JP6389477B2 - カチオン性脂質 - Google Patents
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Description
本願は、2014年1月9日に、米国に出願された仮出願61/925,267号に基づき優先権を主張し、その内容をここに援用する。
これら核酸医薬の中でも、特にsiRNAが注目を集めている。siRNAは、19〜23塩基対からなる二本鎖RNAであり、RNA干渉(RNA interference;RNAi)と呼ばれる配列特異的な遺伝子発現抑制を誘導する。
特許文献1に記載の脂質製剤は、微粒子に核酸等高分子が封入されている核酸−脂質粒子組成物であり、核酸を細胞に導入できることが示されている。
一実施形態において、本発明は、下記一般式(1)で表される化合物又はその薬剤学的に許容される塩であるカチオン性脂質を提供する。カチオン性脂質は、前記塩の水和物又は前記塩の溶媒和物であってもよい。
上記一般式(1)中、R1が、
前記一般式(1’)で表される陽イオンと対になって、本発明のカチオン性脂質が含有し得る陰イオンとしては、薬剤学的に許容されるものであれば特に限定されず、例えば、塩化物イオン、臭化物イオン、硝酸イオン、硫酸イオン、リン酸イオン等の無機イオン;酢酸イオン、シュウ酸イオン、マレイン酸イオン、フマル酸イオン、クエン酸イオン、安息香酸イオン、メタンスルホン酸イオン等の有機酸イオン等が挙げられる。
本発明のカチオン性脂質の製造方法について説明する。下記式(12)および(13)に、カチオン性脂質の合成スキームの一実施形態を示す。
一般式中、aおよびbはそれぞれ0以上かつaとbの和が17以下となる整数を表す。
シクロプロピルを含む新規カチオン性脂質(1−10)の合成は、例えば合成スキーム2に従って合成できる。不飽和のワインレブアミド(1−6)をシモンズスミスシクロプロパン化によりシクロプロピルを含むワインレブアミド(1−7)が得られる。グリニャール試薬を加えることでケトン(1−8)が得られる。さらに水素化リチウムアルミニウムで還元することでアルコール(1−9)が得られる。これをカルボン酸と縮合することでエステル(1−10)が得られる。
一実施形態において、本発明は、(I)本発明のカチオン性脂質と、(II)中性脂質、ポリエチレングリコール修飾脂質、及びステロールからなる群から選ばれる少なくとも一種の脂質と、(III)核酸と、を含有する組成物を提供する。
以下、本発明の組成物の好ましい実施形態について説明するが、この実施形態は、発明の趣旨をより良く理解させるために具体的に説明するものであり、特に指定のない限り、本発明を限定するものではない。
本実施形態の組成物は、核酸を0.01重量%〜50重量%含有することが好ましく、0.1重量%〜30重量%含有することがより好ましく、1重量%〜10重量%含有することが特に好ましい。
一実施形態において、本発明は、(I)本発明のカチオン性脂質と、(II)中性脂質、ポリエチレングリコール修飾脂質、及びステロールからなる群から選ばれる少なくとも一種の脂質とを含有する極性有機溶媒含有水溶液と、(III)核酸を含有する水溶液とを混合して混合液を得る工程(a)と、前記混合液中の極性有機溶媒の含有量を減少させる工程(b)とを備える、組成物の製造方法を提供する。
以下、本発明の組成物の製造方法の好ましい実施形態について説明するが、この実施形態は、発明の趣旨をより良く理解させるために具体的に説明するものであり、特に指定のない限り、本発明を限定するものではない。
[実施例1] 1−(2−オクチルシクロプロピル)ヘプタデカン-8-イル1−メチルピペリジン−4−カルボキシレート (1−(2−octylcyclopropyl)heptadecan−8−yl 1−methylpiperidine−4−carboxylate)(以下、「カチオン性脂質1」という。)の合成
前記合成スキーム1または2に従って、カチオン性脂質1を合成した。
第1工程:
オレイン酸(75.0g、265.5mmol)を塩化メチレン(531.0mL)に溶かした溶液中に、WSC(101.8g、531.05mmol)、トリエチルアミン(53.74g、531.05mmol)、N,O−ジメチルヒドロキシルアミン塩酸塩(51.8g、531.05mmol)を添加した。室温で翌日まで撹拌した後、水を加え、有機層を分液した。有機層を水で5回洗浄後、1M水酸化ナトリウム水溶液で1度洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。乾燥剤をろ過で除き、ろ液を減圧下濃縮した。得られた組成生物1(88.92g)は精製を行わずに次のステップへ用いた。
第2工程:
ジエチル亜鉛(764.9mL、764.9mmol[1M溶液])を塩化メチレン(1416.5mL)に溶かし、0℃まで冷却した。その溶液にTFA(87.2g、764.9mmol)をゆっくり滴下した。昇温があったため再度0℃まで冷却した後にジヨードメタン(204.9g、764.9mmol)を加え、0℃のまま30分撹拌した。この溶液に粗生成物1(83.0g、255.0mmol)を加え、室温まで昇温し1時間撹拌した。反応終了を確認した後に反応を塩化アンモニウム(300mL)でクエンチした。分液して得られた有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥した。乾燥剤をろ過で除き、ろ液を減圧下濃縮した。シリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製し、化合物2(73.0g)を得た。
第3工程:
化合物2(17.0g、50.07mmol)をTHF(100mL)に溶かし、1Mのノニルマグネシウムブロミド(100mL、100mmol)を窒素雰囲気下室温で滴下した。1時間撹拌し、反応の終了を確認した後に十分量の塩化アンモニウム水溶液を加えて反応をクエンチした。反応溶液を水洗し、有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥した。乾燥剤をろ過で除き、ろ液を減圧下濃縮した。シリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製し、化合物3(11.7g)を得た。
第4工程:
得られた化合物3(25.0g、61.5mmol)をテトラヒドロフラン(123mL)に溶かした溶液中に、水素化リチウムアルミニウム(2.3 g、61.47mmol)を添加し、一時間加熱還流した。反応終了を確認した後に、反応系中に水(2.3mL)、15%水酸化ナトリウム水溶液(2.3mL)、水(6.9mL)の順にゆっくり加え反応をクエンチした。この溶液をセライトろ過し、ろ液を減圧下濃縮した。シリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製し、化合物4を得た。
第5工程:
得られた化合物(0.5g、1.22mmol)を塩化メチレン(4.9mL)に溶かした溶液中に、WSC(0.47g、2.45mmol)、ジメチルアミノピリジン(0.03g、0.24mmol)、1−メチルピペリジン−4−カルボン酸(0.35g、2.45mmol)を添加した。室温で翌日まで撹拌した後、水を加え、有機層を分液した。有機層を水で5回洗浄後、1N水酸化ナトリウム水溶液で1度洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。乾燥剤をろ過で除き、ろ液を減圧下濃縮した。シリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製し、下記式(4)で表されるカチオン性脂質1 (0.2g、0.37mmol)を得た。
実施例1と同様にして、下記のカチオン性脂質2〜13を合成した。
HPLC−LC/MS, Rt 12.1 min, ESI−MS(M+H) cacld 547.5, found 548.6, 1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ4.88(1H,ddd), 2.90(2H,d), 2.49(2H,dd), 2.27(1H,m), 1.98(4H,m), 1.78(2H,m), 1.49(4H,m), 1.36−1.25(37H,m), 1.12(6H,m), 0.87(6H,m), 0.62(2H,dd), 0.55(1H,m), −0.34(1H,dd)
HPLC−LC/MS, Rt 9.65 min, ESI−MS(M+H) cacld 505.5, found 506.5, 1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ4.88(1H,d), 3.56(2H,m), 3.26(3H,m), 2.31(3H,s), 1.76(1H,m), 1.51(4H,m), 1.36−1.25(36H,m), 1.12(3H,m), 0.87(6H,m), 0.62(2H,dd), 0.55(1H,m), −0.34(1H,dd)
HPLC−LC/MS, Rt 11.5 min, ESI−MS(M+H) cacld 505.5, found 506.7, 1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ4.87(1H,d), 2.81(2H,d), 2.33(3H,s), 2.25(1H,m), 2.01(2H,ddd), 1.90(2H,dd), 1.79(2H,ddd), 1.72(1H,m), 1.50(4H,m), 1.36−1.25(32H,m), 1.12(3H,m), 0.87(6H,m), 0.62(2H,dd), 0.55(1H,m), −0.34(1H,dd)
HPLC−LC/MS, Rt 13.1 min, ESI−MS(M+H) cacld 519.5, found 520.6, 1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ4.87(1H,d), 2.81(2H,d), 2.33(3H,s), 2.25(1H,m), 2.01(2H,ddd), 1.90(2H,dd), 1.79(2H,ddd), 1.72(1H,m), 1.50(4H,m), 1.36−1.25(34H,m), 1.12(3H,m), 0.87(6H,m), 0.62(2H,dd), 0.55(1H,m), −0.34(1H,dd)
HPLC−LC/MS, Rt 17.1 min, ESI−MS(M+H) cacld 547.5, found 548.5, 1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ4.87(1H,d), 2.81(2H,d), 2.33(3H,s), 2.25(1H,m), 2.01(2H,ddd), 1.90(2H,dd), 1.79(2H,ddd), 1.72(1H,m), 1.50(4H,m), 1.36−1.25(38H,m), 1.12(3H,m), 0.87(6H,m), 0.62(2H,dd), 0.55(1H,m), −0.34(1H,dd)
HPLC−LC/MS, Rt 22.6 min, ESI−MS(M+H) cacld 575.5, found 576.5, 1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ4.87(1H,d), 2.81(2H,d), 2.33(3H,s), 2.25(1H,m), 2.01(2H,ddd), 1.90(2H,dd), 1.79(2H,ddd), 1.72(1H,m), 1.50(4H,m), 1.36−1.25(42H,m), 1.12(3H,m), 0.87(6H,m), 0.62(2H,dd), 0.55(1H,m), −0.34(1H,dd)
HPLC−LC/MS, Rt 11.9 min, ESI−MS(M+H) cacld 533.5, found 534.6, 1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ4.86(1H,ddd), 3.00(2H,m), 2.73(1H,dd), 2.54(2H,dd), 2.47(2H,ddd), 2.08(2H,m), 1.50(5H,m), 1.36−1.25(36H,m), 1.12(6H,m), 0.87(6H,m), 0.62(2H,dd), 0.55(1H,m), −0.34(1H,dd)
HPLC−LC/MS, Rt 10.4 min, ESI−MS(M+H) cacld 507.5, found 508.6, 1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ4.88(1H,q), 2.61(2H,dd), 2.45(2H,dd), 2.24(6H,s), 1.51(4H,m), 1.34(6H,m), 1.27(32H,m), 1.13(2H,m), 0.88(6H,m), 0.64(2H,m), 0.56(1H,dd), −0.34(1H,dd)
HPLC−LC/MS, Rt 10.5 min, ESI−MS(M+H) cacld 521.5, found 522.6, 1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ4.87(1H,q), 2.31(4H,m), 2.21(6H,s), 2.17(1H,s), 1.80(2H,m), 1.61(1H,s), 1.50(2H,d), 1.37(6H,m), 1.27(32H,m), 1.14(2H,m), 0.87(6H,dd), 0.64(2H,dd), 0.55(1H,m), −0.34(1H,dd)
HPLC−LC/MS, Rt 12.5 min, ESI−MS(M+H) cacld 521.5, found 522.6, 1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ4.87(1H,q), 2.66(2H,t), 2.22(6H,s), 1.51(4H,m), 1.36−1.27(38H,m), 1.15(6H,m), 0.88(6H,dd), 0.64(2H,dd), 0.55(1H,m), −0.34(1H,dd)
HPLC−LC/MS, Rt 14.1 min, ESI−MS(M+H) cacld 547.5, found 548.6, 1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ4.87(1H,q), 3.59(2H,m), 2.66(2H,t), 2.48(2H,t), 2.39(2H,m), 1.58(4H,m), 1.49(4H,m), 1.43−1.27(38H,m), 1.13(4H,m), 0.88(6H,dd), 0.64(2H,dd), 0.55(1H,m), −0.34(1H,dd)
下記合成スキーム3または4に従って、カチオン性脂質14を合成した。
オレイン酸(75.0g、265.5mmol)を塩化メチレン(531.0mL)に溶かした溶液中に、WSC(101.8g、531.05mmol)、トリエチルアミン(53.74g、531.05mmol)、N,O−ジメチルヒドロキシルアミン塩酸塩(51.8g、531.05mmol)を添加した。室温で翌日まで撹拌した後、水を加え、有機層を分液した。有機層を水で5回洗浄後、1M水酸化ナトリウム水溶液で1度洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。乾燥剤をろ過で除き、ろ液を減圧下濃縮した。得られた粗生成物1(88.92g)は精製を行わずに次のステップへ用いた。
ジエチル亜鉛(764.9mL、764.9mmol [1M溶液])を塩化メチレン(1416.5mL)に溶かし、0℃まで冷却した。その溶液にTFA(87.2g、764.9mmol)をゆっくり滴下した。昇温があったため再度0℃まで冷却した後にジヨードメタン(204.9g、764.9mmol)を加え、0℃のまま30分撹拌した。この溶液に粗生成物1(83.0g、255.0mmol)を加え、室温まで昇温し1時間撹拌した。反応終了を確認した後に反応を塩化アンモニウム(300mL)でクエンチした。分液して得られた有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥した。乾燥剤をろ過で除き、ろ液を減圧下濃縮した。シリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製し、化合物2(73.0g)を得た。
化合物2(17.0g、50.07mmol)をTHF(100mL)に溶かし、1Mのノニルマグネシウムブロミド(100mL,100mmol)を窒素雰囲気下室温で滴下した。1時間撹拌し、反応の終了を確認した後に十分量の塩化アンモニウム水溶液を加えて反応をクエンチした。反応溶液を水洗し、有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥した。乾燥剤をろ過で除き、ろ液を減圧下濃縮した。シリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製し、化合物3(11.7g)を得た。
得られた化合物3(11.0g、27.0mmol)をエタノール(108mL)に溶かした溶液中に、ヒドロキシアミン塩酸塩(2.4g、35.1mmol)、ピリジン(18.0mL)を添加し、室温で一晩撹拌した。反応溶液を濃縮し、酢酸エチルで抽出、水洗し、有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥した。シリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製し、化合物4(10.8g)を得た。
得られた化合物4(10.0g、23.7mmol)をTHF(237mL)に溶かし、0℃に冷却した。その溶液に水素化リチウムアルミニウム(0.9g、23.7mmol)を添加し、1時間加熱還流した。反応終了を確認した後に、反応系中に水(0.9mL)、15%水酸化ナトリウム水溶液(0.9mL)、水(2.7mL)の順にゆっくり加え反応をクエンチした。この溶液をセライトろ過し、ろ液を減圧下濃縮した。シリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製し、化合物5(5.5g)を得た。
得られた化合物(0.5g、1.23mmol)を塩化メチレン(4.9mL)に溶かした溶液中に、WSC(0.47g、2.45mmol)、トリエチルアミン(0.25g、2.45mmol)、N、N−ジメチルグリシン(0.25g、2.45mmol)を添加した。室温で翌日まで撹拌した後、水を加え、有機層を分液した。有機層を水で5回洗浄後、1N水酸化ナトリウム水溶液で1度洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。乾燥剤をろ過で除き、ろ液を減圧下濃縮した。シリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製し、下記式(20)で表されるカチオン性脂質14(0.4g、0.8mmol)を得た。
参考例5と同様にして、前記合成スキーム3または4に従って下記のカチオン性脂質15〜22を合成した。
[実施例10]
実施例1のカチオン性脂質1を用いて組成物を調製した。核酸としては、センス鎖5’−GGAfUfCAfUfCfUfCAAGfUfCfUfUAfCT*T−3’(配列番号1、T:DNA、fU,fC=2’−Fluoro RNA、*=Phosphorothioate linkage)、アンチセンス鎖5’−GfUAAGAfCfUfUGAGAfUGAfUfCfCT*T−3’(配列番号2、T:DNA、fU,fC=2’−Fluoro RNA、*=Phosphorothioate linkage)の塩基配列からなる、Factor VII(血液凝固第VII因子)遺伝子の発現を抑制するsiRNAであり、アニーリング済みのもの(株式会社ジーンデザイン、以下「Factor VII siRNA」という場合がある。)を使用した。
カチオン性脂質として、カチオン性脂質1の代わりに実施例4のカチオン性脂質4を用いた以外は実施例10と同様にして、実施例11の組成物を得た。
カチオン性脂質として、カチオン性脂質1の代わりに実施例5のカチオン性脂質5を用いた以外は実施例10と同様にして、実施例12の組成物を得た。
カチオン性脂質として、カチオン性脂質1の代わりに実施例6のカチオン性脂質6を用いた以外は実施例10と同様にして、実施例13の組成物を得た。
カチオン性脂質として、カチオン性脂質1の代わりに実施例7のカチオン性脂質7を用いた以外は実施例10と同様にして、実施例14の組成物を得た。
カチオン性脂質として、カチオン性脂質1の代わりに実施例8のカチオン性脂質8を用いた以外は実施例10と同様にして、実施例15の組成物を得た。
実施例10〜15の組成物について、脂質複合体へのsiRNAの封入率を測定した。
また、組成物を1% Triton X−100で希釈して測定したsiRNA濃度(B)を脂質組成物中の全siRNA濃度とした。続いて、次式(F1)により、核酸の封入率を算出した。
封入率(%)=100−(A/B)×100 (F1)
[実施例16]
実施例2のカチオン性脂質2を用いて組成物を調製した。核酸としては、実施例10の組成物で用いたものと同じFactor VII siRNAを使用した。
カチオン性脂質として、カチオン性脂質2の代わりに実施例3のカチオン性脂質3を用いた以外は実施例16と同様にして、実施例17の組成物を得た。
カチオン性脂質として、カチオン性脂質2の代わりに参考例10のカチオン性脂質19を用いた以外は実施例16と同様にして、参考例14の組成物を得た。
カチオン性脂質として、カチオン性脂質2の代わりに参考例12のカチオン性脂質21を用いた以外は実施例16と同様にして、実施例15の組成物を得た。
実施例10の組成物と同様にして、実施例16、17及び参考例14、15の組成物について、脂質複合体へのsiRNAの封入率、及び平均粒子径を測定した。
[実施例18]
実施例1のカチオン性脂質1を用いて組成物を調製した。核酸としては、実施例10の組成物で用いたものと同じFactor VII siRNAを使用した。
カチオン性脂質として、カチオン性脂質1の代わりに実施例9のカチオン性脂質9を用いた以外は実施例18と同様にして、実施例19の組成物を得た。
カチオン性脂質として、カチオン性脂質1の代わりに参考例1のカチオン性脂質10を用いた以外は実施例18と同様にして、参考例16の組成物を得た。
カチオン性脂質として、カチオン性脂質1の代わりに参考例2のカチオン性脂質11を用いた以外は実施例18と同様にして、参考例17の組成物を得た。
カチオン性脂質として、カチオン性脂質1の代わりに参考例3のカチオン性脂質12を用いた以外は実施例18と同様にして、参考例18の組成物を得た。
カチオン性脂質として、カチオン性脂質1の代わりに参考例4のカチオン性脂質13を用いた以外は実施例18と同様にして、参考例19の組成物を得た。
カチオン性脂質として、カチオン性脂質1の代わりに参考例5のカチオン性脂質14を用いた以外は実施例18と同様にして、参考例20の組成物を得た。
カチオン性脂質として、カチオン性脂質1の代わりに参考例8のカチオン性脂質17を用いた以外は実施例18と同様にして、参考例21の組成物を得た。
カチオン性脂質として、カチオン性脂質1の代わりに参考例9のカチオン性脂質18を用いた以外は実施例18と同様にして、参考例22の組成物を得た。
カチオン性脂質として、カチオン性脂質1の代わりに参考例11のカチオン性脂質20を用いた以外は実施例18と同様にして、参考例23の組成物を得た。
カチオン性脂質として、カチオン性脂質1の代わりに参考例13のカチオン性脂質22を用いた以外は実施例18と同様にして、参考例24の組成物を得た。
実施例10の組成物と同様にして、実施例18、19及び参考例16〜24の組成物について、脂質複合体へのsiRNAの封入率、及び平均粒子径を測定した。
[実施例20]
実施例1のカチオン性脂質1を用いて組成物を調製した。核酸としては、実施例10の組成物で用いたものと同じFactor VII siRNAを使用した。
カチオン性脂質として、カチオン性脂質1の代わりに特許文献2に記載された下記式(29)で表される(化学名)(以下、ML−5という。)を、特許文献2に記載された方法にしたがって合成して用いた以外は実施例20と同様にして、比較例1の組成物を得た。
実施例10の組成物と同様にして、実施例20及び比較例1の組成物について、脂質複合体へのsiRNAの封入率、及び粒子径を測定した。また、前記組成物を密閉したバイアルにて4℃で保管し、保管後1ヵ月目、2ヶ月目、4ヶ月目、6ヶ月目、9ヶ月目、及び12ヶ月目のsiRNAの封入率、及び粒子径を同様にして測定した。
[実施例21]
実施例1のカチオン性脂質1を用いて組成物を調製した。核酸としては、実施例10の組成物で用いたものと同じFactor VII siRNAを使用した。
カチオン性脂質として、カチオン性脂質1の代わりに実施例2のカチオン性脂質2を用いた以外は実施例21と同様にして、実施例22の組成物を得た。
カチオン性脂質として、カチオン性脂質1の代わりに実施例4のカチオン性脂質4を用いた以外は実施例21と同様にして、実施例23の組成物を得た。
カチオン性脂質として、カチオン性脂質1の代わりに実施例5のカチオン性脂質5を用いた以外は実施例21と同様にして、実施例24の組成物を得た。
カチオン性脂質として、カチオン性脂質1の代わりに実施例8のカチオン性脂質8を用いた以外は実施例21と同様にして、実施例25の組成物を得た。
カチオン性脂質として、カチオン性脂質1の代わりに前記のML−5を用いた以外は実施例21と同様にして、比較例2の組成物を得た。
実施例10の組成物と同様にして、実施例21〜25及び比較例2の組成物について、平均粒子径を測定した。また、前記組成物を密閉したバイアルにて4℃で保管し、2週間後の平均粒子径を測定した。
[試験例1]
実施例10〜15の組成物を、脂質複合体に封入されたFactor VII siRNA濃度が10μg/mLとなるようにPBSで希釈した。各組成物を、C57/BL6マウス(5週齢、オス)に10mL/kgの投与容量で尾静脈内投与し、投与から24時間後に麻酔下で採血及び肝臓の採取を実施した。遠心により血液から血漿を分離し、血漿中のFactor VIIタンパク質濃度を市販のキット(商品名「BIOPHEN FVII」、HYPHEN BioMed社)により定量した。陰性対照として、PBSを投与した群に同様の処理を行った。
[試験例2]
実施例16、17及び参考例14、15の組成物を、脂質複合体に封入されたFactor VII siRNA濃度が30μg/mLとなるようにPBSで希釈した。各組成物を、C57/BL6マウス(5週齢、オス)に10mL/kgの投与容量で尾静脈内投与し、投与から24時間後に麻酔下で採血及び肝臓の採取を実施した。遠心により血液から血漿を分離し、血漿中のFactor VIIタンパク質濃度を市販のキット(商品名「BIOPHEN FVII」、HYPHEN BioMed社)により定量した。陰性対照として、PBSを投与した群に同様の処理を行った。
[試験例3]
実施例18、19及び参考例16〜24の組成物を試験例2と同様にしてC57/BL6マウス(5週齢、オス)に投与し、投与から24時間後の血漿中のFactor VIIタンパク質濃度の相対値及び肝臓に残存していたカチオン性脂質量の相対値を算出した。結果を表9に示す。
また、本発明によれば、脂質複合体を一定期間保管した際に、粒子径が増大するという物理的安定性の課題を解決することを可能とするカチオン性脂質を提供することができる。
Claims (6)
- 請求項1において、一般式(3)中、n1及びn2がそれぞれ独立に1〜2の整数であることを特徴とするカチオン性脂質。
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