KR101571384B1 - 쌀 캘러스 및 복합 추출물을 함유하는 다크서클 예방 및 개선용 화장료 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 쌀 캘러스 추출물을 포함하는 화장료 조성물에 관한 것으로, 쌀 캘러스 추출물; 및 초피나무 열매 추출물, 어스니어 추출물, 및 수레국화꽃 추출물로 구성된 복합 추출물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물이 제공된다.

Description

쌀 캘러스 및 복합 추출물을 함유하는 다크서클 예방 및 개선용 화장료 조성물{COSMETIC COMPOSITION FOR IMPROVING DARK CIRCLES CONTAINING RICE CALLUS AND COMPLEX EXTRACT}

본 발명은 쌀 캘러스 복합 추출물을 함유하는 화장료 조성물에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 쌀 캘러스 추출물; 및 초피나무 열매 추출물, 측백나무 잎 추출물, 어스니어 추출물, 및 수레국화꽃 추출물로 구성된 복합 추출물을 유효성분으로 포함하여 다크서클 예방 및 개선효과가 우수한 화장료 조성물에 관한 것이다.

피부는 인체의 일차 방어막으로서 체내의 기관들을 온도 및 습도 변화, 자외선, 공해물질 등 외부환경의 자극으로부터 보호해주며, 체온조절 등의 생체 항상성 유지에 중요한 역할을 한다. 피부는 최상부의 표피와 표피 아래층에 존재하는 진피로 구성되어 있으며, 표피는 각질형성세포가 대부분을 차지하는 중층 편평 상피로서 내측으로부터 기저층(basal layer), 유극층(spinous layer), 과립층(granular layer), 각질층(horny layer)순의 4개 층으로 구분된다. 즉, 각질형성세포가 기저층에서 분열한 후 피부의 표면으로 이동하면서 여러 단계로 분화함에 따라 형태가 변하게 된다.

이렇게 중요한 피부 역시 인체의 다른 장기와 마찬가지로 나이가 들어감에 따라 점차 노화가 진행되게 되고, 그 결과 여러 가지 변화가 일어난다. 예컨대, 기저막은 표피와 진피를 경계하는 구조물로써 나이가 들어감에 따라 두께가 얇아진다는 사실이 알려져 있다. 특히 눈을 둘러싸는 표피는 두께가 0.33 내지 0.36mm 가량으로 안면의 나머지 피부보다 3 내지 5배 더 얇다. 이러한 초박성 때문에 눈 주위의 피부는 쉽게 탈수되며, 스트레스, 담배, 자외선 및 과도한 안면 표정의 외부 인자의 영향에 취약하다. 또한, 상기 취약성으로 인해 눈 주위의 피부는 쉽게 팽창 또는 팽윤될 수 있으며, 다크서클이 발생할 수 있다.

다크서클(Dark circles)은 눈꺼풀 아래 부위가 피부색에 비해 상대적으로 색이 짙어져, 눈 밑이 그늘지고 어둡게 보이는 증상들을 통칭한다. 사람들의 삶의 질이 향상되면서 다크서클은 미적인 요소를 방해하는 피부 트러블 중 주요한 요인으로 인식되고 있다. 그러나 다크서클은 그 원인과 형태가 다양하여 육안으로 분류하는 것이 쉽지 않을 뿐만 아니라 이에 대한 연구 및 원인 규명이 미흡한 실정이다.

다크서클은 주로 과다색소침착에 의해 발생하며, 현재까지 눈가 주위의 아토피 및 알레르기성 접촉 피부염으로 인한 염증 후 색소 침착, 오타양 모반 등의 색소성 질환, 얇고 반투명한 눈꺼풀 아래 부분의 안륜근(orbicularis oculi muscle)에 분포한 혈관의 투명, 피부의 이완에 의해 생긴 그림자 등도 다크서클의 한 원인으로 거론되고 있다.

또한, 뺨 또는 광대 부위의 피부와 인접해 있는 아이백(하안검 및 눈 밑 붓기)은 안화광대 인대의 외측 성분에 의한 지지의 손실 및 부피의 손실로 인해 안면 중앙부가 강화되어 생성되고, 이는 다크서클을 유발할 수 있다.

한편, 화장품 업계에서는 여러 화학물질 등에 의한 피부 자극을 줄이기 위해 천연물을 사용한 제품이 다수 개발되고 있다. 천연 재료는 피부에 부작용이 적을 뿐 아니라, 최근 천연 재료를 이용한 화장품에 대한 소비자들의 호응이 높아짐에 따라 화장품 원료로서 개발가치가 한층 늘어나고 있다.

그러나, 통상의 방법으로 추출한 천연물 추출물을 사용하는 조성물들은 원하는 미백, 주름 개선, 등의 효과가 미미할 뿐 아니라, 활성이 지속적으로 유지 및 제어되지 않아 실용성이 높지 않았다.

또한, 단일의 천연 원료를 사용하는 경우 피부 개선 효과를 부여하기 위한 다양한 종류의 유효성분이 포함되지 않을 수 있어, 최근 화장품 업계에서 점차 트렌드로 자리잡고 있는 다기능성(multi-functional) 화장품 개발에 적합하지 않으므로, 이를 개선하기 위한 다양한 연구가 이루어지고 있다.

본 발명은 전술한 종래기술의 문제점을 해결하기 위한 것으로, 생체 안전성이 우수하며, 미백, 및 주름 개선 효과가 우수한 천연 원료 유래의 다크서클 개선용 화장료 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.

본 발명의 일 측면에 따르면, 쌀 캘러스 추출물; 및 초피나무 열매 추출물, 측백나무 잎 추출물, 어스니어 추출물, 및 수레국화꽃 추출물로 구성된 복합 추출물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물이 제공된다.

일 실시예에 따르면, 상기 쌀 캘러스 추출물 15 내지 20중량부, 및 상기 복합 추출물 80 내지 100중량부를 유효성분으로 포함할 수 있다.

일 실시예에 따르면, 상기 복합 추출물은 상기 초피나무 열매 추출물 10 내지 20중량부, 상기 측백나무 잎 추출물 10 내지 20중량부, 상기 어스니어 추출물 10 내지 20중량부, 및 상기 수레국화꽃 추출물 10 내지 20중량부로 구성될 수 있다.

일 실시예에 따르면, 상기 쌀 캘러스 추출물, 및 상기 복합 추출물은 조성물 전체 중량에 대하여 1.0 내지 20.0중량% 함유될 수 있다.

일 실시예에 따르면, 상기 추출물은 물, 탄소수 1 내지 4의 저급 알코올, 아세톤, 에틸아세테이트, 부틸아세테이트 및 1,3-부틸렌 글리콜로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 이상의 용매로 추출될 수 있다.

일 실시예에 따르면, 상기 쌀 캘러스 추출물은 40 내지 70% 농도의 에탄올을 용매로 하여 20 내지 30℃의 온도에서 추출될 수 있다.

일 실시예에 따르면, 상기 복합 추출물은 물을 용매로 하여 50 내지 60℃의 온도에서 추출될 수 있다.

일 실시예에 따르면, 상기 조성물은 다크서클 예방용 또는 개선용일 수 있다.

일 실시예에 따르면, 상기 조성물은 유연화장수, 영양화장수, 영양크림, 마사지크림, 에센스, 아이크림, 클렌징크림, 클렌징폼, 클렌징워터, 팩, 스프레이 및 파우더로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상으로 제형화될 수 있다.

본 발명에 따르면, 상기 화장료 조성물은 쌀 캘러스에 함유된 다량의 유효 성분을 포함하므로 다크서클 예방 및 개선 효과가 우수하다.

또한, 상기 화장료 조성물은 복합 추출물에 함유된 유익한 성분의 상승작용으로 인하여 다크서클 예방 및 개선 효과가 극대화될 수 있다.

본 발명의 효과는 상기한 효과로 한정되는 것은 아니며, 본 발명의 상세한 설명 또는 특허청구범위에 기재된 발명의 구성으로부터 추론 가능한 모든 효과를 포함하는 것으로 이해되어야 한다.

도 1은 본 발명의 일 실시예에 따른 화장료 조성물의 세포 생존율을 평가한 결과이다.
도 2는 본 발명의 일 실시예에 따른 화장료 조성물의 항염 효과를 평가한 결과이다.
도 3는 본 발명의 일 실시예에 따른 화장료 조성물의 항산화 효과를 평가한 결과이다.
도 4는 본 발명의 일 실시예에 따른 화장료 조성물의 미백 효과를 평가한 결과이다.
도 5는 본 발명의 일 실시예에 따른 화장료 조성물의 주름 개선 효과를 평가한 결과이다.
도 6는 본 발명의 일 실시예에 따른 화장료 조성물의 다크서클 개선 효과를 평가한 결과이다.
도 7는 본 발명의 일 실시예에 따른 화장료 조성물의 다크서클 개선 효과를 평가한 결과이다.
도 8는 본 발명의 일 실시예에 따른 화장료 조성물의 다크서클 개선 효과를 평가한 결과이다.
도 9는 본 발명의 일 실시예에 따른 화장료 조성물의 아이백 개선 효과를 평가한 결과이다.
도 10는 본 발명의 일 실시예에 따른 화장료 조성물의 아이백 개선 효과를 평가한 결과이다.

본 명세서에서 사용되는 용어는 본 발명에서의 기능을 고려하면서 가능한 현재 널리 사용되는 일반적인 용어들을 선택하였으나, 이는 당 분야에 종사하는 기술자의 의도 또는 판례, 새로운 기술의 출현 등에 따라 달라질 수 있다. 또한, 특정한 경우는 출원인이 임의로 선정한 용어도 있으며, 이 경우 해당되는 발명의 설명 부분에서 상세히 그 의미를 기재할 것이다. 따라서 본 발명에서 사용되는 용어는 단순한 용어의 명칭이 아닌, 그 용어가 가지는 의미와 본 발명의 전반에 걸친 내용을 토대로 정의되어야 한다.

다르게 정의되지 않는 한, 기술적이거나 과학적인 용어를 포함해서 여기서 사용되는 모든 용어들은 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에 의해 일반적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 가지고 있다. 일반적으로 사용되는 사전에 정의되어 있는 것과 같은 용어들은 관련 기술의 문맥상 가지는 의미와 일치하는 의미를 가지는 것으로 해석되어야 하며, 본 출원에서 명백하게 정의하지 않는 한, 이상적이거나 과도하게 형식적인 의미로 해석되지 않는다.

수치 범위는 상기 범위에 정의된 수치를 포함한다. 본 명세서에 걸쳐 주어진 모든 최대의 수치 제한은 낮은 수치 제한이 명확히 쓰여져 있는 것처럼 모든 더 낮은 수치 제한을 포함한다. 본 명세서에 걸쳐 주어진 모든 최소의 수치 제한은 더 높은 수치 제한이 명확히 쓰여져 있는 것처럼 모든 더 높은 수치 제한을 포함한다. 본 명세서에 걸쳐 주어진 모든 수치 제한은 더 좁은 수치 제한이 명확히 쓰여져 있는 것처럼, 더 넓은 수치 범위 내의 더 좋은 모든 수치 범위를 포함할 것이다.

이하, 본 발명의 실시예를 상세히 기술하나, 하기 실시예에 의해 본 발명이 한정되지 아니함은 자명하다.

본 발명의 일 측면에 따르면, 쌀 캘러스 추출물; 및 초피나무 열매 추출물, 측백나무 잎 추출물, 어스니어 추출물, 및 수레국화꽃 추출물로 구성된 복합 추출물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물이 제공된다.

상기 화장료 조성물은 상기 쌀 캘러스 추출물 및 상기 복합 추출물을 유효성분으로 포함하므로, 다크서클 예방 및 개선 효과가 뛰어나다. 특히, 상기 화장료 조성물은 상기 복합 추출물에 함유된 각 성분의 상승 효과로 인해 상기 쌀 캘러스 추출물 및 상기 단일 추출물을 개별적으로 포함하는 화장료 조성물과 비교하여 미백 및 주름 개선 효과가 현저히 증대될 수 있으며, 다크서클 완화 효과가 우수하다.

상기 “쌀 캘러스(Rice callus)”는 쌀의 조직을 2~3mm 정도로 떼어내 영양이 충분히 공급되는 시험관에서 배양하여 세포분열이 계속돼 세포 덩어리(캘러스)를 형성한 것으로, 캘러스란 부정형의 탈분화한 세포덩어리로서 원래는 식물이 상처를 입었을 때에 나타나는 유상조직으로서, 식물의 조직이나 세포를 식물호르몬이 포함된 배지에서 배양했을 때 얻어질 수 있다. 특히 한천 등의 고정배지에서 배양하고 있는 세포를 캘러스라고 부르며, 현탁배양하고 있는 세포는 포함하지 않는다. 상기 쌀 캘러스는 항산화 효과, 피부세포증식 촉진 효과, 항염 효과를 통한 피부진전 효능, 티로시나아제 억제효과를 통한 미백기능이 있다고 알려져 있다.

상기 “초피나무 열매 (Zanthoxylum piperitum)”는 운향과에 속하는 낙엽활엽관목을 지칭하는 것으로, 암나무·수나무가 따로 있으며, 가시가 마주 달리고 잎에 노란 기름점이 있다. 꽃은 5월에 연한 황색으로 개화하여, 9~10월에 기름점이 있는 지름 4㎜ 정도의 둥근 열매가 붉은색으로 여문다. 다 익으면 열매껍질이 2갈래로 갈라져 검게 윤나는 둥근 씨앗이 나온다. 겨울에도 가지에 매달려 있다. 상기 초피나무 열매는 여성 질환, 치질, 추위나 더위 타는 데, 신경통, 타박상, 종기, 탈모 등에 사용되어 왔으며, 건강에 유익한 효과를 가진다고 알려져 있다.

상기 “어스니어(Usnea Barbata (Lichen))”는 소나무 겨우살이인 송라를 지칭하는 것으로, 송라는 가는 실 같은 흰 녹색을 띠며 깊은 산 고원지대 중에서 습하여 안개가 잘 끼고 눈이 많이 오는 숲 그늘진 곳의 소나무 등 침엽수 고목의 줄기나 죽은 가지에 아주 드물게 붙어서 뒤엉키듯 자라난다. 송진을 먹고 자라나는 송라는 기원전 지의류 식물인데 지금까지 자생하여 생명력이 강하고 약성이 좋다고 알려져 있으며, 우스닌산(usnic acid)이 다량 함유되어 한방에서 이뇨제, 해열제(폐결핵), 강심제, 진해제 및 거담제로 사용해온 것으로 알려져 있다.

상기 “수레국화꽃(Centaurea cyanus L.)”은 국화과 식물인 수레국화의 꽃을 지칭하는 것으로, 각지에서 관상용으로 주로 심는다. 높이 30~90cm이고 줄기는 흰색의 솜털로 되어 있으며 가지가 조금 갈라진다. 꽃은 6~7월에 피지만 온실에서 가꾼 것은 봄에도 핀다. 여름에 꽃잎을 뜯어 그늘에서 말려 사용하며, 꽃의 탕약과 액체성 엑기스가 이뇨 작용 · 이담(利膽) 작용 · 살균 작용을 하여 신염, 방광염, 간염, 담도염 등에 쓰이는 것으로 알려져 있다.

상기 “추출물”은 용매와 추출재료를 특정 조건하에서 접촉시킴으로써 추출재료에 함유된 유효성분이 전이된 용매를 지칭하는 것으로, 천연물로부터 원료에 함유된 성분을 뽑아냄으로써 수득된 물질이라면, 추출 방법이나 성분의 종류와 무관하게 모두 포함할 수 있다. 예컨대, 물이나 유기용매를 이용하여 천연물로부터 용매에 용해되는 성분을 추출해 낸 것, 천연물의 특정 성분, 예컨대 오일과 같은 특정 성분만을 추출하여 얻어진 것 등을 모두 포함할 수 있다.

일 실시예에 따르면, 상기 조성물은 상기 쌀 캘러스 추출물 15 내지 20중량부, 및 상기 복합 추출물 80 내지 100중량부를 유효성분으로 포함할 수 있다.

상기 쌀 캘러스 추출물이 과도하게 포함된 경우, 상기 복합 추출물의 유효성분에서 유래한 다크서클 완화 효과가 적절하게 구현되지 않을 수 있으므로, 작업 환경 및 최종산물의 품질을 고려하여 혼합비율을 적절하게 제어할 수 있다.

일 실시예에 따르면, 상기 복합 추출물은 상기 초피나무 열매 추출물 10 내지 20중량부, 상기 측백나무 잎 추출물 10 내지 20중량부, 상기 어스니어 추출물 10 내지 20중량부, 및 상기 수레국화꽃 추출물 10 내지 20중량부로 구성될 수 있다.

상기 복합 추출물은 혼합 비율의 편차가 큰 경우 각 추출물의 유효성분에서 유래한 다크서클 예방 및 개선 효과가 적절하게 구현되지 않을 수 있으므로, 작업 환경 및 최종 산물의 품질을 고려하여 혼합비율을 적절하게 제어할 수 있다. 특히, 상기 복합 추출물에 함유된 유효성분의 종류는 매우 다양하며 복합 추출물의 혼합 비율에 따라 항균 및 항염 활성이 상이해질 수 있으므로, 각 추출물의 동시 적용에 따른 상가 효과(additive effect)가 극대화될 수 있도록 적정 혼합 비율을 유지하는 것이 바람직하다.

일 실시예에 따르면, 상기 쌀 캘러스 추출물, 및 상기 복합 추출물은 조성물 전체 중량에 대하여 1.0 내지 20.0중량% 함유될 수 있다.

상기 추출물은 함량이 1.0중량% 미만이면 기대하는 효과를 얻기 어려울 수 있으며, 20.0중량%를 초과하면 첨가량 대비 현저한 효과가 구현되지 않을 수 있을 뿐만 아니라, 과도하게 많은 추출물이 함유되어 상기 조성물이 적용된 제품 본연의 품질이 구현되지 않을 수 있다.

상기 추출 공정에 있어서 용매의 종류는 특별히 한정되지 않으며, 필요에 따라 다양한 용매를 사용할 수 있다. 또한 상기 추출은 상기 용매를 사용하여 냉침, 온침, 가열 등 당해 기술 분야의 통상적인 방법이 사용될 수 있다.

일 실시예에 따르면, 상기 추출물은 물, 탄소수 1 내지 4의 저급 알코올, 아세톤, 에틸아세테이트, 부틸아세테이트 및 1,3-부틸렌 글리콜로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 이상의 용매로 추출될 수 있다.

일 실시예에 따르면, 상기 쌀 캘러스 추출물은 40 내지 70% 농도의 에탄올을 용매로 하여 20 내지 30℃의 온도에서 1 내지 4시간 동안 추출될 수 있다.

즉, 상기 원료에 포함된 유효 성분은 용매의 극성에 따라 추출 비율이 상이해질 수 있으며, 상기 에탄올은 천연 원료의 생리 활성 물질의 추출에 있어서 선택성이 뛰어나므로 상기 에탄올 추출에 의해 최적의 미백 및 주름 개선 효과가 구현될 수 있다. 또한, 추출 용매로 에탄올을 사용하면 안전성을 높일 수 있을 뿐만 아니라, 인체에 무해하기 때문에 식품, 의약품 및 화장품의 첨가물로 사용할 때에도 적합할 수 있으며, 안전성 확보를 위한 엄격한 공정관리 등과 같은 비용 증가가 발생하지 않으므로 경제적인 효과가 있다.

특히, 물과 에탄올은 극성이 상이하여, 각 극성에 따라 추출되는 유효성분이 서로 차이가 날 수 있으므로 최적의 피부 개선의 효과가 구현될 수 있도록 상기 에탄올의 농도를 적절히 제어할 수 있다. 다만, 상기 에탄올은 농도가 70% 초과이면 적정한 수율이 구현되지 않을 수 있고, 농도가 40% 미만이면 다크서클 예방 및 개선의 효과를 나타내는 유효 성분이 충분하게 추출되지 않을 수 있으므로, 상기 알코올의 농도를 상기 범위 내에서 적절히 조정할 수 있으며, 바람직하게는 50% 농도의 에탄올일 수 있다.

상기 온도가 20℃ 미만이면, 추출 효율이 저하되어 과도한 시간이 소요되고 유효 성분이 충분히 추출되지 않을 수 있으며, 상기 온도가 30℃를 초과하면 상기 쌀 캘러스의 일부 유효 성분이 변형되거나 손실되어 최적의 피부 개선 효과가 구현되지 않을 수 있다. 또한, 상기 시간이 1시간 미만이면, 상기 유효 성분이 충분히 추출되지 않을 수 있고, 상기 시간이 4시간을 초과하면, 시간 대비 상기 유효 성분 추출 효율이 낮아질 수 있다.

일 실시예에 따르면, 상기 복합 추출물은 물을 용매로 하여 50 내지 60℃의 온도에서 12 내지 18시간 동안 추출될 수 있다.

상기 물만을 용매로 사용하였기 때문에 상기 유효 성분을 손쉽게 추출할 수 있고, 높은 추출 효율로 고농도의 유효 성분을 추출할 수 있다.

또한, 안전성을 높일 수 있을 뿐만 아니라, 인체에 무해하기 때문에 식품, 의약품 및 화장품의 첨가물로 사용할 때에도 적합할 수 있으며, 안전성 확보를 위한 엄격한 공정관리 등과 같은 비용 증가가 발생하지 않으므로 경제적인 효과가 있다.

상기 온도가 50℃ 미만이면, 상기 유효 성분이 충분히 용출되지 않을 수 있으며, 상기 온도가 60℃를 초과하면, 상기 초피나무 열매, 측백나무 잎, 어스니어 및 수레국화꽃이 천연 원료에 함유된 유효 성분이 고온에서 변형 또는 소실되어 피부 개선 효과가 저하될 수 있다. 또한, 상기 시간이 12시간 미만이면, 상기 유효 성분이 충분히 추출되지 않을 수 있고, 상기 시간이 18시간을 초과하면, 시간 대비 상기 유효 성분 추출 효율이 낮아질 수 있다.

일 실시예에 따르면, 상기 화장료 조성물은 다크서클 예방용 또는 개선용일 수 있다.

상기 화장료 조성물은 상기 쌀 캘러스 추출물에 함유된 주름 개선 성분 및 식물 추출물에 함유된 유효 성분의 상승작용으로 인하여 다크서클 예방 및 개선 효과가 현저히 우수하다.

특히, 상기 화장료 조성물은 쌀 캘러스 추출물 및 복합 추출물을 모두 포함하므로 상기 유효성분을 개별적으로 함유하거나, 일부를 함유하지 않는 경우와 비교하여 세포생존율, 항염 효과, 항산화 효과, 미백 효과, 주름 개선 효과, 다크서클 개선 효과, 및 다크서클의 원인이 되는 아이백 개선 효과가 현저히 증대되었다.

일 실시예에 따르면, 상기 화장료 조성물은 유연화장수, 영양화장수, 영양크림, 마사지크림, 에센스, 아이크림, 클렌징크림, 클렌징폼, 클렌징워터, 팩, 스프레이 및 파우더로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상으로 제형화될 수 있다.

상기 화장료 조성물은 각각의 제형에 있어서, 상기 필수성분 외에 제형의 종류 또는 사용 목적 등에 따라 본 발명에 따른 목적을 저해하지 않는 범위 내에서 다른 성분들이 적절히 배합될 수 있다.

또한, 상기 화장료 조성물은 최종 제품의 품질이나 기능에 따라 업계에서 통상적으로 사용되는 지방 물질, 유기용매, 용해제, 농축제, 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉 쇄제, 킬레이트화제, 보존제, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 화장품에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 화장품학 또는 피부과학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 추가적으로 함유할 수 있다.

다만, 상기 보조제 및 그 혼합 비율은 본 발명에 따른 화장료 조성물의 바람직한 성질에 영향을 미치지 않도록 적절히 선택하는 것이 바람직하다.

이하 실시예를 통해, 본 발명을 더욱 상술하나 하기 실시예에 의해 본 발명이 제한되지 아니함은 자명하다.

제조예 1: 쌀 캘러스 추출물의 제조

쌀 캘러스를 유도한 후 에탄올을 용매로 하고 동결 건조하여 쌀 캘러스 추출물을 제조하였다.

성숙한 벼(Oryza sativa L.) 종자를 에탄올과 NaOCl 용액을 이용하여 표면살균처리를 실시하였다. 살균 후 종자를 멸균증류수로 세척하여 캘러스 유도용 고체배지, 바람직하게는 Chu(N6) 한천배지에 넣어, 25℃의 암조건에서 20일간 배양하여 상기 쌀 캘러스를 유도하였다.

상기 유도된 쌀 캘러스 100g을 50% 에탄올 1L에 부유시켜, 25℃의 온도에서 3시간 동안 교반하여 추출 공정을 수행하였으며, 추출된 추출액은 감압 농축 및 동결 건조되어 고형으로 수득되었다.

제조예 2: 복합 추출물의 제조

초피나무 열매 추출물, 측백나무 잎 추출물, 어스니어 추출물, 및 수레국화꽃을 수세한 후 상온에서 완전히 건조시키고 분쇄하여 분쇄물을 각각 100g씩 수득하였다.

초피나무 열매 추출물, 측백나무 잎 추출물, 어스니어 추출물, 및 수레국화꽃의 분쇄물 각 100g에 대해 각각 10배 부피의 물을 용매로 하여 50℃의 온도에서 12시간 동안 침적 추출하였다. 각각의 추출물은 필터에 의해 여과되었으며, 잔여 원료에 대해 동일한 방법으로 3회씩 반복 추출하여 수득된 추출물을 혼합하여 복합 추출물을 완성하였다. 이후 상기 복합 추출물은 30℃에서 감압 농축되었으며 동결 건조되어 고형으로 수득되었다.

상기 수득된 복합 추출물은 화장료 조성물에 투입되었으며, 상기 화장료 조성물에 대한 다크서클 예방 및 개선 효과를 검증하였다.

실시예 : 쌀 캘러스 추출물 및 복합 추출물 혼합시료

동결 건조하여 수득된 제조예 1의 쌀 캘러스 추출물, 및 상기 제조예 2의 초피나무 열매 추출물, 측백나무 잎 추출물, 어스니어 추출물, 수레국화꽃 추출물이 동일 비율로 혼합된 복합 추출물을 혼합하여 실시예의 시료로 하였다.

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비교예 1

동결 건조하여 수득된 제조예 1의 쌀 캘러스 추출물의 일부를 분리하여 비교예 1의 시료로 하였다.

비교예 2

동결 건조하여 수득된 제조예 2의 초피나무 열매 추출물, 측백나무 잎 추출물, 어스니어 추출물, 수레국화꽃 추출물이 동일 비율로 혼합된 복합 추출물 일부를 분리하여 비교예 2의 시료로 하였다.

비교예 3

동결 건조하여 수득된 제조예 2의 초피나무 열매 추출물 일부를 분리하여 비교예 3의 시료로 하였다.

비교예 4

동결 건조하여 수득된 제조예 2의 측백나무 잎 추출물 일부를 분리하여 비교예 4의 시료로 하였다.

비교예 5

동결 건조하여 수득된 제조예 2의 어스니어 추출물 일부를 분리하여 비교예 5의 시료로 하였다.

비교예 6

동결 건조하여 수득된 제조예 2의 수레국화꽃 추출물 일부를 분리하여 비교예 6의 시료로 하였다.

실험예 1: 세포 생존율 평가

상기 실시예 1, 및 비교예 1 내지 6에서 수득된 시료가 세포에 미치는 독성을 측정하였다. 상기 실시예 1, 및 비교예 1 내지 6에서 수득된 시료를 정제수에 현탁하여 농도별(0.1%, 0.5%, 1.0%)로 조성한 후, 하기의 방법을 통해 세포 생존율을 측정하였다.

세포 독성은 MTT{3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2-5-diphenyltetrazolium bromide} 시약을 이용하여 세포 생존율을 측정하는 모스만(Mosmann)의 방법을 변형하여 실시하였다.

0.5㎍/ml의 Lipopolysaccharide를 처리하여 1시간 배양한 후, 시료를 0.1%, 0.5%, 1.0% 농도 별로 처리하여 23시간 동안 배양하였다. 배지를 제거한 후 각 well 당 0.5mg/㎖ 농도의 MTT(3-(4,5-Dimethyl-thiazol-2-yl)-2,5-diphenyl-tetrazolium bromide)를 100㎕씩 첨가하고 2시간 동안 배양하였다. MTT를 제거하고 DMSO를 200㎕씩 첨가한 후, 세포에 생성된 MTT formazan이 잘 용해되도록 교반기를 이용하여 10분 동안 교반시켰다. 교반이 끝난 후 ELISA reader로 540nm에서 흡광도를 측정한 후, 수학식 1에 따라 계산하여 백분율로 표시하였고, 결과는 하기 도 1로 나타내었다.

[수학식 1]

측정 결과, 하기 도 1에 나타낸 바와 같이 각 시료의 모든 농도에서 세포 독성은 거의 나타나지 않았으며, 쌀 캘러스 추출물 및 상기 복합 추출물은 인체에 무해하며 안전성이 매우 우수한 것으로 확인되었다.

실험예 2: 항염 효과 평가(NO 생성 억제능 분석)

상기 실시예 1, 및 비교예 1 내지 6에서 수득된 시료의 항염 효과를 측정하기 위하여, Lipopolysaccharide(LPS)로 자극을 유도한 쥐 대식세포주 RAW 264.7 cell에서의 NO 생성 억제능을 분석하였다.

10％ FBS(Fetal Bovine Serum)가 담긴 DMEM(Dulbecco's Modified Eagle Medium) 배지에 세포를 현탁시켜 96well plate에 4×10⁴ cells/well로 분주한 다음 24시간 동안 안정화시켰다.

0.5㎍/ml의 Lipopolysaccharide를 처리하여 1시간 배양한 후, 상기 시료를 0.1%, 0.5%, 1.0% 농도 별로 처리하여 23시간 동안 배양하였다. 그 후, 상층액을 회수하여 96well plate에 50㎕씩 넣고 Griess reagent를 동량 첨가한 뒤 상온에서 차광하여 10분간 가볍게 흔들어주어 540nm에서 흡광도를 측정하였다.

Sodium Nitrite로 Standard curve로 설정하여 각 샘플의 Nitric Oxide의 생성량을 구하였으며, Lipopolysaccharide를 처리한 군의 Nitric Oxide의 생성량을 100％로 하여 각 시료의 ％ 수득율을 구하였다.

[NO 생성량(%)]

NO production ( % )
구분	0.1%	0.5%	1.0%
대조군 (L-NMMA, 100μM)	19.6
실시예	84.3	79.5	75.8
비교예 1	89.5	86.2	79.5
비교예 2	89.1	87.5	86.1
비교예 3	90.5	90.1	89.4
비교예 4	86.5	85.6	83.5
비교예 5	86.3	84.2	81.8
비교예 6	89.8	87.7	86.6

상기 표 1 및 하기 도 2에 나타낸 바와 같이 실시예에 따른 쌀 캘러스 추출물 및 복합 추출물 혼합 시료는 대조군인 L-NMMA(L-NG-Monomethylarginine)보다 항염 효과가 다소 미약하였으나, 비교예1 내지 6과 비교하여 시료의 농도가 증가할수록 항염 효과가 증가된 것으로 확인되었다.

실험예 3: 항산화 효과 평가

상기 실시예 1, 및 비교예 1 내지 6에서 수득된 시료의 항산화 효과를 측정하기 위하여, 상기 시료를 사용하여 0.1%, 0.5%, 1.0% 농도별로 자유 라디칼 소거 활성능(free radical scavenging activity)을 측정하였다.

안정한 라디칼인 DPPH를 억제제(inhibitor)가 소거하여 탈색시키는 정도를 흡광도(520nm) 측정을 통해 확인하였으며, 양성대조군은 항산화제인 BHA(butylated hydroxyanisole)를 사용하였다.

시험방법은 하기 표 2 와 같고, 자유 라디칼 소거활성은 하기 수학식 2를 이용하여 계산한 후, 하기 표 3 및 도 3에 그래프로 나타내었다.

[시험방법]

시료	대조군 그룹	대조군의 블랭크	실험군 그룹	실험군의 블랭크
DPPH (MeOH)	180	(180)	180	(180)
샘플	(20 용매)	(20 용매)	20	20

[수학식 2]

A : Abs of experimental group

B : Abs blank of experimental group

C : Abs of control group

D : Abs blank of control group

DPPH radical scavenging activity ( % )
구분	0.1%	0.5%	1.0%
대조군(BHA, 100μM)	95.5
실시예	60.2	75.2	85.8
비교예 1	45.2	60.5	72.4
비교예 2	43.4	53.1	60.8
비교예 3	35.5	52.0	62.6
비교예 4	40.4	58.2	70.8
비교예 5	42.3	51.4	59.5
비교예 6	38.3	55.5	65.2

상기 표 3 및 하기 도 3에서 도시되는 바와 같이 상기 쌀 캘러스 추출물 및 복합 추출물 혼합 시료는 항산화 효과가 있을 뿐만 아니라 그 농도가 증가할수록 항산화 효과가 증가된 것으로 확인되었다.

실험예 4: 미백 효과 평가

상기 실시예, 및 비교예 1 내지 6에서 수득된 시료의 미백 효과를 측정하기 위하여 Tyrosinase 저해활성도를 측정하였다.

상기 시료를 0.1%, 0.5%, 1.0% 농도별로 측정하였으며, 실험조건으로 L-DOPA를 기질로 사용하여 흡광도법을 이용하여 측정하였다. 68mM sodium phosphate buffer(pH 6.8)에 mushroom tyrosinase를 녹여 125U/ml가 되도록 하고, -20℃에서 저장하여 실험에 사용하였다. 96well plate에 추출물을 40μM씩 넣고 8mM L-DOPA 120㎕를 첨가하고 mushroom tyrosinase 40㎕를 첨가하여 20분간 반응시킨 후, ELISA reader로 490nm에서 흡광도를 측정하였다.

미백의 효능 비교를 위한 대조군으로는 kojic acid를 사용하였다. Tyrosinase 저해활성은 아래 수학식 3를 이용하여 계산한 후, 하기 표 4 및 도 4에 그래프로 나타내었다.

[수학식 3]

Tyrosinase Inhibition ( % )
구분	0.1%	0.5%	1.0%
대조군(Kojic acid, 50μM)	56.9
실시예	42.1	48.7	53.5
비교예 1	35.5	40.3	45.2
비교예 2	30.2	35.4	41.3
비교예 3	24.5	31.3	35.7
비교예 4	25.7	28.8	32.4
비교예 5	23.2	23.6	23.5
비교예 6	27.8	32.5	36.8

상기 표 4 및 하기 도 4에서 도시되는 바와 같이 쌀 캘러스, 초피나무열매, 측백나무 잎, 어스니어 및 수레국화꽃 복합 추출물(실시예)은 미백 효과가 우수한 것으로 확인되었다.

실험예 5: 주름 개선 효과 평가

상기 실시예, 및 비교예 1 내지 6에서 수득된 시료의 주름 개선 효과를 측정하기 위하여 0.1%, 0.5%, 1.0% 농도별로 콜라겐 생합성 효과를 측정하였다.

CCD-986sk 세포를 24 well plate에 5×10⁴ cell/well로 분주한 뒤, 10% FBS/DMEM 배지로 24시간 배양시킨 다음 serum free 배지를 이용하여 각 추출물을 처리하여 24시간 동안 CO₂ incubator에서 배양하였다. 그 후 세포 배양액을 Procollagen Type C-peptide EIA kit(Takara, Japan)를 이용하여 콜라겐 양을 측정하였으며,

주름 개선 효능 비교를 위한 음성대조군은 대조군으로는 시료를 첨가하지 않은 것을 사용하였으며 양성대조군은 Retinol(비타민 A)을 사용하였다. 콜라겐 생합성 효과는 하기 표 5 및 도 5에 그래프로 나타내었다.

Collagen Synthesis ( % )
구분	0.1%	0.5%	1.0%
음성대조군	100
양성대조군(Retinol, 3mM)	167.86
실시예	138.39	143.75	152.68
비교예 1	129.04	132.96	136.91
비교예 2	124.53	128.12	131.89
비교예 3	119.64	121.77	123.89
비교예 4	116.29	115.50	118.03
비교예 5	103.66	105.40	104.52
비교예 6	124.11	127.68	131.25

하기 도 5에서 도시되는 바와 같이 상기 쌀 캘러스 추출물 및 복합 추출물 혼합 시료는 주름 개선 효과가 우수한 것으로 확인되었다.

실험예 6: 다크서클 개선 효과 평가

상기 실시예 1, 및 비교예 1 내지 6에서 수득된 시료를 포함하는 화장료 조성물의 다크서클 개선 효과를 평가하기 위해 다음과 같이 실험을 하였다.

먼저, 상기 각 시료를 하기 표 6에 나타난 것과 같이 동일하게 제형화 하였으며, 실시예, 및 비교예 1 내지 6의 시료만을 달리하였다.

제형화는 유상성분과 수상성분을 포함하는 하기 표 6의 성분들을 75℃로 가열혼합하여 유화한 후 실온으로 냉각하여 본 발명의 복합 추출물을 함유한 크림 화장료를 제조하였다.

[함량(중량%)]

구분	실시예	비교예 1	비교예 2	비교예 3	비교예 4	비교예 5	비교예 6
쌀 캘러스 추출물(제조예 1)	2.0	10.0	-	-	-	-	-
복합 추출물(제조예2)	8.0	-	10.0	-	-
초피나무 열매 추출물(제조예2)	-	-	-	10.0	-	-	-
측백나무 잎 추출물(제조예2)	-	-	-	-	10.0	-	-
어스니어 추출물(제조예2)	-	-	-	-	-	10.0	-
수레국화꽃 추출물(제조예2)	-	-	-	-	-	-	10.0
카프릴릭/카프릭트리글리세라이드	5.00	5.00	5.00	5.00	5.00	5.00	5.00
디메치콘	0.30	0.30	0.30	0.30	0.30	0.30	0.30
카프릴릴글라이콜	0.30	0.30	0.30	0.30	0.30	0.30	0.30
잔탄검	0.01	0.01	0.01	0.01	0.01	0.01	0.01
소듐하이알루로네이트	0.10	0.10	0.10	0.10	0.10	0.10	0.10
레시틴	0.01	0.01	0.01	0.01	0.01	0.01	0.01
글리세릴스테아레이트	3.00	3.00	3.00	3.00	3.00	3.00	3.00
쉐어버터	0.30	0.30	0.30	0.30	0.30	0.30	0.30
하이드로제네이티드폴리데센	3.00	3.00	3.00	3.00	3.00	3.00	3.00
카보머	0.30	0.30	0.30	0.30	0.30	0.30	0.30
방부제	미량	미량	미량	미량	미량	미량	미량
정제수	잔량	잔량	잔량	잔량	잔량	잔량	잔량
합계	100	100	100	100	100	100	100

피시험자는 30세 이상의 성인 여성 21명을 대상으로 하였으며, 피시험자는 4주 동안 매일 아침, 저녁 세안 후 제형예 1의 크림을 눈 밑 다크서클 부위에 도포하여 흡수되도록 하였다.

사용 전, 2주 사용 후, 4주 사용 후의 시점에서 Mexameter 및 분광광도계로 평가하였다.

동일한 시험담당자가 Mexameter를 이용하여 모든 피시험자의 왼쪽 눈 밑 다크서클 부위를 3회 연속 측정하였으며, 그 평균값을 계산하여 melanin양을 나타내는 melanin index를 분석에 사용하였다. Melanin index 변화는 하기 표 7 및 도 6에 나타내었다.

분광광도계는 동일한 시험담당자가 모든 피시험자의 오른쪽 눈 밑 다크서클부위를 3회 연속 측정하고, 그 평균값을 계산하여 피부밝기를 나타내는 L* value를 분석에 사용하였다. L*value 변화는 하기 표 7 및 도 7에 나타내었다.

또한 육안상의 다크서클 개선 효과를 하기 도 8에 나타내었다.

Melanin Index 변화 (N=21)
번호	사용 전	2주 사용 후	4주 사용 후
1	219.33	204.00	198.00
2	177.33	194.00	172.64
3	170.67	163.67	156.80
4	192.00	195.00	209.57
5	148.67	142.00	128.17
6	185.00	167.67	163.25
7	152.00	170.67	141.75
8	203.00	192.00	200.33
9	166.33	165.67	160.17
10	191.33	190.33	188.00
11	206.67	202.22	198.00
12	137.00	127.00	130.00
13	134.67	139.67	142.17
14	210.00	189.67	214.57
15	132.00	115.00	112.67
16	145.00	120.00	118.25
17	198.67	186.00	171.60
18	110.00	106.00	99.33
19	155.00	146.75	156.67
20	169.33	143.67	139.25
21	174.00	156.00	149.68
평균	170.38	162.71	159.57
표준편차	29.62	30.10	33.03

L* value변화 (N=21)
번호	사용 전	2주 사용 후	4주 사용 후
1	51.10	53.40	54.69
2	54.18	55.88	55.91
3	51.92	53.52	55.10
4	46.61	43.45	48.26
5	57.57	55.94	58.30
6	41.73	39.35	44.32
7	50.78	53.67	53.41
8	56.79	58.42	56.42
9	52.75	51.94	55.48
10	58.16	59.95	60.30
11	49.23	47.54	51.88
12	55.75	57.13	58.16
13	56.80	54.47	58.54
14	54.49	54.97	57.52
15	58.71	59.75	61.79
16	51.76	52.10	54.37
17	52.77	54.61	53.46
18	58.94	59.59	60.70
19	56.27	59.35	58.12
20	54.66	56.63	56.76
21	56.42	58.72	59.38
평균	53.69	54.30	55.85
표준편차	4.27	5.34	4.13

상기 표 7, 표 8 및 하기 도 6, 도 7, 및 도 8에 나타난 바와 같이, 상기 쌀 캘러스 추출물 및 복합 추출물 혼합 시료를 함유한 제형(제조예1)은 다크서클 개선효과가 있을 뿐만 아니라 사용 기간이 증가할수록 다크서클 개선 효과가 증가된 것으로 확인되었다.

실험예 7: 아이백 개선 효과

상기 실시예 1, 및 비교예 1 내지 6에서 수득된 시료를 포함하는 화장료 조성물의 아이백 개선 효과를 평가하기 위해 다음과 같이 실험을 하였다. 먼저, 상기 각 시료를 상기 실험예 6과 동일하게 제형화 하였다.

피시험자는 30세 이상의 성인 여성 21명을 대상으로 하였으며, 피시험자는 4주 동안 매일 아침, 저녁 세안 후 제형예 1의 크림을 눈 밑 다크서클 부위에 고르게 펴 바르고 흡수시켰다.

아이백(눈 밑 붓기)개선 평가를 위하여 ANTERA 3D를 적용하였으며, 동일한 시험담당자가 모든 피시험자의 왼쪽 눈 밑 부위를 측정하고 피부의 증가된 부피를 나타내는 Elevations medium값을 분석에 사용하였다. 전안촬영시스템은 일관된 촬영을 위하여 균일한 조명과 동일한 포지션에서 동일한 시험담당자가 모든 피시험자의 얼굴 정면을 촬영하였다. 기기측정은 시험제품 사용 전과 사용 직후, 2주 사용 후, 4주 사용 후의 시점에서 이루어졌다. Elevations medium 값 변화는 하기 표 9 및 도 9에 나타내었다. 또한 육안상의 아이백 개선효과를 하기 도 10에 나타내었다.

Elevations medium값 변화 (N=21)
번호	사용 전	사용 직후	2주 사용 후	4주 사용 후
1	29.67	29.11	26.83	25.55
2	60.44	51.91	58.32	56.41
3	28.83	22.58	26.83	25.31
4	26.01	26.05	24.58	19.17
5	56.23	60.33	52.25	50.43
6	34.98	27.13	28.04	27.94
7	45.59	44.05	41.88	41.63
8	40.82	34.25	35.15	34.52
9	34.85	34.55	33.22	33.12
10	47.62	45.45	45.43	33.87
11	37.87	34.79	35.29	34.95
12	38.64	37.92	37.07	35.91
13	57.57	43.52	45.06	41.67
14	48.05	46.51	46.22	43.70
15	58.41	41.49	38.28	28.29
16	37.42	31.12	35.53	29.85
17	36.09	20.35	31.30	30.92
18	64.08	45.86	43.13	31.28
19	47.31	47.18	46.82	46.08
20	25.51	25.00	24.63	23.06
21	33.69	34.50	30.27	29.49
평균	42.37	37.32	37.43	34.44
표준편차	11.74	10.46	9.38	9.33

상기 표 9 및 하기 도 9 및 도 10에 나타난 바와 같이, 상기 쌀 캘러스 추출물 및 복합 추출물 혼합 시료(제조예 1)은 다크서클의 원인이 되는 아이백 개선효과가 있을 뿐만 아니라 사용 기간이 증가할수록 아이백 개선 효과가 증가되는 것으로 확인되었다.

전술한 본 발명의 설명은 예시를 위한 것이며, 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 지식을 가진 자는 본 발명의 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 쉽게 변형이 가능하다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해해야만 한다. 예를 들어, 단일형으로 설명되어 있는 각 구성 요소는 분산되어 실시될 수도 있으며, 마찬가지로 분산된 것으로 설명되어 있는 구성 요소들도 결합된 형태로 실시될 수 있다.

본 발명의 범위는 후술하는 특허청구범위에 의하여 나타내어지며, 특허청구범위의 의미 및 범위 그리고 그 균등 개념으로부터 도출되는 모든 변경 또는 변형된 형태가 본 발명의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다.

Claims (9)

1. 쌀 캘러스 추출물; 및
   초피나무 열매 추출물, 측백나무 잎 추출물, 어스니어 추출물, 및 수레국화꽃 추출물로 구성된 복합 추출물을 유효성분으로 포함하는 다크서클 예방용 또는 개선용 화장료 조성물.
   
2. 제1항에 있어서,
   상기 쌀 캘러스 추출물 15 내지 20중량부, 및 상기 복합 추출물 80 내지 100중량부를 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물.
   
3. 제2항에 있어서,
   상기 복합 추출물은 상기 초피나무 열매 추출물 10 내지 20중량부, 상기 측백나무 잎 추출물 10 내지 20중량부, 상기 어스니어 추출물 10 내지 20중량부, 및 상기 수레국화꽃 추출물 10 내지 20중량부로 구성된 화장료 조성물.
   
4. 제1항에 있어서,
   상기 쌀 캘러스 추출물, 및 상기 복합 추출물은 조성물 전체 중량에 대하여 1.0 내지 20.0중량% 함유된 화장료 조성물.
   
5. 제1항에 있어서,
   상기 추출물은 물, 탄소수 1 내지 4의 저급 알코올, 아세톤, 에틸아세테이트, 부틸아세테이트 및 1,3-부틸렌 글리콜로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 이상의 용매로 추출된 화장료 조성물.
   
6. 제5항에 있어서,
   상기 쌀 캘러스 추출물은 40 내지 70% 농도의 에탄올을 용매로 하여 20 내지 30℃의 온도에서 추출된 화장료 조성물.
   
7. 제5항에 있어서,
   상기 복합 추출물은 물을 용매로 하여 50 내지 60℃의 온도에서 추출된 화장료 조성물.
   
8. 삭제
9. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서,
   유연화장수, 영양화장수, 영양크림, 마사지크림, 에센스, 아이크림, 클렌징크림, 클렌징폼, 클렌징워터, 팩, 스프레이 및 파우더로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상으로 제형화된 화장료 조성물.

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