KR0154977B1 - 은행잎 추출물과 그의 제조방법 및 그를 함유하는 약제 - Google Patents

Abstract

본 발명은 우수한 은행잎 추출물과, 그의 제조방법 및 그를 함유하는 약제에 관한 것이다.

Description

은행잎 추출물과 그의 제조방법 및 그를 함유하는 약제

본 발명은 은행잎 추출물, 그의 제조방법 및 그를 함유하는 약제의 개량에 관한 것이다.

은행잎 추출물은, 오랫동안 말초 및 대뇌 동맥순환장애의 치료제용으로 사용돼 왔다. 유효성분으로서 다량의 플라본 글리코시드(flavone glycosides)를 함유하는 은행잎 추출물 제조방법이 알려져 있다 : (DE-B 17 67 98과 DE-B 21 17 429 등의 특허공보 참조). 이러한 추출물은 또한 은행잎 단일 추출물(monoextracts)이라고도 한다.

특허공보 EP-A 0 324 197 에는 은행잎을 저급알콜 또는 케톤 수용액으로 추출하여 얻은 추출물을 규조토(kieselguhr)의 존재하에 농축하여, 얻어진 수성 현탁액을 규조토로 여과한후, 그 여여개을 부타논으로 추출하고, 추출물로부터 용매를 제거하여 은행잎 추출물을 얻는 방법이 개시되어 있다.

특허공보 EP-A 330 567에는 파쇄된 잎들을 수성 케톤으로 추출하여, 이 추출물을 바이-플라본(biflavones)과 소수성 화합물이 침전될때까지 농축하고 여과후, 그 수성 농축물을 알칼리화하여 프로안토시아니딘을 침전시켜 이 침전물을 분리하고, 그 여액을 산성화시킨후, 황산 암모늄 존재하에 C₄-₆케톤으로써 액체-액체추출을 행한 후, 케톤을 스트리핑(stripping)하여 추출물을 얻는 은행잎 추출 방법이 개시되어 있다.

특허공보 DE-A 35 14 054에는 락톤 구조를 갖는 테르페노이드 물질로 알려진 은행잎 성분인 깅골리드(ginkgolides)(참조:K.Nakanishi, Pure and Applied Chemistry, Vol. 14(1967), 89-113; M. Maruyama등, Tetrahedron Letters(1967). 299-302 및 303, 319; K. Okabe등. J. Chem. Soc.(1967), 2201∼2206)를 PAF(platelet Activating Faetor : 혈소판 활성인자)에 의해 유발된 질병과 그 유사증상을 치료하는데 사용할 수 있음이 개시되어 있다.

은행잎에 함유된 또다른 물질인 바이로발리드(bilobalide)는 특허공보 DE-A 33 38 995와 그 대응 미국 특허공보 US-A 4 571 407에 탈수성신경장해(demyelinating neur-opathies). 뇌장해, 대뇌부종의 치료에 사용함이 기재되어 있다.

바이로발리드는 깅골리드와 구조상 유사한 세스퀴테르펜락톤이다(참조 : K. Nakanishi 등, R.T. Major등, K. Weinges등, J.Am.Chem. Soc., Vol. 93(1971). 3544∼3546).

상기의 화합물들 외에도 은행잎은 또한 소위 깅골린 산(ginkgolic acid)(아나카딘 산)을 함유한다. 이러한 화합물은 이중결합수가 0∼3인 n-C₁₃∼n∼C₁₉의 알킬기를 갖는 6-알킬산리질산이다(참조 : J. L.Gellermann등, Phytochemistry, Vol. 15(1976), 1959∼1961; Analytic chem. Vol.40(1968). 739∼743).

페놀이 대응하는 알킬기로 치환된 깅골(ginkgol)은 상기 깅골린산의 생합성적 탈카르복시화 또는 은행잎의 기술적 처리에 의하여 얻을 수 있다.(참조 : Kawamara, Japan, J. Chem. Vol. 3(1928).91∼93).

은행잎중의 깅골린산과 깅골들은 4-위치에 페놀성 수산기를 갖는 대응 유도체들 6-알킬레조르실린산 또는 5-알킬레조르산등과 동반한다(참조: J. Gellermann등, Phytoch-emistry, Vol. 15(1976), 1959∼1961). 이러한 레조르신 유도체들은, 독성작용에 관계되며, 특히 옻나무(toxicodendron)에 의해 유발되는 강한 알레르기와 접촉성 피부염에 관여한다(참조 : G.A.Hill등 J.Am.chem.Soc.Vol.56(1934), 2736∼2738).

은행열매 접촉후 강한 알레르기 반응의 예가 알려져 있다(참조 : W.F.Sowers등, Arch. Dermatol., Vol.91(1965), 452-456, T-Nakamura, Contact, Dermatitis, Vol. 12(1985), 281∼282).

은행열매를 먹은후의 치명적인 점막장해가 알려져 있다(참조 : L.E.Becker와 G.B.Skipw-orth, J.Am.Med.Assoc., Vol. 231(1975). 1162∼1163).

또한, 은행잎을 수집하거나 다룰 때 알레르기성 피부반응이 종종 발생한다.

아나카디아시아(andcardiaceae)와 깅고아시아(ginkgoaceae)로부터 유래된 알킬페놀 화합물에 의해 야기되는 알레르기의 심각성은 이러한 알레르기를 해소키 위한 특허문헌(US-A 4 428 965)에 기재된 탈감작용 물질 및 그 방법의 개발에서 명백히 나타나 있다.

시판되는 은행잎 추출물은 50∼10,000ppm 깅골린산을 함유한다.

특허공보 DE-B 17 67 098과 DE-B 21 17 429에 공지된 방법으로 제조된 은행잎 추출물은, 그 추출물의 친유성 성분들이 실질상 물비혼화성 친유성 용체, 즉 사염화탄소와 같은 염소화 지방족 저급 탄화수소로 수성 아세톤 추출물을 액체-액체 추출함에 의해 제거되므로 알킬페놀 화합물을 실질적으로 함유치 않는다.

그러나, 이 과정에서 임상학적 같이가 있는 깅골리드와 바이로발리드도 또한 상당히 감소되어, 특허공보 DE-B 21 17 429의 실시예 1의 최종 생성물 중 깅골리드 A, B, C 및 J의 합계 함량이 0.5% 이하, 바이로발리드의 경우 대략 0.3% 이하이다. 그러나, 상기 과정중 플라본 글리코시드의 양이 크레 증가된다.

즉, 조추출물중 3∼4%에서 최종 생성물 중대략 24%로 된다.

그러므로, 본 발명의 목적은 플라본 글리코시드의 함량이 높고, 사용된 잎에 존재하는 깅골리드와 바이로발리드를 실질적으로 전부 함유하며, 실질적으로 알킬페놀 화합물을 함유치 않는 은행잎 추출물을 제공하는데 있다.

본 발명의 다른 목적은, 알킬페놀화합물을 실질적으로 함유치 않으며 플라본 글리코시드, 깅골리드 및 바이로발리드의 함량이 높은 은행잎 추출물 제조방법을 제공하는데 있다.

본 발명의 방법은 DE-B 17 67 098과 DE-B 21 17 429의 공지된 방법과는 대조적으로, 염소화 지방족 탄화수소를 사용치 않고 알킬페놀화합물을 제거한다. 기술적 처리에서 염소화 탄화수소의 사용은 직업상의 약해, 이들 화합물의 환경에 대한 중대한 위험 및 약제중에 바람직하지 않게 잔류 될 가능성 때문에 문제가 있다.

마지막으로 본 발명의 목적은, 플라본 글리코시드와 깅골리드와 바이로발리드의 함량이 높은 은행잎 추출물을 함유하며, 정확하게는 알킬페놀 화합물이 제거됨으로써 알레르기 반응 위험성이 실질상 없는 약제를 제공하는데 있다.

따라서, 본 발명은 알킬페놀 화합물을 실질적으로 함유치 않고, 플라본 글리코시드 함량이 높고, 잎중에 원래 존재하는 깅골리드와 바이로발리드를 대부분 함유하는 은행잎 추출물을 제공한다. 바람직하게는 본 발명의 추출물은; 플라본 글리코시드 20∼30중량%, 바람직하게는 22∼26중량%와, 깅골리드 A, B, C 및 J 합계 2.5∼4.5중량%와 바이로발리드 2.0∼4.0중량%와, 알킬페놀 화합물 10ppm미만, 바람직하게는 1ppm미만 및 프로안토시아니딘 10중량% 미만을 함유한다. 또한, 본 발명은 청구범위에 기재된 단계들로 구성되는 은행잎 추출물 제조방법에 관한 것이다.

DE-B 17 67 098호 공보에 기재된 친유성 성분 분리방법과는 대조적으로, 수성알콜 또는 수성아세톤에 의한 조추출물을 염소화 지방족 탄화수소로 직접 액체-액체 추출 처리치 않고, 유기용매성분 증류와 10중량% 이하, 바람직하게는 5중량%이하의 물로 희석하여 침전하는 친유성 성분 대부분을 여과 분리한다. 알킬페놀 화합물, 클로로필, 지방산유도체 및 바이플라본은 그의 수중용해도가 작으므로 침전되어, 여과분리할 수 있다. 이러한 과정을 거치는 중, 은행잎 추출물의 원하는 성분들은 용해상태로 잔류된다.

후속의 제거 단계에서, 알킬페놀 화합물은 10ppm 미만으로 그 함량이 더 감소된다.

특허공보 DB-B 17 67 098의 실시예 5에 의한, 메틸에틸 케톤/아세톤 수용액에 의한 추출물을 증류하여 용매를 제거한다. 그 잔류물을 고체함량이 5∼20%, 바람직하게는 약 10%가 될때까지 20∼60% 수성 에탄올중에 용해하고, DE-B 21 17 429의 실시예 1과 2에서와 같이 상기 용액에 납염 수용액을 가한다. 납 침전물을 분리한 후 얻어진 에탄올 수용액을 직접 또는 에탄올함량이 바람직하게는 30%가 되게 물로 희석한 후, 지방족 또는 지환족 탄화수소(비점이 약 60∼100℃)로 다단 액체-액체 추출 처리할 수 있다.

특허공보 DE-B 21 17 429의 실시예 3에 의해 얻어진 여액을 직접, 또는 에탄올 함량을 약 30%가 되게 조정한후, 상기와 유사하게 처리할 수 있다.

약리학적 실험예에서, 본 발명에 의한 추출물은, 라디칼 포획성과, 혈액순환을 자극하는 성질을 갖으며, 빈혈장애를 방지하고, 혈소판 응집을 억제한다.

또한, 본 발명은 은행잎 추출물을 함유하는 것이 특징인 약제에 관한 것이다.

본 발명의 은행잎 추출물은, 통상의 약제 조제 방법으로, 용액, 코팅정제, 정제 또는 주사용 제제로 가공할 수 있다. 본 발명에 의한 약제는, 말초 및 대뇌동맥 순환장해에 유용하다. 본 발명의 실시예들을 설명한다. 부와 %는 별도 지적이 없는 한 중량에 의한 것이다.

[실시예 1]

건조한 은행잎 100kg을 밀(mill)내에서 4mm이하의 입도로 파쇄하고, 60중량% 수성 아세톤 750kg을 가한 혼합물을 57∼59℃에서 30분간 강교반한다. 여과 또는 원심분리에 의해 고체류물을 분리하고, 동일 조건으로 2차의 추출을 행하였다. 상기 제1차와 제2차의 추출에 의한 추출물들을 합한다. 깅골린산 함량(건조추출물 기준)은 약 13,000ppm이었다.

얻은 추출물을 감압하 농축시켜 고체함량이 30∼40%, 아세톤 함량이 약 5중량% 이하가 되게 했다. 물을 가하여, 상기 농축물을 2배 체적이 되게 희석하고, 교반하면서 약 12℃로 방치 냉각했다. 상기 잎들에 존재하는 깅골린 산 즉, 알킬페놀 화합물을 대부분 함유하는 침전물이 형성됐다. 이 온도에서 1시간 방치후에 형성된 침전물을 원심분리해서 제거했다.

얻어진 상층 수용액중 깅골린산 함량(건조추출물 기준)은 약 320ppm이었다.

상기 수용액 100부에 황산암모늄 30부를 가하고 그 혼합물을 교반했다. 황산암모늄을 용해한후, 메틸에틸케톤 : 아세톤=6:4∼1:1의 혼합물로 2회 액체-액체 추출을 행함으로써, 첨가된 유기용제의 양을 상기 수용액 체적의 1/2이 되도록 했으며, 강교반 및 펌핑(pumping)후에, 혼합 프로세스 종료시에 형성된 상층 유기상(phase)을 제거했다.

이어서 메틸에틸케톤 아세톤 용액을 고체함량이 50∼70%가 되게 감압 농축했다.

이 농축물을 물과 95중량% 에탄올로 희석하여, 50중량% 수성에탄올중 건조추출물 10중량%인 용액을 얻었다. 강교반하면서, 이 용액에 수산화 초산납 수용액을 갈색에서 황갈색(녹색을 띤 갈색)으로 변색될때까지, 소량 첨가했다. 형성된 납-탄닌 침전물을 원심 분리에 의해 분리했다.

상기 납-탄닌 침전물이 분리된 상층액을 n-헥산으로 액체-액체 추출 처리하여 알킬페놀 화합물을 더 제거했다.

이 단계에서 그 알콜-수성 여액을 그의 1/3 체적의 n-헥산으로 실온에서 3회 이상 교반 추출했다. 다음, 그 수성 알콜 추출물용액을 감압 농축하여 에탄올 함량이 약 5%이하가 되게 했다. 이 용액 100부에 황산 암모늄 20부를 용해하고, 메틸에톤케톤 : 에탄올 = 6 : 4 용적비의 혼합물로 액체-액체추출을 행했다. 즉, 상기 수용액의 1/2 체적의 상기 유기 용매 혼합물로 2회 추출하였다.

유기상을 분리하고, 그의 20중량%의 황산 암모늄을 가하고 교반했다. 수상과 용해 안된 황산암모늄을 제거했다.

투명한 추출물 용액을 그 고체함량이 50∼70중량%가 되게 농축했다.

이 농축물을 최고온도 60∼80℃에서 감압 농축하여, 함수량이 5% 미만인 건조 추출물을 얻었다.

은행잎 100kg으로부터, 플라본 글리코시드 함량이 약 24중량%, 깅골리드가 약 3.6중량% 바이로발리드 2.9중량%, 프로안토시아니딘 약 6.5중량%, 알킬페놀 화합물 1ppm미만인 은행잎 추출물 2.5kg을 얻었다.

[실시예 2]

[실시예 3]

Claims (3)

1. 프라본 글리코시드 20∼30중량%와 깅골리드 A, B, C 및 J (합계) 2.5∼4.5 중량%와, 바이로발리드 2.0∼4.0중량%와, 알킬페놀화합물 10ppm미만 및 프로안토시아니딘 10중량%미만을 함유하는 은행잎 추출물의 제조방법에 있어서, (a) 신선한 또는 건조한 은행잎을 약 40∼100℃에서 수성 아세톤, 수성 탄소수 1∼3의 알카놀 또는 무수메탄올로 추출하고, (b) 상기 추출물을 그 유기용매 함량이 10중량%이하가 되게 유기용매의 대부분을 증류 제거하고 최후증류단계에서 물을 가하고, (c) 잔존하는 농축 수용액을 가수 희석하여 그 고체함량이 5∼25중량%가 되게 하고, 교반하면서, 25℃이하의 온도로 방치하여, 수중에 난용성인 친유성 성분으로 된 침전물을 제거하고, (d) 그 잔존수용액에 황산 암모늄을 30중량%가 되게 가하여 형성된 용액을 메틸에틸케톤 또는 메틸에틸케톤 : 아세톤 = 9 : 1 ∼ 4 : 6, 비율로 함유하는 혼합물로 추출하고, (e) 얻어진 추출물을 그 고체함량이 50∼70%가 되도록 농축하고, 그 농축물을 물과 에탄올로 희석하여, 고체함량 10중량%의 에탄올 50중량% 물 50중량%의 용액이 되게 하고, (f) 얻어진 용액에, 이 용액의 색깔이 갈색에서 황갈색으로 변할때까지 수산화 초산납 수용액을 가하여, 형성되는 침전물을 제거하고, (g) 잔존하는 알콜 수용액을 비점이 60∼100℃인 지방족 또는 치환식 용매로 추출하여, 알킬페놀 화합물을 더 제거하고, (h) 잔존하는 알콜 수용액을 그 에탄올 함량이 약 5% 이하가 되게 감압 농축하고, 황산암모늄을 그 함량이 20중량%가 되게 가하고, (i) 얻어진 용액을, 메틸에톤케톤:에탄올 = 8 : 2 ∼ 5 : 5의 혼합물로 추출하고, (k) 얻어진 유기상을 그의 고체함량이 50∼70중량%가 되게 농축하고, (l) 얻어진 농축물을 최고온도 60∼80℃에서 감압 건조하여 함수량이 5% 미만인 건조추출물을 얻는 것이 특징인 은행잎 추출물 제조방법.
2. 제1항 방법에 의하여 제조한 은행잎 추출물을 함유한 약제.
3. 제1항 방법에 의하여 제조한 은행잎 추출물.