동안 원심분리한 다음 따라낸다. 조 백색 고체를 디에틸 에테르(10mL)에 재현탁시키고, 원심분리하고 따라낸다. 상기 세척 과정을 4회 반복하고 생성된 펩타이드를 진공하에 건조시키고, 0.1% TFA를 함유하는 물(10mL)에 용해시키고 동결 건고시킨다. IS-MS: 3463(M+).
실시예 70
사이클로(K18-D22)[Nle8,K18,D22,L27]hPTH(2-31)NH2(서열 64)
Val-Ser-Glu-Ile-Gln-Leu-Nle-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-(Lys-Glu-Arg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Val 아미드
상기 펩타이드를 상기한 방법(방법 B)과 유사한 방식으로 제조한다. 링크 아미드 MBHA 수지(0.5mmol)를 반응 용기내에 유입한 다음, 이를 프로테인 테크놀로지스 PS3 자동 펩타이드 합성기에 제공한다. 하기 아미노산을 Fmoc-염기 SPPS와 일치하는 방식으로 연속적으로 가한다: Fmoc-Val-OH, Fmoc-Asp(OtBu)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Trp(Boc)-OH, Fmoc-Asp(OAllyl)-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Lys(Alloc)-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH 및 Fmoc-Leu-OH. 상기한 바와 같이, 수지-결합된 펩타이드를 Lys(Alloc) 및 Asp(OAllyl) 잔기의 Pd-매개된 측쇄 탈보호 및 후속적인 분자내 측쇄-대-측쇄 환화용 기기로부터 제거한다. 기술한 후처리 과정 이후, 아미드-함유 수지-결합된 펩타이드를 합성 완결용 기기로 회수한 다음 하기 아미노산을 연속적으로 가한다: Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Nle-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH 및 Fmoc-Val-OH. 다음, 수지-결합된 펩타이드의 분획(~50mg)을 기기로부터 제거하고 N-말단 Fmoc 보호 그룹을 20% 피페리딘/DMF 용액(1mL)을 사용하여 5분에 걸쳐 제거한다. 수지-결합된 펩타이드를 DMF(10mL), THF(10mL) 및 디에틸 에테르(10mL)로 연속적으로 세척한다. 공기-건조된 수지를 상기한 비율로 물, 티오아니솔, 페놀 및 에탄디티올을 함유하는 TFA 2mL에 현탁시킨다. 2시간 후에, TFA 용액을 0℃에서 3급-부틸메틸 에테르(8mL)내로 여과시켜 조 펩타이드의 침전을 초래한다. 펩타이드 혼합물을 2500rpm에서 5분 동안 원심분리한 다음 따라낸다. 조 백색 고체를 디에틸 에테르(10mL)에 재현탁시키고, 원심분리하고 따라낸다. 상기 세척 과정을 4회 반복하고 생성된 펩타이드를 진공하에 건조시키고, 0.1% TFA를 함유하는 물(10mL)에 용해시키고 동결 건고시킨다. IS-MS: 3564(M+).
실시예 71
사이클로(K18-D22)[Nle8,K18,D22,L27]hPTH(7-34)NH2(서열 65)
Leu-Nle-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-(Lys-Glu-Arg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Val-His-Asn-Phe 아미드
상기 펩타이드를 상기한 방법(방법 B)과 유사한 방식으로 제조한다. 링크 아미드 MBHA 수지(0.5mmol)를 반응 용기내에 유입한 다음, 이를 프로테인 테크놀로지스 PS3 자동 펩타이드 합성기에 제공한다. 하기 아미노산을 Fmoc-염기 SPPS와 일치하는 방식으로 연속적으로 가한다: Fmoc-Phe-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Asp(OtBu)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Trp(Boc)-OH, Fmoc-Asp(OAllyl)-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Lys(Alloc)-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH 및 Fmoc-Leu-OH. 상기한 바와 같이, 수지-결합된 펩타이드를 Lys(Alloc) 및 Asp(OAllyl) 잔기의 Pd-매개된 측쇄 탈보호 및 후속적인 분자내 측쇄-대-측쇄 환화용 기기로부터 제거한다. 기술한 후처리 과정 이후, 아미드-함유 수지-결합된 펩타이드를 합성 완결용 기기로 회수한 다음 하기 아미노산을 연속적으로 가한다: Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Nle-OH 및 Fmoc-Leu-OH. 조 펩타이드를 수지로부터 분리하고 물(2.0mL), 티오아니솔(2.0mL), 페놀(3.0g) 및 에탄디티올(1.0mL)을 함유하는 TFA 40mL를 사용하여 수지를 탈보호시킨 다음, 분리 혼합물의 냉 3급-부틸메틸 에테르에의 첨가에 의해 침전시킨다. 다음, 조 펩타이드를 역상 액체 크로마토그래피에 의해 정제한다.
실시예 72
사이클로(K10-D14)[A1,Nle8,18,K10,D14,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 66)
Ala-Val-Ser-Glu-Ile-Gln-Leu-Nle-His-(Lys-Leu-Gly-Lys-Asp)-Leu-Asn-Ser-Nle-Glu-Arg-Val-Glu-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Val 아미드
상기 펩타이드를 상기한 방법(방법 C)과 유사한 방식으로 제조한다. 링크 아미드 MBHA 수지(0.5mmol)를 반응 용기내에 유입한 다음, 이를 프로테인 테크놀로지스 PS3 자동 펩타이드 합성기에 제공한다. 하기 아미노산을 Fmoc-염기 SPPS와 일치하는 방식으로 연속적으로 가한다: Fmoc-Val-OH, Fmoc-Asp(OtBu)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Trp(Boc)-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Nle-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Asp(OAllyl)-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Lys(Alloc)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Nle-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Val-OH 및 Fmoc-Ala-OH. 상기한 바와 같이, 수지-결합된 펩타이드를 Lys(Alloc) 및 Asp(OAllyl) 잔기의 Pd-매개된 측쇄 탈보호 및 후속적인 분자내 측쇄-대-측쇄 환화용 기기로부터 제거한다. N-말단 Fmoc 보호 그룹을 20% 피페리딘/DMF 용액(17mL)을 사용하여 5분에 걸쳐 제거한다. 수지-결합된 펩타이드를 DMF(100mL), THF(100mL) 및 디에틸 에테르(100mL)로 연속적으로 세척한다. 공기-건조된 수지를 물(2.0mL), 티오아니솔(2.0mL), 페놀(3.0g) 및 에탄디티올(1.0mL)을 함유하는 TFA 40mL에 현탁시킨다. 2시간 후에, TFA 용액을 0℃에서 3급-부틸메틸 에테르(160mL)내로 여과시켜 조 펩타이드의 침전을 초래한다. 펩타이드 혼합물을 2500rpm에서 5분 동안 원심분리한 다음 따라낸다. 조 백색 고체를 디에틸 에테르(120mL)에 재현탁시키고, 원심분리하고 따라낸다. 상기 세척 과정을 4회 반복하고 생성된 펩타이드를 진공하에 건조시키고, 0.1% TFA를 함유하는 물(100mL)에 용해시키고 동결 건고시킨다.
조 펩타이드를 역상 고성능 액체 크로마토그래피에 의해 정제하여 최종의 정제된 펩타이드 85mg을 백색 고체로서 수득한다. IS-MS: 3626(M+). 아미노산 분석: Asp/Asn: 3.00(3); Ser: 1.69(2); Glu/Gln: 4.91(4); Gly: 0.94(1); Ala: 0.91(1); Val: 2.86(3); Ile: 0.94(1); Leu: 6.33(6); Nle: 1.94(2); Lys: 2.90(3); His: 0.99(1); Arg: 1.96(2); Trp: 측정되지 않음(1).
실시예 73
사이클로(K14-D18)[A1,Nle8,K14,D18,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 67)
Ala-Val-Ser-Glu-Ile-Gln-Leu-Nle-His-Asn-Leu-Gly-Lys-(Lys-Leu-Asn-Ser-Asp)-Glu-Arg-Val-Glu-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Val 아미드
상기 펩타이드를 상기한 방법(방법 C)과 유사한 방식으로 제조한다. 링크 아미드 MBHA 수지(0.5mmol)를 반응 용기내에 유입한 다음, 이를 프로테인 테크놀로지스 PS3 자동 펩타이드 합성기에 제공한다. 하기 아미노산을 Fmoc-염기 SPPS와 일치하는 방식으로 연속적으로 가한다: Fmoc-Val-OH, Fmoc-Asp(OtBu)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Trp(Boc)-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Asp(OAllyl)-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Lys(Alloc)-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Nle-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Val-OH 및 Fmoc-Ala-OH. 상기한 바와 같이, 수지-결합된 펩타이드를 Lys(Alloc) 및 Asp(OAllyl) 잔기의 Pd-매개된 측쇄 탈보호 및 후속적인 분자내 측쇄-대-측쇄 환화용 기기로부터 제거한다. N-말단 Fmoc 보호 그룹을 20% 피페리딘/DMF 용액(17mL)을 사용하여 5분에 걸쳐 제거한다. 수지-결합된 펩타이드를 DMF(100mL), THF(100mL) 및 디에틸 에테르(100mL)로 연속적으로 세척한다. 공기-건조된 수지를 물(2.0mL), 티오아니솔(2.0mL), 페놀(3.0g) 및 에탄디티올(1.0mL)을 함유하는 TFA 40mL에 현탁시킨다. 2시간 후에, TFA 용액을 0℃에서 3급-부틸메틸 에테르(160mL)내로 여과시켜 조 펩타이드의 침전을 초래한다. 펩타이드 혼합물을 2500rpm에서 5분 동안 원심분리한 다음 따라낸다. 조 백색 고체를 디에틸 에테르(120mL)에 재현탁시키고, 원심분리하고 따라낸다. 상기 세척 과정을 4회 반복하고 생성된 펩타이드를 진공하에 건조시키고, 0.1% TFA를 함유하는 물(100mL)에 용해시키고 동결 건고시킨다.
조 펩타이드를 역상 고성능 액체 크로마토그래피에 의해 정제하여 최종의 정제된 펩타이드 57mg을 백색 고체로서 수득한다. IS-MS: 3627(M+). 아미노산 분석: Asp/Asn: 4.00(4); Ser: 1.69(2); Glu/Gln: 4.86(5); Gly: 0.94(1); Ala: 0.98(1); Val: 2.82(3); Ile: 0.90(1); Leu: 6.35(6); Nle: 0.87(1); Lys: 2.89(3); His: 1.00(1); Arg: 1.91(2); Trp: 측정되지 않음(1).
실시예 74
사이클로(K17-D21)[A1,Nle8,18,K17,D21,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 68)
Ala-Val-Ser-Glu-Ile-Gln-Leu-Nle-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-(Lys-Nle-Glu-Arg-Asp)-Glu-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Val 아미드
상기 펩타이드를 상기한 방법(방법 C)과 유사한 방식으로 제조한다. 링크 아미드 MBHA 수지(0.5mmol)를 반응 용기내에 유입한 다음, 이를 프로테인 테크놀로지스 PS3 자동 펩타이드 합성기에 제공한다. 하기 아미노산을 Fmoc-염기 SPPS와 일치하는 방식으로 연속적으로 가한다: Fmoc-Val-OH, Fmoc-Asp(OtBu)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Trp(Boc)-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Asp(OAllyl)-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Nle-OH, Fmoc-Lys(Alloc)-OH, Fmoc-Asn(tBu)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Nle-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Val-OH 및 Fmoc-Ala-OH. 상기한 바와 같이, 수지-결합된 펩타이드를 Lys(Alloc) 및 Asp(OAllyl) 잔기의 Pd-매개된 측쇄 탈보호 및 후속적인 분자내 측쇄-대-측쇄 환화용 기기로부터 제거한다. N-말단 Fmoc 보호 그룹을 20% 피페리딘/DMF 용액(17mL)을 사용하여 5분에 걸쳐 제거한다. 수지-결합된 펩타이드를 DMF(100mL), THF(100mL) 및 디에틸 에테르(100mL)로 연속적으로 세척한다. 공기-건조된 수지를 물(2.0mL), 티오아니솔(2.0mL), 페놀(3.0g)및 에탄디티올(1.0mL)을 함유하는 TFA 40mL에 현탁시킨다. 2시간 후에, TFA 용액을 0℃에서 3급-부틸메틸 에테르(160mL)내로 여과시켜 조 펩타이드의 침전을 초래한다. 펩타이드 혼합물을 2500rpm에서 5분 동안 원심분리한 다음 따라낸다. 조 백색 고체를 디에틸 에테르(120mL)에 재현탁시키고, 원심분리하고 따라낸다. 상기 세척 과정을 4회 반복하고 생성된 펩타이드를 진공하에 건조시키고, 0.1% TFA를 함유하는 물(100mL)에 용해시키고 동결 건고시킨다.
조 펩타이드를 역상 고성능 액체 크로마토그래피에 의해 정제하여 최종의 정제된 펩타이드 136mg을 백색 고체로서 수득한다. IS-MS: 3689(M+). 아미노산 분석: Asp/Asn: 4.00(4); Ser: 0.83(1); Glu/Gln: 4.84(5); Gly: 0.93(1); Ala: 0.96(1); Val: 1.93(2); Ile: 0.84(1); Leu: 6.32(6); Nle: 1.80(2); Lys: 2.87(3); His: 1.95(1); Arg: 2.04(2); Trp: 측정되지 않음(1).
실시예 75
사이클로(K21-D25)[A1,Nle8,18,K21,D25,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 69)
Ala-Val-Ser-Glu-Ile-Gln-Leu-Nle-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-Nle-Glu-
Arg-(Lys-Glu-Trp-Leu-Asp)-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Val 아미드
상기 펩타이드를 상기한 방법(방법 C)과 유사한 방식으로 제조한다. 링크 아미드 MBHA 수지(0.5mmol)를 반응 용기내에 유입한 다음, 이를 프로테인 테크놀로지스 PS3 자동 펩타이드 합성기에 제공한다. 하기 아미노산을 Fmoc-염기 SPPS와일치하는 방식으로 연속적으로 가한다: Fmoc-Val-OH, Fmoc-Asp(OtBu)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Asp(OAllyl)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Trp(Boc)-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Lys(Alloc)-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Nle-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Nle-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Val-OH 및 Fmoc-Ala-OH. 상기한 바와 같이, 수지-결합된 펩타이드를 Lys(Alloc) 및 Asp(OAllyl) 잔기의 Pd-매개된 측쇄 탈보호 및 후속적인 분자내 측쇄-대-측쇄 환화용 기기로부터 제거한다. N-말단 Fmoc 보호 그룹을 20% 피페리딘/DMF 용액(17mL)을 사용하여 5분에 걸쳐 제거한다. 수지-결합된 펩타이드를 DMF(100mL), THF(100mL) 및 디에틸 에테르(100mL)로 연속적으로 세척한다. 공기-건조된 수지를 물(2.0mL), 티오아니솔(2.0mL), 페놀(3.0g) 및 에탄디티올(1.0mL)을 함유하는 TFA 40mL에 현탁시킨다. 2시간 후에, TFA 용액을 0℃에서 3급-부틸메틸 에테르(160mL)내로 여과시켜 조 펩타이드의 침전을 초래한다. 펩타이드 혼합물을 2500rpm에서 5분 동안 원심분리한 다음 따라낸다. 조 백색 고체를 디에틸 에테르(120mL)에 재현탁시키고, 원심분리하고 따라낸다. 상기 세척 과정을 4회 반복하고 생성된 펩타이드를 진공하에 건조시키고, 0.1% TFA를 함유하는 물(100mL)에 용해시키고 동결 건고시킨다.
조 펩타이드를 상기한 바와 같은 역상 고성능 액체 크로마토그래피에 의해 정제하여 최종의 정제된 펩타이드 131mg을 백색 고체로서 수득한다. IS-MS: 3620(M+). 아미노산 분석: Asp/Asn: 4.00(4); Ser: 1.71(2); Glu/Gln: 4.84(5); Gly: 0.96(1); Ala: 0.97(1); Val: 2.07(2); Ile: 0.92(1); Leu: 6.22(6); Nle: 1.90(2); Lys: 2.90(3); His: 1.97(2); Arg: 0.97(1); Trp: 측정되지 않음(1).
실시예 76
사이클로(K25-D29)[A1,Nle8,18,K25,D29,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 70)
Ala-Val-Ser-Glu-Ile-Gln-Leu-Nle-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-Nle-Glu-
Arg-Val-Glu-Trp-Leu-(Lys-Lys-Leu-Leu-Asp)-Asp-Val 아미드
상기 펩타이드를 상기한 방법(방법 C)과 유사한 방식으로 제조한다. 링크 아미드 MBHA 수지(0.5mmol)를 반응 용기내에 유입한 다음, 이를 프로테인 테크놀로지스 PS3 자동 펩타이드 합성기에 제공한다. 하기 아미노산을 Fmoc-염기 SPPS와 일치하는 방식으로 연속적으로 가한다: Fmoc-Val-OH, Fmoc-Asp(OtBu)-OH, Fmoc-Asp(OAllyl)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Lys(Alloc)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Trp(Boc)-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Nle-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Nle-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH,Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Val-OH 및 Fmoc-Ala-OH. 상기한 바와 같이, 수지-결합된 펩타이드를 Lys(Alloc) 및 Asp(OAllyl) 잔기의 Pd-매개된 측쇄 탈보호 및 후속적인 분자내 측쇄-대-측쇄 환화용 기기로부터 제거한다. N-말단 Fmoc 보호 그룹을 20% 피페리딘/DMF 용액(17mL)을 사용하여 5분에 걸쳐 제거한다. 수지-결합된 펩타이드를 DMF(100mL), THF(100mL) 및 디에틸 에테르(100mL)로 연속적으로 세척한다. 공기-건조된 수지를 물(2.0mL), 티오아니솔(2.0mL), 페놀(3.0g) 및 에탄디티올(1.0mL)을 함유하는 TFA 40mL에 현탁시킨다. 2시간 후에, TFA 용액을 0℃에서 3급-부틸메틸 에테르(160mL)내로 여과시켜 조 펩타이드의 침전을 초래한다. 펩타이드 혼합물을 2500rpm에서 5분 동안 원심분리한 다음 따라낸다. 조 백색 고체를 디에틸 에테르(120mL)에 재현탁시키고, 원심분리하고 따라낸다. 상기 세척 과정을 4회 반복하고 생성된 펩타이드를 진공하에 건조시키고, 0.1% TFA를 함유하는 물(100mL)에 용해시키고 동결 건고시킨다.
조 펩타이드를 상기한 바와 같은 역상 고성능 액체 크로마토그래피에 의해 정제하여 최종의 정제된 펩타이드 134mg을 백색 고체로서 수득한다. IS-MS: 3591(M+). 아미노산 분석: Asp/Asn: 4.11(4); Ser: 1.69(2); Glu/Gln: 3.89(4); Gly: 0.97(1); Ala: 1.00(1); Val: 3.12(3); Ile: 0.92(1); Leu: 6.45(6); Nle: 1.85(2); Lys: 3.02(3); His: 1.99(1); Arg: 0.98(1); Trp: 측정되지 않음(1).
실시예 77
사이클로(K18-D22)[K18,D22]hPTHrP(1-34)NH2(서열 71)
Ala-Val-Ser-Glu-His-Gln-Leu-Leu-His-Asp-Lys-Gly-Lys-Ser-Ile-Gln-Asp-(Lys-Arg-Arg-Arg-Asp)-Phe-Leu-His-His-Leu-Ile-Ala-Glu-Ile-His-Thr-Ala 아미드
상기 펩타이드를 상기한 방법(방법 B)과 유사한 방식으로 제조한다. 링크 아미드 MBHA 수지(0.5mmol)를 반응 용기내에 유입한 다음, 이를 프로테인 테크놀로지스 PS3 자동 펩타이드 합성기에 제공한다. 하기 아미노산을 Fmoc-염기 SPPS와 일치하는 방식으로 연속적으로 가한다: Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Thr(tBu)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Phe-OH, Fmoc-Asp(OAllyl)-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Lys(Alloc)-OH, Fmoc-Asp(OtBu)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH 및 Fmoc-Ile-OH. 상기한 바와 같이, 수지-결합된 펩타이드를 Lys(Alloc) 및 Asp(OAllyl) 잔기의 Pd-매개된 측쇄 탈보호 및 후속적인 분자내 측쇄-대-측쇄 환화용 기기로부터 제거한다. 기술한 후처리 과정 이후, 아미드-함유 수지-결합된 펩타이드를 합성 완결용 기기로 회수한 다음 하기 아미노산을 연속적으로 가한다: Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Asp(OtBu)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Val-OH 및 Fmoc-Ala-OH. N-말단 Fmoc 보호 그룹을 20% 피페리딘/DMF 용액(17mL)을 사용하여5분에 걸쳐 제거한다. 수지-결합된 펩타이드를 DMF(100mL), THF(100mL) 및 디에틸 에테르(100mL)로 연속적으로 세척한다. 공기-건조된 수지를 물(2.0mL), 티오아니솔(2.0mL), 페놀(3.0g) 및 에탄디티올(1.0mL)을 함유하는 TFA 40mL에 현탁시킨다. 2시간 후에, TFA 용액을 0℃에서 3급-부틸메틸 에테르(160mL)내로 여과시켜 조 펩타이드의 침전을 초래한다. 펩타이드 혼합물을 2500rpm에서 5분 동안 원심분리한 다음 따라낸다. 조 백색 고체를 디에틸 에테르(120mL)에 재현탁시키고, 원심분리하고 따라낸다. 상기 세척 과정을 4회 반복하고 생성된 펩타이드를 진공하에 건조시키고, 0.1% TFA를 함유하는 물(100mL)에 용해시키고 동결 건고시킨다.
조 펩타이드를 역상 고성능 액체 크로마토그래피에 의해 정제하여 최종의 정제된 펩타이드 110mg을 백색 고체로서 수득한다. IS-MS: 3980(M+). 아미노산 분석: Asp/Asn: 3.11(3); Thr: 1.05(1); Ser: 1.78(2); Glu/Gln: 3.93(4); Gly: 0.98(1); Ala: 3.12(3); Val: 1.00(1); Ile: 2.73(3); Leu: 4.00(4); Lys: 2.86(3); Phe: 1.13(1); His: 4.93(5); Arg: 3.12(3).
실시예 78
사이클로(K18-D22)[K18,26,30,D22,L23,28,31, E25,29]hPTHrP(1-34)NH2(서열 72)
Ala-Val-Ser-Glu-His-Gln-Leu-Leu-His-Asp-Lys-Gly-Lys-Ser-Ile-Gln-Asp-(Lys-Arg-Arg-Arg-Asp)-Leu-Leu-Glu-Lys-Leu-Leu-Glu-Lys-Leu-His-Thr-Ala 아미드
상기 펩타이드를 상기한 방법(방법 B)과 유사한 방식으로 제조한다. 링크아미드 MBHA 수지(0.5mmol)를 반응 용기내에 유입한 다음, 이를 프로테인 테크놀로지스 PS3 자동 펩타이드 합성기에 제공한다. 하기 아미노산을 Fmoc-염기 SPPS와 일치하는 방식으로 연속적으로 가한다: Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Thr(tBu)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Asp(OAllyl)-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Lys(Alloc)-OH, Fmoc-Asp(OtBu)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH 및 Fmoc-Ile-OH. 상기한 바와 같이, 수지-결합된 펩타이드를 Lys(Alloc) 및 Asp(OAllyl) 잔기의 Pd-매개된 측쇄 탈보호 및 후속적인 분자내 측쇄-대-측쇄 환화용 기기로부터 제거한다. 기술한 후처리 과정 이후, 아미드-함유 수지-결합된 펩타이드를 합성 완결용 기기로 회수한 다음 하기 아미노산을 연속적으로 가한다: Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Asp(OtBu)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Val-OH 및 Fmoc-Ala-OH. 다음, 수지-결합된 펩타이드를 기기로부터 제거하고 말단 Fmoc 보호 그룹을 20% 피페리딘/DMF 용액(20mL)을 사용하여 제거한다. 조 펩타이드를 수지로부터 분리하고 물(2.0mL), 티오아니솔(2.0mL), 페놀(3.0g) 및 에탄디티올(1.0mL)을 함유하는 TFA 40mL를 사용하여 수지를 탈보호시킨 다음, 분리 혼합물의 냉 3급-부틸메틸 에테르에의 첨가에 의해 침전시킨다.
조 펩타이드를 역상 고성능 액체 크로마토그래피에 의해 정제하여 최종의 정제된 펩타이드 31mg을 백색 고체로서 수득한다. IS-MS: 3986(M+). 아미노산 분석: Asp/Asn: 2.60(3); Thr: 1.26(1); Ser: 1.61(2); Glu/Gln: 5.02(5); Gly: 0.96(1); Ala: 2.37(2); Val: 0.96(1); Ile: 0.81(1); Leu: 7.71(7); Lys: 5.17(5); His: 3.17(3); Arg: 2.37(3).
실시예 79
비사이클로(K13-D17,K18-D22)[A1,Nle8,D17,22,K18,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 73)
Ala-Val-Ser-Glu-Ile-Gln-Leu-Nle-His-Asn-Leu-Gly-(Lys-His-Leu-Asn-Asp)-(Lys-
Glu-Arg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Val 아미드
D22-K18아미드 가교로 종결시켜 미리 제조한 수지-결합된 펩타이드의 분획(약 0.5mmol)을 자동 펩타이드 합성기로 회수한 다음 N-말단 Fmoc 보호 그룹을 상기한 바와 같이 제거한다. 하기 아미노산 잔기를 표준 HBTU 커플링 과정을 이용하여 연속적으로 가한다: Fmoc-Asp(OAllyl)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-His(Trt)-OH 및 Fmoc-Lys(Alloc)-OH. 수지를 기기로부터 제거하고 DMF(100mL), THF(100mL) 및 디에틸 에테르(100mL)로 연속적으로 세척한 다음, 공기-건조시킨다. Allyl 및 Alloc 보호 그룹을 상기한 바와 같이 Pd-촉매작용하에 제거하고 잔기 Asp17및 K13간의 환화를 DMF(20mL) 중의 HBTU(284mg), HOBt(101mg) 및 NMM(165mg)을 사용하여 2주기로 달성한다. 다음, 수지를 DMF(100mL),THF(100mL) 및 디에틸 에테르(100mL)로 연속적으로 세척한다. 수지를 기기로 회수하고 합성을 하기 아미노산의 첨가에 의해 완료한다: Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Nle-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Val-OH 및 Fmoc-Ala-OH. N-말단 Fmoc 보호 그룹을 20% 피페리딘/DMF 용액(17mL)을 사용하여 5분에 걸쳐 제거한다. 수지-결합된 펩타이드를 DMF(100mL), THF(100mL) 및 디에틸 에테르(100mL)로 연속적으로 세척한다. 공기-건조된 수지를 물(2.0mL), 티오아니솔(2.0mL), 페놀(3.0g) 및 에탄디티올(1.0mL)을 함유하는 TFA 40mL에 현탁시킨다. 2시간 후에, TFA 용액을 0℃에서 3급-부틸메틸 에테르(160mL)내로 여과시켜 조 펩타이드의 침전을 초래한다. 펩타이드 혼합물을 2500rpm에서 5분 동안 원심분리한 다음 따라낸다. 조 백색 고체를 디에틸 에테르(120mL)에 재현탁시키고, 원심분리하고 따라낸다. 상기 세척 과정을 4회 반복하고 생성된 펩타이드를 진공하에 건조시키고, 0.1% TFA를 함유하는 물(100mL)에 용해시키고 동결 건고시킨다.
조 펩타이드를 상기한 바와 같은 역상 고성능 액체 크로마토그래피에 의해 정제하여 최종의 정제된 펩타이드 13mg을 백색 고체로서 수득한다. IS-MS: 3643(M+). 아미노산 분석: Asp/Asn: 4.83(5); Ser: 0.97(1); Glu/Gln: 3.98(4); Gly: 0.97(1); Ala: 0.96(1); Val: 3.14(3); Ile: 0.88(1); Leu: 6.47(6); Nle: 0.80(1); Lys: 2.91(3); His: 2.03(2); Arg: 2.07(2); Trp: 측정되지 않음(1). 아미드 가교의 위치는 에드만 분해에 의해 확인한다.
실시예 80
비사이클로(K18-D22,K26-D30)[A1,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 74)
Ala-Val-Ser-Glu-Ile-Gln-Leu-Nle-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-(Lys-Glu-Arg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Val 아미드
표제 화합물을 상기한 바와 유사한 방식으로 제조한다. 링크 아미드 MBHA 수지(Nova Biochem, La Jolla, CA, USA)(0.80g, 0.45mmol)를 반응 용기에 로딩시키고 DMF(10mL)를 사용하여 10분 동안 팽윤시킨다. 하기 아미노산 잔기를 표준 HBTU 커플링 과정을 이용하여 연속적으로 가한다: Fmoc-Val-OH, Fmoc-Asp(OAllyl)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Lys(Alloc)-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Leu-OH 및 Fmoc-Trp(Boc)-OH. 수지를 기기로부터 제거하고 DMF(100mL), THF(100mL) 및 디에틸 에테르(100mL)로 연속적으로 세척한 다음, 공기-건조시킨다. Allyl 및 Alloc 보호 그룹을 상기한 바와 같이 Pd-촉매작용하에 제거하고 잔기 Asp30및 K26간의 환화를 DMF(20mL) 중의 HBTU(284mg), HOBt(101mg) 및 NMM(165mg)을 사용하여 2주기로 달성한다. 다음, 수지를 DMF(100mL), THF(100mL) 및 디에틸 에테르(100mL)로 연속적으로 세척한다. 수지를 기기로 회수하고 합성을 하기 아미노산의 첨가에 의해 완료한다: Fmoc-Asp(OAllyl)-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Lys(Alloc)-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-His(Trt)-OH,Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Nle-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Val-OH 및 Fmoc-Ala-OH. 수지를 기기로부터 제거하고 DMF(100mL), THF(100mL) 및 디에틸 에테르(100mL)로 연속적으로 세척한 다음, 공기-건조시킨다. Allyl 및 Alloc 보호 그룹을 상기한 바와 같이 Pd-촉매작용하에 제거하고 잔기 Asp22및 K18간의 환화를 DMF(20mL) 중의 HBTU(284mg), HOBt(101mg) 및 NMM(165mg)을 사용하여 2주기로 달성한다. 다음, 수지를 DMF(100mL), THF(100mL) 및 디에틸 에테르(100mL)로 연속적으로 세척한다. N-말단 Fmoc 보호 그룹을 20% 피페리딘/DMF 용액(25mL)을 사용하여 5분에 걸쳐 제거한다. 수지-결합된 펩타이드를 DMF(100mL), THF(100mL) 및 디에틸 에테르(100mL)로 연속적으로 세척한다. 공기-건조된 수지를 물(2.0mL), 티오아니솔(2.0mL), 페놀(3.0g) 및 에탄디티올(1.0mL)을 함유하는 TFA 40mL에 현탁시킨다. 2시간 후에, TFA 용액을 0℃에서 3급-부틸메틸 에테르(120mL)내로 여과시켜 조 펩타이드의 침전을 초래한다. 펩타이드 혼합물을 2500rpm에서 5분 동안 원심분리한 다음 따라낸다. 조 백색 고체를 디에틸 에테르(120mL)에 재현탁시키고, 원심분리하고 따라낸다. 상기 세척 과정을 4회 반복하고 생성된 펩타이드를 진공하에 건조시키고, 0.1% TFA를 함유하는 물(100mL)에 용해시키고 동결 건고시킨다.
조 펩타이드를 역상 고성능 액체 크로마토그래피에 의해 정제하여 최종의 정제된 펩타이드 90mg을 백색 고체로서 수득한다. IS-MS: 3615(M+). 아미노산 분석: Asp/Asn: 3.79(4); Ser: 1.84(2); Glu/Gln: 3.84(4); Gly: 1.19(1); Ala: 1.00(1); Val: 2.82(3); Ile: 0.89(1); Leu: 6.16(6); Nle: 0.74(1); Lys: 2.73(3); His: 1.94(2); Arg: 1.93(2); Trp: 측정되지 않음(1). 아미드 가교의 위치는 에드만 분해에 의해 확인한다.
실시예 81
비사이클로(K13-D17,K18-D22)[A1,Nle8,D17,22,K18,L27]hPTH(1-34)NH2(서열 75)
Ala-Val-Ser-Glu-Ile-Gln-Leu-Nle-His-Asn-Leu-Gly-(Lys-His-Leu-Asn-Asp)-(Lys-
Glu-Arg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Val-His-Asn-Phe 아미드
Phe34로 개시하고 Asp22-Lys18아미드 가교로 종결시켜 미리 제조한 수지-결합된 펩타이드의 분획(0.46g, 약 1.0mmol)을 자동 펩타이드 합성기로 회수한 다음 N-말단 Fmoc 보호 그룹을 상기한 바와 같이 제거한다. 하기 아미노산 잔기를 표준 HBTU 커플링 과정을 이용하여 연속적으로 가한다: Fmoc-Asp(OAllyl)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-His(Trt)-OH 및 Fmoc-Lys(Alloc)-OH. 수지를 기기로부터 제거하고 DMF(100mL), THF(100mL) 및 디에틸 에테르(100mL)로 연속적으로 세척한 다음, 공기-건조시킨다. Allyl 및 Alloc 보호 그룹을 상기한 바와 같이 제거하고 잔기 Lys13및 Asp17간의 환화를 HBTU, HOBt 및 NMM을 사용하여 2주기로 달성한다. 세척 및 건조 후, 수지를 기기로 회수하고 합성을 하기 아미노산의 첨가에 의해 완료한다: Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH,Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Nle-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Val-OH 및 Fmoc-Ala-OH. 조 펩타이드를 수지로부터 분리하고 물(2.0mL), 티오아니솔(2.0mL), 페놀(3.0g) 및 에탄디티올(1.0mL)을 함유하는 TFA 40mL를 사용하여 탈보호시키고 분리 혼합물의 냉 3급-부틸메틸 에테르에의 첨가에 의해 침전시킨다. 다음, 조 펩타이드를 역상 액체 크로마토그래피에 의해 정제한다.
실시예 82
비사이클로(K13-D17,K26-D30)[A1,Nle8,18,D17,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 76)
Ala-Val-Ser-Glu-Ile-Gln-Leu-Nle-His-Asn-Leu-Gly-(Lys-His-Leu-Asn-Asp)-Nle-Glu-Arg-Val-Glu-Trp-Leu-Arg-(Lys-Leu-Leu-Gln-Asp)-Val 아미드
표제 화합물을 상기한 바와 유사한 방식으로 제조한다. 링크 아미드 MBHA 수지(Nova Biochem, La Jolla, CA, USA)(0.80g, 0.45mmol)를 반응 용기에 로딩시키고 DMF(10mL)를 사용하여 10분 동안 팽윤시킨다. 하기 아미노산 잔기를 표준 HBTU 커플링 과정을 이용하여 연속적으로 가한다: Fmoc-Val-OH, Fmoc-Asp(OAllyl)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Lys(Alloc)-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Leu-OH 및 Fmoc-Trp(Boc)-OH. 수지를 기기로부터 제거하고 DMF(100mL), THF(100mL) 및 디에틸 에테르(100mL)로 연속적으로 세척한 다음, 공기-건조시킨다. Allyl 및 Alloc 보호 그룹을 상기한 바와 같이 Pd-촉매작용하에제거하고 잔기 Asp30및 K26간의 환화를 DMF(20mL) 중의 HBTU(284mg), HOBt(101mg) 및 NMM(165mg)을 사용하여 2주기로 달성한다. 다음, 수지를 DMF(100mL), THF(100mL) 및 디에틸 에테르(100mL)로 연속적으로 세척한다. 수지를 기기로 회수하고 합성을 하기 아미노산의 첨가에 의해 완료한다: Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Nle-OH, Fmoc-Asp(OAllyl)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Lys(Alloc)-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Nle-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Val-OH 및 Fmoc-Ala-OH. 수지를 기기로부터 제거하고 DMF(100mL), THF(100mL) 및 디에틸 에테르(100mL)로 연속적으로 세척한 다음, 공기-건조시킨다. 다시, Allyl 및 Alloc 보호 그룹을 상기한 바와 같이 Pd-촉매작용하에 제거하고 잔기 Asp22및 K18간의 환화를 DMF(20mL) 중의 HBTU(284mg), HOBt(101mg) 및 NMM(165mg)을 사용하여 2주기로 달성한다. 다음, 수지를 DMF(100mL), THF(100mL) 및 디에틸 에테르(100mL)로 연속적으로 세척한다. N-말단 Fmoc 보호 그룹을 20% 피페리딘/DMF 용액(25mL)을 사용하여 5분에 걸쳐 제거한다. 수지-결합된 펩타이드를 DMF(100mL), THF(100mL) 및 디에틸 에테르(100mL)로 연속적으로 세척한다. 공기-건조된 수지를 물(2.0mL), 티오아니솔(2.0mL), 페놀(3.0g) 및 에탄디티올(1.0mL)을 함유하는 TFA 40mL에 현탁시킨다. 2시간 후에, TFA 용액을 0℃에서 3급-부틸메틸 에테르(120mL)내로 여과시켜 조 펩타이드의 침전을 초래한다. 펩타이드 혼합물을 2500rpm에서 5분 동안 원심분리한 다음 따라낸다. 조 백색 고체를 디에틸 에테르(120mL)에 재현탁시키고, 원심분리하고 따라낸다. 상기 세척 과정을 4회 반복하고 생성된 펩타이드를 진공하에 건조시키고, 0.1% TFA를 함유하는 물(100mL)에 용해시키고 동결 건고시킨다.
조 펩타이드를 상기한 바와 같은 역상 고성능 액체 크로마토그래피에 의해 정제하여 최종의 정제된 펩타이드 22mg을 백색 고체로서 수득한다. IS-MS: 3642(M+). 아미노산 분석: Asp/Asn: 4.00(4); Ser: 0.99(1); Glu/Gln: 4.95(5); Gly: 0.96(1); Ala: 0.95(1); Val: 3.05(3); Ile: 0.92(1); Leu: 6.40(6); Nle: 1.78(2); Lys: 1.81(2); His: 2.17(2); Arg: 2.03(2); Trp: 측정되지 않음(1). 아미드 가교의 위치는 에드만 분해에 의해 확인한다.
실시예 83
사이클로(K18-D22)[K18-D22]hPTHrP(7-34)NH2(서열 77)
Leu-Leu-His-Asp-Lys-Gly-Lys-Ser-Ile-Gln-Asp-(Lys-Arg-Arg-Arg-Asp)-Phe-Leu-His-His-Leu-Ile-Ala-Glu-Ile-His-Thr-Ala 아미드
상기 펩타이드를 상기한 방법(방법 B)과 유사한 방식으로 제조한다. 링크 아미드 MBHA 수지(0.5mmol)를 반응 용기내에 유입한 다음, 이를 프로테인 테크놀로지스 PS3 자동 펩타이드 합성기에 제공한다. 하기 아미노산을 Fmoc-염기 SPPS와 일치하는 방식으로 연속적으로 가한다: Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Thr(tBu)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Phe-OH, Fmoc-Asp(OAllyl)-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Lys(Alloc)-OH, Fmoc-Asp(OtBu)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH 및 Fmoc-Ile-OH. 상기한 바와 같이, 수지-결합된 펩타이드를 Lys(Alloc) 및 Asp(OAllyl) 잔기의 Pd-매개된 측쇄 탈보호 및 후속적인 분자내 측쇄-대-측쇄 환화용 기기로부터 제거한다. 기술한 후처리 과정 이후, 아미드-함유 수지-결합된 펩타이드를 합성 완결용 기기로 회수한 다음 하기 아미노산을 연속적으로 가한다: Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Asp(OtBu)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH 및 Fmoc-Leu-OH. 조 펩타이드를 수지로부터 분리하고 물(2.0mL), 티오아니솔(2.0mL), 페놀(3.0g) 및 에탄디티올(1.0mL)을 함유하는 TFA 40mL를 사용하여 탈보호시키고 분리 혼합물의 냉 3급-부틸메틸 에테르에의 첨가에 의해 침전시킨다. 다음, 조 펩타이드를 역상 액체 크로마토그래피에 의해 정제한다.
실시예 84
비사이클로(K13-D17,K18-D22)[Nle8,K,D17,22,L27]hPTH(7-34)NH2(서열 78)
Leu-Nle-His-Asn-Leu-Gly-(Lys-His-Leu-Asn-Asp)-(Lys-Glu-Arg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Val-His-Asn-Phe 아미드
실시예 23에서 제조된 Lys18-Asp22아미드 가교로 종결시킨 수지-결합된 펩타이드의 분획을 자동 펩타이드 합성기로 회수한 다음 N-말단 Fmoc 보호 그룹을 상기한 바와 같이 제거한다. 하기 아미노산 잔기를 표준 HBTU 커플링 과정을 이용하여 연속적으로 가한다: Fmoc-Asp(OAllyl)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-His(Trt)-OH 및 Fmoc-Lys(Alloc)-OH. 수지를 기기로부터 제거하고 DMF(100mL), THF(100mL) 및 디에틸 에테르(100mL)로 연속적으로 세척한 다음, 공기-건조시킨다. Allyl 및 Alloc 보호 그룹을 상기한 바와 같이 제거하고 잔기 Lys13및 Asp17간의 환화를 HBTU, HOBt 및 NMM을 사용하여 2주기로 달성한다. 세척 및 건조 후, 수지를 기기로 회수하고 합성을 하기 아미노산의 첨가에 의해 완료한다: Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Nle-OH 및 Fmoc-Leu-OH. 조 펩타이드를 수지로부터 분리하고 물(2.0mL), 티오아니솔(2.0mL), 페놀(3.0g) 및 에탄디티올(1.0mL)을 함유하는 TFA 40mL를 사용하여 탈보호시키고 분리 혼합물의 냉 3급-부틸메틸 에테르에의 첨가에 의해 침전시킨다. 다음, 조 펩타이드를 역상 액체 크로마토그래피에 의해 정제한다.
실시예 85
비사이클로(K18-D22,K26-D30)[Nle8,K18,D22,L27]hPTH(7-34)NH2(서열 79)
Leu-Nle-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-(Lys-Glu-Arg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-(Lys-Leu-Leu-Gln-Asp)-Val-His-Asn-Phe 아미드
표제 화합물을 상기한 바와 유사한 방식으로 제조한다. 링크 아미드 MBHA수지(Nova Biochem, La Jolla, CA, USA)(0.75g, 0.41mmol)를 반응 용기에 로딩시키고 DMF(10mL)를 사용하여 10분 동안 팽윤시킨다. 하기 아미노산 잔기를 표준 HBTU 커플링 과정을 이용하여 연속적으로 가한다: Fmoc-Phe-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Asp(OAllyl)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH 및 Fmoc-Lys(Alloc)-OH. 수지를 기기로부터 제거하고 DMF(100mL), THF(100mL) 및 디에틸 에테르(100mL)로 연속적으로 세척한 다음, 공기-건조시킨다. Allyl 및 Alloc 보호 그룹을 상기한 바와 같이 Pd-촉매작용하에 제거하고 잔기 Lys26및 Asp30간의 환화를 HBTU, HOBt 및 NMM을 사용하여 2주기로 달성한다. 세척 및 건조 후, 수지를 기기로 회수하고 합성을 하기 아미노산을 기술한 커플링 조건을 사용하여 가한다: Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Trp(Boc)-OH, Fmoc-Asp(OAllyl)-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH 및 Fmoc-Lys(Alloc)-OH. 수지를 기기로부터 제거하고 DMF(100mL), THF(100mL) 및 디에틸 에테르(100mL)로 연속적으로 세척한 다음, 공기-건조시킨다. Allyl 및 Alloc 보호 그룹을 상기한 바와 같이 제거하고 잔기 Lys18및 Asp22간의 환화를 HBTU, HOBt 및 NMM을 사용하여 2주기로 달성한다. 세척 및 건조 후, 수지를 기기로 회수하고 합성을 하기 아미노산의 첨가에 의해 완료한다: Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Nle-OH 및 Fmoc-Leu-OH. 조 펩타이드를 수지로부터 분리하고 물(2.0mL),티오아니솔(2.0mL), 페놀(3.0g) 및 에탄디티올(1.0mL)을 함유하는 TFA 40mL를 사용하여 탈보호시키고 분리 혼합물의 냉 3급-부틸메틸 에테르에의 첨가에 의해 침전시킨다. 다음, 조 펩타이드를 역상 액체 크로마토그래피에 의해 정제한다.
실시예 86
트리사이클로(K13-D17,K18-D22,K26-D30)[A1,Nle8,K18,D17,22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 80)
Ala-Val-Ser-Glu-Ile-Gln-Leu-Nle-His-Asn-Leu-Gly-(Lys-His-Leu-Asn-Asp)-(Lys-
Glu-Arg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-(Lys-Leu-Leu-Gln-Asp)-Val 아미드
표제 화합물을 상기한 바와 유사한 방식으로 제조한다. 링크 아미드 MBHA 수지(Nova Biochem, La Jolla, CA, USA)(0.80g, 0.45mmol)를 반응 용기에 로딩시키고 DMF(10mL)를 사용하여 10분 동안 팽윤시킨다. 하기 아미노산 잔기를 표준 HBTU 커플링 과정을 이용하여 연속적으로 가한다: Fmoc-Val-OH, Fmoc-Asp(OAllyl)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Lys(Alloc)-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Leu-OH 및 Fmoc-Trp(Boc)-OH. 수지를 기기로부터 제거하고 DMF(100mL), THF(100mL) 및 디에틸 에테르(100mL)로 연속적으로 세척한 다음, 공기-건조시킨다. Allyl 및 Alloc 보호 그룹을 상기한 바와 같이 Pd-촉매작용하에 제거하고 잔기 Asp30및 K26간의 환화를 DMF(20mL) 중의 HBTU(284mg), HOBt(101mg) 및 NMM(165mg)을 사용하여 2주기로 달성한다. 다음, 수지를 DMF(100mL), THF(100mL) 및 디에틸 에테르(100mL)로 연속적으로 세척한다. 수지를 기기로 회수하고 합성을 하기 아미노산의 첨가에 의해 계속한다: Fmoc-Asp(OAllyl)-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH 및 Fmoc-Lys(Alloc)-OH. 수지를 기기로부터 제거하고 DMF(100mL), THF(100mL) 및 디에틸 에테르(100mL)로 연속적으로 세척한 다음, 공기-건조시킨다. Allyl 및 Alloc 보호 그룹을 상기한 바와 같이 Pd-촉매작용하에 제거하고 잔기 Asp18및 K22간의 환화를 DMF(20mL) 중의 HBTU(284mg), HOBt(101mg) 및 NMM(165mg)을 사용하여 2주기로 달성한다. 수지를 DMF(100mL), THF(100mL) 및 디에틸 에테르(100mL)로 연속적으로 세척한다. 수지를 기기로 회수하고 합성을 하기 아미노산의 첨가에 의해 완료한다: Fmoc-Asp(OAllyl)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Lys(Alloc)-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Nle-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Val-OH 및 Fmoc-Ala-OH. 다시, 수지를 기기로부터 제거하고 DMF(100mL), THF(100mL) 및 디에틸 에테르(100mL)로 연속적으로 세척한 다음, 공기-건조시킨다. Allyl 및 Alloc 보호 그룹을 상기한 바와 같이 Pd-촉매작용하에 제거하고 잔기 Asp17및 K13간의 환화를 DMF(20mL) 중의 HBTU(284mg), HOBt(101mg) 및 NMM(165mg)을 사용하여 2주기로 달성한다. 다음, 수지를 DMF(100mL), THF(100mL) 및 디에틸 에테르(100mL)로 연속적으로 세척한다. N-말단 Fmoc 보호 그룹을 20% 피페리딘/DMF 용액(25mL)을 사용하여 5분에 걸쳐 제거한다. 수지-결합된 펩타이드를 DMF(100mL), THF(100mL) 및 디에틸에테르(100mL)로 연속적으로 세척한다. 공기-건조된 수지를 물(2.0mL), 티오아니솔(2.0mL), 페놀(3.0g) 및 에탄디티올(1.0mL)을 함유하는 TFA 40mL에 현탁시킨다. 2시간 후에, TFA 용액을 0℃에서 3급-부틸메틸 에테르(120mL)내로 여과시켜 조 펩타이드의 침전을 초래한다. 펩타이드 혼합물을 2500rpm에서 5분 동안 원심분리한 다음 따라낸다. 조 백색 고체를 디에틸 에테르(120mL)에 재현탁시키고, 원심분리하고 따라낸다. 상기 세척 과정을 4회 반복하고 생성된 펩타이드를 진공하에 건조시키고, 0.1% TFA를 함유하는 물(100mL)에 용해시키고 동결 건고시킨다.
조 펩타이드를 상기한 바와 같은 역상 고성능 액체 크로마토그래피에 의해 정제하여 최종의 정제된 펩타이드 16mg을 백색 고체로서 수득한다. IS-MS: 3625(M+). 아미노산 분석: Asp/Asn: 4.88(5); Ser: 0.95(1); Glu/Gln: 4.00(4); Gly: 1.01(1); Ala: 0.97(1); Val: 2.93(3); Ile: 0.93(1); Leu: 6.41(6); Nle: 0.84(1); Lys: 2.73(3); His: 2.28(2); Arg: 2.07(2); Trp: 측정되지 않음(1).
약제학적 조성물
화학식 I의 펩타이드 화합물은 유용한 약리학적 활성을 나타내므로, 약제학적 조성물에 혼입하여 특정 의학적 장애를 앓고 있는 환자의 치료에 사용한다.
보다 특히, 본 발명의 범주내의 특정 펩타이드 화합물은 PTH 수용체에 결합하여 아데닐릴 사이클라제 활성을 자극한다. 증가된 아데닐릴 사이클라제 활성은 양성 골 성장과 관련이 있으므로, 예를 들어, 본 발명의 펩타이드 화합물은 칼슘저혈증; 골다공증; 골감소증; 및 골다공증 및 골감소증과 관련된 장애, 예를 들어,부갑상선기능항진증, 부갑상선기능감퇴증 및 쿠싱 증후군; 글루코코르티코이드- 및 면역억제제-유도된 골감소증; 및 골절 및 재골절 수복을 포함한 골 세포 칼슘 조절과 관련된 생리학적 상태의 치료에 유용하다.
또한, 특정의 화학식 I의 펩타이드 화합물은 PTH 수용체에 결합하나, 아데닐릴 사이클라제 활성을 자극하지는 않는다. 이러한 펩타이드 화합물은 과잉 PTH를 특징으로 하는 장애, 예를 들어, 부갑상선기능항진증 및 부갑상선기능항진증-관련된 칼슘과혈발증, 악성 칼슘과혈증, 신부전증 및 고혈압증의 치료에 유용하다.
본 발명의 치료학적 방법의 특정 양태는 골다공증의 치료이다.
본원에서의 치료란 의미는 예방 요법 및 만성 상태의 치료를 포함하는 것으로 이해되어야 한다.
또한, 본 발명은 하나 이상의 무독성, 약제학적으로 허용되는 담체와 함께 제형화된 본 발명의 펩타이드 화합물을 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다. 본 발명의 약제학적 조성물은 사람 및 이외의 동물에게 경구, 폐내, 경점막, 안내, 직장, 비경구, 낭내, 질내, 복막내, 국소(산제, 연고 또는 점적제에 의해), 경피, 이온전기도입법, 구강으로, 또는 경구 또는 비내 분무로서 투여할 수 있다. 폐내 및 피하 전달이 본 발명의 펩타이드 화합물의 특별히 바람직한 투여 방법이다.
본원에서 사용된 바와 같은 용어 '비경구' 투여는 정맥내, 근육내, 복막내, 흉골내, 피하 및 관절내 주사 및 주입을 포함한다.
비경구 주사용 본 발명의 약제학적 조성물은 약제학적으로 허용되는 무균 수성 또는 비수성 용제, 분산제, 현탁제 또는 유제뿐만 아니라 사용 직전에 무균 주사용제 또는 분산제로 재구성하기 위한 무균 산제를 포함한다. 적합한 수성 및 비수성 담체, 희석제, 용매 또는 비히클의 예는 물, 에탄올, 폴리올(예를 들어, 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜 등), 및 이의 적합한 혼합물, 식물성 오일(예를 들어, 올리브유), 주사가능한 유기 에스테르, 예를 들어, 에틸 올레에이트를 포함한다. 적합한 유동성은, 예를 들어, 피막재, 예를 들어, 레시틴의 사용에 의해, 분산제의 경우 필요로 하는 입자 크기의 유지에 의해, 및 계면활성제의 사용에 의해 유지할 수 있다.
상기 조성물은 또한 보조제, 예를 들어, 방부제, 숩윤제, 유화제 및 분산화제를 함유할 수도 있다. 미생물 작용의 예방은 각종 항균제 및 항진균제, 예를 들어, 파라벤, 클로로부탄올, 페놀 소르브산 등의 혼입에 의해 보장할 수 있다. 또한, 등장화제, 예를 들어, 당, 염화나트륨 등을 포함하는 것이 바람직할 수도 있다. 주사가능한 약제학적 형태의 장기간 흡수는 흡수를 지연시키는 제제, 예를 들어, 알루미늄 모노스테아레이트 및 젤라틴의 혼입에 의해 초래할 수 있다.
특정 경우, 약물의 효과를 연장하기 위해, 약물의 피하 또는 근육내 주사로부터의 흡수를 늦추는 것이 바람직하다. 이는 불량한 수용해도를 갖는 결정질 또는 무정형 물질의 액체 현탁액의 사용에 의해 성취할 수 있다. 당해 현탁액은 부가적인 부형제, 예를 들어, 트레할로스를 함유할 수 있다. 약물의 흡수율은 결정 크기 및 결정질 형태에 따라 번갈아 달라질 수 있는 이의 용해 속도에 따라 달라진다. 또한, 비경구 투여된 약물 형태의 지연된 흡수는 약물을 오일 비히클에 용해시키거나 현탁시킴으로써 달성한다.
주사가능한 데포우 형태는 약물의 미소캡슐 매트릭스를 생분해성 중합체, 예를 들어, 폴리락타이드-폴리글리콜라이드내에 형성시킴으로써 제조한다. 약물 대 중합체의 비 및 사용된 특정 중합체의 특성에 따라, 약물 방출 속도를 조절할 수 있다. 이외의 생분해성 중합체의 예는 폴리(오르토에스테르) 및 폴리(무수물)을 포함한다. 데포우 주사가능한 제형은 또한 약물을 체조직에 적합한 리포좀 또는 마이크로에멀젼에 포획시킴으로써 제조한다.
주사가능한 제형은 세균-잔류 필터를 통해 여과시키거나 살균제를 사용 직전에 무균수 또는 이외의 무균 주사가능한 매질에 용해시키거나 분산시킬 수 있는 무균 고체 조성물의 형태에 혼입함으로써 멸균시킬 수 있다.
경구 투여용 고체 투여 형태는 캡슐제, 정제, 환제, 산제 및 입제를 포함한다. 이러한 고체 투여 형태에서, 활성 펩타이드 화합물은 하나 이상의 불활성, 약제학적으로 허용되는 부형제 또는 담체, 예를 들어, 시트르산나트륨 또는 인산이칼슘 및/또는 a) 충전제 또는 증량제, 예를 들어, 전분, 락토스, 수크로스, 글루코스, 만니톨 및 규산, b) 결합제, 예를 들어, 카복실메틸셀룰로스, 알기네이트, 젤라틴, 폴리비닐피롤리돈, 수크로스 및 아카시아, c) 습윤제, 예를 들어, 글리세롤, d) 붕해제, 예를 들어, 아가-아가, 탄산칼슘, 감자 또는 타피오카 전분, 알긴산, 특정 규산염 및 탄산나트륨, e) 용해 지연제, 예를 들어, 파라핀, f) 흡수 촉진제, 예를 들어, 4급 암모늄 화합물, g) 습윤제, 예를 들어, 세틸 알콜 및 글리세롤 모노스테아레이트, h) 흡수제, 예를 들어, 카올린 및 벤토나이트 점토 및 i) 윤활제, 예를 들어, 활석, 스테아르산칼슘, 스테아르산마그네슘, 고체 폴리에틸렌 글리콜,나트륨 라우릴 설페이트 및 이의 혼합물과 혼합한다. 캡슐제, 정제 및 환제의 경우에, 투여 형태는 또한 완충제를 포함할 수 있다.
유사한 유형의 고체 조성물은 또한 락토스 또는 유당과 같은 부형제 및 고분자량 폴리에틸렌 글리콜 등을 사용하여 연질 및 경질-충전된 젤라틴 캡슐제내의 충전재로서 사용할 수도 있다.
정제, 당제, 캡슐제, 환제 및 입제의 고체 투여 형태는 피막 및 쉘, 예를 들어, 장용피 및 약제학적 제형 분야에 익히 공지된 이외의 피막을 사용하여 제조할 수 있다. 이들은 임의로 불투명화제를 함유할 수 있고 또한 활성 성분만, 또는 우선적으로 장관의 특정 부분에, 임의로 지연된 방식으로 방출시키는 조성물일 수도 있다. 사용할 수 있는 삽입된 조성물의 예는 중합체성 물질 및 납을 포함한다.
활성 펩타이드 화합물은 또한, 경우에 따라, 하나 이상의 상기 언급한 부형제를 함유한 미소캡슐화 형태일 수도 있다.
경구 투여용 액체 투여 형태는 약제학적으로 허용되는 유제, 용제, 현탁제, 시럽제 및 엘리시르를 포함한다. 활성 화합물에 더하여, 액체 투여 형태는 당해 분야에서 통상적으로 사용되는 불활성 희석제, 예를 들어, 물 또는 이외의 용매, 가용화제 및 유화제, 예를 들어, 에틸 알콜, 이소프로필 알콜, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알콜, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸렌 글리콜, 디메틸 포름아마이드, 오일(특히, 면실유, 땅콩유, 옥수수유, 배유, 올리브유, 피마자유 및 참깨유), 글리세롤, 테트라하이드로푸르푸릴 알콜, 폴리에틸렌 글리콜 및 솔비탄의 지방산 에스테르, 및 이의 혼합물을 함유할 수 있다.
불활성 희석제 이외에, 경구 조성물은 또한 보조제, 예를 들어, 습윤제, 유화제 및 현탁화제, 감미제, 풍미제 및 향미제를 포함할 수도 있다.
현탁제는, 활성 화합물 이외에, 현탁화제, 예를 들어, 에톡실화 이소스테아릴 알콜, 폴리옥시에틸렌 솔비톨 및 솔비탄 에스테르, 미정질 셀룰로스, 알루미늄 메타하이드록사이드, 벤토나이트, 아가-아가 및 트라가칸트, 및 이의 혼합물을 함유할 수도 있다.
직장 또는 질 투여용 조성물은 바람직하게는 본 발명의 펩타이드 화합물을 적합한 비자극성 부형제 또는 담체, 예를 들어, 코코아 버터, 폴리에틸렌 글리콜 또는 실온에서는 고체이나 체온에서는 액체여서 직장강, 질강에서 용융되어 활성 펩타이드 화합물을 방출하는 좌제 납과 혼합함으로써 제조할 수 있는 좌제이다.
볼 또는 설하 막으로의 전달을 위해, 구강 투여 형태는 상기한 바와 같은 로젠지, 정제 또는 캡슐제를 전형적으로 사용한다. 또한, 당해 제형은 경구 점막에 점착제, 예를 들어, 본원에 참고로 인용된 미국 특허 제4,940,587호에 기술된 바와 같은 하이드록시프로필 셀룰로스와 함께 적용시킬 수 있다. 이들 제형은 약물의 구강내 및 볼 점막을 통한 조절된 방출을 가능하게 한다.
본 발명의 화합물은 또한 리포좀 형태로 투여할 수도 있다. 당해 분야에 공지된 바와 같이, 리포좀은 일반적으로 인지질 또는 이외의 지질 물질로부터 유도된다. 리포좀은 수성 매질에 분산되어 있는 모노- 또는 멀티-라멜라 수화 액체 결정에 의해 형성된다. 리포좀을 형성시킬 수 있는 무독성, 생리학적으로 허용되고 대사가능한 지질을 사용할 수 있다. 리포좀 형태의 본 조성물은 본 발명의 펩타이드화합물 이외에 안정화제, 방부제, 부형제 등을 함유할 수 있다. 바람직한 액체는 천연 및 합성 둘다의 인지질 및 포스파티딜 콜린(레시틴)이다.
리포좀을 형성시키는 방법은 당해 분야에 공지되어 있다. 예를 들어, 문헌 참조[Prescott, Ed.,Methods in Cell Biology, Volume XIV, Academic Press, New York, N.Y. (1976), p. 33 이하 참조].
본 발명의 펩타이드 화합물의 국소 투여용 투여 형태는 산제, 분제, 연고 및 흡입제를 포함한다. 활성 펩타이드 화합물을 무균 조건하에 약제학적으로 허용되는 담체 및 이외의 필요한 방부제, 완충제, 또는 필요할 수 있는 추진제와 혼합한다. 안과 제형, 안용 연고, 산제 및 용제가 또한 본 발명의 범주내에서 고려된다.
본 발명의 펩타이드 화합물은 이온전기도입법을 통해 경피적으로 전달할 수 있다. 일반적으로, 이온전기도입법은 전기장의 영향하에 생물학적 막을 통해 이온 용출액의 수송을 의미한다. 이온전기도입성 약물 전달은 펩타이드 투여의 장 경로를 비교적 효과가 없도록 만드는 위장 및 간장의 '제1 패스' 작용을 회피하는 능력을 갖는다.
일반적으로 이온전기도입 장치는 2개 이상의 전극, 전기 에너지원 및 전달할 펩타이드 화합물을 함유하는 하나 이상의 저장기를 포함한다. 저장기는 이온전기도입 장치와 피부 사이를 접촉하게 만드는데 적합한 제재의 형태일 수 있다. 적합한 제재는 발포체, 겔 및 매트릭스를 포함한다.
이온전기도입성 겔은 카라야 검, 이외의 다당류 겔, 또는 이온을 운반할 수 있는 유사한 친수성 수성 겔일 수 있다. 대표적인 겔은 폴리비닐 알콜, 폴리메틸피롤리딘, 메틸 셀룰로스, 폴리아크릴아미드, 폴리헤마, 폴리헤마 유도체 등을 포함한다. 선택된 매트릭스는 환자의 피부 또는 조직을 자극함을 방지하는 비자극성, 피부 또는 조직과의 우수한 전기 접촉을 수득하기 위한 적합한 전도성, 및 펩타이드 화합물용 담체 매질로서 작용하는 능력을 가져야만 한다.
펩타이드 화합물의 이온전기도입성 전달을 위한 이외의 수단은 펩타이드 화합물 및 재사용가능한 또는 재충전가능한 이온전기도입 장치를 포함하는 패치를 포함한다. 펩타이드의 이온전기도입성 전달은 미국 특허 제5,494,679호에 기술되어 있다. hPTH 유사체의 이온전기도입성 전달은 WO 95/11988-A1에 논의되어 있다.
또 다른 경피 전달 방법은 헬륨 기체의 분출을 사용하여 피부 또는 구강 점막을 통해 약물을 전달하는, 파우더젝트 파마슈티칼스(PowderJect Pharmaceticals: Magdalen Centre, Oxford Science Park, Oxford OX4 4GA, UK)에 의해 개발된 무침(needleless) 시스템이다. 특히, 약물 산제는 약 1000분의 3초 동안 약 750m/초로 가속화되어, 산제를 환자의 피부의 세포내 또는 세포 주변으로 및 전신 순환으로 통과할 수 있도록 한다.
펩타이드 화합물의 폐내 또는 비내 전달은 바람직하게는 계량된 투여량 흡입 장치(MDI)를 사용하여 환자의 기관지 또는 비 통로로의 에어로졸의 투여에 의해 달성한다. MDI에서의 사용을 위해, 펩타이드 화합물을 생리학적 불활성 에어로졸 추진제에 용해시키거나 현탁시킨다. MDI 장치에 유용한 추진제는 클로로플루오로카본(CFC), 예를 들어, CFC-11(트리플루오로클로로메탄), CFC-12(디클로로디플루오로메탄) 및 CFC-114(디클로로테트라플루오로에탄) 및 비-클로로플루오로카본(NCFC),예를 들어, 할로겐화 알칸, 예를 들어, HCHC-123(1,1,1-트리플루오로-2,2-디클로로에탄), HCFC-124(1,1,1,2-테트라플루오로클로로에탄), HCFC-141b, HCFC-225, HFC-125, FC-C51-12(퍼플루오로디메틸사이클로부탄), DYMEL A(디메틸 에테르) 및 DYMEL 152a(1,1-디플루오로에탄)를 포함한다.
당해 펩타이드 화합물은 추진제에 용해시킬 수 있거나 소적의 현탁액 또는 고체 입자의 미세 분산액의 형태를 취할 수 있다. 에어로졸 조성물은 또한 추가의 보조 용매, 계면활성제, 부형제 및 향미제 또는 맛 차폐제를 함유할 수 있다.
계면활성제는 의학적 활성 펩타이드 화합물의 흡입기 저장기내에서의 응집(예를 들어, '케이킹' 또는 결정화 형태로)을 방지하고, 에어로졸 투여시 균일한 투약을 용이하게 하고 순조롭게 호흡할 수 있는 분획(즉, 대부분의 방출이 흡수가 일어나는 폐포에 이르러 높은 폐 침착 효율을 방생시키는 입자 크기 분포)을 갖는 에어로졸 분무 방출을 제공하는데 필요하다. 에어로졸을 CFC 추진제내에 제형화시키는데 유용한 계면활성제는 당해 분야에 익히 공지되어 있다. 대표적인 계면활성제는 올레산, 솔비탄 트리올레에이트, 및 각종 장쇄 디글리세라이드 및 인지질을 포함한다.
할로겐화 알칸 추진제, 예를 들어, CFC-134a 및 HFC-277ea는 전형적인 CFC 추진제보다 실질적으로 덜 극성이고 공지된 MDI 제형에서 일반적으로 사용되는 다수의 계면활성제는 상기 신규한, 비-CFC 추진제와 불혼화성이거나 이에 불용성이므로, 이들과 비융화성인 것으로 밝혀져 있다.
미국 특허 제5,225,183호는 HFC-134a, 표면 활성제, 및 HFC-134a보다 높은극성을 갖는 보조제 또는 보조-용매를 포함하는 제형을 기술하고 있다. HFC-134a보다 높은 극성을 갖는 대표적인 보조제 또는 보조-용매는 알콜, 예를 들어, 에탄올, 이소프로판올 및 프로필렌 글리콜; 탄화수소, 예를 들어, 프로판, 부탄, 이소부탄, 펜탄, 이소펜탄 및 네오펜탄; 및 이외의 추진제, 예를 들어, 프로펠런트 11, 12, 114, 113 및 142b를 포함한다. 보조제는 CFC 추진제를 기재로 하는 것들과 필적할 만한 특성을 갖는 추진제 시스템을 제공하여 전형적인 계면활성제의 사용을 가능하게 하도록 요구되고 있다. HFC-134a와 이외의 용매 또는 추진제, 예를 들어, 디메틸 에테르; 플루오로카본, 예를 들어, 퍼플루오로프로판, 퍼플루오로부탄 및 퍼플루오로펜탄; 및 하이드로클로로플루오로카본, 예를 들어, HCHC-123과의 혼합물이 미국 특허 제5,190,029호에 기술되어 있다.
HFC-134a의 다수의 계면활성제와의 비융화성을 해결하는 또 다른 접근법은 이외의 표면 활성제를 CFC 에어로졸에 전형적으로 사용되는 것으로 대체하는 것이다. 극성 계면활성제, 예를 들어, 폴리에틸렌 글리콜, 디에틸렌 글리콜 모노에틸 에테르, 폴리옥시에틸렌(20) 솔비탄 모노올레에이트, 프로폭실화 폴리에틸렌 글리콜 및 폴리옥시에틸렌(4) 라우릴 에테르의 사용이 본원에 참고로 인용된 미국 특허 제5,492,688호에 기술되어 있다. 본원에 참고로 인용된 미국 특허 제5,182,097호는 올레산을 계면활성제로 사용할 경우 HFC-134a를 단독 추진제로서 사용할 수 있음을 기술하고 있다. 본원에 참고로 인용된 미국 특허 제5,182,097호는 불화 계면활성제의 사용이 HFC-134a를 단독 추진제로서 가능하게 함을 기술하고 있다. PCT 출원 제WO 91/11173은 불화 계면활성제와 통상적인 계면활성제 또는 이외의 보조제, 예를 들어, 폴옥사머 또는 폴리에틸렌 글리콜과의 혼합물이 하이드로플루오로카본 추진제의 사용을 가능하게 함을 기술하고 있다. 할로겐화 알칸 추진제를 사용한 에어로졸 제형을 제조하는데 사용되어 온 비-통상적인 부형제는 보호 콜로이드[참조: PCT 출원 제WO 95/15151] 및 토코페롤[참조: PCT 출원 제WO 95/24892]을 포함한다.
현탁액 에어로졸 제형은 계면활성제, 부형제 및 풍미제 또는 맛 차폐제를 목적하는 입자 크기로 분쇄하거나 이외의 방법으로 감소시킨 펩타이드 화합물과 혼합하고, 상기 혼합물을 적합한 에어로졸 용기 또는 바이알에 유입함으로써 제조한다. 용기를 밀봉한 후에, 에어로졸 추진제를 유입하고 시스템을 교반하여 성분을 완전히 혼합한다. 특정 경우에, 펩타이드 화합물을, 예를 들어, 펩타이드 화합물을 액체-상 에어로졸 추진제와 혼합하면서 분쇄시키는 것이 가능하게 하는 온도 및 압력 조건하에 밀폐 시스템에서 습식-분쇄하는 것이 필요할 수 있다. 펩타이드 화합물, 추진제 및 부형제의 특정 배합물의 경우, 성분의 이상적 첨가 순서 및 배합할 조건을 용이하게 측정할 수 있을 것으로 예상된다.
계량된 투여량 흡입기를 통한 전달 이외에, 이외의 폐 전달 시스템은 무수 산제 및 분무에 적합한 액체 용제 또는 현탁제를 포함한다. 수성 및 비수성계 용제 또는 분산제는 또한 기관 점적주입을 통해 투여할 수도 있다.
무수 산제 제형은 전형적으로 펩타이드 화합물을 폐의 폐포 영역내에서의 침착에 바람직한 범위내의 입자 크기를 갖는 무수의, 통상적으로 동결건조된 형태로 포함할 수 있다. 입자 크기는 바람직하게는 약 0.5㎛ 내지 5㎛이다. 바람직한 크기 범위내의 입자는 당해 분야에 익히 공지된 각종 기술, 예를 들어, 제트-분쇄, 분무 건조, 용매 침전 등에 의해 제조할 수 있다. 무수 산제는 환자에게 환자의 흡기성 호흡에 사용하는 통상적인 무수 산제 흡입기(DPI) 또는 외부 산제 공급원을, 산제를 에어로졸 분무로 분산시키는데 사용하는 공기-보조된 장치로 투여할 수 있다. 펩타이드 화합물은 약제학적으로 허용되는 무수 벌킹 산제와 배합할 수 있다. 바람직한 무수 벌킹 산제는 수크로스, 락토스, 트레할로스, 사람 혈청 알부민(HSA) 및 글리신을 포함한다. 이외의 적합한 무수 벌킹 산제는 셀루비오스, 덱스트란, 말토트리오스, 펙틴, 시트르산나트륨, 아스코르브산나트륨, 만니톨 등을 포함한다.
분무용 액체 펩타이드 화합물 제형은 아세테이트, 아스코르베이트 및 시트레이트를 포함한 약산성(pH 4-6) 완충제를 사용할 수 있다. 이들 완충제가 항산화제로서 작용할 수 있거나, 약제학적으로 허용되는 항산화제를 가하여 산화로부터 유리 메티오닌을 보호할 수 있다. 킬레이트화제, 프로테아제 억제제, 등장성 조절제, 불활성 기체 등을 포함한 이외의 제제를 가하여 화학적 안정성을 유지할 수 있다.
펩타이드 화합물의 수성 용제 또는 현탁제를 기관내 흡입에 의해 투여할 수 있다. 수성 비히클은 순수한 물, 실질적으로 순수한 물 또는 이외의 부형제, 예를 들어, 염, 이온 또는 수성계 시스템에서 일반적으로 사용되는 상기한 바와 같은 이외의 부형제와 배합된 물로부터 선택한다. 액체 제형은 용제계 분산제 또는 용매 또는 보조용매, 예를 들어, 알콜 또는 물을 함유한 글리콜 중의 용제의 형태이다.비-수성 용제는 물을 함유하나 높은 비율의 물을 포함하지 않고 효과적이고 안전한 전달 비히클로서 당해 분야의 숙련가에게 공지되어 있는 알콜 또는 글리콜계 시스템을 포함한다.
본 발명의 약제학적 조성물 중의 활성 성분의 실질적 투여량 수준은 특정 환자에 대해 목적하는 치료학적 반응을 성취하는데 유효한 활성 펩타이드 화합물의 양, 조성물, 및 투여 양식을 수득하도록 변화시킬 수 있다. 선택된 투여량 수준은 특정 펩타이드 화합물의 활성, 투여 경로, 치료할 상태의 중증도, 및 치료할 환자의 상태 및 이전 병력에 따라 달라진다. 그러나, 펩타이드 화합물의 투여량을 목적하는 치료학적 효과를 성취하는데 필요로 하는 것보다 낮은 수준으로 시작하여 목적하는 효과를 성취할 때까지 투여량을 점차적으로 증가시키는 것이 당해 분야의 기술의 범위내이다.
일반적으로, 피하 투여의 경우, 약 0.5㎍ 내지 약 1500㎍의 투여량 수준이 바람직하고, 약 0.5㎍ 내지 약 1000㎍의 투여량 수준이 보다 바람직하고, 약 1㎍ 내지 약 200㎍의 투여량 수준이 가장 바람직하다. 폐내 전달의 경우, 약 0.5㎍ 내지 약 10,000㎍의 투여량 수준이 바람직하고, 약 1㎍ 내지 약 5000㎍의 투여량 수준이 가장 바람직하다. 특히 바람직한 국면에서, 본 발명의 펩타이드 화합물 약 1㎍ 내지 약 5000㎍을 매일 포유동물 환자에게, 바람직하게는 피하 또는 폐내로 투여한다.
시험관내 및 생체내 시험 과정
본 발명의 범주내의 화합물은 당업계에서 수용되고 또 사람 및 포유동물에서의 약리 활성과 상관관계가 있는 것으로 당업계에 인용된, 본원 출원전 공지된 문헌에 기술된 활성시험에서, 현저한 약리학적 활성을 나타내었다. 하기 생체내 및 시험관내 약리학적 시험은 본 발명의 화합물을 특성화시키는데 통상적인 시험방법이다.
1. ROS 17/2.8 세포내에서의 아데닐레이트 사이클라제의 자극
PTH 수용체에 결합하여 아데닐레이트 사이클라제(AC)를 자극하는 본 발명 화합물의 능력은, 다음과 같은 ROS 17/2.8 세포내에서의 cAMP 검정을 사용하여 측정한다: Ros 17/2.8 세포를 24웰 플레이트내에 1x105개 세포/웰로 플레이팅시킨다. 3 내지 5일 후, 배양 배지를 흡출시키고 햄스 F12 배지, 2mM IBMX, 1mg/mL BSA, 35mM HEPES 및 20㎍/mL 아스코르브산을 함유하는 cAMP 검정 완충액 0.5mL로 대체한다. 세포를 37℃에서 30분 동안 배양함으로써 검정 완충액내에서 평형화시킨다. 다음, cAMP 완충액을 흡출시킨다. PTH 유사체를 여러 농도로 검정 완충액내에 희석시키고 웰에 가한다. 다음, 세포를 37℃에서 20분 동안 배양한다. 배양 후, 세포를 1% Triton의 첨가에 의해 가용화시킨다. 전체 cAMP를 cAMP 신틸레이션 프록시머티 검정(Scintillation Proximity Assay) 스크리닝 시스템(Amersham, Arlington Heights, IL)을 사용하여 측정하고 샘플을 왈락 미세역가 플레이트 신틸레이션 카운터를 사용하여 카운팅한다. 데이터는 2개 샘플의 평균 cAMP 값 +/- SD를 나타낸다. EC50치는 최고 자극의 1/2을 유도하는데 필요로 하는 농도로서 정의하고 4-파라미터 적의화 방정식을 사용하여 계산한다.
2. ROS 17/2.8 세포내에서의 PTH 수용체에의 결합
PTH 수용체에의 결합에 대한 PTH와 본 발명의 화합물의 경쟁을 하기한 PTH 수용체 결합 검정을 사용하여 측정한다:
ROS 17/2.8 세포를 플레이팅시키고 cAMP 검정에 대해 기술한 바와 같이 준비한다. 3 내지 5일 후, 배양 배지를 흡출시키고 세포를 결합 완충액[50mM Tris-HCl(pH 7.7), 100mM NaCl, 2mM CaCl2, 5mM KCl, 0.5% HIFCS, 5% HI 말 혈청] 1mL로 2회 세척한다. 세포를 미표지된 PTH 유사체의 존재 및 부재하 둘다에서 100pM125I-[Nle8,18, Tyr34]hPTH(1-34)NH2(Amersham, Arlington Heights, IL)와 함께 배양한다. 22℃에서 2시간 동안 배양한 후, 완충액을 흡출시키고 세포를 차가운 검정 완충 용액으로 3회 세척함으로써 결합을 종결시킨다. 세포-결합된 방사능을 0.1N NaOH의 첨가에 의해 회복시키고 팩카드(Packard) 감마 카운터를 사용하여 카운팅한다. 전체 특이적 결합을 미표지된 펩타이드 화합물을 전혀 함유하지 않은 웰로부터 측정한다. 데이터는 2개의 샘플의 전체 결합의 평균 % +/- SD를 나타낸다. 경쟁 결합에 대한 IC50치는 4-파라미터 적의화 방정식을 사용하여 계산한다.
3. 마우스 및 래트 두개관 세포 배양물내에서의 아데닐레이트 사이클라제의 자극
마우스 및 래트 두개관 세포 배양물의 본 발명의 화합물에 대한 cAMP 반응을 다음과 같이 측정한다:
골아세포를 태아 래트 두개관(수태 19 내지 20일째) 또는 신생아 마우스 두개관(생후 1 내지 2일째)으로부터 분리한다. 전두골 및 두정부골을 분리하고, 골막을 제거하고 결합 조직을 떼어내어 가위로 저민다. 다음, 후속적으로 저민 두개관을 트립신(0.5%) 및 EDTA(0.53mM)와 함께 1형 콜라게나제(0.1%)로 20분 동안 분해한다. 분해물 4 내지 7로부터 방출된 세포를 풀링시키고 세척하여 콜라게나제를 제거한다. 세포를 24웰 플레이트내의 10% FBS를 함유한 MEM에 1x105/mL의 농도로 플레이팅시킨다. 세포를 37℃에서 30분 동안 배앙함으로써 검정 완충액내에 평형화시킨다. 다음, cAMP 완충액을 흡출시킨다. 각종 농도의 PTH 펩타이드 화합물을 검정 완충액내에 희석시킨 다음 가한다. 세포를 37℃에서 20분 동안 배양한다. 배양 후, 세포를 1% Triton의 첨가에 의해 가용화시킨다. 전체 cAMP를 cAMP 신틸레이션 프록시머티 검정 스크리닝 시스템(Amersham, Arlington Heights, IL)을 사용하여 측정하고 샘플을 왈락 미세역가 플레이트 신틸레이션 카운터를 사용하여 카운팅한다. 데이터는 2개 샘플의 평균 cAMP 값 +/- SD를 나타낸다. EC50치는 최고 자극의 1/2을 유도하는데 필요로 하는 농도로서 정의하고 4-파라미터 적의화 방정식을 사용하여 계산한다.
4. 래트에서의 cAMP 생산의 자극
암컷 하를란 스프라그-돌리 래트(루이스 계통, 200g)를 케타민(70mg/kg)/크실라진(6mg/kg) 혼합물을 사용하여 마취시킨다. 다음, 시험할 화합물을 인산염-완충 염수 비히클(1mL/kg)로 바람직한 경로(예를 들어, 정맥내, 피하 또는 기관내)에 의해 투여한다. 1시간 후에, 요도 카테터를 통해 또는 방광 부위에 손으로 완만한 압력을 적용시킴으로써 요를 수집한다. 또한, 심장 천자에 의해 혈액 샘플을 수집한다. 요 샘플을 쟈페[참고 문헌: Jaffe, M., Hoppe Seylers Z. Physiol. Chem.,1886, 10, 391]에 의해 기술된 바와 같은 방사선면역검정(Incstar, Stillwater. MN)을 사용하여 cAMP 농도에 대해 검정한다. 혈청 및 요소 크레아티닌을 또한 측정하고 크레아티닌 농도를 사용하여 cAMP 농도를 사구의 여과의 함수로서 표현한다.
5. 래트에서의 골 작용의 측정
번식을 멈춘 암컷 래트(스프라그-돌리, 생후 8 내지 10개월째)를 좌우 난소척제술에 적용시킨다. 난소척제술 2개월 후, 대표적인 펩타이드 화합물로의 치료를 개시한다. 펩타이드 화합물은 2% 열-불활성화 래트 혈청을 함유하는 등장성, 인산염-완충 염수내에 제조한다. 상기 동물에게 4주 동안 매일 피하 주사한다(5일/주). 마지막 치료한 다음날, 전신 골 미네랄 밀도를 2원 에너지 X-선 흡수측정법(DEXA)에 의해 측정하여 동화작용 반응의 범위를 측정한다.
6. PTH 길항제 활성의 시험관내 측정
배양된 본원에 참고로 인용된 미국 특허 제5,446,130호에 기술된 바와 같은 마우스 골아세포 MC3T3-E1을 사용하여 cAMP의 산출량을 측정함으로써 본 발명의 화합물의 길항제 활성을 측정한다.
7. PTH 길항제 활성의 생체내 측정
본원에 참고로 인용된 미국 특허 제4,423,037호에 기술된 바와 같은 PTH 활성의 효과적인 측정법으로서 당해 분야에 익히 공지된 표준 기술을 사용하여 요의 인산염 및 cAMP를 측정함으로써 본 발명의 펩타이드 화합물의 PTH 길항제로서의 생체내 효능을 측정한다.

Claims (86)

  1. 하기 화학식 I의 사이클릭 펩타이드 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
    화학식 I
    X-A10-A11-A12-A13-A14-A15-A16-A17-A18-A19-A20-A21-A22-A23-A24-A25-A26-A27-Y
    상기식에서,
    X는,
    (a) R1a-A0-A1-A2-A3-A4-A5-A6-A7-A8-A9-,
    (b) R1a-A2-A3-A4-A5-A6-A7-A8-A9-,
    (c) R1b-A3-A4-A5-A6-A7-A8-A9-,
    (d) R1a-A4-A5-A6-A7-A8-A9-,
    (e) R1a-A5-A6-A7-A8-A9-,
    (f) R1a-A6-A7-A8-A9-,
    (g) R1a-A7-A8-A9-,
    (h) R1a-A8-A9-,
    (i) R1a-A9- 및
    (j) R1a-로 이루어진 그룹으로부터 선택되고;
    Y는,
    (a) -R3,
    (b) -A28-R3,
    (c) -A28-A29-R3,
    (d) -A28-A29-A30-R3,
    (e) -A28-A29-A30-A31-R3,
    (f) -A28-A29-A30-A31-A32-R3,
    (g) -A28-A29-A30-A31-A32-A33-R3및
    (h) -A28-A29-A30-A31-A32-A33-A34-R3로 이루어진 그룹으로 선택되고;
    R1a는 H, C1-C20의 알킬, 아릴잔기가 C6-C14의 방향족 일환 또는 다환인 아르알킬 또는 -COR2이고;
    R1b는 R1a또는 식또는의 그룹이고;
    R2는 C1-C20의 알킬, C2-C20의 알케닐, C2-C20의 알키닐, C6-C14의 아릴 또는 아릴잔기가 C6-C14의 방향족 일환 또는 다환인 아르알킬이고;
    R3은 식 A35-OR4또는 A35-NR4R5의 그룹이고;
    R4및 R5는 독립적으로 H 또는 C1-C4의 저급 알킬이고;
    R6또는 R9는 독립적으로 H 또는 C1-C20의 알킬이고;
    R7은 C1-C20의 알킬이고;
    R8은 H, C1-C20의 알킬 또는 COR2이고;
    R10은 H 또는 할로겐이고;
    R11은 C1-C20의 알킬 또는 아릴잔기가 C6-C14의 방향족 일환 또는 다환인 아르알킬이고;
    m은 1, 2 또는 3이고;
    n은 3 또는 4이고;
    A0은 존재하지 않거나 1 내지 6개의 아미노산 잔기의 펩타이드이고;
    A1은 Ser, Ala, Gly 또는 D-Pro이고;
    A2는 Ala, Val 또는 Gly이고;
    A3은 Ala, Ser, Gly 또는 D-Pro이고;
    A4는 Glu, Ala 또는 Gly이고;
    A5는 Ile, His, Ala 또는 Gly이고;
    A6은 Ala, Gln, Gly 또는 D-Pro이고;
    A7은 Ala, Leu 또는 Gly이고;
    A8은 Leu, Nle, Gly 또는 D-Pro이고;
    A9는 His, Ala, D-Pro 또는 Gly이고;
    A10은 Ala, Asn, Asp, Cys, 호모-Cys, Glu, Gly, Lys, Orn, Ser, Thr, D-Pro, -NHCH((CH2)mNH2)CO- 또는 -NHCH[(CH2)nCO2H]CO-이고;
    A11은 Ala, Gly, Leu 또는 Lys이고;
    A12는 Ala 또는 Gly이고;
    A13은 Ala, Asn, Asp, Cys, 호모-Cys, Glu, Gly, Lys, Orn, Ser, Thr, -NHCH((CH2)mNH2)CO- 또는 -NHCH[(CH2)nCO2H]CO-이고;
    A14는 Ala, Asn, Asp, Cys, 호모-Cys, Glu, Gly, His, Lys, Orn, Ser, Thr, D-Pro, -NHCH((CH2)mNH2)CO- 또는 -NHCH[(CH2)nCO2H]CO-이고;
    A15는 Ala, Gly, Ile, D-Pro 또는 Leu이고;
    A16은 Asn, Ala, Gly, D-Pro 또는 Gln이고;
    A17은 Ala, Asn, Asp, Cys, 호모-Cys, Glu, Gly, Lys, Orn, Ser, Thr, D-Pro, -NHCH((CH2)mNH2)CO- 또는 -NHCH[(CH2)nCO2H]CO-이고;
    A18은 Asp, Cys, 호모-Cys, Glu, His, Lys, Orn, Nle, Ser, Thr, -NHCH((CH2)mNH2)CO- 또는 -NHCH[(CH2)nCO2H]CO-이고;
    A19는 Arg 또는 Glu이고;
    A20은 Arg이고;
    A21은 Arg, Asp, Cys, 호모-Cys, Glu, Lys, Orn, Ser, Thr, Val, -NHCH((CH2)mNH2)CO- 또는 -NHCH[(CH2)nCO2H]CO-이고;
    A22는 Asp, Cys, 호모-Cys, Glu, His, Lys, Orn, Phe, Ser, Thr, -NHCH((CH2)mNH2)CO- 또는 -NHCH[(CH2)nCO2H]CO-이고;
    A23은 Leu, Phe 또는 Trp이고;
    A24는 Leu이고;
    A25는 Arg, Asp, Cys, 호모-Cys, Glu, His, Lys, Orn, D-Pro, Ser, Thr, -NHCH((CH2)mNH2)CO- 또는 -NHCH[(CH2)nCO2H]CO-이고;
    A26은 Asp, Cys, 호모-Cys, Glu, His, Lys, Orn, Ser, Thr, -NHCH((CH2)mNH2)CO- 또는 -NHCH[(CH2)nCO2H]CO-이고;
    A27은 Leu 또는 Lys이고;
    A28은 Ile 또는 Leu이고;
    A29는 Ala, Asp, Cys, 호모-Cys, Glu, Gln, Lys, Orn, Ser, Thr, -NHCH((CH2)mNH2)CO- 또는 -NHCH[(CH2)nCO2H]CO-이고;
    A30은 Asp, Cys, 호모-Cys, Glu, Gly, Lys, Orn, Ser, Thr, -NHCH((CH2)mNH2)CO- 또는 -NHCH[(CH2)nCO2H]CO-이고;
    A31은 Ile, Leu 또는 Val이고;
    A32는 His이고;
    A33은 Asn 또는 Thr이고;
    A34는 Ala 또는 Phe이고;
    A35는 존재하지 않거나 1 내지 4개의 아미노산의 펩타이드이고;
    하나 이상의 다음 아미노산 잔기 쌍, A10과 A14, A13과 A17, A14와 A18, A17과 A21, A18과 A22, A21과 A25, A25와 A29및 A26과 A30의 측쇄는 아미드, 에스테르, 디설파이드 또는 란티오닌 결합을 통해 결합하여 가교를 형성시키고, 각각의 다음 아미노산 잔기, A10, A13, A14, A17, A18, A21, A22, A25, A26, A29및 A30의 측쇄는 많아야 하나의 가교의 형성에 기여하는데; 단, 다음 아미노산 잔기 쌍, A13과 A17또는 A26과 A30의 측쇄가 아미드, 디설파이드 또는 란티오닌 결합을 통해 결합하여 가교를 형성시킬 경우, 하나 이상의 다음 아미노산 잔기 쌍, A10과 A14, A14와 A18, A17과 A21, A18과 A22, A21과 A25및 A25와 A29의 측쇄 또한 아미드, 에스테르, 디설파이드 또는 란티오닌 결합을 통해 결합한다.
  2. 제1항에 있어서, 한쌍의 아미노산 잔기의 측쇄로부터 형성된 가교가 또 다른 한쌍의 아미노산 잔기의 측쇄 사이에 형성된 가교와 중첩되지 않는 펩타이드 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  3. 제2항에 있어서, A10이 Ala, Asn, Asp, Gly 또는 Lys이고;
    A13이 Ala, Gly 또는 Lys이고;
    A14가 Ala, Asp, Gly, His, Lys 또는 Ser이고;
    A17이 Ala, Asp, Gly, Lys 또는 Ser이고;
    A18이 Asp, Leu, Lys, Orn 또는 Nle이고;
    A21이 Arg, Asp, Lys 또는 Val이고;
    A22가 Asp, Glu, Lys, Orn 또는 Phe이고;
    A25가 Arg, Asp, Glu, His 또는 Lys이고;
    A26이 His 또는 Lys이고;
    A29가 Ala, Asp, Glu 또는 Gln이고;
    A30이 Asp, Glu 또는 Lys이고;
    하나 이상의 다음 아미노산 잔기 쌍, A10과 A14, A13과 A17, A14와 A18, A17과 A21, A18과 A22, A21과 A25, A25와 A29및 A26과 A30의 측쇄는 아미드 결합을 통해 결합하여 가교를 형성시키고, 각각의 다음 아미노산 잔기, A10, A13, A14, A17, A18, A21, A22, A25, A26, A29및 A30의 측쇄는 많아야 하나의 가교의 형성에 기여하는데; 단,
    (a) A13과 A17의 측쇄가 아미드 결합을 통해 결합하여 가교를 형성시킬 경우, 하나 이상의 다음 아미노산 잔기 쌍, A18과 A22, A21과 A25및 A25와 A29의 측쇄 또한 아미드 결합을 통해 결합하고;
    (b) A26과 A30의 측쇄가 아미드 결합을 통해 결합하여 가교를 형성시킬 경우, 하나 이상의 다음 아미노산 잔기 쌍, A10과 A14, A14와 A18, A17과 A21, A18과 A22및 A21과 A25의 측쇄 또한 아미드 결합을 통해 결합하고;
    (c) A13과 A17또는 A26과 A30의 측쇄가 아미드 결합을 통해 결합하여 가교를 형성시킬 경우, 다음 아미노산 잔기 쌍, A18과 A22또는 A21과 A25의 측쇄 또한 아미드 결합을 통해 결합하는 펩타이드 화합물.
  4. 제3항에 있어서, R1a가 H이고 Y가 NH2인 펩타이드 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  5. 제4항에 있어서, X가 (a) R1a-A1-A2-A3-A4-A5-A6-A7-A8-A9-, (b) R1a-A2-A3-A4-A5-A6-A7-A8-A9- 또는 (c) R1a-A3-A4-A5-A6-A7-A8-A9-인 펩타이드 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  6. 제5항에 있어서, A1이 Ala, Gly 또는 D-Pro이고, A8이 Nle이고, A27이 Leu인 펩타이드 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  7. 제6항에 있어서, (i) A10 및 A14의 측쇄가 아미드 결합을 통해 결합하여 가교를 형성시키거나; (ii) A14및 A18의 측쇄가 아미드 결합을 통해 결합하여 가교를 형성시키거나; (iii) A17 및 A21의 측쇄가 아미드 결합을 통해 결합하여 가교를 형성시키거나; (iv) A18 및 A22의 측쇄가 아미드 결합을 통해 결합하여 가교를 형성시키거나; (v) A21 및 A25의 측쇄가 아미드 결합을 통해 결합하여 가교를 형성시키거나; (vi) A25 및 A29의 측쇄가 아미드 결합을 통해 결합하여 가교를 형성시키는 펩타이드 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  8. 제7항에 있어서, A10이 Asp 또는 Lys이고; A13이 Lys이고; A14가 Asp 또는 Lys이고; A17이 Asp 또는 Ser이고; A18이 Nle이고; A21이 Arg 또는 Val이고; A22가 Glu 또는 Phe이고; A25가 Arg 또는 His이고; A26이 Lys 또는 His이고; A29가 Ala 또는 Gln이고; A30이 Asp 또는 Glu이고; A10과 A14의 측쇄가 아미드 결합을 통해 결합하여 가교를 형성시키는 펩타이드 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  9. 제7항에 있어서, A10이 Asn 또는 Asp이고; A13이 Lys이고; A14가 Asp 또는 Lys이고; A17이 Asp 또는 Ser이고; A18이 Nle이고; A21이 Arg 또는 Val이고; A22가 Glu 또는 Phe이고; A25가 Arg 또는 His이고; A26이 His 또는 Lys이고; A29가 Ala 또는 Gln이고; A30이 Asp 또는 Glu이고; A14과 A18의 측쇄가 아미드 결합을 통해 결합하여 가교를 형성시키는 펩타이드 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  10. 제7항에 있어서, A10이 Asn 또는 Asp이고; A13이 Lys이고; A14가 His 또는 Ser이고; A17이 Asp 또는 Lys이고; A18이 Nle이고; A21이 Asp 또는 Lys이고; A22가 Glu 또는 Phe이고; A25가 Arg 또는 His이고; A26이 His 또는 Lys이고; A29가 Ala 또는 Gln이고; A30이 Asp 또는 Glu이고; A17와 A21의 측쇄가 아미드 결합을 통해 결합하여 가교를 형성시키는 펩타이드 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  11. 제7항에 있어서, A10이 Asn 또는 Asp이고; A13이 Lys이고; A14가 His 또는 Ser이고; A17이 Asp 또는 Ser이고; A18이 Asp, Lys 또는 Orn이고; A21이 Arg 또는 Val이고; A22가 Asp, Glu, Lys 또는 Orn이고; A25가 Arg 또는 His이고; A26이 His 또는 Lys이고; A29가 Ala 또는 Gln이고; A30이 Asp 또는 Glu이고; A18과 A22의 측쇄가 아미드 결합을 통해 결합하여 가교를 형성시키는 펩타이드 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  12. 제7항에 있어서, A10이 Asn 또는 Asp이고; A13이 Lys이고; A14가 His 또는 Ser이고; A17이 Asp 또는 Ser이고; A18이 Nle이고; A21이 Asp 또는 Lys이고; A22가 Glu 또는 Phe이고; A25가 Asp 또는 Lys이고; A26이 His 또는 Lys이고; A29가 Ala 또는 Gln이고; A30이 Asp 또는 Glu이고; A21과 A25의 측쇄가 아미드 결합을 통해 결합하여 가교를 형성시키는 펩타이드 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  13. 제7항에 있어서, A10이 Asn 또는 Asp이고; A13이 Lys이고; A14가 His 또는 Ser이고; A17이 Asp 또는 Ser이고; A18이 Nle이고; A21이 Arg 또는 Val이고; A22가 Glu 또는 Phe이고; A25가 Asp 또는 Lys이고; A26이 His 또는 Lys이고; A29가 Asp 또는 Lys이고; A30이 Asp 또는 Glu이고; A25와 A29의 측쇄가 아미드 결합을 통해 결합하여 가교를 형성시키는 펩타이드 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  14. 제6항에 있어서, (i) A13과 A17의 측쇄가 아미드 결합을 통해 결합하고 A18과 A22의 측쇄가 아미드 결합을 통해 결합하여 가교를 형성시키고; (ii) A18과 A22의 측쇄가 아미드 결합을 통해 결합하고 A26과 A30의 측쇄가 아미드 결합을 통해 결합하여 가교를 형성시키는 펩타이드 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  15. 제14항에 있어서, A10이 Asn 또는 Asp이고; A13이 Lys 또는 Asp이고; A14가 His 또는 Ser이고; A17이 Lys 또는 Asp이고; A18이 Lys 또는 Asp이고; A21이 Val 또는 Arg이고; A22가 Glu, Lys 또는 Asp이고; A25가 Arg 또는 His이고; A26이 His 또는 Lys이고; A29가 Ala 또는 Gln이고; A30이 Asp 또는 Glu이고; A13과 A17의 측쇄가 아미드 결합을 통해 결합하여 가교를 형성시키고 A18과 A22의 측쇄가 아미드 결합을 통해 결합하여 가교를 형성시키는 펩타이드 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  16. 제14항에 있어서, A10이 Asn 또는 Asp이고; A13이 Lys이고; A14가 His 또는 Ser이고; A17이 Ser 또는 Asp이고; A18이 Lys 또는 Asp이고; A21이 Val 또는 Arg이고; A22가 Glu, Lys 또는 Asp이고; A25가 Arg 또는 His이고; A26이 Lys 또는 Asp이고; A29가 Ala 또는 Gln이고; A30이 Lys 또는 Asp이고; A18과 A22의 측쇄가 아미드 결합을 통해 결합하여 가교를 형성시키고 A26과 A30의 측쇄가 아미드 결합을 통해 결합하여 가교를 형성시키는 펩타이드 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  17. 제6항에 있어서, A13과 A17의 측쇄가 아미드 결합을 통해 결합하여 가교를 형성시키고, A18과 A22의 측쇄가 아미드 결합을 통해 결합하여 가교를 형성시키고, A26과 A30의 측쇄가 아미드 결합을 통해 결합하여 가교를 형성시키는 펩타이드 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  18. 제17항에 있어서, A10이 Asn 또는 Asp이고; A13이 Lys 또는 Asp이고; A14가 His 또는 Ser이고; A17이 Lys 또는 Asp이고; A18이 Lys 또는 Asp이고; A21이 Val 또는 Arg이고; A22가 Glu, Lys 또는 Asp이고; A25가 Arg 또는 His이고; A26이 Lys 또는 Asp이고; A29가 Ala 또는 Gln이고; A30이 Lys 또는 Asp인 펩타이드 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  19. 제1항에 있어서, 사이클로(K18-D22)[A1,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 3);
    사이클로(K18-D22)[A1,2,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 5);
    사이클로(K18-D22)[A1,3,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 6);
    사이클로(K18-D22)[A1,4,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 7);
    사이클로(K18-D22)[A1,5,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 8);
    사이클로(K18-D22)[A1,6,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 9);
    사이클로(K18-D22)[A1,7,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 10);
    사이클로(K18-D22)[A1,9,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 11);
    사이클로(K18-D22)[A1,10,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 12);
    사이클로(K18-D22)[A1,11,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 13);
    사이클로(K18-D22)[A1,12,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 14);
    사이클로(K18-D22)[A1,13,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 15);
    사이클로(K18-D22)[A1,14,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 16);
    사이클로(K18-D22)[A1,15,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 17);
    사이클로(K18-D22)[A1,16,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 18);
    사이클로(K18-D22)[A1,17,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 19);
    사이클로(K18-D22)[G1,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 20);
    사이클로(K18-D22)[A1,G2,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 21);
    사이클로(K18-D22)[A1,G3,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 22);
    사이클로(K18-D22)[A1,G4,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 23);
    사이클로(K18-D22)[A1,G5,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 24);
    사이클로(K18-D22)[A1,G6,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 25);
    사이클로(K18-D22)[A1,G7,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 26);
    사이클로(K18-D22)[A1,G8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 27);
    사이클로(K18-D22)[A1,G9,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 28);
    사이클로(K18-D22)[A1,G10,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 29);
    사이클로(K18-D22)[A1,G11,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 30);
    사이클로(K18-D22)[A1,G13,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 31);
    사이클로(K18-D22)[A1,G14,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 32);
    사이클로(K18-D22)[A1,G15,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 33);
    사이클로(K18-D22)[A1,G16,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 34);
    사이클로(K18-D22)[A1,G17,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 35);
    사이클로(K18-D22)[D-P1,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 36);
    사이클로(K18-D22)[A1,D-P3,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 37);
    사이클로(K18-D22)[A1,D-P6,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 38);
    사이클로(K18-D22)[A1,D-P7,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 39);
    사이클로(K18-D22)[A1,D-P9,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 40);
    사이클로(K18-D22)[A1,D-P10,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 41);
    사이클로(K18-D22)[A1,D-P14,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 42);
    사이클로(K18-D22)[A1,D-P15,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 43);
    사이클로(K18-D22)[A1,D-P16,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 44);
    사이클로(K18-D22)[A1,D-P17,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 45);
    사이클로(K18-D22)[A1,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-34)NH2(서열 46);
    사이클로(D18-K22)[A1,Nle8,D18,K22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 47);
    사이클로(O18-D22)[A1,Nle8,O18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 48);
    사이클로(D18-O22)[A1,Nle8,D18,O22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 49);
    사이클로(K18-E22)[A1,Nle8,K18,E22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 50);
    사이클로(O18-E22)[A1,Nle8,O18,E22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 51);
    사이클로(K18-D22)[A1,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-30)NH2(서열 52);
    사이클로(K18-D22)[A1,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-29)NH2(서열 53);
    사이클로(K18-D22)[A1,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-28)NH2(서열 54);
    사이클로(K18-D22)[A1,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-27)NH2(서열 55);
    사이클로(K18-D22)[Nle8,K18,D22,L27]hPTH(3-31)NH2(서열 63);
    사이클로(K18-D22)[Nle8,K18,D22,L27]hPTH(2-31)NH2(서열 64);
    사이클로(K10-D14)[A1,Nle8,18,K10,D14,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 66);
    사이클로(K14-D18)[A1,Nle8,K14,D18,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 67);
    사이클로(K17-D21)[A1,Nle8,18,K17,D21,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 68);
    사이클로(K21-D25)[A1,Nle8,18,K21,D25,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 69);
    사이클로(K25-D29)[A1,Nle8,18,K25,D29,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 70);
    사이클로(K18-D22)[K18,D22]hPTHrP(1-34)NH2(서열 71);
    사이클로(K18-D22)[K18,26,30,D22,L23,28,31, E25,29]hPTHrP(1-34)NH2(서열 72);
    비사이클로(K13-D17,K18-D22)[A1,Nle8,D17,22,K18,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 73);
    비사이클로(K18-D22,K26-D30)[A1,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 74); 및
    트리사이클로(K13-D17,K18-D22,K26-D30)[A1,Nle8,K18,D17,22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 80)으로부터 선택되는 펩타이드 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  20. 제1항에 있어서, 사이클로(K18-D22)[A1,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 3);
    사이클로(K18-D22)[A1,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-34)NH2(서열 46);
    사이클로(K18-D22)[A1,3,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 6);
    사이클로(K18-D22)[A1,6,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 9);
    사이클로(K18-D22)[A1,10,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 12);
    사이클로(K18-D22)[A1,11,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 13);
    사이클로(K18-D22)[A1,12,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 14);
    사이클로(K18-D22)[A1,13,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 15);
    사이클로(K18-D22)[A1,14,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 16);
    사이클로(K18-D22)[A1,15,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 17);
    사이클로(K18-D22)[A1,16,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 18);
    사이클로(K18-D22)[A1,17,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 19);
    사이클로(K18-D22)[G1,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 20);
    사이클로(K18-D22)[A1,G2,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 21);
    사이클로(K18-D22)[A1,G3,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 22);
    사이클로(K18-D22)[A1,G10,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 29);
    사이클로(K18-D22)[A1,G13,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 31);
    사이클로(K18-D22)[A1,G16,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 34);
    사이클로(K18-D22)[A1,G17,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 35);
    사이클로(K18-D22)[D-P1,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 36);
    사이클로(D18-K22)[A1,Nle8,D18,K22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 47);
    사이클로(O18-D22)[A1,Nle8,O18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 48);
    사이클로(D18-O22)[A1,Nle8,D18,O22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 49);
    사이클로(K18-E22)[A1,Nle8,K18,E22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 50);
    사이클로(O18-E22)[A1,Nle8,O18,E22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 51);
    사이클로(K18-D22)[A1,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-30)NH2(서열 52);
    사이클로(K18-D22)[A1,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-29)NH2(서열 53);
    사이클로(K18-D22)[A1,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-28)NH2(서열 54);
    사이클로(K10-D14)[A1,Nle8,18,K10,D14,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 66);
    사이클로(K14-D18)[A1,Nle8,K14,D18,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 67);
    사이클로(K17-D21)[A1,Nle8,18,K17,D21,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 68);
    사이클로(K21-D25)[A1,Nle8,18,K21,D25,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 69);
    사이클로(K25-D29)[A1,Nle8,18,K25,D29,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 70);
    사이클로(K18-D22)[K18,D22]hPTHrP(1-34)NH2(서열 71);
    사이클로(K18-D22)[K18,26,30,D22,L23,28,31, E25,29]hPTHrP(1-34)NH2(서열 72);
    비사이클로(K13-D17,K18-D22)[A1,Nle8,D17,22,K18,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 73);
    비사이클로(K18-D22,K26-D30)[A1,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 74); 및
    트리사이클로(K13-D17,K18-D22,K26-D30)[A1,Nle8,K18,D17,22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 80)로부터 선택되는 펩타이드 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  21. 제1항에 있어서, 사이클로(K18-D22)[A1,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 3);
    사이클로(K18-D22)[A1,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-34)NH2(서열 46);
    사이클로(K18-D22)[A1,10,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 12);
    사이클로(K18-D22)[A1,12,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 14);
    사이클로(K18-D22)[A1,13,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 15);
    사이클로(K18-D22)[A1,14,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 16);
    사이클로(K18-D22)[A1,16,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 18);
    사이클로(K18-D22)[A1,17,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 19);
    사이클로(K18-D22)[A1,G3,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 22);
    사이클로(K18-D22)[A1,G13,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 31);
    사이클로(K18-D22)[A1,G16,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 34);
    사이클로(K18-D22)[A1,G17,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 35);
    사이클로(K18-D22)[D-P1,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 36);
    사이클로(D18-K22)[A1,Nle8,D18,K22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 47);
    사이클로(K18-E22)[A1,Nle8,K18,E22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 50);
    사이클로(O18-E22)[A1,Nle8,O18,E22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 51);
    사이클로(K18-D22)[A1,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-30)NH2(서열 52);
    사이클로(K14-D18)[A1,Nle8,K14,D18,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 67);
    사이클로(K18-D22)[K18,D22]hPTHrP(1-34)NH2(서열 71);
    비사이클로(K13-D17,K18-D22)[A1,Nle8,D17,22,K18,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 73);
    비사이클로(K18-D22,K26-D30)[A1,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 74); 및
    트리사이클로(K13-D17,K18-D22,K26-D30)[A1,Nle8,K18,D17,22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 80)로부터 선택되는 펩타이드 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  22. 비사이클로(K13-D17,K26-D30)[A1,Nle8,18,D17,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 76), 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  23. 제4항에 있어서, X가,
    (a) R1a-A4-A5-A6-A7-A8-A9-,
    (b) R1a-A5-A6-A7-A8-A9-,
    (c) R1a-A6-A7-A8-A9-,
    (d) R1a-A7-A8-A9-,
    (e) R1a-A8-A9-,
    (f) R1b-A9- 및
    (g) R1b-로 이루어진 그룹으로부터 선택된 펩타이드 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  24. 제23항에 있어서, A8이 Nle이고 A27이 Leu인 펩타이드 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  25. 제24항에 있어서, A18과 A22의 측쇄가 아미드 결합을 통해 결합하여 가교를 형성시키는 펩타이드 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  26. 제25항에 있어서, A10이 Asn 또는 Asp이고; A13이 Lys이고; A14가 His 또는 Ser이고; A17이 Asp 또는 Ser이고; A18이 Asp, Lys 또는 Orn이고; A21이 Arg 또는 Val이고; A22가 Asp, Glu, Lys 또는 Orn이고; A25가 Arg 또는 His이고; A26이 His 또는 Lys이고; A29가 Ala 또는 Gln이고; A30이 Asp 또는 Glu인 펩타이드 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  27. 제1항에 있어서, 사이클로(K18-D22)[K18,D22,L27]hPTH(10-31)NH2(서열 56);
    사이클로(K18-D22)[K18,D22,L27]hPTH(9-31)NH2(서열 57);
    사이클로(K18-D22)[Nle8,K18,D22,L27]hPTH(8-31)NH2(서열 58);
    사이클로(K18-D22)[Nle8,K18,D22,L27]hPTH(7-31)NH2(서열 59);
    사이클로(K18-D22)[Nle8,K18,D22,L27]hPTH(6-31)NH2(서열 60);
    사이클로(K18-D22)[Nle8,K18,D22,L27]hPTH(5-31)NH2(서열 61);
    사이클로(K18-D22)[Nle8,K18,D22,L27]hPTH(4-31)NH2(서열 62);
    사이클로(K18-D22)[Nle8,K18,D22,L27]hPTH(7-34)NH2(서열 65); 및
    사이클로(K18-D22)[K18-D22]hPTHrP(7-34)NH2(서열 77)로부터 선택되는 펩타이드 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  28. 제1항의 펩타이드 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는, 칼슘저혈증; 골감소증, 골다공증; 부갑상선기능항진증; 부갑상선기능감퇴증; 글루코코르티코이드- 및 면역억제제-유도된 골감소증; 및 골절 및 재골절로부터 선택된 칼슘 조절과 관련된 질환 치료용 약제학적 조성물.
  29. 삭제
  30. 삭제
  31. 삭제
  32. 삭제
  33. 삭제
  34. 삭제
  35. 삭제
  36. 삭제
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  38. 삭제
  39. 화학식 II의 펩타이드 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
    화학식 II
    X-A10-A11-A12-A13-A14-A15-A16-A17-A18-A19-A20-A21-A22-A23-A24-A25-A26-A27-Y
    상기식에서,
    X는,
    (a) R1a-A0-A1-A2-A3-A4-A5-A6-A7-A8-A9-,
    (b) R1a-A2-A3-A4-A5-A6-A7-A8-A9-,
    (c) R1b-A3-A4-A5-A6-A7-A8-A9-,
    (d) R1a-A4-A5-A6-A7-A8-A9-,
    (e) R1a-A5-A6-A7-A8-A9-,
    (f) R1a-A6-A7-A8-A9-,
    (g) R1a-A7-A8-A9-,
    (h) R1a-A8-A9-,
    (i) R1a-A9- 및
    (j) R1a-로부터 이루어진 그룹으로부터 선택되고;
    Y는,
    (a) -R3,
    (b) -A28-R3,
    (c) -A28-A29-R3,
    (d) -A28-A29-A30-R3,
    (e) -A28-A29-A30-A31-R3,
    (f) -A28-A29-A30-A31-A32-R3,
    (g) -A28-A29-A30-A31-A32-A33-R3및
    (h) -A28-A29-A30-A31-A32-A33-A34-R3로 이루어진 그룹으로 선택되고;
    R1a는 H, C1-C20의 알킬, 아릴잔기가 C6-C14의 방향족 일환 또는 다환인 아르알킬 또는 -COR2이고;
    R1b는 R1a또는 식또는의 그룹이고;
    R2는 C1-C20의 알킬, C2-C20의 알케닐, C2-C20의 알키닐, C6-C14의 아릴 또는 아릴잔기가 C6-C14의 방향족 일환 또는 다환인 아르알킬이고;
    R3은 식 A35-OR4또는 A35-NR4R5의 그룹이고;
    R4및 R5는 독립적으로 H 또는 C1-C4의 저급 알킬이고;
    R6또는 R9는 독립적으로 H 또는 C1-C20의 알킬이고;
    R7은 C1-C20의 알킬이고;
    R8은 H, C1-C20의 알킬 또는 COR2이고;
    R10은 H 또는 할로겐이고;
    R11은 C1-C20의 알킬 또는 아릴잔기가 C6-C14의 방향족 일환 또는 다환인 아르알킬이고;
    A0은 존재하지 않거나 1 내지 6개의 아미노산 잔기의 펩타이드이고;
    A1은 Ser, Ala, Gly 또는 D-Pro이고;
    A2는 Ala, Val 또는 Gly이고;
    A3은 Ala, Ser, Gly 또는 D-Pro이고;
    A4는 Glu, Ala 또는 Gly이고;
    A5는 Ile, His, Ala 또는 Gly이고;
    A6은 Ala, Gln, Gly 또는 D-Pro이고;
    A7은 Ala, Leu 또는 Gly이고;
    A8은 Leu, Nle, Gly 또는 D-Pro이고;
    A9는 His, Ala, Gly 또는 D-Pro이고;
    A10은 Ala, Asn, Gly, Lys, Asp 또는 D-Pro이고;
    A11은 Ala, Gly, Leu 또는 Lys이고;
    A12는 Ala 또는 Gly이고;
    A13은 Ala, Gly 또는 Lys이고;
    A14는 Ala, Gly, His, Ser, Asp, Lys 또는 D-Pro이고;
    A15는 Ala, Gly, Ile, D-Pro 또는 Leu이고;
    A16은 Asn, Ala, Gly, D-Pro 또는 Gln이고;
    A17은 Ala, Asp, Gly, Ser, Lys 또는 D-Pro이고;
    A18은 Lys이고;
    A19는 Arg 또는 Glu이고;
    A20은 Arg이고;
    A21은 Arg, Lys, Asp 또는 Val이고;
    A22는 Asp, Lys, Orn 또는 Glu이고;
    A23은 Leu, Phe 또는 Trp이고;
    A24는 Leu이고;
    A25는 Arg, His, Asp, Lys 또는 Glu이고;
    A26은 Lys 또는 His이고;
    A27은 Leu 또는 Lys이고;
    A28은 Ile 또는 Leu이고;
    A29는 Ala, Asp, Glu 또는 Gln이고;
    A30은 Asp, Lys 또는 Glu이고;
    A31은 Ile, Leu 또는 Val이고;
    A32는 His이고;
    A33은 Asn 또는 Thr이고;
    A34는 Ala 또는 Phe이고;
    A35는 존재하지 않거나 1 내지 4개의 아미노산의 펩타이드이다.
  40. 제39항에 있어서, R1a가 H이고 Y가 NH2인 펩타이드 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  41. 제40항에 있어서, X가 (a) R1a-A1-A2-A3-A4-A5-A6-A7-A8-A9-, (b) R1a-A2-A3-A4-A5-A6-A7-A8-A9- 또는 (c) R1a-A3-A4-A5-A6-A7-A8-A9-인 펩타이드 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  42. 제41항에 있어서, A1이 Ser, Ala, Gly 또는 D-Pro이고;
    A2가 Ala, Val 또는 Gly이고;
    A3이 Ala, Ser, Gly 또는 D-Pro이고;
    A4가 Glu, Ala 또는 Gly이고;
    A5가 Ile, His, Ala 또는 Gly이고;
    A6이 Ala, Gln, Gly 또는 D-Pro이고;
    A7이 Ala, Leu 또는 Gly이고;
    A8이 Leu, Nle, Gly 또는 D-Pro이고;
    A9가 His, Ala, Gly 또는 D-Pro이고;
    A10이 Ala, Asn, Gly, Asp 또는 D-Pro이고;
    A11이 Ala, Gly, Leu 또는 Lys이고;
    A12가 Ala 또는 Gly이고;
    A13이 Ala, Gly 또는 Lys이고;
    A14가 Ala, Gly, His, Ser 또는 D-Pro이고;
    A15가 Ala, Gly, Ile 또는 D-Pro이고;
    A16이 Asn, Ala, Gly, D-Pro 또는 Gln이고;
    A17이 Ala, Asp, Gly, Ser 또는 D-Pro이고;
    A18이 Lys이고;
    A19가 Arg 또는 Glu이고;
    A20이 Arg이고;
    A21이 Arg 또는 Val이고;
    A22가 Asp, Lys, Orn 또는 Glu이고;
    A23이 Leu, Phe 또는 Trp이고;
    A24가 Leu이고;
    A25가 Arg 또는 His이고;
    A26이 Lys 또는 His이고;
    A27이 Leu 또는 Lys이고;
    A28이 Ile 또는 Leu이고;
    A29가 Ala 또는 Glu이고;
    A30이 Asp 또는 Glu이고;
    A31이 Ile, Leu 또는 Val이고;
    A32가 His이고;
    A33이 Asn 또는 Thr이고;
    A34가 Ala 또는 Phe인 펩타이드 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  43. 제42항에 있어서, A1이 Ala, Gly 또는 D-Pro이고, A8이 Nle이고, A22가 Asp이고, A27이 Leu인 펩타이드 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  44. 제43항에 있어서, X가 R1a-A1-A2-A3-A4-A5-A6-A7-A8-A9-인 펩타이드 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  45. 제1항에 있어서, [A1,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 4)인 펩타이드 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  46. 제39항의 펩타이드 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는, 칼슘저혈증; 골감소증, 골다공증; 부갑상선기능항진증; 부갑상선기능감퇴증; 글루코코르티코이드- 및 면역억제제-유도된 골감소증; 및 골절 및 재골절로부터 선택된 칼슘 조절과 관련된 질환 치료용 약제학적 조성물.
  47. 삭제
  48. 삭제
  49. 삭제
  50. 삭제
  51. 삭제
  52. 제1항에 있어서, 사이클로(K18-D22)[A1,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 3)인 펩타이드 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  53. 제1항에 있어서, 사이클로(K18-D22)[A1,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-34)NH2(서열 46)인 펩타이드 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  54. 제1항에 있어서, 사이클로(K18-D22)[A1,10,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 12)인 펩타이드 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  55. 제1항에 있어서, 사이클로(K18-D22)[A1,12,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 14)인 펩타이드 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  56. 제1항에 있어서, 사이클로(K18-D22)[A1,13,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 15)인 펩타이드 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  57. 제1항에 있어서, 사이클로(K18-D22)[A1,14,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 16)인 펩타이드 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  58. 제1항에 있어서, 사이클로(K18-D22)[A1,16,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 18)인 펩타이드 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  59. 제1항에 있어서, 사이클로(K18-D22)[A1,17,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 19)인 펩타이드 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  60. 제1항에 있어서, 사이클로(K18-D22)[A1,G3,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 22)인 펩타이드 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  61. 제1항에 있어서, 사이클로(K18-D22)[A1,G13,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 31)인 펩타이드 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  62. 제1항에 있어서, 사이클로(K18-D22)[A1,G16,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 34)인 펩타이드 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  63. 제1항에 있어서, 사이클로(K18-D22)[A1,G17,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 35)인 펩타이드 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  64. 제1항에 있어서, 사이클로(K18-D22)[D-P1,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 36)인 펩타이드 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  65. 제1항에 있어서, 사이클로(D18-K22)[A1,Nle8,D18,K22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 47)인 펩타이드 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  66. 제1항에 있어서, 사이클로(K18-E22)[A1,Nle8,K18,E22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 50)인 펩타이드 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  67. 제1항에 있어서, 사이클로(O18-E22)[A1,Nle8,O18,E22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 51)인 펩타이드 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  68. 제1항에 있어서, 사이클로(K18-D22)[A1,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-30)NH2(서열 52)인 펩타이드 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  69. 제1항에 있어서, 사이클로(K14-D18)[A1,Nle8,K14,D18,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 67)인 펩타이드 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  70. 제1항에 있어서, 사이클로(K18-D22)[K18,D22]hPTHrP(1-34)NH2(서열 71)인 펩타이드 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  71. 제1항에 있어서, 비사이클로(K13-D17,K18-D22)[A1,Nle8,D17,22,K18,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 73)인 펩타이드 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  72. 제1항에 있어서, 비사이클로(K18-D22,K26-D30)[A1,Nle8,K18,D22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 74)인 펩타이드 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  73. 제1항에 있어서, 트리사이클로(K13-D17,K18-D22,K26-D30)[A1,Nle8,K18,D17,22,L27]hPTH(1-31)NH2(서열 80)인 펩타이드 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  74. 제5항의 펩타이드 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는, 칼슘저혈증; 골감소증, 골다공증; 부갑상선기능항진증; 부갑상선기능감퇴증; 글루코코르티코이드- 및 면역억제제-유도된 골감소증; 및 골절 및 재골절 수복으로부터 선택된 칼슘 조절과 관련된 질환 치료용 약제학적 조성물.
  75. 삭제
  76. 제5항의 펩타이드 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는, 골감소증 또는 골다공증 치료용 약제학적 조성물.
  77. 제74항에 있어서, 맥동성 피하 또는 폐내 투여되는 약제학적 조성물.
  78. 제76항에 있어서, 맥동성 피하 또는 폐내 투여되는 약제학적 조성물.
  79. 제23항의 펩타이드 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는, 부갑상선기능항진증 및 부갑상선기능항진증-관련된 칼슘과혈발증, 악성 칼슘과혈증, 신부전증 및 고혈압증으로부터 선택된 칼슘 조절과 관련된 질환 치료용 약제학적 조성물.
  80. 삭제
  81. 제79항에 있어서, 맥동성 피하 또는 폐내 투여되는 약제학적 조성물.
  82. 삭제
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  84. 제39항의 펩타이드 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는, 골감소증 또는 골다공증 치료용 약제학적 조성물.
  85. 제46항에 있어서, 제40항의 펩타이드 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하고, 맥동성 피하 또는 폐내 투여되는 약제학적 조성물.
  86. 제84항에 있어서, 제40항의 펩타이드 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하고, 맥동성 피하 또는 폐내 투여되는 약제학적 조성물.
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