KR100338684B1 - 세리신의 추출방법 및 그 용도 - Google Patents
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- A61K8/987—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution of animal origin of species other than mammals or birds
Abstract
본 발명은 누에고치를 선별한 다음 완전 건조한 후 건조중량에 대하여 추출 용매로서 물, 완충수용액을 5-40배 부피량을 가한 다음, 냉각 콘덴서가 장치되어 용매가 증발되는 것을 방지한 상태에서 90-130 C, 30분-10시간 가열하여 추출한 후, 메탄올, 에탄올, 아세톤, 아세토니트릴, 테트라하이드로퓨란 또는 이들의 혼합 용매에 침전시켜 탈취한 고형분을 여과, 건조하는 것을 특징으로 하는 세리신 추출방법 및 이 방법에 의해 추출된 세리신 추출물의 항엘라스타제 및 항히아루론라제로서의 용도에 관한 것이다.
Description
본 발명은 세리신의 추출방법 및 그 용도에 관한 것으로, 상세하게는 누에고치로부터 실크 세리신을 추출하는 방법 및 엘라스타제 활성 저해제 및 히아루론라제 활성 저해제로서의 실크 세리신의 용도에 관한 것이다.
피부노화 메카니즘은 자외선이나 외부환경적 요인에 의해 활성 산소나 프리라디칼이 생성 되며,생성된 활성산소나, 프리라디칼에 의해 세포막이 공격을 당하게 되어 피부는 염증(inflammation)이 일어나며, 염증화된(inflammated) 조직은 생리학적 진행 메카니즘에 의해 단백질이나 유전자 물질 등을 파괴 하여 주름 등을 형성하는 피부노화가 일어난다. 피부노화 메카니즘에 관여 되는 단계를 모두 억제, 막아 주는 것이 피부노화를 근본적으로 줄여 줄 수 있다. 상기의 작용을 상세히 설명하면 다음과 같다.
피부에서 엘라스틱 섬유는 콜라겐 섬유와 더불어 진피(epiderm)안쪽에서 가교 결합을 형성한다. 나이가 들어감에 따라 지속적인 자외선 노출이나 피부의 염증반응등과 같은 여러 가지 요인에 의해 섬유아세포로부터 엘라스틴 분해 효소인 엘라스타제 분비작용으로 피부의 탄력이 급격히 저하되고, 함몰(sagging)이 생긴다. 조직학적으로는 염증 세포의 침윤이 증가하며, 엘라스틴 섬유의 결핍과 응집, 콜라겐 섬유의 감소를 보여주며, 생화학적으로는 엘라스타제의 활성도가 현격히 증가한다. 엘라스타제는 엘라스틴을 분해 할 수 있는 지금까지 알려진 유일한 효소이며, 이에 대한 저해는 피부 노화를 근본적으로 줄여 줄 수 있다. 피부 노화를 지연시키기 위하여 종래에는 보습제, 항염증제, 엘라스틴 및 콜라겐 가교 결합이 파괴되어 있는 조직에 영양 및 첨가제 등을 화장료에 배합하는 방법이 이용되고 있는데, 이는 근본적으로 노화를 지연시키는데는 한계가 있는 실정이다. 따라서 피부 탄력을 유지 시키는 엘라스틴 및 콜라겐의 분해를 근본적으로 저해시키는 저해제가 요구되고 있는 실정이다. 종래의 노화 방지 효과를 갖는 원료가 근본적으로 저해하지 못하는 단점으로 인하여 새로운 기능성 물질들을 찾고자 시도되고 있다. 특히, 종래의 동물성 추출물인 콜라겐과 엘라스틴과 유사한 구조를 가진 합성 펩타이드 유도체 등이 사용되고 있으나, 안전성 및 안정성, 그 효과를 충분히 나타내지 못하고 있는 단점으로 인하여 새로운 기능성 물질들을 찾는 노력이 시도되고 있다.
히아루론라제 작용에 대해서 상세히 설명하면, 히아루론라제는 생체중에 ??게 분포하며, 피부에도 존재하는 효소이며, 히아루론산을 분해한다. 히아루론산은 β-D-N-acetylglucosamine 과 β-D-glucouronic acid이 서로 결합한 직쇄상의 고분자 다당이며, 글루코 아미노 글루칸(GAG)의 일종이다. 결합 조직내의 히아루론산의 작용으로는 세포가 수분을 보유하며, 조직내의 메트릭스를 형성하여 세포가 수분을 보유하게 된다. 히아루론산은 나이가 먹음에 따라 감소하고, 그 결과 수분 보유능이 저하되어 노화를 일으킨다. 따라서 히아루론산을 분해하는 히아루론라제의 활성을 억제 하는 것은 제재에 사용 되고 있는 히아루론산의 안정성이나 피부에 도포한 후의 제형에서의 히아루론산 및 피부에 존재하는 히아루론산의 안정성에 기여한다.
본 발명은 이러한 견지에서, 자연의 여러 가지 천연물질들 중에서 노화예방에 유효한 물질을 검색한 결과, 누에고치로부터 추출한 추출물이 매우 우수한 엘라스타제 저해 작용, 히아루론라제 저해작용 등의 효능을 나타냄을 발견하였으며 안정성, 안전성 문제를 동시에 해결하였다.
그러나, 기존의 누에고치로부터 추출된 실크 세리신(한국특허공개공보 제95-5839 호)은 매우 혐오스런 이취를 냄으로 인하여 화장품 첨가제로 사용하는데 큰 문제점이 있었다.
또, 산화방지제나 티로시나제 저해제로서의 세리신의 이용에 관한 기술은 이미 개발(한국 특허 공개공보 제 98-042150 호)되어져 있는 실정이나 엘라스타제 저해제나 히아루론라제 저해제로서의 용도는 공지되어 있지 아니하였다.
따라서, 본 발명의 목적은 이취가 나지 않는 실크 세리신 추출물 및 그 제조방법을 제공하는데 있다.
본 발명의 다른 목적은 신규의 항엘라스타제 및 항히아루론라제를 제공하는데 있다.
상기, 본 발명의 목적은 누에고치를 선별한 다음 완전 건조한 후 건조중량에 대하여 추출 용매로서 물, 완충수용액을 5-40배 부피량을 가한 다음, 냉각 콘덴서가 장치되어 용매가 증발되는 것을 방지한 상태에서 90-130 C, 30분-10시간 가열하여 추출한 후, 메탄올, 에탄올, 아세톤, 아세토니트릴, 테트라하이드로퓨란 또는 이들의 혼합 용매에 침전시켜 탈취한 고형분을 여과, 건조하는 것을 특징으로 하는 세리신 추출방법에 의해 달성된다.
본 발명의 목적은 또한, 세리신을 항엘라스타제 및 항히아루론라제로서 이용하는 것에 의해 달성된다.
이하 본 발명을 상세하게 설명한다.
누에는 한국, 중국 및 동구권 등에서 견사를 수급할 목적으로 다량 양식하고 있으며 우리나라에서는 1960년대 부터 대량으로 양식하여 왔으나 근래에는 견사의 대부분을 수입에 의존하고 있는 실정이다. 본 발명에 사용된 누에고치는 순수 국내산 누에고치로서 출각견에 해당되며 이를 멸균하여 물, 또는 완충수용액에서 일정 비율로 추출한후 메탄올, 에탄올, 아세톤, 아세토니트릴, 테트라하이드로퓨란 또는 이들의 혼합 용매에 침전하여 고형분을 얻는다. 화장료 조성물에 혼합할 경우에는 다시 정제수에 일정량 용해시켜 사용한다. 이 추출물을 화장료, 다시 말하면 영양화장수(로숀), 영양크림, 맛사지 크림, 엣센스, 팩, 유화형 화운데이션 등에 첨가하는 것이다.
즉, 일차로 누에고치를 선별한 다음 완전 건조한 후 건조중량에 대하여 추출 용매로서 물, 완충수용액을 5-40배 부피량을 가한다. 추출 방법으로는 냉각 콘덴서가 장치되어 용매가 증발되는 것을 방지한 상태에서 90-130 C, 30분-10시간 가열하여 추출한다. 추출물을 메탄올, 에탄올, 아세톤, 아세토니트릴, 테트라하이드로퓨란 또는 이들의 혼합 용매에 침전하여 탈취한 고형분을 여과, 건조한다. 고형분을 정제수에 0.1-10% 농도로 다시 용해시켜 얻은 추출물을 중량%로 0.1-5%, 바람직하게는 0.5-2%의 양으로 화장료에 첨가하는 것이다.
아래의 실시예 및 실험 예는 본 발명의 내용을 설명하나, 본 발명의 내용이 여기에 한정되지는 않는다.
실시예 1.
누에고치 100g을 완전 건조시킨 다음 정제수 20kg에 넣고 냉각 콘덴서가 달린 추출기에서 5시간 끓여서 추출한 후 400메쉬 여과포로 여과하고 상온으로 냉각한 후 에탄올 20L에 침전한후 여과하여 10g의 고형분을 얻은 후 다시 물에 용해시켜 0.45μm의 필터로 여과하여 1kg의 수용액을 얻었다.
실시예 2.
누에고치 100g을 완전 건조시킨 다음 정제수 20kg에 넣고 냉각 콘덴서가 달린 추출기에서 5시간 끓여서 추출한 후 400 메쉬 여과포로 여과하고 상온으로 냉각한 후 메탄올 20L에 침전한후 여과하여 10g의 고형분을 얻은 후 다시 물에 용해시켜 0.45μm의 필터로 여과하여 1kg 의 수용액을 얻었다.
실시예 3.
누에고치 100g을 완전 건조시킨 다음 0.2M 인산염 완충액 20kg에 넣고 냉각 콘덴서가 달린 추출기에서 3시간 끓여서 추출한 후 400 메쉬 여과포로 여과하고 상온으로 냉각한 후 에탄올 20L에 침전한후 여과하여 15g의 고형분을 얻은 후 다시물에 용해시켜 0.45μm의 필터로 여과하여 1.5kg 의 수용액을 얻었다.
실시예 4.
누에고치 100g을 완전 건조시킨 다음 0.2M 인산염 완충액 20kg에 넣고 냉각 콘덴서가 달린 추출기에서 3시간 끓여서 추출한 후 400 메쉬 여과포로 여과하고 상온으로 냉각한 후 메탄올 20L에 침전한후 여과하여 15g의 고형분을 얻은 후 다시 물에 용해시켜 0.45μm의 필터로 여과하여 1.5kg 의 수용액을 얻었다.
실시예 5.
누에고치 100g을 완전 건조시킨 다음 정제수 20kg에 넣고 냉각 콘덴서가 달린 추출기에서 3시간 끓여서 추출한 후 400 메쉬 여과포로 여과하고 상온으로 냉각한 후 아세톤 20L에 침전한후 여과하여 8g의 고형분을 얻은 후 다시 물에 용해시켜 0.45μm의 필터로 여과하여 8kg 의 수용액을 얻었다.
실시예 6.
누에고치 100g을 완전 건조시킨 다음 정제수 20kg에 넣고 냉각 콘덴서가 달린 추출기에서 3시간 끓여서 추출한 후 400 메쉬 여과포로 여과하고 상온으로 냉각한 후 아세토나이트릴 20L에 침전한후 여과하여 15g의 고형분을 얻은 후 다시 물에 용해시켜 0.45μm의 필터로 여과하여 1.5kg 의 수용액을 얻었다.
실시예 7.
누에고치 100g을 완전 건조시킨 다음 정제수 20kg에 넣고 냉각 콘덴서가 달린 추출기에서 3시간 끓여서 추출한 후 400 메쉬 여과포로 여과하고 상온으로 냉각한 후 테트라하이드로퓨란 20L에 침전한후 여과하여 15g의 고형분을 얻은 후 다시 물에 용해시켜 0.45μm의 필터로 여과하여 1.5kg 의 수용액을 얻었다.
처방예 1.
세리신 수용액을 함유한 화장료중 영양 화장수의(로숀)의 처방예는 다음과 같다.
여기서 세리신 수용액은 실시예 1의 것을 사용 하였다.
| 원 료 | 중 량 부 |
| 세리신 수용액 | 1.0 |
| 밀납 | 4.0 |
| 폴리솔베이트 60 | 1.5 |
| 솔비탄세스퀴올레이트 | 0.5 |
| 유동파라핀 | 5.0 |
| 스쿠알란 | 5.0 |
| 카프릴릭/카프릭트리글리세라이드 | 5.0 |
| 글리세린 | 3.0 |
| 부틸렌글리콜 | 3.0 |
| 프로필렌글리콜 | 3.0 |
| 카르복시비닐폴리머 | 0.1 |
| 트리에탄올아민 | 0.2 |
| 방부제 | 미량 |
| 색소 | 미량 |
| 향료 | 미량 |
| 정제수 | 잔량 |
처방예 2
세리신 수용액을 함유한 화장료중 영양크림의 처방예는 다음과 같다.
여기서 세리신 수용액은 실시예 1의 것을 말한다.
| 원 료 | 중 량 부 |
| 세리신 수용액 | 1.0 |
| 밀납 | 10.0 |
| 폴리솔베이트 60 | 1.5 |
| 솔비탄세스퀴올레이트 | 0.5 |
| 유동파라핀 | 10.0 |
| 스쿠알란 | 5.0 |
| 카프릴릭/카프릭트리글리세라이드 | 5.0 |
| 글리세린 | 5.0 |
| 부틸렌글리콜 | 3.0 |
| 프로필렌글리콜 | 3.0 |
| 트리에탄올아민 | 0.2 |
| 방부제 | 미량 |
| 색소 | 미량 |
| 향료 | 미량 |
| 정제수 | 잔량 |
처방예 3.
세리신 수용액을 함유한 화장료중 맛사지 크림의 처방예는 다음과 같다.
여기서 세리신 수용액은 실시예 1의 것을 말한다.
| 원 료 | 중 량 부 |
| 세리신 수용액 | 1.0 |
| 밀납 | 10.0 |
| 폴리솔베이트 60 | 1.5 |
| 솔비탄세스퀴올레이트 | 0.8 |
| 유동파라핀 | 40.0 |
| 스쿠알란 | 5.0 |
| 카프릴릭/카프릭트리글리세라이드 | 4.0 |
| 글리세린 | 5.0 |
| 부틸렌글리콜 | 3.0 |
| 프로필렌글리콜 | 3.0 |
| 트리에탄올아민 | 0.2 |
| 방부제 | 미량 |
| 색소 | 미량 |
| 향료 | 미량 |
| 정제수 | 잔량 |
처방예 4.
세리신 수용액을 함유한 화장료중 팩의 처방예는 다음과 같다.
여기서 세리신 수용액은 실시예 1의 것을 말한다.
| 원 료 | 중 량 부 |
| 세리신 수용액 | 1.0 |
| 폴리비닐알콜 | 13.0 |
| 소듐카르복시메틸셀룰로스 | 0.2 |
| 알란토인 | 0.1 |
| 에탄올 | 5.0 |
| 노닐페닐에테르 | 0.3 |
| 방부제 | 미량 |
| 색소 | 미량 |
| 향료 | 미량 |
| 정제수 | 잔량 |
처방예 5
세리신 수용액을 함유한 화장료중 유화형 화운데이션의 처방예는 다음과 같다.
여기서 세리신 수용액은 실시예 1의 것을 말한다.
| 원 료 | 중 량 부 |
| 세리신 수용액 | 1.0 |
| 밀납 | 2.0 |
| 사이크로메치콘 | 2.0 |
| 유동파라핀 | 5.0 |
| 스쿠알란 | 5.0 |
| 스테아린산 | 2.0 |
| 카프릴릭/카프릭트리글리세라이드 | 4.0 |
| 글리세린 | 4.0 |
| 프로필렌글리콜 | 3.0 |
| 부틸렌글리콜 | 3.0 |
| 트리에탄올아민 | 1.0 |
| 알루미늄마그네슘실리케이트 | 0.5 |
| 안료 | 12 |
| 방부제 | 미량 |
| 색소 | 미량 |
| 향료 | 미량 |
| 정제수 | 잔량 |
실험예 1.
상기 세리신 수용액 1-7 에 대하여 엘라스타제 저해 효과를 측정하였다.
1) 실험 방법
엘라스타제는 돼지 췌장으로부터 추출된 것으로 시그마(Sigma)사의 것을 사용하였다. 췌장 엘라스타제에 의한 합성 팹티드 기질(Sigma)의 가수분해에 근거한시험법으로 광파장 410㎚에서의 단위 시간당의 4-나이트로아닐린의 방출량의 증가를 엘라스타제의 촉매 활성치로 하였다. 먼저 기질 용액을 200㎕씩 시험관에 넣고, 트리스 완충용액과 증류수를 가한다. 각 세리신 수용액 0.3㎖의 시료액을 반응액에 넣은 뒤 37℃ 항온조에서 10분 동안 반응 시킨다.
이때 대조군은 각 실크세리신 수용액 대신 용매만을 0.3㎖씩을 넣고 분광분석계로 파장 410㎚에서의 흡광도를 측정한다. 각 추출물의 엘라스타제 저해 효과는 다음의 공식으로 구한다.
엘라스타제 저해율(%) = [ 1 - ( 각 실크세리신 수용액의 효소 활성도/대조군의 효소 활성도) ] X 100
결과를 하기 표 1에 게재하였다.
표 1. 세리신 수용액에 대한 엘라스타제 저해효과
| 실 시 예 | 반응액중에 함유시킨 세리신 수용액의 최종 농도(㎍/㎖) | 엘라스타제 저해율(%) |
| 실시예 1 | 15 7.5 | 100 50 |
| 실시예 2 | 15 7.5 | 100 57 |
| 실시예 3 | 15 7.5 | 100 48 |
| 실시예 4 | 15 7.5 | 100 35 |
| 실시예 5 | 15 7.5 | 100 66 |
| 실시예 6 | 15 7.5 | 100 70 |
| 실시예 7 | 15 7.5 | 100 53 |
실험예 2.
상기 세리신 수용액 1-7의 세리신 수용액에 대하여 히아루론라제 저해 효과를 측정 하였다.
1) 실험 방법.
히아루론라제(시그마, 타입4)을 사용하여 콤파운드 48/80에 의한 불활성형 효소의 활성화 단계의 저해작용을 중심으로 측정했다. 세리신 수용액 시료를 0.1 M 아세트산 완충용액( pH 4.0) 100 ml에 용해해서 시험관에 넣고, 아세트산 완충용액 50 ml에 용해한 효소 0.1 mg을 가해 37도에서 20분간 방치시킨다. 최후로 아세드산 완충용액 250 ml에 녹인 히아루론산나트륨 200 mg을 가해 37도에서 40분간 방치시킨후 0.4 몰 수산화나트륨 100 ml를 가해 냉각후 붕소산 완충용액(pH 9.1) 100 ml을 가해 37도에서 20분간 항온 시킨 후 585 nm에서 흡광도를 측정한다. 대조로는 세리신 시료용액에 아세트산 완충용액을 사용한다. 대조 시험의 흡광도와 세리신 수용액 함유 흡광도의 비에서 100을 곱하여 저해효과를 ( % )로 나타내었다.
결과를 하기 표 2에 게재하였다.
표 2. 세리신 수용액에 대한 히아루론라제 저해효과
| 실 시 예 | 반응액중에 함유시킨 세리신 수용액의 최종 농도(㎍/㎖) | 히아루론라제 저해율(%) |
| 실시예 1 | 20 10 | 90 42 |
| 실시예 2 | 20 10 | 83 44 |
| 실시예 3 | 20 10 | 68 32 |
| 실시예 4 | 20 10 | 95 48 |
| 실시예 5 | 20 10 | 81 40 |
| 실시예 6 | 20 10 | 80 34 |
| 실시예 7 | 20 10 | 77 35 |
실험예 3.
1) 실험방법
피부탄력성에 대한 세리신 수용액의 영향을 실험하기 위해 20명의 왼쪽눈 가장자리에 하루에 두번 적용하였다. 처리하지 않은 오른쪽 눈 가장자리는 대조군으로 사용하였다. 세리신 수용액 함유 화장료를 처리하기 전과 처리하고난 14일 후 피부 표면의 피부 탄력성을 Corneometer CM80과 Cutometer SEM 474에 의해 측정 하였다. Corneometer CM 820에 의한 피부 보습 측정은 대조군에 비해 증가한 보습력 값을 %로 나타내었으며, 피검자 20명의 평균값을 결과에 나타내었다. Cutometer SEM 474에 의한 피부 탄력도 측정은 주름의 깊이를 측정하는 것으로서, 값이 적을수록 탄력성이 좋은 것이다. 탄력도 값은 대조군에 비해 감소한 값을 %로 나타내었으며, 피검자 20명의 평균값을 결과에 나타 내었다.
2) 실험 결과
표 3. 세리신 수용액의 피부 표면 보습 및 탄력도 증가 효과
| 처 방 예 | 피부보습효과(%) | 피부 탄력도 효과(%) |
| 처방예 1 | 30 | 37 |
| 처방예 2 | 33 | 38 |
| 처방예 3 | 40 | 49 |
| 처방예 4 | 29 | 35 |
| 처방예 5 | 34 | 40 |
본 발명에서 얻어진 세리신 수용액을 화장료 조성물에 일정농도 이상 배합하여 사람 피부에 직접 도포한 실험 결과에서도 뚜렷한 피부 탄력 및 노화로 기인한 피부상태가 개선되는 효과를 발휘하게 됨을 발견하게 되었다.
본 발명의 방법에 의해 추출된 세리신 추출물은 종래 방법에 의해 추출된 세리신 추출물과 달리 이취가 나지 않았으며, 세리신 수용액은 엘라스타제 활성저해효과, 히아루론라제 활성저해효과가 우수하였다. 따라서, 피부의 보습 및 탄력성 증가에 유효한 화장료 첨가제로 이용할 수 있다.
Claims (7)
- 누에고치로부터 추출한 실크 세리신을 유효성분으로 하는 항엘라스타제.
- 삭제
- 누에고치로부터 추출한 실크 세리신을 유효성분으로 하는 항히아루론라제.
- 누에고치를 선별한 다음 완전 건조한 후 건조중량에 대하여 추출 용매로서 물, 완충수용액을 5-40배 부피량을 가한 다음, 냉각 콘덴서가 장치되어 용매가 증발되는 것을 방지한 상태에서 90-130C, 30분-10시간 가열하여 추출한 후, 메탄올, 에탄올, 아세톤, 아세토니트릴, 테트라하이드로퓨란 또는 이들의 혼합 용매에 침전시켜 탈취한 고형분을 여과, 건조하는 것을 특징으로 하는 실크 세리신의 추출방법.
- 누에고치를 선별한 다음 완전 건조한 후 건조중량에 대하여 추출 용매로서 물, 완충수용액을 5-40배 부피량을 가한 다음, 냉각 콘덴서가 장치되어 용매가 증발되는 것을 방지한 상태에서 90-130 C, 30분-10시간 가열하여 추출한후, 메탄올, 에탄올, 아세톤, 아세토니트릴, 테트라하이드로퓨란 또는 이들의 혼합 용매에 침전시켜 탈취한 고형분을 여과, 건조시켜 얻은 실크 세리신의 수용액을 함유한 노화방지 화장료 조성물.
- 제 5 항에 있어서, 세리신 수용액의 농도는 0.1-10중량%인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
- 제 6 항에 있어서, 상기 세리신 수용액을 0.1-5중량%의 양으로 함유함을 특징으로 하는 화장료 조성물.
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| KR1019990006533A KR100338684B1 (ko) | 1999-02-26 | 1999-02-26 | 세리신의 추출방법 및 그 용도 |
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| KR1019990006533A KR100338684B1 (ko) | 1999-02-26 | 1999-02-26 | 세리신의 추출방법 및 그 용도 |
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| KR20220023433A (ko) | 2020-08-21 | 2022-03-02 | (주)오렌지다이텍 | 무약제 정련 고농축 세리신 회수방법 |
| KR20220092085A (ko) | 2020-12-24 | 2022-07-01 | (주)오렌지다이텍 | 저분자화된 세리신의 무약제 정련 고농축 회수방법 |
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