TWI648067B - 陽離子性脂質 - Google Patents

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Abstract

本發明提供一種陽離子性脂質，該陽離子性脂質可利用于向細胞質的核酸傳遞，而可解決脂質複合物的物理穩定性的課題。本發明之陽離子性脂質的特徵在於：它係下述通式(3)所表示之化合物或其藥劑學上所容許之鹽。
[式(3)中，L表示碳數7~12之烷基或碳數7~12之烯基，R表示碳數1~2之烷基；n1及n2分別獨立地表示1~3之整數。]

Description

陽離子性脂質
本發明涉及一種新穎的陽離子性脂質。
本申請案係基於2014年1月9日在美國提出申請案之臨時申請案61/925,267號而主張優先權，並將其內容引用到本文中。
siRNA(小干擾RNA)、miRNA(微小RNA)、shRNA(短髮夾RNA、或小髮夾RNA)表現載體、反股寡核苷酸等核酸係在活體內誘導序列特異性基因表現抑制之核酸，其作為核酸醫藥而為公眾所知。
在該等核酸醫藥中，特別是siRNA備受矚目。siRNA係包含19~23個鹼基對之雙股RNA，其會誘導被稱為RNA干擾(RNA interference；RNAi)之序列特異性基因表現抑制。
然而，siRNA雖化學性質穩定，但在治療用途中存在如下問題：容易被血漿中的RNase(核糖核酸酶，ribonuclease)分解、及當單獨存在時難以透過細胞膜(例如，專利文獻1)。
針對所述問題，已知有藉由將siRNA封入到含有陽離子性脂質之微粒子內，而保護所封入的siRNA免於在血漿中發生分解，且可使siRNA透過脂溶性細胞膜，作為此種含有陽離子性脂質之脂質粒子，提出了含有特定的陽離子性脂質並藉由擠出法或線內混合法而製備之脂質製劑(例如，參照專利文獻1)。
專利文獻1中所記載的脂質製劑係在微粒子中封入了核酸等高分 子的核酸-脂質粒子組合物，並且揭露了該脂質製劑可將核酸導入到細胞中。
另外，作為被期待利用於核酸醫藥的陽離子性脂質，現在開發出了各種化合物(例如，參照專利文獻2~6及非專利文獻1)，但已知含有具有非對稱結構的陽離子性脂質的脂質奈米粒(Lipid nanoparticles，LNPs)在保存期間粒徑會增大，也就是說在物理穩定性方面存在課題(非專利文獻2)。
針對所述問題，非專利文獻2中揭露了藉由對含有具有非對稱結構的陽離子性脂質的LNPs選擇性地使用某種磷脂質，而使粒徑的增大得到抑制。
[先前技術文獻]
[專利文獻]
[專利文獻1]日本專利特表2012-530059號公報
[專利文獻2]國際公開第2012/040184號
[專利文獻3]國際公開第2013/059496號
[專利文獻4]國際公開第2010/144740號
[專利文獻5]美國公開第2013/0178541號
[專利文獻6]美國專利第8158601號
[非專利文獻]
[非專利文獻1]Angew. Chem. Int. Ed.(德國應用化學) 2012, 51, 8529-8533
[非專利文獻2]Mol. Pharmaceutics (分子製藥)2014, 3, 11 (11), 4143-53
然而，儘管最近有所進展，但可利用于向細胞質的核酸傳遞而可 解決如上所述的物理穩定性的課題之陽離子性脂質仍然是必要的。
本發明之陽離子性脂質之特徵在於：其係下述通式(1)所表示之化合物或其藥劑學上所容許之鹽。
通式(1)中，R1及R2分別獨立地表示碳數4~24之烷基或碳數4~24之烯基，n1及n2分別獨立為1~3之整數，R3為碳數1~3之烷基。
所述通式(1)中，R1也可具有由碳鏈的一部分縮合而形成的1個以上的環丙烷。
所述通式(1)中，R1也可具有由碳鏈的一部分縮合而形成的1個環丙烷。
所述通式(1)中，R1為
R2為表示碳數7~12的烷基或碳數7~12的烯基的L、R3為碳數1~2的烷基R的本發明之陽離子性脂質係以下述通式(3)表示。
關於本發明之陽離子性脂質，在通式(3)中，n1及n2也可分別獨立 為1~2之整數。
本發明之陽離子性脂質也可為選自以下化合物中之化合物或其藥劑學上所容許之鹽。
本發明之陽離子性脂質也可為下述式(4)所表示之化合物或其藥劑學上所容許之鹽。
本發明之陽離子性脂質也可為下述式(5)所表示之化合物或其藥劑學上所容許之鹽。
[化13]
本發明之陽離子性脂質也可為下述式(10)所表示之化合物或其藥劑學上所容許之鹽。
本發明之組合物之特徵在於含有：(I)本發明之陽離子性脂質、(II)選自由中性脂質、聚乙二醇修飾脂質及固醇所組成之族群中的至少一種脂質及(III)核酸。
本發明之組合物可藉由如下製造方法而製造，該製造方法包括：將包含(I)本發明的陽離子性脂質和(II)選自由中性脂質、聚乙二醇修飾脂質及固醇所組成之族群中的至少一種脂質的含極性有機溶劑之水溶液、與含有(III)核酸的水溶液加以混合而獲得混合液之步驟；以及使所述混合液中的極性有機溶劑的含量減少之步驟。
根據本發明之陽離子性脂質，可向細胞質高效率地釋放核酸。另外，根據本發明之陽離子性脂質，可解決如上所述的物理穩定性之課題。因此，本發明之陽離子性脂質具有作為用於向細胞質傳遞核酸的脂質之可利用性。
圖1係表示實施例20及比較例1之組合物的平均粒徑隨時間經過而產生之變化。
圖2係表示實施例21~25及比較例2之組合物在保存前後的平均粒徑變化。
≪陽離子性脂質≫
在一個實施方式中，本發明提供一種陽離子性脂質，它係下述通式(1)所表示的化合物或其藥劑學上所容許之鹽。陽離子性脂質也可為所述鹽之水合物或所述鹽之溶劑合物。
通式(1)中，R1及R2分別獨立地表示碳數4~24之烷基或碳數4~24之烯基，n1及n2分別獨立為1~3之整數，R3為碳數1~3之烷基。
通式(1)中，R1可具有由碳鏈的一部分縮合而形成的1個以上的環丙烷，也可具有1個環丙烷。
所述通式(1)中，R1以
表示、R2為表示碳數7~12的烷基或碳數7~12的烯基的L、R3為碳數1~2的烷基R的本發明之陽離子性脂質係以下述通式(3)表示。
關於本發明之陽離子性脂質，在通式(3)中，n1及n2也可分別獨立為1~2之整數。
在本發明中，所謂陽離子性脂質，係指下述式所表示的具有脂質親和性區域X和親水性區域Z之兩親分子(amphiphilic molecule)，該脂質親和性區域X含有一個以上的烴基，該親水性區域Z含有在生理pH值下會質子化之極性基。此外，本發明之陽離子性脂質也可在脂質親和性區域和親水性區域之間具有連結區Y。
[化18]X-Y-Z
在本說明書中，所謂“烷基”，係指具有指定個數的碳原子之直鏈狀、環狀或支鏈狀的飽和脂肪族烴基。
在本說明書中，所謂“烯基”，係指具有指定個數的碳原子之直鏈狀、環狀或支鏈狀的不飽和脂肪族烴基，例如可列舉二烯、三烯及四烯等，但並不限定於該等。
作為所述環狀“烷基”或環狀“烯基”，例如可列舉具有1個以上由碳鏈的一部分縮合而形成的環丙烷或環丁烷等環的基，但並不限定於該等。
作為所述通式(3)所表示之化合物，可列舉以下化合物。
[化26]
本發明之陽離子性脂質係所述通式(1)所表示之化合物或其藥劑學上所容許之鹽。即，本發明之陽離子性脂質可發生質子化而含有下述通式(1')所表示之陽離子。
[通式(1')中，R1~R3、n1及n2分別表示與所述通式(1)中的R1~R3、n1及n2相同之含義]
作為與所述通式(1')所表示之陽離子成對，且本發明之陽離子性脂質可含有的陰離子，只要為藥劑學上所容許之陰離子，則沒有特別限定，例如可列舉：氯化物離子、溴化物離子、硝酸根離子、硫酸根離子、磷酸根離子等無機離子；醋酸根離子、草酸根離子、馬來酸根離子、富馬酸根離子、檸檬酸根離子、苯甲酸根離子、甲磺酸根離子等有機酸根離子等。
≪陽離子性脂質之製造方法≫
對本發明之陽離子性脂質之製造方法進行說明。下述式(12)及(13)中表示陽離子性脂質之合成流程的一個實施方式。
[化28]合成流程1
通式中，R4係以下述通式(14)表示。
通式中，R3、n1及n2分別表示與所述通式(1)中的R3、n1及n2相同之 含義。
通式中，a及b分別表示0以上且a與b的和成為17以下的整數。
新穎陽離子性脂質(1-5)之合成例如可依照合成流程1而合成。藉由對化合物(1-1)縮合N,O-二甲基羥基胺而獲得溫勒伯醯胺(Weinreb amide)(1-2)。藉由添加格任亞試劑(Grignard reagent)而獲得酮(1-3)。並且，藉由利用氫化鋁鋰進行還原，而獲得醇(1-4)。藉由使該醇(1-4)和羧酸進行縮合而獲得酯(1-5)。
含有環丙基的新穎陽離子性脂質(1-10)之合成例如可依照合成流程2而進行。藉由西蒙斯-史密斯環丙烷化(Simmons-Smith clopropanation)，由不飽和的溫勒伯醯胺(1-6)而獲得含有環丙基的溫勒伯醯胺(1-7)。藉由添加格任亞試劑而獲得酮(1-8)。並且，藉由利用氫化鋁鋰進行還原，而獲得醇(1-9)。藉由使該醇(1-9)和羧酸進行縮合而獲得酯(1-10)。
≪組合物≫
在一個實施方式中，本發明提供一種組合物，其含有(I)本發明之陽離子性脂質、(II)選自由中性脂質、聚乙二醇修飾脂質及固醇所組成之族群中的至少一種脂質及(III)核酸。
以下，對本發明組合物之較佳實施方式進行說明，但該實施方式係為了更好地理解發明之主旨而具體地進行說明，只要沒有特別指定，則並不限定本發明。
本實施方式組合物中的脂質組成較佳的是含有本發明之陽離子性脂質10莫耳%~100莫耳%，更佳的是含有20莫耳%~90莫耳%，特別佳的是含有40莫耳%~70莫耳%。
作為本實施方式的組合物中之核酸，可列舉：siRNA、miRNA、shRNA表現載體、反義寡核苷酸、核酶等，較佳的是siRNA、miRNA。
本實施方式之組合物較佳的是含有核酸0.01重量%~50重量%，更 佳的是含有0.1重量%~30重量%，特別佳的是含有1重量%~10重量%。
本實施方式組合物中之脂質組成中含有(I)本發明之陽離子性脂質和(II)選自由中性脂質、聚乙二醇修飾脂質及固醇所組成之族群中的至少一種脂質。
作為中性脂質，可列舉：二油醯磷脂醯乙醇胺(DOPE)、棕櫚醯油醯磷脂醯膽鹼(POPC)、卵磷脂醯膽鹼(EPC)、二肉豆蔻醯磷脂醯膽鹼(DMPC)、二棕櫚醯磷脂醯膽鹼(DPPC)、二硬脂醯磷脂醯膽鹼(DSPC)、二花生醯磷脂醯膽鹼(DAPC)、二蘿醯磷脂醯膽鹼(DBPC)、二(二十四醯)磷脂醯膽鹼(DLPC)、二油醯磷脂醯膽鹼(DOPC)、鞘磷脂、神經醯胺、二油醯磷脂醯甘油(DOPG)、二棕櫚醯磷脂醯甘油(DPPG)、磷脂醯乙醇胺(POPE)、二油醯-磷脂醯乙醇胺4-(N-馬來醯亞胺甲基)-環己烷-1-羧酸酯(DOPE-mal)等。
本實施方式組合物中之脂質組成中較佳的是含有中性脂質0莫耳%~50莫耳%，更佳的是含有0莫耳%~40莫耳%，特別佳的是含有0莫耳%~30莫耳%。
作為聚乙二醇修飾脂質，可列舉：PEG2000-DMG(PEG2000-二肉豆蔻基甘油、PEG2000-DPG(PEG2000-二棕櫚醯甘油)、PEG2000-DSG(PEG2000-二硬脂醯甘油)、PEG5000-DMG(PEG5000-二肉豆蔻基甘油)、PEG5000-DPG(PEG5000-二棕櫚醯甘油)、PEG5000-DSG(PEG5000-二硬脂醯甘油)、PEG-cDMA(N-[(甲氧基聚(乙二醇)2000)胺基甲醯基]-1,2-二肉豆蔻基氧基丙基-3-胺)、PEG-C-DOMG(R-3-[(ω-甲氧基-聚(乙二醇)2000)胺基甲醯基]-1,2-二肉豆蔻基氧基丙基-3-胺)、聚乙二醇(PEG)-二醯甘油(DAG)、PEG-二烷氧基丙基(DAA)、PEG-磷脂質、PEG-神經醯胺(Cer)等。
作為PEG-二烷氧基丙基，可列舉：PEG-二月桂氧基丙基、PEG-二肉豆蔻氧基丙基、PEG-二棕櫚氧基丙基、PEG-二硬脂氧基丙基等。
本實施方式組合物中之脂質組成中較佳的是含有聚乙二醇修飾脂質0莫耳%~30莫耳%，更佳的是含有0莫耳%~20莫耳%，特別佳的是含有0莫耳%~10莫耳%。
作為固醇，可列舉：膽固醇、二氫膽固醇、羊毛固醇、β-穀甾醇、菜油固醇、豆固醇、菜籽固醇、麥角固醇、岩藻固醇、3β-[N-(N',N'-二甲基胺基乙基)胺基甲醯基]膽固醇(DC-Chol)等。
本實施方式組合物中之脂質組成中較佳的是含有固醇0莫耳%~90莫耳%，更佳的是含有10莫耳%~80莫耳%，特別佳的是含有20莫耳%~50莫耳%。
本實施方式組合物中之脂質組成之組合沒有特別限定，例如較佳的是本發明之陽離子性脂質、中性脂質及固醇之組合，或本發明之陽離子性脂質、中性脂質、聚乙二醇修飾脂質及固醇之組合。
此外，本實施方式的組合物也可含有蔗糖、葡萄糖、山梨糖醇、乳糖等糖；谷胺醯胺、穀胺酸、穀胺酸鈉、組胺酸等胺基酸；檸檬酸、磷酸、醋酸、乳酸、碳酸、酒石酸等酸的鹽等。
本實施方式之組合物也可製劑化為醫藥組合物。作為醫藥組合物之劑型，例如可列舉注射劑。
本實施方式之組合物例如可為藉由冷凍乾燥等而去除了溶劑之粉末狀態，也可為液體狀態。在組合物為粉末狀態情況下，可在使用前懸浮或溶解到藥學上所容許之介質中製成注射劑而使用。在組合物為液體狀態情況下，可直接使用或者懸浮或溶解到藥學上所容許之介質中製成注射劑而使用。
作為藥學上所容許之介質，可列舉：無菌水；生理鹽水；含有葡萄糖、D-山梨糖醇、D-甘露糖、D-甘露糖醇、氯化鈉等輔助藥的等滲液等。本實施方式之組合物還可含有乙醇、丙二醇、聚乙二醇等醇等溶解輔助劑，穩定劑、抗氧化劑、防腐劑等添加劑。
本實施方式之組合物形成由含有陽離子性脂質的脂質所構成的微粒子內封入了核酸之脂質複合物。脂質複合物之“平均粒徑”可藉由體積平均、數量平均、Z-平均的任一種方法算出。在本實施方式之組合物中，脂質複合物之平均粒徑(Z-平均)例如較佳的是10nm~1000nm，更佳的是30nm~500nm，特別佳的是30nm~200nm。
本實施方式之組合物較佳的是在保存期間，粒徑和保存前相比不會過度增大之組合物。例如，較佳的是在4℃下保存6個月的情況下的粒徑的大小相對於保存前的粒徑的大小為1.6倍以下之組合物，更佳的是1.3倍以下，特別佳的是1.2倍以下。
關於本實施方式之組合物，為了使其不容易引起非特異性吸附或免疫反應，較佳的是在pH值約7.4的環境下(例如，血液中)其表面幾乎無電荷之組合物。另外，關於本實施方式之組合物，為了在因內吞作用而被吞入到細胞內時，容易和內吞體膜融合，較佳的是在低pH值環境下帶正電的組合物。
≪組合物之製造方法≫
在一個實施方式中，本發明提供一種組合物之製造方法，該製造方法包括步驟(a)及步驟(b)，步驟(a)係將包含(I)本發明的陽離子性脂質和(II)選自由中性脂質、聚乙二醇修飾脂質及固醇所組成之族群中的至少一種脂質的含極性有機溶劑之水溶液、與含有(III)核酸的水溶液加以混合而獲得混合液，步驟(b)係使所述混合液中的極性有機溶劑之含量減少。
以下，對本發明之組合物的製造方法的較佳的實施方式進行說明，但該實施方式係為了更好地理解發明之主旨而具體地進行說明，只要沒有特別指定，則並不限定本發明。
藉由水溶性的核酸和上述陽離子性脂質之靜電相互作用及脂質間的疏水相互作用，可形成由脂質構成的微粒子內封入了核酸之脂質複 合物。例如，藉由改變含有(I)本發明之陽離子性脂質和(II)選自由中性脂質、聚乙二醇修飾脂質及固醇所組成之族群中的至少一種脂質的脂質成分在含極性有機溶劑的水溶液中之溶解度，可形成脂質複合物。作為極性有機溶劑，可列舉乙醇等醇。
首先，在步驟(a)中，將溶解了(I)本發明之陽離子性脂質和(II)選自由中性脂質、聚乙二醇修飾脂質及固醇所組成之族群中的至少一種脂質的含極性有機溶劑之水溶液、與含有(III)核酸的水溶液加以混合而獲得混合液。含極性有機溶劑的水溶液中的極性有機溶劑之濃度只要在與核酸的水溶液混合後仍然滿足溶解脂質分子之條件，則沒有特別限定。
接著，在步驟(b)中，向所述混合液中添加水等，由此使極性有機溶劑的含量減少。由此，可形成脂質複合物。為了高效率地形成脂質複合物，較佳的是使極性有機溶劑之含量急劇降低。
根據本實施方式組合物之製造方法，可獲得核酸被高效率地封入到微粒子內部的脂質複合物。
在封入到組合物中的核酸為核酸醫藥的情況下，可用作醫藥組合物。
[實施例]
以下，列舉實施例更詳細地說明本發明，但本發明並不限定於該等實施例。另外，實施例中的化合物名係使用Marvin Sketch ver.5.4(ChemAxion)進行命名。
<陽離子性脂質之合成>
[實施例1]1-甲基哌啶-4-羧酸1-(2-辛基環丙基)十七烷-8-酯(1-(2-octylcyclopropyl)heptadecan-8-yl 1-methylpiperidine-4-carboxylate)(以下，稱為“陽離子性脂質1”)之合成
依照所述合成流程1或2，合成陽離子性脂質1。
第1步驟：
向將油酸(75.0g，265.5mmol)溶解到二氯甲烷(531.0mL)中而成的溶液中，添加WSC(water soluble carbohydrate，水溶性碳水化合物)(101.8g，531.05mmol)、三乙基胺(53.74g，531.05mmol)、N,O-二甲基羥基胺鹽酸鹽(51.8g，531.05mmol)。在室溫下攪拌到次日後，添加水，將有機層分液。將有機層利用水清洗5次後，利用1M氫氧化鈉水溶液清洗1次，利用無水硫酸鎂將其乾燥。藉由過濾將乾燥劑去除，將濾液在減壓下濃縮。對於所獲得的組合物1(88.92g)，不進行純化而用於下一步驟。
第2步驟：
將二乙基鋅(764.9mL，764.9mmol[1M溶液])溶解到二氯甲烷(1416.5mL)中，並冷卻到0℃。向該溶液中緩慢地滴加TFA(Triflouroacetic acid，三氟醋酸)(87.2g，764.9mmol)。因為已升溫，所以再次冷卻到0℃後添加二碘甲烷(204.9g，764.9mmol)，並在0℃的狀態下攪拌30分鐘。向該溶液中添加粗產物1(83.0g，255.0mmol)，升溫到室溫並攪拌1小時。在確認反應結束後，利用氯化銨(300mL)使反應淬滅。將分液所獲得的有機層利用無水硫酸鎂進行乾燥。藉由過濾將乾燥劑去除，將濾液在減壓下濃縮。藉由矽膠柱層析法進行純化，而獲得化合物2(73.0g)。
第3步驟：
將化合物2(17.0g，50.07mmol)溶解到THF(Tetrahydrofuran，四氫呋喃)(100mL)中，在氮氣環境下且室溫下滴加1M的溴化壬基鎂(100mL，100mmol)。攪拌1小時，確認反應結束後添加充分量的氯化銨水溶液而使反應淬滅。對反應溶液進行水洗，將有機層利用無水硫酸鎂進行乾燥。藉由過濾將乾燥劑去除，將濾液在減壓下濃縮。藉由矽膠柱層析法進行純化，而獲得化合物3(11.7g)。
第4步驟：
向將所獲得的化合物3(25.0g，61.5mmol)溶解到四氫呋喃(123mL)而成的溶液中，添加氫化鋁鋰(2.3g，61.47mmol)，並加熱回流一小時。在確認反應結束後，向反應體系中依序緩慢地添加水(2.3mL)、15%氫氧化鈉水溶液(2.3mL)、水(6.9mL)而使反應淬滅。對該溶液進行矽藻土過濾，將濾液在減壓下濃縮。藉由矽膠柱層析法進行純化，而獲得化合物4。
第5步驟：
向將所獲得的化合物(0.5g，1.22mmol)溶解到二氯甲烷(4.9mL)而成的溶液中，添加WSC(0.47g，2.45mmol)、二甲基胺基吡啶(0.03g，0.24mmol)、1-甲基哌啶-4-羧酸(0.35g，2.45mmol)。在室溫下攪拌到次日後，添加水，將有機層分液。將有機層利用水清洗5次後，利用1N氫氧化鈉水溶液清洗1次，並利用無水硫酸鎂將其乾燥。藉由過濾將乾燥劑去除，將濾液在減壓下濃縮。藉由矽膠柱層析法進行純化，而獲得下述式(4)所表示之陽離子性脂質1(0.2g，0.37mmol)。
在以下條件下利用HPLC-LC/MS(high performance liquid chromatography-liquid chromatography/mass spectrometry，高效液相層析-質譜聯用)對所獲得的化合物進行確認。層析柱：YMC-TriartC18、150-4.6mm、5μm，洗提液：MeOH(均勻溶劑)，流速：1.0mL/分鐘，執行時間：15分鐘，柱溫：45℃，檢測：UV(215nm)、電灑電離質譜(ESI-MS)。
HPLC-LC/MS，Rt 11.3分鐘，ESI-MS(M+H)計算值533.5、測量值534.6，1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 4.87(1H,q),2.81(2H,d),2.26(3H,s),2.23(1H,m),1.98(2H,t),1.93(2H,d),1.80(2H,m),1.50(4H,m),1.37(6H,m),1.27(32H,m),1.13(2H,s),0.87(6H,dd),0.64(2H,dd),0.55(1H,m),-0.34(1H,dd)
[實施例2~9、參考例1~4]
和實施例1同樣地合成下述陽離子性脂質2~13。
[實施例2]1-甲基吡咯啶-3-羧酸1-(2-辛基環丙基)十七烷-8-酯(1-(2-octylcyclopropyl)heptadecan-8-yl 1-methylpyrrolidine-3-carboxylate)(陽離子性脂質2)
HPLC-LC/MS，Rt 11.0min，ESI-MS(M+H)計算值519.5、測量值520.6，1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 4.85(1H,ddd),3.03(1H,t),2.87(1H,t),2.64(1H,dd),2.59(1H,dd),2.47(1H,d),2.35(3H,s),2.09(2h,ddd),1.50(4H,m),1.36-1.25(37H,m),1.12(3H,m),0.87(6H,m),0.62(2H,dd),0.55(1H,m),-0.34(1H,dd)
[實施例3]1-乙基吡咯啶-4-羧酸1-(2-辛基環丙基)十七烷-8-酯(1-(2-octylcyclopropyl)heptadecan-8-yl 1-ethylpiperidine-4-carboxylate)(陽離子性脂質3)
HPLC-LC/MS，Rt 12.1min，ESI-MS(M+H)計算值547.5、測量值548.6，1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 4.88(1H,ddd),2.90(2H,d),2.49(2H,dd),2.27(1H,m),1.98(4H,m),1.78(2H,m),1.49(4H,m),1.36-1.25(37H,m),1.12(6H,m),0.87(6H,m),0.62(2H,dd),0.55(1H,m),-0.34(1H,dd)
[實施例4]1-甲基氮呾-3-羧酸1-(2-辛基環丙基)十七烷-8-酯(1-(2-octylcyclopropyl)heptadecan-8-yl 1-methylazetidine-3-carboxylate)(陽離子性脂質4)
HPLC-LC/MS，Rt 9.65min，ESI-MS(M+H)計算值505.5、測量值506.5，1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 4.88(1H,d),3.56(2H,m),3.26(3H,m),2.31(3H,s),1.76(1H,m),1.51(4H,m),1.36-1.25(36H,m),1.12(3H,m),0.87(6H,m),0.62(2H,dd),0.55(1H,m),-0.34(1H,dd)
[實施例5]1-甲基哌啶-4-羧酸1-(2-辛基環丙基)十五烷-8-酯(1-(2-octylcyclopropyl)pentadecan-8-yl 1-methylpiperidine-4-carboxylate)(陽離子性脂質5)
HPLC-LC/MS，Rt 11.5min，ESI-MS(M+H)計算值505.5、測量值506.7，1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 4.87(1H,d),2.81(2H,d),2.33(3H,s),2.25(1H,m),2.01(2H,ddd),1.90(2H,dd),1.79(2H,ddd),1.72(1H,m),1.50(4H,m),1.36-1.25(32H,m),1.12(3H,m),0.87(6H,m), 0.62(2H,dd),0.55(1H,m),-0.34(1H,dd)
[實施例6]1-甲基哌啶-4-羧酸1-(2-辛基環丙基)十六烷-8-酯(1-(2-octylcyclopropyl)hexadecan-8-yl 1-methylpiperidine-4-carboxylate)(陽離子性脂質6)
HPLC-LC/MS，Rt 13.1min，ESI-MS(M+H)計算值519.5、測量值520.6，1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 4.87(1H,d),2.81(2H,d),2.33(3H,s),2.25(1H,m),2.01(2H,ddd),1.90(2H,dd),1.79(2H,ddd),1.72(1H,m),1.50(4H,m),1.36-1.25(34H,m),1.12(3H,m),0.87(6H,m),0.62(2H,dd),0.55(1H,m),-0.34(1H,dd)
[實施例7]1-甲基哌啶-4-羧酸1-(2-辛基環丙基)十八烷-8-酯(1-(2-octylcyclopropyl)octadecan-8-yl 1-methylpiperidine-4-carboxylate)(陽離子性脂質7)
HPLC-LC/MS，Rt 17.1min，ESI-MS(M+H)計算值547.5、測量值548.5，1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 4.87(1H,d),2.81(2H,d),2.33(3H,s),2.25(1H,m),2.01(2H,ddd),1.90(2H,dd),1.79(2H,ddd),1.72(1H,m),1.50(4H,m),1.36-1.25(38H,m),1.12(3H,m),0.87(6H,m),0.62(2H,dd),0.55(1H,m),-0.34(1H,dd)
[實施例8]1-甲基哌啶-4-羧酸1-(2-辛基環丙基)二十烷-8-酯 (1-(2-octylcyclopropyl)icosan-8-yl 1-methylpiperidine-4-carboxylate)(陽離子性脂質8)
HPLC-LC/MS，Rt 22.6min，ESI-MS(M+H)計算值575.5、測量值576.5，1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 4.87(1H,d),2.81(2H,d),2.33(3H,s),2.25(1H,m),2.01(2H,ddd),1.90(2H,dd),1.79(2H,ddd),1.72(1H,m),1.50(4H,m),1.36-1.25(42H,m),1.12(3H,m),0.87(6H,m),0.62(2H,dd),0.55(1H,m),-0.34(1H,dd)
[實施例9]1-乙基吡咯啶-3-羧酸1-(2-辛基環丙基)十七碳-8-酯(1-(2-octylcyclopropyl)heptadecan-8-yl 1-ethylpyrrolidine-3-carboxylate)(陽離子性脂質9)
HPLC-LC/MS，Rt 11.9min，ESI-MS(M+H)計算值533.5、測量值534.6，1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 4.86(1H,ddd),3.00(2H,m),2.73(1H,dd),2.54(2H,dd),2.47(2H,ddd),2.08(2H,m),1.50(5H,m),1.36-1.25(36H,m),1.12(6H,m),0.87(6H,m),0.62(2H,dd),0.55(1H,m),-0.34(1H,dd)
[參考例1]3-(二甲基胺基)丙酸1-(2-辛基環丙基)十七烷-8-酯(1-(2-octylcyclopropyl)heptadecan-8-yl 3-(dimethylamino)propanoate)(陽離子性脂質10)
HPLC-LC/MS，Rt 10.4min，ESI-MS(M+H)計算值507.5、測量值508.6，1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 4.88(1H,q),2.61(2H,dd),2.45(2H,dd),2.24(6H,s),1.51(4H,m),1.34(6H,m),1.27(32H,m),1.13(2H,m),0.88(6H,m),0.64(2H,m),0.56(1H,dd),-0.34(1H,dd)
[參考例2]4-(二甲基胺基)丁酸1-(2-辛基環丙基)十七烷-8-酯(1-(2-octylcyclopropyl)heptadecan-8-yl 4-(dimethylamino)butanoate)(陽離子性脂質11)
HPLC-LC/MS，Rt 10.5min，ESI-MS(M+H)計算值521.5、測量值522.6，1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 4.87(1H,q),2.31(4H,m),2.21(6H,s),2.17(1H,s),1.80(2H,m),1.61(1H,s),1.50(2H,d),1.37(6H,m),1.27(32H,m),1.14(2H,m),0.87(6H,dd),0.64(2H,dd),0.55(1H,m),-0.34(1H,dd)
[參考例3]3-(二甲基胺基)-2-甲基丙酸1-(2-辛基環丙基)十七烷-8-酯(1-(2-octylcyclopropyl)heptadecan-8-yl 3-(dimethylamino)-2-methylpropanoate)(陽離子性脂質12)
HPLC-LC/MS，Rt 12.5min，ESI-MS(M+H)計算值521.5、測量值522.6，1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 4.87(1H,q),2.66(2H,t),2.22(6H,s),1.51(4H,m),1.36-1.27(38H,m),1.15(6H,m),0.88(6H,dd),0.64(2H,dd),0.55(1H,m),-0.34(1H,dd)
[參考例4]3-(哌啶-1-基)丙酸1-(2-辛基環丙基)十七烷-8-酯(1-(2-octylcyclopropyl)heptadecan-8-yl 3-(piperidin-1-yl)propanoate)(陽離子性脂質13)
HPLC-LC/MS，Rt 14.1min，ESI-MS(M+H)計算值547.5、測量值548.6，1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 4.87(1H,q),3.59(2H,m),2.66(2H,t),2.48(2H,t),2.39(2H,m),1.58(4H,m),1.49(4H,m),1.43-1.27(38H,m),1.13(4H,m),0.88(6H,dd),0.64(2H,dd),0.55(1H,m),-0.34(1H,dd)
[參考例5]2-(二甲基胺基)-N-[1-(2-辛基環丙基)十七烷-8-基]乙醯胺(以下，稱為“陽離子性脂質14”)的合成
依照下述合成流程3或4，而合成陽離子性脂質14。
[化43]合成流程3
第1步驟：
向將油酸(75.0g，265.5mmol)溶解到二氯甲烷(531.0mL)而成的溶液中，添加WSC(101.8g，531.05mmol)、三乙基胺(53.74g，531.05mmol)、N,O-二甲基羥基胺鹽酸鹽(51.8g，531.05mmol)。在室溫下攪拌到次日後，添加水，將有機層分液。將有機層利用水清洗5次後，利用1M氫氧化鈉水溶液清洗1次，並利用無水硫酸鎂將其乾燥。藉由過濾將乾燥劑去除，將濾液在減壓下濃縮。對於所獲得的粗產物1(88.92g)，不進行純化而用於下一步驟。
第2步驟：
將二乙基鋅(764.9mL，764.9mmol[1M溶液])溶解到二氯甲烷(1416.5mL)中，並冷卻到0℃。向該溶液中緩慢地滴加TFA(87.2g，764.9mmol)。因為已升溫，所以再次冷卻到0℃後添加二碘甲烷(204.9g，764.9mmol)，並在0℃的狀態下攪拌30分鐘。向該溶液中添加粗產物 1(83.0g，255.0mmol)，升溫到室溫並攪拌1小時。在確認反應結束後，利用氯化銨(300mL)使反應淬滅。將分液所獲得的有機層利用無水硫酸鎂進行乾燥。藉由過濾將乾燥劑去除，將濾液在減壓下濃縮。藉由矽膠柱層析法進行純化，而獲得化合物2(73.0g)。
第3步驟：
將化合物2(17.0g，50.07mmol)溶解到THF(100mL)中，在氮氣環境下且室溫下滴加1M的溴化壬基鎂(100mL，100mmol)。攪拌1小時，確認反應結束後添加充分量的氯化銨水溶液而使反應淬滅。對反應溶液進行水洗，將有機層利用無水硫酸鎂進行乾燥。藉由過濾將乾燥劑去除，將濾液在減壓下濃縮。藉由矽膠柱層析法進行純化，而獲得化合物3(11.7g)。
第4步驟：
向將所獲得的化合物3(11.0g，27.0mmol)溶解到乙醇(108mL)而成的溶液中，添加羥基胺鹽酸鹽(2.4g，35.1mmol)、吡啶(18.0mL)，在室溫下攪拌一晚。將反應溶液濃縮，利用醋酸乙酯進行萃取，並水洗，將有機層利用無水硫酸鎂進行乾燥。藉由矽膠柱層析法進行純化，而獲得化合物4(10.8g)。
第5步驟：
將所獲得的化合物4(10.0g，23.7mmol)溶解到THF(237mL)中，並冷卻到0℃。向該溶液中添加氫化鋁鋰(0.9g，23.7mmol)，加熱回流1小時。在確認反應結束後，向反應體系中依序緩慢地添加水(0.9mL)、15%氫氧化鈉水溶液(0.9mL)、水(2.7mL)而使反應淬滅。對該溶液進行矽藻土過濾，將濾液在減壓下濃縮。藉由矽膠柱層析法進行純化，而獲得化合物5(5.5g)。
第6步驟：
向將所獲得的化合物(0.5g，1.23mmol)溶解到二氯甲烷(4.9mL) 而成的溶液中，添加WSC(0.47g，2.45mmol)、三乙基胺(0.25g，2.45mmol)、N,N-二甲基甘胺酸(0.25g，2.45mmol)。在室溫下攪拌到次日後，添加水，將有機層分液。將有機層利用水清洗5次後，利用1N氫氧化鈉水溶液清洗1次，並利用無水硫酸鎂將其乾燥。藉由過濾將乾燥劑去除，將濾液在減壓下濃縮。藉由矽膠柱層析法進行純化，而獲得下述式(20)所表示的陽離子性脂質14(0.4g，0.8mmol)。
HPLC-LC/MS，Rt 6.91分鐘，ESI-MS(M+H)計算值492.5、測量值493.6，1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 6.84(1H,d),3.88(1H,dd),2.93(2H,s),2.29(6H,s),1.64(1H,m),1.49(2H,m),1.27(39H,m),0.89(2H,m),0.88(6H,m),0.64(2H,m),0.56(1H,dd),-0.34(1H,dd)
[參考例6~13]
和參考例5同樣地，依照所述合成流程3或4合成下述的陽離子性脂質15~22。
[參考例6]3-(二甲基胺基)-N-[1-(2-辛基環丙基)十七烷-8-基]丙醯胺(3-(dimethylamino)-N-[1-(2-octylcyclopropyl)heptadecan-8-yl]propanamide)(陽離子性脂質15)
HPLC-LC/MS，Rt 7.10min，ESI-MS(M+H)計算值506.5、測量值 507.5，1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 6.84(1H,d),3.88(1H,dd),2.93(2H,s),2.29(6H,s),1.64(1H,m),1.49(2H,m),1.27(41H,m),0.89(2H,m),0.88(6H,m),0.64(2H,m),0.56(1H,dd),-0.34(1H,dd)
[參考例7]4-(二甲基胺基)-N-[1-(2-辛基環丙基)十七烷-8-基]丁醯胺(4-(dimethylamino)-N-[1-(2-octylcyclopropyl)heptadecan-8-yl]butanamide)(陽離子性脂質16)
HPLC-LC/MS，Rt 7.20min，ESI-MS(M+H)計算值520.5、測量值521.5，1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 6.06(1H,d),3.88(1H,dd),2.28(4H,m),2.21(6H,s),1.78(2H,q),1.64(4H,s),1.27(40H,m),0.88(6H,m),0.64(2H,m),0.56(1H,dd),-0.34(1H,dd)
[參考例8]2-(二甲基胺基)-N-[(20Z,23Z)-二十七碳-20,23-二烯-10-基]乙醯胺(2-(dimethylamino)-N-[(20Z,23Z)-heptacosa-20,23-dien-10-yl]acetamide)(陽離子性脂質17)
HPLC-LC/MS，Rt 6.50min，ESI-MS(M+H)計算值476.5、測量值477.5，1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 6.84(1H,d),5.35(4H,m),3.88(1H,dd),2.93(2H,s),2.77(2H,t),2.29(6H,s),2.17(2H,s),2.05(4H,m),1.63(4H,m),1.36(3H,t),1.25(25H,m),0.88(6H,dd)
[參考例9]2-(二甲基胺基)-N-[(18Z)-二十七碳-18-烯-10-基]乙醯胺(2-(dimethylamino)-N-[(18Z)-heptacos-18-en-10-yl]acetamide)(陽離子性脂質18)
HPLC-LC/MS，Rt 7.98min，ESI-MS(M+H)計算值478.5、測量值479.5，1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 6.83(1H,d),5.36(2H,m),3.88(2H,m),3.74(1H,t),2.93(2H,s),2.28(2H,m),2.17(2H,s),2.00(3H,m),1.85(1H,m),1.50(3H,m),1.25(37H,m),0.86(6H,dd)
[參考例10]1-甲基-N-[1-(2-辛基環丙基)十七烷-8-基]吡咯啶-2-甲醯胺(1-methyl-N-[1-(2-octylcyclopropyl)heptadecan-8-yl]pyrrolidine-2-carboxamide)(陽離子性脂質19)
HPLC-LC/MS，Rt 8.14min，ESI-MS(M+H)計算值518.5、測量值519.7，1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 6.99(1H,d),3.85(1H,m),3.07(1H,m),2.85(1H,m),2.35(3H,s),2.33(2H,m),2.23(1H,m),1.76(4H,m),1.47(4H,m),1.26-1.25(35H,m),1.12(3H,m),0.87(6H,m),0.62(2H,dd),0.55(1H,m),-0.34(1H,dd)
[參考例11]1-乙基-N-[1-(2-辛基環丙基)十七烷-8-基]吡咯啶-2-甲醯胺 (1-ethyl-N-[1-(2-octylcyclopropyl)heptadecan-8-yl]pyrrolidine-2-carboxamide)(陽離子性脂質20)
HPLC-LC/MS，Rt 8.95min，ESI-MS(M+H)計算值532.5、測量值533.6，1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 7.17(1H,d),3.84(1H,m),3.16(1H,t),3.00(1H,dd),2.64(1H,ddd),2.47(1H,ddd),2.27(1H,ddd),2.15(1H,ddd),1.76(4H,m),1.47(2H,m),1.26-1.25(37H,m),1.12(3H,m),1.06(4H,m),0.87(6H,m),0.62(2H,dd),0.55(1H,m),-0.34(1H,dd)
[參考例12]1-甲基-N-[1-(2-辛基環丙基)十七烷-8-基]哌啶-2-甲醯胺(1-methyl-N-[1-(2-octylcyclopropyl)heptadecan-8-yl]piperidine-2-carboxamide)(陽離子性脂質21)
HPLC-LC/MS，Rt 7.43min，ESI-MS(M+H)計算值532.5、測量值533.6，1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 6.28(1H,d),3.88(1H,m),2.89(1H,d),2.42(1H,dd),2.21(3H,s),2.00(2H,m),1.72(2H,m),1.49(4H,m),1.26-1.25(40H,m),1.12(3H,m),0.87(6H,m),0.62(2H,dd),0.55(1H,m),-0.34(1H,dd)
[參考例13]1-乙基-N-[1-(2-辛基環丙基)十七烷-8-基]哌啶-2-甲醯 胺(1-ethyl-N-[1-(2-octylcyclopropyl)heptadecan-8-yl]piperidine-2-carboxamide)(陽離子性脂質22)
HPLC-LC/MS，Rt 8.03min，ESI-MS(M+H)計算值546.6、測量值547.6，1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 3.88(1H,m),2.89(1H,m),2.85(1H,m),2.48(3H,s),1.89(1H,m),1.76(2H,m),1.63(2H,m),1.47(2H,m),1.26-1.25(41H,m),1.12(6H,m),0.87(6H,m),0.62(2H,dd),0.55(1H,m),-0.34(1H,dd)
<組合物之製備(1)>
[實施例10]
使用實施例1之陽離子性脂質1而製備組合物。作為核酸，使用如下核酸，該核酸係包含有義股5'-GGAfUfCAfUfCfUfCAAGfUfCfUfUAfCT * T-3'(序列編號1，T：DNA，fU、fC=2'-Fluoro RNA，*=硫代磷酸酯連結子)、反義股5'-GfUAAGAfCfUfUGAGAfUGAfUfCfCT* T-3'(序列編號2，T：DNA，fU、fC=2'-Fluoro RNA，*=硫代磷酸酯連結子)的鹼基序列且抑制Factor VII(凝血因數VII)基因的表現的siRNA，而且是經過退火的核酸(基因設計(GeneDesign)股份有限公司，以下有稱為“Factor VII siRNA”的情況)。
將Factor VII siRNA利用25mM醋酸鈉(pH值4.0)溶解為216μg/mL，而製成siRNA稀釋液。另外，將陽離子性脂質1、DSPC(日本精化股份有限公司)、膽固醇(日本精化股份有限公司)、 MPEG2000-DMG(日油股份有限公司)以60/8.5/30/1.5(莫耳比)的比例以總脂質濃度成為15mM的方式溶解到乙醇中，而製成脂質溶液。將siRNA稀釋液和脂質溶液分別以2.4mL/分鐘、1.29mL/分鐘的流速進行混合，進而將25mM醋酸鈉(pH值4.0)以9.25mL/分鐘的流速進行混合，由此獲得脂質複合物水溶液。將所獲得的脂質複合物水溶液供於使用透析膜(商品名“Float-A-Lyzer G2”，美國斯百全(SPECTRUM)公司，50K MWCO)的透析，將外液置換成磷酸緩衝液(PBS，pH值7.5)。透析後，進行濃縮及過濾滅菌，而獲得實施例10的組合物。
[實施例11]
作為陽離子性脂質，使用實施例4之陽離子性脂質4代替陽離子性脂質1，除此以外，和實施例10同樣地獲得實施例11之組合物。
[實施例12]
作為陽離子性脂質，使用實施例5之陽離子性脂質5代替陽離子性脂質1，除此以外，和實施例10同樣地獲得實施例12之組合物。
[實施例13]
作為陽離子性脂質，使用實施例6之陽離子性脂質6代替陽離子性脂質1，除此以外，和實施例10同樣地獲得實施例13之組合物。
[實施例14]
作為陽離子性脂質，使用實施例7之陽離子性脂質7代替陽離子性脂質1，除此以外，和實施例10同樣地獲得實施例14之組合物。
[實施例15]
作為陽離子性脂質，使用實施例8之陽離子性脂質8代替陽離子性脂質1，除此以外，和實施例10同樣地獲得實施例15之組合物。
<組合物的分析(1)>
針對實施例10~15之組合物，測定siRNA向脂質複合物中的封入率。
具體而言，利用無RNA酶水(RNase Free Water)稀釋組合物，使用Quant-iT RiboGreen RNA試劑(美國英傑(Invitrogen)公司)進行測定，將所測得的siRNA濃度(A)設為脂質複合物外液中所存在的siRNA。
另外，將組合物利用1% Triton X-100進行稀釋並測定，將所測得的siRNA濃度(B)設為脂質組合物中的總siRNA濃度。接著，藉由下式(F1)算出核酸的封入率。
封入率(%)=100-(A/B)×100(F1)
另外，利用粒徑測定裝置(商品名“Zetasizer Nano ZS”，英國瑪律文(Malvern)公司製造)測定複合物的平均粒徑。
表1中表示siRNA的封入率及脂質複合物之平均粒徑(Z-平均)。
<組合物之製備(2)>
[實施例16]
使用實施例2之陽離子性脂質2而製備組合物。作為核酸，使用和實施例10之組合物中所使用的核酸相同的Factor VII siRNA。
將Factor VII siRNA利用25mM醋酸鈉(pH值4.0)溶解為538μg/mL，而製成siRNA稀釋液。另外，將陽離子性脂質2、DSPC(日本精化股份有限公司)、膽固醇(日本精化股份有限公司)、MPEG2000-DMG(日油股份有限公司)以60/8/30/2(莫耳比)的比例以總 脂質濃度成為30mM的方式溶解到乙醇中，而製成脂質溶液。將siRNA稀釋液和脂質溶液分別以2.0mL/分鐘、1.08mL/分鐘的流速進行混合，進而將25mM醋酸鈉(pH值4.0)以18.45mL/分鐘的流速進行混合，由此獲得脂質複合物水溶液。將所獲得的脂質複合物水溶液供於使用透析膜(商品名“Float-A-Lyzer G2”，美國斯百全(SPECTRUM)公司，50K MWCO)的透析，將外液置換成磷酸緩衝液(PBS，pH值7.5)。透析後，進行濃縮及過濾滅菌，而獲得實施例16的組合物。
[實施例17]
作為陽離子性脂質，使用實施例3之陽離子性脂質3代替陽離子性脂質2，除此以外，和實施例16同樣地獲得實施例17之組合物。
[參考例14]
作為陽離子性脂質，使用參考例10之陽離子性脂質19代替陽離子性脂質2，除此以外，和實施例16同樣地獲得參考例14之組合物。
[參考例15]
作為陽離子性脂質，使用參考例12之陽離子性脂質21代替陽離子性脂質2，除此以外，和實施例16同樣地獲得實施例15之組合物。
<組合物的分析(2)>
和實施例10之組合物同樣地，針對實施例16、17及參考例14、15之組合物，測定siRNA向脂質複合物中的封入率及平均粒徑。
表2中表示siRNA的封入率及脂質複合物之平均粒徑(Z-平均)。
<組合物之製備(3)>
[實施例18]
使用實施例1之陽離子性脂質1而製備組合物。作為核酸，使用和實施例10之組合物中所使用的核酸相同的Factor VII siRNA。
將Factor VII siRNA利用25mM醋酸鈉(pH值4.0)溶解為400μg/mL，而製成siRNA稀釋液。另外，將陽離子性脂質1、DSPC(日本精化股份有限公司)、膽固醇(日本精化股份有限公司)、MPEG2000-DMG(日油股份有限公司)以60/8/30/2(莫耳比)的比例以總脂質濃度成為12mM的方式溶解到乙醇中，而製成脂質溶液。將siRNA稀釋液和脂質溶液分別以2.0mL/分鐘、2.0mL/分鐘的流速進行混合，進而將25mM醋酸鈉(pH值4.0)以12.0mL/分鐘的流速進行混合，由此獲得脂質複合物水溶液。將所獲得的脂質複合物水溶液供於使用透析膜(商品名“Float-A-Lyzer G2”，美國斯百全(SPECTRUM)公司，50K MWCO)的透析，將外液置換成磷酸緩衝液(PBS，pH值7.5)。透析後，進行濃縮及過濾滅菌，而獲得實施例18之組合物。
[實施例19]
作為陽離子性脂質，使用實施例9之陽離子性脂質9代替陽離子性脂質1，除此以外，和實施例18同樣地獲得實施例19之組合物。
[參考例16]
作為陽離子性脂質，使用參考例1之陽離子性脂質10代替陽離子性脂質1，除此以外，和實施例18同樣地獲得參考例16之組合物。
[參考例17]
作為陽離子性脂質，使用參考例2之陽離子性脂質11代替陽離子性脂質1，除此以外，和實施例18同樣地獲得參考例17之組合物。
[參考例18]
作為陽離子性脂質，使用參考例3之陽離子性脂質12代替陽離子性脂質1，除此以外，和實施例18同樣地獲得參考例18之組合物。
[參考例19]
作為陽離子性脂質，使用參考例4之陽離子性脂質13代替陽離子性脂質1，除此以外，和實施例18同樣地獲得參考例19之組合物。
[參考例20]
作為陽離子性脂質，使用參考例5的陽離子性脂質14代替陽離子性脂質1，除此以外，和實施例18同樣地獲得參考例20的組合物。
[參考例21]
作為陽離子性脂質，使用參考例8之陽離子性脂質17代替陽離子性脂質1，除此以外，和實施例18同樣地獲得參考例21之組合物。
[參考例22]
作為陽離子性脂質，使用參考例9之陽離子性脂質18代替陽離子性脂質1，除此以外，和實施例18同樣地獲得參考例22之組合物。
[參考例23]
作為陽離子性脂質，使用參考例11之陽離子性脂質20代替陽離子性脂質1，除此以外，和實施例18同樣地獲得參考例23之組合物。
[參考例24]
作為陽離子性脂質，使用參考例13之陽離子性脂質22代替陽離子性脂質1，除此以外，和實施例18同樣地獲得參考例24之組合物。
<組合物的分析(3)>
和實施例10的組合物同樣地，針對實施例18、19及參考例16~24的組合物，測定siRNA向脂質複合物中的封入率及平均粒徑。
表3中表示siRNA的封入率及脂質複合物之平均粒徑(Z-平均)。
<組合物之製備(4)>
[實施例20]
使用實施例1之陽離子性脂質1而製備組合物。作為核酸，使用和實施例10之組合物中所使用的核酸相同的Factor VII siRNA。
和實施例18同樣地獲得實施例20之組合物。
[比較例1]
作為陽離子性脂質，依照專利文獻2中所記載之方法合成專利文獻2中所記載的下述式(29)所表示的(化學名)(以下，稱為ML-5)，使用其代替陽離子性脂質1，除此以外，和實施例20同樣地獲得比較例1之組合物。
<組合物之分析(4)>
和實施例10的組合物同樣地，針對實施例20及比較例1的組合物，測定siRNA向脂質複合物中的封入率及粒徑。另外，將所述組合物在密閉的玻璃小瓶中在4℃下保存，同樣地測定保存後第1個月、第2個月、第4個月、第6個月、第9個月、及第12個月的siRNA的封入率及粒 徑。
表4、表5及圖1中分別表示實施例20及比較例1的siRNA向脂質複合物中的封入率及平均粒徑(Z-平均)的隨時間經過而產生之變化。
顯示出和比較例1之組合物相比，實施例20的組合物在保存期間粒徑的增大更加得到抑制。
<組合物之製備(5)>
[實施例21]
使用實施例1之陽離子性脂質1而製備組合物。作為核酸，使用和實施例10之組合物中所使用的核酸相同的Factor VII siRNA。
將Factor VII siRNA利用25mM醋酸鈉(pH值4.0)溶解為108μg/mL，而製成siRNA稀釋液。另外，將陽離子性脂質1、DSPC(日本精化股份有限公司)、膽固醇(日本精化股份有限公司)、MPEG2000-DMG(日油股份有限公司)以60/8/30/2(莫耳比)的比例以總脂質濃度成為6mM的方式溶解到乙醇中，而製成脂質溶液。將siRNA稀釋液和脂質溶液分別以3.36mL/分鐘、1.81mL/分鐘的流速進行混合，進而將25mM醋酸鈉(pH值4.0)以12.95mL/分鐘的流速進行混合， 由此獲得脂質複合物水溶液。將所獲得的脂質複合物水溶液供於使用透析膜(商品名“Float-A-Lyzer G2”，美國斯百全(SPECTRUM)公司，50K MWCO)的透析，將外液置換成磷酸緩衝液(PBS，pH值7.5)。透析後，進行濃縮及過濾滅菌，而獲得實施例21的組合物。
[實施例22]
作為陽離子性脂質，使用實施例2之陽離子性脂質2代替陽離子性脂質1，除此以外，和實施例21同樣地獲得實施例22之組合物。
[實施例23]
作為陽離子性脂質，使用實施例4之陽離子性脂質4代替陽離子性脂質1，除此以外，和實施例21同樣地獲得實施例23之組合物。
[實施例24]
作為陽離子性脂質，使用實施例5之陽離子性脂質5代替陽離子性脂質1，除此以外，和實施例21同樣地獲得實施例24之組合物。
[實施例25]
作為陽離子性脂質，使用實施例8之陽離子性脂質8代替陽離子性脂質1，除此以外，和實施例21同樣地獲得實施例25之組合物。
[比較例2]
作為陽離子性脂質，使用所述的ML-5代替陽離子性脂質1，除此以外，和實施例21同樣地獲得比較例2之組合物。
<組合物之分析(5)>
和實施例10之組合物同樣地，針對實施例21~25及比較例2的組合物，測定平均粒徑。另外，將所述組合物在密閉的玻璃小瓶中在4℃下保存，測定2周後的平均粒徑。
表6及圖2中表示組合物的平均粒徑(體積平均)的隨時間經過而產生的變化。
[表6]
顯示出和比較例2之組合物相比，實施例21~25之組合物在保存期間粒徑的增大更加得到抑制。
<組合物之活性評價(1)>
[試驗例1]
將實施例10~15之組合物以封入到脂質複合物中的Factor VII siRNA濃度成為10μg/mL的方式利用PBS進行稀釋。將各組合物以10mL/kg的投予體積尾靜脈內投予C57/BL6小鼠(5周齡，雄性)，從投予起24小時後在麻醉下實施采血及肝臟的採集。藉由離心將血漿從血液分離，利用市售的套組(商品名“BIOPHEN FVII”，HYPHEN BioMed公司)對血漿中的Factor VII蛋白質濃度進行定量。作為陰性對照，對投予了PBS的組群進行相同處理。
將PBS投予組的Factor VII蛋白質濃度設為100%，以相對值算出組合物投予組的Factor VII蛋白質濃度。將結果示於表7。
顯示出實施例10~15之組合物的Factor VII蛋白質的表現抑制效果較高。即，顯示出利用本發明之陽離子性脂質會將核酸高效率地釋放到細胞質中。
<組合物之活性評價(2)>
[試驗例2]
將實施例16、17及參考例14、15之組合物以封入到脂質複合物中的Factor VII siRNA濃度成為30μg/mL的方式利用PBS進行稀釋。將各組合物以10mL/kg的投予體積尾靜脈內投予C57/BL6小鼠(5周齡，雄性)，從投予起24小時後在麻醉下實施采血及肝臟的採集。利用離心將血漿從血液分離，利用市售的套組(商品名“BIOPHEN FVII”，HYPHEN BioMed公司)對血漿中的Factor VII蛋白質濃度進行定量。作為陰性對照，對投予了PBS的組群進行相同處理。
將PBS投予組的Factor VII蛋白質濃度設為100%，以相對值算出組合物投予組的Factor VII蛋白質濃度。將結果示於表8。
顯示出實施例16、17之組合物的Factor VII蛋白質的表現抑制效果高於參考例14、15之組合物。即，顯示出利用本發明之陽離子性脂質會將核酸高效率地釋放到細胞質中。
<組合物的活性評價(3)>
[試驗例3]
和試驗例2同樣地對C57/BL6小鼠(5周齡，雄性)投予實施例18、19及參考例16~24之組合物，算出從投予起24小時後的血漿中的Factor VII蛋白質濃度的相對值及殘存在肝臟中的陽離子性脂質量之相對值。將結果示於表9。
顯示出實施例18之組合物的Factor VII蛋白質的表現抑制效果高於參考例16~24的任一組合物。即，顯示出利用本發明之陽離子性脂質會將核酸高效率地釋放到細胞質中。
由以上結果得知，根據本發明，可提供可將核酸高效率地釋放到細胞質中的陽離子性脂質。
另外，根據本發明，可提供可解決在將脂質複合物保存一定期間時粒徑增大這一物理穩定性課題之陽離子性脂質。

Claims (7)

  1. 一種陽離子性脂質，其特徵在於：其係下述通式(3)所表示之化合物或其藥學上所容許之鹽， 所述通式(3)中，L表示碳數7~12之烷基或碳數7~12之烯基，R表示碳數1~2之烷基；n1及n2分別獨立為1~3之整數。
  2. 如請求項1之陽離子性脂質，其中通式(3)中，n1及n2分別獨立為1~2之整數。
  3. 如請求項1之陽離子性脂質，其係選自以下化合物(4)~(11)中之化合物或其藥學上所容許之鹽，
  4. 如請求項2之陽離子性脂質，其係選自以下化合物(4)~(11)中之化合物或其藥學上所容許之鹽，
  5. 如請求項1至4項中任一項之陽離子性脂質，其係下述式(4)所表示之化合物或其藥學上所容許之鹽，
  6. 如請求項1至4項中任一項之陽離子性脂質，其係下述式(5)所表示之化合物或其藥學上所容許之鹽，
  7. 如請求項1至4項中任一項之陽離子性脂質，其係下述式(10)所表示之化合物或其藥學上所容許之鹽，
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Families Citing this family (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP6389477B2 (ja) 2014-01-09 2018-09-12 エーザイ・アール・アンド・ディー・マネジメント株式会社 カチオン性脂質
JP6592458B2 (ja) * 2014-12-26 2019-10-16 エーザイ・アール・アンド・ディー・マネジメント株式会社 カチオン性脂質
US10501416B2 (en) * 2016-06-24 2019-12-10 Eisai R&D Management Co., Ltd. Cationic lipid
EP3733647B1 (en) * 2017-12-27 2022-06-15 Eisai R&D Management Co., Ltd. Cationic lipid
KR102589314B1 (ko) 2017-12-28 2023-10-13 다케다 야쿠힝 고교 가부시키가이샤 양이온성 지질
US10526603B1 (en) 2018-10-26 2020-01-07 Eisai R&D Management Co., Ltd. Double-stranded ribonucleic acid capable of suppressing expression of complement C5
JP7352382B2 (ja) * 2019-05-30 2023-09-28 キヤノン株式会社 画像処理装置、画像処理方法及びプログラム
CN114867484A (zh) * 2019-12-26 2022-08-05 卫材R&D管理有限公司 含有抑制补体c5的表达的双链核糖核酸的药物组合物
JPWO2022168884A1 (zh) 2021-02-04 2022-08-11

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20110256175A1 (en) * 2008-10-09 2011-10-20 The University Of British Columbia Amino lipids and methods for the delivery of nucleic acids
WO2013059496A1 (en) * 2011-10-18 2013-04-25 Dicerna Pharmaceuticals, Inc. Amine cationic lipids and uses thereof
CN103167866A (zh) * 2010-09-20 2013-06-19 默沙东公司 用于寡核苷酸递送的新型低分子量阳离子脂质
WO2013158579A1 (en) * 2012-04-19 2013-10-24 Merck Sharp & Dohme Corp. Novel diester and triester based low molecular weight, biodegradable cationic lipids for oligonucleotide delivery

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2692655A1 (en) 2007-07-18 2009-01-22 Novartis Ag Synergistic combinations of vr-1 antagonists and cox-2 inhibitors
KR20230098713A (ko) 2009-06-10 2023-07-04 알닐람 파마슈티칼스 인코포레이티드 향상된 지질 조성물
JP5678267B2 (ja) 2010-08-19 2015-02-25 株式会社タカゾノテクノロジー 蒸気滅菌器および蒸気滅菌器の制御方法
US20130059496A1 (en) 2011-09-06 2013-03-07 Honeywell International Inc. Low bfs composite and process of making the same
JP6389477B2 (ja) 2014-01-09 2018-09-12 エーザイ・アール・アンド・ディー・マネジメント株式会社 カチオン性脂質

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20110256175A1 (en) * 2008-10-09 2011-10-20 The University Of British Columbia Amino lipids and methods for the delivery of nucleic acids
CN103167866A (zh) * 2010-09-20 2013-06-19 默沙东公司 用于寡核苷酸递送的新型低分子量阳离子脂质
WO2013059496A1 (en) * 2011-10-18 2013-04-25 Dicerna Pharmaceuticals, Inc. Amine cationic lipids and uses thereof
WO2013158579A1 (en) * 2012-04-19 2013-10-24 Merck Sharp & Dohme Corp. Novel diester and triester based low molecular weight, biodegradable cationic lipids for oligonucleotide delivery

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