SK151599A3

SK151599A3 - Peptide parathyroid hormone analogs

Info

Publication number: SK151599A3
Application number: SK1515-99A
Authority: SK
Inventors: Stephen M Condon; Isabelle Morize
Original assignee: Rhone Poulenc Rorer Pharma
Priority date: 1997-05-14
Filing date: 1998-05-13
Publication date: 2000-09-12
Also published as: KR20010012568A; PL336803A1; JP2001517957A; BG103957A; US6472505B1; AU7386798A; AU746461B2; WO1998051324A1; EP0986395A1; EP0986395A4; EA002819B1; IL132901A0; KR100351213B1; AP9901686A0; HUP0003349A3; CA2290443A1; BR9808786A; NO995568L; OA11216A; CN1261281A

Description

Oblasť techniky

Predkladaný vynález sa dotýka zlúčenín a spôsobov ich prípravy, farmaceutických prostriedkov obsahujúcich zlúčeniny a použitie zlúčenín v liečbe fyziologických stavov, ktoré môžu byť ovplyvňované agonistickou alebo antagonistickou aktivitou na receptoroch pre paratyroidálny hormón. Presnejšie sa vynález dotýka peptidových analógov paratyroidálneho hormónu a peptidových analógov proteínu príbuzného s paratyroidálnym hormónom.

Doterajší stav techniky

Ľudský paratyroidálny hormón (hPTH) je proteín s 84 aminokyselinami, ktorý je hlavným regulátorom homeostázy vápnika. Proteín príbuzný paratyroidálnemu hormónu (hPTHrP) je proteín so 139 až 171 aminokyselinami s N-koncovou homológiou s hPTH. N-koncové fragmenty hPTH a hPTHrP, najmä fragmenty pozostávajúce z aminokyselín 1-34, si uchovávajú plnú biologickú aktivitu pôvodného hormónu.

hPTH(1-34) má nasledujúcu aminokyselinovú sekvenciu:

Ser-Val-Ser-Glu-lle-GIn-Leu-Met-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-Met-GluArg-Val-Glu-Trp-Leu-Arg-Lys-Lys-Leu-GIn-Asp-Val-His-Asn-Phe. (SEQ ID NO: 1) hPTHrP má nasledujúcu aminokyselinovú sekvenciu:

Ala-Val-Ser-Glu-His-GIn-Leu-Leu-His-Asp-Lys-Gly-Lys-Ser-lle-GIn-Asp-Leu-ArgArg-Arg-Phe-Phe-Leu-His-His-Leu-lle-Ala-Glu-lle-His-Thr-Ala. (SEQ ID NO: 2)

Biologická aktivita hPTH vedie kaktivácii dvoch systémov druhých poslov: adenylátcyklázy spojenej s G proteínom (AC) a proteínkinázou C (PKC) spriahnutou alebo nespriahnutou s G proteínom. Bolo dokázané, že N-koncové fragmenty pHTP(1-34)OH a hPTH(1-31)NH₂ majú anabolickú aktivitu s ohľadom na tvorbu kosti u ľudí a u krýs s vykonanou ovariektómiou, v príslušnom poradí. Bolo dokázané, že toto zvýšenie rastu kostí je spojené so stimuláciou adenylátcyklázovej aktivity.

Analógy týchto N-koncových fragmentov majú značný terapeutický potenciál na liečbu stavov spojených s reguláciou vápnika v bunkách kostí, vrátane hypokalcémie, osteoporózy, osteopénie a ochorení spojených s osteoporózou a osteopéniou ako je hyperparatyroidizmus, hypoparatyroidizmus a Cushingov syndróm, glukokortikoidmi a imunosupresívami indukovaná osteopénia a zlomeniny kostí a hojenie kostí.

Ďalej bolo zistené, že delécia viacej ako šiestich aminokyselinových zvyškov z Nkonca hPTH(1-34) veľmi znižuje výslednú schopnosť analógu stimulovať adenylylcyklázu a zároveň má malý vplyv na väzbu na receptor. Preto analógy hPTH(1-34) skrátené o viacej ako 6 aminokyselín na N-konci inhibujú účinok PTH a sú užitočné pri liečbe ochorení charakterizovaných nadbytkom PTH, ako je napríklad hyperparatyroidizmus a hyperkalcemická kríza pri hyperparatyroidizme, hyperkalcémia pri malignitách, renálnom zlyhaní a hypertenzii.

Acyklické analógy hPTH(1-27) až (1-34) sú opísané v U. S. patente 4086196. Acyklické analógy hPTH(1-34) a hPTHrP(1-34) sú opísané v U. S. patente 5589452. (Nie⁸, Nie¹⁸, Tyr³⁴ alebo Phe³⁴)hPTH(1-34) sú opísané v U. S. patente č. 4656250. (Nie⁸, Nie¹⁸, Tyr³⁴)hPTH(1-34) a jeho N-skrátené deriváty sú opísané v U. S. patentoch č. 4771124 a 4423037. Iné acyklické analógy PTH(1-34) sú opísané v U. S. patentoch č. 5723577 a 5434246, WO 97/02834, EPA 561 412-A-1, EPA 747 817-A2, WO 94/02510, WO 9603437 a WO 9511988-A1. Analógy hPTH(1-28)NH2 až hPTH(1-31)NH2 A (Leu²⁷)hPTH(1-28)NH2 až (Leu²⁷)hPTH(1-33)NH₂ sú opísané v U. S. patente č. 5556940. Acyklické antagonisty PTH receptora vrátane N-koncovo skrátených analógov PTH opisuje U. S. patent č. 5446130, 5229489, 4771124 a 4423037.

Boli opísané cyklické a bicyklické analógy hPTH a hPTHrP. CyklofLys²⁶Asp³⁰)(Leu²⁷)hPTH(1-34)NH2 a cyklo(Lys²⁷-Asp³⁰)hPTH(1-34)NH2 sú opísané v U. S. patente č. 5556940. Cyklo(Lys²⁶-Asp³⁰)(Leu²⁷)hPTH(1-31)NH2, cykloíGlu²²Lys^Leu^hPTHO-SIJNHz a cyklo(Lys²⁷-Asp³⁰)hPTH(1-31)NH2 sú opísané v Barbier et al., J. Med. Chem. 1997, 40: 1373. Monocyklické a bicyklické deriváty hPTH(1-34) alebo hPTHrP(1-34) sú opísané v patentových prihláškach WO 96/40193, DE 19508672-A1 a v A. Bisello et. al., Biochemistry 1997, 36: 3293.

Cyklo(Lys¹³-Asp¹⁷)hPTHrP(7-34)NH₂, účinný antagostista na receptore pre PTH, je opísaný v M. Chorev et. al., Biochemistry 1991, 30: 5698. Aj Kanmera opisuje sériu amid-obsahujúcich analógov hPTHrP, Peptide Chemistry 1993: Okada, Y., vyd., Protein Research Foundation, Osaka, 1994, 321-324.

Podstata vynálezu

Predkladaný vynález obsahuje cyklickú peptidovú zlúčeninu vzorca I:

X-Αι 0-A11 -Αι 2”Ai 3-A1 4-Ai 5-A16-A17-A18-A19-A20-A21-A22-A23-A24-A-25-A26-A27-Y alebo jej farmaceutický prijateľnú soľ alebo proliečivo, kde X je vybraný zo skupiny zahŕňajúcej

a) Ria-Ao-Ai-A2“A3-A4“A5-A6“A7-A8“Ag-,

b) Ri_a-A₂-A3-A4-A5-As-A7-As-Ag-,

C) RlbA3-A4-As-A6^-A7-A8-A9“,

d) Ria-A4-A5-A6-A7-Ae-Ag-,

e) Ria-A5-A6-A7-Ae-A9-,

f) RlaA6-A7-A8-Ag-,

9) Rla^-A7-A8-Ag-,

h) R-la-Ae-Ag-,

i) Rla“Ag-,

j) Rlai

Y je vybraný zo skupiny zahŕňajúcej

a) -R₃,

b) -A28-R3.

C) -A28-A29-R3,

d) -A28^_A29-A30“R3i

e) -A28-A29-A30-A31-R3,

f) -A28^_A29-A3O-A31-A32“R3,

g) -A28-A29-A30-A31-A32-A33-R3, 3

h) -A28-A29-A30-A31-A32-A33-A34-R3;

Ria je H, alkyl, aralkyl alebo -COR₂; Riu je Ri_a alebo skupina vzorca

R₂je alkyl, alkenyl, alkinyl, aryl alebo aralkyl;

R₃ je skupina vzorca A₃₅-OR₄ alebo AS5-NR4R5I R₄ a R_s sú nezávisle H alebo nižší alkyl;

R₆ a R_g sú nezávisle H alebo alkyl;

R? je alkyl;

R_e je H, alkyl alebo -COR₂;

R₁₀ je H alebo halogén;

Ru je alkyl alebo aralkyl; m je 1, 2 alebo 3; n je 3 alebo 4;

A_o nie je prítomné alebo je to peptid s jednou až šiestimi aminokyselinovými zvyškami;

Aj je Ser, Ala, Gly alebo D-Pro alebo ekvivalentná aminokyselina k uvedeným aminokyselinám;

A₂ je Ala, Val alebo Gly alebo ekvivalentná aminokyselina k uvedeným aminokyselinám;

A₃ je Ala, Ser, Gly alebo D-Pro alebo ekvivalentná aminokyselina k uvedeným aminokyselinám;

A< je Glu, Ala alebo Gly alebo ekvivalentná aminokyselina k uvedeným aminokyselinám;

A₅ je lle, His, Ala alebo Gly alebo ekvivalentná aminokyselina k uvedeným aminokyselinám;

Ae je Ala, Gin, Gly alebo D-Pro alebo ekvivalentná aminokyselina k uvedeným aminokyselinám;

A? je Ala, Leu, Gly alebo ekvivalentná aminokyselina k uvedeným aminokyselinám;

Ae je Leu, Nie, Gly alebo D-Pro alebo ekvivalentná aminokyselina k uvedeným aminokyselinám;

Ag je His, Ala, D-Pro alebo Gly alebo ekvivalentná aminokyselina k uvedeným aminokyselinám;

Aw je Ala, Asn, Asp, Cys, homo-Cys, Glu, Gly, Lys, Orn, Ser, Thr, D-Pro, -NHCH(CH₂)_mNH₂)CO- alebo -NHCH[(CH₂)_nCO₂H]CO-;

Au je Ala, Gly, Leu alebo Lys alebo ekvivalentná aminokyselina k uvedeným aminokyselinám;

A12 je Ala alebo Gly alebo ekvivalentná aminokyselina k uvedeným aminokyselinám;

A13 je Ala, Asn, Asp, Cys, homo-Cys, Glu, Gly, Lys, Orn, Ser, Thr, -NHCH(CH₂)_mNH₂)CO- alebo -NHCH[(CH2)_nCO₂H]CO-;

Au je Ala, Asn, Asp, Cys, homo-Cys, Glu, Gly, His, Lys, Orn, Ser, Thr, D-Pro, -NHCH(CH₂)_mNH2)CO- alebo -NHCH[(CH₂)_nCO₂H]CO-;

A₁₅ je Ala, Gly, Íle, D-Pro alebo Leu alebo ekvivalentná aminokyselina k uvedeným aminokyselinám;

Aw je Asn, Ala, Gly, D-Pro alebo Gin alebo ekvivalentná aminokyselina k uvedeným aminokyselinám;

A₁₇ je Ala, Asn, Asp, Cys, homo-Cys, Glu, Gly, Lys, Orn, Ser, Thr, D-Pro, -NHCH(CH₂)_mNH₂)CO- alebo -NHCH[(CH2)_nCO₂H]CO-;

Aw je Asp, Cys, homo-Cys, Glu, His, Leu, Lys, Orn, Nie, Ser, Thr, -NHCH(CH₂)_mNH2)CO- alebo -NHCH[(CH₂)_nCO₂H]CO-;

Aw je Arg alebo Glu alebo ekvivalentná aminokyselina k uvedeným aminokyselinám;

A₂₀ je Arg alebo ekvivalentná aminokyselina k Arg;

A₂i je Arg, Asp, Cys, homo-Cys, Glu, Lys, Orn, Ser, Thr, Val,

-NHCH(CH₂)_mNH₂)CO- alebo -NHCH[(CH₂)_nCO₂H]CO-;

k-zí je Asp, Cys, homo-Cys, Glu, His, Lys, Orn, Phe, Ser, Thr,

-NHCH(CH₂)_mNH₂)CO- alebo -NHCH[(CH2)_nCO₂H]CO-;

A₂₃ je Leu, Phe alebo Trp alebo ekvivalentná aminokyselina k uvedeným aminokyselinám;

A₂4 je Leu alebo ekvivalentná aminokyselina k Leu;

A₂5 je Arg, Asp, Cys, homo-Cys, Glu, His, Lys, Orn, D-Pro, Ser, Thr, -NHCH(CH₂)_mNH₂)CO- alebo -NHCH[(CH₂)„CO₂H]CO-;

A₂₆ je Asp, Cys, homo-Cys, Glu, His, Lys, Orn, Ser, Thr, -NHCH(CH₂)_mNH₂)COalebo -NHCH[(CH₂)nCO₂H]CO-;

A₂₇ je Leu	alebo	Lys	alebo ekvivalentná	aminokyselina	k uvedeným
aminokyselinám;
A₂₈ je lle	alebo	Leu	alebo ekvivalentná	aminokyselina	k uvedeným
aminokyselinám;
A₂₉ je Ala,	Asp,	Cys,	homo-Cys, Glu,	Gin, Lys, Orn,	Ser, Thr,

-NHCH(CH₂)_mNH₂)CO- alebo -NHCH[(CH₂)„CO₂H]CO-;

A30 je Asp, Cys, homo-Cys, Glu, Gly, Lys, Orn, Ser, Thr, -NHCH(CH₂)_mNH₂)COalebo -NHCH[(CH₂)_nCO₂H]CO-;

A31 je lle, Leu alebo Val alebo ekvivalentná aminokyselina k uvedeným aminokyselinám;

A₃₂ je His alebo ekvivalentná aminokyselina k His;

A33 je Asn alebo Thr alebo ekvivalentná aminokyselina k uvedeným aminokyselinám;

A34 je Ala alebo Phe alebo ekvivalentná aminokyselina k uvedeným aminokyselinám;

A₃₅ nie je prítomný alebo je to peptid s 1 až 4 aminokyselinami; a vedľajšie reťazce aspoň jedného z nasledujúcich párov aminokyselinových zvyškov, A10 3 Au, A13 a A17, A14 a Αι₈, A17 a A21, Aie 3 A^, A₂i 3 A₂s 3 A₂g a A^ sú naviazané prostredníctvom amidovej, esterovej, disulfidovej alebo lantioninovej väzby pri vzniku mostíka, a vedľajšie reťazce aspoň jedného z nasledujúcich aminokyselinových zvyškov A₁₀, A₁₃, Au, Ai_?, A™, A₂₁, A^, A₂₅, A^, A^ a A30, prispievajú k tvorbe jedného mostíka; s podmienkou, že keď sú vedľajšie reťazce nasledujúcich párov aminokyselinových zvyškov, A₁₃ 3 A₁₇ slebo A₂₆ 3 A30 naviazané prostredníctvom amidovej, disulfidovej alebo lantioninovej väzby tvoriacej mostík, tak sú vedľajšie reťazce aspoň jedného z nasledujúcich párov aminokyselinových zvyškov, A10 3 A14, A14 a Αι₈, A17 a A₂i, Ai₈ a A₂₂, A₂i a A₂s, A₂s a A29 tiež naviazané amidovou, esterovou, disulfidovou alebo lantioninovou väzbou.

V inom aspekte predkladaný vynález obsahuje cyklickú peptidovú zlúčeninu vzorca II:

Χ-Al 0-A11 -Al 2“Ai 3-A14-A15-A1 6Ai 7-A1 8”Ai 9-A20A2i - A22^-A2₃-A24^_A25^-A26A27Y (II) alebo jej farmaceutický prijateľnú soľ alebo proliečivo, kde X je vybraný zo skupiny zahŕňajúcej

a) Ria”Ao^_Ai-A2-A3-A4-A5-A6-A7-A8-A9-,

b) Ria^-A2-A3-A4-A5-A6”A7-A8-Ag-_I

c) Rib“A3-A4-A5-A6-A7-A8Ag-,

d) Rla^-A4-A5-A6-A7-A8-Ag-,

e) Ria-As-Ae-AT-Ae-Ag-,

f) Rla-A6-A7-A8-Ag-,

g) Rla^-A7-A8-Ag-,

h) Ria-Ae-Ag-,

i) Rla'Ag-, a

j) Ri._:

Y je vybraný zo skupiny zahŕňajúcej

a) 'R3,

b) -A28-R3,

C) -A28-A29-R3,

d) -A28-A29-A30-R3,

e) -A28-A29-A30-A31-R3,

f) -A28-A29-A30-A31-A32-R3.

g) A28-A29-A30-A31-A32-A33-R3, 3

h) -A28-A29-A30-A31-A32-A33-A34-R3;

R,» je H, alkyl, aralkyl alebo -COR₂; Rw je Ria alebo skupina vzorca

R₂ je alkyl, alkenyl, alkinyl, aryl alebo aralkyI;

R₃ je skupina vzorca A35-OR4 alebo A35-NR4R5;

R₄ a R₅ sú nezávisle H alebo nižší alkyl;

R₆ a Rg sú nezávisle H alebo alkyl;

R₇ je alkyl;

Raje H, alkyl alebo COR₂;

R₁₀ je H alebo halogén;

R11 je alkyl alebo aralkyl;

A_o nie je prítomný alebo je to peptid s jedným až šiestimi aminokyselinovými zvyškami;

At je Ser, Ala, Gly alebo D-Pro alebo ekvivalentná aminokyselina k uvedeným aminokyselinám;

A4 je Glu, Ala alebo Gly alebo ekvivalentná aminokyselina k uvedeným aminokyselinám;

A₇ je Ala, Leu alebo Gly alebo ekvivalentná aminokyselina k uvedeným aminokyselinám;

Ag je Leu, Nie, Gly alebo D-Pro alebo ekvivalentná aminokyselina k uvedeným aminokyselinám;

Aw je Ala, Asn, Gly, Lys, Asp alebo D-Pro alebo ekvivalentná aminokyselina k uvedeným aminokyselinám;

An je Ala, Gly, Leu alebo Lys alebo ekvivalentná aminokyselina k uvedeným aminokyselinám;

A₁₂ je Ala alebo Gly alebo ekvivalentná aminokyselina k uvedeným aminokyselinám;

Aia je Ala, Gly alebo Lys alebo ekvivalentná aminokyselina k uvedeným aminokyselinám;

Au je Ala, Gly, His, Ser, Asp, Lys alebo D-Pro alebo ekvivalentná aminokyselina k uvedeným aminokyselinám;

A15 je Ala, Gly, lle, D-Pro alebo Leu alebo ekvivalentná aminokyselina k uvedením aminokyselinám;

A₁₆ je Asn, Ala, Gly, D-Pro alebo Gin alebo ekvivalentná aminokyselina k uvedeným aminokyselinám;

Αν je Ala, Asp, Gly, Ser, Lys alebo D-Pro alebo ekvivalentná aminokyselina k uvedeným aminokyselinám;

A_1S je Asp alebo ekvivalentná aminokyselina;

A₂o je Arg alebo ekvivalentná aminokyselina k Arg;

A₂i je Arg, Lys, Asp alebo Val alebo ekvivalentná aminokyselina k uvedeným aminokyselinám;

A^ je Asp, Lys, Orn alebo Glu alebo ekvivalentná aminokyselina k uvedeným aminokyselinám;

A₂4 je Leu alebo ekvivalentná aminokyselina k Leu;

A₂₅ je Arg, His, Asp, Lys alebo Glu alebo ekvivalentná aminokyselina k uvedeným aminokyselinám;

Ak je Lys alebo His alebo ekvivalentná aminokyselina k uvedeným aminokyselinám;

A₂7 je Leu alebo Lys alebo ekvivalentná aminokyselina k uvedeným aminokyselinám;

A₂s je lle alebo Leu alebo ekvivalentná aminokyselina k uvedeným aminokyselinám;

A₂₉ je Ala, Asp, Glu alebo Gin alebo ekvivalentná aminokyselina k uvedeným aminokyselinám;

A₃₀ je Asp, Lys alebo Glu alebo ekvivalentná aminokyselina k uvedeným aminokyselinám;

A₃i je lle, Leu alebo Val alebo ekvivalentná aminokyselina k uvedeným aminokyselinám;

A₃₂ je His alebo ekvivalentná aminokyselina k His;

A₃₃ je Asn alebo Thr alebo ekvivalentná aminokyselina k uvedeným aminokyselinám;

A₃4 je Ala alebo Phe alebo ekvivalentná aminokyselina k uvedeným aminokyselinám;

A₃₅ nie je prítomný alebo je to peptid s 1 až 4 aminokyselinami.

Peptidové zlúčeniny podľa predkladaného vynálezu majú výhodné vlastnosti, najmä farmaceutické vlastnosti. Sú vhodné najmä na liečbu ochorení ovplyvniteľných zlúčeninami, ktoré sa viažu na receptory pre paratyroidálny hormón, či už s alebo bez súčasnej stimulácie aktivity adenylátcyklázy. Predkladaný vynález je preto zameraný aj na farmaceutické použitie zlúčenín a farmaceutických prostriedkov obsahujúcich peptidové zlúčeniny.

Nasledujúce termíny, ak nie sú definované inak, majú v predkladanom vynálezu nasledujúci význam.

Termín „pacient“ označuje tak človeka, ako aj iné cicavce.

Termín „alkyl“ označuje alifatickú uhľovodíkovú skupinu, ktorá môže byť priama alebo rozvetvená a ktorá obsahuje od 1 do 20 atómov uhlíka v reťazci. Rozvetvenie znamená, že jedna alebo viacej nižších alkyiových skupín je pripojených na lineárny alkylový reťazec. Termín „nižší alkyl“ označuje reťazec s 1 až 4 atómami uhlíka, ktorý môže byť priamy alebo rozvetvený. Príkladom alkylovej skupiny je metyl, etyl, n- a izopropyl, n-, sek-, izo- a ŕerc-butyl a podobne.

Termín „alkenyľ označuje alifatickú uhľovodíkovú skupinu obsahujúcu dvojitú väzbu uhlík-uhlík, ktorá môže byť priama alebo rozvetvená a ktorá obsahuje od 2 do 20 atómov uhlíka v reťazci. Termín „nižší alkenyľ* označuje reťazec s 2 až 4 atómami uhlíka, ktorý môže byť priamy alebo rozvetvený. Príkladom alkenylovej skupiny je etenyl, propenyl, n-butenyl, i-butenyl, 3-metylbut-2-enyl, n-pentenyl, heptenyl, oktenyl, cyklohexylbutenyl a decenyl.

Termín „alkinyľ označuje alifatickú uhľovodíkovú skupinu obsahujúcu trojitú väzbu uhlík-uhlík, ktorá môže byť priama alebo rozvetvená a ktorá obsahuje od 2 do 20 atómov uhlíka v reťazci. Termín „nižší alkinyľ* označuje reťazec s 2 až 4 atómami uhlíka, ktorý môže byť priamy alebo rozvetvený. Príkladom alkinylovej skupiny je etinyl, propinyl, n-butinyl, i-butinyl, 3-metylbut-2-inyl, n-pentinyl, heptinyl, oktinyl a decinyl.

Termín „alkylén“ označuje divalentnú skupinu odvodenú od nasýteného uhľovodíka a s priamym alebo rozvetveným reťazcom pomocou odstránenia dvoch atómov vodíka a príkladom je 1,2-etylén, 1,1-etylén, 1,3-propylén, 2,2dimetylpropylén a podobne.

Termín „aralkyl“ označuje arylovú skupinu viazanú na základnú skupinu prostredníctvom alkylénu. Výhodné aralkyly obsahujú nižší alkyl. Príklady aralkylových skupín sú benzyl, 2-fenetyl, naftylénmetyl a podobne. Výhodnou aralkylovou skupinou je benzyl.

Termín „aryľ označuje aromatický monocyklický alebo multicyklický kruhový systém s 6 až 14 atómami uhlíka, výhodne s 6 až 10 atómami uhlíka. Aryl je voliteľne substituovaný jedným alebo viacerými substituentami vybranými zo skupiny zahŕňajúcej alkyl, hydroxy, halogén a halogénalkyl. Príkladom arylovej skupiny sú fenyl a naftyl.

Termín „aminokyselina“ označuje aminokyselinu vybranú zo skupiny zahŕňajúcej prirodzené a syntetické aminokyseliny, ako sú tu definované. Aminokyseliny môžu byť neutrálne, pozitívne a negatívne, podľa substituentov vo vedľajšom reťazci. „Neutrálna aminokyselina“ je aminokyselina obsahujúca substituenty vedľajšieho reťazca bez náboja. Príklady neutrálnych aminokyselín sú alanín, valín, leucín, izoleucín, prolín, fenylalanín, tryptofán, metionín, glycín, serín, treonín a cysteín. „Pozitívna aminokyselina“ je aminokyselina obsahujúca substituenty vedľajšieho reťazca s kladným nábojom pri fyziologickom pH. Príklady pozitívnych aminokyselín sú lyzín, arginín a histidín. „Negatívna aminokyselina“ je aminokyselina obsahujúca substituenty vedľajšieho reťazca so záporným nábojom pri fyziologickom pH. Príklady negatívnych aminokyselín sú kyselina asparágová a kyselina glutámová. Výhodné sú α-aminokyseliny. Najvýhodnejšie sú α-aminokyseliny majúce Lstereochemické usporiadanie na a-uhlíku.

Termín „prirodzená aminokyselina“ označuje a- aminokyseliny vybrané zo skupiny zahŕňajúcej alanín, valín, leucín, izoleucín, prolín, fenylalanín, tryptofán, metionín, glycín, serín, treonín, cysteín, tyrozín, asparagín, glutamín, lyzín, arginín, histidín, kyselinu asparágovú a kyselinu glutámovú.

Termín „syntetické aminokyseliny“ označuje aminokyseliny, pre ktoré neexistuje kodón nukleovej kyseliny. Príklady syntetických aminokyselín sú napríklad Dizoméry prirodzených α-aminokyselín ako je D-prolín (D-P, D-Pro), ako je uvedený vyššie; Aib (kyselina aminomaslová), bAib (kyselina 3-aminoizomaslová), Nva (norvalín), β-Ala, Aad (kyselina 2-aminoadipová), b-Aad (kyselina 3-aminoadipová), Abu (kyselina 2-aminomaslová), Gaba (kyselina γ-aminomaslová), Acp (kyselina 6aminokapronová), Dbu (kyselina 2,4-diaminomaslová), kyselina a-aminopimelová, TMSA (trimetylsilyl-Ala), alo (alo-izoleucín), Nie (norleucín), ŕerc-Leu, Cit (citrulín), Orn (ornitín, O), Dpm (kyselina 2,2'-diaminopimelová), Dpr (kyselina 2,3diaminopropionová), a- alebo β-Nal, Cha (Cyklohexyl-Ala), hydroxyprolín, Sar (sarkozín) a podobne; cyklické aminokyseliny; N^a-alkylované aminokyseliny ako je MeGly (N^a-metylglycín), EtGly (N^a-etylglycín) a EtAsn (N^a-etylasparagín); a aminokyseliny, v ktorých nesie α-uhlík dva vedľajšie reťazce.

Termín „peptid“ a „polypeptid“ označujú polymér, v ktorom sú monoméry aminokyselinových zvyškov naviazané amidovými väzbami. Výhodné peptidové zlúčeniny podľa predkladaného vynálezu sú tie, ktoré obsahujú a-aminokyseliny.

Termín „peptidová zlúčenina“ označuje zlúčeninu skladajúcu sa z peptidov, ako sú tu definované.

Termín „aminokyselinový zvyšok“ označuje jednotlivé aminokyselinové jednotky obsiahnuté v peptidových zlúčeninách podľa predkladaného vynálezu.

Názvy prirodzených a syntetických aminokyselín a ich zvyškov sú podľa konvencie navrhnuté IUPAC Commision on the Nomenclature of Organic Chemistry a IUPAC-IUB Commision on Biochemical Nomenclature, ako je uvedené v „Nomenclature of α-Amino Acids (Recommendations, 1974)“, Biochemistry 14(2) 1(975). Ak sa názvy a skratky aminokyselín a ich zvyškov použité v predkladanom vynáleze a pripojených nárokoch líšia od odporúčaných názvov, budú tieto názvy a skratky vysvetlené.

Termín „ekvivalentná aminokyselina“ označuje aminokyselinu, ktorá môže byť substituovaná za inú aminokyselinu v peptidovej zlúčenine podľa predkladaného vynálezu bez významnejšej straty funkcie. Pri takýchto zmenách je substitúcia obdobných aminokyselín vykonaná na základe relatívnej podobnosti vedľajších reťazcov, napríklad s ohľadom na veľkosť, náboj, hydrofilné vlastnosti, hydropatické a hydrofóbne vlastnosti, ako je tu uvedené. Termín „ekvivalentná aminokyselina k uvedeným aminokyselinám“, ak je použitý v súvislosti so zoznamom jednotlivých aminokyselín, znamená ekvivalent každej jednotlivej aminokyseliny uvedenej v zozname.

Ako je uvedené v U. S. patente č. 4554101, ktorý je tu uvedený ako odkaz, môžu byť aminokyselinovým zvyškom priradené nasledujúce hodnoty hydrofilnosti: Arg (3,0); Lys (+3,0); Asp (+3,0); Glu (+3,0); Ser (+0,3); Asn (+0,2); Gin (+0,2); Gly (0); Pro (-0,5); Thr (-0,4); Ala (-0,5); His (-0,5); Cys (1,0); Met (-1,3); Val (-1,5); Leu (1.8); Tyr (-2,3); Phe (-2,5); a Trp (-3,4). Je nutné si uvedomiť, že aminokyselinový zvyšok môže byť substituovaný za iný aminokyselinový zvyšok majúci podobnú hodnotu hydrofóbnosti (napríklad hodnotu plus alebo mínus 2,0) a zároveň môže byť získaný biologicky ekvivalentný polypeptid.

Obdobne môžu byť substitúcie vykonané na základe podobnosti v hydropatickom indexe. Každej aminokyseline bol priradený hydropatický index na základe jej hydrofóbnych charakteristík a náboja. Tieto hodnoty hydropatického indexu sú: lle (+4,5); Val (+4,2); Leu (+3,8); Phe (+2,8); Cys (+2,5); Met (+1,9); Ala (+1,8); Gly (0,4); Thr (-0,7); Ser (-0,8); Trp (-0,9); Tyr (-1,3); Pro (-1,6); His (-3,2); Glu (-3,5); Gin (-3,5); Asp (-3,5); Asn (-3,5); Lys (-3,9) a Arg (-4,5). Pri vykonávaní substitúcií podľa hydropatického indexu sú výhodné hodnoty plus alebo mínus 2,0.

V peptidových zlúčeninách podľa predkladaného vynálezu je esterová, amidová, disulfidová alebo lantioninová väzba medzi dvoma aminokyselinovými zvyškami tvorená medzi funkciami vedľajších reťazcov. Rovnako je amidová väzba tvorená medzi karboxylovou skupinou vedľajšieho reťazca acidického aminokyselinového zvyšku a aminoskupinou vedľajšieho reťazca bázického aminokyselinového zvyšku. Výhodné acidické aminokyselinové zvyšky sú Asp, Glu, -NHCH(CH₂)₃CO₂H)COalebo -NHCH[(CH₂)4CO₂H]CO-. Najvýhodnejšia je Asp. Výhodné bázické aminokyselinové zvyšky sú His, Lys, Orn, -NHCH(CH₂NH2)CO- a -NHCH[(CH₂)₂NH₂]CO-. Najvýhodnejším je Lys.

Esterové väzby sú tvorené medzi karboxylovou skupinou vedľajšieho reťazca acidického aminokyselinového zvyšku, ako sú definované vyššie, a hydroxylovou skupinou vedľajšieho reťazca aminokyselinového zvyšku ako je Ser, Thr, Tyr a podobne. Najmä výhodné sú Ser a Thr.

Disulfidy sú tvorené z aminokyselinových zvyškov obsahujúcich sulfhydrylové skupiny vo vedľajšom reťazci. Na tvorbu disulfidových väzieb je najmä výhodný Cys. Lantioninové mostíky sú tvorené desulfurizáciou zodpovedajúceho disulfidu.

Počet atómov v mostíku vzniknutom v dôsledku amidovej, esterovej, disulfidovej alebo lantioninovej väzby tvorenej spôsobom uvedeným vyššie sa bude líšiť podľa dĺžky vedľajšieho reťazca a typu väzby (to znamená amidovej, esterovej, disulfidovej alebo lantioninovej). Mostík výhodne obsahuje od 4 do 12 atómov, lepšie od 6 do 10 atómov. Ďalší výhodný počet atómov obsiahnutých v mostíku je 7, kedy takýto mostík výhodne obsahuje amidovú väzbu medzi funkciami vedľajších reťazcov Lys a Asp.

Príkladná peptidová zlúčenina podľa predkladaného vynálezu je označená napríklad ako cykloíK^-D²²) [A¹,Nle⁸IK¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH2, kde sú naviazané aminokyselinové zvyšky uvedené v zátvorke pre „cyklo“ a substituované aminokyseliny z prirodzenej sekvencie sú umiestnené v hranatých zátvorkách. hPTH označuje ľudský paratyroidálny hormón a hPTHrP označuje proteín príbuzný ľudskému paratyroidálnemu hormónu. Čísla v druhej zátvorke označujú počet aminokyselín v peptidovej zlúčenine, od N-konca (t. j. prvých 31 aminokyselín hPTH).

Ak je peptidová zlúčenina podľa predkladaného vynálezu substituovaná bázickou skupinou, tak sú tvorené adičné soli s kyselinami, ktoré sú jednoduchou a najvýhodnejšou formou na použitie; a v praxi prevažuje použitie solí pred použitím voľnej bázy. Medzi kyseliny, ktoré môžu byť použité na prípravu adičných solí s kyselinami, patria tie, ktoré pri kombinovaní s voľnou bázou vytvárajú farmaceutický prijateľné soli, to znamená soli, ktorých anióny sú netoxické pre pacienta pri farmaceutických dávkach soli, preto nie sú priaznivé účinky voľnej bázy narušené vedľajšími účinkami aniónov. Aj keď sú farmaceutický prijateľné soli uvedených bázických zlúčenín výhodné, sú všetky adičné soli s kyselinami použiteľné ako zdroj voľnej bázy aj vtedy, ak je určitá soľ požadovaná iba ako medziprodukt, ako je tomu napríklad pri soliach pripravených iba za účelom prečistenia a identifikácie alebo vtedy, ak je takáto soľ použitá na prípravu farmaceutický prijateľnej soli s použitím iónomeničového postupu. Farmaceutický prijateľné soli podľa predkladaného vynálezu sú soli odvodené od nasledujúcich kyselín: anorganických kyselín ako je kyselina chlorovodíková, kyselina sírová, kyselina fosforečná a kyselina sulfámová; a organických kyselín ako je kyselina octová, kyselina citrónová, kyselina mliečna, kyselina vínna, kyselina malónová, kyselina metánsulfónová, kyselina etánsulfónová, kyselina benzénsulfónová, kyselina p-toluénsulfónová, kyselina cyklohexylsulfámová, kyselina chinová a podobne. Medzi príslušné adičné soli s kyselinami patria: hydrohalogenidy, napríklad hydrochlorid a hydrobromid, síran, fosforečnan, dusičnan, sulfamát, octan, citrát, laktát, vínan, malonát, šťavelan, salicylát, propionát, jantaran, fumarát, maleínan, metylén-bis-p-hydroxynaftoáty, gentisáty, mesyláty, isetionáty a di-p16 toluoylvínanmetánsulfonát, etánsulfonát, benzénsulfonát, p-toluénsulfonát, cyklohexylsulfamát a chinan, v príslušnom poradí.

Podľa ďalšieho aspektu predkladaného vynálezu sú adičné soli peptidových zlúčenín podľa predkladaného vynálezu s kyselinami pripravené reakciou voľnej bázy s vhodnou kyselinou, s použitím známych postupov. Napríklad, adičné soli peptidových zlúčenín podľa predkladaného vynálezu s kyselinami sú pripravené buď rozpúšťaním voľnej bázy vo vodnom roztoku alebo v roztoku voda - alkohol alebo v inom vhodnom rozpúšťadle obsahujúcom vhodnú kyselinu a soľ je potom izolovaná odparením roztoku alebo reakciou voľnej bázy a kyseliny v organickom rozpúšťadle a potom sa soľ separuje priamo alebo sa získa koncentrovaním roztoku.

Výhodnými adičnými soľami s kyselinami sú trifluóracetát, acetát a hydrochlorid. Najvýhodnejšími soľami sú acetát a tetrahydrochlorid.

Peptidové zlúčeniny podľa predkladaného vynálezu môžu byť regenerované zo solí s použitím známych techník. Napríklad, pôvodná peptidová zlúčenina podľa predkladaného vynálezu môže byť regenerovaná z adičnej soli s kyselinou reakciou s alkalickým činidlom, napríklad s vodným roztokom hydrogénuhličitanu sodného alebo vodným roztokom amoniaku.

Ak je peptidová zlúčenina podľa predkladaného vynálezu substituovaná acidickou skupinou, tak môžu byť tvorené adičné soli s bázami, ktoré sú jednoduchou a najvýhodnejšou formou na použitie; a v praxi prevažuje použitie soli nad použitím voľnej kyseliny. Medzi bázami, ktoré môžu byť použité na prípravu adičných solí s bázami, patria tie, ktoré pri kombinovaní s voľnou kyselinou vytvárajú farmaceutický prijateľné soli, to znamená soli, ktorých katióny sú netoxické pre pacienta pri farmaceutických dávkach soli, preto nie sú priaznivé účinky voľnej kyseliny narušené vedľajšími účinkami katiónov. Farmaceutický prijateľné soli, vrátane solí alkalických kovov a kovov alkalických zemín, podľa predkladaného vynálezu sú soli odvodené od nasledujúcich báz: hydridu sodného, hydroxidu sodného, hydroxidu draselného, hydroxidu vápenatého, hydroxidu hlinitého, hydroxidu lítneho, hydroxidu horečnatého, hydroxidu zinočnatého, amoniaku, trimetylamoniaku, trietylamoniaku, etyléndiamínu, n-metyl-glukamínu, lyzínu, arginínu, ornitínu, cholínu, Ν,Ν'-dibenzyletyléndiamínu, chlórprokaínu, dietanolamínu, prokaínu, n-benzylfenetylamínu, dietylamínu, piperazínu, tris(hydroxymetyl)aminometánu, hydroxidu tetrametylamónneho a podobne.

Soli peptidových zlúčenín podľa predkladaného vynálezu s kovmi môžu byť získavané reakciou hydridu, hydroxidu, uhličitanu alebo podobnej reaktívnej zlúčeniny vybraného kovu vo vodnom alebo organickom rozpúšťadle s peptidovou zlúčeninou vo forme voľnej kyseliny. Použitým vodným rozpúšťadlom môže byť voda alebo zmes vody a organického rozpúšťadla, výhodne alkoholu ako je metanol alebo etanol, ketón ako je acetón, alifatický éter, ako je tetrahydrofurán, alebo ester ako je etylacetát. Takéto reakcie sú zvyčajne vykonané pri laboratórnej teplote, ale môžu byť, ak je to potrebné, vykonané pri zahrievaní.

Soli peptidových zlúčenín podľa predkladaného vynálezu s amínmi môžu byť získané reakciou amínu vo vodnom alebo organickom rozpúšťadle s peptidovou zlúčeninou vo forme voľnej kyseliny. Použitým vodným rozpúšťadlom môže byť voda alebo zmes vody s alkoholom ako je metanol alebo etanol, ketón ako je acetón, éter ako je tetrahydrofurán alebo nitril ako je acetonitril. Aminokyselinové soli môžu byť pripravené rovnakým spôsobom.

Adičné soli peptidových zlúčenín podľa predkladaného vynálezu s bázami môžu byť regenerované zo solí s použitím známych techník. Napríklad, pôvodné peptidové zlúčeniny podľa predkladaného vynálezu môžu byť regenerované z formy adičných solí s bázami reakciou s kyselinou, napríklad kyselinou chlorovodíkovou.

Soli peptidových zlúčenín podľa predkladaného vynálezu sú použiteľné tak ako aktívne zlúčeniny, ako aj pri prečistení peptidových zlúčenín, napríklad s využitím rozdielov rozpustnosti medzi soľou a pôvodnou peptidovou zlúčeninou, vedľajšími produktmi a/alebo východiskovými materiálmi, s použitím techník, ktoré sú v odbore dobre známe.

Termín „farmaceutický prijateľný ester označuje ester, ktorý hydrolyzuje in vivo a patria sem tie estery, ktoré sa ľahko degradujú v tele pri vzniku pôvodnej peptidovej zlúčeniny alebo jej soli. Medzi výhodné esterové skupiny patria napríklad skupiny odvodené od farmaceutický prijateľných alifatických karboxylových kyselín, najmä od alkánových, alkénových, cykloalkánových a alkéndiových kyselín, v ktorých výhodne neobsahuje alkylová alebo alkenylová skupina viacej ako 6 atómov uhlíka. Príklady jednotlivých esterov zahŕňajú mravčany, acetáty, propionáty, butyráty, akryláty a etylsukcináty.

Termín „proliečivo“ označuje zlúčeninu, ktorá sa rýchlo transformuje in vivo pri vzniku pôvodnej peptidovej zlúčeniny, napríklad hydrolýzou v krvi. Termín „farmaceutický prijateľné proliečivo“ označuje zlúčeninu, ktorá je - podľa lekárskych znalostí - vhodná na farmaceutické použitie u pacienta bez nežiaducej toxicity, dráždenia, alergickej reakcie a podobne, a ktorá je účinná na uvažované použitie, a patria sem farmaceutický prijateľné estery rovnako ako obojaké formy peptidových zlúčenín podľa predkladaného vynálezu. Farmaceutický prijateľné proliečiva podľa predkladaného vynálezu sú opísané v T. Higuchi and V. Stella, Pro-drugs as Novel Delivery Systems, zväzok 14, A. C. S. Symposium Šerieš, a v Edward B. Roche, ed., Bioreversible Cariers in Drug Design, American Pharmaceutical Association and Pergamon Press, 1987, ktoré sú tu uvedené ako odkaz.

Termín „solvát“ označuje fyzikálnu asociáciu zlúčeniny podľa predkladaného vynálezu s jednou alebo viacej molekulami rozpúšťadla. Táto fyzikálna asociácia zahŕňa rôzne stupne iónových a kovalentných väzieb, vrátane vodíkového mostíka. V niektorých prípadoch je solvát izolovateľný, napríklad vtedy, ak je jedna alebo viacej molekúl rozpúšťadla obsiahnutých v kryštálovej mriežke kryštalickej pevnej látky. Termín „solvát“ zahŕňa tak rozpustené fázy, ako aj izolovateľné solváty. Príkladom solvátov sú etanoleáty, metanoleáty a podobne. Termín „hydrát“ označuje solvát, kde molekulami rozpúšťadla sú H₂O.

Peptidové zlúčeniny podľa predkladaného vynálezu môžu okrem centier chirality obsahovať v skelete peptidové zlúčeniny centra asymetrie. Tieto centrá asymetrie môžu byť nezávisle v R alebo S konfigurácii. Odborníkom v odbore bude zrejmé, že niektoré peptidové zlúčeniny vzorca 1 môžu mať geometrické izoméry. Medzi geometrické izoméry patria cis a trans formy peptidových zlúčenín podľa predkladaného vynálezu obsahujúce alkenylové skupiny. Predkladaný vynález zahŕňa jednotlivé geometrické izoméry a stereoizoméry a ich zmesi.

Takéto izoméry môžu byť separované z ich zmesí pomocou známych techník, napríklad s použitím chromatografických techník a rekryštalizačných techník alebo môžu byť pripravené samostatne z vhodných izomérov ich medziproduktov, napríklad s použitím techník, ktoré sú tu opísané.

Výhodné uskutočnenia

Medzi peptidové zlúčeniny podľa predkladaného vynálezu patria napríklad: cykloíK^-D²²) [A¹,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 3) [A¹,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 4) cykloíK^-D²²) [A¹'²,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 5) cykloíK^-D²²) [A^1l3,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 6) cyklo(K¹⁸-D²²) [A' tNIe^K^.D^.L^JhPTHíl-SnNHs (SEQ ID NO: 7) cykloíK^-D²²) [A¹'⁵,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 8) cykloíK^-D²²) [A¹'⁶,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 9) cyklo^-D²²) [A¹'⁷,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 10) cykloíK^-D²²) [A'^NIe^K^.D^.L^hPTHCI-SIJNHz (SEQ ID NO: 11) cykloCK^-D²²) [A¹'¹⁰,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 12) cykloCK^-D²²) [A¹'¹¹,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 13) cyklo^-D²²) [A¹’¹²,Nle^B,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 14) cykloCK^-D²²) [A¹'¹³,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 15) cykloCK^-D²²) [A¹’¹⁴,Nle^e,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 16) cyklo^-D²²) [A¹’¹⁵,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 17) cyklo(K¹⁸-D²²) [A¹'¹⁶,Nle⁸K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 18) cyklo(K¹⁸-D²²) [A¹'¹⁷,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 19) cykloCK^-D²²) [G'.NIe^K^.D^.L^hPTHCI-SIJNHz (SEQ ID NO: 20) cykloCK^-D²²) [A¹,G²lNle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 21) cykloíK^-D²²) [A¹,G³,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 22) cyklo^-D²²) [A¹,G⁴,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 23) cykloíK^-D²²) [A¹,G⁵,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 24) cyklo^-D²²) [A¹,G⁶,Nle⁸,K¹⁸,D²²IL²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 25) cyklofK^-D²²) [A¹,G⁷,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 26) cyklo (K¹⁸-D²²) [A¹,G⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 27) cykloíK^-D²²) [A¹,G⁹,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 28) cykloíK^-D²²) [A¹,G¹⁰,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 29) cykloCK^-D²²) [A¹,G¹¹,Nle⁸,K¹⁸,D²²IL²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 30) cykloíK^-D²²) [A’.G^.N^.K^.D^.L^hPTHÍI-S^NHa (SEQ ID NO: 31) cykloíK^-D²²) [A¹lG¹⁴,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 32) cyklofK^-D²²) [A¹,G¹⁵,Nle⁸,K^1S,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 33) cykloíK^-D²²) [A¹,G¹⁶,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 34) cykloíK^-D²²) [A¹,G¹⁷,Nle⁸,K¹⁸lD²²IL²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 35) cyklo^-D²²) [D-P¹,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 36) cyklotK^-D²²) [A’.D-P’.NIe^K^.D^.L^JhPTHÍI-SIJNHz (SEQ ID NO: 37) cykloíK^-D²²) [A¹,D-P⁶,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 38) cykloíK^-D²²) [A¹,D-P⁷,Nle⁸,K¹⁸,D²²IL²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 39) cyklo^-D²²) [A¹,D-P⁹,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 40) cykloíK^-D²²) [A¹,D-P¹⁰,Nle⁸,K¹⁸,D²²IL²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 41) cyklofK^-D²²) [A¹,D-P¹⁴,Nle⁸IK¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 42) cykloíK^-D²²) [A¹,D-P¹⁵INle⁸,K¹⁸lD²²IL²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 43) cyklo^-D²²) [A¹,D-P¹⁶,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 44) cykloíK^-D²²) [A¹,D-P¹⁷lNle⁸IK¹⁸ID²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 45) cykloíK^-D²²) [A¹,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-34)NH2 (SEQ ID NO: 46) cyklotD^-K²²) [A¹,Nle⁸,D¹⁸,K²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 47) cyklofO^-D²²) [A'.NIe^O^.D^.L^JhPTHÍI-SIJNHz (SEQ ID NO: 48) cykloíD^-O²²) [A¹,Nle⁸,D¹⁸,O²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 49) cykloíK^-E²²) [A¹,Nle⁸,K¹⁸,E²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 50) cykloíO^-E²²) [A¹tNle⁸,O¹⁸,E²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 51) cykloíK^-D²²) [A^NIe^K^.D^L^JhPTHÍI-SOJNHz (SEQ ID NO: 52) cykloíK^-D²²) [A¹,Nle⁸IK¹⁸,D²²IL²⁷]hPTH(1-29)NH2 (SEQ ID NO: 53) cykloíK^-D²²) [A¹,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-28)NH2 (SEQ ID NO: 54) cykloíK^-D²²) [A¹,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-27)NH2 (SEQ ID NO: 55) cykloíK^-D²²) [K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(10-31)NH2 (SEQ ID NO: 56) cykloíK^-D²²) [K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(9-31)NH2 (SEQ ID NO: 57) cykloíK^-D²²) [Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(8-31)NH2 (SEQ ID NO: 58) cykloíK^-D²²) [Nle⁸,K¹⁸lD²²,L²⁷]hPTH(7-31)NH₂ (SEQ ID NO: 59) cykloíK^-D²²) [Nle⁸,K¹⁸lD²²lL²⁷]hPTH(6-31)NH₂ (SEQ ID NO: 60) cykloíK^-D²²) [Nle⁸,K¹⁸,D²²IL²⁷]hPTH(5-31)NH₂ (SEQ ID NO: 61) cykloíK^-D²²) [Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(4-31)NH₂ (SEQ ID NO: 62) cykloíK^-D²²) [Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(3-31)NH₂ (SEQ ID NO: 63) cykloíK^-D²²) [Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(2-31)NH₂ (SEQ ID NO: 64) cykloíK^-D²²) [Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(7-34)NH₂ (SEQ ID NO: 65) cyklo(K¹⁰-D¹⁴) [A¹,Nle⁸'¹⁸lK¹⁰,D¹⁴,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 66) cyklo(K¹⁴-D¹⁸) [A¹,Nle⁸,K¹⁴,D¹⁸,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 67) cyklo(K¹⁷-D²¹) [A'.NIe^’.K^.D^.L^lhPTHÍI-SnNHa (SEQ ID NO: 68) cyklo(K²¹-D²⁵) [A¹lNle^8<18lK²¹,D²⁵,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 69) cyklo(K²⁵-D²⁹) [A¹,Nle^e,18lK^2SlD²⁹,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 70) cyklo^-D²²) [K^.D^jhPTHrPíl^NHz (SEQ ID NO: 71) cykloíK^-D²²) [K^18,28,30,D²²,L^23,2e,31tE^2S,2e]hPTHrP(1-34)NH2 (SEQ ID NO: 72) bicyklo(K¹³-D¹⁷IK¹⁸-D²²)[A¹,Nle⁸,D^17l22,K¹⁸,L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 73) bicyklo(K^l8-D²²,K²⁵-D³⁰)[A¹INle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 74) bicykloíK^-D^.K^-D^IA'.N^.D^^.K^.L^hPTHÍI^NHs (SEQ ID NO: 75) cykloíK^-D²²) [K¹⁸,D²²]hPTHrP(7-34)NH2 (SEQ ID NO: 77) bicyklo^-D^K^-D²²) [Nle⁸,K,D¹⁷’²²,L²⁷]hPTH(7-34)NH2 (SEQ ID NO: 78) bicyklo^-D^K^-D³⁰) [Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(7-34)NH2 (SEQ ID NO: 79) tricykloíK^-DXK^-D^.K^-D³⁰) [A¹,Nle⁸,K¹⁸,D¹⁷'²²tĽ²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 80) alebo ich farmaceutický prijateľné soli alebo proliečiva.

Výhodná cyklická peptidová zlúčenina vzorca 2 má vzorec I uvedený vyššie, v ktorom sa mostík tvorený vedľajšími reťazcami jedného páru aminokyselinových zvyškov neprekrýva s mostíkom tvoreným vedľajšími reťazcami iného páru aminokyselinových zvyškov.

Výhodnejšia cyklická peptidová zlúčenina vzorca 3 má vzorec 2 uvedený vyššie, kde A10 je Ala, Asn, Asp, Gly alebo Lys; Au je Ala, Gly alebo Lys; A₁₄ je Ala, Asp, Gly, His, Lys alebo Ser; A-i₇je Ala, Asp, Gly, Lys alebo Ser; A₁₈ je Asp, Leu, Lys, Om alebo Nie; A₂₁ je Arg, Asp, Lys alebo Val; A22 je Asp, Glu, Lys, Om alebo Phe; A₂₅ je Arg, Asp, Glu, His alebo Lys; A^ je His alebo Lys; A₂₉ je Ala, Asp, Glu alebo Gin; A30 je Asp, Glu alebo Lys a vedľajšie reťazce aspoň jedného z nasledovných párov aminokyselinových zvyškov, Am a Ah, Ai₃ a Ai₇, Ah a Ai₈, Ai₇ a A₂i, A-i₈ a A^, A₂i a A25, A₂s a A₂g, A^ a

A₃₀, sú viazané amidovou väzbou pri vzniku mostíka a vedľajšie reťazce každého z nasledujúcich aminokyselinových zvyškov, A₁₀, A₁₃, Ai₄, Ai₇, A₁₈, Α₂ι, A22, A₂₅, A₂₅, A₂g a A₃o, prispievajú k tvorbe jediného neprekrývajúceho sa mostíka; a podmienkou, že:

(a) ak sú vedľajšie reťazce páru aminokyselinových zvyškov Ai₃ a A₁₇ naviazané prostredníctvom amidovej väzby, tak sú vedľajšie reťazce aspoň jedného z nasledujúcich párov aminokyselinových zvyškov, A₁₈ a A^, A_2Í a A₂₅, A₂₅ a A₂₉, tiež naviazané prostredníctvom amidovej väzby tvoriacej mostík;

(b) ak sú vedľajšie reťazce páru aminokyselinových zvyškov A₂₆ a Am naviazané prostredníctvom amidovej väzby, tak sú vedľajšie reťazce aspoň jedného z nasledujúcich párov aminokyselinových zvyškov, A_w a A₁₄, A₁₄ a A₁₈, Α_Ί7 a Α_2Ί, Α_Ί8a A22 a A₂i a A₂₅ tiež naviazané prostredníctvom amidovej väzby tvoriacej mostík;

(c) ak sú vedľajšie reťazce nasledujúcich párov aminokyselinových zvyškov, Ai₃ a Ai₇ a A26 a A_30i naviazané prostredníctvom amidovej väzby, tak sú vedľajšie reťazce aspoň jedného z nasledujúcich párov aminokyselinových zvyškov, Aw a A₂ a Α_2Ί a A₂₅, tiež naviazané prostredníctvom amidovej väzby tvoriacej mostík.

Iná výhodná cyklická peptidová zlúčenina vzorca 4 má vzorec 3 uvedený vyššie, kde R_1ajeHaYje NH₂.

Niektoré cyklické peptidové zlúčeniny podľa predkladaného vynálezu majú agonistickú aktivitu na receptor pre paratyroidálny hormón a preto sú použiteľné na liečbu fyziologických stavov súvisiacich s reguláciou koncentrácie vápnika bunkami kosti, ako je hypokalcémia, osteoporóza, osteopénia a ochorení spojených s osteoporózou a osteopéniou ako je hyperparatyroidizmus, hypoparatyroidizmus a Cushingov syndróm, glukokortikoidmi a imunosupresívami indukovanej osteopénie, a zlomeniny kostí a hojenie kostí.

Výhodná cyklická peptidová zlúčenina s agonistickou aktivitou vzorca 5 má vzorec 4 uvedený vyššie, kde X je (a) Ria-A₁-A₂-A₃-A₄-A5-A6-A₇-A₈-A₉-, (b) Ria^-A₂“A₃-A₄-As-A6-A₇-A₈-A₉-, (C) Ria-A₃-A₄-A5-A6-A₇-A₈-A₉-_I

Výhodnejšia cyklická peptidová zlúčenina s agonistickou aktivitou vzorca 6 má vzorec 5 uvedený vyššie, kde Α_Ί je Ala, Gly alebo D-Pro; Ae je Nie a A₂₇je Leu.

Iná výhodná cyklická peptidová zlúčenina s agonistickou aktivitou vzorca 7 má vzorec 6 uvedený vyššie, kde (i) vedľajšie reťazce Aw a A₁₄ sú naviazané amidovou väzbou tvoriacou mostík;

(ii) vedľajšie reťazce Aw a A₁₈ sú naviazané amidovou väzbou tvoriacou mostík;

(iii) vedľajšie reťazce A₁₇ a A₂₁ sú naviazané amidovou väzbou tvoriacou mostík;

(iv) vedľajšie reťazce Aw a Ak sú naviazané amidovou väzbou tvoriacou mostík;

(v) vedľajšie reťazce A₂₁ a A₂₅ sú naviazané amidovou väzbou tvoriacou mostík; alebo (vi) vedľajšie reťazce A₂₅ a A₂₉ sú naviazané amidovou väzbou tvoriacou mostík.

Iná výhodná cyklická peptidová zlúčenina s agonistickou aktivitou má vzorec (i) uvedený vyššie, kde Aw je Asp alebo Lys; Aw je Lys; A14 je Asp alebo Lys; A₁₇ je Asp alebo Ser; Aw je Nie; A₂₁ je Arg alebo Val; Ak je Glu alebo Phe; A₂₅ je Arg alebo His; Ak je Lys alebo His; A₂₉ je Ala alebo Gin; a Am je Asp alebo Glu; a vedľajšie reťazce Aw a A₁₄ sú viazané prostredníctvom amidovej väzby tvoriacej mostík.

Iná výhodná cyklická peptidová zlúčenina s agonistickou aktivitou má vzorec (ii) uvedený vyššie, kde Aw j® Asn alebo Asp; Aw je Lys; A14 je Asp alebo Lys; Ai₇ je Asp alebo Ser; Aw je Nie; A₂i je Arg alebo Val; Ak je Glu alebo Phe; A₂₅ je Arg alebo His; Ak je Lys alebo His; Ak je Ala alebo Gin; a A30 je Asp alebo Glu; a vedľajšie reťazce Aw a Aw sú viazané prostredníctvom amidovej väzby tvoriacej mostík.

Iná výhodná cyklická peptidová zlúčenina s agonistickou aktivitou má vzorec (iii) uvedený vyššie, kde A_w je Asn alebo Asp; A₁₃ je Lys; A₁₄ je His alebo Ser; A₁₇ je Asp alebo Lys; As je Nie; A₂₁ je Asp alebo Lys; Ak je Giu alebo Phe; Ak je Arg alebo His; Ak je Lys alebo His; A₂₉ je Ala alebo Gin; a Am je Asp alebo Glu; a vedľajšie reťazce A₁₇ a A₂₁ sú viazané prostredníctvom amidovej väzby tvoriacej mostík.

Iná výhodná cyklická peptidová zlúčenina s agonistickou aktivitou má vzorec (iv) uvedený vyššie, kde Aw je Asn alebo Asp; A13 je Lys; Au je His alebo Ser; Ai₇ je Asp alebo Ser; A₁₈ je Asp, Lys alebo Orn; A₂i je Arg alebo Val; A22 je Asp, Glu, Lys alebo Orn; A₂₅ je Arg alebo His; A^ je Lys alebo His; A₂₉ je Ala alebo Gin; a A30 je Asp alebo Glu; a vedľajšie reťazce A₁₈ a A^ sú viazané prostredníctvom amidovej väzby tvoriacej mostík.

Iná výhodná cyklická peptidová zlúčenina s agonistickou aktivitou má vzorec (v) uvedený vyššie, kde Aw je Asn alebo Asp; A₁₃ je Lys; A₁₄ je His alebo Ser; A₁₇ je Asp alebo Ser; A₁₈ je Nie; A₂₁ je Asp alebo Lys; A^ je Glu alebo Phe; A₂₅ je Asp alebo Lys; Α» je Lys alebo His; A₂₉ je Ala alebo Gin; a A30 je Asp alebo Glu; a vedľajšie reťazce Α_2Ί a A₂₅ sú viazané prostredníctvom amidovej väzby tvoriacej mostík.

Iná výhodná cyklická peptidová zlúčenina s agonistickou aktivitou má vzorec (vi) uvedený vyššie, kde A₁₀ je Asn alebo Asp; A₁₃ je Lys; A_u je His alebo Ser; Ai? je Asp alebo Ser; A₁₈ je Nie; A₂₁ je Arg alebo Val; A22 je Glu alebo Phe; A₂₅ je Asp alebo Lys; A26 je Lys alebo His; A₂₉ je Asp alebo Lys; a A30 je Asp alebo Glu; a vedľajšie reťazce A₂₅ a A₂₉ sú viazané prostredníctvom amidovej väzby tvoriacej mostík.

Iná výhodnejšia cyklická peptidová zlúčenina s agonistickou aktivitou vzorca 8 má vzorec 6 uvedený vyššie, kde (vii) vedľajšie reťazce A₁₃ a A₁₇ sú naviazané amidovou väzbou a vedľajšie reťazce Aw a A22 sú naviazané amidovou väzbou pri vzniku mostíka;

(viii) vedľajšie reťazce A₁₈ a A22 sú naviazané amidovou väzbou a vedľajšie reťazce A^ a A^ sú naviazané amidovou väzbou pri vzniku mostíka.

Iná výhodná cyklická peptidová zlúčenina s agonistickou aktivitou má vzorec (vii) uvedený vyššie, kde Aw je Asn alebo Asp; Ai₃ je Lys alebo Asp; Au je His alebo Ser; Ai₇ je Lys alebo Asp; A₁₈ je Lys alebo Asp; A₂i je Arg alebo Val; A₂₂ je Glu, Lys alebo Asp; A₂₅ je Arg alebo His; A^ je Lys alebo His; A₂₉ je Ala alebo Gin; a A^ je Asp alebo Glu; a vedľajšie reťazce A₁₃ a A₁₇ sú naviazané amidovou väzbou a vedľajšie reťazce Α_Ί8 a fvz. sú naviazané amidovou väzbou pri vzniku mostíka.

Iná výhodná cyklická peptidová zlúčenina s agonistickou aktivitou má vzorec (viii) uvedený vyššie, kde Aio je Asn alebo Asp; A13 je Lys; Α_Ί4 je His alebo Ser; A17 je Ser alebo Asp; A₁₈ je Lys alebo Asp; A21 je Arg alebo Val; A22 je Glu, Lys alebo Asp; A₂₅je Arg alebo His; A_2S je Lys alebo Asp; A₂₉ je Ala alebo Gin; a A30 je Lys alebo Asp; a vedľajšie reťazce Ai₈ a A^ sú naviazané amidovou väzbou a vedľajšie reťazce A^ a A30 sú naviazané amidovou väzbou pri vzniku mostíka.

Iná výhodná cyklická peptidová zlúčenina s agonistickou aktivitou vzorca 9 má vzorec 6 uvedený vyššie, kde vedľajšie reťazce A₁₃ a A₁₇ sú naviazané amidovou väzbou a vedľajšie reťazce A₁₈ a A22 sú naviazané amidovou väzbou a vedľajšie reťazce A^a A₃₀ sú naviazané amidovou väzbou pri vzniku mostíka.

Iná výhodná cyklická peptidová zlúčenina s agonistickou aktivitou vzorca 10 má vzorec 9 uvedený vyššie, kde A_w je Asn alebo Asp; A_i3 je Lys alebo Asp; A₁₄ je His alebo Ser; A₁₇ je Lys alebo Asp; A_i8 je Lys alebo Asp; A_2j je Arg alebo Val; Az> je Glu, Lys alebo Asp; A₂₅ je Arg alebo His; A^ je Lys alebo Asp; A₂₉ je Ala alebo Gin; a Am je Lys alebo Asp

Medzi výhodnejšie cyklické peptidové zlúčeniny podľa predkladaného vynálezu s agonistickou aktivitou patrí:

cykl o (K¹⁸-D²²) [A¹,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 3) cykloíK^-D²²) [A¹'²,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 5) cykloíK^-D²²) [A¹³,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 6) cyklo^-D²²) [A¹⁴,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 7) cykloíK^-D²²) [A^1,5,Nle⁸lK¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 8) cyklo^-D²²) [A^1,6,Nie⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 9) cyklotK^-D²²) [A¹'⁷,Nle^K^.D^.L^JhPTHÍI-SIJNHz (SEQ ID NO: 10) cykl o (K¹ ^D²²) [A¹'⁹,Nle⁸K¹⁸,D²²,L^z7]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 11) cyklo^-D²²) [A¹¹⁰,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 12) cyklo^-D²²) [Α^ξΝΙε^,ϋ²² L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 13) cyklo^-D²²) [A^1,12,Nle⁸,K¹⁸,D²².L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 14) cykloíK^-D²²) [A¹'¹³,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 15) cykloíK^-D²²) [A¹'¹⁴,Nle⁸,K¹⁸,D²².L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 16) cyklo^-D²²) [A¹¹⁵,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 17) cyklo(K¹⁸-D²²) [A^.NIe^K^.D^.L^hPTHO-SnNHa (SEQ ID NO: 18) cykloíK^-D²²) [A¹·¹⁷, Nle⁸.K¹⁸.D²².L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 19) cykloíK^-D²²) [G¹.NIe^e.K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 20) cykloíK^-D²²) [A¹,G²lNle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 21) cykloíK^-D²²) [A¹,G³,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 22) cykloíK^-D²²) [A¹,G⁴,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 23) cyklo^-D²²) [A¹,G⁵,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 24) cykloíK^-D²²) [A¹.G⁶,Nle⁸,K¹⁸,D²².L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 25) cyklo^-D²²) [A¹,G⁷,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 26) cyklo^-D²²) [A¹,G⁸,K¹⁸,D²²lL²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 27) cykloíK^-D²²) [A¹.G⁹.NIe⁸,K¹⁸.D²².L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 28) cykloíK^-D²²) [A¹,G¹⁰,Nle⁸,K¹⁸.D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 29) cykloíK^-D²²) [A¹,G¹¹,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 30) cyklo^-D²²) [A¹,G¹³,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 31) cykloíK^-D²²) [A¹.G¹⁴,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 32) cykloíK^-D²²) [A¹,G¹⁵lNle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 33) cykloíK^-D²²) [A¹,G¹⁶,Nle⁸lK¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 34) cykloíK^-D²²) [A^l,G¹⁷,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 35) cyklo(K¹⁸-D²²) [D-P^l,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 36) cykloíK^-D²²) [A¹1D-P³,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 37) cyklo^-D²²) [A¹,D-P⁶,Nie⁸,K¹⁸^²² L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 38) cykloíK^-D²²) [A¹,D-P⁷,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 39) cykloíK^-D²²) [A¹,D-P⁹,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 40) cyklo^-D²²) [A¹,D-P¹⁰,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 41) cykloíK^-D²²) [A¹,D-P¹⁴,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 42) cykloíK^-D²²) [A'.D-P^.NIe^K^.D^.L^hPTHÍI-SIJNHz (SEQ ID NO: 43) cyklo^-D²²) [A¹,D-P¹⁶,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 44) cykloíK^-D²²) [A^l,D-P¹⁷,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 45) cykloíD^-K²²) [A¹,Nle⁸,D¹⁸,K²²,L²⁷]hPTH(1-34)NH2 (SEQ ID NO: 46) cykloíK^-D²²) [A¹,Nie⁸, D^.K^.L^hPTHfl-SIJNHz (SEQ ID NO: 47) cyklotO^-D²²) [A.N^.O^.D^.L^lhPTHÍI-SnNHz (SEQ ID NO: 48) cyklotD^-O²²) [A¹,Nle⁸,D¹⁸,O²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 49) cyklotK^-E²²) [A¹,Nle⁸,K¹⁸,E²²lL²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 50) cykloíO^-E²²) [A¹,Nle⁸O¹⁸,E²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 51) cyklotK^-D²²) [A¹,Nle^e,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-30)NH₂ (SEQ ID NO: 52) cykloíK^-D²²) [A¹,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-29)NH₂ (SEQ ID NO: 53) cyklo^-D²²) [A¹.NIe⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-28)NH₂ (SEQ ID NO: 54) cyklofK^-D²²) [A¹,Nle⁸,K¹⁸.D²².L²⁷]hPTH(1-27)NH₂ (SEQ ID NO: 55) cyklotK^-D²²) [Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(3-31)NH₂ (SEQ ID NO: 63) cyklofK^-D²²) [Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(2-31)NH₂ (SEQ ID NO: 64) cyklo(K¹⁰-D¹⁴) [A¹,Nle⁸'¹⁸.K¹⁰.D¹⁴.L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 66) cyklo(K¹⁴-D¹⁸) [A¹,Nle⁸,K¹⁴,D¹⁸,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 67) cyklo(K¹⁷-D²¹) [A¹,Nie⁸'¹⁸,K¹⁷,D²¹,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 68) cyklo(K²¹-D²⁵) [A'.NIe^^.K^.D^.L^hPTHÍI-SIJNHz (SEQ ID NO: 69) cyklo(K²⁵-D²⁹) [A¹.NIe⁸'¹⁸.K²⁵,D²⁹.L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 70) cykloíK^-D²²) [K^D^hPTHrPO^NHz (SEQ ID NO: 71) cyklotK^-D²²) [K^18,26'³⁰.D²².L^23,28'³¹,E^2S'²⁹lhPTHrP(1-34)NH2 (SEQ ID NO: 72) bicyklo(K¹³-D¹⁷,K¹⁸-D²²) [A¹,Nle⁸,D¹⁷'²²,K¹⁸,L27]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 73) bicyklo^-D²² K^-D³⁰) [A¹,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 74) tricykloíK^-D^K^-D²² K²⁶-D³⁰) [A¹INle^e,K^ietD^17l22,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 80) alebo ich farmaceutický prijateľné soli alebo proliečiva.

Medzi najvýhodnejšie cyklické peptidové zlúčeniny podľa predkladaného vynálezu s agonistickou aktivitou patria:

cykloíK^-D²²) [A¹,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 3) cyklo^-D²²) [A¹,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-34)NH₂ (SEQ ID NO: 46) cykloíK^-D²²) [A^1,3,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 6) cyklo^-D²²) [A¹'⁶,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 9) cyklo^-D²²) [A^1,10,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 12) cykloíK^-D²²) [A^1,11,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 13) cykloíK^-D²²) [A^1,12,Nle⁸,K¹⁸,D²²IL²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 14) cykloíK^-D²²) [A^1,13,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 15) cykloíK^-D²²) [A¹¹⁴,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 16) cykloíK^-D²²) [A¹'¹⁵.NIe⁸lK¹⁸.D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 17) cykloíK^-D²²) [A^1>16,Nle⁸.K¹⁸.D²².L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 18) cykloíK^-D²²) [A’ ^.NIe^K^.D^L^hPTHÍI-SIJNHs (SEQ ID NO: 19) cyklo^-D²²) [G¹,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 20) cykloíK^-D²²) [A¹,G²lNle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 21) cyklo^-D²²) [A¹,G³,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 22) cykloíK^-D²²) [A¹,G¹⁰,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 29) cykloíK^-D²²) [A¹,G¹³.Nie⁸,K¹⁸,D^L^hPTHO-SIJNHs (SEQ ID NO: 31) cyklo(K¹⁸-D²²) [A\G¹⁶,Nle⁸,K¹⁸ D²² L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 34) cyklo^-D²²) [A¹,G¹⁷,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 35) cyklo^-D²²) [D-P¹,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 36) cyklotD^-K²²) [A¹,Nle⁸,D^ieX²²lL²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 47) cyklo^-D²²) [A¹,Nle⁸,O¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 48) cykloíD^-O²²) [A¹,Nle⁸,D¹⁸,O²²IL²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 49) cyklo^-E²²) [A¹,Nle⁸,K¹⁸,E²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 50) cyklo^-E²²) [A¹,Nie⁸,O^E^.L^hPTHO-SIJNHa (SEQ ID NO: 51) cyklo^-D²²) [A¹,Nle⁸lK¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-30)NH₂ (SEQ ID NO: 52) cyklo^-D²²) [A¹,NIe⁸,K^D^L^JhPTHO^NHs (SEQ ID NO: 53) cykloíK^-D²²) [A¹,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-28)NH₂ (SEQ ID NO: 54) cyklo(K¹⁰-D¹⁴) [A¹,Nle⁸'¹⁸,K¹⁰,D¹⁴,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 66) cyklo(K¹⁴-D¹⁸) [A¹,Nle⁸IK¹⁴,D¹⁸lL²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 67) cyklo(K¹⁷-D²¹) [A¹,Nie⁸’¹⁸,K¹⁷,D²¹,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 68) cyklo(K²¹-D²⁵) [A¹,Nie^8,18, K²¹,D²⁵,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 69) eyklo(K²⁵-D²⁹) [A¹,Nle⁸'¹⁸,K²⁵,D²⁹,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 70) cykloíK^-D²²) [K^.D^lhPTHrPíl^NHs (SEQ ID NO: 71) cykloíK^-D²²) [K^18,26,30,D²².L²³'^2e,31lE^25,29]hPTHrP(1-34)NH2 (SEQ ID NO: 72) bicyklo(K¹³-D¹⁷,K^-D²²) [A¹,Nle⁸,D¹⁷-²²,K¹⁸,L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 73) bicyklo^-D^K^-D³⁰) [A'.NIe^K^.D^L^JhPTHÍI-SIJN^ (SEQ ID NO: 74) tricyklo(K¹³-D¹⁷K^-D²²K^-D³⁰) [A^NIe^K^.D^'^L^hPTHíl-SIJNHs (SEQ ID NO: 80) alebo ich farmaceutický prijateľné soli alebo proliečiva.

cyklo^-D²²) [A¹,Nle⁸ K^.D²² L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 3) cyklo^-D²²) [A¹lNle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-34)NH₂ (SEQ ID NO: 46) cyklo^-D²²) [A^1,10,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 12) cykloíK^-D²²) [A^1,12,Nle⁸lK¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 14) cykloíK^-D²²) [A¹¹³,Nle^elK¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 15) cyklo^-D²²) [A’ ^NIe⁸ K¹⁸^²² L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 16) cyklo^-D²²) [A^1,16,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 18) ’ cyklo^-D²²) [A¹-¹⁷.NIe⁸lK¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 19) cyklo^-D²²) [A’.G’.NIe^K^.D^L^hPTHÍI-SDNHí (SEQ ID NO: 22) cyklo^-D²²) [A¹,G¹³,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 31) cyklo(K¹⁸-D²²) [A¹.G¹⁶.NIe⁸.K¹⁸.D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 34) cykloíK^-D²²) [A¹,G¹⁷,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 35) cyklo^-D²²) [D-P'.NIe^K^.D^L^hPTHÍI-SnNHz (SEQ ID NO: 36) cykloíD^-K²²) [A¹,Nle⁸,D¹⁸,K²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 47) cykloíK^-E²²) [A¹,Nle^e,K¹⁸.E²².L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 50) cyklotO^-E²²) [A^l,Nle⁸,O¹⁸,E²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 51) cykloíK^-D²²) [A¹,Nle⁸,K¹⁸lD²²,Ľ²⁷]hPTH(1-30)NH₂ (SEQ ID NO: 52) cyklo(K¹⁴-D¹⁸) [A¹,Nle⁸,K¹⁴,D¹⁸,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 67) cyklo^-D²²) [K¹⁸^²² L²⁷]hPTHrP(1-34)NH₂ (SEQ ID NO: 71) bicykloíK^-D^.K^-D²²) [A¹,Nle⁸.D¹⁷²².K¹⁸.L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 73) bicyklo^-D²² K^-D³⁰) [A¹,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 74) tricyklo(K¹³-D¹⁷,K^-D²² K²⁶-D³⁰) [A¹lNle⁸K¹⁸,D¹⁷'²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 80) alebo ich farmaceutický prijateľné soli alebo proliečiva.

Inou najvýhodnejšou cyklickou peptidovou zlúčeninou s agonistickou aktivitou podľa predkladaného vynálezu je:

bicykloíK^-D²², K^-D³⁰) [Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-34)NH₂ (SEQ ID NO: 79) alebo jej farmaceutický prijateľná soľ alebo proliečivo.

Niektoré cyklické peptidové zlúčeniny podľa predkladaného vynálezu inhibujú účinok PTH. Takéto cyklické peptidové zlúčeniny s antagonistickou aktivitou sú užitočné na liečbu ochorení charakterizovaných nadbytkom PTH, ako je napríklad hyperparatyroidizmus a hyperkalcemická kríza pri hyperparatyroidizme, hyperkalcémii pri malignitách, renálne zlyhanie a hypertenzia.

Výhodná cyklická peptidová zlúčenina s antagonistickou aktivitou vzorca 10 má vzorec 6 uvedený vyššie, kde X je:

a) Ria^-As-Ae-Ar-Ae-Ag-,

b) Ria-As-Ae-Ar-Ae-Ag-,

c) Ria-A6-A7-Ae-Ag-,

d) RlaA7-A8-A9-,

e) R-Ia-Ae-Ag-,

f) Ríb-Ag-, a

g) RíbVýhodnejšia cyklická peptidová zlúčenina s antagonistickou aktivitou vzorca 11 má vzorec 10 uvedený vyššie, kde Ae je Nie a A₂₇ je Leu.

Iná výhodnejšia cyklická peptidová zlúčenina s antagonistickou aktivitou vzorca má vzorec 11 uvedený vyššie, v ktorom sú vedľajšie reťazce Aw a A22 naviazané prostredníctvom amidovej väzby tvoriacej mostík.

Iná výhodnejšia cyklická peptidová zlúčenina s antagonistickou aktivitou vzorca má vzorec 12 uvedený vyššie, v ktorom A_w je Asn alebo Asp; Α_Ί3 je Lys; A₁₄ je His alebo Ser; A₁₇ je Asp alebo Ser; Ai₈ je Asp, Lys alebo Orn; A21 je Arg alebo Val; A22 je Asp, Glu, Lys alebo Orn; A₂₅ je Arg alebo His; A₂₆ je Lys alebo His; A₂₉ je Ala alebo Gin; a A30 je Asp alebo Glu.

Medzi výhodnejšie cyklické peptidové zlúčeniny podľa predkladaného vynálezu s antagonistickou aktivitou patria:

cyklo^-D²²) [K^.D^.L^jhPTHCIO-SnNHs (SEQ ID NO: 56) cykloíK^-D²²) [K^.D^Ľ^hPTH^-SIJNHz (SEQ ID NO: 57) cyklo^’-D²²) [Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(8-31)NH₂ (SEQ ID NO: 58) cykloíK^-D²²) [Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(7-31)NH₂ (SEQ ID NO: 59) cykloíK^-D²²) [Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(6-31)NH₂ (SEQ ID NO: 60) cyklo^-D²²) [Nle’.K^.D^L^jhPTHÍS-SIJNHs (SEQ ID NO: 61) cykloíK^-D²²) [Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(4-31)NH₂ (SEQ ID NO: 62) cykloíK^-D²²) [Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(7-34)NH₂ (SEQ ID NO: 65) a cyklo^-D²²) [K¹⁸,D²²]hPTHrP(7-34)NH₂ (SEQ ID NO: 77) alebo ich farmaceutický prijateľné soli alebo proliečiva.

Niektoré acyklické peptidové zlúčeniny podľa predkladaného vynálezu majú aj agonistickú aktivitu na receptor pre paratyroidálny hormón a preto sú použiteľné na liečbu fyziologických stavov súvisiacich s reguláciou koncentrácie vápnika bunkami kosti, ako je hypokalcémia, osteoporóza, osteopénia a ochorenia spojené s osteoporózou a osteopéniou ako je hyperparatyroidizmus, hypoparatyroidizmus a Cushingov syndróm, glukokortikoidmi a imunosupresívami indukovaná osteopénia, a zlomeniny kostí a hojenie kostí.

Výhodná acyklická peptidová zlúčenina s agonistickou aktivitou je zlúčenina vzorca 14, čo je peptidová zlúčenina vzorca II, kde R₁₄ je H a Y je NH₂.

Výhodnejšia acyklická peptidová zlúčenina s agonistickou aktivitou je zlúčenina vzorca 15, čo je zlúčenina vzorca 14, kde X je (a) R J aAi -A₂-A3-A4-A5-A6-A7-A8-Ag-, (b) Ri a“A₂-A3-A4-A5“A6^_A7-A8^-Ag-, (C) R1 a“ A3-A4-A5”A6“A7-Ae^-Ag-.

Iná výhodnejšia acyklická peptidová zlúčenina s agonistickou aktivitou je zlúčenina vzorca 16, čo je zlúčenina vzorca 15 uvedená vyššie, kde Aj je Ser, Ala, Gly alebo D-Pro; A₂ je Ala, Ser, Gly alebo D-Pro; A4 je Glu, Ala alebo Gly; A₅ je lle, His, Ala alebo Gly; Ae je Ala, Gin, Gly alebo D-Pro; A₇ je Ala, Leu, Gly; Ag je Leu, Nie, Gly alebo D-Pro; A_g je His, Ala, Gly alebo D-Pro; A₁₀ je Ala, Asn, Gly, Asp alebo D-Pro; Au je Ala, Gly, Leu alebo Lys; A₁₂ je Ala alebo Gly; A₁₃ je Ala, Gly alebo Lys; A14 je Ala, Gly, His, Ser alebo D-Pro; A15 je Ala, Gly, lle alebo D-Pro; A₁₆ je Asn, Ala, Gly, D-Pro alebo Gin; A₁₇ je Ala, Asp, Gly, Ser alebo D-Pro; A₁₈ je Lys; Aw je Arg alebo Glu; A₂₀ je Arg; A₂₁ je Arg alebo Val; A₂₂ je Asp, Lys, Orn alebo Glu; A₂₃ je Leu, Phe alebo Trp; A₂₄ je Leu; A₂₅ je Arg alebo His; A^ je Lys alebo His; A₂₇ je Leu alebo Lys; A₂₈ je lle alebo Leu alebo ekvivalentná aminokyselina k uvedeným aminokyselinám; A₂₉ je Ala alebo Gin; Am je Asp alebo Glu; A^ je lle, Leu alebo Val; Am je His; A₃₃ je Asn alebo Thr; a A₃₄ je Ala alebo Phe.

Iná výhodnejšia acyklická peptidová zlúčenina s agonistickou aktivitou je zlúčenina vzorca 17, čo je peptidová zlúčenina vzorca 16, kde Aj je Ala, Gly alebo D-Pro; Ag je Nie; Am je Asp a A₂₇ je Leu.

Iná výhodnejšia acyklická peptidová zlúčenina s agonistickou aktivitou je zlúčenina vzorca 18, čo je zlúčenina vzorca 17, kde X je R^-AMz-As-A^As-Ae-Ay-AeAg-.

Ešte výhodnejšia acyklická peptidová zlúčenina s agonistickou aktivitou je zlúčenina [A¹,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 4) alebo jej farmaceutický prijateľná soľ alebo proliečivo.

Je nutné si uvedomiť, že predkladaný vynález zahŕňa všetky vhodné kombinácie tu uvedených výhodných aspektov vynálezu.

Syntéza peptidových zlúčenín

Peptidové zlúčeniny podľa predkladaného vynálezu môžu byť syntetizované akoukoľvek technikou známou v odbore peptidovej syntézy. Pre peptidovú syntézu na pevnej fáze je zhrnutie techník uvedené v J. M. Stewart and J. D. Young, Solid Phase Peptide Synthesis, W. H. Freeman Co., (San Francisco), 1963 a J. Meienhofer, Hormonal Proteins and Peptides, zväzok 2, str. 46, Academic Press (New York), 1973. Na opis klasickej syntézy v roztoku viď G. Schrôeder and K. Lupke, The Peptides, zväzok 1, Academic Press (New York), 1965.

Všeobecne tieto techniky obsahujú postupné adície jednej alebo viacerých aminokyselín alebo vhodne chránených aminokyselín na rastúci peptidový reťazec. Zvyčajne je buď amino skupina alebo karboxylová skupina prvej aminokyseliny chránená vhodnou chrániacou skupinou. Chránené alebo derivatizované aminokyseliny môžu byť buď naviazané na inertný solidný nosič alebo môž byť použité v roztoku pomocou adície ďalšie aminokyseliny v sekvencii, ktorá má vhodne chránenú komplementárnu skupinu (amínovú alebo karboxylovú), pri takých podmienkach, ktoré umožnia tvorbu amínovej väzby. Chrániaca skupina je potom odstránená z tohto novo pridaného aminokyselinového zvyšku a pridá sa (vhodne chránená) ďalšia aminokyselina, a tak ďalej. Potom, čo sú všetky vybrané aminokyseliny naviazané v správnom poradí, sú akékoľvek zvyšné chrániace skupiny (a akýkoľvek pevný nosič) postupne alebo súčasne odstránené, čím sa získa konečná peptidová zlúčenina. Jednoduchou modifikáciou tohto všeobecného postupu je možné pridať viacej ako jednu aminokyselinu k rastúcemu reťazcu, napríklad pomocou väzby (pri podmienkach, pri ktorých nedochádza k racemizácii centier chirality) chráneného tripeptidu s riadne chráneným dipeptidom, pri ktorom vzniká po odstránení chrániacich skupín pentapeptid, a tak ďalej.

Výhodným spôsobom na prípravu peptidových zlúčenín podľa predkladaného vynálezu je technika syntézy peptidov na pevnej fáze.

V tejto výhodnej metóde je α-amino skupina chránená skupinou senzitívnou na kyselinu alebo zásadu. Takéto chrániace skupiny by mali byť stabilné pri podmienkach tvorby peptidovej väzby a zároveň by mali byť ľahko odstrániteľné bez deštrukcie rastúceho peptidového reťazca a bez racemizácie akéhokoľvek centra chirality obsiahnutého v rastúcom peptide. Výhodnými chrániacimi skupinami sú 9fluórenylmetyloxykarbonyl (Fmoc), t-butyloxykarbonyl (Boe), benzyloxykarbonyl (Cbz), bifenylizopropyloxykarbonyl, t-amyloxykarbonyl, izobornyloxykarbonyl, (a,a)dimetyl-3,5-dimetoxybenzyloxykarbonyl, o-nitrofenylsulfenyl, 2-kyano-tbutyloxykarbonyl a podobne. Výhodnou chrániacou skupinou je 9fluórenylmetyloxykarbonyl (Fmoc).

Veľmi výhodné chrániace skupiny pre vedľajší reťazec sú, v prípade amínových skupín vedľajších reťazcov, ako ich obsahujú napríklad lyzín a arginín: 2,2,5,7,8pentametylchróman-6-sulfonyl (pmc), nitro, p-toluénsulfonyl, 4metoxybenzénsulfonyl, Cbz, Boe, Aloc (alyloxykarbonyl) a adamantyloxykarbonyl; pre tyrozín: benzyl, o-brómbenzyloxykarbonyl, 2,6-dichlórbenzyl, izopropyl, t-butyl (tBu), cyklohexyl, cyklopentyl a acetyl (Ac); pre serín: t-butyl, benzyl a tetrahydropyranyl; pre histidín: trityl, benzyl, Cbz, p-toluénsulfonyl a 2,4-dinitrofenyl; pre tryptofán: formyl a Boe; pre asparagín a glutamín: Trt (trityl); pre kyselinu asparágovú a glutámovú: OtBu a Oalyl.

Cyklické peptidové zlúčeniny podľa predkladaného vynálezu sú výhodne pripravené technikou založenou na fragmentoch, pri ktorej je separované pripravený fragment vybraného kompletného peptidu obsahujúci amidovú, esterovú, disulfidovú alebo lantioninovú väzbu (fragment cyklického peptidu) a je prečistený pred naviazaním na aminokyselinu alebo peptidovú časť požadovaného peptidu, ktorá je naviazaná na živicu. Fragment cyklického peptidu je pripravený pri použití klasickej techniky syntézy v roztoku alebo na pevnej fáze, ako je tu opísané. Syntéza celej peptidovej zlúčeniny je potom vykonaná sekvenčnou adíciou ostávajúcich aminokyselinových zvyškov k cyklickému peptidu naviazanému na živicu; adíciou ďalších cyklických alebo acyklických peptidových fragmentov k cyklickému peptidu naviazanému na živicu; alebo kombináciou vyššie uvedených techník. Príprava cyklických peptidových analógov hPTH s použitím prístupu založeného na príprave fragmentov je opísaná v U. S. patente č. 60/081897, podanom 15.5.1998, ktorý je tu uvedený ako odkaz.

Peptidy podľa predkladaného vynálezu, v ktorých R_1c je

sú pripravené spôsobom, ktorý je opísaný v R. Waelchli et al., Tetrahedron Letí, 6(10): 1151-1156 (1996), čo je tu uvedené ako odkaz.

Nasledujúce nelimitujúce príklady sú uvedené na ďalšie dokreslenie prípravy nových peptidov podľa predkladaného vynálezu.

Príklady uskutočnenia vynálezu

Všeobecné postupy:

Peptidové zlúčeniny sú pripravené na PS3 Automated Solid Phase Peptide Synthetizer, Protein Technologies, Inc., s použitím štandardnej Fmoc techniky syntézy na pevnej fáze (SPPS). Fmoc chrániacej aminokyseliny sú získané buď od Advanced Chem. Tech. (Lousville, KY, USA) alebo od Bachem (Torrance, CA, USA) alebo od Senn Chemicals AG (Dielsdorf, Switzerland) a sú vymenované ďalej: Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Asp(OtBu)-OH, FmocAsp(O-alyl), Fmoc-Cys(Acm)-OH, Fmoc-Cys(Trt)-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, FmocGlu(O-alyl)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-lle-OH,

Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Lys(Aloc)-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Orn(Aloc)-OH, Fmoc-Orn(Aloc)-OH, Fmoc-Phe-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Thr(tBu)-OH, FmocTrp(Boc)-OH, a Fmoc-Val-OH.

Aminokyselinové analýza je vykonaná BACHEM Bioscience, King of Prusia, PA a je uvedená ako: aminokyselinový zvyšok: zistená hodnota (očakávaná hodnota).

Analýza sekvencie je vykonaná v Microchemical Facility na Emory University School of Medicine, Atlanta, Ga.

Príprava amidového mostíka

Cyklické peptidové zlúčeniny s amidovým mostíkom sú pripravené tvorbou amidovej väzby medzi karboxylovou skupinou vedľajšieho reťazca acidického aminokyselinového zvyšku a aminoskupinou vedľajšieho reťazca bázického aminokyselinového zvyšku v prítomnosti aktivačného činidla, ako bolo uvedené vyššie. Výhodné acidické aminokyselinové zvyšky sú Asp, Glu, -NHCH(CH₂)₃CO₂H)CO- alebo -NHCH[(CH₂)₄CO₂H]CO-. Najvýhodnejšie je Asp. Výhodné bázické aminokyselinové zvyšky sú His, Lys, Orn, -NHCH(CH₂NH₂)CO- a -NHCH[(CH₂)₂NH₂]CO-. Najvýhodnejším je Lys.

V prípadoch, keď peptidový prekurzor cyklickej peptidovej zlúčeniny obsahuje viacej ako jeden acidický alebo bázický aminokyselinový zvyšok, sú chrániace skupiny pre ďalšie acidické alebo bázické aminokyseliny vybrané tak, aby mohli byť aminokyseliny, ktoré majú byť cyklizované, selektívne zbavené chrániacich skupín. Výhodne sú vybrané acidické a bázické aminokyselinové zvyšky zbavené chrániacich skupín simultánne. Ďalej, okrem toho, že sú stabilné voči pôsobeniu činidiel použitých na odstránenie chrániacich skupín z vybraných acidických a bázických aminokyselinových zvyškov, sú chrániace skupiny na ostatných aminokyselinových zvyškoch vybrané tak, aby boli stabilné pri použitých podmienkach cyklizácie.

Termín „ortogonalita“, ako je použitý s ohľadom na chrániace skupiny pre vedľajšie reťazce, označuje situáciu, ktorá je tu opísaná, pri ktorej sú na molekule dve alebo viacero tried chrániacich skupín, keď každá trieda je optimálne odstránená pri určitých podmienkach a zároveň je stabilná pri podmienkach použitých na odstránenie chrániacich skupín inej triedy. Tak je možné odstrániť chrániace skupiny jednej triedy a ponechať skupiny inej triedy intaktné.

Výhodné chrániace skupiny majúce požadovanú ortogonalitu sú: pre acidické aminokyselinové zvyšky, ktoré majú byť cyklizované: alyl; pre bázické aminokyselinové zvyšky, ktoré majú byť cyklizované: alyloxykarbonyl; pre akékoľvek ďalšie acidické aminokyselinové zvyšky: ŕerc-butyl (tBu); a pre akékoľvek ďalšie bázické aminokyselinové zvyšky: ŕerc-butyloxykarbonyl (Boe).

Alylové a alyloxykarbonylové chrániace skupiny sú odstránené simultánne reakciou s paládiom, výhodne tetrakis(trifenylfosfín)paládiom (0). Tvorba amidového mostíka je potom vykonaná spôsobom opísaným na tvorbu amidovej väzby.

Príprava esterových mostíkov

Cyklické peptidové zlúčeniny s esterovým mostíkom sú pripravené tvorbou esterovej väzby medzi karboxylovou skupinou vedľajšieho reťazca acidického aminokyselinového zvyšku a hydroxylovou skupinou aminokyselinového zvyšku obsahujúceho hydroxylovú skupinu. Výhodné acidické aminokyselinové zvyšky sú Asp, Glu, -NHCH(CH₂)₃CO₂H)CO- alebo -NHCH[(CH₂)₄CO₂H]CO-. Najvýhodnejšia je Asp. Výhodné aminokyselinové zvyšky obsahujúce hydroxylové skupiny vo vedľajšom reťazci sú Ser, Thr, Tyr a podobné. Najmä výhodné sú Ser a Thr. Tvorba esterovej väzby je vykonaná s použitím spôsobov a činidiel opísaných vyššie na tvorbu amidového mostíka.

Príprava disulfidových mostíkov

Cyklické peptidové zlúčeniny obsahujúce disulfidový mostík sú pripravené tvorbou disulfidovej väzby medzi aminokyselinovými zvyškami obsahujúcimi vo vedľajšom reťazci sulfhydrylové skupiny, medzi ktorými je najvýhodnejší Cys. Výhodné chrániace skupiny pre sulfhydrylové zvyšky vedľajšieho reťazca sú trityl (Trt) a acetamidometyl (Acm). Spracovanie plne chrániaceho peptidového prekurzora na cyklickú peptidovú zlúčeninu s disulfidovým mostíkom sa vykoná napríklad reakciou s oxidačným činidlom, ako je trifluóroctan tália (TI(CF₃CO₂)3) v dimetylformamide (DMF), čo spôsobí selektívne odstránenie Trt alebo Acm chrániacej skupiny a súčasnú tvorbu disulfidového mostíka.

Príprava lantioninových mostíkov

Lantioninové varianty vyššie opísaných disulfidovou väzbou premostených analógov sú pripravené z disulfidu s použitím desulfurizačnej techniky, ktorú opísali Harp and Gleason (J. Org. Chem. 1971, 36: 73-80). Po oxidačnom odstránení Cys(Trt) alebo Cys(Acm) (alebo homocys derivátov) a tvorbe disulfidového mostíka reaguje peptid s tris(dietylamino)fosfínom vo vhodnom rozpúšťadle. Po odporúčaných výplachoch sú zostávajúce chrániace skupiny vedľajšieho reťazca odstránené spôsobom opísaným vyššie. Surová peptidová zlúčenina je potom prečistená kvapalinovou chromatografiou s reverznou fázou.

Príklad 1 cykloíK^-D²²) [A¹,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 3)

Ala-Val-Ser-Glu-lle-Gln-Leu-Nle-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-(Lys-GluArg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-GIn-Asp-Val amid

Spôsob A

Rink Amid MBHA živica (Nová Biochem, La Jolla, CA, USA) (0,75 g, 0,41 mmol) sa vnesie do reakčnej nádoby a nechá sa napučiavať počas 10 minút s použitím DMF (10 ml). N-koncová Fmoc chrániaca skupina sa potom odstráni počas 5 minút pomocou roztoku 20 % piperidínu v DMF (15 ml). Živica sa šesť krát premyje DMF (15 ml) a potom reaguje 20 minút s roztokom obsahujúcim Fmoc-Val-OH (0,34 g, 1,0 mmol) a HBTU (0,38 g, 1,0 mmol) v 0,4 M N-metylmorfolínu (NMM)/DMF (5 ml). Po naviazaní prvej aminokyseliny sa živica tri krát premyje DMF (15 mi). Postup odstránenia chrániacej skupiny/naviazanie sa opakuje s použitím nasledujúcich aminokyselinových zvyškov: Fmoc-Asp(OtBu)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-LeuOH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc38

Trp(Boc)-OH, Fmoc-Asp(Oalyl)-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, FmocGlu(OtBu)-OH a Fmoc-Lys(Aloc)-OH. Peptid naviazaný na živicu sa potom odstráni z prístroja a päť krát sa premyje DMF (50 ml), päť krát THF (50 ml) a päť krát dietyléterom (50 mi). Po sušení vzduchom sa živica resuspenduje pod dusíkom v zmesi 37:2:1 chloroform:kyselina octová:NMM (40 ml). Pridá sa tetrakis(trifenylfosfín)paládium (0) (2,8 g, 2,4 mmol) a heterogénna zmes sa jemne mieša počas 2 hodín pri laboratórnej teplote. Vzniknutý homogénny roztok sa filtruje a živica sa postupne premyje 0,5 % dizopropyletylamidom/DMF (100 ml), 0,5 % dietylditiokarbonátom sodným/DMF (100 ml) a DMF (200 ml). Cyklizácia medzi vedľajšími reťazcami Lys¹⁸ a Asp²² sa vykoná počas 2 hodín s použitím HBTU (0,26 g, 0,62 mmol), HOBT (0,08 g, 0,62 mmol) a NMM (0,14 ml, 1,23 mmol) v bezvodom DMF (20 ml); cyklizácia sa potom vykoná druhý krát. Rozpúšťadlo sa odstráni a živica sa postupne premyje DMF (100 ml), THF (100 ml) a dietyléterom (100 ml) a suší sa vzduchom.

Časť tohto peptidu naviazaného na živicu (0,46 g, približne 0,1 mmol) sa znovu vloží do automatizovaného syntezátora a spôsobom opísaným vyššie sa pridá 17 ostávajúcich aminokyselinových zvyškov v nasledujúcom poradí: Fmoc-Ser(tBu)OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-NIe-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-lle-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, FmocSer(tBu)-OH, Fmoc-Val-OH a Fmoc-Ala-OH. N-koncová Fmoc chrániaca skupina sa odstráni počas 5 minút pôsobením 20 % roztoku piperidínu/DMF (15 ml). Peptid naviazaný na živicu sa odstráni z prístroja a postupne sa premyje DMF (100 ml), THF (100 ml) a dietyléterom (100 ml). Živica sušená vzduchom sa suspenduje v 10 ml TFA obsahujúcich vodu (0,5 ml), tioanizol (0,5 ml), fenol (0,75 g) a etánditiol (0,25 ml). Po dvoch hodinách sa TFA roztok filtruje do ŕerc-butylmetyléteru (60 ml) pri 0 °C, čo spôsobí vyzrážanie surového peptidu. Živica sa premyje TFA (2 ml), ktorá sa pridá do peptidovej zmesi. Peptidová zmes sa centrifuguje pri 2500 rpm počas 5 minút a dekantuje sa. Surová, biela pevná substancia sa resuspenduje vdietyléteri (30 ml), centrifiguje sa a dekantuje sa. Tento premývací postup sa opakuje štyri krát a výsledný peptid sa suší vo vákuu, rozpustí sa vo vode obsahujúcej 0,1 % TFA (50 ml) a lyofilizuje sa.

Surový peptid sa prečistí vysokoúčinnou kvapalinovou chromatografiou s reverznou fázou s použitím Rainin HPLC systému vybaveného DYNAMAX-60A semi-preparatívnou 1“ C18 kolónou. Mobilná fáza sa iniciuje vodou (0,1 % TFA) a vyplachuje sa 30 minút zmesou 60 % ACN (0,08 % TFA)/voda (0,1 % TFA). Čisté frakcie eluujúce približne v 23. minúte sa kombinujú a lyofilizujú pri zisku 40 mg prečisteného peptidu. IS-MS: 3634. Aminokyselinová analýza: Asp/Asn: 3,86 (4); Ser: 1,85 (2); Glu/GIn: 4,00 (4); Gly: 0,98 (1); Ala: 0,97 (1); Val: 2,86 (3); íle: 0,95 (1); Leu: 6,49 (6); Nie: 0,91 (1); Lys: 2,75 (3); His: 2,06 (2); Arg: 2,09 (2); Trp: nie je stanovené (1). Pozícia amidového mostíka je potvrdená Edmanovou degradáciou a mapovaním pri trávení trypsínom.

Spôsob B

Rink Amid MBHA živica (Nová Biochem, La Jolla, CA, USA) (0,75 g, 041 mmol) sa vnesie do reakčnej nádoby a nechá sa napučiavať počas 10 minút s použitím DMF (10 ml). N-koncová Fmoc chrániaca skupina sa potom odstráni v priebehu 5 minút pomocou roztoku 20 % piperidínu v DMF (15 ml). Živica sa šesť krát premyje DMF (17 ml) a potom reaguje 20 minút s roztokom obsahujúcim Fmoc-Val-OH (0,34 g, 1,0 mmol) a HBTU (0,38 g, 1,0 mmol) v 0,4 M N-metylmorfolínu (NMM)/DMF (8 ml). Po naviazaní prvej aminokyseliny sa živica tri krát premyje DMF (17 ml). Postup odstránenia chrániacej skupiny/naviazanie sa opakuje s použitím nasledujúcich aminokyselinových zvyškov: Fmoc-Asp(OtBu)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-LeuOH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Leu-OH, FmocTrp(Boc)-OH, Fmoc-Asp(Oalyl)-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, FmocGlu(OtBu)-OH a Fmoc-Lys(Aloc)-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH a Fmoc-Leu-OH. Peptid naviazaný na živicu sa potom odstráni z prístroja a päť krát sa premyje DMF (50 ml), päť krát THF (50 ml) a päť krát dietyléterom (50 ml). Po sušení vzduchom sa živica resuspenduje pod dusíkom v zmesi 37:2:1 chloroform:kyselina octová:NMM (40 ml). Pridá sa tetrakis/(trifenylfosfín)paládium (0) (1,0 g, 0,86 mmol) a heterogénna zmes sa jemne mieša počas 2 hodín pri laboratórnej teplote. Vzniknutý homogénny roztok sa filtruje a živica sa postupne premýva 0,5 % diizopropyletylamínom/DMF (100 ml), 0,5 % dietylditiokarbonátom sodným/DMF (100 ml) a DMF (200 ml). Cyklizácia medzi vedľajšími reťazcami Lys¹⁸a Asp²² sa uskutoční v priebehu 2 hodín s použitím HBTU (0,23 g, 0,62 mmol),

HOBT (0,08 g, 0,62 mmol) a NMM (0,13 ml, 1,23 mmol) v bezvodom DMF (20 ml), cyklizácia sa potom vykoná druhý krát. Rozpúšťadlo sa odstráni a živica sa postupne premyje DMF (100 ml), THF (100 ml) a dietyléterom (100 ml) a suší sa vzduchom.

Peptid naviazaný na živicu (približne 2,2 g) sa znovu vloží do automatizovaného syntezátora a spôsobom opísaným vyššie sa pridá 14 ostávajúcich aminokyselinových zvyškov v nasledujúcom poradí: Fmoc-His(Trt)-OH, FmocLys(Boc)-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-NIe-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-lle-OH, Fmoc-Glu(OtBu)OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Val-OH a Fmoc-Ala-OH. N-koncová Fmoc chrániaca skupina sa odstráni počas 5 minút pôsobením 20 % roztoku piperidínu/DMF (17 ml). Peptid naviazaný na živicu sa odstráni z prístroja a postupne sa premyje DMF (100 ml), THF (100 ml) a dietyléterom (100 ml). Živica sušená vzduchom sa suspenduje v 40 ml TFA obsahujúcich vodu (2,0 ml), tioanizol (2,0 ml), fenol (3,0 g) a etánditiol (1,0 ml). Po dvoch hodinách sa TFA roztok filtruje do ŕerc-butylmetyléteru (160 ml) pri 0 °C, čo spôsobí vyzrážanie surového peptidu. Živica sa premyje TFA (2 ml), ktorá sa pridá do peptidovej zmesi. Peptidová zmes sa centrifuguje pri 2500 rpm počas 5 minút a dekantuje sa. Surová, biela pevná substancia sa resuspenduje v dietyléteri (120 ml), centrifuguje sa a dekantuje sa. Tento premývací postup sa opakuje štyri krát a výsledný peptid sa suší vo vákuu, rozpustí sa vo vode obsahujúcej 0,1 % TFA (100 ml) a lyofilizuje sa.

Surový peptid sa prečistí kvapalinovou chromatografiou s reverznou fázou, ako bolo opísané vyššie, pri zisku 261 mg materiálu, ktorý je podľa hmotnostného spektra a HPLC analýzy identický so vzorkou získanou v spôsobe A. Ďalej je materiál získaný podľa spôsobu B identický s materiálom získaným v spôsobe A podľa in vitro analýzy vykonanej v ROS 17.2/8 bunkovom cAMP teste.

Spôsob C

Rink Amid MBHA živica (Nová Biochem, La Jolla, CA, USA) (0,75 g, 0,41 mmol) sa vnesie do reakčnej nádoby a nechá sa napučiavať počas 10 minút s použitím DMF (10 ml). N-koncová Fmoc chrániaca skupina sa potom odstráni počas 5 minút pomocou roztoku 20 % piperidinu v DMF (17 ml). Živica sa šesť krát premyje DMF (17 ml) a potom reaguje 20 minút s roztokom obsahujúcim Fmoc-Val-OH (0,34 g, 1,0 mmol) a HBTU (0,38 g, 1,0 mmol) v 0,4 M N-metylmorfolíne (NMM)/DMF (8 ml). Po naviazaní prvej aminokyseliny sa živica tri razy premyje DMF (17 ml). Postup odstránenia chrániacej skupiny/naviazanie sa opakuje s použitím nasledujúcich aminokyselinových zvyškov: Fmoc-Asp(OtBu)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-LeuOH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Leu-OH, FmocTrp(Boc)-OH, Fmoc-Asp(Oalyl)-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, FmocGlu(OtBu)-OH a Fmoc-Lys(Aloc)-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, FmocLeu-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-NIe-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gln(Trt)OH, Fmoc-lle-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Val-OH a FmocAla-OH. Peptid naviazaný na živicu sa potom odstráni z prístroja a 5 krát sa premyje DMF (50 ml), päť krát THF (50 ml) a päť krát dietyléterom (50 ml). Po sušení vzduchom sa živica resuspenduje pod dusíkom v zmesi 37:2:1 chloroform:kyselina octová:NMM (40 ml). Pridá sa tetrakis(trifenylfosfín)paládium (0) (1,0 g, 0,86 mmol) a heterogénna zmes sa jemne mieša počas 2 hodín pri laboratórnej teplote. Vzniknutý homogénny roztok sa filtruje a živica sa postupne premyje 0,5 % diizopropyletylamínom/DMF (100 ml), 0,5 % dietylditiokarbonátom sodným/DMF (100 ml) a DMF (200 ml). Cyklizácia medzi vedľajšími reťazcami Lys¹⁸ a Asp²² sa vykoná v priebehu 2 hodín s použitím HBTU (0,23 g, 0,62 mmol), HOBT (0,08 g, 0,62 mmol) a NMM (0,13 ml, 1,23 mmol) v bezvodom DMF (20 ml); cyklizácia sa potom vykoná druhý krát. Rozpúšťadlo sa odstráni a živica sa postupne premyje DMF (100 ml), THF (100 ml) a dietyléterom (100 ml) a suší sa vzduchom.

N-koncová Fmoc chrániaca skupina sa odstráni počas 5 minút pôsobením 20 % roztoku piperidínu/DMF (17 ml). Peptid naviazaný na živicu sa odstráni z prístroja a postupne sa premyje DMF (100 ml), THF (100 ml) a dietyléterom (100ml). Živica sušená vzduchom sa suspenduje v 40 ml TFA obsahujúcich vodu (2,0 ml), tioanizol (2,0 ml), fenol (3,0 g) a etánditiol (1,0 ml). Po 2 hodinách sa TFA roztok filtruje do ŕerc-butylmetyléteru (160 ml) pri 0 °C, čo spôsobí vyzrážanie surového peptidu. Živica sa premyje TFA (2 ml), ktorá sa pridá do peptidovej zmesi. Peptidová zmes sa centrifuguje pri 2500 rpm počas 5 minút a dekantuje sa. Surová, biela pevná substancia sa resuspenduje v dietyléteri (120 ml), centrifuguje sa a dekantuje sa.

Tento premývací postup sa opakuje štyri krát a výsledný peptid sa suší vo vákuu, rozpustí sa vo vode obsahujúcej 0,1 % TFA (100 ml) a lyofilizuje sa.

Surový peptid sa prečistí kvapalinovou chromatografiou s reverznou fázou, ako bolo opísané vyššie, pri zisku 261 mg materiálu, ktorý je podľa hmotnostného spektra a HPLC analýzy identický so vzorkami získanými pri spôsoboch A a B. Ďalej je materiál získaný v spôsobe C identický s materiálmi získanými v spôsoboch A a B podľa in vitro analýzy vykonanej v ROS 17.2/8 bunkovom cAMP teste.

Spôsob D

Syntéza titulnej zlúčeniny založená na príprave fragmentov sa vykoná spôsobom opísaným v U. S. patente č. 60/081897, podanom 15.5.1998, ktorý je tu uvedený ako odkaz.

Príklad 2 [A¹,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 4)

Ala-Val-Ser-Glu-lle-GIn-Leu-NIe-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-Lys-GluArg-Val-Asp-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-GIn-Asp-Val amid

Rink Amid MBHA živica (Nová Biochem, La Jolla, Ca, USA) (0,75 g, 0,41 mmol) sa vnesie do reakčnej nádoby a nechá sa napučiavať počas 10 minút s použitím DMF (10 ml). N-koncová Fmoc chrániaca skupina sa potom odstráni počas 5 minút pomocou roztoku 20 % piperidínu v DMF (17 ml). Živica sa šesť krát premyje DMF (17 ml) a potom reaguje 20 minút s roztokom obsahujúcom Fmoc-Val-OH (0,34 g, 1,0 mmol) a HBTU (0,38 g, 1,0 mmol) v 0,4 M N-metylmorfolínu (NMM)/DMF (8 ml). Po naviazaní prvej aminokyseliny sa živica tri krát premyje DMF (17 ml). Postup odstránenia chrániacej skupiny/naviazanie sa opakuje s použitím nasledujúcich aminokyselinových zvyškov: Fmoc-Asp(OtBu)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-LeuOH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Leu-OH, FmocTrp(Boc)-OH, Fmoc-Asp(Oalyl)-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, FmocGlu(OtBu)-OH, Fmoc-Lys(Aloc)-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, FmocLeu-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Leu-OH,

Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-NIe-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gln(Trt)OH, Fmoc-lle-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Val-OH a FmocAla-OH. Peptid naviazaný na živicu sa potom odstráni z prístroja a päť krát sa premyje DMF (50 ml), päť krát THF (50 ml) a päť krát dietyléterom (50 ml). Po sušení vzduchom sa časť živice (1,5 g, približne 0,25 mmol) suspenduje pod dusíkom v zmesi 37:2:1 chloroform:kyselina octová:NMM (20 ml). Pridá sa tetrakis(trifenyl-fosfín)paládium (0) (0,5 g, 0,43 mmol) a heterogénna zmes sa jemne mieša počas 2 hodín pri laboratórnej teplote. Vzniknutý homogénny roztok sa filtruje a živica sa postupne premyje 0,5 % diizopropyletylamínom/DMF (100 ml), 0,5 % dietylditiokarbonátom sodným/DMF (100 ml), DMF (200 ml), THF (100 ml) a dietyléterom (100 ml) a suší sa vzduchom.

N-koncová Fmoc chrániaca skupina sa odstráni počas 5 minút pôsobením 20 % roztoku piperidínu/DMF (20 ml). Peptid naviazaný na živicu sa odstráni z prístroja a postupne sa premyje DMF (100 ml), THF (100 ml) a dietyléterom (100 ml). Živica sušená vzduchom sa suspenduje v 20 ml TFA obsahujúcich vodu (1,0 ml), tioanizol (1,0 ml), fenol (1,5 g) a etánditiol (0,5 ml). Po dvoch hodinách sa TFA roztok filtruje do ŕerc-butylmetyléteru (160 ml) pri 0 °C, čo spôsobí vyzrážanie surového peptidu. Živica sa premyje TFA (2 ml), ktorá sa pridá do peptidovej zmesi. Peptidová zmes sa centrifuguje pri 2500 rpm počas 5 minút a dekantuje sa. Surová, biela pevná substancia sa resuspenduje v dietyléteri (120 ml), centrifuguje sa a dekantuje sa. Tento premývací postup sa opakuje štyri krát a výsledný peptid sa suší vo vákuu, rozpustí sa vo vode obsahujúcej 0,1 % TFA (50 ml) a lyofilizuje sa.

Surový peptid sa prečistí kvapalinovou chromatografiou s reverznou fázou, ako bola opísaná vyššie, pri zisku 75 mg konečného, prečisteného peptidu. IS-MS: 3652 (M+). Aminokyselinová analýza: Asp/Asn: 4,00 (4); Ser: 1,78 (2); Glu/GIn: 3,92 (4); Gly: 0,95 (1); Ala: 0,95 (1); Val: 3,03 (3); lle: 0,90 (1); Leu: 6,36 (6); Nie: 0,90 (1); Lys: 3,06 (3); His: 2,01 (2); Arg: 2,04 (2); Trp: nie je stanovené (1). Primárna sekvencia peptidu je potvrdená Edmanovou degradáciou.

Príklady 3-18

Časť peptidu naviazaného na živicu pripraveného spôsobom A a ukončeného K¹⁸, D²² amidovým mostíkom (0,46 g, približne 0,1 mmol) sa rovnomerne rozdelí do sedemnástich 3 ml jamiek 96 jamkovej platne Advanced Chem. Tech 496 MBS prístroja. V každej jamke sa N-koncová Fmoc chrániaca skupina odstráni s použitím roztoku 20 % piperidínu v DMF (0,5 ml). Použije sa program syntézy, ktorý umožňuje nezávislú prípravu všetkých sedemnástich analógov PTH, v ktorých je L-alanín systematicky substituovaný v každej zo 17 N-koncových pozícií s použitím štandardných podmienok Fmoc-väzby amid

IS-MS = 3617 (M+).

Príklad 5 cyklo(K¹⁸-D²²) [A¹⁴,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 7)

Ala-Val-Ser-Ala-lle-Gln-Leu-Nle-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-(Lys-GluArg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Val amid

IS-MS = 3575 (M+).

Príklad 6 cykloíK^-D²²) [A¹'⁵,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 8)

Ala-Val-Ser-Glu-Ala-Gln-Leu-Nle-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-(Lys-GluArg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-GIn-Asp-Val amid

IS-MS = 3591 (M+).

Príklad 7 cykloíK^-D²²) [A^.NIe^K^D^L^jhPTHO-SIJNHz (SEQ ID NO: 9)

Ala-Val-Ser-Glu-lle-Ala-Leu-Nle-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-(Lys-GluArg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Val amid

IS-MS = 3576 (M+).

Príklad 8 cyklotK^-D²²) [A¹·⁷, Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 10)

Ala-Val-Ser-Glu-lle-Gln-Ala-Nle-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-(Lys-Glu Arg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-GIn-Asp-Val amid

IS-MS = 3591 (M+).

Príklad 9 cykloíK^-D²²) [A^K^D^L^hPTHO-SIJNH;, (SEQ ID NO: 81)

Ala-Val-Ser-Glu-lle-Gln-Leu-Ala-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-(Lys-Glu Arg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Val amid

IS-MS = 3591 (M+).

Príklad 10 cyklo^-D²²) [A^1l9,Nle⁸,K¹⁸,D²²,Ľ²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 11)

Ala-Val-Ser-Glu-lle-Gln-Leu-Nle-Ala-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-(Lys-Glu Arg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Val amid

IS-MS - 3567 (M+).

Príklad 11 cyklo^-D²²) [A^1l10lNle⁸,K¹⁸,D²²lL²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 12)

Ala-Val-Ser-Glu-lle-Gln-Leu-Nle-His-Ala-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-(Lys-GluArg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Val amid

IS-MS = 3590 (M+).

Príklad 12 cykloCK^-D²²) [A¹'¹¹,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 13)

Ala-Val-Ser-Glu-lle-Gln-Leu-Nle-His-Asn-Ala-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-(Lys-Glu Arg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-GIn-Asp-Val amid

IS-MS = 3591 (M+).

Príklad 13 cykloíK^-D²²) [A¹¹²lNle⁸lK¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 14)

Ala-Val-Ser-Glu-lle-Gln-Leu-Nle-His-Asn-Leu-Ala-Lys-His-Leu-Asn-Ser-(Lys-Glu Arg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Val amid

IS-MS = 3647 (M+).

Príklad 14 cykloíK^-D²²) [A^l13,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 15)

Ala-Val-Ser-Glu-lle-Gln-Leu-Nle-His-Asn-Leu-Gly-Ala-His-Leii-Asn-Ser-(Lys-Glu Arg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-GIn-Asp-Val amid

IS-MS = 3576 (M+).

Príklad 15 cykloíK^-D²²) [A^1l14,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 16)

Ala-Val-Ser-Glu-lle-Gln-Leu-Nle-His-Asn-Leu-Gly-Lys-Ala-Leu-Asn-Ser-(Lys-Glu Arg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Val amid

IS-MS = 3567 (M+).

Príklad 16 cykloíK^-D²²) [A^1l15,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 17)

Ala-Val-Ser-Glu-lle-Gln-Leu-Nle-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Ala-Asn-Ser-(Lys-GluArg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Val amid

IS-MS = 3591 (M+).

Príklad 17 cyklo^-D²²) [A^1>ie.NIe^elK^ie.D²².L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 18)

Ala-Val-Ser-Glu-lle-Gln-Leu-Nle-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leti-Ala-Ser-(Lys-GluArg-Va!-Asp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-GIn-Asp-Val amid

IS-MS = 3590 (M+).

Príklad 18 cykloíK^-D²²) [A¹'¹⁷,Nle⁸lK¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 19)

Ala-Val-Ser-Glu-lle-Gln-Leu-Nle-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ala-(Lys-GluArg-Val-Asp)-T rp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-GIn-Asp-Val amid

IS-MS-3617 (M+).

Príklady 19-34

Časť peptidu naviazaného na živicu pripraveného spôsobom A a ukončeného K¹⁸D²² amidovým mostíkom (0,46 g, približne 0,1 mmol) sa rovnomerne rozdelí do sedemnástich 3 ml jamiek 96 jamkovej platne Advanced Chem. Tech. 496 MBS prístroja. V každej jamke sa N-koncová Fmoc chrániaca skupina odstráni s použitím roztoku 20 % piperidínu v DMF (0,5 ml). Použije sa program syntézy, ktorý umožňuje nezávislú prípravu všetkých sedemnástich analógov PTH, v ktorých je glycín systematicky substituovaný v každej zo 17 N-koncových pozíciách s použitím štandardných podmienok Fmoc-väzby (0,5 mmol Fmoc-aminokyseliny na väzbovú reakciu; trojitá väzbová reakcia na zvyšok). Po skončení programovanej syntézy sú odstránené chrániace skupiny analógu PTH a analógy sú odstránené zo živice s použitím Reagent K (1,0 ml/jamka) počas 2 hodín. Štepiace roztoky sú potom jednotlivo pridané k dietyléteru (8 ml) pri laboratórnej teplote. Výsledné heterogénne zmesi vyzrážaného peptidu v dietyléteri sú potom centrifugované a supernatant je oddelený od surového peptidu. Peptidy v pevnej forme sú potom postupne premyté päť krát dietyléterom a potom sú sušené vo vákuu. Biely pevný materiál sa rozpustí vo vode (2,0 ml) obsahujúcej 0,1 % TFA, zmrazí sa a lyofilizuje sa.

Peptidy sú zvážené, analyzované ion-spray hmotnostnou spektrometriou a sú potom testované na schopnosť stimulácie tvorby cAMP v ROS 17.2/8 bunkách, s použitím techniky opísanej ďalej.

Príklad 19 cykloíK^-D²²) [G¹,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 20)

Gly-Val-Ser-Glu-lle-Gln-Leu-Nle-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-(Lys-GluArg-Val-Asp)-T rp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-GIn-Asp-Val amid

IS-MS = 3619 (M+).

Príklad 20 cykloíK^-D²²) [A^1l,G²,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 21)

Ala-Gly-Ser-Glu-lle-Gln-Leu-Nle-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-(Lys-GluArg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-GIn-Asp-Val amid

IS-MS = 3591 (M+).

Príklad 21 cyklofK^-D²²) [A^1l,G³,Nle⁸,K¹⁸ID²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 22)

Ala-Val-Gly-Glu-lle-Gln-Leu-Nle-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-(Lys-GluArg-Val-Asp)-T rp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-GIn-Asp-Val amid

IS-MS = 3603 (M+).

Príklad 22 cykloíK^-D²²) [A¹'IG⁴,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 23)

Ala-Val-Ser-Gly-lle-Gln-l_eu-Nle-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-(Lys-Glu Arg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-GIn-Asp-Val amid

IS-MS = 3561 (M+).

Príklad 23 cyklotK^-D²²) [A¹,G⁵,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 24)

Ala-Val-Ser-Glu-Gly-Gln-Leu-Nle-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-(LysGlu-Arg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-GIn-Asp-Val amid

IS-MS = 3577 (M+).

Príklad 24 cykloíK^-D²²) [A^G^NIe^K^.D^.L^hPTHÍI-SIJNHz (SEQ ID NO: 25)

Ala-Val-Ser-Glu-lle-Gly-Leu-Nle-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-(Lys-Glu Arg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-GIn-Asp-Val amid

IS-MS = 3562 (M+).

Príklad 25 cyklo^-D²²) [A¹,G⁷,Nle⁸,K¹⁸,D²²,Ľ²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 26)

Ala-Val-Ser-Glu-lle-Gln-Gly-Nle-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-(Lys-GluArg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-GIn-Asp-Val amid

IS-MS = 3577 (M+).

Príklad 26 cykloíK^-D²²) [A¹,G⁸,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 27)

Ala-Val-Ser-Glu-lle-Gln-Leu-Gly-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-(Lys-Glu Arg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Val amid

IS-MS = 3577 (M+).

Príklad 27 cyklotK^-D²²) [A¹IG⁹,Nle⁸,K¹⁸1D²²IL²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 28)

Ala-Val-Ser-Glu-I le-GIn-Leu-N le-Gly-Asn-Leu-G ly-Lys-H is-Leu-Asn-Ser-(Lys-G Iu Arg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-GIn-Asp-Val amid

IS-MS = 3553 (M+).

Príklad 28 cykloíK^-D²²) [A¹,G¹⁰INle⁸,K¹⁸ID²²IL²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 29)

Ala-Val-Ser-Glu-lle-Gln-Ľeu-Nle-His-Gly-Leu-Gly-Ľys-His-Leu-Asn-Ser-(Lys-GluArg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Val amid

IS-MS = 3576 (M+).

Príklad 29 cyklo^-D²²) [A¹,G¹¹,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 30)

Ala-Val-Ser-Glu-lle-Gln-Leu-Nle-His-Asn-Gly-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-(Lys-GluArg-Val-Asp)-T rp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-GIn-Asp-Val amid

IS-MS = 3577 (M+).

Príklad 30 cykloíK^-D²²) [A’.G^.N^.K^.D^.L^hPTHÍI-SIJNHs (SEQ ID NO: 31)

Ala-val-Ser-Glu-lle-Gln-Leu-Nle-His-Asn-Leu-Gly-Gly-His-Leu-Asn-Ser-(Lys-GluArg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Val amid

IS-MS = 3562 (M+).

Príklad 31 cykloCK^-D²²) [A¹,G¹⁴,Nle⁸,K¹⁸ID²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 32)

Ala-Val-Ser-Glu-lle-Gln-Leu-Nle-His-Asn-Leu-Gly-Lys-Gly-Leu-Asn-Ser-(Lys-Glu Arg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Val amid

IS-MS = 3553 (M+).

Príklad 32 cykloíK^-D²²) [A’.G^.NIe^K^.D^.L^hPTHÍI-SnNHs (SEQ ID NO: 33)

Ala-Val-Ser-Glu-lle-Gln-Leu-Nle-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Gly-Asn-Ser-(Lys-GluArg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Val amid

IS-MS = 3577 (M+).

Príklad 33 cykloíK^-D²²) [A¹lG¹⁶,Nle⁸,K¹⁸ID²²IL²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 34)

Ala-Val-Ser-Glu-lle-Gln-Leu-Nle-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Gly-Ser-(Lys-GluArg-Val-Asp)-T rp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-GIn-Asp-Val amid

IS-MS = 3576 (M+).

Príklad 34 cyklo^-D²²) [A¹,G¹⁷,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 35)

Ala-Val-Ser-Glu-lle-Gln-Leu-Nle-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Gly-(Lys-GluArg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-GIn-Asp-Val amid

IS-MS = 3603 (M+).

Príklady 35 - 51

Časť peptidu naviazaného na živicu pripraveného spôsobom A a ukončeného K¹⁸D²² amidovým mostíkom (0,46 g, približne 0,1 mmol) sa rovnomerne rozdelí do sedemnástich 3 ml jamiek 96 jamkovej platne Advanced Chem. Tech 496 MBS prístroja. V každej jamke sa N-koncová Fmoc chrániaca skupina odstráni s použitím roztoku 20 % piperidínu v DMF (0,5 ml). Použije sa program syntézy, ktorý umožňuje nezávislú prípravu všetkých sedemnástich analógov PTH, v ktorých je D-prolín systematicky substituovaný v každej zo 17 N-koncových pozícií s použitím štandardných podmienok Fmoc-väzby (0,5 mmol Fmoc-aminokyseliny na väzbovú reakciu; trojitá väzbová reakcia na zvyšok). Po ukončení programovej syntézy sú odstránené chrániace skupiny analógu PTH a analógy sú odstránené zo živice s použitím Reagent K (1,0 ml/jamka) počas 2 hodín. Štepiace roztoky sú potom jednotlivo pridané k dietyléteru (8 ml) pri teplote okolia. Výsledné heterogénne zmesi vyzrážaného peptidu v dietyléteri sú potom centrifugované a supernatant je oddelený od surového peptidu. Peptidy v pevnej forme sú potom postupne premyté päť krát dietyléterom a potom sú sušené vo vákuu. Biely pevný materiál sa rozpustí vo vode (2,0 ml) obsahujúcej 0,1 % TFA, zmrazí sa a lyofilizuje sa.

Príklad 35 cykloíK^-D²²) [D-P¹,Nle⁸,K¹⁸,D²²lL²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 36)

D-Pro-Val-Ser-Glu-lle-Gln-Leu-Nle-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-(LysGlu-Arg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-GIn-Asp-Val amid

IS-MS = 3659 (M+).

Príklad 36 cykloíK^-D²²) [A¹,D-P²,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 82)

Ala-D-Pro-Ser-Glu-lle-Gln-Leu-Nle-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-(Lys Glu-Arg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Val amid

IS-MS = 3631 (M+).

Príklad 37 cykl o (K¹⁸-D²²) [A¹,D-P³,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 37)

Ala-Val-D-Pro-Glu-lle-Gln-Leu-Nle-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-(LysGlu-Arg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-GIn-Asp-Val amid

IS-MS = 3643 (M+).

Príklad 38 cykl o (K¹⁸-D²²) [A¹,D-P⁴,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 38)

Ala-Val-Ser-D-Pro-lle-Gln-Leu-Nle-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-(LysGlu-Arg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-GIn-Asp-Val amid

IS-MS = 3601 (M+).

Príklad 39 cykloíK^-D²²) [A¹,D-P⁵,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 84)

Ala-Val-Ser-Glu-D-Pro-Gln-Leu-Nle-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-(Lys Glu-Arg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-GIn-Asp-Val amid

IS-MS = 3617 (M+).

Príklad 40 cykloíK^-D²²) [A’.D-P^N^.K^.D^.L^JhPTHÍI-SIJNHz (SEQ ID NO: 38)

Ala-Val-Ser-Glu-lle-D-Pro-Leu-Nle-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-(Lys Glu-Arg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Val amid

IS-MS = 3602 (M+).

Príklad 41 cykloíK^-D²²) [A¹,D-P⁷,Nle⁸.K¹⁸lD²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 39)

Ala-Val-Ser-Glu-lle-Gln-D-Pro-Nle-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-(Lys Glu-Arg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-\/al amid

IS-MS = 3617 (M+).

Príklad 42 cykloíK^-D²²) [A¹,D-P⁸lNle⁸IK¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 85)

Ala-Val-Ser-Glu-lle-Gln-Leu-D-Pro-His-Asn-Leti-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-(Lys Glu-Arg-Val-AspJ-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-GIn-Asp-Val amid

IS-MS = 3617 (M+).

Príklad 43 cykloíK^-D²²) [A¹,D-P⁹,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 40)

Ala-Val-Ser-Glu-lle-Gln-Leu-Nle-D-Pro-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-(Lys Glu-Arg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-GIn-Asp-Val amid

IS-MS = 3593 (M+).

Príklad 44 cyklo^-D²²) [A¹,D-P¹⁰,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 41)

Ala-Val-Ser-Glu-lle-Gln-Leu-Nle-His-D-Pro-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-(Lys Glu-Arg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-GIn-Asp-Val amid

IS-MS = 3616 (M+).

Príklad 45 cykloíK^-D²²) [A¹,D-P¹¹,Nle⁸,K¹⁸.D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 86)

Ala-Val-Ser-Glu-lle-Gln-Leu-Nle-His-Asn-D-Pro-Gly-Lys-His-Leii-Asn-Ser-(Lys Glu-Arg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Val amid

IS-MS = 3617 (M+).

Príklad 46 cykloCK^-D²²) [A’.D-P^.NIe^K^.D^L^hPTHíl-SIJNHz(SEQ ID NO: 87)

Ala-Val-Ser-Glu-lle-Gln-Leu-Nle-His-Asn-Leu-D-Pro-Lys-His-Leu-Asn-Ser-(Lys Glu-Arg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-GIn-Asp-Val amid

IS-MS = 3673 (M+).

Príklad 47 cykloíK^-D²²) [A^D-P^.NIe^K^.D^L^JhPTHO-SIJNHz (SEQ ID NO: 88)

Ala-Val-Ser-Glu-lle-Gln-Leu-Nle-His-Asn-Leu-Gly-D-Pro-His-Leu-Asn-Ser-(Lys Glu-Arg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-GIn-Asp-Val amid

IS-MS = 3602 (M+).

Príklad 48 cykloíK^-D²²) [A'.D-P^.N^.K^.D^.L^lhPTHíl-SnNHz (SEQ ID NO: 42)

Ala-Val-Ser-Glu-lle-Gln-Leu-Nle-His-Asn-Leu-Gly-Lys-D-Pro-Leu-Asn-Ser-(Lys Glu-Arg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-GIn-Asp-Val amid

IS-MS = 3593 (M+).

Príklad 49 cykloíK^-D²²) [A'.D-P^.NIe^K^.D^.L^hPTHCI-SIJNHz (SEQ ID NO: 43)

Ala-Val-Ser-Glu-lle-Gln-Leu-Nle-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-D-Pro-Asn-Ser-(LysGlu-Arg-Val-Asp)-T rp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-GIn-Asp-Val amid

IS-MS = 3617 (M+).

Príklad 50 cykloíK^-D²²) [A¹,D-P¹⁶,Nle⁸lK¹⁸lD²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 44)

Ala-Val-Ser-Glu-lle-Gln-Leu-Nle-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-D-Pro-Ser-(LysGlu-Arg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Val amid

IS-MS = 3616 (M+).

Príklad 51 cykloíK^-D²²) [A¹,D-P¹⁷,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 45)

Ala-Val-Ser-Glu-lle-Gln-Leu-Nle-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-D-Pro-(LysGlu-Arg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-GIn-Asp-Val amid

IS-MS = 3643 (M+).

Príklad 52 cykloíK^-D²²) [A¹,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-34)NH₂ (SEQ ID NO: 46)

Ala-Val-Ser-Glu-lle-Gln-Leu-Nle-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-(Lys-Glu Arg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Val-His-Asn-Phe amid

Peptid sa pripraví spôsobom analogickým k spôsobu opísanému vyššie (Spôsob B). Rink Amid MBHA živica (0,5 mmol) sa vnesie do reakčnej nádoby, ktorá sa potom napojí na Protein Technologies PS3 Automate Peptide syntezátor. Technikou Fmoc-SPPS sa pridajú postupne nasledujúce aminokyseliny: Fmoc-Phe-OH, FmocAsn(Trt)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Asp(OtBu)-OH, FmocGln(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pmc)OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Trp(Boc)-OH, Fmoc-Asp(Oalyl)-OH, Fmoc-Val-OH, FmocArg(Pmc)-OH, Fmoc-Glu(tBu)-OH a Fmoc-Lys(Aloc)-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, FmocAsn(Trt)-OH a Fmoc-Leu-OH. Ako bolo uvedené vyššie, peptid naviazaný na živicu sa potom odstráni z prístroja pre Pd-sprostredkované odstránenie chrániacich skupín vedľajších reťazcov Lys(Aloc) a Asp(Oalyl) zvyškov a pre následnú intramolekulárnu cyklizáciu medzi vedľajšími reťazcami. Po opísanom spracovaní sa peptid naviazaný na živicu obsahujúcu amid vráti do prístroja na dokončenie syntézy: postupne sa pridajú nasledujúce aminokyseliny: Fmoc-His(Trt)-OH, FmocLys(Boc)-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-NIe-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-lle-OH, Fmoc-Glu(OtBu)OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Val-OH a Fmoc-Ala-OH. Peptid naviazaný na živicu sa odstráni z prístroja a N-koncová Fmoc chrániaca skupina sa odstráni počas 5 minút pôsobením 20 % roztoku piperidínu/DMF (17 ml). Peptid naviazaný na živicu sa postupne premyje DMF (100 ml), THF (100 ml) a dietyléterom (100 ml). Živica sušená vzduchom sa suspenduje v 40 ml TFA obsahujúcich vodu (2,0 ml), tioanizol (2,0 ml), fenol (3,0 g) a etánditiol (1,0 ml). Po dvoch hodinách sa TFA roztok filtruje do ŕerc-butylmetyléteru (160 ml) pri 0 °C, čo spôsobí vyzrážanie surového peptidu. Peptidová zmes sa centrifuguje pri 2500 rpm počas 5 minút a dekantuje sa. Surová, biela pevná substancia sa resuspenduje v dietyléteri (120 ml), centrifuguje sa a dekantuje sa. Tento premývací postup sa opakuje štyri krát a výsledný peptid sa suší vo vákuu, rozpustí sa vo vode obsahujúcej 0,1 % TFA (100 ml) a lyofilizuje sa.

Surový peptid sa prečistí kvapalinovou chromatografiou a reverznou fázou pri zisku 320 mg konečného, prečisteného peptidu vo forme bielej pevnej substancie. IS-MS: 4032 (M+). Aminokyselinová analýza: Asp/Asn: 5,00 (5); Ser: 1,63 (2); Glu/GIn: 3,81 (4); Gly: 0,90 (1); Ala: 0,85 (1); Val: 2,71 (3); lle: 0,84 (1); Leu: 6,35 (6); Nie: 0,77 (1); Phe: 1,07 (1); Lys: 2,90 (3); His: 2,80 (3); Arg: 1,96 (2); Trp: nie je stanovené (1).

Príklad 53 cykloCD^-K²²) [A¹,Nle⁸,D¹⁸,K²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 47)

Ala-Val-Ser-Glu-lle-Gln-Leu-Nle-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-(Asp-GluArg-Val-Lys)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-GIn-Asp-Val amid

Peptid sa pripraví spôsobom analogickým k spôsobu opísanému vyššie (Spôsob C). Rink Amid MBHA živica (0,5 mmol) sa vnesie do reakčnej nádoby, ktorá sa potom napojí na Protein Technologies PS3 Automate Peptide syntezátor. Technikou Fmoc-SPPS sa pridajú postupne nasledujúce aminokyseliny: Fmoc-Val-OH, FmocAsp(OtBu)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Lys(Boc)OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Trp(Boc)-OH, Fmoc-Lys(Aloc)-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Glu(tBu)-OH, Fmoc-Asp(Oalyl)-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, FmocLys(Boc)-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-NIe-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-lle-OH, Fmoc-Glu(OtBu)OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Val-OH a Fmoc-Ala-OH. Ako bolo uvedené vyššie, peptid naviazaný na živicu sa potom odstráni z prístroja pre Pd-sprostredkované odstránenie chrániacich skupín vedľajších reťazcov Lys(Aloc) a Asp(Oalyl) zvyškov a na následnú intramolekulámu cyklizáciu medzi vedľajšími reťazcami. N-koncová Fmoc chrániaca skupina sa odstráni počas 5 minút pôsobením 20 % roztoku piperidínu/DMF (17 ml). Peptid naviazaný na živicu sa postupne premyje DMF (100 ml), THF (100 ml) a dietyléterom (100 ml). Živica sušená vzduchom sa suspenduje v 40 ml TFA obsahujúcich vodu (2,0 ml), tioanizol (2,0 ml), fenol (3,0 g) a etánditiol (1,0 ml). Po dvoch hodinách sa TFA roztok filtruje do ŕerc-butylmetyléteru (160 ml) pri 0 °C, čo spôsobí vyzrážanie surového peptidu. Peptidová zmes sa centrifuguje pri 2500 rpm počas 5 minút a dekantuje sa. Surová, biela pevná substancia sa resuspenduje v dietyléteri (120 ml), centrifuguje sa a dekantuje sa. Tento premývací postup sa opakuje štyri krát a výsledný peptid sa suší vo vákuu, rozpustí sa vo vode obsahujúcej 0,1 % TFA (100 ml) a lyofilizuje sa.

Surový peptid sa potom prečistí kvapalinovou chromatografiou s reverznou fázou, ako bola opísaná vyššie, pri zisku 252 mg konečného, prečisteného peptidu vo forme bielej pevnej substancie. IS-MS: 3634 (M+). Aminokyselinová analýza: Asp/Asn: 3,97 (4); Ser: 1,88 (2); Glu/GIn: 3,95 (4); Gly: 1,00 (1); Ala: 0,99 (1); Val: 2,91 (3); lle: 0,87 (1); Leu: 6,57 (6); Nie: 0,80 (1); Lys: 2,90 (3); His: 2,12 (2); Arg: 2,05 (2); Trp: nieje stanovené (1).

Príklad 54 cykioíO^-D²²) [A'.NIe^O^.D^L^jhPTHCI-SnNHz (SEQ ID NO: 48)

Ala-Val-Ser-Glu-l,e-Gln-Leu-Nle-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-(Orn-GluArg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-GIn-Asp-Val amid

Peptid sa pripraví spôsobom analogickým k spôsobu opísanému vyššie (Spôsob C). Rink Amid MBHA živica (0,5 mmol) sa vnesie do reakčnej nádoby, ktorá sa potom napojí na Proteín Technologies PS3 Automate Peptide syntezátor. Technikou Fmoc-SPPS sa pridajú postupne nasledujúce aminokyseliny: Fmoc-Val-OH, FmocAsp(OtBu)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Lys(Boc)OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Trp(Boc)-OH, Fmoc-Asp(Oalyl)-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Glu(tBu)-OH, Fmoc-Orn(Aloc)-OH, FmocSer(tBu)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Lys(Boc)OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, FmocNle-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-lle-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Val-OH a Fmoc-Ala-OH. Ako bolo uvedené vyššie, peptid naviazaný na živicu sa potom odstráni z prístroja pre Pd-sprostredkované odstránenie chrániacich skupín vedľajších reťazcov Om(Aloc) a Asp(Oalyl) zvyškov a pre následnú intramolekulárnu cykiizáciu medzi vedľajšími reťazcami. N-koncová Fmoc chrániaca skupina sa odstráni počas 5 minút pôsobením 20 % roztoku piperidínu/DMF (17 mi). Peptid naviazaný na živicu sa postupne premyje DMF (100 ml), THF (100 ml) a dietyléterom (100 ml). Živica sušená vzduchom sa suspenduje v 40 ml TFA obsahujúcich vodu (2,0 ml), tioanizol (2,0 ml), fenol (3,0 g) a etánditiol (1,0 ml). Po dvoch hodinách sa TFA roztok filtruje do ŕerc-butylmetyléteru (160 ml) pri 0 °C, čo spôsobí vyzrážanie surového peptidu. Peptidová zmes sa centrifuguje pri 2500 rpm počas 5 minút a dekantuje sa. Surová, biela pevná substancia sa resuspenduje v dietyléteri (120 ml), centrifuguje sa a dekantuje sa. Tento premývací postup sa opakuje štyri krát a výsledný peptid sa suší vo vákuu, rozpustí sa vo vode obsahujúcej 0,1 % TFA (100 ml) a lyofilizuje sa.

Surový peptid sa potom prečistí kvapalinovou chromatografiou s reverznou fázou, ako bola opísaná vyššie, pri zisku 251 mg konečného, prečisteného peptidu vo forme bielej pevnej substancie. IS-MS: 3620 (M+). Aminokyselinová analýza: Asp/Asn: 4,00 (4); Ser: 1,76 (2); Glu/GIn: 3,89 (4); Gly: 0,98 (1); Ala: 0,95 (1); Val: 2,94 (3); lle: 0,88 (1); Leu: 6,52 (6); Nie: 0,84 (1); Lys: 2,03 (2); His: 1,94 (2); Arg: 2,01 (2); Trp: nie je stanovené (1).

Príklad 55 cykloíD^-O²²) [A¹,Nle⁸,D¹⁸,O²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 49)

Ala-Val-Ser-Glu-lle-Gln-Leu-Nle-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-(Asp-GluArg-Val-Orn)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-GIn-Asp-Val amid

Peptid sa pripraví spôsobom analogickým k spôsobu opísanému vyššie (Spôsob C). Rink Amid MBHA živica (0,5 mmol) sa vnesie do reakčnej nádoby, ktorá sa potom napojí na Proteín Technologies PS3 Automate Peptide syntezátor. Technikou Fmoc-SPPS sa pridajú postupne nasledujúce aminokyseliny: Fmoc-Val-OH, FmocAsp(OtBu)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Lys(Boc)OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Trp(Boc)-OH, Fmoc-Orn(Aloc)-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Asp(Oalyl)-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, FmocLys(Boc)-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-NIe-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-lle-OH, Fmoc-Glu(OtBu)OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Val-OH a Fmoc-Ala-OH. Ako bolo uvedené vyššie, peptid naviazaný na živicu sa potom odstráni z prístroja pre Pd-sprostredkované odstránenie chrániacich skupín vedľajších reťazcov Orn(Aloc) a Asp(Oalyl) zvyškov a pre následnú intramolekulárnu cyklizáciu medzi vedľajšími reťazcami. N-koncová Fmoc chrániaca skupina sa odstráni počas 5 minút pôsobením 20 % roztoku piperidínu/DMF (17 ml). Peptid naviazaný na živicu sa postupne premyje DMF (100 ml), THF (100 ml) a dietyléterom (100 ml). Živica sušená vzduchom sa suspenduje v 40 ml TFA obsahujúcich vodu (2,0 ml), tioanizol (2,0 ml), fenol (3,0 g) a etánditiol (1,0 ml). Po dvoch hodinách sa TFA roztok filtruje do ŕerc-butylmetyléteru (160 ml) pri 0 °C, čo spôsobí vyzrážanie surového peptidu. Peptidová zmes sa centrifúguje pri 2500 rpm počas 5 minút a dekantuje sa. Surová, biela pevná substancia sa resuspenduje v dietyléteri (120 ml), centrifúguje sa a dekantuje sa. Tento premývací postup sa opakuje štyri krát a výsledný peptid sa suší vo vákuu, rozpustí sa vo vode obsahujúcej 0,1 % TFA (100 ml) a lyofilizuje sa.

Surový peptid sa potom prečistí kvapalinovou chromatografiou s reverznou fázou, ako bolo opísané vyššie, pri zisku 414 mg konečného, prečisteného peptidu vo forme bielej pevnej substancie. IS-MS: 3620 (M+). Aminokyselinová analýza: Asp/Asn: 4,00 (4); Ser: 1,81 (2); Glu/GIn: 3,93 (4); Gly: 0,99 (1); Ala: 0,97 (1); Val: 2,67 (3); lle: 0,87 (1); Leu: 6,39 (6); Nie: 0,79 (1); Lys: 1,98 (2); His: 1,97 (2); Arg:

1,97 (2); Trp: nie je stanovené (1).

Príklad 56 cyklo(K¹⁸-E²²) [A¹,Nle⁸,K¹⁸,E²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 50)

Ala-Val-Ser-G lu-l le-GIn-Leu-N le-H is-Asn-Leu-Gly-Lys-H is-Leu-Asn-Ser-(Lys-GluArg-Val-Glu)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-GIn-Asp-Val amid

Peptid sa pripraví spôsobom analogickým k spôsobu opísanému vyššie (Spôsob C). Rink Amid MBHA živica (0,5 mmol) sa vnesie do reakčnej nádoby, ktorá sa potom napojí na Proteín Technologies PS3 Automate Peptide syntezátor. Technikou Fmoc-SPPS sa pridajú postupne nasledujúce aminokyseliny: Fmoc-Val-OH, FmocAsp(OtBu)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Lys(Boc)OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Trp(Boc)-OH, Fmoc-Glu(Oalyl)-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Lys(Aloc)-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, FmocLys(Boc)-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-NIe-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-lle-OH, Fmoc-Glu(OtBu)OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Val-OH a Fmoc-Ala-OH. Ako bolo uvedené vyššie, peptid naviazaný na živicu sa potom odstráni z prístroja pre Pd-sprostredkované odstránenie chrániacich skupín vedľajších reťazcov Lys(Aloc) a Glu(Oalyl) zvyškov a pre následnú intramolekulámu cyklizáciu medzi vedľajšími reťazcami. N-koncová

Fmoc chrániaca skupina sa odstráni počas 5 minút pôsobením 20 % roztoku piperidínu/DMF (17 ml). Peptid naviazaný na živicu sa postupne premyje DMF (100 ml), THF (100 ml) a dietyléterom (100 ml). Živica sušená vzduchom sa suspenduje v 40 ml TFA obsahujúcich vodu (2,0 ml), tioanizol (2,0 ml), fenol (3,0 g) a etánditiol (1,0 ml). Po dvoch hodinách sa TFA roztok filtruje do ŕerc-butylmetyléteru (160 ml) pri 0 ’C, čo spôsobí vyzrážanie surového peptidu. Peptidová zmes sa centrifuguje pri 2500 rpm počas 5 minút a dekantuje sa. Surová, biela pevná substancia sa resuspenduje v dietyléteri (120 ml), centrifuguje sa a dekantuje sa. Tento premývací postup sa opakuje štyri krát a výsledný peptid sa suší vo vákuu, rozpustí sa vo vode obsahujúcej 0,1 % TFA (100 ml) a lyofilizuje sa.

Surový peptid sa potom prečistí kvapalinovou chromatografiou s reverznou fázou, ako bola opísaná vyššie, pri zisku 95 mg konečného, prečisteného peptidu vo forme bielej pevnej substancie. IS-MS: 3648 (M+). Aminokyselinová analýza: Asp/Asn: 3,00 (3); Ser: 1,70 (2); Glu/GIn: 4,75 (5); Gly: 0,93 (1); Ala: 0,89 (1); Val: 2,80 (3); Ile: 0,89 (1); Leu: 6,16 (6); Nie: 0,87 (1); Lys: 2,99 (3); His: 1,86 (2); Arg: 1,90 (2); Trp: nie je stanovené (1).

Príklad 57 cyklo(O¹⁸-E²²) [A¹,Nle⁸,O¹⁸,E²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 51)

Ala-Val-Ser-Glu-lle-Gln-Leu-Nle-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-(Om-GluArg-Val-Glu)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-GIn-Asp-Val amid

Peptid sa pripraví spôsobom analogickým k spôsobu opísanému vyššie (Spôsob C). Rink Amid MBHA živica (0,5 mmol) sa vnesie do reakčnej nádoby, ktorá sa potom napojí na Proteín Technologies PS3 Automate Peptide syntezátor. Technikou Fmoc-SPPS sa pridajú postupne nasledujúce aminokyseliny: Fmoc-Val-OH, FmocAsp(OtBu)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Lys(Boc)OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Trp(Boc)-OH, Fmoc-Glu(Oalyl)-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Orn(Aloc)-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, FmocLys(Boc)-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-NIe-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-lle-OH, Fmoc-Glu(OtBu)63

OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Val-OH a Fmoc-Ala-OH. Ako bolo uvedené vyššie, peptid naviazaný na živicu sa potom odstráni z prístroja pre Pd-sprostredkované odstránenie chrániacich skupín vedľajších reťazcov Orn(Aloc) a Glu(Oalyl) zvyškov a pre následnú intramolekulárnu cyklizáciu medzi vedľajšími reťazcami. N-koncová Fmoc chrániaca skupina sa odstráni počas 5 minút pôsobením 20 % roztoku piperidínu/DMF (17 ml). Peptid naviazaný na živicu sa postupne premyje DMF (100 ml), THF (100 ml) a dietyléterom (100 ml). Živica sušená vzduchom sa suspenduje v 40 ml TFA obsahujúcich vodu (2,0 ml), tioanizol (2,0 ml), fenol (3,0 g) a etánditiol (1,0 ml). Po dvoch hodinách sa TFA roztok filtruje do ŕerc-butylmetyléteru (160 ml) pri 0 °C, čo spôsobí vyzrážanie surového peptidu. Peptidová zmes sa centrifuguje pri 2500 rpm počas 5 minút a dekantuje sa. Surová, biela pevná substancia sa resuspenduje v diétyléteri (120 ml), centrifuguje sa a dekantuje sa. Tento premývací postup sa opakuje štyri krát a výsledný peptid sa suší vo vákuu, rozpustí sa vo vode obsahujúcej 0,1 % TFA (100 ml) a lyofilizuje sa.

Surový peptid sa potom prečistí kvapalinovou chromatografiou s reverznou fázou, ako bolo opísané vyššie, pri zisku 237 mg konečného, prečisteného peptidu vo forme bielej pevnej substancie. IS-MS: 3634 (M+). Aminokyselinová analýza: Asp/Asn: 3,09 (3); Ser: 1,74 (2); Glu/GIn: 5,02 (5); Gly: 0,97 (1); Ala: 0,93 (1); Val: 2,95 (3); lle: 0,88 (1); Leu: 6,44 (6); Nie: 0,85 (1); Lys: 2,06 (2); His: 1,89 (2); Arg:

1,98 (2); Trp: nie je stanovené (1).

Príklad 58 cyklo^-D²²) [A¹,Nle⁸,K¹⁸,D²²IL²⁷]hPTH(1-30)NH₂ (SEQ ID NO: 52)

Ala-Val-Ser-Glu-lle-Gln-Leu-Nle-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-(Lys-GluArg-Val-Asp)-T rp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-GIn-Asp amid

Peptid sa pripraví spôsobom analogickým k spôsobu opísanému vyššie (Spôsob C). Rink Amid MBHA živica (0,5 mmol) sa vnesie do reakčnej nádoby, ktorá sa potom napojí na Protein Technologies PS3 Automate Peptide syntezátor. Technikou Fmoc-SPPS sa pridajú postupne nasledujúce aminokyseliny: Fmoc-Asp(OtBu)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, FmocArg(Pmc)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Trp(Boc)-OH, Fmoc-Asp(Oalyl)-OH, Fmoc-Val64

OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Lys(Aloc)-OH, Fmoc-Ser(tBu)OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-NIe-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-lle-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, FmocSer(tBu)-OH, Fmoc-Val-OH a Fmoc-Ala-OH. Ako bolo uvedené vyššie, peptid naviazaný na živicu sa potom odstráni z prístroja pre Pd-sprostredkované odstránenie chrániacich skupín vedľajších reťazcov Lys(Aloc) a Asp(Oalyl) zvyškov a pre následnú intramolekulárnu cyklizáciu medzi vedľajšími reťazcami. N-koncová Fmoc chrániaca skupina sa odstráni počas 5 minút pôsobením 20 % roztoku piperidínu/DMF (17 ml). Peptid naviazaný na živicu sa postupne premyje DMF (100 ml), THF (100 ml) a dietyléterom (100 ml). Živica sušená vzduchom sa suspenduje v 40 ml TFA obsahujúcich vodu (2,0 ml), tioanizol (2,0 ml), fenol (3,0 g) a etánditiol (1,0 ml). Po dvoch hodinách sa TFA roztok filtruje do ŕerc-butylmetyléteru (160 ml) pri 0 °C, čo spôsobí vyzrážanie surového peptidu. Peptidová zmes sa centrifuguje pri 2500 rpm počas 5 minút a dekantuje sa. Surová, biela pevná substancia sa resuspenduje v dietyléteri (120 ml), centrifuguje sa a dekantuje sa. Tento premývací postup sa opakuje štyri krát a výsledný peptid sa suší vo vákuu, rozpustí sa vo vode obsahujúcej 0,1 % TFA (100 ml) a lyofilizuje sa.

Časť surového peptidu sa potom prečistí kvapalinovou chromatografiou s reverznou fázou, ako bola opísaná vyššie, pri zisku 53 mg konečného, prečisteného peptidu vo forme bielej pevnej substancie. IS-MS. 3534 (M+). Aminokyselinová analýza: Asp/Asn: 4,00 (4); Ser: 1,71 (2); Glu/GIn: 3,89 (4); Gly: 0,93 (1); Ala: 0,92 (1); Val: 1,87 (2); lle: 0,90 (1); Leu: 6,46 (6); Nie: 0,82 (1); Lys: 2,89 (3); His: 2,01 (2); Arg: 2,03 (2); Trp: nie je stanovené (1).

Príklad 59 cykloíK^-D²²) [A¹,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-29)NH₂ (SEQ ID NO: 53)

Ala-Val-Ser-G lu-l le-G In-Leu-N le-H is-Asn-Leu-G ly-Lys-H is-Leu-Asn-Ser-(Lys-GluArg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-GIn amid

Peptid sa pripraví spôsobom analogickým k spôsobu opísanému vyššie (Spôsob C). Rink Amid MBHA živica (0,5 mmol) sa vnesie do reakčnej nádoby, ktorá sa potom napojí na Protein Technologies PS3 Automate Peptide syntezátor. Technikou Fmoc-SPPS sa pridajú postupne nasledujúce aminokyseliny: Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-LeuOH, Fmoc-Trp(Boc)-OH, Fmoc-Asp(Oalyl)-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Lys(Aloc)-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-LeuOH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-NIe-OH, Fmoc-Leu-OH, FmocGln(Trt)-OH, Fmoc-lle-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Val-OH a Fmoc-Ala-OH. Ako bolo uvedené vyššie, peptid naviazaný na živicu sa potom odstráni z prístroja pre Pd-sprostredkované odstránenie chrániacich skupín vedľajších reťazcov Lys(Aloc) a Asp(Oaiyl) zvyškov a pre následnú intramolekulárnu cyklizáciu medzi vedľajšími reťazcami. N-koncová Fmoc chrániaca skupina sa odstráni počas 5 minút pôsobením 20 % roztoku piperidínu/DMF (17 ml). Peptid naviazaný na živicu sa postupne premyje DMF (100 ml), THF (100 ml) a dietyléterom (100 ml). Živica sušená vzduchom sa suspenduje v 40 ml TFA obsahujúcich vodu (2,0 ml), tioanizol (2,0 ml), fenol (3,0 g) a etánditiol (1,0 ml). Po dvoch hodinách sa TFA roztok filtruje do ŕerc-butylmetyléteru (160 ml) pri 0 °C, čo spôsobí vyzrážanie surového peptidu. Peptidová zmes sa centrifuguje pri 2500 rpm počas 5 minút a dekantuje sa. Surová, biela pevná substancia sa resuspenduje v dietyléteri (120 ml), centrifuguje sa a dekantuje sa. Tento premývací postup sa opakuje štyri krát a výsledný peptid sa suší vo vákuu, rozpustí sa vo vode obsahujúcej 0,1 % TFA (100 ml) a lyofilizuje sa.

Časť surového peptidu sa potom prečistí kvapalinovou chromatografiou s reverznou fázou, ako bola opísaná vyššie, pri zisku 100 mg konečného, prečisteného peptidu vo forme biele pevnej substancie. IS-MS: 3419 (M+). Aminokyselinová analýza: Asp/Asn: 2,85 (3); Ser: 1,73 (2); Glu/GIn: 3,98 (4); Gly: 1,00 (1); Ala: 0,98 (1); Val: 2,00 (2); lie: 0,93 (1); Leu: 6,47 (6); Nie: 0,97 (1); Lys:

2,99 (3); His: 2,09 (2); Arg: 1,99 (2); Trp: nie je stanovené (1).

Príklad 60 cyklo^-D²²) [A¹,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-28)NH₂ (SEQ ID NO: 54)

Ala-Val-Ser-Glu-lle-Gln-Leu-Nle-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-(Lys-GluArg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu amid

Peptid sa pripraví spôsobom analogickým k spôsobu opísanému vyššie (Spôsob C). Rink Amid MBHA živica (0,5 mmol) sa vnesie do reakčnej nádoby, ktorá sa potom napojí na Protein Technologies PS3 Automate Peptide syntezátor. Technikou Fmoc-SPPS sa pridajú postupne nasledujúce aminokyseliny: Fmoc-Leu-OH, FmocLeu-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Trp(Boc)OH, Fmoc-Asp(Oalyl)-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Lys(Aloc)-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, FmocHis(Trt)-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-NIe-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-lle-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Val-OH a Fmoc-Ala-OH. Ako bolo uvedené vyššie, peptid naviazaný na živicu sa potom odstráni z prístroja pre Pdsprostredkované odstránenie chrániacich skupín vedľajších reťazcov Lys(Aloc) a Asp(Oalyl) zvyškov a pre následnú intramolekulámu cyklizáciu medzi vedľajšími reťazcami. N-koncová Fmoc chrániaca skupina sa odstráni počas 5 minút pôsobením 20 % roztoku piperidínu/DMF (17 ml). Peptid naviazaný na živicu sa postupne premyje DMF (100 ml), THF (100 ml) a dietyléterom (100 ml). Živica sušená vzduchom sa suspenduje v 40 ml TFA obsahujúcich vodu (2,0 ml), tioanizol (2,0 ml), fenol (3,0 g) a etánditiol (1,0 ml). Po dvoch hodinách sa TFA roztok filtruje do terc-butylmetyléteru (160 ml) pri 0 °C, čo spôsobí vyzrážanie surového peptidu. Peptidová zmes sa centrifuguje pri 2500 rpm počas 5 minút a dekantuje sa. Surová, biela pevná substancia sa resuspenduje v dietyléteri (120 ml), centrifuguje sa a dekantuje sa. Tento premývací postup sa opakuje štyri krát a výsledný peptid sa suší vo vákuu, rozpustí sa vo vode obsahujúcej 0,1 % TFA (100 ml) a lyofilizuje sa.

Časť surového peptidu sa potom prečistí kvapalinovou chromatografiou s reverznou fázou, ako bola opísaná vyššie, pri zisku 51 mg konečného, prečisteného peptidu vo forme bielej pevnej substancie. IS-MS: 3291 (M+). Aminokyselinová analýza: Asp/Asn: 2,81 (3); Ser: 1,71 (2); Glu/GIn: 2,86 (3); Gly: 0,97 (1); Ala: 1,00 (1); Val: 1,93 (2); lle: 0,91 (1); Leu: 6,30 (6); Nie: 0,92 (1); Lys: 2,88 (3); His: 2,03 (2); Arg: 1,93 (2); Trp: nie je stanovené (1);.

Príklad 61 cyklo^-D²²) [A¹,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-27)NH₂ (SEQ ID NO: 55)

Ala-Val-Ser-Glu-lle-Gln-Leu-Nle-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-(Lys-GluArg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu amid

Peptid sa pripraví spôsobom analogickým k spôsobu opísanému vyššie (Spôsob C). Rink Amid MBHA živica (0,5 mmol) sa vnesie do reakčnej nádoby, ktorá sa potom napojí na Protein Technologies PS3 Automate Peptide syntezátor. Technikou Fmoc-SPPS sa pridajú postupne nasledujúce aminokyseliny: Fmoc-Leu-OH, FmocLys(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Trp(Boc)-OH, FmocAsp(Oalyl)-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, FmocLys(Aloc)-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, FmocHis(Trt)-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-NIe-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-lle-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Val-OH a Fmoc-Ala-OH. Ako bolo uvedené vyššie, peptid naviazaný na živicu sa potom odstráni z prístroja pre Pdsprostredkované odstránenie chrániacich skupín vedľajších reťazcov Lys(Aloc) a Asp(Oalyl) zvyškov a pre následnú intramolekulárnu cyklizáciu medzi vedľajšími reťazcami. N-koncová Fmoc chrániaca skupina sa odstráni počas 5 minút pôsobením 20 % roztoku piperidínu/DMF (17 ml). Peptid naviazaný na živicu sa postupne premyje DMF (100 ml), THF (100 ml) a dietyléterom (100 ml). Živica sušená vzduchom sa suspenduje v 40 ml TFA obsahujúcich vodu (2,0 ml), tioanizol (2,0 ml), fenol (3,0 g) a etánditiol (1,0 ml). Po dvoch hodinách sa TFA roztok filtruje do ŕerc-butylmetyiéteru (160 ml) pri 0 “C, čo spôsobí vyzrážanie surového peptidu. Peptidová zmes sa centrifuguje pri 2500 rpm počas 5 minút a dekantuje sa. Surová, biela pevná substancia sa resuspenduje v dietyléteri (120 ml), centrifuguje sa a dekantuje sa. Tento premývací postup sa opakuje štyri krát a výsledný peptid sa suší vo vákuu, rozpustí sa vo vode obsahujúcej 0,1 % TFA (100 ml) a lyofllizuje sa.

Časť surového peptidu sa potom prečistí kvapalinovou chromatografiou s reverznou fázou, ako bola opísaná vyššie, pri zisku 65 mg konečného, prečisteného peptidu vo forme bielej pevnej substancie. IS-MS: 3178 (M+). Aminokyselinová analýza: Asp/Asn: 2,74 (3); Ser: 1,75 (2); Glu/GIn: 2,88 (3); Gly:

0,95 (1); Ala: 1,00 (1); Val: 1,94 (2); Íle: 0,93 (1); Leu: 5,16 (5); Nie: 0,88 (1); Lys 2,84 (3); His: 2,01 (2); Arg: 1,93 (2); Trp: nie je stanovené (1).

Príklad 62 cyklo^-D²²) [K^.D^.L^jhPTHCIO-SIJNHz (SEQ ID NO: 56)

Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-(Lys-Glu-Arg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-Lys-LeuLeu-GIn-Asp-Val amid

Peptid sa pripraví spôsobom analogickým k spôsobu opísanému vyššie (Spôsob B). Rink Amid MBHA živica (0,5 mmol) sa vnesie do reakčnej nádoby, ktorá sa potom napojí na Protein Technologies PS3 Automate Peptide syntezátor. Technikou Fmoc-SPPS sa pridajú postupne nasledujúce aminokyseliny: Fmoc-Val-OH, FmocAsp(OtBu), Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Trp(Boc)-OH, Fmoc-Asp(Oalyl)-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Lys(Aloc)-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH a Fmoc-Leu-OH. Ako bolo uvedené vyššie, peptid naviazaný na živicu sa potom odstráni z prístroja pre Pd-sprostredkované odstránenie chrániacich skupín vedľajších reťazcov Lys(Aloc) a Asp(Oalyl) zvyškov a pre následnú intramolekulárnu cyklizáciu medzi vedľajšími reťazcami. Po opísanom spracovaní sa peptid naviazaný na živicu obsahujúcu amid vráti do prístroja na dokončenie syntézy a postupne sa pridajú nasledujúce aminokyseliny: Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Leu-OH a FmocAsn(Trt)-OH. Časť peptidu naviazaného na živicu (približne 50 mg) sa potom odoberie z prístroja a N-koncová Fmoc chrániaca skupina sa odstráni počas 5 minút pôsobením 20 % roztoku piperidínu/DMF (10 ml). Peptid naviazaný na živicu sa postupne premyje DMF (10 ml), THF (10 ml) a dietyléterom (10 ml). Živica sušená vzduchom sa suspenduje v 2 ml TFA obsahujúcich vodu, tioanizol, fenol a etánditiol v rovnakých pomeroch, ako bolo uvedené skôr. Po dvoch hodinách sa TFA roztok filtruje do ŕerc-butylmetyléteru (8 ml) pri 0 °C, čo spôsobí vyzrážanie surového peptidu. Peptidová zmes sa centrifuguje pri 2500 rpm počas 5 minút a dekantuje sa. Surová, biela pevná substancia sa resuspenduje v dietyléteri (10 ml), centrifuguje sa a dekantuje sa. Tento premývací postup sa opakuje štyrikrát a výsledný peptid sa suší vo vákuu, rozpustí sa vo vode obsahujúcej 0,1 % TFA (10 ml) a lyofilizuje sa. IS-MS: 2642 (M+).

Príklad 63 cyklofK^-D²²) [K^.D^.L^jhPTHíg-SIJNHz (SEQ ID NO: 57)

His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-(Lys-Glu-Arg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-LysLeu-Leu-GIn-Asp-Val amid

Peptid sa pripraví spôsobom analogickým k spôsobu opísanému vyššie (Spôsob B). Rink Amid MBHA živica (0,5 mmol) sa vnesie do reakčnej nádoby, ktorá sa potom napojí na Protein Technologies PS3 Automate Peptide syntezátor. Technikou Fmoc-SPPS sa pridajú postupne nasledujúce aminokyseliny: Fmoc-Val-OH, FmocAsp(OtBu)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Lys(Boc)OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Trp(Boc)-OH, Fmoc-Asp(Oalyl)-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Lys(Aloc)-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH a Fmoc-Leu-OH. Ako bolo uvedené vyššie, peptid naviazaný na živicu sa potom odstráni z prístroja pre Pd-sprostredkované odstránenie chrániacich skupín vedľajších reťazcov Lys(Aloc) a Asp(Oalyl) zvyškov a pre následnú intramolekulárnu cyklizáciu medzi vedľajšími reťazcami. Po opísanom spracovaní sa peptid naviazaný na živicu obsahujúcu amid vráti do prístroja na dokončenie syntézy a postupne sa pridajú nasledujúce aminokyseliny: Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Leu-OH, FmocAsn(Trt)-OH a Fmoc-His(Trt)-OH. Časť peptidu naviazaného na živicu (približne 50 mg) sa potom odoberie z prístroja a N-koncová Fmoc chrániaca skupina sa odstráni počas 5 minút pôsobením 20 % roztoku piperidínu/DMF (1 mL). Peptid naviazaný na živicu sa postupne premyje DMF (10 ml), THF (10 ml) a dietyléterom (10 ml). Živica sušená vzduchom sa suspenduje v 2 ml TFA obsahujúcich vodu, tioanizol, fenol a etánditiol v rovnakých pomeroch, ako boli uvedené vyššie. Po dvoch hodinách sa TFA roztok filtruje do ŕerc-butylmetyléteru (8 ml) pri 0 ’C, čo spôsobí vyzrážanie surového peptidu. Peptidová zmes sa centrifuguje pri 2500 rpm počas 5 minút a dekantuje sa. Surová, biela pevná substancia sa resuspenduje v dietyléteri (10 ml), centrifuguje sa a dekantuje sa. Tento premývací postup sa opakuje štyrikrát a výsledný peptid sa suší vo vákuu, rozpustí sa vo vode obsahujúcej 0,1 % TFA (10 ml) a lyofilizuje sa. IS-MS: 2780 (M+).

Príklad 64 cyklo^-D²²) [Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(8-31)NH₂ (SEQ ID NO: 58)

Nle-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-(Lys-Glu-Arg-Val-Asp)-Trp-Leu-ArgLys-Leu-Leu-GIn-Asp-Val amid

Peptid sa pripraví spôsobom analogickým k spôsobu opísanému vyššie (Spôsob B). Rink Amid MBHA živica (0,5 mmol) sa vnesie do reakčnej nádoby, ktorá sa potom napojí na Protein Technologies PS3 Automate Peptide syntezátor. Technikou Fmoc-SPPS sa pridajú postupne nasledujúce aminokyseliny: Fmoc-Val-OH, FmocAsp(OtBu)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Lys(Boc)OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Trp(Boc)-OH, Fmoc-Asp(Oalyl)-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Lys(Aloc)-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH a Fmoc-Leu-OH. Ako bolo uvedené vyššie, peptid naviazaný na živicu sa potom odstráni z prístroja pre Pd-sprostredkované odstránenie chrániacich skupín vedľajších reťazcov Lys(Aloc) a Asp(Oalyl) zvyškov a pre následnú intramolekulárnu cyklizáciu medzi vedľajšími reťazcami. Po opísanom spracovaní sa peptid naviazaný na živicu obsahujúcu amid vráti do prístroja na dokončenie syntézy a postupne sa pridajú nasledujúce aminokyseliny: Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Leu-OH, FmocAsn(Trt)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH a Fmoc-NIe-OH. Časť peptidu naviazaného na živicu (približne 50 mg) sa potom odoberie z prístroja a N-koncová Fmoc chrániaca skupina sa odstráni počas 5 minút pôsobením 20 % roztoku piperidínu/DMF (1 ml). Peptid naviazaný na živicu sa postupne premyje DMF (10 ml), THF (10 ml) a dietyléterom (10 ml). Živica sušená vzduchom sa suspenduje v 2 ml TFA obsahujúcich vodu, tioanizol, fenol a etánditiol v rovnakých pomeroch, ako boli uvedené vyššie. Po dvoch hodinách sa TFA roztok filtruje do ferc-butylmetyléteru (8 ml) pri 0 °C, čo spôsobí vyzrážanie surového peptidu. Peptidová zmes sa centrifuguje pri 2500 rpm počas 5 minút a dekantuje sa. Surová, biela pevná substancia sa resuspenduje v dietyléteri (10 ml), centrifuguje sa a dekantuje sa. Tento premývací postup sa opakuje štyrikrát a výsledný peptid sa suší vo vákuu, rozpustí sa vo vode obsahujúcej 0,1 % TFA (10 ml) a lyofilizuje sa. IS-MS: 2892 (M+).

Príklad 65 cyklofK^-D²²) [Nle⁸,K¹⁸,D²²!L²⁷]hPTH(7-31)NH₂ (SEQ ID NO: 59)

Leu-Nle-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-(Lys-Glu-Arg-Val-Asp)-Trp-LeuArg-Lys-Leu-Leu-GIn-Asp-Val amid

Peptid sa pripraví spôsobom analogickým k spôsobu opísanému vyššie (Spôsob B). Rink Amid MBHA živica (0,5 mmol) sa vnesie do reakčnej nádoby, ktorá sa potom napojí na Proteín Technologies PS3 Automate Peptide syntezátor. Technikou Fmoc-SPPS sa pridajú postupne nasledujúce aminokyseliny: Fmoc-Val-OH, FmocAsp(OtBu)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Lys(Boc)OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Trp(Boc)-OH, Fmoc-Asp(Oalyl)-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Lys(Aloc)-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH a Fmoc-Leu-OH. Ako bolo uvedené vyššie, peptid naviazaný na živicu sa potom odstráni z prístroja pre Pd-sprostredkované odstránenie chrániacich skupín vedľajších reťazcov Lys(Aloc) a Asp(Oalyl) zvyškov a pre následnú intramolekulárnu cykiizáciu medzi vedľajšími reťazcami. Po opísanom spracovaní sa peptid naviazaný na živicu obsahujúcu amid vráti do prístroja na dokončenie syntézy a postupne sa pridajú nasledujúce aminokyseliny: Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Leu-OH, FmocAsn(Trt)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-NIe-OH a Fmoc-Leu-OH. Časť peptidu naviazaného a živicu (približne 50 mg) sa potom odoberie z prístroja a N-koncová Fmoc chrániaca skupina sa odstráni počas 5 minút pôsobením 20 % roztoku piperidínu/DMF (1 ml). Peptid naviazaný na živicu sa postupne premyje DMF (10 ml), THF (10 ml) a dietyléterom (10 ml). Živica sušená vzduchom sa suspenduje v 2 ml TFA obsahujúcich vodu, tioanizol, fenol a etánditiol v rovnakých pomeroch, ako boli uvedené vyššie. Po dvoch hodinách sa TFA roztok filtruje do ŕercbutylmetyléteru (8 ml) pri 0 °C, čo spôsobí vyzrážanie surového peptidu. Peptidová zmes sa centrifuguje pri 2500 rpm počas 5 minút a dekantuje sa. Surová, biela pevná substancia sa resuspenduje v dietyléteri (10 ml), centrifuguje sa a dekantuje sa. Tento premývací postup sa opakuje štyrikrát a výsledný peptid sa suší vo vákuu, rozpustí sa vo vode obsahujúcej 0,1 % TFA (10 ml) a lyofilizuje sa. IS-MS: 3006 (M+).

Príklad 66 cykloíK^-D²²) [Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(6-31)NH₂ (SEQ ID NO: 60)

Gln-Leu-Nle-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-(Lys-Glu-Arg-Val-Asp)-TrpLeu-Arg-Lys-Leu-Leu-GIn-Asp-Val amid

Peptid sa pripraví spôsobom analogickým k spôsobu opísanému vyššie (Spôsob B). Rink Amid MBHA živice (0,5 mmol) sa vnesie do reakčnej nádoby, ktorá sa potom napojí na Proteín Technologies PS3 Automate Peptide syntezátor. Technikou Fmoc-SPPS sa pridajú postupne nasledujúce aminokyseliny: Fmoc-Val-OH, FmocAsp(OtBu)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Lys(Boc)OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Trp(Boc)-OH, Fmoc-Asp(Oalyl)-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Lys(Aloc)-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH a Fmoc-Leu-OH. Ako bolo uvedené vyššie, peptid naviazaný na živicu sa potom odstráni z prístroja pre Pd-sprostredkované odstránenie chrániacich skupín vedľajších reťazcov Lys(Aloc) a Asp(Oalyi) zvyškov a pre následnú intramolekulárnu cyklizáciu medzi vedľajšími reťazcami. Po opísanom spracovaní sa peptid naviazaný na živicu obsahujúcu amid vráti do prístroja na dokončenie syntézy, postupne sa pridajú nasledujúce aminokyseliny: Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Leu-OH, FmocAsn(Trt)-OH, Fmoc-Hís(Trt)-OH, Fmoc-NIe-OH, Fmoc-Leu-OH a Fmoc-Gln(Trt)-OH. Časť peptidu naviazaného na živicu (približne 50 mg) sa potom odoberie z prístroja a N-koncová Fmoc chrániaca skupina sa odstráni počas 5 minút pôsobením 20 % roztoku piperidínu/DMF (1 ml). Peptid naviazaný na živicu sa postupne premyje DMF (10 ml), THF (10 ml) a dietyléterom (10 ml). Živica sušená vzduchom sa suspenduje v 2 ml TFA obsahujúcich vodu, tioanizol, fenol a etánditiol v rovnakých pomeroch, ako boli uvedené vyššie. Po dvoch hodinách sa TFA roztok filtruje do tercbutylmetyléteru (8 ml) pri 0 °C, čo spôsobí vyzrážanie surového peptidu. Peptidová zmes sa centrifuguje pri 2500 rpm počas 5 minút a dekantuje sa. Surová, biela pevná substancia sa resuspenduje v dietyléteri (10 ml), centrifuguje sa a dekantuje sa. Tento premývací postup sa opakuje štyrikrát a výsledný peptid sa suší vo vákuu, rozpustí sa vo vode obsahujúcej 0,1 % TFA (10 ml) a lyofilizuje sa. IS-MS: 3135 (M+).

Príklad 67 cyklo(K¹⁸-D²²)[Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(5-31)NH₂ (SEQ ID NO: 61) lle-Gln-Leu-Nle-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-(Lys-Glu-Arg-Val-Asp)Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-GIn-Asp-Val amid

Peptid sa pripraví spôsobom analogickým k spôsobu opísanému vyššie (Spôsob B). Rink Amid MBHA živica (0,5 mmol) sa vnesie do reakčnej nádoby, ktorá sa potom napojí na Proteín Technologies PS3 Automate Peptide syntezátor. Technikou Fmoc-SPPS sa pridajú postupne nasledujúce aminokyseliny: Fmoc-Val-OH, FmocAsp(OtBu)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Lys(Boc)OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Trp(Boc)-OH, Fmoc-Asp(Oalyl)-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Lys(Aloc)-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH a Fmoc-Leu-OH. Ako bolo uvedené vyššie, peptid naviazaný na živicu sa potom odstráni z prístroja pre Pd-sprostredkované odstránenie chrániacich skupín vedľajších reťazcov Lys(Aloc) a Asp(Oalyl) zvyškov a pre následnú intramolekulárnu cyklizáciu medzi vedľajšími reťazcami. Po opísanom spracovaní sa peptid naviazaný na živicu obsahujúcu amid vráti do prístroja na dokončenie syntézy a postupne sa pridajú nasledujúce aminokyseliny: Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Leu-OH, FmocAsn(Trt)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-NIe-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH a Fmoc-lle-OH. Časť peptidu naviazaného na živicu (približne 50 mg) sa potom odoberie z prístroja a N-koncová Fmoc chrániaca skupina sa odstráni počas 5 minút pôsobením 20 % roztoku piperidínu/DMF (1 ml). Peptid naviazaný na živicu sa postupne premyje DMF (10 ml), THF (10 ml) a dietyléterom (10 ml). Živica sušená vzduchom sa suspenduje v 2 ml TFA obsahujúcich vodu, tioanizol, fenol a etánditiol v rovnakých pomeroch, ako bolo uvedené vyššie. Po dvoch hodinách sa TFA roztok filtruje do ŕerc-butylmetyléteru (8 ml) pri 0 °C, čo spôsobí vyzrážanie surového peptidu. Peptidová zmes sa centrifuguje pri 2500 rpm počas 5 minút a dekantuje sa. Surová, biela pevná substancia sa resuspenduje v dietyléteri (10 ml), centrifuguje sa a dekantuje sa. Tento premývací postup sa opakuje štyrikrát a výsledný peptid sa suší vo vákuu, rozpustí sa vo vode obsahujúcej 0,1 % TFA (10 ml) a lyofilizuje sa. IS-MS: 3247 (M+).

Príklad 68 cyklo(K¹⁸-D²²)[Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(4-31)NH₂ (SEQ ID NO: 62)

Glu-lle-Gln-Leu-Nle-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-(Lys-Glu-Arg-ValAsp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-GIn-Asp-Val amid

Peptid sa pripraví spôsobom analogickým k spôsobu opísanému vyššie (Spôsob B). Rink Amid MBHA živica (0,5 mmol) sa vnesie do reakčnej nádoby, ktorá sa potom napojí na Proteín Technologies PS3 Automate Peptide syntezátor. Technikou Fmoc-SPPS sa pridajú postupne nasledujúce aminokyseliny: Fmoc-Val-OH, FmocAsp(OtBu)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Lys(Boc)OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Trp(Boc)-OH, Fmoc-Asp(Oalyl)-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Lys(Aloc)-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH a Fmoc-Leu-OH. Ako bolo uvedené vyššie, peptid naviazaný na živicu sa potom odstráni z prístroja pre Pd-sprostredkované odstránenie chrániacich skupín vedľajších reťazcov Lys(Aloc) a Asp(Oalyl) zvyškov a na následnú intramolekulámu cyklizáciu medzi vedľajšími reťazcami. Po opísanom spracovaní sa peptid naviazaný na živicu obsahujúcu amid vráti do prístroja na dokončenie syntézy a postupne sa pridajú nasledujúce aminokyseliny: FmocHis(Trt)-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-NIe-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-lle-OH a Fmoc-Glu(OtBu)-OH. Časť peptidu naviazaného na živicu (približne 50 mg) sa potom odoberie z prístroja a N-koncová Fmoc chrániaca skupina sa odstráni počas 5 minút pôsobením 20 % roztoku piperidínu/DMF (1 ml). Peptid naviazaný na živicu sa postupne premyje DMF (10 ml), THF (10 ml) a dietyléterom (10 ml). Živica sušená vzduchom sa suspenduje v 2 ml TFA obsahujúcich vodu, tioanizol, fenol a etánditiol v rovnakých pomeroch, ako boli uvedené vyššie. Po dvoch hodinách sa TFA roztok filtruje do ŕerc-butylmetyléteru (8 ml) pri 0 °C, čo spôsobí vyzrážanie surového peptidu. Peptidová zmes sa centrifúguje pri 2500 rpm počas 5 minút a dekantuje sa. Surová, biela pevná substancia sa resuspenduje v dietyléteri (10 mi), centrifúguje sa a dekantuje sa. Tento premývací postup sa opakuje štyrikrát a výsledný peptid sa suší vo vákuu, rozpustí sa vo vode obsahujúcej 0,1 % TFA (10 ml) a lyofilizuje sa. IS-MS: 3377 (M+).

Príklad 69 cyklo(K¹⁸-D²²)[Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(3-31)NH₂ (SEQ ID NO: 63)

Ser-Glu-lle-Gln-Leu-Nle-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-(Lys-Glu-Arg-ValAsp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-GIn-Asp-Val amid

Peptid sa pripraví spôsobom analogickým k spôsobu opísanému vyššie (Spôsob B). Rink Amid MBHA živica (0,5 mmol) sa vnesie do reakčnej nádoby, ktorá sa potom napojí na Protein Technologies PS3 Automate Peptide syntezátor. Technikou Fmoc-SPPS sa pridajú postupne nasledujúce aminokyseliny: Fmoc-Val-OH, FmocAsp(OtBu)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Lys(Boc)OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Trp(Boc)-OH, Fmoc-Asp(Oalyl)-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Lys(Aloc)-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH a Fmoc-Leu-OH. Ako bolo uvedené vyššie, peptid naviazaný na živicu sa potom odstráni z prístroja pre Pd-sprostredkované odstránenie chrániacich skupín vedľajších reťazcov Lys(Aloc) a Asp(Oalyl) zvyškov a na následnú intramolekulárnu cyklizáciu medzi vedľajšími reťazcami. Po opísanom spracovaní sa peptid naviazaný na živicu obsahujúci amid vráti do prístroja na dokončenie syntézy a postupne sa pridajú nasledujúce aminokyseliny: FmocHis(Trt)-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-NIe-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-lle-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH a Fmoc-Ser(tBu)-OH. Časť peptidu naviazaného na živicu (približne 50 mg) sa potom odoberie z prístroja a N-koncová Fmoc chrániaca skupina sa odstráni počas 5 minút pôsobením 20 % roztoku piperidínu/DMF (1 ml). Peptid naviazaný na živicu sa postupne premyje DMF (10 ml), THF (10 ml) a dietyléterom (10 ml). Živica sušená vzduchom sa suspenduje v 2 ml TFA obsahujúcich vodu, tioanizol, fenol a etánditiol v rovnakých pomeroch, ako boli uvedené vyššie. Po dvoch hodinách sa TFA roztok filtruje do ŕerc-butylmetyléteru (8 ml) pri 0 °C, čo spôsobí vyzrážanie surového peptidu. Peptidová zmes sa centrifuguje pri 2500 rpm počas 5 minút a dekantuje sa. Surová, biela pevná substancia sa resuspenduje v dietyléteri (10 ml), centrifuguje sa a dekantuje sa. Tento premývací postup sa opakuje štyrikrát a výsledný peptid sa suší vo vákuu, rozpustí sa vo vode obsahujúcej 0,1 % TFA (10 ml) a lyofilizuje sa. IS-MS: 3463 (M+).

Príklad 70 cyklo(K¹⁸-D²²)[Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(2-31)NH₂ (SEQ ID NO: 64)

Val-Ser-Glu-lle-Gln-Leu-Nle-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-(Lys-Glu-ArgVal-Asp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Val amid

Peptid sa pripraví spôsobom analogickým k spôsobu opísanému vyššie (Spôsob B). Rink Amid MBHA živica (0,5 mmol) sa vnesie do reakčnej nádoby, ktorá sa potom napojí na Protein Technologies PS3 Automate Peptide syntezátor. Technikou Fmoc-SPPS sa pridajú postupne nasledujúce aminokyseliny: Fmoc-Val-OH, FmocAsp(OtBu)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Lys(Boc)OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Trp(Boc)-OH, Fmoc-Asp(Oalyl)-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Lys(Aloc)-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH a Fmoc-Leu-OH. Ako bolo uvedené vyššie, peptid naviazaný na živicu sa potom odstráni z prístroja na Pd-sprostredkované odstránenie chrániacich skupín vedľajších reťazcov Lys(Aloc) a Asp(Oalyl) zvyškov a na následnú intramolekulárnu cyklizáciu medzi vedľajšími reťazcami. Po opísanom spracovaní sa peptid naviazaný na živicu obsahujúcu amid vráti do prístroja na dokončenie syntézy a postupne sa pridajú nasledujúce aminokyseliny: FmocHis(Trt)-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-NIe-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-lle-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH a Fmoc-Val-OH. Časť peptidu naviazaného na živicu (približne 50 mg) sa potom odoberie z prístroja a N-koncová Fmoc chrániaca skupina sa odstráni počas 5 minút pôsobením 20 % roztoku piperidínu/DMF (1 ml). Peptid naviazaný na živicu sa postupne prepláchne DMF (10 ml), THF (10 ml) a dietyléterom (10 ml). Živica sušená vzduchom sa suspenduje v 2 ml TFA obsahujúcich vodu, tioanizol, fenol a etánditiol v rovnakých pomeroch, ako boli uvedené vyššie. Po dvoch hodinách sa TFA roztok filtruje do ŕercbutylmetyléteru (8 ml) pri 0 °C, čo spôsobí vyzrážanie surového peptidu. Peptidová zmes sa centrifuguje pri 2500 rpm počas 5 minút a dekantuje sa. Surová, biela pevná substancia sa resuspenduje v dietyléteri (10 ml), centrifuguje sa a dekantuje sa. Tento premývací postup sa opakuje štyrikrát a výsledný peptid sa suší vo vákuu, rozpustí sa vo vode obsahujúcej 0,1 % TFA (10 ml) a lyofilizuje sa. IS-MS: 3564 (M+).

Príklad 71 cyklo(K¹⁸-D²²)[Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(7-34)NH₂ (SEQ ID NO: 65)

Leu-Nle-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-(Lys-Glu-Arg-Val-Asp)-Trp-LeuArg-Lys-Leu-Leu-GIn-Asp-Val-His-Asn-Phe amid

Peptid sa pripraví spôsobom analogickým k spôsobu opísanému vyššie (Spôsob

B) . Rink Amid MBHA živica (0,5 mmol) sa vnesie do reakčnej nádoby, ktorá sa potom napojí na Proteín Technologies PS3 Automate Peptide syntezátor. Technikou Fmoc-SPPS sa pridajú postupne nasledujúce aminokyseliny: Fmoc-Phe-OH, FmocAsn(Trt)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Asp(OtBu)-OH, FmocGln(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Arg(Pmc)OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Trp(Boc)-OH, Fmoc-Asp(Oalyl)-OH, Fmoc-Val-OH, FmocArg(Pmc)-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Lys(Aloc)-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, FmocAsn(Trt)-OH a Fmoc-Leu-OH. Ako bolo uvedené vyššie, peptid naviazaný na živicu sa potom odstráni z prístroja na Pd-sprostredkované odstránenie chrániacich skupín vedľajších reťazcov Lys(Aloc) a Asp(Oalyl) zvyškov a na následnú intramolekulárnu cyklizáciu medzi vedľajšími reťazcami. Po opísanom spracovaní sa peptid naviazaný na živicu obsahujúci amid vráti do prístroja na dokončenie syntézy a postupne sa pridajú nasledujúce aminokyseliny: Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, FmocGly-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-NIe-OH, Fmoc-Leu-OH. Surový peptid sa odštiepi zo živice a chrániaca skupina sa odstráni s použitím 40 ml TFA obsahujúcich vodu (2,0 ml), tioanizol (2,0 ml), fenol (3,0 g) a etánditiol (1,0 ml) a vyzráža sa pridaním štepiacej zmesi do chladného tercbutylmetyléteru. Surový peptid sa potom prečistí kvapalinovou chromatografiou s reverznou fázou.

Príklad 72 cyklo(K¹⁰-D¹⁴)[A¹,Nle⁸'¹⁸,K¹⁰,D¹⁴,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 66)

Ala-Val-Ser-Glu-lle-Gln-Leu-Nle-His-(Lys-Leu-Gly-Lys-Asp)-Leu-Asn-Ser-Nle-GluArg-Val-Glu-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-GIn-Asp-Val amid

C) . Rink Amid MBHA živica (0,5 mmol) sa vnesie do reakčnej nádoby, ktorá sa potom pripojí na Proteín Technologies PS3 Automate Peptide syntezátor. Technikou Fmoc-SPPS sa pridajú postupne nasledujúce aminokyseliny: Fmoc-Val-OH, Fmoc79

Asp(OtBu)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Lys(Boc)OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Trp(Boc)-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-NIe-OH, FmocSer(tBu)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Asp(Oalyl)-OH, FmocLys(Boc)-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Lys(Aloc)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-NIe-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-lle-OH, Fmoc-Glu(OtBu)OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Val-OH a Fmoc-Ala-OH. Ako bolo uvedené vyššie, peptid naviazaný na živicu sa potom odstráni z prístroja na Pd-sprostredkované odstránenie chrániacich skupín vedľajších reťazcov Lys(Aloc) a Asp(Oalyl) zvyškov a na následnú intramolekulámu cyklizáciu medzi vedľajšími reťazcami. N-koncová Fmoc chrániaca skupina sa odstráni počas 5 minút pôsobením 20 % roztoku piperidínu/DMF (17 ml). Peptid naviazaný na živicu sa postupne premyje DMF (100 ml), THF (100 ml) a dietyléterom (100 ml). Živica sušená vzduchom sa suspenduje v 40 ml TFA obsahujúcich vodu (2,0 ml), tioanizol (2,0 ml), fenol (3,0 g) a etánditiol (1,0 ml). Po dvoch hodinách sa TFA roztok filtruje do ŕerc-butylmetyléteru (160 ml) pri 0 °C, čo spôsobí vyzrážanie surového peptidu. Peptidová zmes sa centrifuguje pri 2500 rpm počas 5 minút a dekantuje sa. Surová, biela pevná substancia sa resuspenduje v dietyléteri (120 ml), centrifuguje sa a dekantuje sa. Tento premývací postup sa opakuje štyrikrát a výsledný peptid sa suší vo vákuu, rozpustí sa vo vode obsahujúcej 0,1 % TFA (100 ml) a lyofilizuje sa.

Časť surového peptidu sa potom prečistí kvapalinovou chromatografiou s reverznou fázou, ako bola opísaná vyššie, pri zisku 85 mg konečného, prečisteného peptidu vo forme bielej pevnej substancie. IS-MS: 3626 (M+). Aminokyselinová analýza: Asp/Asn: 3,00 (3); Ser: 1,69 (2); Glu/GIn: 4,91 (5); Gly: 0,94 (1); Ala: 0,91 (1); Val: 2,86 (3); lle: 0,94 (1); Leu: 6,33 (6); Nie: 1,94 (2); Lys: 2,90 (3); His: 0,99 (1); Arg: 1,96 (2); Trp: nie je stanovené (1).

Príklad 73 cyklo(K¹⁴-D¹⁸)[A¹,Nle⁸,K¹⁴,D¹⁸,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 67)

Ala-Val-Ser-Glu-lle-Gln-Leu-Nle-His-Asn-Leu-Gly-Lys-(Lys-Leu-Asn-Ser-Asp)Glu-Arg-Va,-Glu-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-GIn-Asp-Val amid

Peptid sa pripraví spôsobom analogickým k spôsobu opísanému vyššie (Spôsob C). Rink Amid MBHA živica (0,5 mmol) sa vnesie do reakčnej nádoby, ktorá sa potom napojí na Protein Technologies PS3 Automate Peptide syntezátor. Technikou Fmoc-SPPS sa pridajú postupne nasledujúce aminokyseliny: Fmoc-Val-OH, FmocAsp(OtBu)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Lys(Boc)OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Trp(Boc)-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Asp(Oalyl)-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Lys(Aloc)-OH, FmocLys(Boc)-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-NIe-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-lle-OH, Fmoc-Glu(OtBu)OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Val-OH a Fmoc-Ala-OH. Ako bolo uvedené vyššie, peptid naviazaný na živicu sa potom odstráni z prístroja na Pd-sprostredkované odstránenie chrániacich skupín vedľajších reťazcov Lys(Aloc) a Asp(Oalyl) zvyškov a na následnú intramolekulárnu cyklizáciu medzi vedľajšími reťazcami. N-koncová Fmoc chrániaca skupina sa odstráni počas 5 minút pôsobením 20 % roztoku piperidínu/DMF (17 ml). Peptid naviazaný na živicu sa postupne premyje DMF (100 ml), THF (100 ml) a dietyléterom (100 ml). Živica sušená vzduchom sa suspenduje v 40 ml TFA obsahujúcich vodu (2,0 ml), tioanizol (2,0 ml), fenol (3,0 g) a etánditiol (1,0 ml). Po dvoch hodinách sa TFA roztok filtruje do ŕerc-butylmetyléteru (160 ml) pri 0 °C, čo spôsobí vyzrážanie surového peptidu. Peptidová zmes sa centrifuguje pri 2500 rpm počas 5 minút a dekantuje sa. Surová, biela pevná substancia sa resuspenduje v dietyléteri (120 ml), centrifuguje sa a dekantuje sa. Tento premývací postup sa opakuje štyrikrát a výsledný peptid sa suší vo vákuu, rozpustí sa vo vode obsahujúcej 0,1 % TFA (100 ml) a lyofilizuje sa.

Časť surového peptidu sa potom prečistí kvapalinovou chromatografiou s reverznou fázou, ako bola opísaná vyššie, pri zisku 57 mg konečného, prečisteného peptidu vo forme bielej pevnej substancie. IS-MS: 3627 (M+). Aminokyselinová analýza: Asp/Asn: 4,00 (4); Ser: 1,69 02): Glu/GIn: 4,86 (5); Gly: 0,94 (1); Ala: 0,98 (1); Val: 2,82 (3); lle: 0,90 (1); Leu: 6,35 (6); Nie: 0,87 (1); Lys: 2,89 (3); His: 1,00 (1); Arg: 1,91 (2); Trp: nie je stanovené (1).

Príklad 74 cyklo(K¹⁷-D²¹)[A¹,Nle⁸-¹⁸,K¹⁷,D²¹,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 68)

Ala-Val-Ser-Glu-lle-Gln-Leu-Nle-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-(Lys-Nle-GluArg-Asp)-Glu-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Val amid

Peptid sa pripraví spôsobom analogickým k spôsobu opísanému vyššie (Spôsob C). Rink Amid MBHA živica (0,5 mmol) sa vnesie do reakčnej nádoby, ktorá sa potom napojí na Protein Technologies PS3 Automate Peptide syntezátor. Technikou Fmoc-SPPS sa pridajú postupne nasledujúce aminokyseliny: Fmoc-Val-OH, FmocAsp(OtBu)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Lys(Boc)OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Trp(Boc)-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Asp(Oalyl)-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-NIe-OH, Fmoc-Lys(Aloc)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, FmocLys(Boc)-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-NIe-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-lle-OH, Fmoc-Glu(OtBu)OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Val-OH a Fmoc-Ala-OH. Ako bolo uvedené vyššie, peptid naviazaný na živicu sa potom odstráni z prístroja na Pd-sprostredkované odstránenie chrániacich skupín vedľajších reťazcov Lys(Aloc) a Asp(Oalyl) zvyškov a na následnú intramolekulárnu cyklizáciu medzi vedľajšími reťazcami. N-koncová Fmoc chrániaca skupina sa odstráni počas 5 minút pôsobením 20 % roztoku piperidínu/DMF (17 ml). Peptid naviazaný na živicu sa postupne premyje DMF (100 ml), THF (100 ml) a dietyléterom (100 ml). Živica sušená vzduchom sa suspenduje v 40 ml TFA obsahujúcich vodu (2,0 ml), tioanizol (2,0 ml), fenol (3,0 g) a etánditiol (1,0 ml). Po dvoch hodinách sa TFA roztok filtruje do ŕerc-butylmetyléteru (160 ml) pri 0 °C, čo spôsobí vyzrážanie surového peptidu. Peptidová zmes sa centrifuguje pri 2500 rpm počas 5 minút a dekantuje sa. Surová, biela pevná substancia sa resuspenduje v dietyléteri (120 ml), centrifuguje sa a dekantuje sa. Tento premývací postup sa opakuje štyrikrát a výsledný peptid sa suší vo vákuu, rozpustí sa vo vode obsahujúcej 0,1 % TFA (100 ml) a lyofilizuje sa.

Časť surového peptidu sa potom prečistí kvapalinovou chromatografiou s reverznou fázou, ako bola opísaná vyššie, pri zisku 136 mg konečného, prečisteného peptidu vo forme bielej pevnej substancie. IS-MS: 3698 (M+). Aminokyselinová analýza: Asp/Asn: 4,00 (4); Ser: 0,83 (1); Glu/GIn: 4,84 (5); Gly:

0,93 (1); Ala: 0,96 (1); Val: 1,93 (2); íle: 0,84 (1); Leu: 6,32 (6); Nie: 1,80 (2); Lys: 2,87 (3); His: 1,95 (2); Arg: 2,04 (2); Trp: nie je stanovené (1).

Príklad 75 cyklo(K²¹-D²⁵)[A¹,Nle⁸'¹⁸,K²¹,D²⁵,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 69)

Ala-Val-Ser-Glu-lle-GIn-Leu-NIe-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-NIe-GluArg-(Lys-Glu-T rp-Leu-Asp)-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Val amid

Peptid sa pripraví spôsobom analogickým k spôsobu opísanému vyššie (Spôsob C). Rink Amid MBHA živica (0,5 mmol) sa vnesie do reakčnej nádoby, ktorá sa potom napojí na Protein Technologies PS3 Automate Peptide syntezátor. Technikou Fmoc-SPPS sa pridajú postupne nasledujúce aminokyseliny: Fmoc-Val-OH, FmocAsp(OtBu)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Lys(Boc)OH, Fmoc-Asp(Oalyl)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Trp(Boc)-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Lys(Aloc)-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-NIe-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, FmocLys(Boc)-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-NIe-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-lle-OH, Fmoc-Glu(OtBu)OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Val-OH a Fmoc-Ala-OH. Ako bolo uvedené vyššie, peptid naviazaný na živicu sa potom odstráni z prístroja na Pd-sprostredkované odstránenie chrániacich skupín vedľajších reťazcov Lys(Aloc) a Asp(Oalyi) zvyškov a na následnú intramolekulárnu cyklizáciu medzi vedľajšími reťazcami. N-koncová Fmoc chrániaca skupina sa odstráni počas 5 minút pôsobením 20 % roztoku piperidínu/DMF (17 ml). Peptid naviazaný na živicu sa postupne premyje DMF (100 ml), THF (100 ml) a dietyléterom (100 ml). Živica sušená vzduchom sa suspenduje v 40 ml TFA obsahujúcich vodu (2,0 ml), tioanizol (2,0 ml), fenol (3,0 g) a etánditiol (1,0 ml). Po dvoch hodinách sa TFA roztok filtruje do ŕerc-butylmetyléteru (160 ml) pri 0 °C, čo spôsobí vyzrážanie surového peptidu. Peptidová zmes sa centrifuguje pri 2500 rpm počas 5 minút a dekantuje sa. Surová, biela pevná substancia sa resuspenduje v dietyléteri (120 ml), centrifuguje sa a dekantuje sa. Tento premývací postup sa opakuje štyrikrát a výsledný peptid sa suší vo vákuu, rozpustí sa vo vode obsahujúcej 0,1 % TFA (100 ml) a lyofilizuje sa.

Časť surového peptidu sa potom prečistí kvapalinovou chromatografiou s reverznou fázou, ako bola opísaná vyššie, pri zisku 131 mg konečného, prečisteného peptidu vo forme bielej pevnej substancie. IS-MS: 3620 (M+). Aminokyselinová analýza: Asp/Asn: 4,00 (4); Ser: 1,71 (2); Glu/GIn: 4,84 (5); Gly: 0,96 (1); Ala: 0,97 (1); Val: 2,07 (2); lle: 0,92 (1); Leu: 6,22 (6); Nie: 1,90 (2); Lys: 2,90 (3); His: 1,97 (2); Arg: 0,97 (1); Trp: nie je stanovené (1).

Príklad 76 cyklo(K²⁵-D²⁹)[A¹,Nle⁸'¹⁸,K²⁵,D²⁹,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 70)

Ala-Val-Ser-Glu-lle-GIn-Leu-NIe-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-NIe-GluArg-Val-Glu-Trp-Leu-(Lys-Lys-Leu-Leu-Asp)-Asp-Val amid

Peptid sa pripraví spôsobom analogickým k spôsobu opísanému vyššie (Spôsob C). Rink Amid MBHA živica (0,5 mmol) sa vnesie do reakčnej nádoby, ktorá sa potom napojí na Protein Technologies PS3 Automate Peptide syntezátor. Technikou Fmoc-SPPS sa pridajú postupne nasledujúce aminokyseliny: Fmoc-Val-OH, FmocAsp(OtBu)-OH, Fmoc-Asp(Oalyl)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, FmocLys(Boc)-OH, Fmoc-Lys(Aloc)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Trp(Boc)-OH, FmocGlu(OtBu)-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-NIeOH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, FmocHis(Trt)-OH, Fmoc-NIe-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-lle-OH, FmocGlu(OtBu)-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Val-OH a Fmoc-Ala-OH. Ako bolo uvedené vyššie, peptid naviazaný na živicu sa potom odstráni z prístroja na Pdsprostredkované odstránenie chrániacich skupín vedľajších reťazcov Lys(Aloc) a Asp(Oalyl) zvyškov a na následnú intramolekulárnu cyklizáciu medzi vedľajšími reťazcami. N-koncová Fmoc chrániaca skupina sa odstráni počas 5 minút pôsobením 20 % roztoku piperidínu/DMF (17 ml). Peptid naviazaný na živicu sa postupne premyje DMF (100 ml), THF (100 ml) a dietyléterom (100 ml). Živica sušená vzduchom sa suspenduje v 40 ml TFA obsahujúcich vodu (2,0 ml), tioanizol (2,0 ml), fenol (3,0 g) a etánditiol (1,0 ml). Po dvoch hodinách sa TFA roztok filtruje do ŕerc-butylmetyléteru (160 ml) pri 0 °C, čo spôsobí vyzrážanie surového peptidu. Peptidová zmes sa centrifuguje pri 2500 rpm počas 5 minút a dekantuje sa. Surová, biela pevná substancia sa resuspenduje v dietyléteri (120 ml), centrifuguje sa a dekantuje sa. Tento premývací postup sa opakuje štyrikrát a výsledný peptid sa suší vo vákuu, rozpustí sa vo vode obsahujúcej 0,1 % TFA (100 ml) a lyofilizuje sa.

Časť surového peptidu sa potom prečistí kvapalinovou chromatografiou s reverznou fázou, ako bola opísaná vyššie, pri zisku 134 mg konečného, prečisteného peptidu vo forme bielej pevnej substancie. IS-MS: 3591 (M+). Aminokyselinová analýza: Asp/Asn: 4,11 (4); Ser: 1,69 (2): Glu/GIn: 3,89 (4); Gly: 0,97 (1); Ala: 1,00 (1); Vaľ. 3,12 (3); lle: 0,92 (1); Leu: 6,45 (6); Nie: 1,85 (2); Lys: 3,02 (3); His: 1,99 (2); Arg: 0,98 (1); Trp: nie je stanovené (1).

Príklad 77 cykloíK^-D^IK^.D^jhPTHrPíl^JNHa (SEQ ID NO: 71)

Ala-Val-Ser-Glu-His-Gln-Leu-Leu-His-Asn-Lys-Gly-Lys-Ser-lle-Gln-Asp-(Lys-ArgArg-Arg-Asp)-Phe-Leu-His-His-Leu-lle-Ala-Glu-lle-His-Thr-Ala amid

Peptid sa pripraví spôsobom analogickým k spôsobu opísanému vyššie (Spôsob B). Rink Amid MBHA živica (0,5 mmol) sa vnesie do reakčnej nádoby, ktorá sa potom napojí na Protein Technologies PS3 Automate Peptide syntezátor. Technikou Fmoc-SPPS sa pridajú postupne nasledujúce aminokyseliny: Fmoc-Ala-OH, FmocThr(tBu)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-lle-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-lle-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Phe-OH, Fmoc-Asp(Oalyl)-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Lys(Aloc)-OH, Fmoc-Asp(OtBu)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-lle-OH. Ako bolo uvedené vyššie, peptid naviazaný na živicu sa potom odstráni z prístroja na Pd-sprostredkované odstránenie chrániacich skupín vedľajších reťazcov Lys(Aloc) a Asp(Oalyl) zvyškov a na následnú intramolekulárnu cyklizáciu medzi vedľajšími reťazcami. Po opísanom spracovaní sa peptid naviazaný na živicu obsahujúci amid vráti do prístroja na dokončenie syntézy a postupne sa pridajú nasledujúce aminokyseliny: Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, FmocGly-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Asp(OtBu)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-LeuOH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Val-OH a Fmoc-Ala-OH. Peptid naviazaný na živicu sa potom odoberie z prístroja a N-koncová Fmoc chrániaca skupina sa odstráni počas 5 minútového pôsobenia 20 % roztoku piperidínu/DMF (17 ml). Peptid naviazaný na živicu sa postupne premyje DMF (100 ml), THF (100 ml) a dietyléterom (100 ml). Živica sušená vzduchom sa suspenduje v 40 ml TFA obsahujúcich vodu (2,0 ml), tioanizol (2,0 ml), fenol (3,0 g) a etánditiol (1,0 ml). Po dvoch hodinách sa TFA roztok filtruje do ŕerc-butylmetyléteru (160 ml) pri 0 °C, čo spôsobí vyzrážanie surového peptidu. Peptidová zmes sa centrifuguje pri 2500 rpm počas 5 minút a dekantuje sa. Surová, biela pevná substancia sa resuspenduje v dietyléteri (120 ml), centrifuguje sa a dekantuje sa. Tento premývací postup sa opakuje štyrikrát a výsledný peptid sa suší vo vákuu, rozpustí sa vo vode obsahujúcej 0,1 % TFA (100 ml) a lyofilizuje sa.

Surový peptid sa potom prečistí kvapalinovou chromatografiou s reverznou fázou pri zisku 110 mg konečného peptidu vo forme bielej pevnej substancie. IS-MS: 3980 (M+). Aminokyselinová analýza: Asp/Asn: 3,11 (3); Thr 1,05 (1); Ser: 1,78 (2); Glu/GIn: 3,93 (4); Gly: 0,98 (1); Ala: 3,12 (3); Val: 1,00 (1); lle: 2,73 (3); Leu: 4,00 (4); Lys: 2,86 (3); Phe: 1,13 (1); His: 4,93 (5); Arg: 3,12 (3);

Príklad 78 cyklo(K¹⁸-D²²)[K^18,26'³⁰,D²²,L²³'^28,31,E²⁵'²⁹]hPTHrP(1-34)NH₂ (SEQ ID NO: 72)

Ala-Val-Ser-Glu-His-Gln-Leu-Leu-His-Asp-Lys-Gly-Lys-Ser-lle-Gln-Asp-(Lys-ArgArg-Arg-Asp)-Leu-Leu-Glu-Lys-Leu-His-Thr-Ala amid

5). Ring Amid MBHA živica (0,5 mmol) sa vnesie do reakčnej nádoby, ktorá sa potom napojí na Proteín Technologies PS3 Automate Peptide syntezátor. Technikou Fmoc-SPPS sa pridajú postupne nasledujúce aminokyseliny: Fmoc-Ala-OH, FmocThr(tBu)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, FmocGlu(OtBu)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Glu(OtBu)OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Asp(Oalyl)-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Lys(Aloc)-OH, Fmoc-Asp(OtBu)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-lle-OH. Ako bolo uvedené vyššie, peptid naviazaný na živicu sa potom odstráni z prístroja na Pd-sprostredkované odstránenie chrániacich skupín vedľajších reťazcov Lys(Aloc) a Asp(Oalyl) zvyškov a na následnú intramolekulárnu cyklizáciu medzi vedľajšími reťazcami. Po opísanom spracovaní sa peptid naviazaný na živicu obsahujúci amid vráti do prístroja na dokončenie syntézy a postupne sa pridajú nasledujúce aminokyseliny: Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, FmocGly-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Asp(OtBu)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-LeuOH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Val-OH a Fmoc-Ala-OH. Peptid naviazaný na živicu sa potom odoberie z prístroja a N-koncová Fmoc chrániaca skupina sa odstráni počas 5 minútového pôsobenia 20 % roztoku piperidínu/DMF (20 ml). Surový peptid sa odštiepi od živice a s použitím 40 ml TFA obsahujúcich vodu (2,0 ml), tioanizol (2,0 ml), fenol (3,0 g) a etánditiol (1,0 ml) sa vykoná odstránenie chrániacich skupín a vyzrážanie sa uskutoční pridaním štiepiacej zmesi do chladného tercbutylmetyléteru.

Surový peptid sa potom prečistí kvapalinovou chromatografiou s reverznou fázou pri zisku 31 mg konečného peptidu vo forme biele pevnej substancie. IS-MS: 3986 (M+). Aminokyselinová analýza: Asp/Asn: 2,60 (3); Thr: 1,26 (1); Ser. 1,61 (2); Glu/GIn: 5,02 (5); Gly: 0,96 (1); Ala: 2,37 (2); Val: 0,96 (1); lle: 0,81 (1); Leu: 7,71 (7); Lys: 5,17 (5); His: 3,17 (3); Arg: 2,37 (3).

Príklad 79 bicyklo(K¹³-D¹⁷,K¹⁸-D²²)[A¹,Nle⁸,D¹⁷'²²,K¹⁸,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 73)

Ala-Val-Ser-Glu-lle-Gln-Leu-Nle-His-Asn-Leu-Gly-(Lys-His-Leu-Asn-Asp)-(LysGlu-Arg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-GIn-Asp-Val amid

Časť skôr pripraveného peptidu naviazaného na živicu ukončeného D^-K¹⁸amidovým mostíkom (približne 0,5 mmol) sa vráti do automatizovaného peptidového syntezátora a N-koncová Fmoc chrániaca skupina sa odstráni vyššie opísaným spôsobom. Postupne sa s použitím štandardných HBTU väzbových podmienok pridajú nasledujúce aminokyselinové zvyšky: Fmoc-Asp(Oalyl)-OH, Fmoc-Asn(Trt)OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-His(Trt)-OH a Fmoc-Lys(Aloc)-OH. Živica sa odoberie z prístroja a postupne sa premyje DMF (100 ml), THF (100 ml) a dietyléterom (100 ml) a potom sa suší vzduchom. Alylová a Aloc chrániace skupiny sa odstránia pri

Pd-katalýze, ako bolo opísané vyššie, a cyklizácia medzi zvyškami Asp¹⁷ a K¹³ sa vykoná v dvoch cykloch s použitím HBTU (284 mg), HOBt (101 mg) a NMM (165 ml) v DMF (20 ml). Živica sa potom postupne premyje DMF (100 ml), THF (100 ml) a dietyléterom (100 ml). Živica sa potom vráti do prístroja na dokončenie syntézy a postupne sa pridajú nasledujúce aminokyseliny: Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-NIe-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gln(Trt)OH, Fmoc-lle-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Val-OH a FmocAla-OH. N-koncová Fmoc chrániaca skupina sa odstráni počas 5 minútového pôsobenia 20 % roztoku piperidínu/DMF (17 ml). Peptid naviazaný na živicu sa odoberie z prístroja a postupne sa premyje DMF (100 ml), THF (100 ml) a dietyléterom (100 ml). Živica sušená vzduchom sa suspenduje v 40 ml TFA obsahujúcich vodu (2,0 ml), tioanizol (2,0 ml), fenol (3,0 g) a etánditiol (1,0 ml). Po dvoch hodinách sa TFA roztok filtruje do ŕerc-butylmetyléteru (160 ml) pri 0 °C, čo spôsobí vyzrážanie surového peptidu. Peptidová zmes sa centrifuguje pri 2500 rpm počas 5 minút a dekantuje sa. Surová, biela pevná substancia sa resuspenduje v dietyléteri (120 ml), centrifuguje sa a dekantuje sa. Tento premývací postup sa opakuje štyrikrát a výsledný peptid sa suší vo vákuu, rozpustí sa vo vode obsahujúcej 0,1 % TFA (100 ml) a lyofilizuje sa.

Surový peptid sa potom prečistí vysoko účinnou kvapalinovou chromatografiou s reverznou fázou, ako bola opísaná vyššie, pri zisku 13 mg konečného peptidu vo forme bielej pevnej substancie. IS-MS: 3643 (M+). Aminokyselinová analýza: Asp/Asn: 4,83 (5); Ser: 0,97 (1); Glu/GIn: 3,98 (4); Gly: 0,97 (1); Ala: 0,96 (1); Val: 3,14 (3); lle: 0,88 (1); Leu: 6,47 (6); Nie: 0,80 (1); Lys: 2,91 (3); His: 2,03 (2); Arg: 2,07 (2); Trp: nie je stanovené (1). Pozície amidových mostíkov sú potvrdené Edmanovou degradáciou.

Príklad 80 bicykloíK^-D^.K^-D³⁰) [A’.NIe^K^D^L^JhPTHO-SIJNHz (SEQ ID NO: 74)

Ala-Val-Ser-Glu-lle-Gln-Leu-Nle-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-(Lys-GluArg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-(Lys-Leu-Leu-Gln-Asp)-Val amid

Titulná zlúčenina sa pripraví spôsobom analogickým k vyššie uvedeným spôsobom. Rink Amide MBHA živica (Nová Biochem, La Jolla, Ca, USA) (0,80 g, 0,45 mmol) sa vnesie do reakčnej nádoby a nechá sa 10 minút napučiavať v DMF (10 ml). Postupne sa s použitím štandardných HBTU väzbových podmienok pridajú nasledujúce aminokyselinové zvyšky: Fmoc-Val-OH, Fmoc-Asp(Oalyl)-OH, FmocGln(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Lys(Aloc)-OH, Fmoc-Arg(Pmc)OH, Fmoc-Leu-OH a Fmoc-Trp(Boc)-OH. Živica sa odoberie z prístroja a postupne sa premyje DMF (100 ml), THF (100 ml) a dietyléterom (100 ml) a potom sa suší vzduchom. Alylová a Aloc chrániace skupiny sa odstránia pri Pd-katalýze, ako bola opísaná vyššie, a cykiizácia medzi zvyškami Asp³⁰ a K²⁶ sa vykoná v dvoch cykloch s použitím HBTU (284 mg), HOBt (101 mg) a NMM (165 ml) v DMF (20 ml). Živica sa potom postupne premyje DMF (100 ml), THF (100 ml) a dietyléterom (100 ml). Živica sa potom vráti do prístroja na dokončenie syntézy a postupne sa pridajú nasledujúce aminokyseliny: Fmoc-Asp(Oalyl)-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, FmocGlu(OtBu)-OH, Fmoc-Lys(Aloc)-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, FmocLeu-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-NIe-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gln(Trt)OH, Fmoc-lle-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Val-OH a FmocAla-OH. Živica sa odoberie z prístroja a postupne sa premyje DMF (100 ml), THF (100 ml) a dietyléterom (100 ml) a potom sa suší vzduchom. Alylová a Aloc chrániace skupiny sa odstránia pri Pd-katalýze, ako bola opísaná vyššie, a cykiizácia medzi zvyškami Asp²² a K¹⁸ sa vykoná v dvoch cykloch s použitím HBTU (284 mg), HOBt (101 mg) a NMM (165 ml) v DMF (20 ml). Živica sa potom postupne premyje DMF (100 ml), THF (100 ml) a dietyléterom (100 ml). N-koncová Fmoc chrániaca skupina sa odstráni počas 5 minútového pôsobenia 20 % roztoku piperidínu/DMF (17 ml). Peptid naviazaný na živicu sa postupne premyje DMF (100 ml), THF (100 ml) a dietyléterom (100 ml). Živica sušená vzduchom sa suspenduje v 40 ml TFA obsahujúcich vodu (2,0 ml), tioanizol (2,0 ml), fenol (3,0 g) a etánditiol (1,0 ml). Po dvoch hodinách sa TFA roztok filtruje do ŕerc-butylmetyléteru (160 ml), pri 0 °C, čo spôsobí vyzrážanie surového peptidu. Peptidová zmes sa centrifuguje pri 2500 rpm počas 5 minút a dekantuje sa. Surová, biela pevná substancia sa resuspenduje v dietyléteri (120 ml), centrifuguje sa a dekantuje sa. Tento premývací postup sa opakuje štyrikrát a výsledný peptid sa suší vo vákuu, rozpustí sa vo vode obsahujúcej 0,1 % TFA (100 ml) a lyofilizuje sa.

Surový peptid sa potom prečistí vysokoúčinnou kvapalinovou chromatografiou s reverznou fázou, ako bola opísaná vyššie, pri zisku 90 mg konečného peptidu vo forme bielej pevnej substancie. IS-MS: 3615 (M+). Aminokyselinová analýza: Asp/Asn: 3,79 (4); Ser: 1,84 (2); Glu/GIn: 3,84 (4); Gly: 1,19 (1); Ala: 1,00 (1); Val: 2,82 (3); Ile: 0,89 (1); Leu: 6,16 (6); Nie: 0,74 (1); Lys: 2,73 (3); His: 1,94 (2); Arg: 1,93 (2); Trp: nie je stanovené (1). Pozície amidových mostíkov sú potvrdené Edmanovou degradáciou.

Príklad 81 bicyklo(K¹³-D¹⁷,K¹⁸-D²²)[A¹,Nle⁸,D¹⁷'²²,K¹⁸, L²⁷]hPTH(1-34)NH₂ (SEQ ID NO: 75)

Ala-Val-Ser-Glu-lle-Gln-Leu-Nle-His-Asn-Leu-Gly-(Lys-His-Leu-Asn-Asp)-(LysGlu-Arg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Val-His-Asn-Phe amid

Časť skôr pripraveného peptidu naviazaného na živicu začínajúceho Phe³⁴ a ukončeného D^-K¹⁸ amidovým mostíkom (0,46 g, približne 1,0 mmol) sa vráti do automatizovaného peptidového syntezátora a N-koncová Fmoc chrániaca skupina sa odstráni vyššie opísaným spôsobom. Postupne sa s použitím štandardných HBTU väzbových podmienok pridajú nasledujúce aminokyselinové zvyšky: FmocAsp(Oalyl)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-His(Trt)-OH a FmocLys(Aloc)-OH. Živica sa odoberie z prístroja a postupne sa premyje DMF (100 ml), THF (100 ml) a dietyléterom (100 ml) a potom sa suší vzduchom. Alylová a Aloc chrániace skupiny sa odstránia spôsobom opísaným vyššie a cyklizácia medzi zvyškami Lys¹³ a Asp¹⁷ sa vykoná v dvoch cykloch s použitím HBTU, HOBt a NMM. Po premytí a sušení sa živica vráti do prístroja na dokončenie syntézy a postupne sa pridajú nasledujúce aminokyseliny v uvedenom poradí: Fmoc-Gly-OH, Fmoc-LeuOH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-NIe-OH, Fmoc-Leu-OH, FmocGin(Trt)-OH, Fmoc-lle-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Val-OH a Fmoc-Ala-OH. Surový peptid sa odštiepi zo živice a chrániaca skupina sa odstráni s použitím 40 ml TFA obsahujúcich vodu (2,0 ml), tioanizol (2,0 ml), fenol (3,0 g) a etánditiol (1,0 ml) a vyzráža sa pridaním štepiacej zmesi do chladného tercbutyImetyléteru. Surový peptid sa potom prečistí kvapalinovou chromatografiou s reverznou fázou.

Príklad 82 bicyklo(K¹³-D¹⁷,K²⁶-D³⁰)[A¹INle⁸'¹⁸,D¹⁷,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 76)

Ala-Val-Ser-Glu-lle-Gln-Leu-Nle-His-Asn-Leu-Gly-(Lys-His-Leu-Asn-Asp)-NleGlu-Arg-Val-Glu-Trp-Leu-Arg-(Lys-Leu-Leu-Gln-Asp)-Val amid

Titulná zlúčenina sa pripraví spôsobom analogickým k vyššie uvedeným spôsobom. Rink Amide MBHA živica (Nová Biochem, La Jolla, CA, USA) (0,80 g, 0,45 mmol) sa vnesie do reakčnej nádoby a nechá sa 10 minút napučiavať v DMF (10 ml). Postupne sa s použitím štandardných HBTU väzbových podmienok pridajú nasledujúce aminokyselinová zvyšky: Fmoc-Val-OH, Fmoc-Asp(Oalyl)-OH, FmocGln(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Lys(Oalyl)-OH, Fmoc-Arg(Pmc)OH, Fmoc-Leu-OH a Fmoc-Trp(Boc)-OH. Živica sa odoberie z prístroja a postupne sa premyje DMF (100 ml), THF (100 ml) a dietyléterom (100 mi) a potom sa suší vzduchom. Alylová a Aloc chrániace skupiny sa odstránia pri Pd-katalýze, ako bola opísaná vyššie a cyklizácia medzi zvyškami Asp³⁰ a K²⁶ sa vykoná v dvoch cykloch s použitím HBTU (284 mg), HOBt (101 mg) a NMM (165 ml) v DMF (20 ml). Živica sa potom postupne premyje DMF (100 ml), THF (100 ml) a dietyléterom (100 ml). Živica sa potom vráti do prístroja na dokončenie syntézy a postupne sa pridajú nasledujúce aminokyseliny: Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, FmocGlu(OtBu)-OH, Fmoc-NIe-OH, Fmoc-Asp(Oalyl)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-LeuOH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Leu-OH, FmocAsn(Trt)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-NIe-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-lle-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Val-OH a Fmoc-AlaOH. Živica sa odoberie z prístroja a postupne sa prepláchne DMF (100 ml), THF (100 ml) a dietyléterom (100 ml) a potom sa suší vzduchom. Alylová a Aloc chrániace skupiny sa znovu odstránia pri Pd-katalýze, ako bolo opísané vyššie, a cyklizácia medzi zvyškami Asp²² a K¹⁸ sa vykoná v dvoch cykloch s použitím HBTU (284 mg), HOBt (101 mg) a NMM (165 ml) v DMF (20 ml). Živica sa potom postupne premyje DMF (100 ml), THF (100 ml) a dietyléterom (100 ml). N-koncová Fmoc chrániaca skupina sa odstráni počas 5 minútového pôsobenia 20 % roztoku piperidínu/DMF (17 ml). Peptid naviazaný na živicu sa postupne premyje DMF (100 ml), THF (100 ml) a dietyléterom (100 ml). Živica sušená vzduchom sa suspenduje v ml TFA obsahujúcich vodu (2,0 ml), tioanizol (2,0 ml), fenol (3,0 g) a etánditiol (1,0 ml). Po dvoch hodinách sa TFA roztok filtruje do ŕerc-butylmetyléteru (120 ml) pri 0 °C, čo spôsobí vyzrážanie surového peptidu. Peptidová zmes sa centrifuguje pri 2500 rpm počas 5 minút a dekantuje sa. Surová, biela pevná substancia sa resuspenduje v dietyléteri (120 ml), centrifuguje sa a dekantuje sa. Tento premývací postup sa opakuje štyrikrát a výsledný peptid sa suší vo vákuu, rozpustí sa vo vode obsahujúcej 0,1 % TFA (100 ml) a lyofilizuje sa.

Surový peptid sa potom prečistí vysokoúčinnou kvapalinovou chromatografiou s reverznou fázou, ako bolo opísané vyššie, pri zisku 22 mg konečného peptidu vo forme bielej pevnej substancie. IS-MS: 3642 (M+). Aminokyselinová analýza: Asp/Asn: 4,00 (4); Ser: 0,99 (1); Glu/GIn: 4,95 (5); Gly: 0,96 (1); Ala: 0,95 (1); Val: 3,05 (3); lle: 0,92 (1); Leu: 6,40 (6); Nie: 1,78 (2); Lys: 1,81 (2); His: 2,17 (2); Arg: 2,03 (2); Trp: nie je stanovené (1). Pozície amidových mostíkov sú potvrdené Edmanovou degradáciou.

Príklad 83 cyklo(K¹⁸-D²²)[K¹⁸,D²²]hPTHrP(7-34)NH₂ (SEQ ID NO: 77)

Leu-Leu-His-Asp-Lys-Gly-Lys-Ser-lle-Gln-Asp-(Lys-Arg-Arg-Arg-Asp)-Phe-LeuHis-His-Leu-lle-Ala-Glu-lle-His-Thr-Ala amid

Peptid sa pripraví spôsobom analogickým k spôsobu opísanému vyššie (Spôsob B). Rink Amid MBHA živica (0,5 mmol) sa vnesie o reakčnej nádoby, ktorá sa potom napojí na Protein Technologies PS3 Automate Peptide syntezátor. Technikou FmocSPPS sa pridajú postupne nasledujúce aminokyseliny: Fmoc-Ala-OH, FmocThr(tBu)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-lle-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-lle-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Phe-OH, Fmoc-Asp(Oalyl)-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Lys(Aloc)-OH, Fmoc-Asp(OtBu)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH a Fmoc-lle-OH. Ako bolo uvedené vyššie, peptid naviazaný na živicu sa potom odstráni z prístroja na Pd-sprostredkované odstránenie chrániacich skupín vedľajších reťazcov Lys(Aloc) a Asp(Oalyl) zvyškov a na následnú intramolekulárnu cyklizáciu medzi vedľajšími reťazcami. Po opísanom spracovaní sa peptid naviazaný na živicu obsahujúci amid vráti do prístroja na dokončenie syntézy a postupne sa pridajú nasledujúce aminokyseliny: Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, FmocGly-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Asp(OtBu)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-LeuOH a Fmoc-Leu-OH. Surový peptid sa odštiepi zo živice a chrániace skupiny sa odstránia s použitím 40 ml TFA obsahujúcich vodu (2,0 ml), tioanizol (2,0 ml), fenol (3,0 g) a etánditiol (1,0 ml) a vyzráža sa pridaním štepiacej zmesi do chladného tercbutylmetyléteru. Surový peptid sa potom prečistí kvapalinovou chromatografiou s reverznou fázou.

Príklad 84 bicyklo(K¹³-D¹⁷,K¹⁸-D²²)[Nle⁸,K¹³,D¹⁷'²²,L²⁷]hPTH(7-34)NH₂ (SEQ ID NO: 78)

Leu-Nle-His-Asn-Leu-Gly-(Lys-His-Leu-Asn-Asp)-(Lys-Glu-Arg-Val-Asp)-Trp-LeuArg-Lys-Leu-Leu-GIn-Asp-Val-His-Asn-Phe amid

Časť peptidu naviazaného na živicu ukončeného Lys^-Asp²² amidovým mostíkom pripraveného v príklade 23 sa vráti do automatizovaného peptidového syntezátora a N-koncová Fmoc chrániaca skupina sa odstráni vyššie opísaným spôsobom. Postupne sa s použitím štandardných HBTU väzbových podmienok pridajú nasledujúce aminokyselinové zvyšky: Fmoc-Asp(Oalyl)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-His(Trt)-OH a Fmoc-Lys(Aloc)-OH. Živica sa odoberie z prístroja a postupne sa premyje DMF (100 ml), THF (100 ml) a dietyléterom (100 ml) a potom sa suší vzduchom. Alylová a Aloc chrániace skupiny sa odstránia spôsobom opísaným vyššie a cyklizácia medzi zvyškami Lys¹³ a Asp¹⁷ sa vykoná v dvoch cykloch s použitím HBTU, HOBt a NMM. Po premytí a sušení sa živica vráti do prístroja na dokončenie syntézy a postupne sa pridajú: Fmoc-Gly-OH, Fmoc-LeuOH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-NIe-OH, Fmoc-Leu-OH. Surový peptid sa odštiepi zo živice a chrániace skupiny sa odstránia s použitím 40 ml TFA obsahujúcich vodu (2,0 ml), tioanizol (2,0 ml), fenol (3,0 g) a etánditiol (1,0 ml) a vyzráža sa pridaním štepiacej zmesi do chladného ŕerc-butylmetyléteru. Surový peptid sa potom prečistí kvapalinovou chromatografiou s reverznou fázou.

Príklad 85 bicyklo(K¹⁸-D²²,K²⁶-D³⁰)[Nle^e,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(7-34)NH₂ (SEQ ID NO: 79)

Leu-Nle-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-(Lys-Glu-Arg-Val-Asp)-Trp-LeuArg-(Lys-Leu-Leu-Gln-Asp)-Val-His-Asn-Phe amid

Peptid sa pripraví spôsobom analogickým k spôsobu opísanému vyššie. Rink Amid MBHA živica (0,75 g, 0,41 mmol) sa vnesie do reakčnej nádoby, nechá sa 10 minút napučiavať v DMF (10 ml). Postupne sa s použitím štandardných HBTU väzbových podmienok pridajú nasledujúce aminokyselinové zvyšky: Fmoc-Phe-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Asp(Oalyl)-OH, FmocGln(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH a Fmoc-Lys(Aloc)-OH. Živica sa odoberie z prístroja a postupne sa premyje DMF (100 ml), THF (100 ml) a dietyléterom (100 ml) a potom sa suší vzduchom. Alylová a Aloc chrániace skupiny sa odstránia spôsobom opísaným vyššie a cyklizácia medzi zvyškami Lys²⁶ a Asp³⁰sa vykoná v dvoch cykloch s použitím HBTU, HOBt a NMM. Po prepláchnutí a sušení sa živica vráti do prístroja na dokončenie syntézy a postupne sa pridajú nasledujúce aminokyseliny v uvedenom poradí: Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Trp(Boc)-OH, Fmoc-Asp(Oalyl)-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH a Fmoc-Lys(Aloc)-OH. Živica sa odoberie z prístroja a postupne sa premyje DMF (100 ml), THF (100 ml) a dietyléterom (100 ml) a potom sa suší vzduchom. Alylová a Aloc chrániace skupiny sa odstránia spôsobom opísaným vyššie a cyklizácia medzi zvyškami Lys¹⁸ a Asp²² sa vykoná v dvoch cykloch s použitím HBTU, HOBt a NMM. Po premytí a sušení sa živica vráti do prístroja na dokončenie syntézy a postupne sa pridajú nasledujúce aminokyseliny v uvedenom poradí: Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, FmocHis(Trt)-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-NIe-OH, Fmoc-Leu-OH. Surový peptid sa odštiepi zo živice a chrániace skupiny sa odstránia s použitím 40 ml TFA obsahujúcich vodu (2,0 ml), tioanizol (2,0 ml), fenol (3,0 g) a etánditiol (1,0 ml) a vyzráža sa pridaním štepiacej zmesi do chladného ŕerc-butylmetyléteru. Surový peptid sa potom prečistí kvapalinovou chromatografiou s reverznou fázou.

Príklad 86 tricyklo(K¹³-D¹⁷,K¹⁸-D²²,K²⁶-D³⁰)[A¹,Nle⁸,K¹⁸,D¹⁷’²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 80)

Ala-Val-Ser-Glu-lle-Gln-Leu-Nle-His-Asn-Leu-Gly-(Lys-His-Leu-Asn-Asp)-(LysGlu-Arg-Val-Asp)-Trp-Leu-Arg-(Lys-Leu-Leu-Gln-Asp)-Val amid

Titulná zlúčenina sa pripraví spôsobom analogickým k vyššie uvedeným spôsobom. Rink Amide MBHA živica (Nová Biochem, La Jolla, CA, USA) (0,80 g, 0,45 mmol) sa vnesie do reakčnej nádoby a nechá sa 10 minút napučiavať v DMF (10 ml). Postupne sa s použitím štandardných HBTU väzbových podmienok pridajú nasledujúce aminokyselinové zvyšky: Fmoc-Val-OH, Fmoc-Asp(Oalyl)-OH, FmocGln(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Lys(Aloc)-OH, Fmoc-Arg(Pmc)OH, Fmoc-Leu-OH a Fmoc-Trp(Boc)-OH. Živica sa odoberie z prístroja a postupne sa premyje DMF (100 ml), THF (100 ml) a dietyléterom (100 ml) a potom sa suší vzduchom. Alylová a Aloc chrániace skupiny sa odstránia pri Pd-katalýze, ako bola opísaná vyššie, a cyklizácia medzi zvyškami Asp³⁰ a K²⁶ sa vykoná v dvoch cykloch s použitím HBTU (284 mg), HOBt (101 mg) a NMM (165 ml) v DMF (20 ml). Živica sa potom postupne premyje DMF (100 ml), THF (100 ml) a dietyléterom (100 ml). Živica sa potom vráti do prístroja na dokončenie syntézy a postupne sa pridajú nasledujúce aminokyseliny: Fmoc-Asp(Oalyl)-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, FmocGlu(OtBu)-OH, Fmoc-Lys(Aloc)-OH. Živica sa odoberie z prístroja a postupne sa premyje DMF (100 ml),THF (100 ml) a dietyléterom (100 ml) a potom sa suší vzduchom. Alylová a Aloc chrániace skupiny sa odstránia pri Pd-katalýze, ako bola opísaná vyššie, a cyklizácia medzi zvyškami Asp¹⁸ a K²² sa vykoná v dvoch cykloch s použitím HBTU (284 mg), HOBt (101 mg) a NMM (165 ml) v DMF (20 ml). Živica sa potom postupne premyje DMF (100 ml), THF (100 ml) a dietyléterom (100 ml). Živica sa potom vráti do prístroja na dokončenie syntézy a postupne sa pridajú nasledujúce aminokyseliny: Fmoc-Asp(Oalyl)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, FmocHis(Trt)-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-NIe-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-lle-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Val-OH a Fmoc-Ala-OH. Živica sa následne odoberie z prístroja a postupne sa premyje DMF (100 ml), THF (100 ml) a dietyléterom (100 ml) a potom sa suší vzduchom. Alylová a Aloc chrániace skupiny sa potom odstránia pri Pd-katalýze, ako bolo opísané vyššie a cyklizácia medzi zvyškami Asp¹⁷ a K¹³ sa vykoná v dvoch cykloch s použitím HBTU (284 mg), HOBt (101 mg) a NMM (165 ml) v DMF (20 ml). Živica sa potom postupne premyje DMF (100 ml), THF (100 ml) a dietyléterom (100 ml). N-koncová Fmoc chrániaca skupina sa odstráni počas 5 minútového pôsobenia 20 % roztoku piperidínu/DMF (17 ml). Peptid naviazaný na živicu sa postupne premyje DMF (100 ml), THF (100 ml) a dietyléterom (100 ml). Živica sušená vzduchom sa suspenduje v 40 ml TFA obsahujúcich vodu (2,0 ml), tioanizol (2,0 ml), fenol (3,0 g) a etánditiol (1,0 ml). Po dvoch hodinách sa TFA roztok filtruje do ŕerc-butylmetyléteru (120 ml) pri 0 °C, čo spôsobí vyzrážanie surového peptidu. Peptidová zmes sa centrifuguje pri 2500 rpm počas 5 minút a dekantuje sa. Surová, biela pevná substancia sa resuspenduje v dietyléteri (120 ml), centrifuguje sa a dekantuje sa. Tento premývací postup sa opakuje štyrikrát a výsledný peptid sa suší vo vákuu, rozpustí sa vo vode obsahujúcej 0,1 % TFA (100 ml) a lyofilizuje sa.

Surový peptid sa následne prečistí vysokoúčinnou kvapalinovou chromatografiou s reverznou fázou, ako bola opísaná vyššie, pri zisku 16 mg konečného peptidu vo forme bielej pevnej substancie. ES-MS: 3625 (M+). Aminokyselinová analýza: Asp/Asn: 4,88 (5); Ser: 0,95 (1); Glu/GIn: 4,00 (4); Gly: 1,01 (1); Ala: 0,97 (1); Val: 2,93 (3); lle: 0,93 (1); Leu: 6,41 (6); Nie: 0,84 (1); Lys: 2,73 (3); His: 2,28 (2); Arg: 2,07 (2); Trp: nie je stanovené (1).

Farmaceutické prostriedky

Peptidové zlúčeniny vzorca I majú výhodnú farmakologickú aktivitu a preto môžu byť obsiahnuté vo farmaceutických prostriedkoch a môžu byť použité na liečbu pacientov trpiacich určitými chorobami.

Presnejšie, niektoré peptidové zlúčeniny podľa predkladaného vynálezu sa viažu na receptory pre PTH a stimulujú aktivitu adenylátcyklázy. Zvýšená aktivita adenylátcyklázy je spojená s rastom kostí a preto sú peptidové zlúčeniny podľa predkladaného vynálezu napríklad užitočné na liečbu ochorení ako je hypokalcémia, osteoporóza, osteopénia a ochorenia spojené s osteoporózou a osteopéniou, ako je hyperparatyroidizmus, hypoparatyroidizmus a Cushingov syndróm, glukokortikoidmi a imunosupresívami indukovaná osteopénia, a zlomeniny kostí a hojenie kostí.

Ďalej, niektoré peptidové zlúčeniny podľa predkladaného vynálezu sa viažu na receptory pre PTH, ale nestimulujú aktivitu adenylylcyklázy. Takéto peptidové zlúčeniny sú použiteľné na liečbu ochorení charakterizovaných nadbytkom PTH, ako je napríklad hyperparatyroidizmus a hyperkalcemická kríza pri hyperparatyroidizme, hyperkalcémia pri malignitách, renálne zlyhanie a hypertenzia.

Jedným uskutočnením terapeutických spôsobov podľa predkladaného vynálezu je liečba osteoporózy.

Termín „liečba“ zahŕňa profylaxiu aj terapiu existujúceho ochorenia.

Predkladaný vynález tiež obsahuje farmaceutické prostriedky, ktoré obsahujú peptidové zlúčeniny podľa predkladaného vynálezu spolu s jedným alebo viacerými netoxickými farmaceutický prijateľnými nosičmi. Farmaceutické prostriedky podľa predkladaného vynálezu môžu byť podávané ľuďom alebo zvieratám orálne, intrapulmonálne, transmukozálne, intraokulárne, rektálne, parenterálne, intracisternálne, intravagináfne, intraperitoneálne, lokálne (vo forme zásypov, mastí alebo kvapiek), transdermálne, ionoforeticky, bukálne, alebo formou orálneho alebo nazálneho spreja. Intrapulmonálne a subkutánne podanie je výhodným spôsobom podávania peptidových zlúčenín podľa predkladaného vynálezu.

Termín „parenterálne podanie“, ako je tu použitý, označuje intravenóznu, intramuskulárnu, intraperitoneálnu, intrasternálnu, subkutánnu a intraartikulárnu injekciu a infúziu.

Farmaceutické prostriedky podľa predkladaného vynálezu na parenterálnu injekciu obsahujú farmaceutický prijateľné sterilné vodné alebo nevodné roztoky, disperzie, suspenzie alebo emulzie, ďalej sterilné prášky na rekonštitúciu na sterilné injekčné roztoky alebo disperzie bezprostredne pred aplikáciou. Príklady takýchto vodných a nevodných nosičov, riedidiel, rozpúšťadiel alebo vehikúl sú voda, etanol, polyoly (ako je glycerol, propylénglykol, polyetylénglykol a pod.) a ich zmesi, rastlinné oleje (ako je olivový olej) a injektovateľné organické estery ako je etyloleát. Vhodná tekutosť môže byť udržiavaná napríklad pomocou poťahových materiálov ako je lecitín, zachovaním požadovanej veľkosti častíc v prípade disperzie a pomocou surfaktantov.

Tieto prostriedky môžu tiež obsahovať pomocné činidlá ako sú konzervačné činidlá, zmáčadlá, emulgačné činidlá a dispergačné činidlá. Prevencia rastu mikroorganizmu môže byť uskutočnené obsiahnutím rôznych antibakteriálnych a antimykotických činidiel, ako je napríklad parabén, chlórbutanol, kyselina fenolsorbová a pod. Môže byť tiež žiaduce použitie činidiel ovplyvňujúcich izotonicitu ako sú cukry, chlorid sodný a pod. Predĺžená absorpcia injekčnej farmaceutickej formy môže byť sprostredkovaná činidlami predlžujúcimi absorpciu, ako je napríklad monosteraran hlinitý alebo želatína.

V niektorých prípadoch je na predĺženie účinku lieku žiaduce spomalenie absorpcie lieku z miesta podkožnej alebo vnútrosvalovej injekcie. Tohto spomalenia môže byť dosiahnuté pomocou kvapalnej suspenzie kryštalického alebo amorfného materiálu s nízkou rozpustnosťou vo vode. Takáto suspenzia môže obsahovať ďalšie prísady, ako je trehalóza. Rýchlosť absorpcie lieku potom závisí na rýchlosti jeho rozpúšťania, ktoré závisí od veľkosti kryštálov a kryštalickej formy. Alternatívne je spomalenej absorpcie parenterálne podaného lieku dosiahnuté rozpustením alebo suspendovaním lieku v olejovom nosiči.

Injekčné depotné formy môžu byť pripravené výrobou mikroenkapsulačných matríc lieku v biodegradovateľných polyméroch, ako je polylaktidpolyglykolid. Rýchlosť uvoľňovania lieku môže byť kontrolovaná pomerom lieku a polyméru a charakterom použitého polyméru. Príklady iných biodegradovateľných polymérov zahŕňajú poly(ortoestery) a poly(anhydridy). Depotné injekčné prostriedky môžu byť tiež pripravené vložením lieku do lipozómov alebo mikroemulzií, ktoré sú kompatibilné s tkanivami.

Injekčné prostriedky môžu byť sterilizované, napríklad filtráciou cez antibakteriálny filter, alebo pomocou sterilizačného činidla vo forme sterilných pevných prostriedkov, ktoré môžu byť rozpustené alebo dispergované v sterilnej vode alebo v inom sterilnom injekčnom médiu bezprostredne pred použitím.

Medzi pevné dávkové formy na orálnu aplikáciu patria kapsuly, tablety, pilulky, prášky a granule. V takýchto pevných dávkových formách je aktívna peptidová zlúčenina zmiešaná s aspoň jednou inertnou, farmaceutický prijateľnou prísadou alebo nosičom ako je napríklad citrát sodný alebo fosforečnan vápenatý a/alebo a) plnivami ako sú škroby, laktóza, sacharóza, glukóza, manitol a kyselina kremičitá, b) spojivami ako je napríklad karboxymetylcelulóza, algináty, želatína, polyvinylpyrolidón, sacharóza a arabská guma, c) zvlhčovacími činidlami ako je glycerol, d) činidlami podporujúcimi rozpadavosť ako je agar-agar, uhličitan vápenatý, zemiakový alebo tapiokový škrob, kyselina alginová, niektoré kremičitany a uhličitan sodný, e) činidlami spomaľujúcimi rozpúšťanie ako je parafín, f) činidlami urýchľujúcimi absorpciu ako sú kvartérne amóniové zlúčeniny, d) zmáčadlami ako je napríklad cetylalkohol a glycerol monostearát, h) absorbenty ako je kaolín a bentonitový íl a i) mastivami ako je mastenec, stearan vápenatý, stearan horečnatý, pevné polyetylénglykoly, laurylsíran sodný a ich zmesi. V prípade kapsúl, tabliet a piluliek môže dávková forma obsahovať aj pufrovacie činidlá.

Pevné dávkové formy obdobného typu môžu byť tiež použité ako náplne v kapsuliach z mäkkej a tuhej želatíny, s použitím takých prísad ako je laktóza alebo mliečny cukor, rovnako ako polyetylénglykoly s vysokou molekulovou hmotnosťou a podobne.

Pevné dávkové formy tabliet, dražé, kapsúl, piluliek a granúl môžu byť pripravené s poťahom, ako je enterálny poťah a iné poťahy dobre známe v odbore výroby farmaceutických prostriedkov. Takéto poťahy môžu voliteľne obsahovať činidlá nepriepustné pre svetlo a môžu mať aj také zloženie, že uvoľňujú aktívnu zložku iba alebo prednostne v istej časti črevného traktu, voliteľne kontrolovaným spôsobom. Príklady takýchto poťahových prostriedkov sú polymérne substancie a vosky.

Aktívne peptidové zlúčeniny môžu byť pripravované aj v mikroenkapsulovej forme, ak je to vhodné, tak s jednou alebo s niekoľkými z vyššie uvedených prísad.

Medzi kvapalné dávkové formy na orálne podávanie patria farmaceutický prijateľné emulzie, roztoky, suspenzie, sirupy a elixíry. Okrem aktívnych zlúčenín môžu kvapalné dávkové formy obsahovať inertné rozpúšťadlá bežne používané v odbore, ako je napríklad voda a iné rozpúšťadlá, solubilizačné činidlá a emulgačné činidlá ako je etylalkohol, izopropylalkohol, etylkarbonát, etylacetát, benzylalkohol, benzylbenzoát, propylénglykol, 1,3-butylénglykol, dimetylformamid, oleje (najmä bavlníkový, podzemnicový, kukuričný, klíčkový, olivový, ricínový a sezamový olej), glycerol, tetrahydrofurfurylalkohol, polyetylénglykoly a sorbitanové estery mastných kyselín a ich zmesi.

Okrem inertných rozpúšťadiel môžu orálne prostriedky obsahovať aj pomocné činidlá ako sú zmáčadlá, emulgačné činidlá a suspendačné činidlá, sladidlá, ochucovadlá a činidlá upravujúce vôňu.

Suspenzie môžu okrem aktívnych zlúčenín obsahovať suspendačné činidlá ako sú napríklad etoxylované izostearylalkoholy, sorbitolové a sorbitanové estery polyoxyetylénu, mikrokryštalická celulóza, metahydroxid hlinitý, bentonit, agar-agar a tragant a ich zmesi.

Prostriedky na rektálnu alebo vaginálnu aplikáciu sú výhodne čapíky, ktoré môžu byť pripravené zmiešaním peptidovej zlúčeniny podľa predkladaného vynálezu s vhodnými nedráždivými prísadami alebo nosičmi ako je kakaové maslo, polyetylénglykol alebo vosk na čapíky, ktoré sú pri laboratórnej teplote v pevnej forme, ale kvapalné pri telesnej teplote, a preto sa topia v rekte alebo vagíne a uvoľňujú aktívnu peptidovú zlúčeninu.

Na bukálnu alebo sublinguálnu aplikáciu sú zvyčajne použité orálne dávkové formy, ako sú pastilky, tablety alebo kapsuly, ako bolo opísané vyššie. Alternatívne môže byť prostriedok aplikovaný na sliznicu v dutine ústnej s adhezivom ako je hydroxypropylcelulóza, ako je opísané v U. S. patente č. 4940587, ktorý je tu uvedený ako odkaz. Tento prostriedok umožňuje kontrolované uvoľňovanie lieku do dutiny ústnej a jeho vstrebanie bukálnou sliznicou.

Zlúčeniny podľa predkladaného vynálezu môžu byť podávané aj vo forme lipozómov. Ako je v odbore známe, lipozómy sú všeobecne odvodené od fosfolipidov a iných lipidových substancií. Lipozómy sú tvorené mono- alebo multivrstvovými hydratovanými kvapalnými kryštálmi, ktoré sú dispergované vo vodnom médiu. Môže byť použitý akýkoľvek netoxický, fyziologicky prijateľný a

100 metabolizovaný lipid schopný tvorby lipozómov. Prostriedok podľa predkladaného vynálezu vo forme lipozómov môže obsahovať okrem peptidovej zlúčeniny podľa predkladaného vynálezu stabilizačné činidlá, konzervačné činidlá, prísady a podobne. Výhodnými lipidmi sú fosfolipidy a fosfatidylcholíny (lecitíny), tak prirodzené, ako aj syntetické.

Spôsob prípravy lipozómov je známy. Viď napríklad Prescott, Ed., Methods in Celí Biology, zväzok XIV, Academic Press, New York, N. Y. (1976), str. 33 a ďalej.

Medzi dávkové formy pre lokálnu aplikáciu peptidových zlúčenín podľa predkladaného vynálezu patria zásypy, spreje, masti a inhalačné prostriedky. Aktívna peptidová zlúčenina je miešaná v sterilných podmienkach s farmaceutický prijateľným nosičom a akýmikoľvek nutnými konzervačnými činidlami, puframi alebo hnacími plynmi. Oftalmologické prostriedky, očné masti, prášky a roztoky, tiež spadajú do rozsahu predkladaného vynálezu.

Peptidové zlúčeniny podľa predkladaného vynálezu môžu byť podané transdermálne pomocou ionoforézy. Všeobecne označuje termín ionoforéza prenos iónových roztokov cez biologické membrány pôsobením elektrického poľa. lonoforetické podanie liekov prekonáva vplyv efektu „prvého priechodu“ gastrointestinálnym traktom a pečeňou, ktorý spôsobuje relatívnu neúčinnosť enterálnych spôsobov podania peptidov.

Všeobecne obsahuje ionoforetický prístroj aspoň dve elektródy, zdroj elektrickej energie a aspoň jeden zásobník, ktorý obsahuje peptidovú zlúčeninu, ktorá má byť podaná. Zásobníkom môže byť akýkoľvek materiál vhodný na vytvorenie kontaktu medzi ionoforetickou jednotkou a kožou. Medzi výhodné materiály patria peny, gély a matrice.

lonoforetickým gélom môže byť karay guma, iné polysacharidové gély alebo obdobné hydrofilné vodné gély, ktoré môžu niesť ióny. Príklady gélov sú polyvinylalkohol, polymetylpyrolidón, metylcelulóza, polyakrylamid, polyhémy, deriváty polyhému a pod. Vybraná matrica by mala byť nedráždivá pre kožu alebo tkanivá pacienta, mala by mať vhodnú vodivosť, aby bol umožnený dobrý elektrický

ΙΟΙ kontakt s kožou alebo tkanivami pacienta a mala by mať schopnosť nosiča pre peptidovú zlúčeninu.

Inými prostriedkami na ionoforetické podávanie peptidových zlúčenín sú náplasti obsahujúce peptidovú zlúčeninu, rovnako ako ionoforetické prostriedky na opakované použitie alebo opakované naplnenie. Ionoforetické podávanie peptidov je opísané v U. S. patente č. 5494679. Ionoforetické podávanie analógov hPTH je opísané vo WO 95/11988-A1.

Iným spôsobom na transdermálnu aplikáciu je bezihlový systém vyvinutý PowderJect Pharmaceuticals (Magdalén Centre, Oxford Science Park, Oxford 0X4 4GA, UK), v ktorom je prúd hélia použitý na aplikáciu liekov cez kožu alebo cez sliznicu dutiny ústnej. Presnejšie, liek vo forme prášku je urýchlený na približne 750 m/s na čas asi 3 ms, čo umožní prienik prášku do alebo okolo buniek kože pacienta a tak do systémovej cirkulácie pacienta.

Intrapulmonálna alebo intranazálna aplikácia peptidovej zlúčeniny je výhodne uskutočnená podávaním aerosólu do bronchiolov alebo do nosných ciest pacienta s použitím inhalačného prostriedku s odmerateľnou dávkou (MDI). Na aplikáciu v MDI je peptidová zlúčenina rozpustená alebo suspendovaná vo fyziologicky prijateľnom hnacom plyne pre aerosól. Hnacie plyny použiteľné v MDI prostriedkoch zahŕňajúcich chlórfluórkarbóny (CFC) ako je CFC-11 (trichlórfluórmetán), CFC-12 (dichlórfluórmetán) a CFC-114 (dichlórtetrafluóretán) a non-chlórfluórkarbóny (NCFC) ako sú halogénové alkány ako je HCFC-123 (1,1,1-trifluór-2, 2-dichlóretán), HCFC-124 (1,1,1,2-tetrafluórchlóretán), HCF-141b, HCF-225, HCF-125, FC-C51-12 (perfluórdimetylcyklobután), DYMEL A (dimetiléter) a DYMEL 152a (1, 1 -difluóretán).

Peptidové zlúčeniny môžu byť rozpustené v hnacom plyne alebo môžu byť vo forme suspenzie kvapiek alebo jemnej disperzie pevných častíc. Aerosólový prostriedok môže ďalej obsahovať spolurozpúšťadlá, surfaktanty, prísady a ochucovadlá.

Surfaktanty sú potrebné na prevenciu agregácie (napríklad vo forme „tvorby koláčov“ alebo kryštalizácie) aktívnej peptidovej zlúčeniny v zásobníku inhalačného

102 prostriedku, na uľahčenie uniformného dávkovania pri podávaní aerosólu, a preto, aby bolo umožnené podanie aerosólu s výhodou respiračnou frakciou (to znamená, aby bola distribúcia veľkosti častíc taká, aby väčšina aplikovanej dávky dosiahla alveolov, v ktorých prebieha absorpcia, a tak, aby bola dosiahnutá vysoká účinnosť intrapulmonálneho podania). Surfaktanty použiteľné na prípravu aerosolov v CFC hnacích plynoch sú v odbore dobre známe. Príklady sú kyselina olejová sorbitan trioleát, a rôzne diglyceridy s dlhým reťazcom a fosfolipidmi.

Halogénované alkanové hnacie plyny ako je HFC-134a a HFC-227ea sú značne menej polárne ako tradičné CFC hnacie plyny a veľa surfaktantov, ktoré sa používajú v známych MDI prostriedkoch, nie sú miešateľné alebo sú nerozpustné a preto sú inkompatibilné s týmito novými non-CFC hnacími plynmi.

U. S. patent č. 5225183 opisuje prostriedok obsahujúci HFC-134a, povrchovo aktívne činidlo a pomocné činidlo alebo rozpúšťadlo s vyššou polaritou ako má HFC134a. Príklady pomocných činidiel a rozpúšťadiel , ktoré majú vyššiu polaritu ako HFC-134a sú alkoholy ako je atanol, izopropanol a propylénglykol; uhlovodíky ako je propán, bután, izobután, pentán, izopentán a neopentán; a iné hnacie plyny ako sú Propellants 11, 12, 114, 113 a 142b. Pomocné činidlo je chránené preto, že umožňuje získanie hnacieho systému porovnávacích vlastností so systémami založenými na použití CFC hnacích plynov a preto umožňuje použitie klasických surfaktantov. Zmesi HFC-134a s inými rozpúšťadlami alebo hnacími plynmi, vrátane dimetyléteru, fluórkarbónov ako je perfluórpropán, perfluórbután a perfluórpentán, a hydrochlorfluórkarbónov ako je HCF-123, sú opísané v U. S. patente č. 5190029.

Iným prístupom na vyriešenie inkompatibility HFC-134a s veľa surfaktantami je použitie iných činidiel s povrchovou aktivitou miesto činidiel tradične používaných v CFC aerosóloch. Použitie polárnych surfaktantov ako je polyetylénglykol, dietylénglykolmonoetyléter, polyoxyetylén (20), sorbitan monooleját, propoxylovaný polyetylénglykol a polyoxyetylén (4) lauryléter je opísané v U. S. patente č. 5492688, ktorý je tu uvedený ako odkaz. U. S. patent č. 5182097, ktorý je tu uvedený ako odkaz, opisuje, že HFC-134a môže byť použitý ako jediný hnací plyn, pokiaľ je ako surfaktant použitá kyselina olejová. U. S. patent č. 5182097, ktorý je tu uvedený ako odkaz, opisuje, že použitie fluórovaných surfaktantov umožňuje použitie HFC-134a ako jediného hnacieho plynu. PCT prihláška č. WO 91/11173 opisuje, že zmesi

103 fluórovaných surfaktantov s bežnými surfaktantami alebo inými pomocnými činidlami, ako sú poloxaméry alebo polyetylénglykoly, umožňuje použitie hydrofluórkarbónových hnacích plynov. Medzi neobvyklé prísady, ktoré boli použité na prípravu aerosólových prostriedkov s halogénovanými alkanovými hnacími pynmi, patria protektívne koloidy, viď PCT prihláška č. WO 95/15151; a tokoferol, viď PCT prihláška č. WO 95/24892. Aerosólové prostriedky vo forme suspenzie sú pripravené zmiešaním akýchkoľvek surfaktantov, prísad a ochucovadiel s peptidovou zlúčeninou, ktorá bola namletá alebo inak spracovaná na požadovanú veľkosť častíc a zmes je následne vložená do vhodného zásobníka alebo liekovky pre aerosól. Po uzatvorení zásobníka sa zavedie hnací plyn pre aerosól a systém sa pretrepe kvôli dokonalému premiešaniu zložiek. V niektorých prípadoch môže byť potrebné namlieť peptidovú zlúčeninu za vlhka v uzatvorenom systéme, napríklad pri teplote a tlaku, ktoré umožňujú namletie peptidovej zlúčeniny v zmesi s kvapalným hnacím plynom pre aerosól. Je zrejmé, že pre každú kombináciu peptidovej zlúčeniny, hnacieho plynu a prísad môže byť ľahko určené ideálne poradie pridávania prísad a podmienky, pri ktorých majú byť miešané.

Okrem inhalačných prostriedkov s odmerateľnou dávkou patria medzi prostriedky na intrapulmonálnu aplikáciu suché prášky a kvapalné roztoky alebo suspenzie vhodné na nebulizáciu. Vodné a nevodné roztoky môžu byť podávané aj inštaláciou do priedušnice.

Suché práškové prostriedky zvyčajne obsahujú peptidovú zlúčeninu v suchej, zvyčajne lyofilizovanej forme, s veľkosťou častíc vo výhodnom rozmedzí na depozíciu v pľúcnych alveolách. Veľkosť častíc je výhodne od 0,5 pm do 5 pm. Častice požadovanej veľkosti môžu byť pripravené rôznymi technikami známymi v odbore, vrátane dýzového mletia, sprejového sušenia, zrážania rozpúšťadlom a podobne. Suché prášky sú podávané pacientom pomocou bežných inhalátorov suchých práškov (DPI), ktoré využívajú nádych pacienta, alebo prostriedkov využívajúcich vonkajší prúd vzduchu na dispergovanie prášku do aerosólu. Peptidové zlúčeniny môžu byť zmiešané s farmaceutický prijateľným suchým práškom na zväčšenie objemu. Vhodnými suchými objemovými činidlami sú sacharóza, laktóza, trehalóza, ľudský sérový albumín (HSA) a glycín. Inými

104 vhodnými suchými objemovými činidlami sú celubióza, dextrány, maltotrióza, pektín, citrát sodný, askorbát sodný, manitol a podobne.

Kvapalné prostriedky obsahujúce peptidové zlúčeniny môžu využívať slabo kyslé (pH 4-6) tlmivé roztoky(pufry) ako je acetát, askorbát a citrát. Tieto pufry môžu pôsobiť ako antioxidačné činidlá alebo môžu byť pridané iné farmaceutický prijateľné antioxidačné činidlá na chránenie akýchkoľvek voľných metionínov pred oxidáciou. Ďalšie činidlá môžu byť pridané na zvýšenie alebo zachovanie chemickej stability, vrátane chelačných činidiel, inhibítorov, proteáz, činidiel ovplyvňujúcich izotonicitu, inertných plynov a podobne.

Vodné roztoky alebo suspenzie peptidovej zlúčeniny môžu byť podávané inštaláciou do priedušnice. Vodný nosič je vybraný zo skupiny zahŕňajúcej vodu, prečistenú vodu alebo vodu zmiešanú s inými prísadami ako sú soli, ióny a prísady opísané vyššie, ktoré sú zvyčajne používané vo vodných systémoch. Kvapalné prostriedky sú vo forme disperzií v roztoku alebo vo forme roztokov v rozpúšťadlách alebo spolurozpúšťadlách ako sú alkoholy alebo glykoly s vodou. Nevodné roztoky zahŕňajú tie alkoholové alebo giykolové systémy, ktoré môžu obsahovať isté množstvo vody, alebo ktoré nie sú zložené z väčšiny vody a o ktorých je v odbore známe, že sú účinnými a bezpečnými nosičmi.

Dávky aktívnych zložiek vo farmaceutických prostriedkoch podľa predkladaného vynálezu sa môžu líšiť, ale sú také, aby bola dosiahnutá aplikácia takého množstva peptidovej zlúčeniny, ktoré je účinné na dosiahnutie požadovanej terapeutickej odpovede u konkrétneho pacienta, s použitím určitého prostriedku a spôsobu aplikácie. Vybraná dávka bude závisieť od aktivity vybranej peptidovej zlúčeniny, spôsobu aplikácie, závažnosti liečeného stavu a od celkového zdravotného stavu a osobnej anamnézy liečeného pacienta. Avšak, v odbore je zvyčajné začatie liečby takými dávkami peptidovej zlúčeniny, ktoré sú nižšie ako dávky potrebné na dosiahnutie požadovaného účinku a tieto dávky postupne zvyšovať, pokiaľ nie je dosiahnutý požadovaný účinok.

Všeobecne sú na subkutánnu aplikáciu výhodné dávky v rozmedzí od približne 0,5 gg do približne 1500 gg, lepšie od približne 0,5 gg do približne 1000 gg a

105 najlepšie od približne 1 pg do približne 200 pg. Pri intrapulmonálnej aplikácii sú výhodné dávky v rozmedzí od približne 0,5 pg do približne 10 000 pg a najvýhodnejšie sú dávky v rozmedzí od približne 1 pg do približne 5000 pg. V najvýhodnejšom aspekte je pacientovi (cicavcovi) podávaná dávka od približne 1 pg do približne 5000 pg peptidovej zlúčeniny podľa predkladaného vynálezu, výhodne subkutánne alebo intrapulmonálne.

Testy in vitro a in vivo

Zlúčeniny podľa predkladaného vynálezu vykazujú výrazné farmakologické aktivity v testoch opísaných v literatúre, ktoré sú prijímané v odbore a o ktorých je známe, že korelujú s farmakologickou aktivitou u ľudí a iných cicavcov. Nasledujúce farmakologické testy in vitro a in vivo sú typické na charakterizovanie zlúčenín podľa predkladaného vynálezu.

1. Stimulácia adenylátcyklázy v ROS 17/2.8 bunkách

Schopnosť zlúčenín podľa predkladaného vynálezu stimulovať adenylátcyklázu (AC) prostredníctvom pôsobenia na receptory pre PTH je meraná s použitím cAMP testu na ROS 17/2.8 bunkách nasledujúcim spôsobom: ROS 17/2.8 bunky sú umiestnené v množstve 1 x 10⁵ buniek/jamka v 24-jamkových platniach. Po 3 - 5 dňoch je kultivačné médium aspirované a je nahradené 0,5 ml cAMP testovacieho pufra, ktorý obsahuje Ham F12 médium, 2 mM IBMX, 1 mg/ml BSA, 35 mM HEPES a 20 pg/ml kyseliny askorbovej. Bunky sú uvedené do rovnováhy v testovacom pufri inkubáciou buniek počas 30 minút pri 37 °C. Následne je cAMP pufor aspirovaný. PTH analóg sa riedi v testovacom pufri na niekoľko koncentrácií a pridá sa do jamiek. Bunky sa potom inkubujú pri 37 °C počas 20 minút. Po inkubácii sa bunky solubilizujú pridaním 1 % Tritónu. Celkový cAMP sa meria s použitím cAMP Scintillation Proximity Assay Screening systému (Amersham, Arlington Heights, IL) a vzorky sa odčítajú s použitím Wallac scintilačného počítača mikrotitračných platní. Uvedené dáta predstavujú priemerné hodnoty cAMP z dvoch vzoriek ± SD. Hodnoty ECso sú definované ako koncentrácia potrebná na vyvolanie polovičnej maximálnej stimulácie a sú vyrátané s použitím 4-parametrovej rovnice.

106

2. Väzba na receptor pre PTH na ROS 17/2.8 bunkách

Kompetícia zlúčenín podľa predkladaného vynálezu s PTH o väzbu na receptor pre PTH je meraná s použitím väzbového testu pre PTH receptor, ako je opísané ďalej.

ROS 17/2.8 bunky sa umiestnia na platne a kultivujú spôsobom opísaným pre cAMP test. Po 3 - 5 dňoch sa kultivačné médium ašpiruje a bunky sa dvakrát premyjú 1 ml väzbového pufra (50 mM Tris-HCI/pH 7,7), 100 mM NaCl, 2 mM CaCI₂, 5 mM KCI, 0,5 % HIFCS, 5 % Hl konského séra). Bunky sa inkubujú so 100 pM ¹²⁵l[Nle^8,18,Tyr³⁴]hPTH(1-34)NH₂ (Amersham, Arlington Heights, IL) tak v prítomnosti, ako aj v neprítomnosti neznačeného analógu PTH. Po inkubácii počas 2 hodín pri 22 °C sa väzba ukončí ašpiráciou pufra a trojitým premytím buniek v chladnom roztoku testovacieho pufra. Rádioaktivita naviazaná na bunky získa pomocou pridania 0,1 N NaOH a počíta sa s použitím gama počítača (Packard). Celková špecifická väzba sa určí z jamiek, ktoré neobsahovali neznačenú peptidovú zlúčeninu. Uvedené dáta predstavujú priemerné % celkovej väzby z dvoch vzoriek ± SD. Hodnoty IC50 pre kompetíciu sú vyrátané s použitím 4-parametrovej rovnice.

3. Stimulácia adenylátcykiázy v kostných bunkových líniách myší a krýs cAMP odpoveď kostných bunkových kultúr myší a krýs na zlúčeniny podľa predkladaného vynálezu je určená nasledujúcim spôsobom:

Osteoblasty sú izolované z kostí plodov krýs (deň 19-20 gestácie) alebo kostí novonarodených myší (vek 1-2 dni). Izoluje sa frontálna a parietálna kosť, odstráni sa periost a spojivové tkanivo a kosti sa nastrihajú nožnicami. Nastrihané kosti sa potom postupne trávia počas 20 minút kolagenázou typu 1 (0,1 %) s tripsínom (0,5 %) a EDTA (0,53 mM). Bunky uvoľnené z trávenia 4 - 7 sa zhromaždia a odstráni sa kolagenáza. Bunky sa umiestnia v množstve 1 x 10^s buniek/jamka v MEM médiu s 10 % FBS v 24-jamkových platniach. Bunky sú uvedené do rovnováhy v testovacom pufri inkubáciou buniek počas 30 minút pri 37 °C. Následne je cAMP pufor aspirovaný. PTH analóg sa riedi v testovacom pufri na niekoľko koncentrácií a pridá

107 sa do jamiek. Bunky sa potom inkubujú pri 37 °C počas 20 minút. Po inkubácii sa bunky solubilizujú pridaním 1 % Tritónu. Celkový cAMP sa meria s použitím cAMP Scintillation Proximity Assay Screening systému (Amersham, Arlington Heights, IL) a vzorky sa odrátavajú s použitím Wallac scintilačného počítača mikrotitračných platní. Uvedené dáta predstavujú priemerné hodnoty cAMP z dvoch vzoriek ± SD. Hodnoty EC50 sú definované ako koncentrácia potrebná na vyvolanie polovičnej maximálnej stimulácie a sú vyrátané s použitím 4-parametrovej rovnice.

4. Stimulácia produkcie cAMP u krýs

Samice Harlan Sprague-Dawley krýs (kmeň Lewis, 300 g) sa anestetizujú s použitím zmesi ketamínu (70 mg/kg)/xylazínu (6 mg/kg). Testovaná peptidová zlúčenina sa následne aplikuje vybraným spôsobom (napríklad intravenózne, subkutánne alebo intratracheálne) vo fosfátom pufrovanom saiinickom nosiči (1 ml/kg). Po 1 hodine sa pomocou močového katétra alebo manuálne miernym tlakom na močový mechúr odoberie moč. Punkciou srdca sa tiež odoberie vzorka krvi. Vzorka moču sa testuje na koncentráciu cAMP s použitím rádioimunotestu (Incstar, Stillwater, MN) spôsobom, ktorý opísal Jaffé (Jaffé, M., Hoppe Seylers Z. Physiol. Chem. 1886, 10, 391). Tiež sa stanoví koncentrácia sérového a močového kreatinínu a koncentrácia kreatinínu sa použije na vyjadrenie koncentrácií cAMP ako funkcie glomerulárnej filtrácie.

5. Meranie účinkov na kosť u krýs

U samíc Retired krýs (Sprague-Dawley, 8-10 mesiacov veku) sa vykoná bilaterálna ovariektómia. Dva mesiace po ovariektómii sa začne liečba vybranou peptidovou zlúčeninou. Peptidová zlúčenina sa pripraví v izotonickom, fosfátom pufrovanom saiinickom roztoku obsahujúcom 2 % teplom inaktivovaného séra krýs. Zvieratám je podávaná denne podkožná injekcia (5 dní v týždni) počas 4 týždňov. Jeden deň po aplikácii poslednej dávky sa na stanovenie anabolickej odpovedi meria celotelová kostná hustota s použitím rôntgenovej absorpcie využívajúcej dve energie (DEXA).

6. In vitro meranie PTH antagonistickej aktivity

108

Antagonistická aktivita zlúčenín podľa predkladaného vynálezu sa stanoví meraním produkcie cAMP s použitím kultivovaných osteoblastov MC3T3-E1 myší, ako je opísané v U. S. patente č. 544 6130, ktorý je tu uvedený ako odkaz.

7. In vivo meranie PTH antagonistickej aktivity

In vivo účinnosť peptidových zlúčenín podľa predkladaného vynálezu ako antagonistov PTH je stanovená meraním obsahu fosfátov a cAMP v moči s použitím štandardných postupov známych v odbore, ktoré sú známe ako spoľahlivé merania aktivity PTH, ako sú opísané v U. S. patente č. 4423037, ktorý je tu uvedený ako odkaz.

109

Zoznam sekvencii (1) Všeobecné informácie:

(i) Prihlasovateľ: Condon, Stephen M.

Morize, Isabelle (ii) Názov vynálezu: Peptidové analógy paratyroidálneho hormónu (iii) Počet sekvencii: 88 (iv) Adresa pre korešpondenciu (A) Adresa: Rhone-Poulenc Porer Inc.

(B) Ulica: 500 Arcola Road, Mailstop 3C43 (C) Mesto: Collegeville (D) Štát: PA (E) Krajina: USA (F) ZIP: 19426 (v) Počítačová čítacia forma:

(A) Typ média: Floppy disk (B) Počítač: IBM PC kompatibilný (C) Operačný systém: PC-DOS/MS DOS (D) Software: Patent In Release #1.0, verzia #1.30 (vi) údaje o súčasnej prihláške:

(A) Číslo prihlášky:

(B) Dátum podania:

(C) Klasifikácia:

(vii) Predchádzajúce dáta prihlášky:

(A) Číslo prihlášky: US 60/046472 (B) Dátum podania: 14. 5. 1997 (viii) Zástupca/agent informácie:

(A) Meno: Martin Esg., Michael B.

(B) Registračné číslo: 37521 (C) Referenčné číslo registra: A 2678 B-WO (ix) Telekomunikačná informácia:

(A) Telefón: (610) 454-2793 (B) Telefax: (610) 454-3808 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 1:

(i) Charakteristiky sekvencie:

(A) Dĺžka: 34 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Reťazec:

(D) Topológia: nie je dôležitá

110 (ii) Typ molekúl: peptid (v) Typ fragmentu: N-koncový (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 1:

Ser Val Ser Glu lle Gin Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn 15 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gin Asp Val His

25 30

Asn Phe (2) Informácia pre SEQ ID NO: 2:

(i) Charakteristiky sekvencie:

(A) Dĺžka: 34 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Reťazec:

(D) Topológia: nie je dôležitá (ii) Typ molekuly: peptid (v) Typ fragmentu: N-koncový (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 2:

Ala Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser lle Gin 15 10 15

Asp Leu Arg Arg Arg Phe Phe Leu His His Leu lle Ala Glu lle His

25 30

Thr Ala (2) Informácia pre SEQ ID NO: 3:

(i) Charakteristiky sekvencie:

(A) Dĺžka: 31 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Reťazec:

(D) Topológia: nie je dôležitá (ii) Typ molekuly: peptid (v) Typ fragmentu: N-koncový (ix) Vlastnosti:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 8 (D) Iné informácie: /produkt = „Nie“ (ix) Vlastnosti:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 18-22

111 (D) Iné informácie: /produkt = „iné“ /poznámka = „vedľajšie reťazce Lys v pozícii 18 a Asp v pozícii 22 sú viazané amidovou väzbou“ (ix) Vlastnosti:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 31 (C) Iné informácie“ /produkt = „iné“ /poznámka = „táto C-koncová aminokyselina je amid, t.j. CONH₂“ (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 3:

Ala Val Ser Glu lle Gin Leu Xaa His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn 15 10 15

Ser Lys Glu Arg Val Asp Trp Leu Arg Lys Leu Leu Gin Asp Val

25 30 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 4:

(i) Charakteristiky sekvencie:

(A) Dĺžka: 31 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Reťazec:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 8 (C) Iné informácie: /produkt = „Nie“ (ix) Vlastnosti:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 31 (C) Iné informácie: /produkt = „iné“ /poznámka = „táto sekvencia má amid na C-konci, t.j. CONH₂ a nie karboxylovú skupinu (t.j. COOH)“ (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 4:

Ala Val Ser Glu lle Gin Leu Xaa His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn 15 10 15

Ser Lys Glu Arg Val Asp Trp Leu Arg Lys Leu Leu Gin Asp Val

25 30 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 5:

(i) Charakteristiky sekvencie:

(A) Dĺžka: 31 aminokyselín

112 (B) Typ: aminokyselina (C) Reťazec:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 18-22 (C) Iné informácie: /produkt = „iné“ /poznámka = „vedľajšie reťazce Lys v pozícii 18 a Asp v pozícii 22 sú viazané amidovou väzbou“ (ix) Vlastnosti (A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 31 (C) Iné informácie: /produkt = „iné“ /poznámka = „táto C-koncová aminokyselina je amid, t.j. CONH₂“ (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 5:

Ala Ala Ser Glu Ile Gin Leu Xaa His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn 15 10 15

Ser Lys Glu Arg Val Asp Trp Leu Arg Lys Leu Leu Gin Asp Val

25 30 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 6:

(i) Charakteristiky sekvencie:

(A) Dĺžka: 31 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Reťazec:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 8 (C) Iné informácie: /produkt ~ „Nie“ (ix) Vlastnosti:

(A) Meno/kľúč: peptid

113 (B) Umiestnenie: 18-22 (C) Iné informácie: /produkt = „iné“ /poznámka = „vedľajšie reťazce Lys v pozícii 18 a Asp v pozícii 22 sú viazané amidovou väzbou“ (ix) Vlastnosti:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 31 (C) Iné informácie: /produkt = „iné“ /poznámka = „táto C-koncová aminokyselina je amid, t.j. CONH₂“ (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 6:

Ala Val Ala Glu lle Gin Leu Xaa His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn 15 10 15

Ser Lys Glu Arg Val Asp Trp Leu Arg Lys Leu Leu Gin Asp Val

35 30 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 7:

(i) Charakteristiky sekvencie:

(A) Dĺžka: 31 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Reťazec:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 18-22 (C) Iné informácie: /produkt = „iné“ /poznámka = „vedľajšie reťazce Lys v pozícii 18 a Asp v pozícii 22 sú viazané amidovou väzbou“ (ix) Vlastnosti:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 31 (C) Iné informácie: /produkt = „iné“ /poznámka = „táto C-koncová aminokyselina je amid, t.j. CONH₂“ (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 7:

Ala Val Ser Ala lle Gin Leu Xaa His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn 15 10 15

114

Ser Lys Glu Arg Val Asp Trp Leu Arg Lys Leu Leu Gin Asp Val 20 25 30 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 8:

(i) Charakteristiky sekvencie:

(A) Dĺžka: 31 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Reťazec:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 31 (C) Iné informácie: /produkt = „iné“ /poznámka = „táto C-koncová aminokyselina je amid, t.j. CONH₂“ (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 8:

Ala Val Ser Glu Ala Gin Leu Xaa His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn 15 10 15

Ser Lys Glu Arg Val Asp Trp Leu Arg Lys Leu Leu Gin Asp Val

25 30 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 9:

(!) Charakteristiky sekvencie:

(A) Dĺžka: 31 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Reťazec:

(D) Topológia: nie je dôležitá (ii) Typ molekuly: peptid (v) Typ fragmentu: N-koncový

115 (ix) Vlastnosti:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 18-22 (D) Iné informácie: /produkt = „iné“ /poznámka = „vedľajšie reťazce Lys v pozícii 18 a Asp v pozícii 22 sú viazané amidovou väzbou“ (ix) Vlastnosti:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 31 (D) Iné informácie: /produkt = „iné“ /poznámka = „táto C-koncová aminokyselina je amid, t.j. CONH₂“ (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 9:

Ala Val Ser Glu lle Ala Leu Xaa His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn 1 15 10 15

Ser Lys Glu Arg Val Asp Trp Leu Arg Lys Leu Leu Gin Asp Val

25 30 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 10:

(i) Charakteristiky sekvencie:

(A) Dĺžka: 31 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Reťazec:

(A) Meno/kľúč: peptid

116 (B) Umiestnenie: 31 (D) Iné informácie: /produkt = „iné“ /poznámka = „táto C-koncová aminokyselina je amid, t.j. CONH₂(xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 10:

Ala Val Ser Glu lle Gin Ala Xaa His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn 1 5 10 15

Ser Lys Glu Arg Val Asp Trp Leu Arg Lys Leu Leu Gin Asp Val

25 30 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 11:

(i) Charakteristiky sekvencie:

(A) Dĺžka: 31 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Reťazec:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 31 (D) Iné informácie: /produkt = „iné“ /poznámka = „táto C-koncová aminokyselina je amid, t.j. CONH₂“ (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 11:

Ala Val Ser Glu lle Gin Leu Xaa Ala Asn Leu Gly Lys His Leu Asn 15 10 15

Ser Lys Glu Arg Val Asp Trp Leu Arg Lys Leu Leu Gin Asp Val

25 30 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 12:

(i) Charakteristiky sekvencie:

(A) Dĺžka: 31 aminokyselín

117 (B) Typ: aminokyselina (C) Reťazec:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 31 (D) Iné informácie: /produkt = „iné“ /poznámka = „táto C-koncová aminokyselina je amid, t.j. CONH₂“ (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 12:

Ala Val Ser Glu lle Gin Leu Xaa His Ala Leu Gly Lys His Leu Asn 15 10 15

Ser Lys Glu Arg Val Asp Trp Leu Arg Lys Leu Leu Gin Asp Val

25 30 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 13:

(i) Charakteristiky sekvencie:

(A) Dĺžka: 31 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Reťazec:

118 (A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 18-22 (D) Iné informácie: /produkt = „iné“ /poznámka = „vedľajšie reťazce Lys v pozícii 18 a Asp v pozícii 22 sú viazané amidovou väzbou“ (ix) Vlastnosti:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 31 (D) Iné informácie: /produkt = „iné“ /poznámka = „táto C-koncová aminokyselina je amid, t.j. CONH₂“ (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 13:

Ala Val Ser Glu lle Gin Leu Xaa His Asn Ala Gly Lys His Leu Asn 15 10 15

Ser Lys Glu Arg Val Asp Trp Leu Arg Lys Leu Leu Gin Asp Val

25 30 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 14:

(i) Charakteristiky sekvencie:

(A) Dĺžka: 31 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Reťazec:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 31 (D) Iné informácie: /produkt = „iné“ /poznámka = „táto C-koncová aminokyselina je amid, t.j. CONH₂“ (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 14:

Ala Val Ser Glu lle Gin Leu Xaa His Asn Leu Ala Lys His Leu Asn

119

10 15

Ser Lys Glu Arg Val Asp Trp Leu Arg Lys Leu Leu Gin Asp Val

25 30 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 15:

(i) Charakteristiky sekvencie:

(A) Dĺžka: 31 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Reťazec:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 31 (D) Iné informácie: /produkt = „iné“ /poznámka = „táto C-koncová aminokyselina je amid, t.j. CONH₂“ (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 15:

Ala Val ser Glu Íle Gin Leu Xaa His Asn Leu Gly Ala His Leu Asn 1 5 10 15

Ser Lys Glu Arg Val Asp Trp Leu Arg Lys Leu Leu Gin Asp Val

25 30 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 16:

(i) Charakteristiky sekvencie:

(A) Dĺžka: 31 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Reťazec:

120 (ix) Vlastnosti:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 18-22 (D) Iné informácie: /produkt = „iné“ /poznámka = „vedľajšie reťazce Lys v pozícii 18a Asp v pozícii 22 sú viazané amidovou väzbou“ (ix) Vlastnosti:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 31 (D) Iné informácie: /produkt = „iné“ /poznámka = „táto C-koncová aminokyselina je amid, t.j. CONH₂“ (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 16:

Ala Val Ser Glu Ile Gin Leu Xaa His Asn Leu Gly Lys Ala Leu Asn 15 10 15

Ser Lys Glu Arg Val Asp Trp Leu Arg Lys Leu Leu Gin Asp Val

25 30 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 17:

(i) Charakteristiky sekvencie:

(A) Dĺžka: 31 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Reťazec:

(D) Topológia: nie je dôležitá (ix) Vlastnosti:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 31 (D) Iné informácie: /produkt = „iné“ /poznámka = „táto C-koncová aminokyselina je amid, t.j. CONH₂“ (ix) Vlastnosti:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 8 (D) Iné informácie: /produkt = „Nie“

121 (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 17:

Ala Val Ser Glu lle Gin Leu Xaa His Asn Leu Gly Lys His Ala Asn 15 10 15

Ser Lys Glu Arg Val Asp Trp Leu Arg Lys Leu Leu Gin Asp Val

25 30 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 18:

(i) Charakteristiky sekvencie:

(A) Dĺžka: 31 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Reťazec:

(D) Topológia: nie je dôležitá (ix) Vlastnosti:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 31 (D) Iné informácie: /produkt = „iné“ /poznámka = „táto C-koncová aminokyselina je amid, t.j. CONH₂“ (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 18:

Ala Val Ser Glu lle Gin Leu Xaa His Asn Leu Gly Lys His Leu Ala 15 10 15

Ser Lys Glu Arg Val Asp Trp Leu Arg Lys Leu Leu Gin Asp Val

25 30 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 19:

(i) Charakteristiky sekvencie:

(A) Dĺžka: 31 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Reťazec:

122 (ix) Vlastnosti:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 18-22 (D) Iné informácie: /produkt = „iné /poznámka = „vedľajšie reťazce Lys v pozícii 18 a Asp v pozícii 22 sú viazané amidovou väzbou (ix) Vlastnosti:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 31 (D) Iné informácie: /produkt = „iné“ /poznámka = „táto C-koncová aminokyselina je amid, t.j. CONH₂“ (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 19:

Ala Val Ser Glu lle Gin Leu Xaa His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn 15 10 15

Ala Lys Glu Arg Val Asp Trp Leu Arg Lys Leu Leu Gin Asp Val

25 30 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 20:

(i) Charakteristiky sekvencie:

(A) Dĺžka: 31 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Reťazec:

123 (A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 31 (D) Iné informácie: /produkt = „iné“ /poznámka = „táto C-koncová aminokyselina je amid, t.j. CONH₂“ (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 20:

Gly Val Ser Glu lle Gin Leu Xaa His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn 15 10 15

Ser Lys Glu Arg Val Asp Trp Leu Arg Lys Leu Leu Gin Asp Val

25 30 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 21:

(i) Charakteristiky sekvencie:

(A) Dĺžka: 31 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Reťazec:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 31 (D) Iné informácie: /produkt = „iné“ /poznámka = „táto C-koncová aminokyselina je amid, t.j. CONH₂“ (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 21:

Ala Gly Ser Glu lle Gin Leu Xaa His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn 15 10 15

Ser Lys Glu Arg Val Asp Trp Leu Arg Lys Leu Leu Gin Asp Val

25 30 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 22:

(i) Charakteristiky sekvencie:

124 (A) Dĺžka: 31 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Reťazec:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 18-22 (D) Iné informácie: /produkt = „iné“ /poznámka = „vedľajšie reťazce Lys v pozícii 18 a Asp v pozícii 22 sú viazané amidovou väzbou (ix) Vlastnosti:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 31 (D) Iné informácie: /produkt = „iné“ /poznámka = „táto C-koncová aminokyselina je amid, t.j. CONH₂“ (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 22:

Ala Val Gly Glu lle Gin Leu Xaa His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn 15 10 15

Ser Lys Glu Arg Val Asp Trp Leu Arg Lys Leu Leu Gin Asp Val

25 30 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 23:

(i) Charakteristiky sekvencie:

(A) Dĺžka: 31 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Reťazec:

125 (ix) Vlastnosti:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 31 (D) Iné informácie: /produkt = „iné“ /poznámka = „táto C-koncová aminokyselina je amid, t.j. CONH₂“ (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 23:

Ala Val Ser Gly lle Gin Leu Xaa His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn 15 10 15

Ser Lys Glu Arg Val Asp Trp Leu Arg Lys Leu Leu Gin Asp Val

25 30 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 24:

(i) Charakteristiky sekvencie:

(A) Dĺžka: 31 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Reťazec:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 31 (D) Iné informácie: /produkt = „iné“ /poznámka = „táto C-koncová aminokyselina je amid, t.j. CONH₂“ (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 24:

126

Ala Val Ser Glu Gly Gin Leu Xaa His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn 1 5 10 15

Ser Lys Glu Arg Val Asp Trp Leu Arg Lys Leu Leu Gin Asp Val

25 30 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 25:

(i) Charakteristiky sekvencie:

(A) Dĺžka: 31 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Reťazec:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 31 (D) Iné informácie: /produkt = „iné“ /poznámka = „táto C-koncová aminokyselina je amid, t.j. CONH₂“ (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 25:

Ala Val Ser Glu lle Gly Leu Xaa His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn 15 10 15

Ser Lys Glu Arg Val Asp Trp Leu Arg Lys Leu Leu Gin Asp Val

15 30 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 26:

(i) Charakteristiky sekvencie:

(A) Dĺžka: 31 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Reťazec:

(D) Topológia: nie je dôležitá (ii) Typ molekuly: peptid

127 (v) Typ fragmentu: N-koncový (ix) Vlastnosti:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 31 (D) Iné informácie: /produkt = „iné“ /poznámka = „táto C-koncová aminokyselina je amid, t.j. CONH₂“ (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 26:

Ala Val Ser Glu lle Gin Gly Xaa His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn 1 5 10 15

Ser Lys Glu Arg Val Asp Trp Leu Arg Lys Leu Leu Gin Asp Val

25 30 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 27:

(i) Charakteristiky sekvencie:

(A) Dĺžka: 31 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Reťazec:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 31 (D) Iné informácie: /produkt = „iné“ /poznámka = „táto C-koncová aminokyselina je amid, t.j. CONH₂“

128 (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 27:

Ala Val Ser Glu lle Gin Leu Gly His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn 15 10 15

Ser Lys Glu Arg Val Asp Trp Leu Arg Lys Leu Leu Gin Asp Val

15 30 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 28:

(i) Charakteristiky sekvencie:

(A) Dĺžka: 31 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Reťazec:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 31 (D) Iné informácie: /produkt = „iné“ /poznámka = „táto C-koncová aminokyselina je amid, t.j. CONH2“ (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 28:

Ala Val Ser Glu lle Gin Leu Xaa Gly Asn Leu Gly Lys His Leu Asn 15 10 15

Ser Lys Glu Arg Val Asp Trp Leu Arg Lys Leu Leu Gin Asp Val

25 30 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 29:

(i) Charakteristiky sekvencie:

(A) Dĺžka: 31 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Reťazec:

(D) Topológia: nie je dôležitá

129 (ii) Typ molekuly: peptid (v) Typ fragmentu: N-koncový (ix) Vlastnosti:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 31 (D) Iné informácie: /produkt = „iné“ /poznámka = „táto C-koncová aminokyselina je amid, t.j. CONH₂“ (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 29:

Ala Val Ser Glu lle Gin Leu Xaa His Gly Leu Gly Lys His Leu Asn 15 10 15

Ser Lys Glu Arg Val Asp Trp Leu Arg Lys Leu Leu Gin Asp Val

25 30 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 30:

(i) Charakteristiky sekvencie:

(A) Dĺžka: 31 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Reťazec:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 18-22 (D) Iné informácie: /produkt = „iné“

130 /poznámka = „vedľajšie reťazce Lys v pozícii 18 a Asp v pozícii 22 sú viazané amidovou väzbou“ (ix) Vlastnosti:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 31 (D) Iné informácie: /produkt = „iné“ /poznámka = „táto C-koncová aminokyselina je amid, t.j. CONH₂“ (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 30:

Ala Val Ser Glu lle Gin Leu Xaa His Asn Gly Gly Lys His Leu Asn 15 10 15

Ser Lys Glu Arg Val Asp Trp Leu Arg Lys Leu Leu Gin Asp Val

25 30 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 31:

(i) Charakteristiky sekvencie:

(A) Dĺžka: 31 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Reťazec:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 31 (D) Iné informácie: /produkt = „iné“ /poznámka = „táto C-koncová aminokyselina je amid, t.j. CONH₂“ (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 31:

Ala Val Ser Glu lle Gin Leu Xaa His Asn Leu Gly Gly His Leu Asn 15 10 15

Ser Lys Glu Arg Val Asp Trp Leu Arg Lys Leu Leu Gin Asp Val

15 30

131 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 32:

(i) Charakteristiky sekvencie:

(A) Dĺžka: 31 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Reťazec:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 31 (D) Iné informácie: /produkt = „iné /poznámka = „táto C-koncová aminokyselina je amid, t.j. CONH₂“ (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 32:

Ala Val Ser Glu lle Gin Leu Xaa His Asn Leu Gly Lys Gly Leu Asn 15 10 15

Ser Lys Glu Arg Val Asp Trp Leu Arg Lys Leu Leu Gin Asp Val

25 30 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 33:

(i) Charakteristiky sekvencie:

(A) Dĺžka: 31 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Reťazec:

(D) Topológia: nieje dôležitá (ii) Typ molekuly: peptid (v) Typ fragmentu: N-koncový (ix) Vlastnosti:

132 (A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 8 (D) Iné informácie: /produkt = „Nie“ (ix) Vlastnosti:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 31 (D) Iné informácie: /produkt = „iné“ /poznámka = „táto C-koncová aminokyselina je amid, t.j. CONH₂“ (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 33:

Ala Val Ser Glu lle Gin Leu Xaa His Asn Leu Gly Lys His Gly Asn 15 10 15

Ser Lys Glu Arg Val Asp Trp Leu Arg Lys Leu Leu Gin Asp Val

25 30 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 34:

(i) Charakteristiky sekvencie:

(A) Dĺžka: 31 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Reťazec:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 31

133 (D) Iné informácie: /produkt = „iné“ /poznámka = „táto C-koncová aminokyselina je amid, t.j. CONH₂ (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 34:

Ala Val Ser Glu lf e Gin Leu Xaa His Asn Leu Gly Lys His Leu Gly 15 10 15

Ser Lys Glu Arg Val Asp Trp Leu Arg Lys Leu Leu Gin Asp Val

25 30 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 35:

(i) Charakteristiky sekvencie:

(A) Dĺžka: 31 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Reťazec:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 31 (D) Iné informácie: /produkt = „iné“ /poznámka = „táto C-koncová aminokyselina je amid, t.j. CONH₂“ (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 35:

Ala Val Ser Glu Íle Gin Leu Xaa His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn 15 10 15

Gly Lys Glu Arg Val Asp Trp Leu Arg Lys Leu Leu Gin Asp Val

25 30 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 36:

(i) Charakteristiky sekvencie:

(A) Dĺžka: 31 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina

134 (C) Reťazec:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 1 (D) Iné informácie: /produkt = „iný“ /poznámka = „Xaa v pozícii 1 je D-prolín“ (ix) Vlastnosti:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 31 (D) Iné informácie: /produkt = „iné“ /poznámka = „táto C-koncová aminokyselina je amid, t.j. CONH₂“ (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 36:

Xaa Val Ser Glu lle Gin Leu Xaa His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn 15 10 15

Ser Lys Glu Arg Val Asp Trp Leu Arg Lys Leu Leu Gin Asp Val

25 30 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 37:

(i) Charakteristiky sekvencie:

(A) Dĺžka: 31 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Reťazec:

135 (A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 3 (D) Iné informácie: /produkt = „iný“ /poznámka = „Xaa v pozícii 3 je D-prolín“ (ix) Vlastnosti:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 31 (D) Iné informácie: /produkt = „iné“ /poznámka = „táto C-koncová aminokyselina je amid, t.j. CONH₂“ (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 37:

Ala Val Xaa Glu lle Gin Leu Xaa His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn 15 10 15

Ser Lys Glu Arg Val Asp Trp Leu Arg Lys Leu Leu Gin Asp Val

25 30 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 38:

(i) Charakteristiky sekvencie:

(A) Dĺžka: 31 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Reťazec:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 6 (D) Iné informácie: /produkt = „iný“ /poznámka = „Xaa v pozícii 6 je D-prolín“ (ix) Vlastnosti:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 8

136 (D) Iné informácie: /produkt = „Nie“ (ix) Vlastnosti:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 31 (D) Iné informácie: /produkt = „iné“ /poznámka = „táto C-koncová aminokyselina je amid, t.j. CONH₂“ (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 38:

Ala Val Ser Glu lle Xaa Leu Xaa His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn 15 10 15

Ser Lys Glu Arg Val Asp Trp Leu Arg Lys Leu Leu Gin Asp Val

25 30 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 39:

(i) Charakteristiky sekvencie:

(A) Dĺžka: 31 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Reťazec:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 7 (D) Iné informácie: /produkt = „iný“ /poznámka = „Xaa v pozícii 7 je D-prolín“ (ix) Vlastnosti:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 18-22 (D) Iné informácie: /produkt = „iné“ /poznámka = „vedľajšie reťazce Lys v pozícii 18 a Asp v pozícii 22 sú viazané amidovou väzbou“

137 (ix) Vlastnosti:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 31 (D) Iné informácie: /produkt = „iné“ /poznámka = „táto C-koncová aminokyselina je amid, t.j. CONH₂“ (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 39:

Ala Val Ser Glu lle Gin Xaa Xaa His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn 15 10 15

Ser Lys Glu Arg Val Asp Trp Leu Arg Lys Leu Leu Gin Asp Val

25 30 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 40:

(i) Charakteristiky sekvencie:

(A) Dĺžka: 31 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Reťazec:

(D) Topológia: nie je dôležitá (ii) Typ molekuly: peptid (v) Typ fragmentu: N-koncový <

(ix) Vlastnosti:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 9 (D) Iné informácie: /produkt = „iný“ /poznámka = „Xaa v pozícii 9 je D-prolín“ (ix) Vlastnosti:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 31 (D) Iné informácie: /produkt = „iné“ /poznámka = „táto C-koncová aminokyselina je amid, t.j. CONH₂“ (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 40:

138

Ala Val Ser Glu Ile Gin Leu Xaa His Xaa Leu Gly Lys His Leu Asn 15 10 15

Ser Lys Glu Arg Val Asp Trp Leu Arg Lys Leu Leu Gin Asp Val

25 20 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 41:

(i) Charakteristiky sekvencie:

(A) Dĺžka: 31 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Reťazec:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 10 (D) Iné informácie: /produkt = „iný“ /poznámka: „Xaa v pozícii 10 je D-prolín“ (ix) Vlastnosti:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 31 (D) Iné informácie: /produkt = „iné“ /poznámka = „táto C-koncová aminokyselina je amid, t.j. CONH₂“ (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 41:

Ala Val Ser Glu Ile Gin Leu Xaa Xaa Asn Leu Gly Lys His Leu Asn 15 10 15

Ser Lys Glu Arg Val Asp Trp Leu Arg Lys Leu Leu Gin Asp Val

25 30 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 42:

(i) Charakteristiky sekvencie:

139 (A) Dĺžka: 31 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Reťazec:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: -10 (D) Iné informácie: /produkt = „Nie“ (ix) Vlastnosti:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: - 4 (D) Iné informácie: /produkt = „iný“ /poznámka = „Xaa v pozícii 14 je D-prolín“ (ix) Vlastnosti:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 1-5 (D) Iné informácie: /produkt = „iné“ /poznámka = „vedľajšie reťazce Lys v pozícii 18 a Asp v pozícii 22 sú viazané amidovou väzbou a táto sekvencia má amid na C-konci (t.j. CONH₂) a nie karboxylovú skupinu (t.j. COOH)“ (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 42:

Ala Val Ser Glu lle Gin Leu Xaa His Asn Leu Gly Lys Xaa Leu Asn -15 -10 -5

Ser Lys Glu Arg Val Asp Trp Leu Arg Lys Leu Leu Gin Asp Val 1 5 10 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 43:

(i) Charakteristiky sekvencie:

(A) Dĺžka: 31 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Reťazec:

140 (ix) Vlastnosti:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 15 (D) Iné informácie: /produkt = „iný“ /poznámka = „Xaa v pozícii 15 je D-prolín“ (ix) Vlastnosti:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 18-22 (D) Iné informácie: /produkt = „iné“ /poznámka = „vedľajšie reťazce Lys v pozícii 18 a Asp v pozícii 22 sú viazané amidovou väzbu“ (ix) Vlastnosti:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 31 (D) Iné informácie: /produkt = „iné“ /poznámka = „táto C-koncová aminokyselina je amid, t.j. CONH₂“ (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 43:

Ala Val Ser Glu lle Gin Leu Xaa His Asn Leu Gly Lys His Xaa Asn 15 10 15

Ser Lys Glu Arg Val Asp Trp Leu Arg Lys Leu Leu Gin Asp Val

25 30 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 44:

(i) Charakteristiky sekvencie:

(A) Dĺžka: 31 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Reťazec:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 16 (D) Iné informácie: /produkt = „iný“ /poznámka = „Xaa v pozícii 16 je D-prolín“ (ix) Vlastnosti:

141 (A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 18-22 (D) Iné informácie: /produkt = „iné“ /poznámka = „vedľajšie reťazce Lys v pozícii 18 a Asp v pozícii 22 sú viazané amidovou väzbou“ (ix) Vlastnosti:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 31 (D) Iné informácie: /produkt = „iné“ /poznámka = „táto C-koncová aminokyselina je amid, t.j. CONH₂“ (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 44:

Ala Val Ser Glu lle Gin Leu Xaa His Asn Leu Gly Lys His Leu Xaa 15 10 15

Ser Lys Glu Arg Val Asp Trp Leu Arg Lys Leu Leu Gin Asp Val

25 30 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 45:

(i) Charakteristiky sekvencie:

(A) Dĺžka: 31 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Reťazec:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 17 (D) Iné informácie: /produkt = „iný“ /poznámka = „Xaa v pozícii 17 je D-prolín“ (ix) Vlastnosti:

(A) Meno/kľúč: peptid

142 (B) Umiestnenie: 31 (D) Iné informácie: /produkt = „iné“ /poznámka = „táto C-koncová aminokyselina je amid, t.j. CONH₂“ (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 45:

Ala Val Ser Glu lle Gin Leu Xaa His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn 15 10 15

Xaa Lys Glu Arg Val Asp Trp Leu Arg Lys Leu Leu Gin Asp Val

25 30 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 46:

(i) Charakteristiky sekvencie:

(A) Dĺžka: 34 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Reťazec:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 18-22 (D) Iné informácie: /produkt = „iné“ /poznámka - „vedľajšie reťazce Lys v pozícii 18 a Asp v pozícii 22 sú viazané amidovou väzbou“ (ix) Vlastnosti:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 34 (D) Iné informácie: /produkt = „iné“ /poznámka = „táto C-koncová aminokyselina je amid, t.j. CONH₂“ (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 46:

Ala Val Ser Glu lle Gin Leu Xaa His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn 15 10 15

Ser Lys Glu Arg Val Asp Trp Leu Arg Lys Leu Leu Gin Asp Val His

25 30

Asn Phe (2) Informácia pre SEQ ID NO: 47:

143 (i) Charakteristiky sekvencie:

(A) Dĺžka: 31 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Reťazec:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 31 (D) Iné informácie: /produkt = „iné“ /poznámka = „táto C-koncová aminokyselina je amid, t.j. CONH₂“ (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 47:

Ala Val Ser Glu lle Gin Leu Xaa His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn 15 10 15

Ser Asp Glu Arg Val Lys Trp Leu Arg Lys Leu Leu Gin Asp Val

25 30 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 48:

(i) Charakteristiky sekvencie:

(A) Dĺžka: 31 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Reťazec:

144 (ix) Vlastností:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 18 (D) Iné informácie: /produkt = „Orn“ (ix) Vlastnosti:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 18-22 (D) Iné informácie: /produkt = „iné“ /poznámka = „vedľajšie reťazce Orn v pozícii 18 a Asp v pozícii 22 sú viazané amidovou väzbou“ (ix) Vlastnosti:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 31 (D) Iné informácie: /produkt = „iné“ /poznámka = „táto C-koncová aminokyselina je amid, t.j. CONH₂“ (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 48:

Ala Val Ser Glu lle Gin Leu Xaa His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn 15 10 15

Ser Xaa Glu Arg Val Asp Trp Leu Arg Lys Leu Leu Gin Asp Val

25 30 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 49:

(i) Charakteristiky sekvencie:

(A) Dĺžka: 31 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Reťazec:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 22 (D) Iné informácie: /produkt = „Orn“ (ix) Vlastnosti:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 18-22

145 (D) Iné informácie: /produkt = „iné“ /poznámka = „vedľajšie reťazce Asp v pozícii 18a Orn v pozícii 22 sú viazané amidovou väzbou“ (ix) Vlastnosti:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 31 (D) Iné informácie: /produkt = „iné“ /poznámka = „táto C-koncová aminokyselina je amid, t.j. CONH₂“ (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 49:

Ala Val Ser Glu lle Gin Leu Xaa His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn 15 10 15

Ser Asp Glu Arg Val Xaa Trp Leu Arg Lys Leu Leu Gin Asp Val

25 30 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 50:

(i) Charakteristiky sekvencie:

(A) Dĺžka: 31 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Reťazec:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 18-22 (D) Iné informácie: /produkt = „iné“ /poznámka = „vedľajšie reťazce Lys v pozícii 18 a Glu v pozícii 22 sú viazané amidovou väzbou“ (ix) Vlastnosti:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 31 (D) Iné informácie: /produkt = „iné“ /poznámka = „táto C-koncová aminokyselina je amid, t.j. CONH₂“ (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 50:

Ala Val Ser Glu lle Gin Leu Xaa His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn 15 10 15

Ser Lys Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Leu Leu Gin Asp Val

146

25 30 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 51:

(i) Charakteristiky sekvencie:

(A) Dĺžka: 31 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Reťazec:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 1 (D) Iné informácie: /produkt = „Nie“ (ix) Vlastnosti:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 11 (D) Iné informácie: /produkt = „Orn“ (ix) Vlastnosti:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 11-15 (D) Iné informácie: /produkt = „iné“ /poznámka = „vedľajšie reťazce Orn v pozícii 18 a Glu v pozícii 22 sú viazané amidovou väzbou“ (ix) Vlastnosti:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 24 (D) Iné informácie: /produkt = „iné“ /poznámka = „táto C-koncová aminokyselina je amid, t.j. CONH₂“ (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 51.

Ala Val Ser Glu lle Gin Leu Xaa His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn -5 1 5

Ser Xaa Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Leu Leu Gin Asp Val 10 15 20 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 52:

(i) Charakteristiky sekvencie:

(A) Dĺžka: 30 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Reťazec:

(D) Topológia: nie je dôležitá

147 (ii) Typ molekuly: peptid (v) Typ fragmentu: N-koncový (ix) Vlastnosti:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 30 (D) Iné informácie: /produkt = „iné“ /poznámka = „táto C-koncová aminokyselina je amid, t.j. C0NH₂“ (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 52:

Ala Val Ser Glu lle Gin Leu Xaa His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn 15 10 15

Ser Lys Glu Arg Val Asp Trp Leu Arg Lys Leu Leu Gin Asp

25 30 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 53:

(i) Charakteristiky sekvencie:

(A) Dĺžka: 29 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Reťazec:

148 /poznámka = „vedľajšie reťazce Lys v pozícii 18 a Asp v pozícii 22 sú viazané amidovou väzbou¹* (ix) Vlastnosti:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 29 (D) Iné informácie: /produkt = „iné“ /poznámka = „táto C-koncová aminokyselina je amid, t.j. CONH₂“ (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 53:

Ala Val Ser Glu lle Gin Leu Xaa His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn 15 10 15

Ser Lys Glu Arg Val Asp Trp Leu Arg Lys Leu Leu Gin

25 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 54:

(i) Charakteristiky sekvencie:

(A) Dĺžka: 28 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Reťazec:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 18-22 (D) Iné informácie: /produkt = „iné“ /poznámka „vedľajšie reťazce Lys v pozícii 18a Asp v pozícii 22 sú viazané amidovou väzbou“ (ix) Vlastnosti:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 28 (D) Iné informácie: /produkt = „iné“ /poznámka = „táto C-koncová aminokyselina je amid, t.j. CONH₂“ (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 54:

Ala Val Ser Glu lle Gin Leu Xaa His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn 15 10 15

Ser Lys Glu Arg Val Asp Trp Leu Arg Lys Leu Leu

25

149 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 55:

(i) Charakteristiky sekvencie:

(A) Dĺžka: 27 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Reťazec:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 27 (D) Iné informácie: /produkt = „iné“ /poznámka = „táto C-koncová aminokyselina je amid, t.j. CONH₂“ (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 55:

Ala Val Ser Glu lle Gin Leu Xaa His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn 15 10 15

Ser Lys Glu Arg Val Asp Trp Leu Arg Lys Leu

25 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 56:

(i) Charakteristiky sekvencie:

(A) Dĺžka: 22 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Reťazec:

150 (A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 9-13 (D) Iné informácie: /produkt = „iné“ /poznámka = „vedľajšie reťazce Lys v pozícii 9 a Asp v pozícii 13 sú viazané amidovou väzbou“ (ix) Vlastnosti:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 22 (D) Iné informácie: /produkt = „iné“ /poznámka = „táto C-koncová aminokyselina je amid, t.j. CONH₂“ (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 56:

Asn Leu Gly Lys His Leu Asn Ser Lys Glu Arg Val Asp Trp Leu Arg 15 10 15

Lys Leu Leu Gin Asp Val (2) Informácia pre SEQ ID NO: 57:

(i) Charakteristiky sekvencie:

(A) Dĺžka: 23 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Reťazec:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 10-14 (D) Iné informácie: /produkt = „iné“ /poznámka = „vedľajšie reťazce Lys v pozícii 10 a Asp v pozícii 14 sú viazané amidovou väzbou“ (ix) Vlastnosti:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 23 (D) Iné informácie: /produkt = „iné“ /poznámka = „táto C-koncová aminokyselina je amid, t.j. CONH₂“ (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 57:

His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn Ser Lys Glu Arg Val Asp Trp Leu 15 10 15

Arg Lys Leu Leu Gin Asp Val (2) Informácia pre SEQ ID NO: 58:

151 (i) Charakteristiky sekvencie:

(A) Dĺžka: 24 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Reťazec:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 11-15 (D) Iné informácie: /produkt = „iné“ /poznámka = „vedľajšie reťazce Lys v pozícii 11a Asp v pozícii 15 sú viazané amidovou väzbou“ (ix) Vlastnosti:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 24 (D) Iné informácie: /produkt = „iné“ /poznámka = „táto C-koncová aminokyselina je amid, t.j. CONH₂“ (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 58:

Xaa His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn Ser Lys Glu Arg Val Asp Trp 15 10 15

Leu Arg Lys Leu Leu Gin Asp Val (2) Informácia pre SEQ ID NO: 59:

(i) Charakteristiky sekvencie:

(A) Dĺžka: 25 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Reťazec:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 2

152 (D) Iné informácie: /produkt = „Nie“ (ix) Vlastnosti:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 12-16 (D) Iné informácie: /produkt = „iné“ /poznámka = „vedľajšie reťazce Lys v pozícii 12 a Asp v pozícii 16 sú viazané amidovou väzbou“ (ix) Vlastnosti:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 25 (D) Iné informácie: /produkt = „iné“ /poznámka = „táto C-koncová aminokyselina je amid, t.j. CONH₂“ (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 59:

Leu Xaa His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn Ser Lys Glu Arg Val Asp 15 10 15

Trp Leu Arg Lys Leu Leu Gin Asp Val

25 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 60:

(i) Charakteristiky sekvencie:

(A) Dĺžka: 26 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Reťazec:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 3 (D) Iné informácie: /produkt = „Nie“ (ix) Vlastnosti:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 13-17 (D) Iné informácie: /produkt = „iné“ /poznámka = „vedľajšie reťazce Lys v pozícii 13 a Asp v pozícii 17 sú viazané amidovou väzbou“ (ix) Vlastnosti:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 26 (D)lné informácie: /produkt = „iné“ /poznámka = „táto C-koncová aminokyselina je amid, t.j. CONH₂“

153 (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 60:

Gin Leu Xaa His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn Ser Lys Glu Arg Val 15 10 15

Asp Trp Leu Arg Lys Leu Leu Gin Asp Val

25 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 61:

(i) Charakteristiky sekvencie:

(A) Dĺžka: 27 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Reťazec:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 4 (D) Iné informácie: /produkt = „Nie“ (ix) Vlastnosti:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 14-18 (D) Iné informácie: /produkt = „iné“ /poznámka = „vedľajšie reťazce Lys v pozícii 14 a Asp v pozícii 18 sú viazané amidovou väzbou (ix) Vlastnosti:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 27 (D) Iné informácie: /produkt = „iné“ /poznámka = „táto C-koncová aminokyselina je amid, t.j. CONH₂“ (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 61:

lle Gin Leu Xaa His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn Ser Lys Glu Arg 15 10 15

Val Asp Trp Leu Arg Lys Leu Leu Gin Asp Val

25 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 62:

(i) Charakteristiky sekvencie:

(A) Dĺžka: 28 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Reťazec:

(D) Topológia: nie je dôležitá

154 (ii) Typ molekuly: peptid (v) Typ fragmentu: N-koncový (ix) Vlastnosti:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 5 (D) Iné informácie: /produkt = „Nie“ (ix) Vlastnosti:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 15-19 (D) Iné informácie: /produkt = „iné“ /poznámka = „vedľajšie reťazce Lys v pozícii 15 a Asp v pozícii 19 sú viazané amidovou väzbou“ (ix) Vlastnosti:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 28 (D) Iné informácie: /produkt = „iné“ /poznámka = „táto C-koncová aminokyselina je amid, t.j. CONH₂“ (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 62:

Glu Ile Gin Leu Xaa His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn Ser Lys Glu 15 10 15

Arg Val Asp Trp Leu Arg Lys Leu Leu Gin Asp Val

25 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 63:

(i) Charakteristiky sekvencie:

(A) Dĺžka: 29 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Reťazec:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 6 (D) Iné informácie: /produkt = „Nie“ (ix) Vlastnosti:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 16-20 (D) Iné informácie: /produkt = „iné“

155 /poznámka = „vedľajšie reťazce Lys v pozícii 16 a Asp v pozícii 20 sú viazané amidovou väzbou“ (ix) Vlastnosti:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 29 (D) Iné informácie: /produkt = „iné“ /poznámka = „táto C-koncová aminokyselina je amid, t.j. CONH₂“ (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 63:

Ser Glu lle Gin Leu Xaa His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn Ser Lys 15 10 15

Glu Arg Val Asp Trp Leu Arg Lys Leu Leu Gin Asp Val

25 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 64:

(i) Charakteristiky sekvencie:

(A) Dĺžka: 30 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Reťazec:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 7 (D) Iné informácie: /produkt = „Nie“ (ix) Vlastnosti:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 17-21 (D) Iné informácie: /produkt = „iné“ /poznámka = „vedľajšie reťazce Lys v pozícii 17 a Asp v pozícii 21 sú viazané amidovou väzbou“ (ix) Vlastnosti:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 30 (D) Iné informácie: /produkt = „iné“ /poznámka = „táto C-koncová aminokyselina je amid, t.j. CONH₂“ (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 64.

Val Ser Glu lle Gin Leu Xaa His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn Ser 15 10 15

Lys Glu Arg Val Asp Trp Leu Arg Lys Leu Leu Gin Asp Val

25 30

156 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 65:

(i) Charakteristiky sekvencie:

(A) Dĺžka: 28 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Reťazec:

(D) Topológia: nie je dôležitá (ii) Typ molekuly: peptid (v)Typ fragmentu: N-koncový (ix) Vlastnosti:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 2 (D) Iné informácie: /produkt = „Nie“ (ix) Vlastnosti:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 28 (D) Iné informácie: /produkt = „iné“ /poznámka = „táto C-koncová aminokyselina je amid, t.j. CONH₂“ (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 65:

Leu Xaa His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn Ser Lys Glu Arg Val Asp 15 10 15

Trp Leu Arg Lys Leu Leu Gin Asp Val His Asn Phe

25 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 66:

(i) Charakteristiky sekvencie:

(A) Dĺžka: 31 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Reťazec:

157 (A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 8 (D) Iné informácie: /produkt = „Nie“ (ix) Vlastnosti:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 18 (D) Iné informácie: /produkt = „Nie“ (ix) Vlastnosti:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 31 (D) Iné informácie: /produkt = „iné /poznámka = „táto C-koncová aminokyselina je amid, t.j. CONH₂“ (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 66:

Ala Val Ser Glu ile Gin Leu Xaa His Lys Leu Gly Lys Asp Leu Asn 15 10 15

Ser Xaa Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Leu Leu Gin Asp Val

25 20 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 67:

(i) Charakteristiky sekvencie:

(A) Dĺžka: 31 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Reťazec:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 14-18 (D) Iné informácie: /produkt = „iné“

158 /poznámka = „vedľajšie reťazce Lys v pozícii 14 a Asp v pozícii 18 sú viazané amidovou väzbou“ (ix) Vlastnosti:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 31 (D) Iné informácie: /produkt = „iné“ /poznámka = „táto C-koncová aminokyselina je amid, t.j. CONH₂“ (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 67:

Ala Val Ser Glu lle Gin Leu Xaa His Asn Leu Gly Lys Lys Leu Asn 15 10 15

Ser Asp Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Leu Leu Gin Asp Val

25 30 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 68:

(i) Charakteristiky sekvencie:

(A) Dĺžka: 31 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Reťazec:

159 (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 68:

Ala Val Ser Glu lle Gin Leu Xaa His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn 15 10 15

Lys Xaa Glu Arg Asp Glu Trp Leu Arg Lys Leu Leu Gin Asp Val

25 30 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 69:

(i) Charakteristiky sekvencie:

(A) Dĺžka: 31 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Reťazec:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 21-25 (D) Iné informácie: /produkt = „iné“ /poznámka = „vedľajšie reťazce Lys v pozícii 21 a Asp v pozícii 25 sú viazané amidovou väzbou (ix) Vlastnosti:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 31 (D) Iné informácie: /produkt = „iné“ /poznámka = „táto C-koncová aminokyselina je amid, t.j. CONH₂“ (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 69:

Ala Val Ser Glu lle Gin Leu Xaa His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn 15 10 15

Ser Xaa Glu Arg Lys Glu Trp Leu Asp Lys Leu Leu Gin Asp Val

25 30 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 70:

(i) Charakteristiky sekvencie:

160 (A) Dĺžka: 31 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Reťazec:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 25-29 (D) Iné informácie: /produkt = „iné“ /poznámka = „vedľajšie reťazce Lys v pozícii 25 a Asp v pozícii 29 sú viazané amidovou väzbou“ (ix) Vlastnosti:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 31 (D) Iné informácie: /produkt = „iné“ /poznámka = „táto C-koncová aminokyselina je amid, t.j. CONH₂“ (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 70:

Ala Val Ser Glu lle Gin Leu Xaa His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn 15 10 15

Ser Xaa Glu Arg Val Glu Trp Leu Lys Lys Leu Leu Asp Asp Val

25 30 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 71:

(i) Charakteristiky sekvencie:

(A) Dĺžka: 34 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Reťazec:

(D) Topológia: nieje dôležitá (ii) Typ molekuly: peptid (v) Typ fragmentu: N-koncový

161 (ix) Vlastnosti:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 18-22 (D) Iné informácie: /produkt = „iné“ /poznámka = „vedľajšie reťazce Lys v pozícii 18 a Asp v pozícii 22 sú viazané amidovou väzbou“ (ix) Vlastností:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 34 (D) Iné informácie: /produkt = „iné“ /poznámka = „táto C-koncová aminokyselina je amid, t.j. CONH₂“ (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 71:

Ala Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser lle Gin 15 10 15

Asp Lys Arg Arg Arg Asp Phe Leu His His Leu lle Ala Glu lle His

25 30

Thr Ala (2) Informácia pre SEQ ID NO: 72:

(i) Charakteristiky sekvencie:

(A) Dĺžka: 34 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Reťazec:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 34 (D) Iné informácie: /produkt = „iné“ /poznámka = „táto C-koncová aminokyselina je amid, t.j. CONH₂“ (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 72:

Ala Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser lle Gin 15 10 15

Asp Lys Arg Arg Arg Asp Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys Leu His

25 30

162

Thr Ala (2) Informácia pre SEQ ID NO: 73:

(i) Charakteristiky sekvencie:

(A) Dĺžka: 31 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Reťazec:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 31 (D) Iné informácie: /produkt = „iné“ /poznámka = „táto C-koncová aminokyselina je amid, t.j. CONH₂“ (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 73:

Ala Val Ser Glu lle Gin Leu Xaa His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn 15 10 15

Asp Lys Glu Arg Val Asp Trp Leu Arg Lys Leu Leu Gin Asp Val

25 30 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 74:

(i) Charakteristiky sekvencie:

(A) Dĺžka: 31 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Reťazec:

163 (D) Topológia: nie je dôležitá (ii) Typ molekuly: peptid (v) Typ fragmentu: N-koncový (ix) Vlastnosti:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 26-30 (D) Iné informácie: /produkt = „iné“ /poznámka = „vedľajšie reťazce Lys v pozícii 26 a Asp v pozícii 30 sú viazané amidovou väzbou“ (ix) Vlastnosti:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 31 (D) Iné informácie: /produkt = „iné“ /poznámka = „táto C-koncová aminokyselina je amid, t.j. CONH₂“ (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 74:

Ala Val Ser Glu lle Gin Leu Xaa His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn 15 10 15

Ser Lys Glu Arg Val Asp Trp Leu Arg Lys Leu Leu Gin Asp Val

25 30 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 75:

(i) Charakteristiky sekvencie:

(A) Dĺžka: 34 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Reťazec:

164 (A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 8 (D) Iné informácie: /produkt = „Nie“ (ix) Vlastnosti:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 34 (D) Iné informácie: /produkt = „iné“ /poznámka = „táto C-koncová aminokyselina je amid, t.j. CONH₂“ (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 75:

Ala Val Ser Glu lle Gin Leu Xaa His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn 15 10 15

Asp Lys Glu Arg Val Asp Trp Leu Arg Lys Leu Leu Gin Asp Val His

25 30

Asn Phe (2) Informácia pre SEQ ID NO: 76:

(i) Charakteristiky sekvencie:

(A) Dĺžka: 31 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Reťazec:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 18

165 (D) Iné informácie: /produkt = „Nie“ (ix) Vlastnosti:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 31 (D) Iné informácie: /produkt = „iné“ /poznámka = „táto C-koncová aminokyselina je amid, t.j. CONH₂“ (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 76:

Ala Val Ser Glu lle Gin Leu Xaa His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn 15 10 15

Asp Xaa Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Leu Leu Gin Asp Val

25 30 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 77:

(i) Charakteristiky sekvencie:

(A) Dĺžka: 28 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Reťazec:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 28

166 (D) Iné informácie: /produkt = „iné“ /poznámka = „táto C-koncová aminokyselina je amid, t.j. CONH₂“ (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 77:

Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser lle Gin Asp Lys Arg Arg Arg Asp 1 5 10 15

Phe Leu His His Leu lle Ala Glu lle His Trh Ala

25 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 78:

(i) Charakteristiky sekvencie:

(A) Dĺžka: 28 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Reťazec:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 7-11 (D) Iné informácie: /produkt = „iné“ /poznámka = „vedľajšie reťazce Lys v pozícii 7 a Asp v pozícii 11 sú viazané amidovou väzbou“ (ix) Vlastnosti:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 28 (D) Iné informácie: /produkt = „iné“ /poznámka = „táto C-koncová aminokyselina je amid, t.j. CONH₂“ (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 78:

Leu Xaa His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn Asp Lys Glu Arg Val Asp 1 5 10 15

Trp Leu Arg Lys Leu Leu Gin Asp Val His Asn Phe

167

25 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 79:

(i) Charakteristiky sekvencie:

(A) Dĺžka: 28 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Reťazec:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 20-24 (D) Iné informácie: /produkt = „iné“ /poznámka = „vedľajšie reťazce Lys v pozícii 20 a Asp v pozícii 24 sú viazané amidovou väzbou“ (ix) Vlastnosti:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 28 (D) Iné informácie: /produkt = „iné“ /poznámka = „táto C-koncová aminokyselina je amid, t.j. CONH₂“ (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 79:

Leu Xaa His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn Ser Lys Glu Arg Val Asp 15 10 15

Trp Leu Arg Lys Leu Leu Gin Asp Val His Asn Phe

25 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 80:

(i) Charakteristiky sekvencie:

(A) Dĺžka: 31 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Reťazec:

168 (D) Topológia: nie je dôležitá (ii) Typ molekuly: peptid (v) Typ fragmentu: N-koncový (ix) Vlastnosti:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 31 (D) Iné informácie: /produkt = „iné“ /poznámka = „táto C-koncová aminokyselina je amid, t.j. CONH₂“ (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 80:

Ala Val Ser Glu lle Gin Leu Xaa His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn 1 5 20 15

Asp Lys Glu Arg Val Asp Trp Leu Arg Lys Leu Leu Gin Asp Val

25 30 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 81:

(i) Charakteristiky sekvencie:

(A) Dĺžka: 31 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Reťazec:

169 (D) Topológia: nie je dôležitá (ii) Typ molekuly: peptid (v) Typ fragmentu: N-koncový (ix) Vlastnosti:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 31 (D) Iné informácie: /produkt = „iné“ /poznámka = „táto C-koncová aminokyselina je amid, t.j. CONH₂“ (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 81:

Ala Val Ser Glu lle Gin Leu Ala His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn 15 10 15

Ser Lys Glu Arg Val Asp Trp Leu Arg Lys Leu Leu Gin Asp Val

25 30 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 82:

(i) Charakteristiky sekvencie:

(A) Dĺžka: 31 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Reťazec:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 2 (D) Iné informácie: /produkt = „iné“ /poznámka = „Xaa v pozícii 2 je D-prolín“ (ix) Vlastnosti:

(A) Meno/kľúč: peptid

170 (B) Umiestnenie: 18-22 (D) Iné informácie: /produkt = „iné“ /poznámka = „vedľajšie reťazce Lys v pozícii 18a Asp v pozícii 22 sú viazané amidovou väzbou“ (ix) Vlastnosti:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 31 (D) Iné informácie: /produkt = „iné“ /poznámka = „táto C-koncová aminokyselina je amid, t.j. CONH₂“ (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 82:

Ala Xaa Ser Glu lle Gin Leu Xaa His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn 15 10 15

Ser Lys Glu Arg Val Asp Trp Leu Arg Lys Leu Leu Gin Asp Val

25 30 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 83:

(i) Charakteristiky sekvencie:

(A) Dĺžka: 31 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Reťazec:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 4 (D) Iné informácie: /produkt = „iné“ /poznámka = „Xaa v pozícii 4 je D-prolín“ (ix) Vlastnosti:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 31

171 (D) Iné informácie: /produkt = „iné“ /poznámka = „táto C-koncová aminokyselina je amid, t.j. CONH₂“ (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 83:

Ala Val Ser Xaa Ile Gin Leu Xaa His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn 15 10 15

Ser Lys Glu Arg Val Asp Trp Leu Arg Lys Leu Leu Gin Asp Val

25 30 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 84:

(i) Charakteristiky sekvencie:

(A) Dĺžka: 31 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Reťazec:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 5 (D) Iné informácie: /produkt = „iné“ /poznámka = „Xaa v pozícii 5 je D-prolín“ (ix) Vlastnosti:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 31 (D) Iné informácie: /produkt = „iné“ /poznámka = „táto C-koncová aminokyselina je amid, tj. CONH₂“ (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 84:

Ala Val Ser Glu Xaa Gin Leu Xaa His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn 15 10 15

Ser Lys Glu Arg Val Asp Trp Leu Arg Lys Leu Leu Gin Asp Val

25 30

172

(2) Informácia pre SEQ ID NO: 85:

(i) Charakteristiky sekvencie:

(A) Dĺžka: 31 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Reťazec:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 8 (D) Iné informácie: /produkt = „iné“ /poznámka = „Xaa v pozícii 8 je D-prolín“ (ix) Vlastnosti:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 31 (D) Iné informácie: /produkt = „iné“ /poznámka = „táto C-koncová aminokyselina je amid, t.j. CONH₂“ (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 85:

Ala Val Ser Glu lle Gin Leu Xaa His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn 15 10 15

Ser Lys Glu Arg Val Asp Trp Leu Arg Lys Leu Leu Gin Asp Val

25 30 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 86:

(i) Charakteristiky sekvencie:

(A) Dĺžka: 31 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Reťazec:

173 (ix) Vlastnosti:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 11 (D) Iné informácie: /produkt = „iné“ /poznámka = „Xaa v pozícii 11 je D-prolín“ (ix) Vlastnosti:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 31 (D) Iné informácie: /produkt = „iné“ /poznámka = „táto C-koncová aminokyselina je amid, t.j. CONH₂“ (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 86:

Ala Val Ser Glu lle Gin Leu Xaa His Asn Xaa Gly Lys His Leu Asn 15 10 15

Ser Lys Glu Arg Val Asp Trp Leu Arg Lys Leu Leu Gin Asp Val

25 30 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 87:

(i) Charakteristiky sekvencie:

(A) Dĺžka: 31 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Reťazec:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 12

174 (D) Iné informácie: /produkt = „iné“ /poznámka = „Xaa v pozícii 12 je D-prolín“ (ix) Vlastnosti:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 31 (D) Iné informácie: /produkt = „iné“ /poznámka = „táto C-koncová aminokyselina je amid, t.j. CONH₂“ (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 87:

Ala Val Ser Glu lle Gin Leu Xaa His Asn Leu Xaa Lys His Leu Asn 15 10 15

Ser Lys Glu Arg Val Asp Trp Leu Arg Lys Leu Leu Gin Asp Val

25 30 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 88:

(i) Charakteristiky sekvencie:

(A) Dĺžka: 31 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Reťazec:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 13 (D) Iné informácie: /produkt = „iné“ /poznámka = „vedľajšie reťazce Lys v pozícii 18 a Asp v pozícii 22 sú viazané amidovou väzbou“ (ix) Vlastnosti:

(A) Meno/kľúč: peptid (B) Umiestnenie: 31 (D) Iné informácie: /produkt = „iné“

175 /poznámka = „táto C-koncová aminokyselina je amid, t.j. CONH₂“ (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 88:

Ala Val Ser Glu íle Gin Leu Xaa His Asn Leu Gly Xaa His Leu Asn 15 10 15

Ser Lys Glu Arg Val Asp Trp Leu Arg Lys Leu Leu Gin Asp Val

25 30

Claims

1. Cyklická peptidová zlúčenina vzorca:

X-Αι 0-A11 -Al 2“Ai 3“Ai 4-A1 5Ai6Ai 7-A1 8“Ai 9-A20-A21-A22-A23-A24-A25-A26-A27-Y alebo jej farmaceutický prijateľná soľ alebo proliečivo, kde

X je vybraný zo skupiny zahŕňajúcej (a) Ria^-Ao^-Ai-A2^-A3-A4-A5-A6“A7-A8“Ag-_I (b) Ria^_A2^_A3-A4-A5-A6A7-A8“A9“, (c) Rib-A3-A4-A5-A6-A7-A8-Ag-, (d) Ria-A4-A5-A6“A7-A8-Ag-, (e) Ria-As-Ae-AT-Ae-Ag-, (f) Rla-Ae-AT-Ae-Ag-, (9) Rla^-A7-Ae-Ag-, (h) Rla'Ae-Ag-, (i) Ria-Ag- a 0) Rlai

Y je vybraný zo skupiny zahŕňajúcej (a) -R₃, (b) -A28-R31 (C) -A₂8-A29-R3!

(d) -A28-A29-A30-R3, (e) -A28-A₂g-A30-A3i-R3, (f) -A28-A29-A30-A31-A32-R3, (9) -A28A₂g-A3o-A3i-A32-A33-R3_t a (h) -A28-A₂9-A30-A31-A32-A33-A34-R3;

Ria je H, alkyl, aralkyl alebo -COR₂;

Rw je Ria alebo skupina vzorca

177

R₂ je alkyl, alkenyl, alkinyl, aryl alebo aralkyl;

R₃ je skupina vzorca A35-OR4 alebo AM-NR4R5;

R₄ a R_s sú nezávisle H alebo nižší alkyl;

R₆ a Rg sú nezávisle H alebo alkyl;

R₇je alkyl;

R₈ je H, alkyl alebo COR₂;

R₁₀ je H alebo halogén;

Ru je alkyl alebo aralkyl; m je 1, 2 alebo 3 n je 3 alebo 4;

A_o nie je prítomný alebo je to peptid obsahujúci jeden až šesť aminokyselinových zvyškov;

A1 je Ser, Ala, Gly alebo D-Pro alebo ekvivalentná aminokyselina k uvedeným aminokyselinám;

Ag je Ala, Ser, Gly alebo D-Pro alebo ekvivalentná aminokyselina k uvedeným aminokyselinám;

A5 je lle, His, Ala alebo Gly alebo ekvivalentná aminokyselina k uvedeným aminokyselinám;

Ag je Ala, Gin, Gly alebo D-Pro alebo ekvivalentná aminokyselina k uvedeným aminokyselinám;

A₇ je Ala, Leu, Gly alebo ekvivalentná aminokyselina k uvedeným aminokyselinám;

178

A₁₃ je Ala, Asn, Asp, Cys, homo-Cys, Glu, Gly, Lys, Orn, Ser, Thr, -NHCH(CH₂)_mNH₂)CO- alebo -NHCH[(CH₂)_nCO₂H]CO-;

A14 je Ala, Asn, Asp, Cys, homo-Cys, Glu, Gly, His, Lys, Orn, Ser, Thr, D-Pro, -NHCH(CH₂)_mNH₂)CO- alebo -NHCH[(CH₂)„CO₂H]CO-;

A₁₅ je Ala, Gly, lle, D-Pro alebo Leu alebo ekvivalentná aminokyselina k uvedeným aminokyselinám;

A17 je Ala, Asn, Asp, Cys, homo-Cys, Glu, Gly, Lys, Orn, Ser, Thr, D-Pro, -NHCH(CH₂)_mCO- alebo -NHCH[(CH₂)_mCO₂H]CO-;

A₁₈ je Asp, Cys, homo-Cys, Glu, His, Leu, Lys, Orn, Nie, Ser, Thr, -NHCH(CH₂)_mNH₂)CO- alebo -NHCH[(CH₂)_nCO₂H]CO-;

Aig je Arg alebo Glu alebo ekvivalentná aminokyselina k uvedeným aminokyselinám;

Ah) je Arg alebo ekvivalentná aminokyselina k Arg;

A₂i je Arg, Asp, Cys, homo-Cys, Glu, Lys, Orn, Ser, Thr, Val, -NHCH(CH₂)_mNH2)CO- alebo -NHCH[(CH₂)„CO₂H]CO;

Az> Asp, Cys, homo-Cys, Glu, His, Lys, Orn, Phe, Ser, Thr, -NHCH(CH₂)_mNH₂)CO- alebo -NHCH[(CH₂)„CO₂H]CO;

A23 je Leu, Phe alebo Trp alebo ekvivalentná aminokyselina k uvedeným aminokyselinám;

A₂₄ je Leu alebo ekvivalentná aminokyselina k Leu;

A₂₅ je Arg, Asp, Cys, homo-Cys, Glu, His, Lys, Orn, D-Pro, Ser, Thr, -NHCH(CH₂)_mNH₂)CO- alebo -NHCH[(CH₂)_nCO₂H]CO-;

Ak je Asp, Cys, homo-Cys, Glu, His, Lys, Orn, Ser, Thr, -NHCH(CH2)_mNH2)CO- alebo -NHCH[(CH2)_nCO₂H]CO-;

179

A₂₇ je Leu alebo Lys alebo ekvivalentná aminokyselina k uvedeným aminokyselinám;

A₂₈ je lle alebo Leu alebo ekvivalentná aminokyselina k uvedeným aminokyselinám;

A₂g je Ala, Asp, Cys, homo-Cys, Glu, Gin, Lys, Orn, Ser, Thr, -NHCH(CH₂)_mNH₂)CO- alebo -NHCH[(CH₂)_nCO₂H]CO-;

A₃o je Asp, Cys, homo-Cys, Glu, Gly, Lys, Orn, Ser, Thr, -NHCH(CH₂)_mNH₂)CO- alebo -NHCH[(CH₂)_nCO₂H]CO-;

A3₂je His alebo ekvivalentná aminokyselina k His;

A35 nie je prítomný alebo je to peptid s 1 až 4 aminokyselinami; a vedľajšie reťazce aspoň jedného z nasledujúcich párov aminokyselinových zvyškov, A10 a A14, A13 a A17, A14 a Αι₈, A17 a A₂i, Ai₈ a Aa, A₂t a A₂s a A₂₉ a Aa sú naviazané prostredníctvom amidovej, esterovej, disulfidovej alebo lantioninovej väzby pri vzniku mostíka, a vedľajšie reťazce aspoň jedného z nasledujúcich aminokyselinových zvyškov, A₁₀, A13, Au, A17, Ai_8l A₂₁, Aa, A₂₅, A₂₆, A₂₉ a Aa, prispievajú k tvorbe jedného mostíka; s podmienkou, že keď sú vedľajšie reťazce nasledujúcich párov aminokyselinových zvyškov, A₁₃ a A₁₇ alebo Aa a A30 naviazané prostredníctvom amidovej, disulfidovej alebo lantioninovej väzby tvoriacej mostík, potom sú vedľajšie reťazce aspoň jedného z nasledujúcich párov aminokyselinových zvyškov, A10 3 Aui Au a Αι₈, A17 a A₂i, Ai₈ a Aa. A21 s A₂s, A₂s a A₂₉ tiež naviazané amidovou, esterovou, disulfidovou alebo lantioninovou väzbou.

2. Peptidová zlúčenina podľa nároku 1 alebo jej farmaceutický prijateľná soľ alebo proliečivo, v ktorom sa mostík tvorený vedľajšími reťazcami jedného páru aminokyselinových zvyškov neprekrýva s mostíkom tvoreným medzi vedľajšími reťazcami iného páru aminokyselinových zvyškov.

180

3. Peptidová zlúčenina podľa nároku 2 alebo jej farmaceutický prijateľná soľ alebo proliečivo, kde

Aw je Ala, Asn, Asp, Gly alebo Lys;

A₁₃ je Ala, Gly alebo Lys;

Aw je Ala, Asp, Gly, His, Lys alebo Ser;

A17 je Ala, Asp, Gly, Lys alebo Ser;

Aw je Asp, Leu, Lys, Orn alebo Nie;

A₂i je Arg, Asp, Lys alebo Val;

Az2 je Asp, Glu, Lys, Orn alebo Phe;

A₂₅ je Arg, Asp, Glu, His alebo Lys;

A₂₆ je His alebo Lys;

A₂₉ je Ala, Asp, Glu alebo Gin;

Am je Asp, Glu alebo Lys; a vedľajšie reťazce aspoň jedného z nasledujúcich párov aminokyselinových zvyškov, Aw a Au, Ai₃ a Ai_7i Au a Aw, Ai₇ a A₂i, Aw a A22, A₂i a A₂s, A₂s a A^, A^ a A30 sú viazané amidovou väzbou pri vzniku mostíka a vedľajšie reťazce každého z nasledujúcich aminokyselinových zvyškov, A₁₀, Aw, A₁₄, A₁₇, Aw, A₂₁, A^, A_25i A₂₆, A₂₉ a A30, prispievajú k tvorbe jediného neprekrývajúceho sa mostíka; s podmienkou, že (a) ak sú vedľajšie reťazce A₁₃ a A₁₇ naviazané prostredníctvom amidovej väzby, tak sú vedľajšie reťazce aspoň jedného zAw a A^, A_2Í a A₂₅, A₂₅ a A₂₉, tiež naviazané prostredníctvom amidovej väzby;

(b) ak sú vedľajšie reťazce A^ a Am naviazané prostredníctvom amidovej väzby, tak sú vedľajšie reťazce aspoň jedného z Aw a A₁₄, Au a Aw, Au a A_2Í, Aw a A_s a A₂₁ a A₂₅ tiež naviazané prostredníctvom amidovej väzby;

(c) ak sú vedľajšie reťazce A₁₃ a A₁₇ a a A3₀ naviazané prostredníctvom amidovej väzby tvoriacej mostík, tak sú vedľajšie reťazce aspoň jedného z Aw a A₂₂alebo Α_2Ί a A₂₅ tiež naviazané prostredníctvom amidovej väzby.

4. Peptidová zlúčenina podľa nároku 3 alebo jej farmaceutický prijateľná soľ alebo proliečivo, kde Ru je H a Y je NH₂.

181

5. Peptidová zlúčenina podľa nároku 4 alebo jej farmaceutický prijateľná soľ alebo proliečivo, kde X je (a) Ri_a-Ai-A2-A3-Ä4-A5-A6-A7-A8-Ag-, (b) Ria'A^Aa-A^As-Ae-A-^As-Ag-, alebo (c) Ríb-As-A^As-As-A^Aa-Ag-.

6. Peptidová zlúčenina podľa nároku 5 alebo jej farmaceutický prijateľná soľ alebo proliečivo, kde Α_Ί je Ala, Gly alebo D-Pro; Ae je Nie a A₂₇ je Leu.

7. Peptidová zlúčenina podľa nárokuj 6 alebo jej farmaceutický prijateľná soľ alebo proliečivo, kde (i) vedľajšie reťazce A₁₀ a A₁₄ sú naviazané amidovou väzbou tvoriacou mostík;

(ii) vedľajšie reťazce A₁₄ a Aw sú naviazané amidovou väzbou tvoriacou mostík;

(iii) vedľajšie reťazce A₁₇ a A₂i sú naviazané amidovou väzbou tvoriacou mostík;

(iv) vedľajšie reťazce Aw a Az2 sú naviazané amidovou väzbou tvoriacou mostík;

(v) vedľajšie reťazce A₂₁ a A₂₆ sú naviazané amidovou väzbou tvoriacou mostík; alebo (vi) vedľajšie reťazce A₂₅ a A₂₉ sú naviazané amidovou väzbou tvoriacou mostík.

8. Peptidová zlúčenina podľa nároku 7 alebo jej farmaceutický prijateľná soľ alebo proliečivo, kde A₁₀ je Asp alebo Lys; Aw je Lys; Ai₄ je Asp alebo Lys; Α_Ί7 je Asp alebo Ser; Aw je Nie; A₂i je Arg alebo Val; A^ je Glu alebo Phe; A₂₅ je Arg alebo His; A26 je Lys alebo His; A₂₉ je Ala alebo Gin; a A30 je Asp alebo Glu; a vedľajšie reťazce A10 a Ai₄ sú viazané prostredníctvom amidovej väzby tvoriacej mostík.

9. Peptidová zlúčenina podľa nároku 7 alebo jej farmaceutický prijateľná soľ alebo proliečivo, kde A₁₀ je Asn alebo Asp; Aw je Lys; Ai₄ je Asp alebo Lys; A₁₇ je Asp alebo Ser; Aw je Nie; Α_2Ί je Arg alebo Val; Az> je Glu alebo Phe; A₂₅ je Arg alebo His; A26 je Lys alebo His; A^ je Ala alebo Gin; a A30 je Asp alebo Glu; a vedľajšie reťazce Ai₄ a Aw sú viazané prostredníctvom amidovej väzby tvoriacej mostík.

10. Peptidová zlúčenina podľa nároku 7 alebo jej farmaceutický prijateľná soľ alebo proliečivo, kde A₁₀ je Asn alebo Asp; Aw je Lys; A₁₄ je His alebo Ser; Aw je Asp alebo Lys; A₁₈ je Nie; A₂₁ je Asp alebo Lys; A^ je Glu alebo Phe; A₂₅ je Arg alebo

182

His; A₂₆ je Lys alebo His; A₂₉ je Ala alebo Gin; a A30 je Asp alebo Glu; a vedľajšie reťazce A₁₇ a A₂₁ sú viazané prostredníctvom amidovej väzby tvoriacej mostík.

11. Peptidová zlúčenina podľa nároku 7 alebo jej farmaceutický prijateľná soľ alebo proliečivo, kde Aw je Asn alebo Asp; A_j3 je Lys; A₁₄ je His alebo Ser; A_i7 je Asp alebo Ser; A₁₈ je Asp, Lys alebo Orn; A₂₁ je Arg alebo Val; A₂₂ je Asp, Glu, Lys alebo Orn; A₂₅ je Arg alebo His; A₂₆ je Lys alebo His; A₂₉ je Ala alebo Gin; a A30 je Asp alebo Glu; a vedľajšie reťazce Aw a K22 sú viazané prostredníctvom amidovej väzby tvoriacej mostík.

12. Peptidová zlúčenina podľa nároku 7 alebo jej farmaceutický prijateľná soľ alebo proliečivo, kde A₁₀ je Asn alebo Asp; A₁₃ je Lys; A_u je His alebo Ser; Ai₇ je Asp alebo Ser; Aw je Nie; A₂₁ je Asp alebo Lys; Az> je Glu alebo Phe; A₂₅ je Asp alebo Lys; A^ je Lys alebo His; A₂₉ je Ala alebo Gin; a A30 je Asp alebo Glu; a vedľajšie reťazce A₂i a A₂₅ sú viazané prostredníctvom amidovej väzby tvoriacej mostík.

13. Peptidová zlúčenina podľa nároku 7 alebo jej farmaceutický prijateľná soľ alebo proliečivo, kde A_w je Asn alebo Asp; A₁₃ je Lys; A_u je His alebo Ser; A₁₇ je Asp alebo Ser; Aw je Nie; A21 je Arg alebo Val; A^ je Glu alebo Phe; A₂₅ je Asp alebo Lys; Ak je Lys alebo His; A₂₉ je Asp alebo Lys; a Am je Asp alebo Glu; a vedľajšie reťazce A₂s a A₂₉ sú viazané prostredníctvom amidovej väzby tvoriacej mostík.

14. Peptidová zlúčenina podľa nároku 6 alebo jej farmaceutický prijateľná soľ alebo proliečivo, kde (i) vedľajšie reťazce A_í3 a A₁₇ sú naviazané amidovou väzbou a vedľajšie reťazce

Aw a K22. sú naviazané amidovou väzbou pri vzniku mostíka;

(ii) vedľajšie reťazce Aw a A22 sú naviazané amidovou väzbou a vedľajšie reťazce

A^ a Am sú naviazané amidovou väzbou pri vzniku mostíka.

15. Peptidová zlúčenina podľa nároku 14 alebo jej farmaceutický prijateľná soľ alebo proliečivo, kde Aw je Asn alebo Asp; Aw je Lys alebo Asp; A_u je His alebo Ser; A₁₇ je Lys alebo Asp; Α_Ί8 je Lys alebo Asp; Α_2Ί je Arg alebo Val; A^ je Glu, Lys alebo Asp; A₂₅ je Arg alebo His; A^ je Lys alebo His; A₂₉ je Ala alebo Gin; a Am je

183

Asp alebo Glu; a vedľajšie reťazce A₁₃ a A₁₇ sú naviazané amidovou väzbou a vedľajšie reťazce Ai₈ a A22 sú naviazané amidovou väzbou pri vzniku mostíka.

16. Peptidová zlúčenina podľa nároku 14 alebo jej farmaceutický prijateľná soľ alebo proliečivo, kde A_wje Asn alebo Asp; A13 je Lys; A_u je His alebo Ser; Ai₇je Ser alebo Asp; A₁₈ je Lys alebo Asp; A₂i je Arg alebo Val; A^ je Glu, Lys alebo Asp; A₂₅je Arg alebo His; A^ je Lys alebo Asp; A₂₉ je Ala alebo Gin; a A30 je Lys alebo Asp; a vedľajšie reťazce Aw a A22 sú naviazané amidovou väzbou a vedľajšie reťazce A₂₆ a A30 sú naviazané amidovou väzbou pri vzniku mostíka.

17. Peptidová zlúčenina podľa nároku 6 alebo jej farmaceutický prijateľná soľ alebo proliečivo, kde vedľajšie reťazce A_i3 a A₁₇ sú naviazané amidovou väzbou a vedľajšie reťazce Aw a A22 sú naviazané amidovou väzbou a vedľajšie reťazce A% a A30 sú naviazané amidovou väzbou pri vzniku mostíka.

18. Peptidová zlúčenina podľa nároku 17 alebo jej farmaceutický prijateľná soľ alebo proliečivo, kde A₁₀ je Asn alebo Asp; A_n je Lys alebo Asp; A₁₄ je His alebo Ser; A₁₇ je Lys alebo Asp; Ä₁₈ je Lys alebo Asp; Α_2Ί je Arg alebo Val; Ä₂₂ je Glu, Lys alebo Asp; A₂₅ je Arg alebo His; A₂₆ je Lys alebo Asp; A₂₉ je Ala alebo Gin; a A₃₀ je Lys alebo Asp.

19. Peptidová zlúčenina podľa nároku 1 vybraná zo skupiny zahŕňajúcej:

cyklo(K¹⁸-D^{19 * * 22})[A¹,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 3) [A¹,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 4) cyklo(K¹⁸-D²²)[A¹'²,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 5) cykloíK^-D^tA’ ^.NIe^K^.D^L^hPTHÍI-SIJN^ (SEQ ID NO: 6) cyklo(K¹⁸-D²²)[A¹'⁴,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 7) cyklo(K¹⁸-D²²)[A¹’⁵,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 8) cykloíK^-D^IA'^NIe^K^.D^.L^hPTHÍI-SnNHz (SEQ ID NO: 9) cyklo(K¹⁸-D²²)[A¹'⁷,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 10) cyklo(K¹⁸-D²²)[A¹'⁹,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 11) cyklo(K¹⁸-D²²)[A¹'¹⁰,Nle^e,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 12) cyklo(K¹⁸-D²²)[A¹¹¹,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 13) cyklo(K¹⁸-D²²)[A¹¹²,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 14)

184 cyklo(K¹⁸-D²²)[A¹'¹³,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH2(SEQ ID NO: 15) cyklo(K¹⁸-D²²)[A¹-¹⁴,Nle⁸IK¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 16) cyklo(K¹⁸-D²²)[A¹¹⁵INle⁸IK¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 17) cyklo(K¹⁸-D²²)[A¹‘¹⁶INle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 18) cyklo(K¹⁸-D²²)[A^l17,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 19) cyklo(K¹⁸-D²²)[G¹,Nle⁸lK¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 20) cyklo(K¹⁸-D²²)[A¹,G²,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 21) cykloíK^-D^A'.G’.N^.K^.D^L^hPTHÍI-SIjNHz (SEQ ID NO: 22) cyklo(K¹⁸-D²²)[A¹,G⁴,Nle⁸IK¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 23) cyklo(K¹⁸-D²²)[A¹,G⁵,Nle⁸,K¹⁸ID²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 24) cyklo(K¹⁸-D²²)[A¹,G⁶,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 25) cyklo(K¹⁸-D²²)[A¹,G⁷,Nle⁸lK¹⁸,D²²IL²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 26) cykloíK^-D^tA’.G^K^.D^.L^hPTHÍI-SnNHz (SEQ ID NO: 27) cyklo(K¹⁸-D²²)[A¹IG⁹,Nle⁸,K¹⁸,D²²,Ľ²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 28) cyklo(K¹⁸-D²²)[A¹,G¹⁰,Nle⁸,K¹⁸lD²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 29) cykloíK^-D^XA’.G^.NIe^K^.D^L^hPTHO-SIJNHz (SEQ ID NO: 30) cykloíK^-D^IA'.G^.NIe^K^.D^L^lhPTHO-SnNHz (SEQ ID NO: 31) cykloíK^-D^MA^G^.NIe^K^.D^.L^hPTHfl-SIJNHz (SEQ ID NO: 32) cykloíK^-D^IA'.G^.NIe’.K^.D^.L^JhPTHÍI-SIJN^ (SEQ ID NO: 33) cyklo(K¹⁸-D²²)[A¹,G¹⁶,Nle⁸,K¹⁸ID²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 34) cykloíK^-D^tA'.G^.N^.K^.D^.L^lhPTHO-SIJNHz (SEQ ID NO: 35) cykloíK^-D^ID-P^NIe’.K^.D^.L^hPTHÍI-SIJNHa (SEQ ID NO: 36) cyklo(K¹⁸-D²²)[A¹,D-P³,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 37) cyklo(K^l8-D²²)[A¹,D-P⁶,Nle⁸IK¹⁸,D²²,Ľ²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 38) cyklo(K¹⁸-D²²)[A¹,D-P⁷,Nle⁸,K¹⁸lD²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 39) cyklofK^-D^XA’.D-P^NIe’.K^.D^.L^JhPTHÍI-SIJNHz (SEQ ID NO: 40) cyklo(K¹⁸-D²²)[A¹,D-P¹⁰,Nle⁸,K^ie,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 41) cyklo(K¹⁸-D²²)[A¹1D-P¹⁴,Nle⁸tK¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 42) cyklo(K¹⁸-D²²)[A¹,D-P¹⁵,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 43) cykloíK^-D^IA^D-P^NIe^K^.D^L^hPTHO-SnNHz (SEQ ID NO: 44) cykloíK^-D^JIA’.D-P¹⁷ N^.K^.D^L^hPTHÍI-SIJNHz (SEQ ID NO: 45) cyklo(K¹⁸-D²²)[A¹,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-34)NH₂ (SEQ ID NO: 46) cyklo(D¹⁸-K²²)[A^l,Nle⁸ID¹⁸,K²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 47) cyklo(0¹⁸-D²²)[A¹,Nle⁸0¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 48)

185 cyklo(D¹⁸-O²²)[A¹,Nle⁸,D¹⁸,O²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 49) cyklo(K¹⁸-E²²)[A¹,Nle⁸,K¹⁸,E²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 50) cyklo(O¹⁸-E²²)[A¹,Nle⁸,O¹⁸,E²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 51) cyklo(K¹⁸-D²²)[A¹,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-30)NH2 (SEQ ID NO: 52) cyklo(K¹⁸-D²²)[A¹.NIe⁸,K¹⁸,D²²,Ľ²⁷]hPTH(1-29)NH2 (SEQ ID NO: 53) cyklo^-D^.NIe⁸,Κ¹⁸^²² L²⁷]hPTH(1-28)NH2 (SEQ ID NO: 54) cyklo(K¹⁸-D²²)[A¹,Nle⁸,K¹⁸,D²².L²⁷]hPTH(1-27)NH2 (SEQ ID NO: 55) cyklo(K¹⁸-D²²)[Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(3-31)NH2 (SEQ ID NO: 63) cyklo(K¹⁸-D²²)[Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(2-31)NH2 (SEQ ID NO: 64) cyklo(K¹⁰-D¹⁴)[A¹,Nle⁸¹⁸,K¹⁰,D¹⁴,L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 66) cyklo(K¹⁴-D¹⁸)[A¹,Nle⁸,K¹⁴,D¹⁸,L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 67) cyklo(K^l7-D^{20 21})[A¹,Nle^8lielK¹⁷1D²¹,L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 68) cyklo(K²¹-D²⁵)[A¹,Nle⁸'¹⁸,K²¹,D²⁵,L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 69) cyklo(K²⁵-D²⁹)[A¹.NIe⁸'¹⁸.K²⁵.D²⁹.L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 70) cyklo(K¹⁸-D²²)[K¹⁸,D²²]hPTHrP(1-34)NH2 (SEQ ID NO: 71) cyklo(K¹⁸-D²²)[K^18,26,30,D²²IL^23,28,31,E^25,29]hPTHrP(1-34)NH2 (SEQ ID NO: 72) bicyklo(K¹³-D¹⁷,K^-D^ÍA’.NIe’.D^^K^.L^lhPTHÍI-SIJNHz (SEQ ID NO: 73) bÍcyklo(K¹⁸-D²²,K²⁶-D³⁰)[A¹,Nle⁸.K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 74) tricyklo(K¹³-D¹⁷,K¹⁸-D²²lK²⁶-D³⁰)[A¹,Nle⁸,K¹⁸,D^17,22,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO:

80) alebo ich farmaceutický prijateľné soli alebo proliečivá.

20. Peptidové zlúčenina podľa nároku 1 vybraná zo skupiny zahŕňajúcej:

cyklo(K¹⁸-D²²)[A¹,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 3) cyklo(K¹⁸-D²²)[A¹,Nle⁸,K¹⁸lD²²,L²⁷]hPTH(1-34)NH₂ (SEQ ID NO: 46) cyklo(K¹⁸-D²²)[A^1>3.NIe⁸.K^ie,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 6) cyklo(K¹⁸-D²²)[A¹’^e.NIe⁸,K^ie.D²².L²⁷JhPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 9) cyklo(K¹⁸-D²²)[A¹'^,0,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 12) cyklo(K¹⁸-D²²)[A¹'¹¹,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 13) cyklo(K¹⁸-D²²)[A^1,12,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 14) cyklo(K¹⁸-D²²)[A^1,13,Nle^elK¹⁸ID²²lL²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 15) cyklo(K¹⁸-D²²)[A¹-¹⁴,Nle⁸,K¹⁸,D²².L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 16) cyklo(K¹⁸-D²²)[A^1,15,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 17) cykloíK^-D^IA^^.NIe^K^.D^.L^hPTHíl-SIJNHz (SEQ ID NO: 18)

186 cyklo(K¹⁸-D²²)[A¹'¹⁷,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷jhPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 19) cyklo(K¹⁸-D²²)[G¹,Nle⁸,K¹⁸.D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 20) cykloíK^-D²²)^¹^² Nle’.KWL^hPTHa-SIJNHa (SEQ ID NO: 21) cyklo(K¹⁸-D²²)[A¹,G³,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 22) cyklo(K¹⁸-D²²)[A¹,G¹⁰,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 29) cyklo(K¹⁸-D^2a)[A¹IG¹³.NIe⁸.K^ie,D²²lL²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 31) cyklo(K^l8-D²²)[A^l.G¹⁶,Nle⁸,K¹⁸,D²².L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 34) cyklo(K¹⁸-D²²)[A¹,G¹⁷,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 35) cykloíK^-D^tD-P’.NIe⁸ K^.D²² L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 36) cyklo(D¹⁸-K²²)[Aⁱ.NIe⁸,D^,e.K²².L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 47) cyklo(O¹⁸-D²²)[A\Nle⁸,O¹⁸.D²²lL^Z7]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 48) cykloíD^-O^XA'.NIe^D^.O^.L^hPTHÍI-SIJNHz (SEQ ID NO: 49) cyklo(K¹⁸-E²²)[A¹.NIe⁸,K^,8.E²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 50) cyklotO^-E^fA'.NIe⁸^¹⁸ E²² L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 51) cyklo(K¹⁸-D²²)[A¹,Nle⁸,K¹⁸.D²²,L²⁷]hPTH(1-30)NH2 (SEQ ID NO: 52) cyklo(K¹⁸-D²²)[A¹,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-29)NH2 (SEQ ID NO: 53) cyklo(K^l8-D²²)[A¹,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-28)NH2 (SEQ ID NO: 54) cyklo(K¹⁰-D¹⁴)(A¹.NIe^8,18,K¹⁰,D¹⁴,L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 66) cyklo(K¹⁴-D¹⁸)[A¹,Nle⁸,K¹⁴,D¹⁸,L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 67) cyklo(K¹⁷-D²¹)[A¹,Nle^8,18,K¹⁷ D²¹,L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 68) cyklo(K²¹-D²⁵)[A¹,Nle⁸'¹⁸,K^2l,D²⁵,L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 69) cyklo(K²⁵-D²⁹)[A¹,Nle⁸'¹⁸,K²⁵ D²⁹,L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 70) cyklofK^-D²²)^¹⁸,D²²]hPTHrP(1-34)NH2 (SEQ ID NO: 71) cyklo(K¹⁸-D²²)[K^18,26,30,D²²,L²³'²⁸’³¹lE²⁵’²⁹]hPTHrP(1-34)NH2 (SEQ ID NO: 72) bicyklo(K¹³-D¹⁷,K¹⁸-D²²)[A¹,Nle⁸,D¹⁷'²²,K¹⁸,L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 73) bicyklo^-D²² K^-D^fA'.NIe⁸K¹⁸^²² L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 74) tricyklo(K^l3-D¹⁷,K¹⁶-D²²,K²⁶-D³⁰)[A\Nle⁸,K^1B,D^17l22,L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO:

80) alebo ich farmaceutický prijateľné soli alebo proliečiva.

21. Peptidová zlúčenina podľa nároku 1 vybraná zo skupiny zahŕňajúcej: cyklo(K¹⁸-D²²)[A¹,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 3) cyklo(K¹⁸-D²²)[A¹,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-34)NH2 (SEQ ID NO: 46) cyklo(K¹⁸-D²²)[A¹'¹⁰,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 12)

187 cyklo(K¹⁸-D²²)[A^1l12,Nle⁸.K¹⁸.D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 14) cyklo^-D²²)^¹'¹³ Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 15) cyklo(K¹⁸-D²²)[A^1,14,Nle⁸lK¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 16) cyklo(K¹⁸-D²²)[A¹¹⁶,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 18) cyklo(K¹⁸-D²²)[A^1,17,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 19) cyklo(K¹⁸-D²²)[A¹,G³,Nle⁸,K¹⁸,D²²IL²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 22) cyklo(K¹⁸-D²²)[A¹,G¹³,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 31) cyklo(K¹⁸-D²²)[A¹,G¹⁶lNle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 34) cyklo(K¹⁸-D²²)[A¹,G¹⁷,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 35) cyklo(K¹⁸-D²²)[D-P¹INle⁸,K¹⁸lD²²,Ľ²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 36) cykloíD^-K^ÍA'.NIe^D^.K^.L^hPTHÍI-SIJN^ (SEQ ID NO: 47) cyklo(K¹⁸-E²²)[A¹.NIe⁸.K¹⁸.E²².L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 50) cyklo(O¹⁸-E²²)[A¹,Nle⁸,O¹⁸,E²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 51) cyklo(K¹⁸-D²²)[A¹,Nle⁸,K¹⁸.D²²,L²⁷]hPTH(1-30)NH2 (SEQ ID NO: 52) cyklo(K¹⁴-D¹⁸)[A¹,Nle⁸,K¹⁴,D¹⁸,L²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 67) cyklo(K¹⁸-D²²)[K¹⁸,D²²]hPTHrP(1-34)NH2 (SEQ ID NO: 71) bicyklo(K¹³-D¹⁷,K¹⁸-D²²)[A¹,Nle⁸,D^17,22,K¹⁸.L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 73) bicyklo(K¹⁸-D²².K²⁶-D³⁰)[A¹.NIe⁸.K¹⁸,D²²lL²⁷]hPTH(1-31)NH2 (SEQ ID NO: 74) tricyklo(K¹³-D¹⁷K¹⁸-D²².K²⁶-D³⁰)[A¹.NIe⁸lK¹⁸.D²².L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO:

80) alebo ich farmaceutický prijateľné soli alebo proliečivá.

22. bicyklo(K¹³-D¹⁷,K²⁶-D³⁰)[A¹,Nle^e,18,D¹⁷,L²⁷]hPTH(7-31)NH₂ (SEQ ID NO: 79) alebo jej farmaceutický prijateľná soľ alebo proliečivo.

23. Peptidová zlúčenina podľa nároku 4 alebo jej farmaceutický prijateľná soľ alebo proliečivo, kde X je vybrané zo skupiny zahŕňajúcej (a) Ria-A4-A5-A6-A7-Ae-Ag-, (b) RlaAs-A6“A7-A8-Ag-, (c) Rib-A6A7-A8-Ag-, (d) Ria-AyAe-Ag-, (e) Ria^-Ae-Ag-, (f) Rlb^-Ag-, a (g) Ríb.

188

24. Peptidová zlúčenina podľa nároku 23 alebo jej farmaceutický prijateľná soľ alebo proliečivo, v ktorom Ae je Nie a A₂₇ je Leu.

25. Peptidová zlúčenina podľa nároku 24 alebo jej farmaceutický prijateľná soľ alebo proliečivo, v ktorej sú vedľajšie reťazce Aw a A22 naviazané prostredníctvom amidovej väzby tvoriacej mostík.

26. Peptidová zlúčenina podľa nároku 25 alebo jej farmaceutický prijateľná soľ alebo proliečivo, v ktorej A_w je Asn alebo Asp; A₁₃ je Lys; A₁₄ je His alebo Ser; A17 je Asp alebo Ser; A₁₈ je Asp, Lys alebo Orn; A₂i je Arg alebo Val; A^ je Asp, Glu, Lys alebo Orn; A₂₅ je Arg alebo His; A^ je Lys alebo His; A₂₉ je Ala alebo Gin; a A30 je Asp alebo Glu.

27. Peptidová zlúčenina podľa nároku 1 vybraná zo skupiny zahŕňajúcej: cykloíK^-D^IK^.D^.L^jhPTHCIO-SIJNHz (SEQ ID NO: 56) cyklo(K¹⁸-D²²)[K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(9-31)NH2 (SEQ ID NO: 57) cyklo(K¹⁸-D²²)[Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(8-31)NH2 (SEQ ID NO: 58) cyklo(K¹⁸-D²²)[Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(7-31)NH2 (SEQ ID NO: 59) cyklo(K¹⁸-D²²)[Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(6-31)NH2 (SEQ ID NO: 60) cyklo(K¹⁸-D²²)[Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(5-31)NH2 (SEQ ID NO: 61) cyklo(K¹⁸-D²²)[Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(4-31)NH2 (SEQ ID NO: 62) cyklo(K¹⁸-D²²)[Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(7-34)NH2 (SEQ ID NO: 65) cyklo(K¹⁸-D²²)[K¹⁸,D²²]hPTHrP(7-34)NH2 (SEQ ID NO: 77) alebo ich farmaceutický prijateľné soli alebo proliečivá.

28. Farmaceutický prostriedok, vyznačujúci sa tým, že obsahuje peptidovú zlúčeninu podľa nároku 1, alebo jej farmaceutický prijateľnú soľ alebo proliečivo, a farmaceutický prijateľný nosič.

29. Spôsob liečby ochorení spojených s poruchou vápnikového metabolizmu, vyznačujúci sa tým, že pacientovi, ktorý potrebuje takúto terapiu, je podávané terapeuticky účinné množstvo peptidovej zlúčeniny podľa nároku 1, alebo jej farmaceutický prijateľné soli alebo proliečivá.

189

30. Spôsob liečby ochorení spojených s poruchou vápnikového metabolizmu, vyznačujúci sa tým, že pacientovi, ktorý potrebuje takúto terapiu, je podávané terapeuticky účinné množstvo peptidovej zlúčeniny podľa nároku 5, alebo jej farmaceutický prijateľné soli alebo proliečivá.

31. Spôsob podľa nároku 30, vyznačujúci sa tým, že uvedeným ochorením spojeným s poruchou vápnikového metabolizmu je hypokalcémia, osteoporóza, osteopénia, hyperparatyroidizmus, hypoparatyroidizmus, glukokortikoidmi a imunosupresívami indukovaná osteopénia, a zlomeniny kostí.

32. Spôsob liečby osteopénie alebo osteoporózy, vyznačujúci sa tým, že pacientovi, ktorý potrebuje takúto terapiu, je podávané terapeuticky účinné množstvo peptidovej zlúčeniny podľa nároku 5, alebo jej farmaceutický prijateľné soli alebo proliečivá.

33. Spôsob podľa nároku 30, vyznačujúci sa tým, že obsahuje pulzné subkutánne alebo intrapulmonálne podávanie terapeuticky účinného množstva peptidovej zlúčeniny podľa nároku 1, alebo jej farmaceutický prijateľné soli alebo proliečivá.

34. Spôsob podľa nároku 32, vyznačujúci sa tým, že obsahuje pulzné subkutánne alebo intrapulmonálne podávanie terapeuticky účinného množstva peptidovej zlúčeniny podľa nároku 4, alebo jej farmaceutický prijateľné soli alebo proliečivá.

35 Spôsob liečby ochorení spojených s poruchou vápnikového metabolizmu, vyznačujúci sa tým, že pacientovi, ktorý potrebuje takúto terapiu, je podávané terapeuticky účinné množstvo peptidovej zlúčeniny podľa nároku 23, alebo jej farmaceutický prijateľné soli alebo proliečivá.

36. Spôsob podľa nároku 35, vyznačujúci sa tým, že uvedené ochorenie spojené s poruchou vápnikového metabolizmu je vybrané zo skupiny zahŕňajúcej

190 hyperparatyroidizmus a hyperkalcemická krízu pri hyperparatyroidizme, hyperkalcémii pri malignitách, renálne zlyhanie a hypertenziu.

37. Spôsob podľa nároku 35, vyznačujúci sa tým, že obsahuje pulzné subkutánne alebo intrapulmonálne podávanie terapeuticky účinného množstva peptidovej zlúčeniny podľa nároku 23, alebo jej farmaceutický prijateľné soli alebo proliečivá.

38. Spôsob podľa nároku 36, vyznačujúci sa tým, že obsahuje pulzné subkutánne alebo intrapulmonálne podávanie terapeuticky účinného množstva peptidovej zlúčeniny podľa nároku 23, alebo jej farmaceutický prijateľné soli alebo proliečivá.

39. Peptidová zlúčenina vzorca:

X-Αι o-Ai 1 -Al 2-Ai 3Ai 4-A15’Al6Ai 7-A1 8Ai 9-A20-A21 -Α22-Α23-Α24-Α₂5'Α26·Α27Ύ alebo jej farmaceutický prijateľná soľ alebo proliečivo, kde

X je vybraný zo skupiny zahŕňajúcej (a) Ri_a“Ao“Ai-A2”A3-A4-A5-A6-A7-A8-A9“, (b) Ria^-A₂”A3-A4-A5-A6A7-A8-A9-, (c) Rib-A3-A4-A5-A6“A7-Ae-Ag-, (d) Rla-A4-A5-A6-A7-A8-Ag-, (e) Ria-As-Ae-AT-Ae-Ag-, (f) RlaA6-A7-Ae-A9-, (g) Rla-ArAg-Ag-, (h) Rla'Afi-Ag-, (i) Ria-Ag- a

0) Ria!

Y je vybrané zo skupiny zahŕňajúcej (a) -R₃,

191 (b) -A28-R3.

(C) ^-A₂8A₂₉”R_3l (d) -A28-A29-A30-R3.

(e) ”A₂8^-A29^-A3o“A₃i“R₃, (f) “A₂8A₂9^-A₃o-A₃i“A₃₂-R₃, (g) -A₂8-A₂₉-A3o-A3i-A3₂-A33-R3 a (h) -A₂8-A₂g-A30-A₃i -A3₂“A₃₃-A₃₄-R₃;

R_1a je H, alkyl, aralkyl alebo -COR₂; Rw je Ria alebo skupina vzorca

R₂ je alkyl, alkenyl, alkinyl, aryl alebo aralkyl;

R₃ je skupina vzorca A₃₅-OR₄ alebo A3₅-NR₄R₅;

R₄ a R₅ sú nezávisle H alebo nižší alkyl;

R₆ a Rg sú nezávisle H alebo alkyl;

R₇ je alkyl;

R₈ je H, alkyl alebo COR₂;

R_1O je H alebo halogén;

Rn je alkyl alebo aralkyl;

Ao nie je prítomný alebo je to peptid s jedným až šiestimi aminokyselinovými zvyškami;

192

As je Leu, Nie, Gly alebo D-Pro alebo ekvivalentná aminokyselina k uvedeným aminokyselinám;

Aw je Ala, Asn, Gly, Lys, Asp alebo D-Pro, alebo ekvivalentná aminokyselina k uvedeným aminokyselinám;

Ai₂ je Ala alebo Gly alebo ekvivalentná aminokyselina k uvedeným aminokyselinám;

Aw je Ala, Gly alebo Lys alebo ekvivalentná aminokyselina k uvedeným aminokyselinám;

Aw je Ala, Gly, His, Ser, Asp, Lys alebo D-Pro alebo ekvivalentná aminokyselina k uvedeným aminokyselinám;

Aw je Ala, Gly, lle, D-Pro alebo Leu alebo ekvivalentná aminokyselina k uvedeným aminokyselinám,

A₁₇ je Ala, Asp, Gly, Ser, Lys alebo D-Pro alebo ekvivalentná aminokyselina k uvedeným aminokyselinám;

Aw je Lys alebo ekvivalentná aminokyselina;

A₂o je Arg alebo ekvivalentná aminokyselina k Arg;

Ak je Asp, Lys, Orn alebo Glu alebo ekvivalentná aminokyselina k uvedeným aminokyselinám;

193

A₂4 je Leu alebo ekvivalentná aminokyselina k Leu;

A₂₆ je Lys alebo His alebo ekvivalentná aminokyselina aminokyselinám; A₂7 je Leu alebo Lys alebo ekvivalentná aminokyselina aminokyselinám; A_2B je lle alebo Leu alebo ekvivalentná aminokyselina

k uvedeným k uvedeným k uvedeným aminokyselinám;

A₂g je Ala, Asp, Glu alebo Gin alebo ekvivalentná aminokyselina k uvedeným aminokyselinám;

je lle, Leu alebo Val alebo ekvivalentná aminokyselina k uvedeným aminokyselinám;

Am je His alebo ekvivalentná aminokyselina k His;

Am je Asn alebo Thr alebo ekvivalentná aminokyselina k uvedeným aminokyselinám;

Am je Ala alebo Phe alebo ekvivalentná aminokyselina k uvedeným aminokyselinám;

Am nie je prítomný alebo je to peptid s 1 až 4 aminokyselinami.

40. Peptidová zlúčenina podľa nároku 39 alebo jej farmaceutický prijateľná soľ alebo proliečivo, kde R_1a je H a Y je NH₂.

41. Peptidová zlúčenina podľa nároku 40 alebo jej farmaceutický prijateľná soľ alebo proliečivo, kde X je (a) RiaAi“A₂-A₃“A4-A5-A6^-A7-A8Ag-, (b) RiaA₂-A₃-A4A5-A6-A7-A8“Ag-, alebo (C) Ria-As-Aí-As-Ae-Ay-Ae-Ag-,

194

42. Peptidová zlúčenina podľa nároku 41 alebo jej farmaceutický prijateľná soľ alebo proliečivo, kde

Ai je Ser, Ala, Gly alebo D-Pro;

A₂ je Ala, Val alebo Gly;

A3 je Ala, Ser, Gly alebo D-Pro;

A4 je Glu, Ala alebo Gly;

As je Ile, His, Ala alebo Gly;

Ae je Ala, Gin, Gly alebo D-Pro;

A₇ je Ala, Leu alebo Gly;

Ae je Leu, Nie, Gly alebo D-Pro;

A_g je His, Ala, D-Pro alebo Gly;

A10 je Ala, Asn, Gly, Lys, Asp alebo D-Pro;

An je Ala, Gly, Leu alebo Lys;

Ai₂ je Ala alebo Gly;

A13 je Ala, Gly alebo Lys;

A₁₄ je Ala, Gly, His, Ser alebo D-Pro;

A₁₅ je Ala, Gly, Ile alebo D-Pro;

A₁₆ je Asn, Ala, Gly, D-Pro alebo Gin;

A17 je Ala, Asp, Gly, Ser alebo D-Pro;

Aieje Lys;

Awje Arg alebo Glu;

A₂₀je Arg;

A₂i je Arg alebo Val;

Αζ2 je Asp, Lys, Orn alebo Glu;

A₂₃ je Leu, Phe alebo Trp;

A₂₄ je Leu;

A₂₅ je Arg alebo His;

A^ je Lys alebo His;

A₂₇ je Leu alebo Lys;

A₂₈ je Ile alebo Leu alebo ekvivalentná aminokyselina k uvedeným aminokyselinám;

A_2g je Ala alebo Gin;

A30 je Asp alebo Glu;

Así je Ile, Leu alebo Val;

195

A₃₂je His;

A33 je Asn alebo Thr;

A34 je Ala alebo Phe.

43. Peptidová zlúčenina podľa nároku 42 alebo jej farmaceutický prijateľná soľ alebo proliečivo, kde Aj je Ala, Gly alebo D-Pro; Ae je Nie, A^ je Asp a A₂₇ je Leu.

44. Peptidová zlúčenina podľa nároku 43 alebo jej farmaceutický prijateľná soľ alebo proliečivo, kde X je

Rl aAj-A₂-A3 A4-Αδ-Αβ-Αγ-Αβ^-A9-.

45. Peptidová zlúčenina podľa nároku 1, ktorá je [A^l,Nle⁸tK¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 4), alebo jej farmaceutický prijateľná soľ alebo proliečivo.

46. Farmaceutický prostriedok, vyznačujúci sa tým, že obsahuje peptidovú zlúčeninu podľa nároku 39 alebo jej farmaceutický prijateľnú soľ alebo proliečivo, a farmaceutický prijateľný nosič.

47. Spôsob liečby ochorení spojených s poruchou vápnikového metabolizmu, vyznačujúci sa tým, že pacientovi, ktorý potrebuje takúto terapiu, je podané terapeuticky účinné množstvo peptidovej zlúčeniny podľa nároku 39, alebo jej farmaceutický prijateľné soli alebo proliečivá.

48. Spôsob podľa nároku 47, vyznačujúci sa tým, že uvedeným ochorením spojeným s poruchou vápnikového metabolizmu je hypokalcémia, osteoporóza, osteopénia, hyperparatyroidizmus, hypoparatyroidizmus, glukokortikoidmi a imunosupresívami indukovaná osteopénia, a zlomeniny kostí.

49. Spôsob liečby osteopénie alebo osteoporózy, vyznačujúci sa tým, že pacientovi, ktorý potrebuje takúto terapiu, je podané terapeuticky účinné množstvo peptidovej zlúčeniny podľa nároku 39, alebo jej farmaceutický prijateľné soli alebo proliečivá.

196

50. Spôsob podľa nároku 47, vyznačujúci sa tým, že obsahuje pulzné subkutánne alebo intrapuimonálne podávanie terapeuticky účinného množstva peptidovej zlúčeniny podľa nároku 40, alebo jej farmaceutický prijateľné soli alebo proliečivá.

51. Spôsob podľa nároku 49, vyznačujúci sa tým, že obsahuje pulzné subkutánne alebo intrapuimonálne podávanie terapeuticky účinného množstva peptidovej zlúčeniny podľa nároku 40, alebo jej farmaceutický prijateľné soli alebo proliečivá.

52. Peptidová zlúčenina podľa nároku 1, ktorou je cykloíK^-D²²) [A¹, Nie⁸, K¹⁸, D²², L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 3), alebo jej farmaceutický prijateľná soľ alebo proliečivo.

53. Peptidová zlúčenina podľa nároku 1, ktorou je cyklo(K¹⁸D²²)[A¹,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-34)NH₂ (SEQ ID NO: 46), alebo jej farmaceutický prijateľná soľ alebo proliečivo.

54. Peptidová zlúčenina podľa nároku 1, ktorou je cyklo(K¹⁸D²²)[A^1l10lNle⁸,K¹⁸>D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 12), alebo jej farmaceutický prijateľná soľ alebo proliečivo.

55. Peptidová zlúčenina podľa nároku 1, ktorou je cyklo(K¹⁸D²²)[A¹'¹²,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 14), alebo jej farmaceutický prijateľná soľ alebo proliečivo.

56. Peptidová zlúčenina podľa nároku 1, ktorou je cyklo(K¹⁸D²²)[A¹'¹³,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 15), alebo jej farmaceutický prijateľná soľ alebo proliečivo.

57. Peptidová zlúčenina podľa nároku 1, ktorou je cyklo(K¹⁸D^ÍA'^.N^.K^.D^.L^JhPTHíl-SnNHz (SEQ ID NO: 16), alebo jej farmaceutický prijateľná soľ alebo proliečivo.

197

58. Peptidová zlúčenina podľa nároku 1, ktorou je cyklo(K¹⁸D²²)[A¹-¹⁶,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 18), alebo jej farmaceutický prijateľná soľ alebo proliečivo.

59. Peptidová zlúčenina podľa nároku 1, ktorou je cyklo(K¹⁸D²²)[A¹¹⁷,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 19), alebo jej farmaceutický prijateľná soľ alebo proliečivo.

60. Peptidová zlúčenina podľa nároku 1, ktorou je cyklo(K¹⁸D²²)[A¹IG³,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 22), alebo jej farmaceutický prijateľná soľ alebo proliečivo.

61. Peptidová zlúčenina podľa nároku 1, ktorou je cyklo(K¹⁸D²²)[A¹,G¹³INle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 31), alebo jej farmaceutický prijateľná soľ alebo proliečivo.

62. Peptidová zlúčenina podľa nároku 1, ktorou je cyklo(K¹⁸D²²)[A¹,G¹⁶,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 34), alebo jej farmaceutický prijateľná soľ alebo proliečivo.

63. Peptidová zlúčenina podľa nároku 1, ktorou je cyklo(K¹⁸D²²)[A¹,G¹⁷,Nle⁸,K^ie,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 35), alebo jej farmaceutický prijateľná soľ alebo proliečivo.

64. Peptidová zlúčenina podľa nároku 1, ktorou je cykloíK^-D²²)^P¹,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 36), alebo jej farmaceutický prijateľná soľ alebo proliečivo.

65. Peptidová zlúčenina podľa nároku 1, ktorou je cyklo(D¹⁸K²²)[A^l,Nle⁸,D^1B,K²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 47), alebo jej farmaceutický prijateľná soľ alebo proliečivo.

198

66. Peptidová zlúčenina podľa nároku 1, ktorou je cyklo(K¹⁸E²²)[A¹,Nle⁸,K¹⁸,E²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 50), alebo jej farmaceutický prijateľná soľ alebo proliečivo.

67. Peptidová zlúčenina podľa nároku 1, ktorou je cyklo(O¹⁸E²²)[A¹,Nle⁸,O¹⁸,E²²,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 51), alebo jej farmaceutický prijateľná soľ alebo proliečivo.

68. Peptidová zlúčenina podľa nároku 1, ktorou je cyklo(K¹⁸D²²)[A¹,Nle⁸,K¹⁸,D²²,L²⁷]hPTH(1-30)NH₂ (SEQ ID NO: 52), alebo jej farmaceutický prijateľná soľ alebo proliečivo.

69. Peptidová zlúčenina podlá nároku 1, ktorou je cyklo(K¹⁴D¹⁸)[A¹,Nle⁸,K¹⁴,D¹⁸,L²⁷]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 67), alebo jej farmaceutický prijateľná soľ alebo proliečivo.

70. Peptidová zlúčenina podľa nároku 1, ktorou je cyklo(K¹⁸□^[K^D^jhPTHrPO-S^NHa (SEQ ID NO: 71), alebo jej farmaceutický prijateľná soľ alebo proliečivo.

71. Peptidová zlúčenina podľa nároku 1, ktorou je bicyklo(K¹³-D¹⁷,K¹⁸D²²)[A¹,Nle®,D^17,22,K^l8,L^a7]hPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 73), alebo jej farmaceutický prijateľná soľ alebo proliečivo.

72. Peptidová zlúčenina podľa nároku 1, ktorou je bicykloíK^-D^.K²⁶D^ľA'.N^.K^.D^L^JhPTHÍI-SIJNHz (SEQ ID NO: 74), alebo jej farmaceutický prijateľná soľ alebo proliečivo.

73. Peptidová zlúčenina podľa nároku 1, ktorou je tricykloíK^-D^.K^-D^.K²⁶D³⁰)[A¹,Nle⁸,K¹⁸,D^17,22,L²⁷JhPTH(1-31)NH₂ (SEQ ID NO: 80), alebo jej farmaceutický prijateľná soľ alebo proliečivo.