JPWO2017222016A1 - カチオン性脂質 - Google Patents

Abstract

本発明は、細胞質への核酸送達に利用可能なカチオン性脂質を提供する。本発明のカチオン性脂質は、例えば、下記式（１ａ）で表される化合物又はその薬学的に許容される塩である。
【化１０４】

［式中、Ｌ_１及びＬ_２はそれぞれ独立に炭素数３〜１０のアルキレン基、Ｒ_１及びＲ_２はそれぞれ独立に炭素数４〜２２のアルキル基又は炭素数４〜２２のアルケニル基を表し、Ｘ_１は単結合又は−ＣＯ−Ｏ−を表し、環Ｐは下記式（Ｐ−１）〜（Ｐ−５）のいずれかを表す。］
【化１０５】

［式中、Ｒ_３は炭素数１〜３のアルキル基を表す。］

Description

本発明は、新規なカチオン性脂質に関する。

ｓｉＲＮＡ（ｓｍａｌｌ ｉｎｔｅｒｆｅｒｉｎｇ ＲＮＡ）、ｍｉＲＮＡ（ｍｉｃｒｏ ＲＮＡ）、ｓｈＲＮＡ（ｓｈｏｒｔ ｈａｉｒｐｉｎ ＲＮＡ、または、ｓｍａｌｌ ｈａｉｒｐｉｎ ＲＮＡ）発現ベクター、アンチセンスオリゴヌクレオチド等の核酸は、生体内で配列特異的な遺伝子発現抑制を誘導する核酸であり、核酸医薬として知られている。

これらの核酸医薬の中でも、特にｓｉＲＮＡが注目を集めている。ｓｉＲＮＡは、１９〜２３塩基対からなる二本鎖ＲＮＡであり、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡ ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ、ＲＮＡｉ）と呼ばれる配列特異的な遺伝子発現抑制を誘導する。

ｓｉＲＮＡは化学的には安定であるが、血しょう中のＲＮａｓｅ（ｒｉｂｏｎｕｃｌｅａｓｅ）により分解されやすい点、及び、単独では細胞膜を透過しにくいという点等において、治療用用途としての問題点を有している（例えば、特許文献１参照。）。

上記の問題点に対して、カチオン性脂質を含有する微粒子内にｓｉＲＮＡを封入することにより、封入されたｓｉＲＮＡを血しょう中での分解から保護し、かつ脂溶性の細胞膜へ透過させることを可能とすることが知られている（例えば、特許文献１参照。）。

また、特許文献２〜５には、ｓｉＲＮＡ等の核酸医薬の送達に用いられるカチオン性脂質であって、生分解能を向上させたカチオン性脂質が記載されている。

また、カチオン性脂質を含有する微粒子は、保管期間中に凝集しやすいという安定性の問題点があり、ポリエチレングリコール修飾脂質（ＰＥＧ脂質）を該微粒子に含有させて凝集を抑制する方法が知られている。さらに、特定のＰＥＧ脂質であるＰＥＧ−ＤＰＧを微粒子の構成成分とすることや該微粒子と脱イオン化された溶媒とからなる製剤とすることで、凝集抑制と核酸の送達効率とを改善する方法が、特許文献６に記載されている。

国際公開第２０１０／１４４７４０号パンフレット 国際公開第２０１１／１５３４９３号パンフレット 国際公開第２０１３／０８６３５４号パンフレット 国際公開第２０１３／１５８５７９号パンフレット 国際公開第２０１５／０９５３４６号パンフレット 国際公開第２０１４／０８９２３９号パンフレット

しかしながら、最近の進展にもかかわらず、細胞質への核酸送達に利用できるカチオン性脂質が依然として求められている。

本発明は、以下の[１]から[１５]に関する。

［１］下記式（１ａ）で表される化合物又はその薬学的に許容される塩。
［式中、Ｌ_１及びＬ_２はそれぞれ独立に炭素数３〜１０のアルキレン基、Ｒ_１及びＲ_２はそれぞれ独立に炭素数４〜２２のアルキル基又は炭素数４〜２２のアルケニル基を表し、Ｘ_１は単結合又は−ＣＯ−Ｏ−を表し、環Ｐは下記式（Ｐ−１）〜（Ｐ−５）のいずれかを表す。］
［式中、Ｒ_３は炭素数１〜３のアルキル基を表す。］
［２］下記式（１）で表される、［１］に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
［式中、Ｌ_１及びＬ_２はそれぞれ独立に炭素数３〜１０のアルキレン基、Ｒ_１及びＲ_２はそれぞれ独立に炭素数４〜２２のアルキル基又は炭素数４〜２２のアルケニル基を表し、Ｘ_１は単結合又は−ＣＯ−Ｏ−を表す。］

［３］下記式（Ａ１）〜（Ａ２２）で表される化合物からなる群より選択される、［１］又は［２］に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。

［３ａ］上記式（Ａ１）、（Ａ２）、（Ａ３）、（Ａ４）、（Ａ５）、（Ａ９）、（Ａ１２）、（Ａ１５）、（Ａ１６）、（Ａ１７）、（Ａ１９）、（Ａ２０）、（Ａ２２）で表される化合物からなる群より選択される、［３］に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
［３ｂ］上記式（Ａ１）、（Ａ２）、（Ａ３）、（Ａ４）、（Ａ５）、（Ａ９）、（Ａ１２）、（Ａ１５）、（Ａ２０）で表される化合物からなる群より選択される、［３］に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
［３ｃ］上記式（Ａ１）〜（Ａ５）で表される化合物からなる群より選択される、［３］に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
［３ｄ］上記式（Ａ６）〜（Ａ８）で表される化合物からなる群より選択される、［３］に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。

［３］下記式（Ａ１）で表される、［１］〜［３］のいずれかに記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。

［４］下記式（Ａ２）で表される、［１］〜［３］のいずれかに記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。

［５］下記式（Ａ３）で表される、［１］〜［３］のいずれかに記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。

［６］下記式（Ａ４）で表される、［１］〜［３］のいずれかに記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。

［７］下記式（Ａ５）で表される、［１］〜［３］のいずれかに記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。

［８］ 下記式（Ａ９）で表される、［１］〜［３］のいずれかに記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。

［９］下記式（Ａ１２）で表される、［１］〜［３］のいずれかに記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。

［１０］下記式（Ａ１５）で表される、［１］〜［３］のいずれかに記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。

［１１］下記式（Ａ２０）で表される、［１］〜［３］のいずれかに記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。

［１３］（Ｉ）［１］〜［１２］のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩と、（ＩＩ）中性脂質、ポリエチレングリコール修飾脂質、及びステロールからなる群から選ばれる少なくとも一種の脂質と、を含有する脂質複合体。

［１４］（Ｉ）［１］〜［１２］のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩と、（ＩＩ）中性脂質、ポリエチレングリコール修飾脂質、及びステロールからなる群から選ばれる少なくとも一種の脂質と、（ＩＩＩ）核酸と、を含有する組成物。

［１５］（Ｉ）［１］〜［１２］のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩と、（ＩＩ）中性脂質、ポリエチレングリコール修飾脂質、及びステロールからなる群から選ばれる少なくとも一種の脂質とを含有する極性有機溶媒含有水溶液と、（ＩＩＩ）核酸を含有する水溶液とを混合して混合液を得る工程と、混合液中の極性有機溶媒の含有率を減少させる工程と、を含む組成物の製造方法。

本発明のカチオン性脂質は以下の一以上の効果を有する。
（１）本発明のカチオン性脂質によれば、核酸を細胞質に効率よく放出することを可能とする。
（２）本発明のカチオン性脂質によれば、一定期間保管した場合に脂質複合体の粒子径の増大を抑制することを可能とする。
したがって、本発明のカチオン性脂質は、細胞質への核酸送達用の脂質としての利用可能性を有している。

試験例１の結果を示すグラフである。 試験例２の結果を示すグラフである。

以下、本発明について実施形態及び例示物等を示して詳細に説明するが、本発明は以下に示す実施形態及び例示物等に限定されるものではなく、本発明の要旨を逸脱しない範囲において任意に変更して実施できる。なお、本明細書に記載した全ての文献及び刊行物は、その目的にかかわらず参照によりその全体を本明細書に組み込むものとする。

＜カチオン性脂質＞
一実施形態において、本発明は、下記式（１ａ）で表される化合物又はその薬学的に許容される塩であり、カチオン性脂質として用いることができる。カチオン性脂質は、前記塩の水和物又は前記塩の溶媒和物であってもよい。
式（１ａ）中、環Ｐは下記式（Ｐ−１）〜（Ｐ−５）のいずれかを表す。
上記式（Ｐ−１）〜（Ｐ−５）中、Ｒ_３は炭素数１〜３のアルキル基を表す。

一実施形態において、環Ｐは下記式（Ｐ−１）、式（Ｐ−２）、（Ｐ−４）、（Ｐ−５）のいずれかを表す。
一実施形態において、環Ｐは下記式（Ｐ−１）を表す。

一実施形態において、本発明は、下記式（１）で表される化合物又はその薬学的に許容される塩であり、カチオン性脂質として用いることができる。カチオン性脂質は、前記塩の水和物又は前記塩の溶媒和物であってもよい。

式（１ａ）および式（１）中、Ｌ_１及びＬ_２はそれぞれ独立に炭素数３〜１０のアルキレン基、Ｒ_１及びＲ_２はそれぞれ独立に炭素数４〜２２のアルキル基又は炭素数４〜２２のアルケニル基を表し、Ｘ_１は単結合又は−ＣＯ−Ｏ−を表す。

本明細書において、「アルキル」とは、指定された数の炭素原子を有する直鎖状、環状または分岐状の飽和脂肪族炭化水素基を意味する。
本明細書において、「アルケニル」とは、指定された数の炭素原子および少なくとも１つの炭素−炭素二重結合を有する直鎖または分岐の炭化水素基を意味する。例えば、モノエン、ジエン、トリエン及びテトラエンなどが挙げられるが、これらに限定されるものではない。
本明細書において、「アルキレン」とは、指定された数の炭素原子を有する直鎖状、環状または分岐状の２価の飽和脂肪族炭化水素基を意味する。
本明細書において、「ハロゲン」は、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉを意味する。

本発明の一実施形態は、上記式（１ａ）または式（１）中、Ｌ_１及びＬ_２はそれぞれ独立に炭素数３〜１０（例えば、炭素数５〜１０又は炭素数３〜８）のアルキレン基、Ｒ_１及びＲ_２はそれぞれ独立に炭素数４〜１８のアルキル基又は炭素数４〜１８のアルケニル基、Ｘ_１は単結合又は−ＣＯ−Ｏ−で表される化合物又はその薬学的に許容される塩であり、カチオン性脂質として用いることができる。カチオン性脂質は、前記塩の水和物又は前記塩の溶媒和物であってもよい。

本発明の一実施形態は、上記式（１ａ）または式（１）中、Ｌ_１及びＬ_２はそれぞれ独立に炭素数３〜１０（例えば、炭素数５〜１０又は炭素数３〜８）の直鎖状のアルキレン基であり、Ｒ_１及びＲ_２はそれぞれ独立に炭素数４〜１８の直鎖状または分岐状のアルキル基又は炭素数４〜１８の直鎖状のアルケニル基であり、Ｘ_１は−ＣＯ−Ｏ−である化合物又はその薬学的に許容される塩であり、カチオン性脂質として用いることができる。カチオン性脂質は、前記塩の水和物又は前記塩の溶媒和物であってもよい。
したがって、本発明の一実施形態は、下記式（１ｂ）で表される化合物又はその薬学的に許容される塩である。
式（１ｂ）中、Ｒ_１及びＲ_２はそれぞれ独立に炭素数４〜２２のアルキル基又は炭素数４〜２２のアルケニル基、好ましくは炭素数４〜１８の直鎖状又は分岐状のアルキル基又は炭素数４〜１８の直鎖状のアルケニル基であり、ｎ１およびｎ２はそれぞれ独立に３〜１０（例えば５〜１０又は３〜８）の整数を表す。

本発明の一実施形態において、本発明は、上記式（１ａ）または式（１）中、Ｘ_１は−ＣＯ−Ｏ−であり、Ｌ_１はＬ_２と同一であり、Ｒ_１はＲ_２と同一である化合物又はその薬学的に許容される塩であり、カチオン性脂質として用いることができる。カチオン性脂質は、前記塩の水和物又は前記塩の溶媒和物であってもよい。

本発明の一実施形態において、本発明は、上記式（１ａ）または式（１）中、Ｌ_１及びＬ_２はそれぞれ独立に炭素数５〜１０の直鎖状のアルキレン基であり、Ｒ_１は炭素数４〜１８の直鎖状又は分岐状のアルキル基又は炭素数４〜１８の直鎖状のアルケニル基であり、Ｒ_２は炭素数４〜１８の直鎖状のアルキル基であり、Ｘ_１は単結合である化合物又はその薬学的に許容される塩である。本実施形態において好ましくは、Ｌ_２及びＲ_２の合計の炭素数が９〜１２である。本実施形態の化合物はカチオン性脂質として用いることができる。カチオン性脂質は、前記塩の水和物又は前記塩の溶媒和物であってもよい。
したがって、本発明の一実施形態は、下記式（１ｃ）で表される化合物又はその薬学的に許容される塩である。
式（１ｃ）中、Ｒ_１は炭素数４〜２２のアルキル基又は炭素数４〜２２のアルケニル基、好ましくは炭素数４〜１８の直鎖状又は分岐状のアルキル基又は炭素数４〜１８の直鎖状のアルケニル基であり、ｎ１は３〜１０（例えば５〜１０又は３〜８）の整数を表し、ｎ２は８〜２５、好ましくは８〜１１の整数を表す。

以下に実施形態の化合物の一例を示す。

本発明の一実施形態は、上記式（Ａ１）〜（Ａ２２）のいずれかで表される化合物又はその薬学的に許容される塩であり、カチオン性脂質として用いることができる。カチオン性脂質は、前記塩の水和物又は前記塩の溶媒和物であってもよい。
本発明の一実施形態は、上記式（Ａ１）〜（Ａ５）、（Ａ９）〜（Ａ２２）のいずれかで表される化合物又はその薬学的に許容される塩であり、カチオン性脂質として用いることができる。カチオン性脂質は、前記塩の水和物又は前記塩の溶媒和物であってもよい。
本発明の一実施形態は、上記式（Ａ１）、（Ａ２）、（Ａ３）、（Ａ４）、（Ａ５）、（Ａ９）、（Ａ１２）、（Ａ１５）、（Ａ１６）、（Ａ１７）、（Ａ１９）、（Ａ２０）、（Ａ２２）のいずれかで表される化合物又はその薬学的に許容される塩であり、カチオン性脂質として用いることができる。カチオン性脂質は、前記塩の水和物又は前記塩の溶媒和物であってもよい。
本発明の一実施形態は、上記式（Ａ１）、（Ａ２）、（Ａ３）、（Ａ４）、（Ａ５）、（Ａ９）、（Ａ１２）、（Ａ１５）、（Ａ２０）のいずれかで表される化合物又はその薬学的に許容される塩であり、カチオン性脂質として用いることができる。カチオン性脂質は、前記塩の水和物又は前記塩の溶媒和物であってもよい。
本発明の一実施形態は、上記式（Ａ１）、（Ａ２）、（Ａ３）、（Ａ４）、（Ａ５）のいずれかで表される化合物又はその薬学的に許容される塩であり、カチオン性脂質として用いることができる。カチオン性脂質は、前記塩の水和物又は前記塩の溶媒和物であってもよい。
本発明の一実施形態は、上記式（Ａ６）、（Ａ７）、（Ａ８）のいずれかで表される化合物又はその薬学的に許容される塩であり、カチオン性脂質として用いることができる。カチオン性脂質は、前記塩の水和物又は前記塩の溶媒和物であってもよい。

本明細書において、カチオン性脂質とは、一つ以上の炭化水素基を含む脂質親和性領域と、生理的ｐＨでプロトン化する極性基を含む親水性領域とを有する両親媒性分子である。即ち、本発明のカチオン性脂質は、プロトン化し、陽イオンを形成し得る。例えば上記式（１）で表される化合物は、ピペリジン環の窒素原子上の孤立電子対に水素イオンが配位した下記式（１）’で表される化合物（陽イオン）を包含する。
上記陽イオンと対になって、本実施形態のカチオン性脂質が含有し得る陰イオンとしては、薬学的に許容されるものであれば特に限定されず、例えば、塩化物イオン、臭化物イオン、硝酸イオン、硫酸イオン、リン酸イオン等の無機イオン；酢酸イオン、シュウ酸イオン、マレイン酸イオン、フマル酸イオン、クエン酸イオン、安息香酸イオン、メタンスルホン酸イオン等の有機酸イオン等が挙げられる。
本発明のカチオン性脂質は、幾何異性体、光学異性体等の立体異性体、互変異性体等が存在し得るが、本発明のカチオン性脂質は、これらを含め、全ての可能な異性体およびそれらの混合物を包含する。

＜カチオン性脂質の製造方法＞
本発明のカチオン性脂質の製造方法について説明する。下記式（１０）および（１１）に、カチオン性脂質の合成スキームの一実施形態を示す。本明細書に記載されている化合物はすべて、化合物として本発明に含まれる。本発明の化合物は、以下のスキームにおいて記載されている方法の少なくとも１つに従って合成することができる。

(式中Ｌ_１及びＲ_１はそれぞれ前記と同義であり、Ｒは式（１）における−Ｌ_２−Ｘ_１−Ｒ_２--（Ｌ_２、Ｘ_１及びＲ_２はそれぞれ前記と同義）である。)

式（１）のカチオン性脂質（Ｘ_１が単結合である化合物）は、例えば、上記式（１０）に示すスキーム１に従って合成することができる。
（工程１−１：エステル化）
まず、アルコール（ａ１）とハロゲン化アルキルカルボン酸 Ｘ−Ｌ_１−ＣＯＯＨ（Ｘはハロゲン原子であり、Ｌ_１は前記と同義）（好ましくは臭化アルキルカルボン酸）とを縮合剤の存在下で反応させてエステルのハロゲン化物（ａ２）を得る。縮合剤としては、例えば、１−［３−（ジメチルアミノ）プロピル］−３−エチルカルボジイミド（ＥＤＣ）塩酸塩、Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）等が挙げられる。必要に応じて、塩基を加えても良い。塩基としては、例えば、ＮＭＭ、ＴＥＡ、ＤＩＰＥＡ、ＤＭＡＰ、ピリジン、ピコリン、ルチジン等が挙げられる。溶媒としては、例えば、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、塩化メチレン、クロロホルム、ベンゼン、ヘキサン、酢酸エチル等が挙げられる。
（工程１−２：アルキル鎖導入）
次いで、エステルハロゲン化物（ａ２）とジ-tert-ブチル マロネートとを塩基の存在下で反応させる。これによりマロン酸ジエステルの活性メチレンの水素原子が引き抜かれて、アルキルエステル鎖が導入され、化合物（ａ３）を得る。塩基としては例えばＮａＨが挙げられる。溶媒としては、例えば、ジオキサン、テトラヒドロフラン、シクロペンチルメチルエーテル、１，２−ジメトキシエタン等のエーテル類等が挙げられる。
（工程１−３：アルキル鎖導入）
次いで、化合物（ａ３）とハロゲン化アルキル（好ましくはヨウ化物）を塩基の存在下で反応させ、アルキル鎖を導入し、化合物（ａ４）を得る。塩基および溶媒は上記工程１−２と同様のものを使用できる。
（工程１−４：脱保護）
次いで、化合物（ａ４）のtert-ブチル基を酸加水分解条件下で脱保護し、化合物（ａ５）を得る。脱保護に使用する酸としては、例えば、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）、塩酸等が挙げられる。溶媒としては、例えば、塩化メチレン等が挙げられる。
（工程１−５：脱炭酸）
次いで、化合物（ａ５）の脱炭酸によりカルボン酸（ａ６）を得る。脱炭酸反応は、例えば、溶媒中、加熱することにより行うことができる。溶媒としては、例えば、ベンゼン、トルエン、キシレン、などの芳香族炭化水素類等が用いられる。
（工程１−６：還元工程）
化合物（ａ６）のカルボキシル基を還元剤の存在下でヒドロキシル基へと還元して化合物（ａ７）を得る。還元剤としては、例えばボラン（ＢＨ_３）−テトラヒドロフラン錯体、ボラン−ジメチルスルフィド錯体等のボラン錯体などが挙げられる。溶媒としては、例えばジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、ジオキサンなどのエーテル類、クロロホルム、塩化メチレン、ジクロロエタンなどのハロゲン化炭化水素類、ヘキサン、ベンゼン、トルエンなどの炭化水素類、およびこれらの混合溶媒等が用いられる。
（工程１−７：エステル化）
得られたアルコール（ａ７）と１−メチル−ピペリジン−４−カルボン酸またはその誘導体（ハロゲン化水素塩など）とを縮合剤、塩基の存在下で反応させて最終物である化合物（ａ８）（Ｒ＝Ｌ_２−Ｘ_１−Ｒ_２）（式（１）のカチオン性脂質に相当する化合物）が得られる。縮合剤および塩基としては工程１−１と同様のものを使用できる。

なお、Ｘ_１が−ＣＯ−Ｏ−である化合物を合成する際には、上記スキーム１の工程１−３において、後述する工程２−１に準じてカルボキシル基が保護された化合物を調製し、これを化合物（ａ３）と反応させ、最後に脱保護およびエステル化を行えばよい。

(式中Ｌ_１及びＲ_１はそれぞれ前記と同義であり、Ｒは式（１）における−Ｌ_２−Ｘ_１−Ｒ_２--（Ｌ_２、Ｘ_１及びＲ_２はそれぞれ前記と同義）である。)
上記スキーム２は、当業者が、異なる方法によって式（１）のカチオン性脂質（Ｘ_１が単結合である化合物）を合成する方法を示したものである。
（工程２−１：エステル化）
まず、ベンジルアルコールに対してハロゲン化アルキルカルボン酸を縮合させることでエステルのハロゲン化物（ｂ１）を得る。エステル化条件は工程１−１と同様である。
（工程２−２：アルキル鎖導入）
次いで、工程１−２と同様に、エステルのハロゲン化物（ｂ１）とジ-tert-ブチル マロネートとを塩基の存在下で反応させ、化合物（ｂ２）を得る。
（工程２−３：アルキル鎖導入）
次いで、工程１−３と同様に、化合物（ｂ２）とハロゲン化アルキルを塩基の存在下で反応させ、化合物（ｂ３）を得る。
（工程２−４：脱保護）
次いで、工程１−４と同様に、化合物（ｂ３）のtert-ブトキシカルボニル基を酸加水分解条件下で脱保護し、化合物（ｂ４）を得る。
（工程２−５：脱炭酸）
次いで、工程１−５と同様に、カルボン酸（ｂ５）を得る。
（工程２−６：還元工程）
さらにこれを、工程１−６と同様に還元剤の存在下で還元して化合物（ｂ６）を得る。
（工程２−７：エステル化）
得られた化合物（ｂ６）と１−メチル−ピペリジン−４−カルボン酸またはその誘導体（ハロゲン化水素塩など）とを縮合剤、塩基の存在下でエステル化反応させて、化合物（ｂ７）を得る。
（工程２−８：脱保護）
続いて、還元条件下で、ベンジル保護基を脱保護して化合物（ｂ８）を得る。脱保護は例えば、パラジウム／炭素等の金属触媒存在下、接触水素添加反応することにより行えばよい。
（工程２−９：エステル化）
最後に、化合物（ｂ８）をアルコール（Ｒ_１ＯＨ）と反応させることにより化合物（ｂ９）（Ｒ＝Ｌ_２−Ｘ_１−Ｒ_２）（式（１）のカチオン性脂質に相当する化合物）を得ることができる。

なお、Ｘ_１が−ＣＯ−Ｏ−である化合物を合成する際には、上記スキーム２の工程２−３において、工程２−１に準じてカルボキシル基が保護された化合物を化合物（ｂ２）と反応させ、これを工程２−８において脱保護すればよい。

上記式（１ａ）の化合物についても、上記スキーム１又は２に準じて合成することができる。具体的には、環Ｐが式（Ｐ−１）、（Ｐ−４）、（Ｐ−５）の構造である場合には、例えば、上記工程１−７または工程２−７において１−メチル−ピペリジン−４−カルボン酸に代えて、式（Ｐ−１）、（Ｐ−４）、（Ｐ−５）の構造に対応するカルボン酸を用いてエステル化反応させればよい。また、環Ｐが式（Ｐ−２）、（Ｐ−３）の構造である場合には、工程１−７に代えて、塩基の存在下、工程１−６で得られた化合物ａ７、カルボニル化試薬（例えばクロロギ酸 ４−ニトロフェニルなどのクロロギ酸エステル）、Ｎ−アルキルピペラジン又はＮ−アルキルホモピペラジン（式（Ｐ−２）、（Ｐ−３）の構造を有する化合物）を反応させることにより式（１ａ）で表される化合物を得ることができる（後述の実施例Ａ−８を参照）。

本発明の化合物の合成において、出発原料の製造が特に記載されていない限り、それらの化合物は公知であるか、または当技術分野で公知の類似の方法により、もしくは以下の実施例中に記載されているとおり、調製することができる。当業者であれば、上記のスキームが、単に本発明の化合物の代表的な調製法に過ぎないことを理解しており、他の周知の方法を同様に使用することができる。

本発明の化合物の調製において、分子の官能基を保護することが必要かつ／又は望ましい場合がある。これは、当業者に周知の従来の保護基によって行うことができる。保護基は、その後の都合のよい段階で、当該技術分野で周知の方法を用いて除去することができる。なお、上記スキームで示した保護基（tert-ブチル保護基、ベンジル保護基）は当業者に周知の他の保護基に置換することもできる。

＜脂質複合体＞
本発明は、（Ｉ）上述したカチオン性脂質と、（ＩＩ）中性脂質、ポリエチレングリコール修飾脂質及びステロールからなる群より選択される少なくとも一種の脂質と、を含有する脂質複合体を提供する。本発明の一実施形態として、脂質複合体は、（Ｉ）上述したカチオン性脂質と、（ＩＩ）中性脂質、ポリエチレングリコール修飾脂質及びステロールからなる群より選択される少なくとも一種の脂質と、（ＩＩＩ）核酸と、を含有する。したがって、本発明の脂質複合体は、核酸を含んでいても含んでいなくてもよい。本実施形態の脂質複合体は、核酸を細胞質に効率よく放出することを可能とする。また、本実施形態の脂質複合体は、一定期間（例えば１か月又は３か月）保管した場合に粒子径の増大が抑制され、優れた物理的安定性を示し得る。
カチオン性脂質を含有する脂質と核酸とで形成される複合体の形態としては、例えば、核酸と脂質一重(一分子)層からなる膜(逆ミセル)との複合体、核酸とリポソームとの複合体、核酸とミセルとの複合体等が挙げられる。本発明の一実施形態の脂質複合体において、核酸はカチオン性脂質を含有する脂質で構成された微粒子内に封入されている。

本実施形態の脂質複合体は、脂質複合体が含有する全脂質を基準として、上述したカチオン性脂質を、例えば１０〜１００モル％、例えば２０〜９０モル％、例えば４０〜８０モル％含有する。カチオン性脂質は、１種を単独で、又は２種以上を混合して用いることができる。

核酸としては、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ発現ベクター、アンチセンスオリゴヌクレオチド、ｍＲＮＡ、リボザイム等が挙げられる。一実施形態において、核酸は、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｍＲＮＡであってもよい。

本実施形態の脂質複合体は、脂質複合体の全重量に対して、核酸を例えば０．０１〜５０重量％、例えば０．１〜３０重量％、例えば１〜１０重量％含有する。

本実施形態の脂質複合体は、脂質成分として、（Ｉ）上述したカチオン性脂質と、（ＩＩ）中性脂質、ポリエチレングリコール修飾脂質、及びステロールからなる群より選択される少なくとも一種の脂質とを含有する。本実施形態の脂質複合体は、脂質複合体の全重量に対して、脂質成分を例えば５０〜１００重量％、例えば７０〜９９．９９重量％、例えば９０〜９９重量％含有する。

中性脂質とは、生理的ｐＨで、非電荷または中性の両性イオンの形のいずれかで存在する脂質を意味する。中性脂質としては、ジオレオイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、パルミトイルオレオイルホスファチジルコリン（ＰＯＰＣ）、卵ホスファチジルコリン（ＥＰＣ）、ジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）、ジアラキドイルホスファチジルコリン（ＤＡＰＣ）、ジベヘノイルホスファチジルコリン（ＤＢＰＣ）、ジリグノセロイルホスファチジルコリン（ＤＬＰＣ）、ジオレオイルホスファチジルコリン（ＤＯＰＣ）、スフィンゴミエリン、セラミド、ジオレオイルホスファチジルグリセロール（ＤＯＰＧ）、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール（ＤＰＰＧ）、ホスファチジルエタノールアミン（ＰＯＰＥ）、ジオレオイル−ホスファチジルエタノールアミン４−（Ｎ−マレイミドメチル）−シクロヘキサン−１−カルボキシレート（ＤＯＰＥ−ｍａｌ）等が挙げられる。中性脂質は、１種を単独で、又は２種以上を混合して用いることができる。

本実施形態の脂質複合体は、脂質複合体が含有する全脂質を基準として、中性脂質を、例えば０〜５０モル％、例えば０〜４０モル％、例えば０〜３０モル％含有してもよい。

ポリエチレングリコール修飾脂質としては、ＰＥＧ２０００−ＤＭＧ（ＰＥＧ２０００−ジミリスチルグリセロール）、ＰＥＧ２０００−ＤＰＧ（ＰＥＧ２０００−ジパルミトイルグリセロール）、ＰＥＧ２０００−ＤＳＧ（ＰＥＧ２０００−ジステアロイルグリセロール）、ＰＥＧ５０００−ＤＭＧ（ＰＥＧ５０００−ジミリスチルグリセロール）、ＰＥＧ５０００−ＤＰＧ（ＰＥＧ５０００−ジパルミトイルグリセロール）、ＰＥＧ５０００−ＤＳＧ（ＰＥＧ５０００−ジステアロイルグリセロール）、ＰＥＧ−ｃＤＭＡ（Ｎ−［（メトキシポリ（エチレングリコール）２０００）カルバミル］−１，２−ジミリスチルオキシルプロピル−３−アミン）、ＰＥＧ−Ｃ−ＤＯＭＧ（Ｒ−３−［（ω−メトキシ−ポリ（エチレングリコール）２０００）カルバモイル）］−１，２−ジミリスチルオキシルプロピル−３−アミン）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）−ジアシルグリセロール（ＤＡＧ）、ＰＥＧ−ジアルキルオキシプロピル（ＤＡＡ）、ＰＥＧ−リン脂質、ＰＥＧ−セラミド（Ｃｅｒ）等が挙げられる。

ＰＥＧ−ジアルキルオキシプロピルとしては、ＰＥＧ−ジラウリルオキシプロピル、ＰＥＧ−ジミリスチルオキシプロピル、ＰＥＧ−ジパルミチルオキシプロピル、ＰＥＧ−ジステアリルオキシプロピル等が挙げられる。ポリエチレングリコール修飾脂質は、１種を単独で、又は２種以上を混合して用いることができる。

本実施形態の脂質複合体は、脂質複合体が含有する全脂質を基準として、ポリエチレングリコール修飾脂質を、例えば０〜３０モル％、例えば０〜２０モル％、例えば０〜１０モル％含有してもよい。

ステロールはステロイド骨格を有するアルコールである。ステロールとしては、コレステロール、ジヒドロコレステロール、ラノステロール、β−シトステロール、カンペステロール、スチグマステロール、ブラシカステロール、エルゴカステロール、フコステロール、３β−［Ｎ−（Ｎ’，Ｎ’−ジメチルアミノエチル）カルバモイル］コレステロール（ＤＣ−Ｃｈｏｌ）等が挙げられる。ステロールは、１種を単独で、又は２種以上を混合して用いることができる。

本実施形態の脂質複合体は、脂質複合体が含有する全脂質を基準として、ステロールを、例えば０〜９０モル％、例えば１０〜８０モル％、例えば２０〜５０モル％含有してもよい。

本実施形態の脂質複合体における脂質成分の組み合わせは、特に限定されず、例えば、上述したカチオン性脂質、中性脂質及びステロールの組み合わせ、上述したカチオン性脂質、中性脂質、ポリエチレングリコール修飾脂質及びステロールの組み合わせ等が挙げられる。

＜組成物＞
一実施形態において、本発明は、（Ｉ）上述したカチオン性脂質と、（ＩＩ）中性脂質、ポリエチレングリコール修飾脂質及びステロールからなる群より選択される少なくとも一種の脂質と、（ＩＩＩ）核酸と、を含有する組成物を提供する。本実施形態の組成物は、核酸を細胞質に効率よく放出することを可能とする。本実施形態の組成物は、上述した脂質複合体、薬学的に許容される媒体、及び場合によりその他の添加剤を含有するものであってもよい。薬学的に許容される媒体、その他の添加剤については後述する。

本実施形態の組成物は、組成物が含有する全脂質を基準として、上述したカチオン性脂質を、例えば１０〜１００モル％、例えば２０〜９０モル％、例えば４０〜７０モル％含有する。カチオン性脂質は、１種を単独で、又は２種以上を混合して用いることができる。

核酸としては、上述したものと同様のものが挙げられる。本実施形態の組成物は、組成物の全重量に対して、核酸を例えば０．０１〜５０重量％、例えば０．１〜３０重量％、例えば１〜１０重量％含有する。

本実施形態の組成物は、脂質成分として、（Ｉ）上述したカチオン性脂質と、（ＩＩ）中性脂質、ポリエチレングリコール修飾脂質、及びステロールからなる群より選択される少なくとも一種の脂質とを含有する。

中性脂質としては、上述したものと同様のものが挙げられる。本実施形態の組成物は、組成物が含有する全脂質を基準として、中性脂質を、例えば０〜５０モル％、例えば０〜４０モル％、例えば０〜３０モル％含有してもよい。

ポリエチレングリコール修飾脂質としては、上述したものと同様のものが挙げられる。本実施形態の組成物は、組成物が含有する全脂質を基準として、ポリエチレングリコール修飾脂質を、例えば０〜３０モル％、例えば０〜２０モル％、例えば０〜１０モル％含有してもよい。

ステロールとしては、上述したものと同様のものが挙げられる。本実施形態の組成物は、組成物が含有する全脂質を基準として、ステロールを、例えば０〜９０モル％、例えば１０〜８０モル％、例えば２０〜５０モル％含有してもよい。

本実施形態の組成物における脂質成分の組み合わせは、特に限定されず、例えば、上述したカチオン性脂質、中性脂質及びステロールの組み合わせ、上述したカチオン性脂質、中性脂質、ポリエチレングリコール修飾脂質及びステロールの組み合わせ等が挙げられる。

本実施形態の組成物は、上述した成分の他にも、その他の添加剤として、ショ糖、ブドウ糖、ソルビトール、乳糖等の糖；グルタミン、グルタミン酸、グルタミン酸ナトリウム、ヒスチジン等のアミノ酸；クエン酸、リン酸、酢酸、乳酸、炭酸、酒石酸等の酸の塩等を含有してもよい。

本実施形態の組成物は、医薬組成物として製剤化されていてもよい。医薬組成物の剤型としては、例えば注射剤が挙げられる。

本実施形態の組成物は、例えば、凍結乾燥等により溶媒を除去した粉末状態であってもよく、液体状態であってもよい。本発明の一実施形態の組成物は、上述した実施形態の脂質複合体を含む粉末組成物である。粉末組成物は、液体状態の組成物（分散液）から例えば濾過、遠心分離等によって溶媒を除去して調製してもよいし、該分散液を凍結乾燥して調製してもよい。組成物が粉末状態である場合には、使用前に薬学的に許容される媒体に懸濁又は溶解させて注射剤として用いることができる。本発明の一実施形態の組成物は、上述した実施形態の脂質複合体および薬学的に許容される媒体を含む液体組成物である。組成物が液体状態である場合には、そのままで又は薬学的に許容される媒体に懸濁又は溶解させて注射剤として用いることができる。

薬学的に許容される媒体としては、滅菌水；生理食塩水；ブドウ糖、Ｄ−ソルビトール、Ｄ−マンノース、Ｄ−マンニトール、塩化ナトリウム等の補助薬を含む等張液；リン酸緩衝液、クエン緩衝液、酢酸緩衝液等の緩衝液等が挙げられる。本実施形態の組成物は、更に、エタノール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール等のアルコール等の溶解補助剤、安定剤、酸化防止剤、防腐剤、薬剤製造上一般に用いられる賦形剤、充填剤、増量剤、結合剤、湿潤剤、崩壊剤、潤滑剤、界面活性剤、分散剤、保存剤、矯味矯臭剤、無痛化剤等の添加剤を含有していてもよい。

組成物の患者への投与は、例えば、動脈内注射、静脈内注射、皮下注射等の非経口用法により行うことができる。組成物の投与量は、投与対象、対象臓器、症状、投与方法によっても異なる。組成物の投与対象は限定されず、各種動物に適用することができるが、特に、哺乳動物、好ましくはヒトおよび臨床試験、スクリーニング、実験における実験動物に適用することができる。

本実施形態の組成物は、カチオン性脂質を含有する脂質で構成された微粒子内に核酸が封入された脂質複合体を形成している。脂質複合体の「平均粒子径」は、体積平均、数平均、Ｚ−平均のいずれかの方法で算出することができる。本実施形態の組成物において、脂質複合体の平均粒子径（Ｚ−平均）は、例えば１０〜１０００ｎｍ、例えば３０〜５００ｎｍ、例えば３０〜２００ｎｍであってよい。
本実施形態の組成物は、保管期間中、脂質複合体の粒子径が保管前と比べて極力増大しないものが好ましい。例えば、４℃で３ヶ月保管した場合の平均粒子径（Ｚ−平均）の大きさが保管前の粒子径の大きさに対して１．３倍以下であるものが好ましく、１．２倍以下であるものがより好ましく、１．１倍以下であるものが特に好ましい。

本実施形態の組成物は、非特異的な吸着や免疫反応を抑制する観点から、例えば血液中等の約ｐＨ７．４の環境下において、表面の荷電がほとんどないことが好ましい。また、エンドサイトーシスにより細胞内に取り込まれる際、エンドソーム膜との融合効率を向上させる観点から、低ｐＨ（例えば３．５〜７．０）環境下で正に帯電することが好ましい。

＜組成物の製造方法＞
一実施形態において、本発明は、（Ｉ）上述したカチオン性脂質と、（ＩＩ）中性脂質、ポリエチレングリコール修飾脂質及びステロールからなる群より選択される少なくとも一種の脂質とを含有する極性有機溶媒含有水溶液と、（ＩＩＩ）核酸を含有する水溶液とを混合して混合液を得る工程（ａ）と、混合液中の極性有機溶媒の含有率を減少させる工程（ｂ）とを備える、組成物の製造方法を提供する。本実施形態の製造方法によれば、核酸を細胞質に効率よく放出することが可能な組成物を製造することができる。

水溶性の核酸と上述したカチオン性脂質との静電的相互作用、及び脂質間の疎水的相互作用により、脂質で構成された微粒子内に核酸が封入された脂質複合体を形成することができる。例えば、混合液中の極性有機溶媒の含有率を減少させることによって、（Ｉ）上述したカチオン性脂質と、（ＩＩ）中性脂質、ポリエチレングリコール修飾脂質及びステロールからなる群より選択される少なくとも一種の脂質とを含む脂質成分の、極性有機溶媒含有水溶液に対する溶解度を変化させることにより、脂質複合体を形成させることができる。極性有機溶媒としては、エタノール等のアルコールが挙げられる。

まず、工程（ａ）において、（Ｉ）上述したカチオン性脂質と、（ＩＩ）中性脂質、ポリエチレングリコール修飾脂質及びステロールからなる群より選択される少なくとも一種の脂質とを溶解させた、極性有機溶媒含有水溶液と、（ＩＩＩ）核酸を含有する水溶液とを混合して混合液を得る。極性有機溶媒含有水溶液中の極性有機溶媒の濃度は、核酸の水溶液と混合後も、脂質分子が溶解する条件を満たしていれば特に限定されない。一例をあげると、工程（ａ）の極性有機溶媒含有水溶液における極性有機溶媒の濃度は０〜６０重量％でありうる。

続いて、工程（ｂ）において、上記の混合液に水等を添加することにより、極性有機溶媒の含有率を減少させる。これにより、脂質複合体を形成させることができる。脂質複合体を効率よく形成させるためには、極性有機溶媒の含有率を急激に低下させることが好ましい。一例をあげると、工程（ｂ）における最終の極性有機溶媒含有水溶液における極性有機溶媒の濃度は０〜５重量％でありうる。

また、工程（ａ）で得られた上記混合液を、透析によって、極性有機溶媒を除去し、溶媒を薬学的に許容される媒体に置換してもよい。透析過程で溶液中の極性有機溶媒の含有率が減少するため、これにより、脂質複合体を形成させることができる。

本実施形態の組成物の製造方法によれば、核酸が効率よく微粒子内部に封入された脂質複合体を得ることができる。かかる脂質複合体は優れた物理的安定性を有し得る。例えば、一定期間（例えば１か月、例えば３か月）保管した場合に、粒子径の増大が抑制され得る。

組成物に封入される核酸が核酸医薬である場合には、組成物を医薬組成物として利用することができる。例えば、本発明の組成物は、標的となる細胞質（例えば各種疾患の原因となる細胞質）にin vivo又はin vitroで所望の核酸を導入する治療（例えば遺伝子治療）に用いることができる。よって本発明の一実施形態は、上述した脂質複合体を含む医薬組成物を用いる各種疾患の治療方法（特に遺伝子治療方法）を提供する。なお、投与の対象、投与の方法及び条件は上記と同様である。

本発明の一実施形態は上記アニオン性脂質を含む核酸医薬送達用キットでありうる。また、当該キットは、各種標的細胞に対する治療（例えば遺伝子治療）などに好ましく用いることができる。本実施形態のキットにおいて、アニオン性脂質の保存状態は特に限定されず、それぞれの安定性（保存性）及び使用容易性等を考慮して溶液状又は粉末状など任意の状態に設定することができる。本実施形態のキットは、上記アニオン性脂質以外に、例えば、各種核酸、各種媒体（薬学的に許容される媒体、バッファ）、及び使用説明書（使用マニュアル）等を含んでもよい。本実施形態のキットは、標的細胞内に導入する所望の核酸および上記アニオン性脂質を含有する脂質を含む組成物または脂質複合体を調製するために使用される。調製した組成物または脂質複合体は、標的細胞への核酸送達のために有効に用いることができる。さらに、本発明の一実施形態は、上記アニオン性脂質を含む医薬組成物を含む核酸医薬送達用キットでありうる。本実施形態のキットは、上記医薬組成物以外に、例えば、各種媒体（薬学的に許容される媒体）、及び使用説明書（使用マニュアル）等を含んでもよい。

以下に実施例、製造例および試験例を挙げて本発明を更に詳述するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。実施例、製造例中の化合物名は、ソフトウエア（商品名「ＣｈｅｍＤｒａｗ Ｕｌｔｒａ ｖｅｒ．１２．０」、パーキンエルマー社製）を用いて命名した。
本発明の化合物を合成するために利用される出発原料、試薬、酸、塩基、脱水剤、溶媒、および触媒はすべて、市販されているか、または当業者に公知の有機合成法によって生成することができる。さらに、本発明の化合物は、以下の実施例で示されている通り、当業者に公知の有機合成法により製造することができる。

実施例において使用される略語は当業者に周知の慣用的な略語である。いくつかの略語を以下に示す。
ＤＩＰＥＡ：Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＡＰ：４−（ジメチルアミノ）ピリジン
ＤＭＦ：Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
ＥＤＣ：１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩
ｎ−：ノルマル
ｔｅｒｔ−：ターシャリー
ＥｔＯＡｃ：酢酸エチル
ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸
ＴＨＦ：テトラヒドロフラン
^１Ｈ−ＮＭＲ：プロトン核磁気共鳴スペクトルメトリー

以下の実施例及び製造例中の「室温」は通常約１０℃から約３５℃を示す。％は特記しない限り重量パーセントを示す。

プロトン核磁気共鳴スペクトルの化学シフトは、テトラメチルシランに対するδ単位（ｐｐｍ）で記録されている。パターンの略語は、次の通りである。
ｓ：シングレット、ｄ：ダブレット、ｔ：トリプレット、ｑ：カルテット、ｑｕｉｎ：クインテット、ｍ：マルチプレット、ｂｒ：ブロード。
クロマトグラフィーに関しては、ＹＡＭＡＺＥＮ社製パラレルプレップ｛カラム：ＹＡＭＡＺＥＮ社製 Ｈｉ−ＦｌａｓｈＴＭ Ｃｏｌｕｍｎ（Ｓｉｌｉｃａｇｅｌ）、サイズ；Ｓ（１６×６０ｍｍ）、Ｍ（２０×７５ｍｍ）、Ｌ（２６×１００ｍｍ）、２Ｌ（２６×１５０ｍｍ）｝、あるいはＢｉｏｔａｇｅ社製フラッシュ自動精製システムＩｓｏｌｅｒａＴＭ｛カラム：ＳＮＡＰ Ｃａｒｔｒｉｄｇｅ ＫＰ−Ｓｉｌ（１０ｇ、２５ｇ、５０ｇ、１００ｇ、３４０ｇ）｝を用いた。

Ａ．カチオン性脂質の合成
［製造例１］
２−ブチルオクチル ９−ブロモノナノエートの合成

９−ブロモノナン酸（１．１ｇ，４．７ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（０．９１ｍＬ，５．３ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（７６ｍｇ，０.６３ｍｍｏｌ）を塩化メチレン（１３ｍＬ）に溶解し、氷冷下、ＥＤＣ（１．０ｇ，５．３ｍｍｏｌ）を加えた。２−ブチル−１−オクタノール（０．５８ｇ，３．１ｍｍｏｌ）を加え、室温で２時間撹拌した。反応混合物に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加え、酢酸エチルで抽出した。有機相を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。濾過後、溶媒を減圧下留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｎ−ヘプタン／酢酸エチル）にて精製し、標記化合物（１．２ｇ，２．９６ｍｍｏｌ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ（ｐｐｍ）：０．８２−０．９５（ｍ，６Ｈ），１．１７−１．４９（ｍ，２４Ｈ），１．５２−１．７０（ｍ，３Ｈ），１．７５−１．９３（ｍ，２Ｈ），２．２３−２．３６（ｍ，２Ｈ），３．３４−３．４７（ｍ，２Ｈ），３．９１−４．０２（ｍ，２Ｈ）．

［製造例２］
ベンジル ９−ブロモノナノエートの合成

ベンジルアルコール（０．５０ｍＬ，４．８４ｍｍｏｌ）、９−ブロモノナン酸（１．３８ｇ，５．８０ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（５９ｍｇ，０．４８ｍｍｏｌ）を塩化メチレン（９．６ｍＬ）に溶解し、氷冷下、ＥＤＣ（１．１６ｇ，６．０５ｍｍｏｌ）を加え、室温で２時間撹拌した。反応混合物に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加え、ジエチルエーテルで抽出した。有機相を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。濾過後、溶媒を減圧下留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｎ−ヘプタン／酢酸エチル）にて精製し、標記化合物（１．４９ｇ，４．５５ｍｍｏｌ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ（ｐｐｍ）：１．２２−１．４８（ｍ，８Ｈ），１．５８−１．７１（ｍ，２Ｈ），１．７８−１．９０（ｍ，２Ｈ），２．３０−２．４０（ｍ，２Ｈ），３．３５−３．４４（ｍ，２Ｈ），５．１２（ｓ，２Ｈ），７．２６−７．４５（ｍ，５Ｈ）．

［製造例３］
ベンジル ８−ブロオクタノエートの合成

製造例２の方法に準じ、ベンジルアルコール（１．８５ｍＬ，１７．９ｍｍｏｌ）、８−ブロモオクタン酸（４．０ｇ，１７．９ｍｍｏｌ）、ＥＤＣ（３．７８ｇ，１９．７ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（０．２２ｇ，１．７９ｍｍｏｌ）、および塩化メチレン（３６ｍＬ）から標記化合物（４．８ｇ，１５．３ｍｍｏｌ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ（ｐｐｍ）：１．２２−１．４８（ｍ，６Ｈ），１．５８−１．７１（ｍ，２Ｈ），１．７８−１．９０（ｍ，２Ｈ），２．３０−２．３８（ｍ，２Ｈ），３．３３−３．４５（ｍ，２Ｈ），５．１２（ｓ，２Ｈ），７．２８−７．４４（ｍ，５Ｈ）．

［製造例４］
８−ペンチルトリデカン−１−オールの合成

（１）（６−カルボキシヘキシル）トリフェニルホスホニウム ブロミドの合成
７−ブロモヘプタン酸（２．０ｇ，９．５７ｍｍｏｌ）とトリフェニルホスフィン（２．５ｇ，９．５７ｍｍｏｌ）とをアセトニトリル（２０ｍＬ）に懸濁し、１８時間加熱還流した。室温に放冷したのち減圧下濃縮し標記化合物（４．１ｇ，８．６６ｍｍｏｌ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ（ｐｐｍ）：１．２２−１．５９（ｍ，８Ｈ），２．１２−２．２５（ｍ，２Ｈ），３．４７−３．６２（ｍ，２Ｈ），７．１９−７．２８（ｍ，２Ｈ），７．３４−７．４４（ｍ，２Ｈ），７．７１−７．８５（ｍ，１０Ｈ），７．８５−７．９４（ｍ，３Ｈ），１１．９７（ｂｒ ｓ，１Ｈ）．

（２）８−ペンチル−７−トリデセン酸の合成
製造例４−（１）で得た化合物（４．６５ｇ，９．８７ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１５ｍＬ）に溶解し、窒素雰囲気下、室温でナトリウム ビス（トリメチルシリル）アミド／ＴＨＦ溶液（１Ｍ，１９．７ｍＬ，１９．７ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を４５℃まで加熱したのち３０分間撹拌した。ウンデカン−６−オン（１．７ｍＬ，８．２２ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（５ｍＬ）溶液を滴下したのち加熱還流した。反応混合物を２２時間撹拌したのち、塩酸（２Ｍ）をｐＨが２になるまで注意深く加えた。水（１００ｍＬ）を加えジエチルエーテルで抽出したのち、有機相を無水硫酸マグネシウムで乾燥した。濾過後、溶媒を減圧下留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル／シクロヘキサン）にて精製し、標記化合物とウンデカン−６−オンとの１：１の混合物（１．３６ｇ）として得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ（ｐｐｍ）：０．８０−０．８９（ｍ，６Ｈ），１．１６−１．３８（ｍ，１８Ｈ），１．４３−１．５３（ｍ，２Ｈ），１．８９−１．９９（ｍ，４Ｈ），２．１７（ｔ，Ｊ＝７．４３Ｈｚ，２Ｈ），５．０７（ｔ，Ｊ＝６．９０Ｈｚ，１Ｈ），１１．８３（ｂｒ ｓ，１Ｈ）．

（３）８−ペンチルトリデシル酸の合成
製造例４−（２）で得た化合物（１．３６ｇ）と１０％パラジウム−炭素（０．０６ｇ，０．０６０ｍｍｏｌ）とをエタノール（５ｍＬ）に懸濁し、水素雰囲気下、室温常圧下で１８時間撹拌した。反応混合物をセライトでろ過しエタノールで洗浄した。ろ液を減圧下濃縮し、標記化合物（０．６０ｇ，２．１８ｍｍｏｌ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ（ｐｐｍ）：０．８５（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，６Ｈ），１．１４−１．３２（ｍ，２５Ｈ），１．４２−１．５２（ｍ，２Ｈ），２．１８（ｔ，Ｊ＝７．４３Ｈｚ，２Ｈ）．

（４）８−ペンチルトリデカン−１−オールの合成
水素化リチウムアルミニウム／ＴＨＦ溶液（２．４Ｍ，１．３ｍＬ，３．１５ｍｍｏｌ）に、窒素雰囲気下、製造例４−（３）で得た化合物（１．３６ｇ）のＴＨＦ（５ｍＬ）溶液を氷冷下滴下した。室温で２時間撹拌したのち塩酸（１Ｍ，８ｍＬ）を滴下し１時間撹拌した。有機相をジエチルエーテルで抽出したのち、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水の順に洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。濾過後、溶媒を減圧下留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル／シクロヘキサン）にて精製し、標記化合物（０．２８ｇ，１．０２ｍｍｏｌ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ（ｐｐｍ）：０．８８（ｔ，Ｊ＝７．２４Ｈｚ，６Ｈ），１．１３−１．４１（ｍ，２８Ｈ），１．５４−１．６０（ｍ，２Ｈ），３．５９−３．６８（ｍ，２Ｈ）．

［製造例５］
４−ノニルトリデカン−１−オールの合成

（１）（３−ブロモプロポキシ）（ｔｅｒｔ−ブチル）ジメチルシランの合成
３−ブロモ−１−プロパノール（６．５ｍＬ，７１．９ｍｍｏｌ）を塩化メチレン（２５０ｍＬ）に溶解し、室温でイミダゾール（７．８４ｇ，１１５．０ｍｍｏｌ）を加え完全に溶解した。ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル クロリド（１３．０ｇ，８６．３ｍｍｏｌ）を加え、室温で３日間撹拌した。反応液をろ過したのち減圧下濃縮した。残渣にジエチルエーテル（３００ｍＬ）を加え、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水の順に洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。濾過後、溶媒を減圧下留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（シクロヘキサン）にて精製し、標記化合物（１６．２ｇ，６４．０ｍｍｏｌ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ（ｐｐｍ）：０．０８（ｓ，６Ｈ），０．９１（ｓ，９Ｈ），２．０５（ｑｕｉｎ，Ｊ＝６．０５Ｈｚ，２Ｈ），３．５３（ｔ，Ｊ＝６．４２Ｈｚ，２Ｈ），３．７５（ｔ，Ｊ＝５．６９Ｈｚ，２Ｈ）．

（２）｛３−［（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ］プロピル｝トリフェニルホスホニウム ブロミドの合成
製造例４−（１）の方法に準じ、製造例５−（１）で得られた化合物（１６．２ｇ，６３．９ｍｍｏｌ）、トリフェニルホスフィン（１６．８ｇ，６３．９ｍｍｏｌ）およびアセトニトリル（１２５ｍＬ）から、標記化合物（２１．２ｇ，４１．１ｍｍｏｌ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ（ｐｐｍ）：０．０１（ｓ，６Ｈ），０．８４（ｓ，９Ｈ），１．６５−１．７５（ｍ，２Ｈ），３．４８−３．５７（ｍ，２Ｈ），３．６９（ｔ，Ｊ＝６．１４Ｈｚ，２Ｈ），７．７３−７．８４（ｍ，１２Ｈ），７．８７−７．９３（ｍ，３Ｈ）．

（３）ｔｅｒｔ−ブチルジメチル［（４−ノニル−３−トリデセン−１−イル）オキシ］シランの合成
製造例５−（２）で得た化合物（４．３８ｇ，８．５０ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１５ｍＬ）に溶解し、窒素雰囲気下、室温でナトリウム ビス（トリメチルシリル）アミド／ＴＨＦ溶液（１Ｍ，８．５ｍＬ，８．５ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を４５℃まで加熱したのち３０分間撹拌した。ノナデカン−１０−オン（２．０ｇ，７．０８ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１０ｍＬ）溶液を滴下したのち２１時間加熱還流した。 反応混合物を室温まで冷却したのちジエチルエーテルを加え、水、飽和食塩水の順に洗浄し、有機相を無水硫酸マグネシウムで乾燥した。濾過後、溶媒を減圧下留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（シクロヘキサン）にて精製し、標記化合物（１．１６ｇ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ（ｐｐｍ）：０．０７（ｓ，６Ｈ），０．９０（ｍ，１５Ｈ），１．２１−１．４１（ｍ，２８Ｈ），１．９２−２．０４（ｍ，４Ｈ），２．２４（ｑ，Ｊ＝７．３４Ｈｚ，２Ｈ），３．５８（ｔ，Ｊ＝７．２４ Ｈｚ，２Ｈ），５．０９（ｔ，Ｊ＝７．１５Ｈｚ，１Ｈ）．

（４）４−ノニルトリデカン−１−オールの合成
製造例５−（３）で得た化合物（１．１６ｇ，２．６４ｍｍｏｌ）および１０％パラジウム−炭素（０．２８ｇ，０．２６ｍｍｏｌ）を酢酸エチル（１０ｍＬ）および酢酸（０．１５ｍＬ，２．６４ｍｍｏｌ）に懸濁し、水素雰囲気下、室温で常圧で１８時間撹拌した。反応混合物をセライトでろ過しエタノールで洗浄したのち、ろ液を減圧下濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル／シクロヘキサン）にて精製し、標記化合物（０．３５ｇ，１．０８ｍｍｏｌ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ（ｐｐｍ）：０．８０−０．９０（ｍ，６Ｈ），１．１３−１．３０（ｍ，３５Ｈ），１．３２−１．３９（ｍ，２Ｈ），３．３２−３．３８（ｍ，２Ｈ），４．３０（ｔ，Ｊ＝５．２３Ｈｚ，１Ｈ）．

［製造例６］
４−ヘプチルウンデカン−１−オールの合成

（１）ｔｅｒｔ−ブチル［（４−ヘプチル−３−ウンデセン−１−イル）オキシ］ジメチルシランの合成
製造例５−（３）の方法に準じ、｛３−［（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ］プロピル｝トリフェニルホスホニウム ブロミド（３．０ｇ，５．８３ｍｍｏｌ）、ＴＨＦ（１０ｍＬ）、ナトリウム ビス（トリメチルシリル）アミド／ＴＨＦ溶液（１Ｍ，５．８ｍＬ，５．８ｍｍｏｌ）、およびペンタデカン−８−オン（１．１ｇ，４．８６ｍｍｏｌ）から、標記化合物（０．８３ｇ，２．１７ｍｍｏｌ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（６００Ｈｚ，ＣＤＣｌ_３）δ（ｐｐｍ）：０．０７（ｓ，６Ｈ），０．８４−０．９５（ｍ，１５Ｈ），０．８９（ｓ，１Ｈ），１．２１−１．４１（ｍ，２０Ｈ），１．９２−２．０５（ｍ，４Ｈ），２．２４（ｑ，Ｊ＝７．３４Ｈｚ，２Ｈ），３．５８（ｔ，Ｊ＝７．２４Ｈｚ，２Ｈ），５．０９（ｔ，Ｊ＝７．２４Ｈｚ，１Ｈ）．

（２）４−ヘプチルウンデカン−１−オールの合成
製造例５−（４）の方法に準じ、製造例６−（１）で得た化合物（０．８３ｇ，２．１７ｍｍｏｌ）、１０％パラジウム−炭素（０．２３ｇ，０．２２ｍｍｏｌ）、酢酸エチル（１０ｍＬ）、および酢酸（０．２５ｍＬ，４．３５ｍｍｏｌ）から、標記化合物（０．４２ｇ，１．５６ｍｍｏｌ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ（ｐｐｍ）：０．８２−０．８９（ｍ，６Ｈ），１．１４−１．３１（ｍ，２７Ｈ），１．３３−１．３９（ｍ，２Ｈ），３．３２−３．３８（ｍ，２Ｈ），４．３０（ｔ，Ｊ＝５．１４ Ｈｚ，１Ｈ）．

［製造例７］
４−ペンチルノナン−１−オールの合成

（１）ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル［（４−ペンチル−３−ノネン−１−イル）オキシ］シランの合成
製造例５−（３）の方法に順じ、｛３−［（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ］プロピル｝トリフェニルホスホニウム ブロミド（５．０ｇ，９．７２ｍｍｏｌ）、ＴＨＦ（４ｍＬ）、ナトリウム ビス（トリメチルシリル）アミド／ＴＨＦ溶液（１Ｍ，９．７ｍＬ，９．７ｍｍｏｌ）、およびウンデカン−６−オン（１．７ｍＬ，８．１０ｍｍｏｌ）から、標記化合物（１．１６ｇ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（６００Ｈｚ，ＣＤＣｌ_３）δ（ｐｐｍ）：０．０７（ｓ，６Ｈ），０．９０（ｍ，１５Ｈ），１．１９−１．４３（ｍ，１３Ｈ），１．９２−２．０５（ｍ，４Ｈ），２．２１−２．２９（ｍ，２Ｈ），３．５８（ｔ，Ｊ＝７．２４Ｈｚ，２Ｈ），５．１０（ｔ，Ｊ＝７．１５Ｈｚ，１Ｈ）．

（２）４−ペンチルノナン−１−オ−ルの合成
製造例５−（４）の方法に準じ、製造例７−（１）で得た化合物（１．１２ｇ，３．４３ｍｍｏｌ）、１０％パラジウム−炭素（０．３７ｇ，０．３４ｍｍｏｌ）、酢酸エチル（１５ｍＬ）、および酢酸（０．３９ｍＬ，６．８６ｍｍｏｌ）から、標記化合物（０．２２ｇ，１．０２ｍｍｏｌ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ（ｐｐｍ）：０．８７−０．９３（ｍ，６Ｈ），１．１８−１．３６（ｍ，１９Ｈ），１．３７−１．４５（ｍ，２Ｈ），３．３６−３．４２（ｍ，２Ｈ），４．３５（ｔ，Ｊ＝５．２３Ｈｚ，１Ｈ）．

［製造例８］
ベンジル ４−ブロモブタノエートの合成
ベンジルアルコール（２．８４ｍＬ，２７．３ｍｍｏｌ）、４−ブロモブタン酸（５．０１ｇ，３０．０ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（０．３３ｇ，２．７３ｍｍｏｌ）を塩化メチレン（５０ｍＬ）に溶解し、氷冷下、ＥＤＣ（６．５ｇ，３４．１ｍｍｏｌ）を加え、室温で２．５時間撹拌した。反応混合物を減圧下濃縮したのちジエチルエーテルに溶解した。飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、水、１０％クエン酸水溶液で順に洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。濾過後、溶媒を減圧下留去し、標記化合物（６．４１ｇ，２４．９ｍｍｏｌ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ（ｐｐｍ）：２．２０（ｑｕｉｎ，Ｊ＝６．８３Ｈｚ，２Ｈ），２．５６（ｔ，Ｊ＝７．１５ Ｈｚ，２Ｈ），３．４６（ｔ，Ｊ＝６．５１Ｈｚ，２Ｈ），５．１３（ｓ，２Ｈ），７．２８−７．４２（ｍ，５Ｈ）．

［製造例９］
ベンジル ６−ブロモヘキサノエートの合成
製造例８の方法に準じ、ベンジルアルコール（１．９３ｍＬ，１８．５ｍｍｏｌ）、６−ブロモヘキサン酸（４．３３ｇ，２２．２ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（０．２３ｇ，１．８５ｍｍｏｌ）、ＥＤＣ（４．４３ｇ，２３．１ｍｍｏｌ）および塩化メチレン（３５ｍＬ）から、標記化合物（５．４３ｇ，１９．０ｍｍｏｌ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ（ｐｐｍ）：１．４４−１．５１（ｍ，２Ｈ），１．６４−１．７２（ｍ，２Ｈ），１．８３−１．９０（ｍ，２Ｈ），２．３８（ｔ，Ｊ＝７．４３ Ｈｚ，２Ｈ），３．３９（ｔ，Ｊ＝６．６９ Ｈｚ，２Ｈ），５．１２（ｓ，２Ｈ），７．３０−７．４０（ｍ，５Ｈ）．

［製造例１０］
（１Ｒ，５Ｓ，６ｒ）−３−メチル−３−アザビシクロ［３．１．０］ヘキサン−６−カルボン酸 塩酸塩の合成

（１）（１Ｒ，５Ｓ，６ｒ）−エチル ３−メチル−３−アザビシクロ［３．１．０］ヘキサン−６−カルボキシレートの合成
（１Ｒ，５Ｓ，６ｒ）−エチル ３−アザビシクロ［３．１．０］ヘキサン−６−カルボキシレート（ＣＡＳ １７４４５６−７７−０）（０．８９ｇ，５．７４ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（２０ｍＬ）に溶解し、酢酸（０．４９ｍＬ，８．６ｍｍｏｌ）、ホルムアルデヒド溶液（１１．７ｍＬ，１６１．５ｍｏｌ）を室温で順に加え、３０分間撹拌した。ナトリウムトリ（アセトキシ）ボロヒドリド（２．４３ｇ，１１．５ｍｍｏｌ）を加え、室温で３時間撹拌した。反応混合物を、減圧下、濃縮したのち、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加え、塩化メチレンで抽出した。無水硫酸ナトリウムで乾燥した。濾過後、溶媒を減圧下留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（塩化メチレン／メタノール）にて精製し、標記化合物（０．７０ｇ，４．１４ｍｍｏｌ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ（ｐｐｍ）：１．２５（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ），１．９４（ｂｒ ｓ，２Ｈ），２．０１（ｂｒ ｓ，１Ｈ），２．２９（ｓ，３Ｈ），２．３５（ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，２Ｈ），３．０５（ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，２Ｈ），４．０９（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ）．

（２）（１Ｒ，５Ｓ，６ｒ）−３−メチル−３−アザビシクロ［３．１．０］ヘキサン−６−カルボン酸 塩酸塩の合成
製造例１０−（１）で得た化合物（０．６０ｇ，３．５５ｍｍｏｌ）に濃塩酸（１０ｍＬ）を加え、７０℃で１２時間撹拌した。反応混合物を、減圧下、濃縮し、標記化合物（０．５２ｇ，３．０５ｍｍｏｌ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ（ｐｐｍ）：２．１４（ｂｒ ｓ，２Ｈ），２．２５（ｂｒ ｓ，１Ｈ），２．７４（ｂｒ ｓ，３Ｈ），３．２５−３．３７（ｍ，２Ｈ），３．５６−３．６７（ｍ，２Ｈ）、１０．９１（ｂｒ ｓ，１Ｈ），１２．４９（ｂｒ ｓ，１Ｈ）．

［製造例１１］
（１Ｒ，５Ｓ，６ｓ）−３−メチル−３−アザビシクロ［３．１．０］ヘキサン−６−カルボン酸 塩酸塩の合成

（１）（１Ｒ，５Ｓ，６ｓ）−エチル ３−メチル−３−アザビシクロ［３．１．０］ヘキサン−６−カルボキシレートの合成
製造例１０−（１）の方法に準じ、（１Ｒ，５Ｓ，６ｓ）−エチル ３−アザビシクロ［３．１．０］ヘキサン−６−カルボキシレート（ＣＡＳ １１４４０９９−５４−６）（２．５ｇ，１６．１ｍｍｏｌ）、酢酸（１．４ｍＬ，２４．２ｍｍｏｌ）、ホルムアルデヒド溶液（１０．０ｍＬ，１３４．３ｍｍｏｌ）、ナトリウムトリ（アセトキシ）ボロヒドリド（６．８ｇ，３２．２ｍｍｏｌ）、およびＴＨＦ（５０ｍＬ）から、標記化合物（２．５ｇ，１４．８ｍｍｏｌ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ（ｐｐｍ）：１．２３（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，３Ｈ），１．４８−１．６８（ｍ，３Ｈ），２．２２（ｓ，３Ｈ），２．３３（ｂｒ ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），３．０２（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），４．１０（ｑ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ）．

（２）（１Ｒ，５Ｓ，６ｓ）−３−メチル−３−アザビシクロ［３．１．０］ヘキサン−６−カルボン酸 塩酸塩の合成
製造例１０−（２）の方法に準じ、製造例１０−（２）で得た化合物（５００ｍｇ，２．９６ｍｍｏｌ）と濃塩酸（１０ｍＬ）とから、標記化合物（３５０ｍｇ，１．９７ｍｍｏｌ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ（ｐｐｍ）：１．８８−１．９４（ｍ，０．４５Ｈ），１．９４−２．００（ｍ，０．５５Ｈ），２．３５−２．４５（ｍ，２Ｈ），２．６８（ｂｒ ｓ，１．６５Ｈ），２．６７（ｂｒ ｓ，１．３５Ｈ），３．０８−３．１８（ｍ，１．１Ｈ），３．４５−３．５７（ｍ，０．９Ｈ）、３．７３−３．８８（ｍ，２Ｈ），９．１６（ｂｒ ｓ，１Ｈ），１１．５２（ｂｒ ｓ，１Ｈ）．

＜カチオン性脂質の合成（１）＞
［実施例Ａ−１］
２−｛９−［（２−ブチルオクチル）オキシ］−９−オキソノニル｝ドデシル １−メチルピペリジン−４−カルボキシレート（カチオン性脂質１）

（１）１，１−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル ９−（２−ブチルオクチル）ノナン−１，１，９−トリカルボキシレートの合成
６０％水素化ナトリウム（５９ｍｇ，１．４８ｍｍｏｌ）を１，４−ジオキサン（６．５ｍＬ）に懸濁させ、室温でジ−ｔｅｒｔ−ブチル マロネート（０．３０ｍＬ，１．３５ｍｍｏｌ）をゆっくり加え、２０分間撹拌した。製造例１で得た化合物（５７３ｍｇ，１．４１ｍｍｏｌ）を１，４−ジオキサン（１ｍＬ）を使って加え、７０℃で３時間、９５℃で１５時間撹拌した。反応混合物を氷水バスで冷却し、飽和塩化アンモニウム水溶液を加え、ｎ−ヘプタンで抽出した。有機相を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。濾過後、溶媒を減圧下留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｎ−ヘプタン／酢酸エチル）にて精製し、標記化合物（４９０ｍｇ，０．９１ｍｍｏｌ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ（ｐｐｍ）：０．８０−０．９８（ｍ，６Ｈ），１．１８−１．３８（ｍ，２４Ｈ），１．３９−１．５４（ｍ，２Ｈ），１．４６（ｓ，１８Ｈ），１．５５−１．６９（ｍ，３Ｈ），１．７１−１．８７（ｍ，２Ｈ），２．２４−２．３５（ｍ，２Ｈ），３．０６−３．１５（ｍ，１Ｈ），３．９１−４．０２（ｍ，２Ｈ）．

（２）９，９−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル １−（２−ブチルオクチル）ノナデカン−１，９，９−トリカルボキシレートの合成
実施例Ａ−１−（１）で得られた化合物（４９０ｍｇ，０．９１ｍｍｏｌ）を１，４−ジオキサン（４ｍＬ）に溶解し、水冷下、６０％水素化ナトリウム（４７ｍｇ，１．１８ｍｍｏｌ）を加え、室温で５分間撹拌した。１−ヨードデカン（０．３９ｍＬ，１．８１ｍｍｏｌ）を加え、８０℃で１５時間撹拌した。反応混合物を氷水バスで冷却し、飽和塩化アンモニウム水溶液を加え、ｎ−ヘプタンで抽出した。有機相を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。濾過後、溶媒を減圧下留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｎ−ヘプタン／酢酸エチル）にて精製し、標記化合物（４５０ｍｇ，０．６６ｍｍｏｌ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ（ｐｐｍ）：０．８０−０．９６（ｍ，９Ｈ），１．０５−１．３６（ｍ，４０Ｈ），１．３９−１．４９（ｍ，２Ｈ），１．４４（ｓ，１８Ｈ），１．５３−１．６８（ｍ，３Ｈ），１．７０−１．８２（ｍ，４Ｈ），２．２３−２．３４（ｍ，２Ｈ），３．９２−４．０１（ｍ，２Ｈ）．

（３）２−｛９−［（２−ブチルオクチル）オキシ］−９−オキソノニル｝ドデカン酸の合成
実施例Ａ−１−（２）で得られた化合物（４５０ｍｇ，０．６６ｍｍｏｌ）を塩化メチレン（２ｍＬ）に溶解し、氷冷下、ＴＦＡ（１ｍＬ）を加え、室温で１．５時間撹拌した。反応混合物にトルエンを加え、減圧下、溶媒を留去した。トルエンの添加および留去を２回繰り返すことにより乾燥し、２−｛９−[（２−ブチルオクチル）オキシ]−９−オキソノニル｝−２−デシルマロン酸の粗生成物を得た。得られた粗生成物をキシレン（５ｍＬ）に溶解し、１５０℃で８時間撹拌した。反応混合物を室温に戻し、減圧下濃縮した。得られた残渣をカラムクロマトグラフィー（ｎ−ヘプタン／酢酸エチル）にて精製し、標記化合物（２４０ｍｇ，０．４６ｍｍｏｌ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ（ｐｐｍ）：０．８０−０．９７（ｍ，９Ｈ），１．１６−１．７０（ｍ，４９Ｈ），２．２２−２．４１（ｍ，３Ｈ），３．９２−４．０２（ｍ，２Ｈ）．

（４）２−ブチルオクチル １０−（ヒドロキシメチル）イコサノエートの合成
実施例Ａ−１−（３）で得た化合物（２４０ｍｇ，０．４６ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（４ｍＬ）に溶解し、−１５℃で０．９２Ｍボラン−ＴＨＦ錯体（０．７５ｍＬ，０．６９ｍｍｏｌ）を滴下し、０℃で２時間撹拌した。飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加え、室温で５分間撹拌し、酢酸エチルで抽出した。有機相を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。濾過後、溶媒を減圧下留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｎ−ヘプタン／酢酸エチル）にて精製し、標記化合物（１９７ｍｇ，０．３９ｍｍｏｌ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ（ｐｐｍ）：０．８０−０．９８（ｍ，９Ｈ），１．１０−１．３９（ｍ，４６Ｈ），１．３９−１．５０（ｍ，１Ｈ），１．５４−１．６９（ｍ，４Ｈ），２．２３−２．３６（ｍ，２Ｈ），３．４８−３．５９（ｍ，２Ｈ），３．９２−４．０２（ｍ，２Ｈ）．

（５）２−｛９−［（２−ブチルオクチル）オキシ］−９−オキソノニル｝ドデシル １−メチルピペリジン−４−カルボキシレートの合成
実施例Ａ−１−（４）で得た化合物（３８ｍｇ，０．０７４ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（０．０５４ｍＬ，０．３１ｍｍｏｌ）、１−メチル−ピペリジン−４−カルボン酸 塩酸塩（２７ｍｇ，０．１５ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（１．８ｍｇ，０．０１５ｍｍｏｌ）を塩化メチレン（０．８ｍＬ）に溶解し、氷冷下、ＥＤＣ（３１ｍｇ，０．１６ｍｍｏｌ）を加え、室温で１５時間撹拌した。反応混合物に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加え、クロロホルムで抽出した。有機相を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。濾過後、溶媒を減圧下留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｎ−ヘプタン／酢酸エチル／メタノール）にて精製し、標記化合物（３８ｍｇ，０．０６０ｍｍｏｌ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ（ｐｐｍ）：０．７７−０．９７（ｍ，９Ｈ），１．１３−１．４１（ｍ，４６Ｈ），１．５０−１．６９（ｍ，４Ｈ），１．６９−１．８５（ｍ，２Ｈ），１．８５−２．０９（ｍ，４Ｈ），２．１８−２．３５（ｍ，３Ｈ），２．２７（ｓ，３Ｈ），２．７２−２．８８（ｍ，２Ｈ），３．９０−４．０３（ｍ，４Ｈ）．

＜カチオン性脂質の合成（２）＞
［実施例Ａ−２］
２−｛９−オキソ−９−［（３−ペンチルオクチル）オキシ］ノニル｝ドデシル １−メチルピペリジン−４−カルボキシレート（カチオン性脂質２）

（１）９−ベンジル １，１−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル ノナン−１，１，９−トリカルボキシレートの合成
６０％水素化ナトリウム（８３ｍｇ，２．０７ｍｍｏｌ）を１，４−ジオキサン（９．４ｍＬ）に懸濁させ、室温でジ−ｔｅｒｔ−ブチル マロネート（０．４２ｍＬ，１．８８ｍｍｏｌ）をゆっくり加え、１０分間撹拌した。製造例２で得た化合物（６５０ｍｇ，１．９９ｍｍｏｌ）を加え、９５℃で１３時間撹拌した。反応混合物を氷水バスで冷却し、飽和塩化アンモニウム水溶液を加え、ｎ−ヘプタンで抽出した。有機相を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。濾過後、溶媒を減圧下留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｎ−ヘプタン／酢酸エチル）にて精製し、標記化合物（５３６ｍｇ，１．１６ｍｍｏｌ）を得た。

（２）１−ベンジル ９，９−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル ノナデカン−１，９，９−トリカルボキシレートの合成
実施例Ａ−１−（２）の方法に準じ、実施例Ａ−２−（１）で得られた化合物（５９０ｍｇ，１．２８ｍｍｏｌ）、１−ヨードデカン（０．５４ｍＬ，２．５５ｍｍｏｌ）、６５％水素化ナトリウム（７１ｍｇ，１．９１ｍｍｏｌ）および１，４−ジオキサン（５ｍＬ）から標記化合物（４７０ｍｇ，０．７８ｍｍｏｌ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ（ｐｐｍ）：０．８３−０．９３（ｍ，３Ｈ），１．０５−１．３６（ｍ，２６Ｈ），１．４４（ｓ，１８Ｈ），１．５７−１．６８（ｍ，２Ｈ），１．７１−１．８２（ｍ，４Ｈ），２．２９−２．３９（ｍ，２Ｈ），５．１１（ｓ，２Ｈ），７．２８−７．４２（ｍ，５Ｈ）．

（３）２−［９−（ベンジロキシ）−９−オキソノニル］ドデカン酸の合成
実施例Ａ−１−（３）の方法に準じ、実施例Ａ−２−（２）で得られた化合物（４７０ｍｇ，０．７８ｍｍｏｌ）、塩化メチレン（２ｍＬ）、ＴＦＡ（１ｍＬ）、およびキシレン（２ｍＬ）から標記化合物（２８６ｍｇ，０．６４ｍｍｏｌ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ（ｐｐｍ）：０．８１−０．９５（ｍ，３Ｈ），１．１８−１．３７（ｍ，２６Ｈ），１．３９−１．５２（ｍ，２Ｈ），１．５４−１．６９（ｍ，４Ｈ），２．２８−２．４１（ｍ，３Ｈ），５．１１（ｓ，２Ｈ），７．２８−７．４０（ｍ，５Ｈ）．

（４）ベンジル １０−（ヒドロキシメチル）イコサノエートの合成
実施例Ａ−１−（４）の方法に準じ、実施例Ａ−２−（３）で得た化合物（２８５ｍｇ，０．６４ｍｍｏｌ）、０．９２Ｍボラン−ＴＨＦ錯体（１．０ｍＬ，０．９６ｍｍｏｌ）、およびＴＨＦ（３．２ｍＬ）から標記化合物（２２３ｍｇ，０．５２ｍｍｏｌ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ（ｐｐｍ）：０．８１−０．９５（ｍ，３Ｈ），１．１２−１．３８（ｍ，３１Ｈ），１．３９−１．５０（ｍ，１Ｈ），１．５８−１．７２（ｍ，２Ｈ），２．２３−２．３６（ｍ，２Ｈ），３．４８−３．５９（ｍ，２Ｈ），５．１１（ｓ，２Ｈ），７．２８−７．４１（ｍ，５Ｈ）．

（５）２−［９−（ベンジロキシ）−９−オキソノニル］ドデシル １−メチルピペリジン−４−カルボキシレートの合成
実施例Ａ−１−（５）の方法に準じ、実施例Ａ−２−（４）で得た化合物（１１４ｍｇ，０．２６ｍｍｏｌ）、１−メチル−ピペリジン−４−カルボン酸 塩酸塩（９５ｍｇ，０．５３ｍｍｏｌ）、ＥＤＣ（１１１ｍｇ，０．５８ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（０．０９０ｍＬ，０．５３ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（６．４ｍｇ，０．０５３ｍｍｏｌ）および塩化メチレン（１．３ｍＬ）から標記化合物（１２８ｍｇ，０．２３ｍｍｏｌ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ（ｐｐｍ）：０．８１−０．９６（ｍ，３Ｈ），１．１５−１．４１（ｍ，３１Ｈ），１．５２−１．７０（ｍ，２Ｈ），１．７０−１．８４（ｍ，２Ｈ），１．８５−２．０６（ｍ，４Ｈ），２．１８−２．４０（ｍ，３Ｈ），２．２７（ｓ，３Ｈ），２．７３−２．８９（ｍ，２Ｈ），３．９２−４．０３（ｍ，２Ｈ），５．１２（ｓ，２Ｈ），７．２８−７．４４（ｍ，５Ｈ）．

（６）１０−｛［（１−メチルピペリジン−４−カルボニル）オキシ］メチル｝イコサン酸の合成
実施例Ａ−２−（５）で得た化合物（１２７ｍｇ，０．２３ｍｍｏｌ）を酢酸エチル（２ｍＬ）に溶解し、室温で１０％パラジウム−炭素（２４ｍｇ，５０％含水）を加え、水素雰囲気下、常圧で３時間撹拌した。反応液を濾過し、酢酸エチルで洗浄した。濾液を減圧下濃縮し、得られた残渣をカラムクロマトグラフィー（クロロホルム／メタノール）にて精製し、標記化合物（９４ｍｇ，０．２０ｍｍｏｌ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ（ｐｐｍ）：０．８１−０．９５（ｍ，３Ｈ），１．１２−１．４４（ｍ，３１Ｈ），１．５３−１．７１（ｍ，２Ｈ），１．７４−１．９５（ｍ，２Ｈ），１．９７−２．１０（ｍ，２Ｈ），２．１１−２．３７（ｍ，５Ｈ），２．４０（ｓ，３Ｈ），３．１１−３．２８（ｍ，２Ｈ），３．７９−３．９２（ｍ，１Ｈ），４．１４−４．２５（ｍ，１Ｈ）．

（７）２−｛９−オキソ−９−［（３−ペンチルオクチル）オキシ］ノニル｝ドデシル １−メチルピペリジン−４−カルボキシレートの合成
製造例２の方法に準じ、実施例Ａ−２−（６）で得た化合物（９３ｍｇ，０．２０ｍｍｏｌ）、３−ペンチルオクタン−１−オール（ＣＡＳ １４４３５１９−６３−８）（６０ｍｇ，０．３０ｍｍｏｌ）、ＥＤＣ（４２ｍｇ，０．２２ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（４．９ｍｇ，０．０４０ｍｍｏｌ）および塩化メチレン（１．５ｍＬ）から標記化合物（１０３ｍｇ，０．１６ｍｍｏｌ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ（ｐｐｍ）：０．８２−０．９５（ｍ，９Ｈ），１．１４−１．４６（ｍ，４６Ｈ），１．５０−１．６８（ｍ，６Ｈ），１．７０−１．８４（ｍ，２Ｈ），１．８５−２．０６（ｍ，４Ｈ），２．１９−２．３３（ｍ，３Ｈ），２．２７（ｓ，３Ｈ），２．７４−２．８７（ｍ，２Ｈ），３．９３−４．０２（ｍ，２Ｈ），４．０３−４．１４（ｍ，２Ｈ）．

＜カチオン性脂質の合成（３）＞
［実施例Ａ−３］
２−ノニル−１１−オキソ−１１−［（３−ペンチルオクチル）オキシ］ウンデシル １−メチルピペリジン−４−カルボキシレート（カチオン性脂質３）

（１）１−ベンジル ９，９−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル オクタデカン−１，９，９−トリカルボキシレートの合成
実施例Ａ−２−（１）で得られた化合物（５３６ｍｇ，１．１６ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（６ｍＬ）に溶解し、水冷下、６０％水素化ナトリウム（５８ｍｇ，１．４５ｍｍｏｌ）を加え、室温で５分間撹拌した。１−ヨードノナン（０．２３ｍＬ，１．１６ｍｍｏｌ）を加え、８０℃で２０時間撹拌した。反応混合物を氷水バスで冷却し、飽和塩化アンモニウム水溶液を加え、ｎ−ヘプタンで抽出した。有機相を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。濾過後、溶媒を減圧下留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｎ−ヘプタン／酢酸エチル）にて精製し、標記化合物（３４０ｍｇ，０．５７７ｍｍｏｌ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ（ｐｐｍ）：０．８２−０．９２（ｍ，３Ｈ），１．０３−１．３６（ｍ，２４Ｈ），１．４４（ｓ，１８Ｈ），１．５７−１．６８（ｍ，２Ｈ），１．７１−１．８１（ｍ，４Ｈ），２．２８−２．４０（ｍ，２Ｈ），５．１１（ｓ，２Ｈ），７．２８−７．４１（ｍ，５Ｈ）．

（２）１１−（ベンジロキシ）−２−ノニル−１１−オキソウンデカン酸の合成
実施例Ａ−１−（３）の方法に準じ、実施例Ａ−３−（１）で得られた化合物（３４０ｍｇ，０．５８ｍｍｏｌ）、塩化メチレン（２ｍＬ）、ＴＦＡ（１ｍＬ）、およびキシレン（２ｍＬ）から標記化合物（９６ｍｇ，０．２２ｍｍｏｌ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ（ｐｐｍ）：０．８０−０．９５（ｍ，３Ｈ），１．１２−１．７４（ｍ，３０Ｈ），２．２８−２．４１（ｍ，３Ｈ），５．１１（ｓ，２Ｈ），７．２８−７．４０（ｍ，５Ｈ）．

（３）ベンジル １０−（ヒドロキシメチル）ノナデカノエートの合成
実施例Ａ−１−（４）の方法に準じ、実施例Ａ−３−（２）で得た化合物（９６ｍｇ，０．２２ｍｍｏｌ）、０．９２Ｍボラン−ＴＨＦ錯体（０．３６ｍＬ，０．３３ｍｍｏｌ）およびＴＨＦ（１．１ｍＬ）から標記化合物（８０ｍｇ，０．１９ｍｍｏｌ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ（ｐｐｍ）：０．８１−０．９４（ｍ，３Ｈ），１．０９−１．３８（ｍ，２９Ｈ），１．３８−１．５０（ｍ，１Ｈ），１．５８−１．７１（ｍ，２Ｈ），２．３０−２．４０（ｍ，２Ｈ），３．４８−３．５８（ｍ，２Ｈ），５．１１（ｓ，２Ｈ），７．２９−７．４２（ｍ，５Ｈ）．

（４）１１−（ベンジロキシ）−２−ノニル−１１−オキソウンデシル １−メチルピペリジン−４−カルボキシレートの合成
実施例Ａ−１−（５）の方法に準じ、実施例Ａ−３−（３）で得た化合物（８０ｍｇ，０．１９ｍｍｏｌ）、１−メチル−ピペリジン−４−カルボン酸 塩酸塩（６９ｍｇ，０．３８ｍｍｏｌ）、ＥＤＣ（８１ｍｇ，０．４２ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（０．０６６ｍＬ，０．３８ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（４．７ｍｇ，０．０３８ｍｍｏｌ）および塩化メチレン（１．０ｍＬ）から標記化合物（９７ｍｇ，０．１８ｍｍｏｌ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ（ｐｐｍ）：０．８３−０．９４（ｍ，３Ｈ），１．１５−１．３９（ｍ，２９Ｈ），１．５２−１．７０（ｍ，２Ｈ），１．７０−１．８５（ｍ，２Ｈ），１．８５−２．０７（ｍ，４Ｈ），２．１９−２．４０（ｍ，３Ｈ），２．２７（ｓ，３Ｈ），２．７３−２．８８（ｍ，２Ｈ），３．９４−４．０２（ｍ，２Ｈ），５．１２（ｓ，２Ｈ），７．２８−７．４３（ｍ，５Ｈ）．

（５）１０−｛［（１−メチルピペリジン−４−カルボニル）オキシ］メチル｝ノナデカン酸の合成
実施例Ａ−２−（６）の方法に準じ、実施例Ａ−３−（４）で得た化合物（９６ｍｇ，０．１８ｍｍｏｌ）を酢酸エチル（２ｍＬ）に溶解し、室温で１０％パラジウム−炭素（１９ｍｇ，５０％含水）を加え、水素雰囲気下、常圧で３時間撹拌した。反応液を濾過し、酢酸エチルで洗浄した。濾液を減圧下濃縮し、得られた残渣をカラムクロマトグラフィー（クロロホルム／メタノール）にて精製し、標記化合物（７４ｍｇ，０．１６３ｍｍｏｌ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ（ｐｐｍ）：０．８１−０．９５（ｍ，３Ｈ），１．１２−１．４４（ｍ，２９Ｈ），１．５３−１．７１（ｍ，２Ｈ），１．７４−１．９４（ｍ，２Ｈ），１．９８−２．０８（ｍ，２Ｈ），２．０８−２．３８（ｍ，５Ｈ），２．３９（ｓ，３Ｈ），３．１０−３．３０（ｍ，２Ｈ），３．８０−３．９１（ｍ，１Ｈ），４．１４−４．２５（ｍ，１Ｈ）．

（６）２−ノニル−１１−オキソ−１１−［（３−ペンチルオクチル）オキシ］ウンデシル １−メチルピペリジン−４−カルボキシレートの合成
製造例２の方法に準じ、実施例Ａ−３−（５）で得た化合物（７４ｍｇ，０．１６ｍｍｏｌ）、３−ペンチルオクタン−１−オール（ＣＡＳ １４４３５１９−６３−８）（４９ｍｇ，０．２５ｍｍｏｌ）、ＥＤＣ（３８ｍｇ，０．２０ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（４．０ｍｇ，０．０３３ｍｍｏｌ）および塩化メチレン（１．２ｍＬ）から標記化合物（８１ｍｇ，０．１３ｍｍｏｌ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ（ｐｐｍ）：０．８１−０．９５（ｍ，９Ｈ），１．１５−１．４７（ｍ，４４Ｈ），１．５０−１．６８（ｍ，６Ｈ），１．７０−１．８４（ｍ，２Ｈ），１．８４−２．０６（ｍ，４Ｈ），２．１８−２．３３（ｍ，３Ｈ），２．２７（ｓ，３Ｈ），２．７３−２．８７（ｍ，２Ｈ），３．９４−４．０１（ｍ，２Ｈ），４．０４−４．１２（ｍ，２Ｈ）．

＜カチオン性脂質の合成（４）＞
［実施例Ａ−４］
ビス（３−ペンチルオクチル） ９―｛［（１−メチルピペリジン−４−カルボニル）オキシ］メチル｝ヘプタデカンジオエート（カチオン性脂質４）

（１）８−ベンジル １，１−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル オクタン−１，１，８−トリカルボキシレートの合成
６０％水素化ナトリウム（５９ｍｇ，１．４８ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（５．４ｍＬ）に懸濁させ、氷冷下、ジ−ｔｅｒｔ−ブチル マロネート（０．３０ｍＬ，１．３５ｍｍｏｌ）をゆっくり加え、０℃で５分間撹拌したのちバスを取り外して２０分間撹拌した。氷冷下、ナトリウムヨージド（６１ｍｇ，０．４０ｍｍｏｌ）、製造例３で得た化合物（４４３ｍｇ，１．４１ｍｍｏｌ）を加え、室温で１５時間撹拌した。反応混合物を氷水バスで冷却し、水を加え、ジエチルエーテルで抽出した。有機相を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。濾過後、溶媒を減圧下留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｎ−ヘプタン／酢酸エチル）にて精製し、標記化合物（４５６ｍｇ，１．０２ｍｍｏｌ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ（ｐｐｍ）：１．２３−１．３６（ｍ，８Ｈ），１．４５（ｓ，１８Ｈ），１．５８−１．６９（ｍ，２Ｈ），１．７２−１．８４（ｍ，２Ｈ），２．３０−２．４０（ｍ，２Ｈ），３．０５−３．１５（ｍ，１Ｈ），５．１１（ｓ，２Ｈ），７．２８−７．４１（ｍ，５Ｈ）．

（２）１，１５−ジベンジル ８，８−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル ペンタデカン−１，８，８，１５−テトラカルボキシレートの合成
実施例Ａ−４−（１）の方法に準じ、実施例Ａ−４−（１）で得られた化合物（４５６ｍｇ，１．０２ｍｍｏｌ）、製造例３で得た化合物（４７８ｍｇ，１．５３ｍｍｏｌ）、ナトリウムヨージド（４６ｍｇ，０．３１ｍｍｏｌ）、６０％水素化ナトリウム（４９ｍｇ，１．２２ｍｍｏｌ）およびＤＭＦ（３．３ｍＬ）から標記化合物（３８０ｍｇ，０．５６ｍｍｏｌ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ（ｐｐｍ）：１．０３−１．１７（ｍ，４Ｈ），１．２３−１．３６（ｍ，１２Ｈ），１．４３（ｓ，１８Ｈ），１．５６−１．６８（ｍ，４Ｈ），１．７０−１．８０（ｍ，４Ｈ），２．２９−２．３８（ｍ，４Ｈ），５．１１（ｓ，４Ｈ），７．２７−７．４１（ｍ，１０Ｈ）．

（３）１０−（ベンジロキシ）−２−［８−（ベンジロキシ）−８−オキソオクチル］−１０−オキソデカン酸の合成
実施例Ａ−１−（３）の方法に準じ、実施例Ａ−４−（２）で得られた化合物（３８０ｍｇ，０．５６ｍｍｏｌ）、塩化メチレン（２ｍＬ）、ＴＦＡ（１ｍＬ）、およびキシレン（２ｍＬ）から標記化合物（２３４ｍｇ，０．４５ｍｍｏｌ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ（ｐｐｍ）：１．１８−１．３７（ｍ，１６Ｈ），１．３８−１．７１（ｍ，８Ｈ），２．２６−２．４１（ｍ，５Ｈ），５．１１（ｓ，４Ｈ），７．２８−７．４３（ｍ，１０Ｈ）．

（４）ジベンジル ９−（ヒドロキシメチル）ヘプタデカンジオエートの合成
実施例Ａ−１−（４）の方法に準じ、実施例Ａ−４−（３）で得た化合物（２３４ｍｇ，０．４５ｍｍｏｌ）、０．９２Ｍボラン−ＴＨＦ錯体（０．７３ｍＬ，０．６７ｍｍｏｌ）とＴＨＦ（１．８ｍＬ）とから標記化合物（１８８ｍｇ，０．３７ｍｍｏｌ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ（ｐｐｍ）：１．１２−１．５１（ｍ，２２Ｈ），１．５６−１．７２（ｍ，４Ｈ），２．２９−２．４１（ｍ，４Ｈ），３．４７−３．５８（ｍ，２Ｈ），５．１１（ｓ，４Ｈ），７．２８−７．４４（ｍ，１０Ｈ）．

（５）ジベンジル ９−｛［（１−メチルピペリジン−４−カルボニル)オキシ）メチル］ヘプタデカンジオエートの合成
実施例Ａ−１−（５）の方法に準じ、実施例Ａ−４−（４）で得た化合物（１８８ｍｇ，０．３７ｍｍｏｌ）、１−メチル−ピペリジン−４−カルボン酸 塩酸塩（１３２ｍｇ，０．７４ｍｍｏｌ）、ＥＤＣ（１５５ｍｇ，０．８１ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（０．１２６ｍＬ，０．７４ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（９．０ｍｇ，０．０７４ｍｍｏｌ）および塩化メチレン（１．９ｍＬ）から標記化合物（２１７ｍｇ，０．３４ｍｍｏｌ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ（ｐｐｍ）：１．１６−１．３８（ｍ，２１Ｈ），１．５３−１．６９（ｍ，４Ｈ），１．７０−１．８４（ｍ，２Ｈ），１．８５−２．０４（ｍ，４Ｈ），２．１９−２．４０（ｍ，５Ｈ），２．２６（ｓ，３Ｈ），２．７４−２．８６（ｍ，２Ｈ），３．９２−４．０１（ｍ，２Ｈ），５．１１（ｓ，４Ｈ），７．２８−７．４１（ｍ，１０Ｈ）．

（６）ビス（３−ペンチルオクチル） ９―｛［（１−メチルピペリジン−４−カルボニル)オキシ）メチル］ヘプタデカンジオエートの合成
実施例Ａ−４−（５）で得た化合物（２１７ｍｇ，０．３４ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（４ｍＬ）およびメタノール（２ｍＬ）に溶解し、室温で１０％パラジウム−炭素（１９ｍｇ，５０％含水）を加え、水素雰囲気下、常圧で２時間撹拌した。反応系を窒素で置換したのち反応液を濾過し、メタノールで洗浄した。濾液を減圧下濃縮し、９−｛［（１−メチルピペリジン−４−カルボニル）オキシ］メチル｝ヘプタデカン二酸の粗生成物（１６０ｍｇ）を得た。
製造例２の方法に準じ、得られた粗生成物（４０ｍｇ）、３−ペンチルオクタン−１−オール（ＣＡＳ １４４３５１９−６３−８）（４４ｍｇ，０．２２ｍｍｏｌ）、ＥＤＣ（３７ｍｇ，０．１９ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（２．１ｍｇ，０．０１８ｍｍｏｌ）およびＴＨＦ（１ｍＬ）から標記化合物（３４ｍｇ，０．０４１ｍｍｏｌ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ（ｐｐｍ）：０．８３−０．９４（ｍ，１２Ｈ），１．１４−１．４８（ｍ，５３Ｈ），１．５１−１．６７（ｍ，１０Ｈ），１．７０−１．８４（ｍ，２Ｈ），１．８５−２．０７（ｍ，４Ｈ），２．１８−２．３４（ｍ，５Ｈ），２．２７（ｓ，３Ｈ），２．７４−２．８８（ｍ，２Ｈ），３．９３−４．０１（ｍ，２Ｈ），４．０３−４．１２（ｍ，４Ｈ）．

＜カチオン性脂質の合成（５）＞
［実施例Ａ−５］
ジ［（Ｚ）−２−ノネン−１−イル］ ９―｛［（１−メチルピペリジン−４−カルボニル）オキシ］メチル｝ヘプタデカンジオエート（カチオン性脂質５）

製造例２の方法に準じ、実施例Ａ−４−（６）で得た９−｛［（１−メチルピペリジン−４−カルボニル）オキシ］メチル｝ヘプタデカン二酸の粗生成物（６０ｍｇ）とｃｉｓ−２−ノネン−１−オール（０．０６６ｍＬ，０．４０ｍｍｏｌ）、ＥＤＣ（５６ｍｇ，０．２９ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（３．２ｍｇ，０．０２６ｍｍｏｌ）およびＴＨＦ（１．３ｍＬ）から標記化合物（７６ｍｇ，０．１１ｍｍｏｌ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ（ｐｐｍ）：０．８１−０．９６（ｍ，６Ｈ），１．１５−１．４４（ｍ，３５Ｈ），１．５２−１．６８（ｍ，６Ｈ），１．７０−１．８４（ｍ，２Ｈ），１．８５−２．０５（ｍ，４Ｈ），２．０５−２．１５（ｍ，４Ｈ），２．２１−２．３５（ｍ，５Ｈ），２．２７（ｓ，３Ｈ），２．７４−２．８８（ｍ，２Ｈ），３．９３−４．０１（ｍ，２Ｈ），４．５７−４．６７（ｍ，４Ｈ），５．４７−５．５８（ｍ，２Ｈ），５．５９−５．７０（ｍ，２Ｈ）．

＜カチオン性脂質の合成（６）＞
［実施例Ａ−６］
（１Ｒ，５Ｓ，６ｒ）−２−｛９−［（２−ブチルオクチル）オキシ］−９−オキソノニル｝ドデシル ３−メチル−３−アザビシクロ［３．１．０］ヘキサン−６−カルボキシレート（カチオン性脂質６）

実施例Ａ−１−（５）の方法に準じ、実施例Ａ−１−（４）で得た化合物（４０ｍｇ，０．０７８ｍｍｏｌ）、製造例１０−（２）で得た化合物（２８ｍｇ，０．１６ｍｍｏｌ）、ＥＤＣ（３３ｍｇ，０．１７ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（０．０２７ｍＬ，０．１６ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（１．９ｍｇ，０．０１６ｍｍｏｌ）および塩化メチレン（１．０ｍＬ）から標記化合物（４０ｍｇ，０．０６３ｍｍｏｌ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ（ｐｐｍ）：０．８０−１．００（ｍ，９Ｈ），１．１６−１．４０（ｍ，４６Ｈ），１．５２−１．７０（ｍ，４Ｈ），１．８９−１．９７（ｍ，２Ｈ），１．９８−２．０６（ｍ，１Ｈ），２．２３−２．４２（ｍ，４Ｈ），２．３０（ｓ，３Ｈ），３．００−３．１２（ｍ，２Ｈ），３．８７−４．０３（ｍ，４Ｈ）．

＜カチオン性脂質の合成（７）＞
［実施例Ａ−７］
（１Ｒ，５Ｓ，６ｓ）−２−｛９−［（２−ブチルオクチル）オキシ］−９−オキソノニル｝ドデシル ３−メチル−３−アザビシクロ［３．１．０］ヘキサン−６−カルボキシレート（カチオン性脂質７）

実施例Ａ−１−（５）の方法に準じ、実施例Ａ−１−（４）で得た化合物（４０ｍｇ，０．０７８ｍｍｏｌ）、製造例１１−（２）で得た化合物（２７．８ｍｇ，０．１６ｍｍｏｌ）、ＥＤＣ（３３ｍｇ，０．１７ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（０．０２７ｍＬ，０．１５７ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（１．９ｍｇ，０．０１６ｍｍｏｌ）および塩化メチレン（１．０ｍＬ）から標記化合物（３８ｍｇ，０．０６０ｍｍｏｌ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ（ｐｐｍ）：０．８１−０．９７（ｍ，９Ｈ），１．１５−１．４０（ｍ，４６Ｈ），１．４６−１．７０（ｍ，７Ｈ），２．２１（ｓ，３Ｈ），２．２４−２．３８（ｍ，４Ｈ），２．９６−３．０７（ｍ，２Ｈ），３．８５−４．０２（ｍ，４Ｈ）．

＜カチオン性脂質の合成（８）＞
［実施例Ａ−８］
２−｛９−［（２−ブチルオクチル）オキシ］−９−オキソノニル｝ドデシル ４−メチルピペラジン−１−カルボキシレート（カチオン性脂質８）

実施例Ａ−１−（４）で得た化合物（１１ｍｇ，０．０２２ｍｍｏｌ）とピリジン（０．００４３ｍＬ，０．０５４ｍｍｏｌ）を塩化メチレン（０．８ｍＬ）に溶解し、氷冷下、クロロギ酸 ４−ニトロフェニル（１２ｍｇ，０．０６０ｍｍｏｌ）を加え、同温で１０分間、室温で１時間半撹拌した。反応液に１-メチルピペラジン（０．０１０ｍＬ，０．０９０ｍｍｏｌ）を加え、室温で３時間撹拌した。反応混合物に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加え、酢酸エチルで抽出した。有機相を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。濾過後、溶媒を減圧下留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｎ−ヘプタン／酢酸エチル）にて精製し、標記化合物（１１ｍｇ，０．０１７ｍｍｏｌ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ（ｐｐｍ）：０．８０−０．９８（ｍ，９Ｈ），１．１６−１．４２（ｍ，４６Ｈ），１．５２−１．７７（ｍ，４Ｈ），２．２３−２．４４（ｍ，６Ｈ），２．３０（ｓ，３Ｈ），３．４２−３．５７（ｍ，４Ｈ），３．９０−４．０４（ｍ，４Ｈ）．

＜カチオン性脂質の合成（９）＞
［実施例Ａ−９］
２−［９−（ヘキシルオキシ）−９−オキソノニル］ドデシル １−メチルピペリジン−４−カルボキシレート（カチオン性脂質９）
製造例２の方法に準じ、実施例Ａ−２−（６）で得た化合物（１００ｍｇ，０．２１ｍｍｏｌ）、ヘキサン−１−オール（３２μＬ，０．２６ｍｍｏｌ）、ＥＤＣ（４９ｍｇ，０．２６ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（５．０ｍｇ，０．０５０ｍｍｏｌ）および塩化メチレン（５．０ｍＬ）から標記化合物（１０２ｍｇ，０．１９ｍｍｏｌ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ（ｐｐｍ）：０．８５−０．９２（ｍ，６Ｈ），１．１９−１．３９（ｍ，３７Ｈ），１．５７−１．６６（ｍ，５Ｈ），１．７３−１．８４（ｍ，２Ｈ），１．８７−１．９４（ｍ，２Ｈ），１．９６−２．０７（ｍ，２Ｈ），２．２２−２．３２（ｍ，６Ｈ），２．７３−２．８７（ｍ，２Ｈ），３．９８（ｄ，Ｊ＝５．５０Ｈｚ，２Ｈ），４．０６（ｔ，Ｊ＝６．７９Ｈｚ，２Ｈ）．

＜カチオン性脂質の合成（１０）＞
［実施例Ａ−１０］
２−［９−（オクチルオキシ）−９−オキソノニル］ドデシル １−メチルピペリジン−４−カルボキシレート（カチオン性脂質１０）
製造例２の方法に準じ、実施例Ａ−２−（６）で得た化合物（２００ｍｇ，０．４２ｍｍｏｌ）、オクタン−１−オール（６７ｍｇ，０．５１ｍｍｏｌ）、ＥＤＣ（９８ｍｇ，０．５１ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（１０ｍｇ，０．０９ｍｍｏｌ）および塩化メチレン（１０ｍＬ）から標記化合物（１０９ｍｇ，０．１９ｍｍｏｌ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ（ｐｐｍ）：０．９１（ｔ，Ｊ＝６．９７Ｈｚ，６Ｈ），１．２３−１．４０（ｍ，４０Ｈ），１．６０−１．６８（ｍ，５Ｈ），１．７６−１．８５（ｍ，２Ｈ），１．８９−１．９５（ｍ，２Ｈ），１．９７−２．０６（ｍ，２Ｈ），２．２５−２．３３（ｍ，６Ｈ），２．７８−２．８６（ｍ，２Ｈ），４．００（ｄ，Ｊ＝５．６９ Ｈｚ，２Ｈ），４．０８（ｔ，Ｊ＝６．７９ Ｈｚ，２Ｈ）．

＜カチオン性脂質の合成（１１）＞
［実施例Ａ−１１］
２−［９−（デシルオキシ) −９−オキソノニル］ドデシル １−メチルピペリジン−４−カルボキシレート（カチオン性脂質１１）
製造例２の方法に準じ、実施例Ａ−２−（６）で得た化合物（２００ｍｇ，０．４２ｍｍｏｌ）、デカン−１−オール（１００μＬ，，０．５１ｍｍｏｌ）、ＥＤＣ（９８ｍｇ，０．５１ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（１０ｍｇ，０．０９ｍｍｏｌ）および塩化メチレン（１０ｍＬ）から標記化合物（１５３ｍｇ，０．２５ｍｍｏｌ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ（ｐｐｍ）：０．９１（ｔ，Ｊ＝７．０６Ｈｚ，６Ｈ），１．１７−１．４２（ｍ，４４Ｈ），１．６０−１．６８（ｍ，５Ｈ），１．７５−１．８６（ｍ，２Ｈ），１．８８−１．９６（ｍ，２Ｈ），１．９７−２．０７（ｍ，２Ｈ），２．２４−２．３５（ｍ，６Ｈ），２．７８−２．８７（ｍ，２Ｈ），４．００（ｄ，Ｊ＝５．５０Ｈｚ，２Ｈ），４．０８（ｔ，Ｊ＝６．７９ Ｈｚ，２Ｈ）．

＜カチオン性脂質の合成（１２）＞
［実施例Ａ−１２］
２−｛９−オキソ−９−［（４−ペンチルノニル）オキシ］ノニル｝ドデシル １−メチルピペリジン−４−カルボキシレート（カチオン性脂質１２）
製造例２の方法に準じ、実施例Ａ−２−（６）で得た化合物（２００ｍｇ，０．４２ｍｍｏｌ）、製造例７−（２）で得た化合物（１１５ｍｇ，０．６０ｍｍｏｌ）、ＥＤＣ（９８ｍｇ，０．５１ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（１０ｍｇ，０．０９ｍｍｏｌ）および塩化メチレン（１０ｍＬ）から標記化合物（２１２ｍｇ，０．３２ｍｍｏｌ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ（ｐｐｍ）：０．８５−０．９２（ｍ，９Ｈ），１．１６−１．３４（ｍ，４９Ｈ），１．５１−１．６６（ｍ，５Ｈ），１．７３−１．８４（ｍ，２Ｈ），１．８６−１．９４（ｍ，２Ｈ），１．９５−２．０５（ｍ，２Ｈ），２．２３−２．３１（ｍ，６Ｈ），２．７５−２．８５（ｍ，２Ｈ），３．９８（ｄ，Ｊ＝５．５０Ｈｚ，２Ｈ），４．０４（ｔ，Ｊ＝６．７９ Ｈｚ，２Ｈ）．

＜カチオン性脂質の合成（１３）＞
［実施例Ａ−１３］
２−（４−オキソ−４−（トリデシルオキシ）ブチル）ドデシル １−メチルピペリジン−４−カルボキシレート（カチオン性脂質１３）

（１）４−ベンジル １，１−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル ブタン−１，１，４−トリカルボキシレートの合成
６０％水素化ナトリウム（１．０５ｇ，２６．２ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（５０ｍＬ）に懸濁させ、氷冷下、ジ−ｔｅｒｔ−ブチル マロネート（５．８６ｍＬ，２６．２ｍｍｏｌ）を滴下し、室温で２０分間撹拌した。氷冷下、ヨウ化ナトリウム（０．３７ｇ，２．４９ｍｍｏｌ）を加えたのち、製造例８で得た化合物（６．４１ｇ，２４．９ｍｍｏｌ）を滴下し、室温で１８時間撹拌した。反応混合物をジエチルエーテルで希釈し、水で洗浄したのち、水層をジエチルエーテルで抽出した。有機相を合わせ、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。濾過後、溶媒を減圧下留去し、標記化合物（９．８８ｇ，２５．２ｍｍｏｌ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ（ｐｐｍ）：１．４２−１．４９（ｍ，１８Ｈ），１．６５−１．７２（ｍ，２Ｈ），１．８０−１．８７（ｍ，２Ｈ），２．３９（ｔ，Ｊ＝７．５２ Ｈｚ，２Ｈ），３．１３（ｔ，Ｊ＝７．５２Ｈｚ，１Ｈ），５．１１（ｓ，２Ｈ），７．２９−７．４０（ｍ，５Ｈ）．

（２）１−ベンジル ４，４−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル テトラデカン−１，４，４−トリカルボキシレートの合成
実施例Ａ−１３−（１）で得られた化合物（９．８８ｇ，２５．２ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１００ｍＬ）に溶解し、水冷下、６０％水素化ナトリウム（１．５１ｇ，３７．８ｍｍｏｌ）を加え、室温で３０分間撹拌した。１−ヨードデカン（１０．７ｍＬ，５０．４ｍｍｏｌ）をゆっくり加えたのち、室温で４時間撹拌した。反応混合物に飽和塩化アンモニウム水溶液を加え、ｎ−ペンタンで抽出した。有機相を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。濾過後、溶媒を減圧下留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｎ−ヘプタン／ジエチルエーテル）にて精製し、標記化合物（４．３１ｇ，８．０９ｍｍｏｌ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ（ｐｐｍ）：０．８５−０．９１（ｍ，３Ｈ），１．０７−１．１７（ｍ，２Ｈ），１．２１−１．３３（ｍ，１６Ｈ），１．４４（ｓ，１８Ｈ），１．４９−１．５４（ｍ，２Ｈ），１．７４−１．８４（ｍ，４Ｈ），２．３６（ｔ，Ｊ＝７．３４ Ｈｚ，２Ｈ），５．１１（ｓ，２Ｈ），７．２８−７．３８（ｍ，５Ｈ）．

（３）２−［４−（ベンジルオキシ）−４−オキソブチル］ドデカン酸の合成
実施例Ａ−１３−（２）で得られた化合物（４．３１ｇ，８．０９ｍｍｏｌ）を塩化メチレン（２０ｍＬ）に溶解し、氷冷下、ＴＦＡ（１０ｍＬ）を滴下し、室温で４時間撹拌した。反応混合物を減圧下濃縮したのち、トルエンを加え２回共沸した。得られた粗生成物をキシレン（２５ｍＬ）に溶解し、８時間加熱還流した。反応混合物を室温に戻し、減圧下濃縮した。得られた残渣をカラムクロマトグラフィー（シクロヘキサン／酢酸エチル）にて精製し、標記化合物（２．７４ｇ，７．２８ｍｍｏｌ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ（ｐｐｍ）：０．８２−０．８９（ｍ，３Ｈ），１．１７−１．３１（ｍ，１６Ｈ），１．３２−１．４２（ｍ，３Ｈ），１．４３−１．５７（ｍ，４Ｈ），２．１６−２．２２（ｍ，１Ｈ），２．３２−２．３８（ｍ，２Ｈ），５．０８（ｓ，２Ｈ），７．２９−７．４０（ｍ，５Ｈ），１２．０６（ｂｒ ｓ，１Ｈ）．

（４）ベンジル ５−（ヒドロキシメチル）ペンタデカノエートの合成
実施例Ａ−１３−（３）で得た化合物（２．７４ｇ，７．２８ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（３０ｍＬ）に溶解し、−７８℃でボラン−ＴＨＦ錯体（１Ｍ，１６．９ｍＬ，１６．９ｍｍｏｌ）を滴下した。０℃で８時間撹拌したのち、１５℃で２２時間撹拌した。飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加え、ジエチルエーテルで抽出した。有機相を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。濾過後、溶媒を減圧下留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（シクロヘキサン／酢酸エチル）にて精製し、標記化合物（２．３０ｇ，６．３４ｍｍｏｌ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ（ｐｐｍ）：０．８５（ｔ，Ｊ＝６．８８Ｈｚ，３Ｈ），１．０８−１．３７（ｍ，１８Ｈ），１．４９−１．５８（ｍ，２Ｈ），２．２７−２．３６（ｍ，２Ｈ），３．２１−３．２９（ｍ，２Ｈ），４．２８（ｔ，Ｊ＝５．１４Ｈｚ，１Ｈ），５．０１−５．１２（ｍ，２Ｈ），７．３０−７．４０（ｍ，５Ｈ）．

（５）２−（４−（ベンジルオキシ）−４−オキソブチル）ドデシル １−メチルピペリジン−４−カルボキシレートの合成
実施例Ａ−１３−（４）で得た化合物（２．３０ｇ，６．３４ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（２．２ｍＬ，１２．７ｍｍｏｌ）、１−メチル−ピペリジン−４−カルボン酸 塩酸塩（２．２８ｇ，１２．７ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（０．１６ｇ，１．２７ｍｍｏｌ）を塩化メチレン（３０ｍＬ）に溶解し、氷冷下、ＥＤＣ（２．６８ｇ，１３．９ｍｍｏｌ）を加え、室温で４時間撹拌した。反応混合物を減圧下濃縮したのち、ジエチルエーテルに溶解した。飽和炭酸水素ナトリウム水溶液と水で順次洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。濾過後、溶媒を減圧下留去し、標記化合物（２．９７ｇ，６．０９ｍｍｏｌ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ（ｐｐｍ）：０．８８（ｔ，Ｊ＝７．０６ Ｈｚ，３Ｈ），１．１７−１．３８（ｍ，２１Ｈ），１．６０−１．７０（ｍ，３Ｈ），１．７７−１．８７（ｍ，２Ｈ），１．８９−１．９９（ｍ，２Ｈ），２．２３−２．３８（ｍ，６Ｈ），２．７４−２．９１（ｍ，２Ｈ），３．９４−４．０２（ｍ，２Ｈ），５．０９−５．１３（ｍ，２Ｈ），７．３０−７．４１（ｍ，５Ｈ）．

（６）５−｛［（１−メチルピペリジン−４−カルボニル）オキシ］メチル｝ペンタデカン酸の合成
実施例Ａ−１３−（５）で得た化合物（２．９７ｇ，６．０９ｍｍｏｌ）を酢酸エチル（３５ｍＬ）に溶解し、室温で１０％パラジウム−炭素（０．６５ｇ，０．６１ｍｍｏｌ，５０％含水）を加え、水素雰囲気下、常圧で３時間撹拌した。反応液を濾過し、酢酸エチルで洗浄した。濾液を減圧下濃縮し、標記化合物（２．３１ｇ，５．８１ｍｍｏｌ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ（ｐｐｍ）：０．８５（ｔ，Ｊ＝６．８８ Ｈｚ，３Ｈ），１．２１−１．３２（ｍ，２０Ｈ），１．４４−１．６６（ｍ，５Ｈ），１．７５−１．８３（ｍ，２Ｈ），１．９５−１．９８（ｍ，１Ｈ），１．９９−２．０６（ｍ，１Ｈ），２．１３−２．２３（ｍ，５Ｈ），２．２３−２．３０（ｍ，１Ｈ），２．６４−２．７７（ｍ，２Ｈ），３．８８−３．９７（ｍ，２Ｈ）．

（７）２−（４−オキソ−４−（トリデシルオキシ）ブチル）ドデシル １−メチルピペリジン−４−カルボキシレートの合成
実施例Ａ−１３−（６）で得た化合物（２００ｍｇ，０．５０ｍｍｏｌ）、トリデカン−１−オール（１２１ｍｇ，０．６０ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（１２ｍｇ，０．１０ｍｍｏｌ）を塩化メチレン（５ｍＬ）に溶解し、室温でＥＤＣ（１１６ｍｇ，０．６０ｍｍｏｌ）を加え、室温で４時間撹拌した。反応混合物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（メタノール／酢酸エチル）にて精製し、標記化合物（１７０ｍｇ，０．２９ｍｍｏｌ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ（ｐｐｍ）：０．８８（ｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，６Ｈ），１．２６（ｂｒ ｓ，４１Ｈ），１．５７−１．６９（ｍ，６Ｈ），１．７３−１．８２（ｍ，２Ｈ），１．９０（ｂｒ ｄｄ，Ｊ＝１３．５，３．０３Ｈｚ，２Ｈ），１．９４−２．０４（ｍ，２Ｈ），２．２２−２．３４（ｍ，６Ｈ），２．６７−２．９０（ｂｒ ｄ，Ｊ＝９．８Ｈｚ，２Ｈ），３．９５−４．０２（ｍ，２Ｈ），４．０３−４．０８（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ）．

＜カチオン性脂質の合成（１４）＞
［実施例Ａ−１４］
２−（４−オキソ−４−（（８−ペンチルトリデシル）オキシ）ブチル）ドデシル １−メチルピペリジン−４−カルボキシレート（カチオン性脂質１４）
実施例Ａ−１３−（７）の方法に準じ、実施例Ａ−１３−（６）で得た化合物（１２０ｍｇ，０．３０ｍｍｏｌ）、製造例４−（４）で得た化合物（９０ｍｇ，０．３３ｍｍｏｌ）、ＥＤＣ（６４ｍｇ，０．３３ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（４．０ｍｇ，０．０３３ｍｍｏｌ）および塩化メチレン（１．５ｍＬ）から、標記化合物（１３３ｍｇ，０．２１ｍｍｏｌ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）δ（ｐｐｍ）：０．８７−０．９７（ｍ，９Ｈ），１．１８−１．４５（ｍ，４７Ｈ），１．６０−１．７３（ｍ，５Ｈ），１．７３−１．８３ （ｍ，２Ｈ），１．８８−１．９９（ｍ，２Ｈ），２．０６−２．１９（ｍ，２Ｈ），２．２３−２．４３（ｍ，６Ｈ），２．７７−２．８９（ｍ，２Ｈ），３．９９−４．１５（ｍ，４Ｈ）．

＜カチオン性脂質の合成（１５）＞
［実施例Ａ−１５］
２−｛４−［（４−ノニルトリデシル）オキシ］−４−オキソブチル｝ドデシル １−メチルピペリジン−４−カルボキシレート（カチオン性脂質１５）
実施例Ａ−１３−（７）の方法に準じ、実施例Ａ−１３−（６）で得た化合物（１１０ｍｇ，０．２８ｍｍｏｌ）、製造例５−（４）で得た化合物（９９ｍｇ，０．３０ｍｍｏｌ）、ＥＤＣ（５８ｍｇ，０．３０ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（４．０ｍｇ，０．０３３ｍｍｏｌ）および塩化メチレン（１．３ｍＬ）から、標記化合物（１０６ｍｇ，０．１５ｍｍｏｌ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）δ（ｐｐｍ）：０．８５−０．９９（ｍ，９Ｈ），１．１５−１．４４（ｍ，５５Ｈ），１．５６−１．８４（ｍ，７Ｈ），１．９４（ｍ，Ｊ＝１３．２Ｈｚ，２Ｈ），２．０６−２．１９（ｍ，２Ｈ），２．２３−２．４４（ｍ，６Ｈ），２．７６−２．９０（ｍ，２Ｈ），３．９６−４．１４（ｍ，４Ｈ）．

＜カチオン性脂質の合成（１６）＞
［実施例Ａ−１６］
ジオクチル ９−｛［（１−メチルピペリジン−４−カルボニル）オキシ］メチル｝ヘプタデカンジオエート（カチオン性脂質１６）

（１）９−｛［（１−メチルピペリジン−４−カルボニル）オキシ］メチル｝ヘプタデカンジオン酸の合成
実施例Ａ−４−（５）で得た化合物（０．８０ｇ，１．２５ｍｍｏｌ）をエタノール（５ｍＬ）に溶解し、室温で１０％パラジウム−炭素（０．１３ｇ，０．１３ｍｍｏｌ，５０％含水）を加え、水素雰囲気下、常圧で１８時間撹拌した。反応液をセライトで濾過し、エタノールで洗浄した。濾液を減圧下濃縮し、標記化合物（０．５８ｇ，１．２６ｍｍｏｌ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ（ｐｐｍ）：１．１７−１．３０（ｍ，２０Ｈ），１．４３−１．５２（ｍ，４Ｈ），１．５２−１．６２（ｍ，３Ｈ），１．７７−１．８２（ｍ，２Ｈ），１．９２−２．０３（ｍ，２Ｈ），２．１２−２．２２（ｍ，７Ｈ），２．２３−２．３３（ｍ，１Ｈ），２．６６−２．７５（ｍ，２Ｈ），３．９３（ｄ，Ｊ＝５．５０Ｈｚ，２Ｈ）．

（２）ジオクチル ９−｛［（１−メチルピペリジン−４−カルボニル）オキシ］メチル｝ヘプタデカンジオエートの合成
実施例Ａ−１６−（１）で得た化合物（１００ｍｇ，０．２２ｍｍｏｌ）、オクタン−１−オール（８３μＬ，０．５３ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（１１ｍｇ，０．０９ｍｍｏｌ）を塩化メチレン（５ｍＬ）に溶解し、室温でＥＤＣ（１０１ｍｇ，０．５３ｍｍｏｌ）を加え、室温で１８時間撹拌した。反応混合物を減圧下濃縮したのち、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（メタノール／酢酸エチル）にて精製し、標記化合物（１０１ｍｇ，０．１５ｍｍｏｌ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ（ｐｐｍ）：０．８３−０．９２（ｍ，６Ｈ），１．２１−１．３９（ｍ，４０Ｈ），１．５５−１．６６（ｍ，９Ｈ），１．７２−１．８３（ｍ，２Ｈ），１．８５−１．９５（ｍ，２Ｈ），１．９５−２．０６（ｍ，２Ｈ），２．２２−２．３３（ｍ，８Ｈ），２．７５−２．８７（ｍ，２Ｈ），３．９７（ｄ，Ｊ＝５．６９Ｈｚ，２Ｈ），４．０５（ｔ，Ｊ＝６．６９Ｈｚ，４Ｈ）．

＜カチオン性脂質の合成（１７）＞
［実施例Ａ−１７］
ビス（４−ペンチルノニル） ９−｛［（１−メチルピペリジン−４−カルボニル）オキシ］メチル｝ヘプタデカンジオエート（カチオン性脂質１７）
実施例Ａ−１６−（２）の方法に準じ、実施例Ａ−１６−（１）で得た化合物（０．２０ｇ，０．４４ｍｍｏｌ）、製造例７−（２）で得た化合物（０．２３ｇ，１．０５ｍｍｏｌ）、ＥＤＣ（０．２０ｇ，１．０５ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（１１ｍｇ，０．０９ｍｍｏｌ）および塩化メチレン（５ｍＬ）から、標記化合物（０．２３ｇ，０．２７ｍｍｏｌ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ（ｐｐｍ）：０．８８（ｔ，Ｊ＝７．２４Ｈｚ，１２Ｈ），１．１７−１．３５（ｍ，５８Ｈ），１．５８−１．６５（ｍ，９Ｈ），１．７３−１．８３（ｍ，２Ｈ），１．８７−１．９３（ｍ，２Ｈ），１．９５−２．０４（ｍ，２Ｈ），２．２３−２．３２（ｍ，８Ｈ），２．７５−２．８６（ｍ，２Ｈ），３．９７（ｄ，Ｊ＝５．５０Ｈｚ，２Ｈ），４．０４（ｔ，Ｊ＝６．７９ Ｈｚ，４Ｈ）．

＜カチオン性脂質の合成（１８）＞
［実施例Ａ−１８］
ジトリデシル ５−｛［（１−メチルピペリジン−４−カルボニル）オキシ］メチル｝ノナンジオエート（カチオン性脂質１８）

（１）１，７−ジベンジル ４，４−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル ヘプタン−１，４，４，７−テトラカルボキシレートの合成
実施例Ａ−１３−（１）で得られた化合物（３．８４ｇ，９．７８ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（３０ｍＬ）に溶解し、水冷下、６０％水素化ナトリウム（０．４３ｇ，１０．８ｍｍｏｌ）を加え、室温で３０分間撹拌した。ベンジル ４−ブロモブタノエート（３．０２ｇ，１１．７ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１０ｍＬ）溶液を加えたのち、１８時間加熱還流した。反応液を室温に戻し、ジエチルエーテルで希釈した。有機相を水、飽和食塩水で順次洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。濾過後、溶媒を減圧下留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル／シクロヘキサン）にて精製し、標記化合物（１．８８ｇ，３．３１ｍｍｏｌ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ（ｐｐｍ）：１．４３（ｓ，１８Ｈ），１．４７−１．５４（ｍ，４Ｈ），１．７８−１．８５（ｍ，４Ｈ），２．３６（ｔ，Ｊ＝７．３４Ｈｚ，４Ｈ），５．１０（ｓ，４Ｈ），７．２７−７．４０（ｍ，１０Ｈ）．

（２）６−（ベンジルオキシ）−２−［４−（ベンジルオキシ）−４−オキソブチル］−６−ヘキサン酸の合成
実施例Ａ−１３−（３）の方法に準じ、実施例Ａ−１８−（１）で得られた化合物（１．８８ｇ，３．３１ｍｍｏｌ）、ＴＦＡ（４ｍＬ）、塩化メチレン（８ｍＬ）、およびキシレン（１０ｍＬ）から、標記化合物（１．０１ｇ，２．４５ｍｍｏｌ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ（ｐｐｍ）：１．３１−１．５８（ｍ，８Ｈ），２．１９−２．２５（ｍ，１Ｈ），２．３３−２．３７（ｍ，４Ｈ），５．０５−５．１１（ｍ，４Ｈ），７．２７−７．４０（ｍ，１０Ｈ），１２．１４（ｂｒ ｓ，１Ｈ）．

（３）ジベンジル ５−（ヒドロキシメチル）ノナンジオエートの合成
実施例Ａ−１８−（２）で得た化合物（１．０１ｇ，２．４５ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１０ｍＬ）に溶解し、−７８℃でボラン−ＴＨＦ錯体（１Ｍ，４．９ｍＬ，４．９ｍｍｏｌ）を滴下した。０℃で１６時間撹拌したのち、飽和塩化アンモニウム水溶液を加え、ジエチルエーテルで抽出した。有機相を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。濾過後、溶媒を減圧下留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（シクロヘキサン／酢酸エチル）にて精製し、標記化合物（０．５９ｇ，１．４７ｍｍｏｌ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ（ｐｐｍ）：１．０９−１．３７（ｍ，６Ｈ），１．４８−１．５６（ｍ，４Ｈ），２．３２（ｔ，Ｊ＝７．３４Ｈｚ，４Ｈ），３．２６（ｔ，Ｊ＝５．２３Ｈｚ，２Ｈ），４．３２（ｔ，Ｊ＝５．１４Ｈｚ，１Ｈ），５．０８（ｓ，４Ｈ），７．２８−７．４１（ｍ，１０Ｈ）．

（４）ジベンジル ５−｛［（１−メチルピペリジン−４−カルボニル）オキシ］メチル｝ノナンジオエートの合成
実施例Ａ−１３−（５）の方法に準じ、実施例Ａ−１８−（３）で得た化合物（０．５８ｇ，１．４７ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（０．５１ｍＬ，２．９５ｍｍｏｌ）、１−メチル−ピペリジン−４−カルボン酸 塩酸塩（０．５２ｇ，２．９５ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（３６ｍｇ，０．３０ｍｍｏｌ）、ＥＤＣ（０．６２ｇ，３．２４ｍｍｏｌ）および塩化メチレン（７ｍＬ）から、標記化合物（０．６２ｇ，１．１９ｍｍｏｌ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ（ｐｐｍ）：１．２７−１．３８（ｍ，４Ｈ），１．５９−１．６９（ｍ，５Ｈ），１．７０−１．８１（ｍ，２Ｈ），１．８５−１．９２（ｍ，２Ｈ），１．９２−２．０２（ｍ，２Ｈ），２．２６（ｓ，４Ｈ），２．３３（ｔ，Ｊ＝７．３４Ｈｚ，４Ｈ），２．７４−２．８３（ｍ，２Ｈ），３．９７（ｄ，Ｊ＝５．６９Ｈｚ，２Ｈ），５．１１（ｓ，４Ｈ），７．２８−７．３９（ｍ，１０Ｈ）．

（５）５−［｛（１−メチルピペリジン−４−カルボニル）オキシ｝メチル］ジノナン酸の合成
実施例Ａ−１６−（１）の方法に準じ、実施例Ａ−１８−（４）で得た化合物（０．６２ｇ，１．１９ｍｍｏｌ）、１０％パラジウム−炭素（６２ｍｇ，０．０６ｍｍｏｌ，５０％含水）およびエタノール（２ｍＬ）から、標記化合物（０．４１ｇ，１．１９ｍｍｏｌ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ（ｐｐｍ）：１．２０−１．３１（ｍ，４Ｈ），１．４４−１．６６（ｍ，７Ｈ），１．７２−１．８１（ｍ，４Ｈ），１．８８−１．９７（ｍ，２Ｈ），２．１３（ｓ，３Ｈ），２．１６−２．２２（ｍ，４ Ｈ），２．２２−２．３０（ｍ，１Ｈ），２．６４−２．７１（ｍ，２Ｈ），３．９３（ｄ，Ｊ＝５．３２Ｈｚ，２Ｈ）．

（６）ジトリデシル ５−｛［（１−メチルピペリジン−４−カルボニル）オキシ］メチル｝ノナンジオエートの合成
実施例Ａ−１３−（７）の方法に準じ、実施例Ａ−１８−（５）で得た化合物（１３５ｍｇ，０．３９ｍｍｏｌ）、トリデカン−１−オール（１８９ｍｇ，０．９４ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（９ｍｇ，０．０８ｍｍｏｌ）、ＥＤＣ（１６６ｍｇ，０．８７ｍｍｏｌ）および塩化メチレン（５ｍＬ）から、標記化合物（１０７ｍｇ，０．１５ｍｍｏｌ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ（ｐｐｍ）：０．８８（ｔ，Ｊ＝７．０６Ｈｚ，６Ｈ），１．２０−１．４１（ｍ、４５Ｈ），１．５８−１．７１（ｍ，９Ｈ），１．７１−１．８２（ｍ，２Ｈ），１．８６−１．９４（ｍ，２Ｈ），１．９５−２．０４（ｍ，２Ｈ），２．２３−２．３０（ｍ，８Ｈ），２．７７−２．８３（ｍ，２Ｈ），４．００（ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，２Ｈ），４．０５（ｔ，Ｊ＝６．８８Ｈｚ，４Ｈ）．

＜カチオン性脂質の合成（１９）＞
［実施例Ａ−１９］
ビス（８−ペンチルトリデシル） ５−｛［（１−メチルピペリジン−４−カルボニル）オキシ］メチル｝ノナンジオエート（カチオン性脂質１９）
実施例Ａ−１３−（７）の方法に準じ、実施例Ａ−１８−（５）で得た化合物（８０ｍｇ，０．２３ｍｍｏｌ）、製造例４−（４）で得た化合物（１５１ｍｇ，０．５６ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（６ｍｇ，０．０５ｍｍｏｌ）、ＥＤＣ（９８ｍｇ，０．５１ｍｍｏｌ）および塩化メチレン（５ｍＬ）から、標記化合物（７９ｍｇ，０．０９ｍｍｏｌ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ（ｐｐｍ）：０．８８（ｔ，Ｊ＝７．２４Ｈｚ，１２Ｈ），１．１５−１．４０（ｍ，６０Ｈ），１．５９−１．７１（ｍ，１０Ｈ），１．７２−１．８２（ｍ，２Ｈ），１．８６−１．９４（ｍ，２Ｈ），１．９４−２．０４（ｍ，２Ｈ），２．２３−２．３２（ｍ，８Ｈ），２．７７−２．８５（ｍ，２Ｈ），４．００（ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，２Ｈ），４．０５（ｔ，Ｊ＝６．８８Ｈｚ，４Ｈ）．

＜カチオン性脂質の合成（２０）＞
［実施例Ａ−２０］
ビス（４−ノニルトリデシル） ５−｛［（１−メチルピペリジン−４−カルボニル）オキシ］メチル｝ノナンジオエート（カチオン性脂質２０）
実施例Ａ−１３−（７）の方法に準じ、実施例Ａ−１８−（５）で得た化合物（８０ｍｇ，０．２３ｍｍｏｌ）、製造例５−（４）で得た化合物（１９８ｍｇ，０．６１ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（６ｍｇ，０．０５ｍｍｏｌ）、ＥＤＣ（９８ｍｇ，０．５１ｍｍｏｌ）および塩化メチレン（５ｍＬ）から、標記化合物（４６ｍｇ，０．０５ｍｍｏｌ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ（ｐｐｍ）：０．８８（ｔ，Ｊ＝６．９７ Ｈｚ，１２Ｈ），１．１７−１．４１（ｍ，７７Ｈ），１．５７−１．７２（ｍ，９Ｈ），１．７２−１．８１（ｍ，２Ｈ），１．８５−１．９４（ｍ，２Ｈ），１．９４−２．０３（ｍ，２Ｈ），２．２３−２．３１（ｍ，８Ｈ），２．８０（ｍ，Ｊ＝１０．５０Ｈｚ，２Ｈ），４．００（ｄ，Ｊ＝５．５０Ｈｚ，２Ｈ），４．０３（ｔ，Ｊ＝６．８８ Ｈｚ，４Ｈ）．

＜カチオン性脂質の合成（２１）＞
［実施例Ａ−２１］
ジウンデシル ７−｛［（１−メチルピペリジン−４−カルボニル）オキシ］メチル｝トリデカンジオエート（カチオン性脂質２１）

（１）６−ベンジル １，１−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル ヘキサン−１，１，６−トリカルボキシレートの合成
６０％水素化ナトリウム（０．８０ｇ，２０．０ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（３５ｍＬ）に懸濁させ、氷冷下、ジ−ｔｅｒｔ−ブチル マロネート（４．４８ｍＬ，２０．０ｍｍｏｌ）を滴下し、室温で１５分間撹拌した。氷冷下、ヨウ化ナトリウム（０．２９ｇ，１．９０ｍｍｏｌ）を加えたのち、製造例９で得た化合物（５．４３ｇ，１９．０ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１０ｍＬ）溶液を滴下し、室温で１８時間撹拌した。反応混合物をジエチルエーテルで希釈し、水で洗浄したのち、水層をジエチルエーテルで抽出した。有機相を合わせ、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。濾過後、溶媒を減圧下留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（シクロヘキサン／酢酸エチル）にて精製し、標記化合物（６．０１ｇ，１４．３ｍｍｏｌ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ（ｐｐｍ）：１．２７−１．３８（ｍ，４Ｈ），１．４５（ｓ，１８Ｈ），１．６２−１．６８（ｍ，２Ｈ），１．７３−１．８２（ｍ，２Ｈ），２．３５（ｔ，Ｊ＝７．５２Ｈｚ，２Ｈ），３．０９（ｔ，Ｊ＝７．６１Ｈｚ，１Ｈ），５．１１（ｓ，２Ｈ），７．２９−７．４０（ｍ，５Ｈ）．

（２）１，１１−ジベンジル ６，６−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル ウンデカン−１，６，６，１１−テトラカルボキシレートの合成
実施例Ａ−１８−（１）の方法に準じ、実施例Ａ−２１−（１）で得た化合物（４．０ｇ，９．５１ｍｍｏｌ）、６０％水素化ナトリウム（０．４２ｇ，１０．５ｍｍｏｌ）、製造例９で得た化合物（３．２５ｇ，１１．４ｍｍｏｌ）およびＴＨＦ（３０ｍＬ）から、標記化合物（５．１８ｇ，８．２９ｍｍｏｌ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ（ｐｐｍ）：１．０９−１．１９（ｍ，４Ｈ），１．２８−１．３６（ｍ，５Ｈ），１．４３（ｓ，１８Ｈ），１．６０−１．６９（ｍ，４Ｈ），１．７２−１．８０（ｍ，４Ｈ），２．３４（ｔ，Ｊ＝７．５２Ｈｚ，４Ｈ），５．０５−５．１５（ｍ，４Ｈ），７．２８−７．４１（ｍ，９Ｈ）．

（３）８−（ベンジルオキシ）−２−［６−（ベンジルオキシ）−６−オキソヘキシル］−８−オキソオクタン酸の合成
実施例Ａ−１３−（３）の方法に準じ、実施例Ａ−２１−（２）で得られた化合物（５．１８ｇ，８．２９ｍｍｏｌ）、ＴＦＡ（１０ｍＬ）、塩化メチレン（２０ｍＬ）およびキシレン（２５ｍＬ）から、標記化合物（２．４９ｇ，５．３１ｍｍｏｌ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ（ｐｐｍ）：１．１５−１．５７（ｍ，１６Ｈ），２．１１−２．２０（ｍ，１Ｈ），２．３３（ｔ，Ｊ＝７．３４Ｈｚ，４Ｈ），５．０８（ｓ，４Ｈ），７．２３−７．４３（ｍ，１０Ｈ），１２．０１（ｂｒ ｓ，１Ｈ）．

（４）ジベンジル ７−（ヒドロキシメチル）トリデカンジオエートの合成
実施例Ａ−１８−（３）の方法に準じ、実施例Ａ−２１−（３）で得た化合物（２．４９ｇ，５．３１ｍｍｏｌ）、ボラン−ＴＨＦ錯体（１Ｍ，１３．２ｍＬ，１３．２ｍｍｏｌ）およびＴＨＦ（２０ｍＬ）から、標記化合物（１．９５ｇ，４．２９ｍｍｏｌ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ（ｐｐｍ）：１．１１−１．３６（ｍ，１３Ｈ），１．３９−１．４６（ｍ，１Ｈ），１．６０−１．７０（ｍ，４Ｈ），２．３５（ｔ，Ｊ＝７．５２ Ｈｚ，４Ｈ），３．５１（ｄ，Ｊ＝５．３２Ｈｚ，２Ｈ），５．１１（ｓ，４Ｈ），７．２９−７．４０（ｍ，１０Ｈ）．

（５）ジベンジル ７−｛［（１−メチルピペリジン−４−カルボニル）オキシ］メチル｝トリデカンジオエートの合成
実施例Ａ−１３−（５）の方法に準じ、実施例Ａ−２１−（４）で得た化合物（１．９５ｇ，４．２９ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（１．５ｍＬ，８．５８ｍｍｏｌ）、１−メチル−ピペリジン−４−カルボン酸 塩酸塩（１．５４ｇ，８．５８ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（０．１１ｇ，０．８６ｍｍｏｌ）、ＥＤＣ（１．８１ｇ，９．４４ｍｍｏｌ）および塩化メチレン（２０ｍＬ）から、標記化合物（２．９７ｇ，６．０９ｍｍｏｌ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ（ｐｐｍ）：１．２２−１．３５（ｍ，１２Ｈ），１．６１−１．６８（ｍ，４Ｈ），１．７０−１．８４（ｍ，３Ｈ），１．８５−１．９３（ｍ，２Ｈ），１．９５−２．０６（ｍ，２Ｈ），２．２１−２．３０（ｍ，４Ｈ），２．３５（ｔ，Ｊ＝７．５２Ｈｚ，４Ｈ），２．７４−２．８５ （ｍ，２Ｈ），３．９６（ｄ，Ｊ＝５．５０Ｈｚ，２Ｈ），５．１１（ｓ，４Ｈ），７．２９−７．３９ （ｍ，１０Ｈ）．

（６）７−｛［（１−メチルピペリジン−４−カルボニル）オキシ］メチル｝トリデカンジオン酸の合成
実施例Ａ−１６−（１）の方法に準じ、実施例Ａ−２１−（５）で得た化合物（２．２８ｇ，３．９３ｍｍｏｌ）、１０％パラジウム−炭素（０．４２ｇ，０．３９ｍｍｏｌ，５０％含水）およびエタノール（２０ｍＬ）からし、標記化合物（１．３４ｇ，３．３５ｍｍｏｌ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ （６００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ（ｐｐｍ）：１．１９−１．３０（ｍ，１２Ｈ），１．４４−１．５３（ｍ，４Ｈ），１．５３−１．６３（ｍ，３Ｈ），１．７２−１．８１（ｍ，２Ｈ），１．９０−１．９８（ｍ，２Ｈ），２．１４（ｓ，３Ｈ），２．１８（ｔ，Ｊ＝７．４３ Ｈｚ，４Ｈ），２．２３−２．３１（ｍ，１Ｈ），２．６４−２．７３（ｍ，２Ｈ），３．９３（ｄ，Ｊ＝５．５０Ｈｚ，２Ｈ）．

（７）ジウンデシル７−｛［（１−メチルピペリジン−４−カルボニル）オキシ］メチル｝トリデカンジオエートの合成
実施例Ａ−２１−（６）で得た化合物（２００ｍｇ，０．５０ｍｍｏｌ）、ウンデカン−１−オール（８３μＬ，１．２０ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（２４ｍｇ，０．２０ｍｍｏｌ）を塩化メチレン（１０ｍＬ）に溶解し、室温でＥＤＣ（２３０ｍｇ，１．２０ｍｍｏｌ）を加え、室温で１８時間撹拌した。飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加え、塩化メチレンで抽出したのち有機相を減圧下濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル／シクロヘキサン／メタノール）にて精製し、標記化合物（２２０ｍｇ，０．３２ｍｍｏｌ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ（ｐｐｍ）：０．８８（ｔ，Ｊ＝７．０６Ｈｚ，６Ｈ），１．１９−１．３９（ｍ，４４Ｈ），１．５７−１．６８（ｍ，９Ｈ）１．７１−１．８６（ｍ，２Ｈ），１．８４−１．９５（ｍ，２Ｈ），１．９５−２．０６（ｍ，２Ｈ），２．２１−２．３４（ｍ，８Ｈ），２．７５−２．８７（ｍ，２Ｈ），３．９７（ｄ，Ｊ＝５．６９Ｈｚ，２Ｈ），４．０５（ｔ，Ｊ＝６．７９Ｈｚ，４Ｈ）．

＜カチオン性脂質の合成（２２）＞
［実施例Ａ−２２］
ビス（４−ヘプチルウンデシル） ７−｛［（１−メチルピペリジン−４−カルボニル）オキシ］メチル｝トリデカンジオエート（カチオン性脂質２２）
実施例Ａ−１６−（２）の方法に準じ、実施例Ａ−２１−（６）で得た化合物（２００ｍｇ，０．２５ｍｍｏｌ）、製造例６−（２）で得た化合物（１６０ｍｇ，０．６０ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（１２ｍｇ，０．１０ｍｍｏｌ）、ＥＤＣ（１２０ｍｇ，０．６０ｍｍｏｌ）および塩化メチレン（５ｍＬ）から、標記化合物（８８ｍｇ，０．１０ｍｍｏｌ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ（ｐｐｍ）：０．８８（ｔ，Ｊ＝６．９７Ｈｚ，１２Ｈ），１．１１−１．３６（ｍ，６６Ｈ），１．４９−１．６７（ｍ，９Ｈ），１．７１−１．８４（ｍ，２Ｈ），１．８４−１．９５（ｍ，２Ｈ），１．９５−２．０５（ｍ，２Ｈ），２．２１−２．３３（ｍ，８Ｈ），２．７４−２．８８（ｍ，２Ｈ），３．９７（ｄ，Ｊ＝５．５０Ｈｚ，２Ｈ），４．０４（ｔ，Ｊ＝６．８８Ｈｚ，４Ｈ）．

合成したカチオン性脂質１〜２２を下記表Ａに示す。

Ｂ．組成物の調製および解析
＜組成物の調製（１）＞
［実施例Ｂ−１］
実施例Ａ−１のカチオン性脂質１を用いて組成物を調製した。核酸としては、センス鎖５’−ＧＧＡｆＵｆＣＡｆＵｆＣｆＵｆＣＡＡＧｆＵｆＣｆＵｆＵＡｆＣＴ＊Ｔ−３’（Ｔ：ＤＮＡ、ｆＵ，ｆＣ＝２’−Ｆｌｕｏｒｏ ＲＮＡ、＊＝Ｐｈｏｓｐｈｏｒｏｔｈｉｏａｔｅ ｌｉｎｋａｇｅ）（配列番号１）、アンチセンス鎖５’−ＧｆＵＡＡＧＡｆＣｆＵｆＵＧＡＧＡｆＵＧＡｆＵｆＣｆＣＴ＊Ｔ−３’（Ｔ：ＤＮＡ、ｆＵ，ｆＣ＝２’−Ｆｌｕｏｒｏ ＲＮＡ、＊＝Ｐｈｏｓｐｈｏｒｏｔｈｉｏａｔｅ ｌｉｎｋａｇｅ）（配列番号２）の塩基配列からなる、Ｆａｃｔｏｒ ＶＩＩ（血液凝固第ＶＩＩ因子）遺伝子の発現を抑制するｓｉＲＮＡであり、アニーリング済みのもの（株式会社ジーンデザイン、以下「Ｆａｃｔｏｒ ＶＩＩ ｓｉＲＮＡ」という場合がある。）を使用した。

Ｆａｃｔｏｒ ＶＩＩ ｓｉＲＮＡを２５ｍＭ酢酸ナトリウム（ｐＨ４．０）で８０μｇ／ｍＬに溶解し、ｓｉＲＮＡ希釈液とした。また、カチオン性脂質１、ＤＳＰＣ（日本精化株式会社）、Ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ（日本精化株式会社）、ＭＰＥＧ２０００−ＤＭＧ（日油株式会社）を６０／８．５／３０／１．５（モル比）の割合で総脂質濃度７．２ｍＭとなるようにエタノールに溶解し、脂質溶液とした。ｓｉＲＮＡ希釈液と脂質溶液とを、それぞれ３ｍＬ／分、１ｍＬ／分の流速で投入して混合することにより、脂質複合体水溶液を得た。得られた脂質複合体水溶液を、透析膜（商品名「Ｆｌｏａｔ−Ａ−Ｌｙｚｅｒ Ｇ２」、ＳＰＥＣＴＲＵＭ社、５０Ｋ ＭＷＣＯ）を用いた透析に供し、外液をリン酸緩衝液（ＰＢＳ、ｐＨ７．４）に置換した。透析後、濃縮及び濾過滅菌を行い、実施例Ｂ−１の液体組成物を得た。

［実施例Ｂ−２］
カチオン性脂質として、カチオン性脂質１の代わりに実施例Ａ−２のカチオン性脂質２を用いた以外は実施例Ｂ−１と同様にして、実施例Ａ−７の組成物を得た。

［実施例Ｂ−３］
カチオン性脂質として、カチオン性脂質１の代わりに実施例Ａ−３のカチオン性脂質３を用いた以外は実施例Ｂ−１と同様にして、実施例Ｂ−３の組成物を得た。

［実施例Ｂ−４］
カチオン性脂質として、カチオン性脂質１の代わりに実施例Ａ−４のカチオン性脂質４を用いた以外は実施例Ｂ−１と同様にして、実施例Ｂ−４の組成物を得た。

［実施例Ｂ−５］
カチオン性脂質として、カチオン性脂質１の代わりに実施例Ａ−５のカチオン性脂質５を用いた以外は実施例Ｂ−１と同様にして、実施例Ｂ−５の組成物を得た。

［実施例Ｂ−６］
カチオン性脂質として、カチオン性脂質１の代わりに実施例Ａ−６のカチオン性脂質６を用いた以外は実施例Ｂ−１と同様にして、実施例Ｂ−６の組成物を得た。

［実施例Ｂ−７］
カチオン性脂質として、カチオン性脂質１の代わりに実施例Ａ−７のカチオン性脂質７を用いた以外は実施例Ｂ−１と同様にして、実施例Ｂ−７の組成物を得た。

［実施例Ｂ−８］
カチオン性脂質として、カチオン性脂質１の代わりに実施例Ａ−８のカチオン性脂質８を用いた以外は実施例Ｂ−１と同様にして、実施例Ｂ−８の組成物を得た。

［比較例Ｂ−１］
カチオン性脂質として、カチオン性脂質１の代わりに、特許文献２に記載された下記式（１２）で表されるジ（（Ｚ）−ノン−２−エン−１−イル）９−（（４−（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）ヘプタデカンジオエート（以下、「ＡＬＮ−３１９」という場合がある。）を、特許文献２に記載された方法にしたがって合成して用いた以外は実施例Ｂ−１と同様にして、比較例Ｂ−１の組成物を得た。

＜組成物の解析（１）＞
実施例Ｂ−１〜実施例Ｂ−８及び比較例Ｂ−１の組成物について、脂質複合体へのｓｉＲＮＡの封入率を測定した。

具体的には、組成物をＲＮａｓｅ Ｆｒｅｅ Ｗａｔｅｒで希釈し、Ｑｕａｎｔ−ｉＴ ＲｉｂｏＧｒｅｅｎ ＲＮＡ Ｒｅａｇｅｎｔ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）を使用して測定したｓｉＲＮＡ濃度（Ａ）を、脂質複合体外液に存在するｓｉＲＮＡとした。また、組成物を１％ Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００で希釈して測定したｓｉＲＮＡ濃度（Ｂ）を組成物中の全ｓｉＲＮＡ濃度とした。続いて、次式（Ｆ１）により、核酸の封入率を算出した。
封入率（％）＝１００−（Ａ／Ｂ）×１００ （Ｆ１）

また、粒子径測定装置（商品名「Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ Ｎａｎｏ ＺＳ」、Ｍａｌｖｅｒｎ社製）で脂質複合体の平均粒子径を測定した。

表１に、ｓｉＲＮＡの封入率ならびに脂質複合体の平均粒子径（Ｚ−平均）および多分散指数を示す。

実施例Ｂ−１〜実施例Ｂ−８の組成物は、比較例Ｂ−１の組成物と同等の高いｓｉＲＮＡの封入率を示すことが確認される。

＜組成物の調製（２）＞
［実施例Ｂ−９］
実施例Ａ−１のカチオン性脂質１を用いて組成物を調製した。核酸としては、Ｆｉｒｅｆｌｙ Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ (ＦＬｕｃ)のｍＲＮＡ（ＴｒｉＬｉｎｋ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、以下「ＦＬｕｃ ｍＲＮＡ」という場合がある。）を使用した。

ＦＬｕｃ ｍＲＮＡを５０ｍＭ酢酸ナトリウム（ｐＨ４．０）で２７μｇ／ｍＬに溶解し、ｍＲＮＡ希釈液とした。また、カチオン性脂質１、ＤＳＰＣ（日本精化株式会社）、Ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ（日本精化株式会社）、ＭＰＥＧ２０００−ＤＭＧ（日油株式会社）を６０／８．５／３０／１．５（モル比）の割合で総脂質濃度２．４ｍＭとなるようにエタノールに溶解し、脂質溶液とした。ｍＲＮＡ希釈液と脂質溶液とを、それぞれ３ｍＬ／分、１ｍＬ／分の流速で投入して混合することにより、脂質複合体水溶液を得た。得られた脂質複合体水溶液を、透析膜（商品名「Ｆｌｏａｔ−Ａ−Ｌｙｚｅｒ Ｇ２」、ＳＰＥＣＴＲＵＭ社、５０Ｋ ＭＷＣＯ）を用いた透析に供し、外液をリン酸緩衝液（ＰＢＳ、ｐＨ７．４）に置換した。透析後、濃縮及び濾過滅菌を行い、実施例Ｂ−９の組成物を得た。

［実施例Ｂ−１０］
カチオン性脂質として、カチオン性脂質１の代わりに実施例Ａ−２のカチオン性脂質２を用いた以外は実施例Ｂ−９と同様にして、実施例Ｂ−１０の組成物を得た。

［比較例Ｂ−２］
カチオン性脂質として、カチオン性脂質１の代わりに、上述したＡＬＮ−３１９を用いた以外は実施例Ｂ−９と同様にして、比較例Ｂ−２の組成物を得た。

＜組成物の解析（２）＞
組成物の解析（１）と同様にして、実施例Ｂ−９、実施例Ｂ−１０及び比較例Ｂ−２の組成物について、脂質複合体へのｍＲＮＡの封入率、及び脂質複合体の平均粒子径を測定した。表２に、ｍＲＮＡの封入率及び脂質複合体の平均粒子径（Ｚ−平均）を示す。

実施例Ｂ−９〜実施例Ｂ−１０の組成物は、比較例Ｂ−２の組成物と同等の高いｍＲＮＡの封入率を示すことが確認される。

＜組成物の調製（３）＞
［実施例Ｂ−１１］
実施例Ａ−２のカチオン性脂質２を用いて組成物を調製した。カチオン性脂質として、カチオン性脂質１の代わりに、カチオン性脂質２を用い、核酸として、ＦＬｕｃ ｍＲＮＡの代わりに、Ｈｕｍａｎ Ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｉｅｔｉｎ (ｈＥＰＯ)のｍＲＮＡ（ＴｒｉＬｉｎｋ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、以下「ＥＰＯ ｍＲＮＡ」という場合がある。）を使用した以外は実施例Ｂ−９と同様にして、実施例Ｂ−１１の組成物を得た。

［比較例Ｂ−３］
カチオン性脂質として、カチオン性脂質２の代わりに、上述したＡＬＮ−３１９を用いた以外は実施例Ｂ−１１と同様にして、比較例Ｂ−３の組成物を得た。

＜組成物の解析（３）＞
組成物の解析（１）と同様にして、実施例Ｂ−１１および比較例Ｂ−３の組成物について、脂質複合体へのｍＲＮＡの封入率、及び脂質複合体の平均粒子径を測定した。表３に、ｍＲＮＡの封入率及び脂質複合体の平均粒子径（Ｚ−平均）を示す。

実施例Ｂ−１１の組成物は、比較例Ｂ−３の組成物と同等の高いｍＲＮＡの封入率を示すことが確認される。

＜組成物の調製（４）＞
［実施例Ｂ−１２］
組成物の調製（１）と同様にして、実施例Ａ−１のカチオン性脂質１を用いて、Ｆａｃｔｏｒ ＶＩＩ ｓｉＲＮＡを含む、実施例Ｂ−１２の組成物を得た。

［実施例Ｂ−１３］
カチオン性脂質として、カチオン性脂質１の代わりに、実施例Ａ−２のカチオン性脂質２を用いた以外は実施例Ｂ−１２と同様にして、実施例Ｂ−１３の組成物を得た。

［比較例Ｂ−４］
カチオン性脂質として、カチオン性脂質１の代わりに、上述したＡＬＮ−３１９を用いた以外は実施例Ｂ−１２と同様にして、比較例Ｂ−４の組成物を得た。

＜組成物の解析（４）＞
組成物の解析（１）と同様にして、実施例Ｂ−１２、実施例Ｂ−１３および比較例Ｂ−４の組成物について、脂質複合体の平均粒子径（保管前平均粒子径）を測定した。さらに、各組成物を密閉したバイアルにて４℃で３ヶ月間保管し、脂質複合体の平均粒子径（保管後平均粒子径）を測定した。表４に、脂質複合体の平均粒子径（Ｚ−平均）の変化を示す。表中、平均粒子径の変化（％）は、保管後平均粒子径／保管前平均粒子径×１００で算出した。

実施例Ｂ−１２及び実施例Ｂ−１３の組成物は、３ヶ月保管後においても平均粒子径がほとんど変化せず、比較例Ｂ−４の組成物よりも物理的に安定であることが示された。

＜組成物の調製（５）＞
［実施例Ｂ−１４］
組成物の調製（１）と同様にして、実施例Ａ−９のカチオン性脂質９を用いて、Ｆａｃｔｏｒ ＶＩＩ ｓｉＲＮＡを含む、実施例Ｂ−１４の組成物を得た。

［実施例Ｂ−１５］
カチオン性脂質として、カチオン性脂質９の代わりに、実施例Ａ−１０のカチオン性脂質１０を用いた以外は実施例Ｂ−１４と同様にして、実施例Ｂ−１５の組成物を得た。

［実施例Ｂ−１６］
カチオン性脂質として、カチオン性脂質９の代わりに、実施例Ａ−１１のカチオン性脂質１１を用いた以外は実施例Ｂ−１４と同様にして、実施例Ｂ−１６の組成物を得た。

［実施例Ｂ−１７］
カチオン性脂質として、カチオン性脂質９の代わりに、実施例Ａ−１２のカチオン性脂質１２を用いた以外は実施例Ｂ−１４と同様にして、実施例Ｂ−１７の組成物を得た。

［実施例Ｂ−１８］
カチオン性脂質として、カチオン性脂質９の代わりに、実施例Ａ−１３のカチオン性脂質１３を用いた以外は実施例Ｂ−１４と同様にして、実施例Ｂ−１８の組成物を得た。

［実施例Ｂ−１９］
カチオン性脂質として、カチオン性脂質９の代わりに、実施例Ａ−１４のカチオン性脂質１４を用いた以外は実施例Ｂ−１４と同様にして、実施例Ｂ−１９の組成物を得た。

［実施例Ｂ−２０］
カチオン性脂質として、カチオン性脂質９の代わりに、実施例Ａ−１５のカチオン性脂質１５を用いた以外は実施例Ｂ−１４と同様にして、実施例Ｂ−２０の組成物を得た。

［実施例Ｂ−２１］
カチオン性脂質として、カチオン性脂質９の代わりに、実施例Ａ−２のカチオン性脂質２を用いた以外は実施例Ｂ−１４と同様にして、実施例Ｂ−２１の組成物を得た。

＜組成物の解析（５）＞
組成物の解析（１）と同様にして、実施例Ｂ−１４〜実施例Ｂ−２１の組成物について、脂質複合体へのｓｉＲＮＡの封入率、及び脂質複合体の平均粒子径を測定した。表５に、ｓｉＲＮＡの封入率ならびに脂質複合体の平均粒子径（Ｚ−平均）および多分散指数を示す。

＜組成物の調製（６）＞
［実施例Ｂ−２２］
組成物の調製（１）と同様にして、実施例Ａ−１６のカチオン性脂質１６を用いて、Ｆａｃｔｏｒ ＶＩＩ ｓｉＲＮＡを含む、実施例Ｂ−２２の組成物を得た。

［実施例Ｂ−２３］
カチオン性脂質として、カチオン性脂質１６の代わりに、実施例Ａ−１７のカチオン性脂質１７を用いた以外は実施例Ｂ−２２と同様にして、実施例Ｂ−２３の組成物を得た。

［実施例Ｂ−２４］
カチオン性脂質として、カチオン性脂質１６の代わりに、実施例Ａ−１８のカチオン性脂質１８を用いた以外は実施例Ｂ−２２と同様にして、実施例Ｂ−２４の組成物を得た。

［実施例Ｂ−２５］
カチオン性脂質として、カチオン性脂質１６の代わりに、実施例Ａ−１９のカチオン性脂質１９を用いた以外は実施例Ｂ−２２と同様にして、実施例Ｂ−２５の組成物を得た。

［実施例Ｂ−２６］
カチオン性脂質として、カチオン性脂質１６の代わりに、実施例Ａ−２０のカチオン性脂質２０を用いた以外は実施例Ｂ−２２と同様にして、実施例Ｂ−２６の組成物を得た。

［実施例Ｂ−２７］
カチオン性脂質として、カチオン性脂質１６の代わりに、実施例Ａ−２１のカチオン性脂質２１を用いた以外は実施例Ｂ−２２と同様にして、実施例Ｂ−２７の組成物を得た。

［実施例Ｂ−２８］
カチオン性脂質として、カチオン性脂質１６の代わりに、実施例Ａ−２２のカチオン性脂質２２を用いた以外は実施例Ｂ−２２と同様にして、実施例Ｂ−２８の組成物を得た。

［実施例Ｂ−２９］
カチオン性脂質として、カチオン性脂質１６の代わりに、実施例Ａ−２のカチオン性脂質２を用いた以外は実施例Ｂ−２２と同様にして、実施例Ｂ−２９の組成物を得た。
＜組成物の解析（６）＞
組成物の解析（１）と同様にして、実施例Ｂ−２２〜実施例Ｂ−２９の組成物について、脂質複合体へのｓｉＲＮＡの封入率、及び脂質複合体の平均粒子径を測定した。表６に、ｓｉＲＮＡの封入率ならびに脂質複合体の平均粒子径（Ｚ−平均）および多分散指数を示す。

＜組成物の調製（７）＞
［実施例Ｂ−３０］
組成物の調製（１）と同様にして、実施例Ａ−１のカチオン性脂質１を用いて、Ｆａｃｔｏｒ ＶＩＩ ｓｉＲＮＡを含む、実施例Ｂ−３０の組成物を得た。

［実施例Ｂ−３１］
カチオン性脂質として、カチオン性脂質１の代わりに、実施例Ａ−２のカチオン性脂質２を用いた以外は実施例Ｂ−３０と同様にして、実施例Ｂ−３０の組成物を得た。

［実施例Ｂ−３２］
カチオン性脂質として、カチオン性脂質１の代わりに、実施例Ａ−３のカチオン性脂質３を用いた以外は実施例Ｂ−３０と同様にして、実施例Ｂ−３２の組成物を得た。

［実施例Ｂ−３３］
カチオン性脂質として、カチオン性脂質１の代わりに、実施例Ａ−４のカチオン性脂質４を用いた以外は実施例Ｂ−３０と同様にして、実施例Ｂ−３３の組成物を得た。

［比較例Ｂ−５］
カチオン性脂質として、カチオン性脂質１の代わりに、上述したＡＬＮ−３１９を用いた以外は実施例Ｂ−３０と同様にして、比較例Ｂ−５の組成物を得た。

＜組成物の解析（７）＞
組成物の解析（１）と同様にして、実施例Ｂ−３０〜実施例Ｂ−３３及び比較例Ｂ−５の組成物について、脂質複合体の平均粒子径（保管前平均粒子径）を測定した。さらに、各組成物を密閉したバイアルに４℃で保管し、３ヶ月後および６ヶ月後の脂質複合体の平均粒子径（保管後粒子径）を測定した。表７に、脂質複合体の平均粒子径（Ｚ−平均）の変化を示す。表中、平均粒子径の変化（％）は、保管後平均粒子径（６ヶ月後）／保管前平均粒子径×１００で算出した。

実施例Ｂ−３０〜実施例Ｂ−３３の組成物は、６ヶ月保管後においても平均粒子径がほとんど変化せず、比較例Ｂ−５の組成物よりも物理的に安定であることが示された。

＜組成物の調製（８）＞
［実施例Ｂ−３４］
実施例Ａ−２のカチオン性脂質２を用いて組成物を調製した。核酸としては、ＥＰＯ ｍＲＮＡを使用した。

ＥＰＯ ｍＲＮＡを１０ｍＭクエン酸ナトリウム（ｐＨ４．０）で８０μｇ／ｍＬに溶解し、ｍＲＮＡ希釈液とした。また、カチオン性脂質２、ＤＯＰＥ（日油株式会社）、Ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ（日本精化株式会社）、ＭＰＥＧ２０００−ＤＭＧ（日油株式会社）を６０／５．０／３３．５／１．５（モル比）の割合で総脂質濃度２．２５ｍＭとなるようにエタノールに溶解し、脂質溶液とした。ｍＲＮＡ希釈液と脂質溶液とを、それぞれ３ｍＬ／分、１ｍＬ／分の流速で投入して混合することにより、脂質複合体水溶液を得た。得られた脂質複合体水溶液を、透析膜（商品名「Ｆｌｏａｔ−Ａ−Ｌｙｚｅｒ Ｇ２」、ＳＰＥＣＴＲＵＭ社、５０Ｋ ＭＷＣＯ）を用いた透析に供し、外液をリン酸緩衝液（ＰＢＳ、ｐＨ７．４）に置換した。透析後、濃縮及び濾過滅菌を行い、実施例Ｂ−３４の組成物を得た。

［実施例Ｂ−３５］
核酸として、Ｆａｃｔｏｒ ＶＩＩ ｓｉＲＮＡの代わりにＬｕｃｉｆｅｒａｓｅ ｓｉＲＮＡを、カチオン性脂質として、カチオン性脂質１の代わりに、実施例Ａ−２のカチオン性脂質２を用いた以外は組成物の調製（１）と同様にして、実施例Ｂ−３５の組成物を得た。なお、Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ ｓｉＲＮＡは、センス鎖５’−ＣＵＵＡＣＧＣＵＧＡＧＵＡＣＵＵＣＧＡＴ＊Ｔ−３’（Ｔ：ＤＮＡ、＊＝Ｐｈｏｓｐｈｏｒｏｔｈｉｏａｔｅ ｌｉｎｋａｇｅ）（配列番号３）、アンチセンス鎖５’−ＵＣＧＡＡＧＵＡＣＵＣＡＧＣＧＵＡＡＧＴ＊Ｔ−３’（Ｔ：ＤＮＡ、＊＝Ｐｈｏｓｐｈｏｒｏｔｈｉｏａｔｅ ｌｉｎｋａｇｅ）（配列番号４）の塩基配列からなり、アニーリング済みのもの（株式会社ジーンデザイン）を使用した。

＜組成物の解析（８）＞
組成物の解析（１）と同様にして、実施例Ｂ−３４および実施例Ｂ−３５の組成物について、脂質複合体へのｍＲＮＡまたはｓｉＲＮＡの封入率、及び脂質複合体の平均粒子径を測定した。表８に、ｍＲＮＡまたはｓｉＲＮＡの封入率及び脂質複合体の平均粒子径（Ｚ−平均）を示す。

実施例Ｂ−３４おおび実施例Ｂ−３５の組成物は、高い核酸封入率を示すことが確認される。この結果は、実施例の組成物が、核酸の種類によらず、核酸送達に利用可能であることを示す。

Ｃ．試験例
［試験例１］
実施例Ｂ−１〜実施例Ｂ−３及び比較例Ｂ−１の組成物を、脂質複合体に封入されたＦａｃｔｏｒ ＶＩＩ ｓｉＲＮＡ濃度が１μｇ／ｍＬ又は５μｇ／ｍＬとなるようにＰＢＳで希釈した。各組成物を、ＩＣＲマウス（５週齢、メス、平均体重２５ｇ、ｎ＝３）に１０ｍＬ／ｋｇの投与容量で尾静脈内投与し、投与から２４時間後に麻酔下で採血及び肝臓の採取を実施した。遠心により血液から血漿を分離し、血漿中のＦａｃｔｏｒ ＶＩＩタンパク質濃度を市販のキット（商品名「ＢＩＯＰＨＥＮ ＦＶＩＩ」、ＨＹＰＨＥＮ ＢｉｏＭｅｄ社）により定量した。陰性対照として、ＰＢＳを投与した群に同様の処理を行った。

ＰＢＳ投与群のＦａｃｔｏｒ ＶＩＩタンパク質濃度を１００％とし、組成物投与群のＦａｃｔｏｒ ＶＩＩタンパク質濃度を相対値として算出した。結果を図１および表９に示す。

実施例Ｂ−１〜実施例Ｂ−３の組成物は、比較例Ｂ−１の組成物よりも、Ｆａｃｔｏｒ ＶＩＩタンパク質の発現抑制効果が高いことが確認される。この結果は実施例の組成物が、核酸を細胞質に効率よく放出していることを示す。

［試験例２］
実施例Ｂ−４及び比較例Ｂ−１の組成物を試験例１と同様にしてＩＣＲマウス（５週齢、メス、平均体重２５ｇ、ｎ＝３）に投与し、投与から２４時間後の血漿中のＦａｃｔｏｒ ＶＩＩタンパク質濃度の相対値を算出した。結果を図２および表１０に示す。

実施例Ｂ−４の組成物は、比較例Ｂ−１の組成物よりも、Ｆａｃｔｏｒ ＶＩＩタンパク質の発現抑制効果が高いことが確認される。この結果は実施例の組成物が、核酸を細胞質に効率よく放出していることを示す。

［試験例３］
実施例Ｂ−５の組成物を試験例１と同様にしてＩＣＲマウス（５週齢、メス、平均体重２５ｇ、ｎ＝３）に投与し、投与から２４時間後の血漿中のＦａｃｔｏｒ ＶＩＩタンパク質濃度の相対値を算出した。結果を表１１に示す。

実施例Ｂ−５の組成物は、Ｆａｃｔｏｒ ＶＩＩタンパク質の発現抑制効果が高いことが確認される。この結果は実施例の組成物が、核酸を細胞質に効率よく放出していることを示す。

［試験例４］
実施例Ｂ−１１と比較例Ｂ−３の組成物を、脂質複合体に封入されたｈＥＰＯ ｍＲＮＡ濃度が１μｇ／ｍＬ又は３μｇ／ｍＬとなるようにＰＢＳで希釈した。各組成物を、ＩＣＲマウス（５週齢、メス、平均体重２５ｇ、ｎ＝３）に１０ｍＬ／ｋｇの投与容量で尾静脈内投与し、投与から２４時間後に麻酔下で採血を実施した。遠心により血液から血漿を分離し、血漿中のｈＥＰＯタンパク質濃度を市販のキット（商品名「Ｈｕｍａｎ Ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｉｅｔｉｎ Ｑｕａｎｔｉｋｉｎｅ ＩＶＤ ＥＬＩＳＡ Ｋｉｔ」、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）により定量した。陰性対照として、何も投与していない（無処理）群とＰＢＳを投与した群に同様の処理を行った。結果を表１２に示す。

実施例Ｂ−１１の組成物は、比較例Ｂ−３の組成物に比べてｈＥＰＯタンパク質の発現効果が高いことが確認される。この結果は実施例の組成物が、核酸を細胞質に効率よく放出していることを示す。

［試験例５］
実施例Ｂ−１４〜実施例Ｂ−２１の組成物を、脂質複合体に封入されたＦａｃｔｏｒ ＶＩＩ ｓｉＲＮＡ濃度が３μｇ／ｍＬ又は３０μｇ／ｍＬとなるようにＰＢＳで希釈した。各組成物を、ＩＣＲマウス（５週齢、メス、平均体重２５ｇ、ｎ＝３）に１０ｍＬ／ｋｇの投与容量で尾静脈内投与し、投与から２４時間後に麻酔下で採血及び肝臓の採取を実施した。遠心により血液から血漿を分離し、血漿中のＦａｃｔｏｒ ＶＩＩタンパク質濃度を市販のキット（商品名「ＢＩＯＰＨＥＮ ＦＶＩＩ」、ＨＹＰＨＥＮ ＢｉｏＭｅｄ社）により定量した。陰性対照として、ＰＢＳを投与した群に同様の処理を行った。

ＰＢＳ投与群のＦａｃｔｏｒ ＶＩＩタンパク質濃度を１００％とし、組成物投与群のＦａｃｔｏｒ ＶＩＩタンパク質濃度を相対値として算出した。結果を表１３に示す。

［試験例６］
実施例Ｂ−２２〜実施例Ｂ−２９の組成物を試験例５と同様にしてＩＣＲマウス（５週齢、メス、平均体重２５ｇ、ｎ＝３）に投与し、投与から２４時間後の血漿中のＦａｃｔｏｒ ＶＩＩタンパク質濃度の相対値を算出した。結果を表１４に示す。

［試験例７］
ＥＰＯ ｍＲＮＡを封入した実施例Ｂ−３４の組成物を、脂質複合体に封入されたＲＮＡ濃度が３０μｇ／ｍＬとなるようにＰＢＳで希釈した。各組成物を、ＢＡＬＢ／ｃマウス（メス、ｎ＝４）に、１０ｍＬ／ｋｇの投与容量で尾静脈内投与し、投与から1日及び４日後に麻酔下で採血を実施した。遠心により血液から血漿を分離し、血漿中のｈＥＰＯタンパク濃度を市販のキット（商品名「Ｈｕｍａｎ Ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｉｅｔｉｎ Ｑｕａｎｔｉｋｉｎｅ ＩＶＤ ＥＬＩＳＡ Ｋｉｔ」、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）により定量した。また、網状赤血球数を測定した。陰性対照として、何も投与していない（無処理）群とＬｕｃｉｆｅｒａｓｅ ｓｉＲＮＡを封入した実施例Ｂ−３５の組成物を投与した群に同様の処理を行った。結果を表１５に示す

無処置群及びＬｕｃ ｓｉＲＮＡ投与群ではｈＥＰＯが検出されず、ＥＰＯ ｍＲＮＡ投与群では投与１日後にｈＥＰＯが検出された。また、産生したＥＰＯの作用により、投与４日後に網状赤血球数が増加したことが確認された。この結果は実施例の組成物が、核酸を細胞質に効率よく放出していることを示す。

以上の結果から、本発明のカチオン性脂質によれば、核酸を細胞質に効率よく放出することが可能となる。また、本発明のカチオン性脂質によれば、一定期間保管した際に、脂質複合体の粒子径の増大を抑制することが可能となる。

本発明によれば、核酸を細胞質に効率よく放出することが可能なカチオン性脂質を提供することができる。

Claims (15)

1. 下記式（１ａ）で表される化合物又はその薬学的に許容される塩。
   ［式中、Ｌ_１及びＬ_２はそれぞれ独立に炭素数３〜１０のアルキレン基、Ｒ_１及びＲ_２はそれぞれ独立に炭素数４〜２２のアルキル基又は炭素数４〜２２のアルケニル基を表し、Ｘ_１は単結合又は−ＣＯ−Ｏ−を表し、環Ｐは下記式（Ｐ−１）〜（Ｐ−５）のいずれかを表す。］
   ［式中、Ｒ_３は炭素数１〜３のアルキル基を表す。］
2. 式（１）で表される、請求項１に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
   ［式中、Ｌ_１及びＬ_２はそれぞれ独立に炭素数３〜１０のアルキレン基、Ｒ_１及びＲ_２はそれぞれ独立に炭素数４〜２２のアルキル基又は炭素数４〜２２のアルケニル基を表し、Ｘ_１は単結合又は−ＣＯ−Ｏ−を表す。］
3. 下記式（Ａ１）〜（Ａ２２）で表される化合物からなる群より選択される、請求項１又は２に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
   
4. 下記式（Ａ１）で表される、請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
   
5. 下記式（Ａ２）で表される、請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
   
6. 下記式（Ａ３）で表される、請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
   
7. 下記式（Ａ４）で表される、請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
   
8. 下記式（Ａ５）で表される、請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
   
9. 下記式（Ａ９）で表される、請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
   
10. 下記式（Ａ１２）で表される、請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
    
11. 下記式（Ａ１５）で表される、請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
    
12. 下記式（Ａ２０）で表される、請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
    
13. （Ｉ）請求項１〜１２のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩と、（ＩＩ）中性脂質、ポリエチレングリコール修飾脂質、及びステロールからなる群から選ばれる少なくとも一種の脂質と、を含有する脂質複合体。
14. （Ｉ）請求項１〜１２のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩と、（ＩＩ）中性脂質、ポリエチレングリコール修飾脂質、及びステロールからなる群から選ばれる少なくとも一種の脂質と、（ＩＩＩ）核酸と、を含有する組成物。
15. （Ｉ）請求項１〜１２のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩と、（ＩＩ）中性脂質、ポリエチレングリコール修飾脂質、及びステロールからなる群から選ばれる少なくとも一種の脂質とを含有する極性有機溶媒含有水溶液と、（ＩＩＩ）核酸を含有する水溶液とを混合して混合液を得る工程と、混合液中の極性有機溶媒の含有率を減少させる工程と、を含む組成物の製造方法。