KR102016092B1 - 천연 추출물과 세포 배양액을 포함하는 주름개선용 화장료 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은, 황금누에고치추출물 및/또는 가시연꽃종자추출물을 포함하는 전연추출물과 확정세포배양액 4의 주름개선효과를 검증함으로써, 주름개선에 효과가 있는 화장료 조성물을 제공하기 위한 것으로, 상기 화장료 조성물은 세포배양액인 확정세포배양액 4와 천연추출물을 포함하는 것을 특징으로 한다.

Description

천연 추출물과 세포 배양액을 포함하는 주름개선용 화장료 조성물{Cosmetic Composition For Improving Wrinkles Containing Natural Extracts and Culture Media}

본 발명은, 천연 추출물과 세포 배양액을 포함하는 주름개선용 화장료 조성물로서, 상세하게는 황금누에고치로부터 추출한 골드세리신 및/또는 가시연꽃의 종자로부터 추출한 가시연꽃종자추출을 포함하는 천연추출물과 확정세포배양 4(Defined Cell Culture Media 4)를 포함하여 피부의 주름개선에 효과가 있는 주름개선용 화장료 조성물에 관한 것이다.

종래의 마스크팩은 주로 피부 진정이나 보습 기능에서 출발하여 최근에는 다양한 기능성 성분이나 천연추출물을 포함하면서 피부 진정이나 보습뿐만 아니라 미백, 노화방지, 주름개선 등의 기능성을 포함하고 있다.

예를 들어, 한국공개특허 제10-2017-0047514호 공보(이하, "특허문헌 1"이라 함)는 '그라비올라 항균 추출물을 함유하는 피부 주름 개선용 마스크 화장료 조성물 및 그 제조방법'을 개시하고 있고, 한국등록특허 제10-1754645호 공보(이하, "특허문헌 2"라 함)는 '바다제비집 복합 발효 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부주름 개선용 조성물, 이를 이용한 피부주름 개선용 패치, 및 마스크 팩'을 개시하고 있으며, 또한, 한국등록특허 제10-1774408호 공보(이하, "특허문헌 3"이라 함)는 '산양산삼, 사탕수수, 감 및 그라비올라 추출물을 포함하는 천연성분 물질을 사용한 피부 주름 개선용 노인용 화장료 조성물 및 이를 이용한 마스크팩 시트'을 개시하고 있다.

한편, 대한화장품협회에 화장품 성분으로 등록되어 있는 "확정세포배양액 4(Defined Cell Culture Media 4)"는, 알라닌, 알지닌, 아스파라진, 아스파틱애씨드, 바이오틴, 칼슘클로라이드, 칼슘판토테네이트, 카퍼설페이트, 사이아노코발라민, 시스테인에이치씨엘, 다이소듐포스페이트,페러스설페이트, 폴릭애씨드, 글루코오스, 글루타믹애씨드, 글라이신, 히스티딘에이치씨엘, 이노시톨, 아이소류신, 류신, 리놀레익애씨드, 리놀레닉애씨드, 라이신, 마그네슘클로라이드, 마그네슘설페이트, 메티오닌, 나이아신아마이드, 페닐알라닌, 프롤린, 피리독신에이치씨엘, 리보플라빈, 세린, 소듐바이카보네이트, 소듐클로라이드, 소듐포스페이트, 소듐파이루베이트, 티아민에이치씨엘, 티옥틱애씨드, 트립토판, 타이로신, 발린 및 징크설페이트으로 구성된 세포배양액으로, 피부보호제, 피부컨디셔닝제(수분차단제)로 사용되기 위해 배합되는 것으로 표시되어 있으나, 확정세포배양액 4가 주름개선 등의 기능성이 있는지에 대해서는 아직 연구된 바가 없다.

또한, 황금누에고치는 농촌진흥청이 일본종계 잠311(JS169)과 중국종계 잠312(CS186)을 교잡하여 육성한 품종인 "골든실크"에 의해 지어진 황색 고치를 말한다. 이러한, 상기 황금누에고치는 원래 염색이 필요없는 천연 황색실크 생산용으로 육종된 것이나, 최근 황금누에고치는 일반 누에고치보다 세리신을 더 많이 포함하고 있는 것으로 알려져 황금누에고치 추출물을 기능성 화장품의 원료로 사용 가능성에 대한 연구가 이루어지고 있다.

예를 들어, 한국등록특허 제10-1704617호 공보(이하, "특허문헌 4"라 함)는 '황금누에고치 유래 펩타이드를 유효성분으로 함유하는 피부미백용 화장료 조성물'에 대해 개시하고 있고, 한국등록특허 제10-1457372호 공보(이하, "특허문헌 5"라 함)는 '황금누에고치 추출물을 함유한 모발 및 두피상태 개선용 화장료조성물'에 대해 개시하고 있으나, 아직 황금누에고치 추출물이 주름개선용 화장료 조성물로서 효과가 있는지에 대해 정확하게 검증된 바가 없다.

또한, 가시연꽃(Euryale Ferox)은 수련과에 속하는 한해살이 남방계 수생식물로 중부 이남의 오래된 연못, 저수지, 호수에 서식하며, 잎과 줄기, 열매 식물체 대부분이 가시로 덮여 있다. 가시연꽃의 열매는 익으면 검게 변하며 씨앗은 말려서 약용하거나 식용하는데, 한방에서는 가시연꽃의 열매를 감실(嵌實) 또는 감인(嵌仁)이라고 하고 열매 속의 씨를 가을에 말린 것을 감인(嵌仁) 또는 검인(검仁)이라고 부르며, 말린 씨는 한방에서 설사를 멎게 하거나 허리와 무릎이 저리고 아픈 것을 치료하는데 쓰여 왔다.

가시연꽃 종자는 단백질 4.4%, 지방 0.2%, 탄수화물 32%로 되어있고 무기물로 칼륨, 인, 철 그리고 비타민B2, 비타민C 등도 함유되어 있는 것으로 알려져 있으며, 화장품 성분으로 가시연꽃씨추출물(Euryale Ferox Seed Extract)이 등록되어 있으나 산화방지제로 배합되는 것으로 기재되어 있을 뿐, 가시연꽃종자추출물의 화장품 성분으로서의 기능적 특성에 대한 연구는 거의 이루어지지 않고 있다.

한국공개특허 제10-2017-0047514호 공보 한국등록특허 제10-1754645호 공보 한국등록특허 제10-1774408호 공보 한국등록특허 제10-1704617호 공보 한국등록특허 제10-1457372호 공보

본 발명은, 상기와 같은 종래의 문제점을 감안한 것으로, 황금누에고치추출물과 가시연꽃종자추출물을 포함하는 전연추출물과 확정세포배양액 4의 주름개선효과를 검증함으로써, 주름개선에 효과가 있는 주름개선용 화장료 조성물을 제공하기 위한 것이다.

본 발명에 의한 주름개선용 화장료 조성물은 세포배양액인 확정세포배양액 4와 천연추출물을 포함하는 것을 특징으로 한다,

또한, 본 발명에 의한 주름개선용 화장료 조성물에서, 상기 천연추출물은 황금누에고치로부터 추출한 골드세리신을 포함하는 것을 특징으로 한다,

또한, 본 발명에 의한 주름개선용 화장료 조성물에서, 상기 골드세리신은 상기 확정세포배양액 4의 1L에 대해 3g 내지 10g의 비율로 포함되는 것을 특징으로 한다

또한, 본 발명에 의한 주름개선용 화장료 조성물에서, 상기 천연추출물은 황금누에고치로부터 추출한 골드세리신과 가시연꽃의 종자로부터 추출한 가시연꽃종자추출물을 포함하는 것을 특징으로 한다.

또한, 본 발명에 의한 주름개선용 화장료 조성물에서, 상기 천연추출물은 상기 골드세리신과 가시연꽃종자추출물은 중량비 1:1로 혼합하되, 혼합된 상기 골드세리신과 가시연꽃종자추출물은 상기 확정세포배양액 4의 1L에 대해 3g 내지 10g의 비율로 포함되는 것을 특징으로 한다.

본 발명에 의하면, 세포배양액인 확정세포배양액 4는 주름개선용 화장료의 원료로 이용될 수 있다.

또한, 본 발명에 의하면, 세포배양액인 확정세포배양액 4와 황금누에고치로부터 추출한 골드세리신을 혼합하여 주름개선용 화장료의 원료로 이용할 수 있다.

또한, 본 발명에 의하면, 세포배양액인 확정세포배양액 4와 황금누에고치로부터 추출한 골드세리신 및 가시연꽃의 종자로부터 추출한 가시연꽃종자추출물을 혼합하여 주름개선용 화장료의 원료로 이용할 수 있다.

이하에서, 본 발명의 구체적인 실시예에 대해 상세히 설명한다.

본 발명에 의한 주름개선용 화장료 조성물은 세포배양액인 확정세포배양액 4와 천연추출물을 포함한다.

이때, 상기 천연추출물은 황금누에고치로부터 추출한 골드세리신을 포함하거나, 황금누에고치로부터 추출한 골드세리신 및 가시연꽃의 종자로부터 추출한 가시연꽃종자추출물을 포함한다.

또한, 상기 천연추출물이 상기 골드 세리신만을 포함하는 경우, 상기 골드세리신은 상기 확정세포배양액 4의 1L에 대해 3g 내지 10g의 비율로 포함하는 것이 바람직하다.

또한, 상기 천연추출물이 상기 골드 세리신 및 가시연꽃종자추출물을 혼합하여 포함하는 경우, 상기 골드세리신과 가시연꽃종자추출물을 중량비 1:1로 혼합하되, 혼합된 상기 골드세리신과 가시연꽃종자추출물은 상기 확정세포배양액 4의 1L에 대해 3g 내지 10g의 비율로 포함하는 것이 바람직하다.

[DCCM 4의 조성]

본 발명의 실시예에서 사용되는 DCCM 4를 조성하는 성분 및 함량은 다음과 같으며, 완성된 배양액의 pH는 7.2-7.6 사이를 유지하며, 삼투압은 280~320 mOsmol 사이를 유지하도록 하였다.

성분의 명칭 함량(g/1L)

소듐클로라이드(Sodium chloride) 6.575900

소듐바이카보네이트(Sodium hydrogen carbonate) 2.225600

다이소듐포스페이트(Disodium Phosphate) 0.300000

칼슘클로라이드(Calcium chloride dihydrate) 0.214500

마그네슘설페이트(Magnesium sulfate) 0.052800

소듐포스페이트(Sodium Phosphate) 0.121500

마그네슘클로라이드(Magnesium chloride) 0.028600

징크설페이트(Zinc sulfate) 0.000645

페러스설페이트(Ferric sulfate) 0.001225

카퍼설페이트(Cupric sulfate) 0.000002

글루코오스(D-glucose) 1.500000

소듐파이루베이트(Sodium pyruvate) 0.330000

알지닌(L-arginine) 0.147500

타이로신(L-tyrosine) 0.067080

라이신(L-lysine) 0.091250

류신(L-leucine) 0.070800

아이소류신(L-isoleucine) 0.065400

리놀레익애씨드(Linoleic acid) 0.064200

발린(L-valin) 0.063420

페닐알라닌(L-phenylalanine) 0.042600

히스티딘에이치씨엘(Histidine HCl) 0.037800

세린(L-serine) 0.031500

글라이신(Glycine) 0.022500

시스테인에이치씨엘(Cysteine HCl) 0.058800

메티오닌(L-methionine) 0.020700

프롤린(L-proline) 0.020700

이노시톨(i- Inositol) 0.015120

트립토판(L-tryptophane) 0.010800

아스파라진(L-asparagine-monohydrate) 0.009000

글루타믹애씨드(L-glutamic acid) 0.008820

아스파틱애씨드(L-asparatic acid) 0.007800

알라닌(L-alanine) 0.005340

폴릭애씨드(Folic acid) 0.003975

칼슘판토테네이트(D-calcium pantothenate) 0.003375

티아민에이치씨엘(Thiamine HCl) 0.003225

피리독신에이치씨엘(Pyridoxine HCl) 0.003045

나이아신아마이드(Niacinamide) 0.003030

사이아노코발라민(Vitamine B12) 0.001050

리보플라빈(Rivoflavin) 0.000330

티옥틱애씨드(Thioctic acid) 0.000158

리놀레닉애씨드(Linoleic acid) 0.000060

바이오틴(D-biotin) 0.000006

[황금누에고치로부터 골드세리신의 추출]

농촌진흥청에서 수매하여 세절한 황금누에고치와 증류수를 1:30(중량비)로 혼합하여 완전히 침지시킨 상태에서 100℃에서 2시간 동안 열수 추출하여 황금누에고치로부터 골드세리신을 추출하였다.

열수추출에 의하여 추출된 골드세리신이 포함된 수용액에 세리신 1g당 플라보자임 효소 80㎎의 비율로 혼합한 후 37℃에서 6시간 동안 가수분해시켰으며, 상기 플라보자임 효소에 의해 가수분해된 골드세리신 수용액을 분획분자량 4,000을 갖는 관형 한외여과막을 이용한 분리공정을 거쳐 농축하고, 농축된 골드세리신 수용액을 -4℃ 이하의 냉동실에서 일정시간 냉동과정을 거친 후에 해동시키는 방법으로 골드세리신 분말을 수득하였다.

[가시연꽃종자추출물의 추출]

가을에 채취하여 건조된 가시연꽃 종자를 미세 분쇄 후 80%(v/v) 메탄올 수용액에 실온에서 일주일 동안 침적시켜 추출한 후, 여과하고 감압 농축하였으며, 농축된 가시연꽃 종자 추출물을 -4℃ 이하의 냉동실에서 일정시간 냉동과정을 거친 후에 해동시키는 방법으로 분말화 하였다.

<실험예>

(1) 시료의 제조

상기 DCCM 4의 조성에 의해 제조된 시료(이하, "실시예 1"이라 함,)와, 상기 DCCM 4의 1L에 상기 방법으로 추출된 골드세리신를 3g, 5g, 10g을 각각 첨가한 3종의 시료((이하, "실시예 2", "실시예 3", "실시예 4"라 함,)와, 상기 방법으로 추출된 골드세리신과 가시연꽃종자추출물을 1:1의 중량비로 혼합하여 상기 DCCM 4의 1L에 3g, 5g, 10g을 각각 첨가한 3종의 시료((이하, "실시예 5", "실시예 6", "실시예 7"이라 함,)를 제조하였다.

(2) 섬유아세포 증식능 측정

피부에 노화가 진행되면 진피의 변화가 현저하게 나타나며, 진피의 변화는 섬유아세포(Normal Human Dermal Fibroblast)의 숫자와 이들의 합성 능력의 감소로 인하여 세포 외 기질 중 큰 분자량을 가진 물질들의 변화로 발생된다. 본 실험에서는 주름개선 효과를 측정하기 위해 인간의 피부 섬유아세포를 이용하여 섬유아세포 증식능을 측정하였다.

구체적으로 줄기세포화장품이나 피부세포배양 시 가장 널리 상용화된 배지로 알려져 있는 DMEM(Dulbecco’s modified Eagle’s medium) 배양액을 대조군으로 하고, 상기 실시예 1 내지 7을 실험군으로 하였으며, 각 배양액 5ml에 각각 1x10⁴ cells의 섬유아세포를 T25 플라스크에 넣고 37℃, 5% CO₂, 배양기에서 24시간과 48시간 배양 후 트립신-이디티에이(trypsin-EDTA) 용액을 이용하여 모든 세포를 수획하여 계수하였다.

<대조군 대비 배양세포 증가율(단위: %)>

시간	실시예 1	실시예 2	실시예 3	실시예 4	실시예 5	실시예 6	실시예 7
24h	108.9	110.1	120,2	130.2	117,1	124,1	138,4
48h	125.2	127,2	132.1	152.7	129,2	136.2	157.7

위의 [표 1]에서 보는 바와 같이, 실시예 1 내지 7에서, 모두 대조군에 비해 세포증식 촉진효과가 있는 것으로 나타났다.

또한, DCCM 4를 그대로 사용하는 것보다, DCCM 4에 황금누에고치로부터 추출한 골드세리신을 첨가한 경우(실시예 2 내지 4), 세포증식 촉진효과가 더 큰 것으로 나타났으며, 이때 상기 골드세리신의 농도가 높을수록 세포증식 촉진효과가 더 큰 것으로 나타났다.

특히, DCCM 4에 황금누에고치로부터 추출한 골드세리신만 첨가한 경우(실시예 2 내지 4)보다 골드세리신과 가시연꽃종자추출물을 1:1의 중량비로 혼합한 경우(실시예 5 내지 7), 세포증식 촉진효과가 더 큰 것으로 나타났으며, 이때에도 마찬가지로 상기 골드세리신과 가시연꽃종자추출물의 농도가 높을수록 세포증식 촉진효과가 더 큰 것으로 나타났다.

(3) 엘라스타아제 활성 억제

한편, 자외선에 의하여 사람의 피부에서 광노화 현상이 나타나며 자외선 조사 후 엘라스타아제(elastase)의 활성이 증가하기 때문에 엘라스타아제의 활성증가는 자외선에 의한 피부 탄성도의 감소 및 주름 생성의 주요원인으로 생각되고 있다.

즉, 섬유아세포에서 유래한 엘라스타아제가 피부탄성섬유의 3차원적 뒤틀림에 중요한 역할을 하는 것으로 알려져 있으며 이러한 엘라스타아제의 활성증가는 피부의 탄력섬유를 감소시킴으로써 피부 주름 형성에 기여하기 때문에 엘라스타아제의 활성을 억제함으로써 피부노화를 방지할 수 있다. 따라서

본 실험예에서는, 본 발명의 실시예 1 내지 7에 의한 주름개선 효과의 또 다른 지표로서 엘라스타아제 활성 억제(저해) 정도를 측정하였다.

엘라스타아제 활성 억제는 엘라스타아제 기질인 N-succinyl-(L-Ala)3-ρ-nitroanilide (Sigma, 미국)를 사용한 효소반응에 의해 조사하였다. 자세하게는 각 시료를 0.5㎖씩 시험관에 넣고 100mM Tris-HCl 완충용액 (pH 8.0)에 녹인 porcine pancreas elastase (1U/ml) 용액 0.5 ml을 가한 후 DMSO에 녹여 준비된 3.2μM N-succinyl-(L-Ala)3-ρ-nitroanilide를 0.1 ml씩 첨가하여 잘 섞은 후 실온에서 20분간 반응시켰다. 엘라스타아제 활성은 기질로부터 생성되는 ρ-nitroanilide에 의한 색의 변화를 405㎚의 파장에서 흡광도를 측정함으로써 엘라스타아제 활성을 측정하는 방법을 이용하였으며, 이때 엘라스타아제의 활성 저해율은 아래의 식 (1)에 의하여 계산하였다.

엘라스타아제 활성 저해율(%)=100-((시료의흡광도)/대조군의 흡광도)x100)·····(1)

또한, 엘라스타아제 활성도를 측정하기 위한 대조군은 시료 대신 3차 증류수를 넣어 같은 방법으로 측정하였으며, 양성대조군으로 기존 주름개선효과가 뛰어나다고 알려진 레티놀(retinol, >99%, Sigma, 미국)과 비교하였다.

<엘라스타아제 활성 억제율(단위 : %)>

시료명	엘라스타아제 활성 저해율
실시예 1	47.2
실시예 2	49.4
실시예 3	49.7
실시예 4	50.2
실시예 5	49.8
실시예 6	50.7
실시예 7	51.2
레티놀	50.1

위의 [표 2]에서 보는 바와 같이, 실시예 1 내지 7의 경우 모두 레티놀과 비슷한 엘라스타아제 활성 저해율을 보였다.

특히, DCCM 4만을 사용하는 것보다, DCCM 4에 황금누에고치로부터 추출한 골드세리신을 첨가한 경우(실시예 2 내지 4), 엘라스타아제 활성 저해율 높아졌으며, 또한, 골드세리신과 가시연꽃종자추출물을 1:1의 중량비로 혼합한 경우(실시예 5 내지 7)에는 DCCM 4에 황금누에고치로부터 추출한 골드세리신을 첨가한 경우보다 엘라스타아제 활성 억제율이 향상된 것으로 나타났다.

상기한 바와 같이, 본 발명에 의하면, 대한화장품협회에 화장품 성분으로 등록되어 있는 "확정세포배양액 4(Defined Cell Culture Media 4)"의 조성만으로도 세포증식을 촉진하는 한편, 엘라스타아제의 활성을 억제함으로써 화장품의 원료로 사용시 배합용도로서 등록된 피부보호제나 피부컨디셔닝제(수분차단제)로서의 기능 외에도 주름개선용 원료로서의 활용 가능성을 기대할 수 있게 되었다.

또한, 상기 DCCM 4에 황금누에고치로부터 추출한 골드세리신을 첨가한 경우, 주름개선에 있어서 상기 DCCM 4보다 더 나은 효과가 있으며, 나아가 상기 DCCM 4에 황금누에고치로부터 추출한 골드세리신과 가시연꽃의 종자(씨)로부터 추출한 가시연꽃종자추출물을 혼합하여 첨가한 경우, 주름개선에 있어서 상기 DCCM 4만을 사용하거나 상기 DCCM 4에 골드세리신만을 첨가한 경우보다 더 나은 효과가 있다.

[화장료의 제조]

본 발명에 의한 화장료의 제형은 사용목적에 따라 액상의 에센스 타입, 에멀젼의 크림 타입 등 그 제형이 특별히 제한되지 않으며, 이때 상기 DCCM 4를 수분베이스로 할 수 있다.

또한, 화장료의 제형할 때, 골드세리신 및 가시연꽃종자추출물을 혼합하는 경우라 하더라도 반드시 사전에 혼합하여 첨가할 필요는 없고, 각각 분리하여 첨가할 수 있다.

또한, 고농도의 화장료의 제조를 위해 상기 DCCM 4를 2 내지 10배 농축할 수 있으며, 이때 골드세리신 및 가시연꽃종자추출물은 상기 DCCM 4에 첨가한 상태에서 농축하여 사용하는 것이 바람직하나 반드시 이에 한정되는 것은 아니며, 상기 DCCM 4과 골드세리신 및 가시연꽃종자추출물을 분리하여 일련의 공정에서 각각 투입하여 화장료를 제조할 수 있다.

Claims (5)

1. 세포배양액인 확정세포배양액 4와 천연추출물을 포함하되,
   상기 천연추출물은 황금누에고치로부터 추출한 골드세리신과 가시연꽃의 종자로부터 추출한 가시연꽃종자추출물을 중량비 1:1로 혼합하여 이루어지며,
   상기 확정세포배양액 4의 1L에 대해 상기 천연추출물 3g 내지 10g의 비율로 포함하여, 엘라스타아제의 활성을 저해하는 것을 특징으로 하는 주름개선용 화장료 조성물.
   
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