TW201726599A - 陽離子性脂質 - Google Patents

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nucleic acid
alkenyl
cationic lipid
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漥山剛之
江良公宏
直井智幸
八木香機
細江慎太郎
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協和醱酵麒麟有限公司
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Abstract

本發明提供一種容易地將核酸導入至例如細胞內等之下述式(A)所表示之陽離子性脂質等、含有該陽離子性脂質及核酸之組合物、及使用含有該陽離子性脂質及核酸之組合物而將核酸導入至細胞內之方法等。□(式中，R1為烯基等，R2為烯基等，R3及R4為烷基，或者一併形成伸烷基，或者R3與R5一併形成伸烷基，R5為氫原子等，或者與R3一併形成伸烷基，X1為伸烷基，X2為單鍵或伸烷基)

Description

陽離子性脂質
本發明係關於一種將核酸容易地導入至例如細胞內等之陽離子性脂質、含有該陽離子性脂質之組合物等。
陽離子性脂質係具有含有一個或複數個烴基之脂質親和性區域、與含有至少一個帶正電之極性頭基(polar headgroup)之親水性區域的親水親油性分子。陽離子性脂質與核酸等巨大分子形成總電荷帶正電之複合物，藉此使核酸等巨大分子變得容易通過細胞之原生質膜而進入細胞質，因此陽離子性脂質有用。可於活體外(in vitro)及活體內(in vivo)進行之該過程作為轉染(transfection)而為人所知。
專利文獻1及2中揭示有對於在活體內將核酸傳遞至細胞內有利，及對於用於適合治療疾病之核酸-脂質粒子組合物有利的陽離子性脂質及含有該脂質之脂質粒子。專利文獻1中揭示有例如，
2,2-二亞麻基-4-(2-二甲基胺基乙基)-[1,3]-二氧雜環戊烷(2,2- dilinoleyl-4-(2-dimethylaminoethyl)-[1,3]-dioxolane；DLin-KC2-DMA)等，專利文獻2中揭示有例如，
4-(二甲基胺基)丁酸(6Z,9Z,28Z,31Z)-三十七碳-6,9,28,31-四烯-19-酯((6Z,9Z,28Z,31Z)-heptatriaconta-6,9,28,31-tetraen-19-yl 4-(dimethylamino)butanoate；DLin-MC3-DMA)等陽離子性脂質。
[先前技術文獻] [專利文獻]
[專利文獻1]
國際公開第2010/042877號說明書
[專利文獻2]
國際公開第2010/054401號說明書
本發明之目的在於提供一種將核酸容易地導入至例如細胞內等之陽離子性脂質、含有該陽離子性脂質之組合物等。
本發明係關於以下之(1)~(22)。
(1)一種陽離子性脂質，其以下述式(A)、式(B)、或式(C)表示，[化3]
(式中，R1為碳數8~24之直鏈狀或支鏈狀之烷基、烯基或炔基，R2為碳數8~24之直鏈狀或支鏈狀之烷基、烯基或炔基、烷氧基乙基、烷氧基丙基、烯氧基乙基、烯氧基丙基、炔氧基乙基或炔氧基丙基，R3及R4相同或不同，為碳數1~3之烷基，或者一併形成碳數2~8之伸烷基，或者R3與R5一併形成碳數2~8之伸烷基，R5為氫原子、碳數1~6之烷基、碳數3~6之烯基、胺基、單烷基胺基、羥基、烷氧基、胺甲醯基、單烷基胺甲醯基、二烷基胺甲醯基或者經相同或不同之1~3個胺基、單烷基胺基、羥基、烷氧基、胺甲醯基、單烷基胺甲醯基或二烷基胺甲醯基取代的碳數1~6之烷基或碳數3~6之烯基，或者與R3一併形成碳數2~8之伸烷基，X1為碳數1~6之伸烷基，X2為單鍵或碳數1~6之伸烷基，其中，X1與X2之碳數之和為7以下，且於R5為氫原子之情形時，X2為單鍵，於R5與R3一併形成碳數2~6之伸烷基之情形時，X2為單鍵，或者亞甲基或伸乙基)
(式中，R6為碳數8~24之直鏈狀或支鏈狀之烷基、烯基或炔基，R7為碳數8~24之直鏈狀或支鏈狀之烷基、烯基或炔基、烷氧基乙基、烷氧基丙基、烯氧基乙基、烯氧基丙基、炔氧基乙基或炔氧基丙基)
(式中，R8為碳數8~24之直鏈狀或支鏈狀之烷基、烯基或炔基，R9為碳數8~24之直鏈狀或支鏈狀之烷基、烯基或炔基、烷氧基乙基、烷氧基丙基、烯氧基乙基、烯氧基丙基、炔氧基乙基或炔氧基丙基，X3為碳數1~3之伸烷基，R10為氫原子或碳數1~3之烷基)。
(2)如上述(1)之陽離子性脂質，其中R1、R2、R6、R7、R8及R9分別為十四烷基、十六烷基、(Z)-十四碳-9-烯基、(Z)-十六碳-9-烯基、(Z)-十八碳-6-烯基、(Z)-十八碳-9-烯基、(E)-十八碳-9-烯基、(Z)-十八碳-11-烯基、(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基、(9Z,12Z,15Z)-十八碳-9,12,15-三烯基、(Z)-二十碳-11-烯基、(11Z,14Z)-二十碳-11,14-二烯基或(Z)-二十二碳-13-烯基。
(3)如上述(1)之陽離子性脂質，其中R1、R2、R6、R7、R8及R9分別為(Z)-十八碳-9-烯基、(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基或(11Z,14Z)-二十碳-11,14-二烯基。
(4)如上述(1)至(3)中任一項之陽離子性脂質，其中X1為碳數1~3之伸烷基，X2為單鍵或亞甲基。
(5)如上述(1)至(4)中任一項之陽離子性脂質，其中X3為亞甲基或伸乙基。
(6)如上述(1)至(5)中任一項之陽離子性脂質，其中R3及R4相同或不同，為甲基或乙基，或者一併形成伸正戊基或伸正己基。
(7)如上述(1)至(6)中任一項之陽離子性脂質，其中R3及R5一併形成伸正丙基或伸正丁基，R4為甲基或乙基。
(8)如上述(1)至(7)中任一項之陽離子性脂質，其中R5及R10分別為氫原子或甲基。
(9)一種組合物，其含有如上述(1)至(8)中任一項之陽離子性脂質及核酸。
(10)如上述(9)之組合物，其中該陽離子性脂質與該核酸形成複合物，或者於該陽離子性脂質中組合有中性脂質及/或高分子者與該核酸形成複合物。
(11)如上述(9)之組合物，其中該陽離子性脂質與該核酸形成複合物，或者於該陽離子性脂質中組合有中性脂質及/或高分子者與該核酸形成複合物，且該組合物含有封入該複合物之脂質膜。
(12)如上述(9)至(11)中任一項之組合物，其中核酸係具有利用RNA干擾(RNAi)而抑制標靶基因表現之作用的核酸。
(13)如上述(12)之組合物，其中標靶基因係於肝臟、肺、腎臟或脾臟中表現之基因。
(14)一種將核酸導入至細胞內之方法，其使用如上述(9)至(13)中任一項之組合物。
(15)如上述(14)之方法，其中細胞係位於哺乳類之肝臟、肺、腎臟或 脾臟之細胞。
(16)如上述(14)或(15)之方法，其中導入至細胞內之方法係藉由該組合物之靜脈內投予而導入至細胞內的方法。
(17)一種與肝臟、肺、腎臟或脾臟相關之疾病之治療方法，其包括將如上述(13)之組合物投予哺乳動物之步驟。
(18)如上述(17)之方法，其中投予之方法為靜脈內投予。
(19)一種醫藥，其係包含如上述(12)之組合物的用於治療疾病之醫藥。
(20)如上述(19)之醫藥，其係靜脈內投予用。
(21)一種與肝臟、肺、腎臟或脾臟相關之疾病之治療劑，其包含如上述(13)之組合物。
(22)如上述(21)之與肝臟、肺、腎臟或脾臟相關之疾病之治療劑，其係靜脈內投予用。
藉由將本發明之含有陽離子性脂質及核酸之組合物投予哺乳類等，可將該核酸容易地導入至例如細胞內等。
圖1表示將實施例49中所獲得之製劑(使用化合物A-1、3~5各者之製劑)及比較例1中所獲得之製劑(使用DLin-KC2-DMA及化合物XI-1~3各者之製劑)導入源自人類肝癌之細胞株HepG2細胞內之後的標靶基因之mRNA之表現率。縱軸表示將陰性對照設為1之情形時之標靶基因之mRNA的表現率，橫軸表示核酸濃度(nM)、所使用之陽離子性脂質之化合物編號。
圖2表示將實施例49中所獲得之製劑(使用化合物A-1~5各者之製劑)及比較例1中所獲得之製劑(使用DLin-KC2-MDA之製劑)分別對小鼠投予相當於siRNA為0.3mg/kg之量48小時後的血清膽固醇之值。縱軸表示將生理食鹽水投予群設為100之情形時之血清膽固醇值之相對值。
圖3表示將實施例49中所獲得之製劑(使用化合物A-1~5各者之製劑)及比較例1中所獲得之製劑(使用DLin-KC2-MDA及化合物XI-1~3各者之製劑)分別對小鼠投予相當於siRNA為3mg/kg之量48小時後的血清膽固醇之值。縱軸表示將生理食鹽水投予群設為100之情形時之血清膽固醇值之相對值。
圖4表示將實施例50或51中所獲得之製劑(使用化合物A-6、A-1、A-7及A-8各者之製劑)分別對小鼠投予相當於siRNA為0.3mg/kg之量48小時後的血漿中因子VII蛋白質之濃度。縱軸表示將生理食鹽水投予群設為100之情形時之血漿中因子VII蛋白質之濃度之相對值。
圖5表示將實施例51中所獲得之製劑(使用化合物A-9~12、B-1、B-8及C-1各者之製劑)分別對小鼠投予相當於siRNA為0.3mg/kg之量48小時後的血漿中因子VII蛋白質之濃度。縱軸表示將生理食鹽水投予群設為100之情形時之血漿中因子VII蛋白質之濃度之相對值。
圖6表示將實施例51中所獲得之製劑(使用化合物A-5及A-13~21各者之製劑)分別對小鼠投予相當於siRNA為0.3mg/kg之量48小時後的血漿中因子VII蛋白質之濃度。縱軸表示將生理食鹽水投予群設為100之情形時之血漿中因子VII蛋白質之濃度之相對值。
圖7表示將實施例51中所獲得之製劑(使用化合物A-28~36各者之製劑)分別對小鼠投予相當於siRNA為0.3mg/kg之量投予48小時後的血漿中 因子VII蛋白質之濃度。縱軸表示將生理食鹽水投予群設為100之情形時之血漿中因子VII蛋白質之濃度之相對值。
圖8表示將實施例51中所獲得之製劑(使用化合物C-2~5各者之製劑)分別對小鼠投予相當於siRNA為0.3mg/kg之量投予48小時後的血漿中因子VII蛋白質之濃度。縱軸表示將生理食鹽水投予群設為100之情形時之血漿中因子VII蛋白質之濃度之相對值。
圖9表示將比較例2中所獲得之製劑(使用化合物XI-4~8各者之製劑)分別對小鼠投予相當於siRNA為0.3mg/kg之量投予48小時後的血漿中因子VII蛋白質之濃度。縱軸表示將生理食鹽水投予群設為100之情形時之血漿中因子VII蛋白質之濃度之相對值。
圖10表示將實施例52或53中所獲得之製劑(使用化合物A-1、A-6、A-7、A-10、A-12、B-8及C-1各者之製劑)分別對小鼠投予相當於siRNA為0.3或0.1mg/kg之量48小時後的血漿中因子VII蛋白質之濃度。縱軸表示將生理食鹽水投予群設為100之情形時之血漿中因子VII蛋白質之濃度之相對值。
圖11表示將實施例53中所獲得之製劑(使用化合物A-5及A-13~21各者之製劑)分別對小鼠投予相當於siRNA為0.3或0.03mg/kg之量48小時後的血漿中因子VII蛋白質之濃度。縱軸表示將生理食鹽水投予群設為100之情形時之血漿中因子VII蛋白質之濃度之相對值。
圖12表示將實施例53中所獲得之製劑(使用化合物A-28~36各者之製劑)分別對小鼠投予相當於siRNA為0.3或0.03mg/kg之量48小時後的血漿中因子VII蛋白質之濃度。縱軸表示將生理食鹽水投予群設為100之情形時之血漿中因子VII蛋白質之濃度之相對值。
圖13表示將實施例53中所獲得之製劑或者與實施例52或53同樣地獲得之製劑(使用化合物A-1、A-6、A-10及C-1~5各者之製劑)及比較例3中所獲得之製劑(使用化合物XI-9之製劑)分別對小鼠投予相當於siRNA為0.3或0.03mg/kg之量48小時後的血漿中因子VII蛋白質之濃度。縱軸表示將生理食鹽水投予群設為100之情形時之血漿中因子VII蛋白質之濃度之相對值。
圖14表示將實施例54中所獲得之製劑(使用化合物A-1、A-7及A-10各者之製劑)分別對小鼠投予相當於siRNA為0.3或0.1mg/kg之量48小時後的血漿中因子VII蛋白質之濃度。縱軸表示將生理食鹽水投予群設為100之情形時之血漿中因子VII蛋白質之濃度之相對值。
本發明之陽離子性脂質係下述式(A)、式(B)、或式(C)所表示者，
(式中，R1為碳數8~24之直鏈狀或支鏈狀之烷基、烯基或炔基，R2為碳數8~24之直鏈狀或支鏈狀之烷基、烯基或炔基、烷氧基乙基、烷氧基丙基、烯氧基乙基、烯氧基丙基、炔氧基乙基或炔氧基丙基，R3及R4相同或不同，為碳數1~3之烷基，或者一併形成碳數2~8之伸烷基，或者R3與R5一併形成碳數2~6之伸烷基，R5為氫原子、碳數1~6之烷基、碳數3~6之烯基、胺基、單烷基胺 基、羥基、烷氧基、胺甲醯基、單烷基胺甲醯基、二烷基胺甲醯基或者經相同或不同之1~3個胺基、單烷基胺基、羥基、烷氧基、胺甲醯基、單烷基胺甲醯基或二烷基胺甲醯基取代的碳數1~6之烷基或碳數3~6之烯基，或者與R3一併形成碳數2~8之伸烷基，X1為碳數1~6之伸烷基，X2為單鍵或碳數1~6之伸烷基，其中，X1與X2之碳數之和為7以下，且於R5為氫原子之情形時，X2為單鍵，於R5與R3一併形成碳數2~6之伸烷基之情形時，X2為單鍵，或者亞甲基或伸乙基)
(式中，R6為碳數8~24之直鏈狀或支鏈狀之烷基、烯基或炔基，R7為碳數8~24之直鏈狀或支鏈狀之烷基、烯基或炔基、烷氧基乙基、烷氧基丙基、烯氧基乙基、烯氧基丙基、炔氧基乙基或炔氧基丙基)
(式中，R8為碳數8~24之直鏈狀或支鏈狀之烷基、烯基或炔基，R9為碳數8~24之直鏈狀或支鏈狀之烷基、烯基或炔基、烷氧基乙基、烷氧基丙基、烯氧基乙基、烯氧基丙基、炔氧基乙基或炔氧基丙基， X3為碳數1~3之伸烷基，R10為氫原子或碳數1~3之烷基)。
以下，有時亦將式(A)所表示之化合物稱為化合物(A)。其他式編號之化合物亦同樣。
作為碳數8~24之直鏈狀或支鏈狀之烷基，例如可列舉：辛基、癸基、十二烷基、十三烷基、十四烷基、2,6,10-三甲基十一烷基、十五烷基、3,7,11-三甲基十二烷基、十六烷基、十七烷基、十八烷基、6,10,14-三甲基十五烷-2-基、十九烷基、2,6,10,14-四甲基十五烷基、二十烷基、3,7,11,15-四甲基十六烷基、二十一烷基、二十二烷基、二十三烷基、二十四烷基等。
作為碳數8~24之直鏈狀或支鏈狀之烯基，只要為含有1個以上雙鍵之碳數8~24之直鏈狀或支鏈狀之烯基即可，例如可列舉：(Z)-十四碳-9-烯基、(Z)-十六碳-9-烯基、(Z)-十八碳-6-烯基、(Z)-十八碳-9-烯基、(E)-十八碳-9-烯基、(Z)-十八碳-11-烯基、(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基、(9Z,12Z,15Z)-十八碳-9,12,15-三烯基、(Z)-二十碳-11-烯基、(11Z,14Z)-二十碳-11,14-二烯基、3,7,11-三甲基十二碳-2,6,10-三烯基、3,7,11,15-四甲基十六碳-2-烯基、(Z)-二十二碳-13-烯基等，較佳可列舉：(Z)-十六碳-9-烯基、(Z)-十八碳-6-烯基、(Z)-十八碳-9-烯基、(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基、(Z)-二十碳-11-烯基、(11Z,14Z)-二十碳-11,14-二烯基、(Z)-二十二碳-13-烯基等。
作為碳數8~24之直鏈狀或支鏈狀之炔基，只要為含有1個以上三鍵之碳數8~24之直鏈狀或支鏈狀之炔基即可，例如可列舉：十二碳-11-炔基、十四碳-6-炔基、十六碳-7-炔基、十六碳-5,7-二炔基、十八碳-9-炔基 等。
作為烷氧基乙基及烷氧基丙基中之烷基部分，例如可列舉上述碳數8~24之直鏈狀或支鏈狀之烷基之例示中所列舉之基等。
作為烯氧基乙基及烯氧基丙基中之烯基部分，例如可列舉上述碳數8~24之直鏈狀或支鏈狀之烯基之例示中所列舉之基等。
作為炔氧基乙基及炔氧基丙基中之炔基部分，例如可列舉上述碳數8~24之直鏈狀或支鏈狀之炔基之例示中所列舉之基等。
再者，R1及R2更佳為相同或不同之碳數8~24之直鏈狀或支鏈狀之烷基或烯基，進而較佳為相同或不同之碳數8~24之直鏈狀或支鏈狀之烯基，進而較佳為相同或不同之碳數8~24之直鏈狀之烯基。又，R1及R2更佳為相同，於此情形時，更佳為碳數12~24之直鏈狀或支鏈狀之烷基、烯基或炔基，進而較佳為碳數12~24之直鏈狀之烯基。
於R1及R2不同之情形時，R1為碳數16~24之直鏈狀或支鏈狀之烷基、烯基或炔基，且R2為碳數8~12之直鏈狀或支鏈狀之烷基、烯基或炔基之情況亦為本發明之較佳形態之一。於此情形時，更佳為R1為碳數16~24之直鏈狀之烯基，R2為碳數8~12之直鏈狀之烷基，最佳為R1為(Z)-十八碳-9-烯基或(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基，R2為辛基、癸基或十二烷基。又，於R1及R2不同之情形時，R1為碳數12~24之直鏈狀或支鏈狀之烷基、烯基或炔基，且R2為烷氧基乙基、烷氧基丙基、烯氧基乙基、烯氧基丙基、炔氧基乙基或炔氧基丙基之情況亦為本發明之較佳形態之一。於此情形時，更佳為R1為碳數16~24之直鏈狀之烯基，R2為烯氧基乙基，進而較佳為R1為(Z)-十八碳-9-烯基、(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基或(11Z,14Z)-二十碳-11,14-二烯基，R2為(Z)-十八碳-9-烯基氧基乙基、 (9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基氧基乙基或(11Z,14Z)-二十碳-11,14-二烯基氧基乙基，最佳為R1為(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基，R2為(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基氧基乙基。
於R1及/或R2為相同或不同之碳數8~24之直鏈狀或者支鏈狀之烷基、烯基之情形時，較佳為相同或不同之十四烷基、十六烷基、(Z)-十四碳-9-烯基、(Z)-十六碳-9-烯基、(Z)-十八碳-6-烯基、(Z)-十八碳-9-烯基、(E)-十八碳-9-烯基、(Z)-十八碳-11-烯基、(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基、(9Z,12Z,15Z)-十八碳-9,12,15-三烯基、(Z)-二十碳-11-烯基、(11Z,14Z)-二十碳-11,14-二烯基或(Z)-二十二碳-13-烯基，更佳為相同或不同之十六烷基、(Z)-十六碳-9-烯基、(Z)-十八碳-6-烯基、(Z)-十八碳-9-烯基、(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基、(Z)-二十碳-11-烯基或(11Z,14Z)-二十碳-11,14-二烯基，進而較佳為相同或不同之(Z)-十八碳-9-烯基、(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基或(11Z,14Z)-二十碳-11,14-二烯基，最佳為同為(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基。
R6及R7分別與R1及R2含義相同。其中，於R7為碳數16~24之直鏈狀或支鏈狀之烷基、烯基或炔基之情形時，R6及R7較佳為同為(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基。
R8及R9分別與R1及R2含義相同。其中，R8及R9較佳為同為碳數16~24之直鏈狀或支鏈狀之烷基、烯基或炔基，更佳為同為(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基。
作為R3及R4中之碳數1~3之烷基，例如可列舉甲基、乙基、丙基、異丙基及環丙基，較佳可列舉甲基及乙基，進而較佳可列舉甲基。
作為R3與R4一併形成之碳數2~8之伸烷基，例如可列舉伸乙基、伸 正丙基、伸正丁基、伸正戊基、伸正己基、伸正庚基、伸正辛基等，較佳可列舉伸正戊基、伸正己基、伸正庚基等，更佳可列舉伸正戊基、伸正己基等，進而較佳可列舉伸正己基。
再者，R3較佳為甲基或乙基，或者與R4一併形成碳數5~7之伸烷基，或者與R5一併形成碳數3~5之伸烷基，其中，於R3未與R4一併形成碳數5~7之伸烷基之情形時，R4較佳為甲基或乙基，更佳為甲基。進而，R3更佳為甲基，或者與R4一併形成伸正戊基或伸正己基，或者R3與R5一併形成伸乙基、伸正丙基，其中，於R3未與R4一併形成伸正戊基或伸正己基之情形時，R4更佳為甲基。
作為R5中之碳數1~6之烷基，例如可列舉：甲基、乙基、丙基、異丙基、環丙基、丁基、異丁基、第二丁基、第三丁基、環丁基、環丙基甲基、戊基、異戊基、第二戊基、新戊基、第三戊基、環戊基、己基、環己基等，較佳可列舉甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、第二丁基、第三丁基、戊基、異戊基、第二戊基、第三戊基、新戊基、己基等，進而較佳可列舉甲基、乙基、丙基等。
作為R5中之碳數3~6之烯基，例如可列舉：烯丙基、1-丙烯基、丁烯基、戊烯基、己烯基等，較佳可列舉烯丙基等。
作為R5中之單烷基胺基，只要為經1個例如碳數1~6之烷基(與上述含義相同)取代之胺基即可，例如可列舉甲基胺基、乙基胺基、丙基胺基、丁基胺基、戊基胺基、己基胺基等，較佳可列舉甲基胺基、乙基胺基等。
R5中之胺基及單烷基胺基可分別對氮原子上之孤電子對配位氫離子而形成銨基及單烷基銨基，胺基及單烷基胺基分別包含銨基及單烷基銨 基。
本發明中，對胺基及單烷基胺基之氮原子上之孤電子對配位氫離子而成之銨基及單烷基銨基可與製藥上可容許之陰離子形成鹽。
作為R5中之烷氧基，例如只要為經碳數1~6之烷基(與上述含義相同)取代之羥基即可，例如可列舉：甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、戊氧基、己氧基等，較佳可列舉甲氧基、乙氧基等。
作為R5中之單烷基胺甲醯基及二烷基胺甲醯基，可列舉分別經1個及相同或不同之2個例如碳數1~6之烷基(與上述含義相同)取代之胺甲醯基，更具體而言，可列舉：甲基胺甲醯基、乙基胺甲醯基、丙基胺甲醯基、丁基胺甲醯基、戊基胺甲醯基、己基胺甲醯基、二甲基胺甲醯基、二乙基胺甲醯基、乙基甲基胺甲醯基、甲基丙基胺甲醯基、丁基甲基胺甲醯基、甲基戊基胺甲醯基、己基甲基胺甲醯基等，較佳可列舉甲基胺甲醯基、乙基胺甲醯基、二甲基胺甲醯基等。
作為R5與R3一併形成之碳數2~6之伸烷基，例如可列舉伸乙基、伸正丙基、伸正丁基、伸正戊基、伸正己基等，較佳可列舉伸正丙基、伸正丁基、伸正戊基等，更佳可列舉伸正丙基、伸正丁基等，進而較佳可列舉伸正丙基。
再者，R5較佳為氫原子、碳數1~6之烷基、單烷基胺基、羥基、烷氧基或者經相同或不同之1~3個胺基、單烷基胺基、或羥基或者烷氧基取代之碳數1~6之烷基，或者與R3一併形成碳數2~6之伸烷基，更佳為氫原子、甲基、胺基、甲基胺基、羥基、甲氧基或者經相同或不同之1~3個胺基或羥基取代之甲基，或者與R3一併形成碳數3~5之伸烷基，進而較佳為氫原子、碳數1~3之烷基、或羥基，或者與R3一併形成伸正丙基或伸正 丁基，最佳為氫原子或與R3一併形成伸正丙基。
作為R10中之碳數1~3之烷基，例如可列舉甲基、乙基、丙基、異丙基、環丙基等，較佳可列舉甲基、乙基、異丙基等，更佳可列舉甲基、乙基等。再者，作為R10，進而較佳為氫原子或甲基，最佳為氫原子。
作為X1及X2中之碳數1~6之伸烷基，例如可列舉亞甲基、伸乙基、伸正丙基、伸正丁基、伸正戊基、伸正己基等。
又，X1較佳為碳數1~3之伸烷基，最佳為亞甲基或伸乙基，X2較佳為單鍵、亞甲基或伸乙基，更佳為單鍵或亞甲基。X1與X2之碳數之和較佳為1~3，最佳為2。於該等任一情形時，R3及R4相同或不同，為甲基或乙基，R5為氫原子、甲基、胺基、甲基胺基、羥基、甲氧基、或者經相同或不同之1~3個胺基或羥基取代之甲基，或者R3與R4一併形成碳數5~7之伸烷基，R5為氫原子、甲基、胺基、甲基胺基、羥基、甲氧基、或者經相同或不同之1~3個胺基或羥基取代之甲基，或者R3與R5一併形成碳數3~5之伸烷基，R4較佳為甲基或乙基，R3及R4為甲基，R5為氫原子，或者R3與R4一併形成伸正戊基或伸正己基，R5為氫原子，或者R3與R5一併形成伸正丙基，R4更佳為甲基。
作為X3中之碳數1~3之伸烷基，例如可列舉亞甲基、伸乙基、伸正丙基等，較佳可列舉亞甲基、伸乙基等。
式(A)中之氧原子可分別被取代為硫原子。
將式(A)中之1個氧原子取代為硫原子所得之式(Aa)[化9]
(式中，R1、R2、R3、R4、R5、X1及X2分別與上述含義相同)所表示之化合物Aa可藉由使勞森試劑(Lawesson's Reagent，2,4-雙(4-甲氧基苯基)-1,3,2,4-二磷雜環丁烷-2,4-二硫醚)等1,3,2,4-二磷雜環丁烷-2,4-二硫醚衍生物作用於對應之化合物A而獲得。
本發明之陽離子性脂質於對任一氮原子上之孤電子對配位氫離子之情形時，亦可與製藥上可容許之陰離子形成鹽。
於本發明中，作為製藥上可容許之陰離子，例如可列舉：氯化物離子、溴化物離子、硝酸根離子、硫酸根離子、磷酸根離子等無機離子，乙酸根離子、草酸根離子、馬來酸根離子、富馬酸根離子、檸檬酸根離子、苯甲酸根離子、甲磺酸根離子等有機酸根離子等。
其次，對本發明之陽離子性脂質之製造方法進行說明。再者，於以下所示之製造方法中所定義之基於該製造方法之條件下發生變化或不適於實施該製造方法之情形時，可藉由使用有機合成化學中常用之保護基之導入及除去方法[例如有機合成中之保護基第3版(Protective Groups in Organic Synthesis,third edition)，Green(T.W.Greene)著，John Wiley & Sons Inc.(1999年)等中所記載之方法]等而製造目標化合物。又，亦可視需要改變取代基導入等反應步驟之順序。
製造方法
化合物(A)中，R2為碳數8~24之直鏈狀或支鏈狀之烷基、烯基或炔基的化合物(Ia)可藉由以下方法製造。
(式中，R1、R3、R4、R5、X1及X2分別與上述含義相同，R11為碳數8~24之直鏈狀或支鏈狀之烷基、烯基或炔基，Y表示氯原子、溴原子、碘原子、三氟甲磺醯氧基、甲磺醯氧基、苯磺醯氧基、對甲苯磺醯氧基等脫離基，Ar表示對硝基苯基、鄰硝基苯基、對氯苯基等經取代之苯基或未經取代之苯基)
步驟1及步驟2
化合物(IIa)可藉由於無溶劑之情況下或於溶劑中、視需要更佳為1~10當量之鹼之存在下，在室溫與200℃之間之溫度下使氨與化合物(IIIa)反應5分鐘~100小時而製造。進而，化合物(IIb)可藉由於無溶劑之情況下或於溶劑中、視需要更佳為1~10當量之鹼之存在下，在室溫與200℃之間之溫度下使化合物(IIa)與化合物(IIIb)反應5分鐘~100小時而製造。
作為溶劑，例如可列舉：甲醇、乙醇、二氯甲烷、氯仿、1,2-二氯乙 烷、甲苯、乙酸乙酯、乙腈、二乙醚、四氫呋喃、1,2-二甲氧基乙烷、二烷、N,N-二甲基甲醯胺、N,N-二甲基乙醯胺、N-甲基吡咯啶酮、吡啶、水等，該等可單獨或混合使用。
作為鹼，例如可列舉：碳酸鉀、氫氧化鉀、氫氧化鈉、甲醇鈉、第三丁醇鉀、三乙胺、二異丙基乙基胺、N-甲基嗎啉、吡啶、1,8-二氮雜雙環[5.4.0]-7-十一烯(DBU)等。
化合物(IIIa)及化合物(IIIb)可以市售品之形式獲得，或者可利用公知之方法(例如「第5版實驗化學講座13有機化合物之合成I」，第5版，p.374，丸善(2005年))或依據其之方法而獲得。
R1與R11相同之情形時之化合物(IIb)可藉由於步驟1中使用2當量以上之化合物(IIIa)而獲得。
步驟3
化合物(VI)可藉由於無溶劑之情況下或於溶劑中、視需要更佳為1~10當量之添加劑之存在下、及/或視需要更佳為1~10當量之鹼之存在下，在-20℃與150℃之間之溫度下使化合物(IV)與化合物(V)反應5分鐘~72小時而製造。
作為溶劑，例如可列舉：二氯甲烷、氯仿、1,2-二氯乙烷、甲苯、乙酸乙酯、乙腈、二乙醚、四氫呋喃、1,2-二甲氧基乙烷、二烷、N,N-二甲基甲醯胺、N,N-二甲基乙醯胺、N-甲基吡咯啶酮、二甲基亞碸等，該等可單獨或混合使用。
作為添加劑，例如可列舉：1-羥基苯并三唑、4-二甲基胺基吡啶等。
作為鹼，可列舉步驟1及2中所例示者。
化合物(IV)可以市售品之形式獲得。
化合物(V)可以市售品之形式獲得，或者可利用公知之方法(例如「第5版實驗化學講座14有機化合物之合成II」，第5版，p.1，丸善(2005年))或依據其之方法而獲得。
步驟4
化合物(Ia)可藉由於無溶劑之情況下或於溶劑中、視需要更佳為1~10當量之添加劑之存在下、及/或視需要更佳為1~10當量之鹼之存在下，在-20℃與150℃之間之溫度下，使化合物(IIb)與化合物(VI)反應5分鐘~72小時而製造。
作為溶劑及添加劑，可分別列舉步驟3中所例示者。
作為鹼，可列舉步驟1及2中所例示者。
又，化合物(IIb)亦可藉由以下方法而製造。
(式中，R1、R11及Y分別與上述含義相同，Boc表示第三丁氧基羰基，Ns表示2-硝基苯磺醯基)
步驟5
化合物(IIc)可藉由於無溶劑之情況下或於溶劑中、視需要更佳為1~ 10當量之添加劑之存在下、及/或視需要更佳為1~10當量之鹼之存在下，在室溫與200℃之間之溫度下，使N-(第三丁氧基羰基)-2-硝基苯磺醯胺與化合物(IIIa)反應5分鐘~100小時而製造。
作為溶劑，可列舉步驟1及2中所例示者。
作為添加劑，例如可列舉正四丁基碘化銨、碘化鈉等。
作為鹼，例如可列舉：碳酸銫、碳酸鉀、氫氧化鉀、氫氧化鈉、甲醇鈉、第三丁醇鉀、三乙胺、二異丙基乙基胺、N-甲基嗎啉、吡啶、DBU等。
步驟6
化合物(IId)可藉由於無溶劑之情況下或於溶劑中、視需要更佳為1~10當量之添加劑之存在下，在-20℃與150℃之間之溫度下以1當量~遠過量之酸對化合物(IIc)進行5分鐘~72小時處理而製造。
作為溶劑，可列舉步驟1及2中所例示者。
作為酸，例如可列舉鹽酸、硫酸、磷酸、三氟乙酸等。
作為添加劑，例如可列舉大茴香硫醚、二甲基硫醚、三異丙基矽烷等。
步驟7
化合物(IIe)可藉由於無溶劑之情況下或於溶劑中、視需要更佳為1~10當量之添加劑之存在下、及/或視需要更佳為1~10當量之鹼之存在下，在室溫與200℃之間之溫度下，使化合物(IIIb)與化合物(IId)反應5分鐘~100小時而製造。
作為溶劑，可列舉步驟1及2中所例示者。
作為添加劑及鹼，可分別列舉步驟5中所例示者。
步驟8
化合物(IIb)可藉由於無溶劑之情況下或於溶劑中、視需要更佳為1~10當量之鹼之存在下，在室溫與200℃之間之溫度下，使化合物(IIe)與硫醇化合物反應5分鐘~100小時而製造。
作為溶劑，可列舉步驟1及2中所例示者。
作為硫醇化合物，例如可列舉：甲硫醇、乙硫醇、十二烷硫醇、苯硫酚、巰基乙酸等。
作為鹼，可列舉步驟5中所例示者。
化合物(A)中，R2為烷氧基乙基、烷氧基丙基、烯氧基乙基、烯氧基丙基、炔氧基乙基或炔氧基丙基的化合物(Ib)可藉由以下方法而製造。
(式中，R1、R3、R4、R5、X1、X2、Y及Ar分別與上述含義相同，R12為烷氧基乙基、烷氧基丙基、烯氧基乙基、烯氧基丙基、炔氧基乙基 或炔氧基丙基，Ms表示甲磺醯基)
步驟9
化合物(IIf)可藉由於無溶劑之情況下或於溶劑中、視需要更佳為1~10當量之鹼之存在下，在室溫與200℃之間之溫度下，使化合物(IIa)與化合物(IIIc)反應5分鐘~100小時而製造。
作為溶劑，可列舉步驟1及2中所例示者。
作為鹼，可列舉步驟1及2中所例示者。
步驟10
化合物(Ib)可藉由於無溶劑之情況下或於溶劑中、視需要更佳為1~10當量之添加劑之存在下、及/或視需要更佳為1~10當量之鹼之存在下，在-20℃與150℃之間之溫度下使化合物(IIf)與化合物(VI)反應5分鐘~72小時而製造。
作為溶劑及添加劑，可分別列舉步驟3中所例示者。
作為鹼，可列舉步驟1及2中所例示者。
化合物(IIIc)可藉由以下方法而製造。
(式中，R13為碳數8~24之直鏈狀或支鏈狀之烷基、烯基或炔基，X4表示伸乙基或伸正丙基，Ms表示甲磺醯基)
步驟11
化合物(VIIb)可藉由於無溶劑之情況下或於溶劑中、視需要更佳為1~10當量之鹼之存在下，在室溫與200℃之間之溫度下，使化合物(VIIa)與化合物(VIII)反應5分鐘~100小時而製造。
作為溶劑，可列舉步驟3中所例示者。
作為鹼，可列舉步驟1及2中所例示者。
化合物(VIIa)可以市售品之形式獲得，或者可利用公知之方法(例如「第5版實驗化學講座14有機化合物之合成II」，第5版，p.1，丸善(2005年))或依據其之方法而獲得。
化合物(VIII)可以市售品之形式獲得。
步驟12
化合物(IIIc)可藉由於無溶劑之情況下或於溶劑中、較佳為1~10當量之鹼之存在下，在-20℃與150℃之間之溫度下，使化合物(VIIb)與甲磺醯基化試劑反應5分鐘~72小時而製造。
作為溶劑，可列舉步驟3中所例示者。
作為鹼，可列舉步驟1及2中所例示者。
作為甲磺醯基化試劑，例如可列舉甲磺酸酐、甲磺醯氯等。
又，化合物(IIf)亦可藉由以下方法而製造。
(式中，R1、R12、Y、Ns及Ms分別與上述含義相同)
步驟13
化合物(IIg)可藉由於無溶劑之情況下或於溶劑中、視需要更佳為1~10當量之添加劑之存在下、及/或視需要更佳為1~10當量之鹼之存在下，在室溫與200℃之間之溫度下，使化合物(IIIc)與化合物(IId)反應5分鐘~100小時而製造。
作為溶劑，可列舉步驟1及2中所例示者。
作為添加劑及鹼，可分別列舉步驟5中所例示者。
步驟14
化合物(IIf)可藉由於無溶劑之情況下或於溶劑中、視需要更佳為1~10當量之鹼之存在下，在室溫與200℃之間之溫度下，使化合物(IIg)與硫醇化合物反應5分鐘~100小時而製造。
作為溶劑，可列舉步驟1及2中所例示者。
作為硫醇化合物，可列舉步驟8中所例示者。
作為鹼，可列舉步驟5中所例示者。
式(A)中之氧原子為硫原子之式(Aa)~(Ac)
(式中，R1、R2、R3、R4、R5、X1及X2分別與上述含義相同)所表示之化合物Aa~Ac可藉由分別於步驟4及步驟10中使用式(VI)中之氧原子為硫原子之式(VIa)~(VIc)所表示之化合物VIa~VIc而獲得。
(式中，R3、R4、R5、X1、X2及Ar分別與上述含義相同)
化合物(B)中，R7為碳數8~24之直鏈狀或支鏈狀之烷基、烯基或炔基之化合物(Ba)可利用化合物(IIb)之製造方法而獲得。
化合物(B)中，R7為烷氧基乙基、烷氧基丙基、烯氧基乙基、烯氧基丙基、炔氧基乙基或炔氧基丙基之化合物(Bc)可利用化合物(IIf)之製造方法而獲得。
化合物(C)可藉由以下方法而製造。
(式中，R8、R9、R10、X3及Y分別與上述含義相同)
步驟15
化合物(C)可藉由於無溶劑之情況下或於溶劑中、視需要更佳為1~10當量之添加劑之存在下、及/或視需要更佳為1~10當量之鹼之存在下，在室溫與200℃之間之溫度下，使化合物(IIh)與化合物(Xa)反應5分鐘~100小時而製造。
作為溶劑及鹼，可分別列舉步驟1及2中所例示者。
作為添加劑，可列舉步驟5中所例示者。
化合物(IIh)可利用化合物(B)之製造方法而獲得。
化合物(Xa)可以市售品之形式獲得，或者可利用公知之方法(例如「第5版實驗化學講座13有機化合物之合成I」，第5版，p.374，丸善(2005 年))或依據其之方法而獲得。
化合物(C)中，R10為氫原子之化合物(Ca)亦可藉由以下方法而製造。
(式中，R8、R9、X3及Y分別與上述含義相同，Pro表示三甲基矽烷基、三乙基矽烷基、三第三丁基矽烷基、第三丁基二甲基矽烷基、第三丁基二苯基矽烷基或三苯基矽烷基等矽烷基型保護基)
步驟16
化合物(IXa)可藉由於無溶劑之情況下或於溶劑中、視需要更佳為1~10當量之添加劑之存在下、及/或視需要更佳為1~10當量之鹼之存在下，在室溫與200℃之間之溫度下，使化合物(IIh)與化合物(Xb)反應5分鐘~100小時而製造。
作為溶劑及鹼，可分別列舉步驟1及2中所例示者。
作為添加劑，可列舉步驟5中所例示者。
化合物(IIh)可利用化合物(B)之製造方法而獲得。
化合物(Xb)可以市售品之形式獲得，或者可利用公知之方法(例如 「第5版實驗化學講座18有機化合物之合成VI」，第5版，p.171-172，丸善(2005年))或依據其之方法而獲得。
步驟17
化合物(Ca)可藉由於無溶劑之情況下或於溶劑中，在-20℃與150℃之間之溫度下，使化合物(IXa)與脫保護試劑反應5分鐘~72小時而製造。
作為溶劑，可列舉步驟1及2中所例示者。
作為脫保護試劑，例如可列舉：四丁基氟化銨、氟化氫吡啶複合物、氫氟酸等氟化合物等，乙酸、三氟乙酸、對甲苯磺酸吡啶鎓、鹽酸等酸等。
化合物(C)中，R10為氫原子且X3為碳數2之伸烷基的化合物(Cb)亦可藉由以下方法而製造。
(式中，R8及R9分別與上述含義相同)
步驟18
化合物(IXb)可藉由於無溶劑之情況下或於溶劑中、視需要更佳為1 ~10當量之鹼之存在下，在室溫與200℃之間之溫度下，使化合物(IIh)與較佳為1~遠過量之丙烯酸乙酯反應5分鐘~100小時而製造。
作為溶劑，可列舉步驟1中所例示者。
作為鹼，例如可列舉：碳酸鉀、氫氧化鉀、氫氧化鈉、甲醇鈉、乙醇鈉、第三丁醇鉀、三乙胺、二異丙基乙基胺、N-甲基嗎啉、吡啶、DBU等。
步驟19
化合物(Cb)可藉由於溶劑中、視需要更佳為1~10當量之添加劑之存在下，在-20℃與150℃之間之溫度下，使化合物(IXb)與較佳為1~10當量之還原劑反應5分鐘~72小時而製造。
作為溶劑，例如可列舉四氫呋喃、二烷、二乙醚、二氯甲烷、甲苯等，該等可單獨或混合使用。
作為還原劑，例如可列舉：氫化鋁鋰、氫化鋁、氫化二異丁基鋁、三乙醯氧基硼氫化鈉、氰基硼氫化鈉、硼烷等。
作為添加劑，例如可列舉：氯化鋁、氯化鈰、氯化鐵、乙酸、鹽酸等。
上述各製造方法中之中間體及目標化合物可藉由實施有機合成化學中常用之分離純化法、例如過濾、萃取、清洗、乾燥、濃縮、再結晶、各種層析法等而單離純化。又，對於中間體，亦可在不特別地進行純化之情況下供於其後之反應。
本發明之陽離子性脂質可對結構中之氮原子上之孤電子對配位氫離子，於此情形時，可與製藥上可容許之陰離子(與上述含義相同)形成鹽，本發明之陽離子性脂質亦包含對該氮原子上之孤電子對配位氫離子之化合 物。
本發明之陽離子性脂質中亦有可存在幾何異構物、光學異構物等立體異構物、互變異構物等者，本發明之陽離子性脂質包括該等，包含所有可能之異構物及該等之混合物。
本發明之陽離子性脂質中之各原子之一部分或全部可分別取代為對應之同位素原子，化合物(A)、化合物(B)或化合物(C)亦包含取代為該等同位素原子之化合物。例如，化合物(A)、化合物(B)或化合物(C)中之氫原子之一部分或全部亦可為原子量為2之氫原子(氘原子)。
本發明之陽離子性脂質中之各原子之一部分或全部分別取代為對應之同位素原子的化合物可使用市售之構建嵌段，利用與上述各製造方法相同之方法而製造。又，化合物(A)、化合物(B)或化合物(C)中之氫原子之一部分或全部取代為氘原子的化合物亦可使用如下方法而合成：例如使用銥錯合物作為觸媒，使用重水作為氘源，對醇、羧酸等進行氘化之方法[參照美國化學會誌(J.Am.Chem.Soc.),Vol.124,No.10,2092(2002)]等。
將藉由本發明而獲得之本發明之陽離子性脂質之具體例示於第1~3表。但，本發明之陽離子性脂質並不限定於該等。
又，作為本發明中使用之核酸，例如只要為由核苷酸及/或具有與核苷酸同等功能之分子聚合而成之分子，則可為任意分子，例如可列舉：作為核糖核苷酸之聚合物之核糖核酸(RNA)、作為脫氧核糖核苷酸之聚合物之脫氧核糖核酸(DNA)、包含RNA與DNA之嵌合核酸、及該等核酸之至少一個核苷酸經具有與該核苷酸同等功能之分子取代之核苷酸聚合物等。又，包含至少一部分使核苷酸及/或具有與核苷酸同等功能之分子聚合而成之分子之結構的衍生物亦包含於本發明之核酸中。再者，於本發明中，尿嘧啶U與胸腺嘧啶T可分別互換。
作為具有與核苷酸同等功能之分子，例如可列舉核苷酸衍生物等。
作為核苷酸衍生物，例如只要為對核苷酸實施修飾之分子，則可為任意分子，例如與RNA或DNA相比，為了提高耐核酸酶性或者對其他分解因子穩定化，為了提高與互補鏈核酸之親和性，為了提高細胞透過性，或為了使之可視化，可較佳地使用對核糖核苷酸或脫氧核糖核苷酸實施修 飾之分子等。
作為核苷酸衍生物，例如可列舉：糖部修飾核苷酸、磷酸二酯鍵修飾核苷酸、鹼基修飾核苷酸等。
作為糖部修飾核苷酸，例如只要為對核苷酸之糖之化學結構之一部分或全部以任意之取代基進行修飾或者取代而成者、或者以任意之原子進行取代而成者，則可為任意者，可較佳地使用2'-修飾核苷酸。
作為糖部修飾核苷酸之修飾基，例如可列舉：2'-氰基、2'-烷基、2'-取代烷基、2'-烯基、2'-取代烯基、2'-鹵基、2'-O-氰基、2'-O-烷基、2'-O-取代烷基、2'-O-烯基、2'-O-取代烯基、2'-S-烷基、2'-S-取代烷基、2'-S-烯基、2'-S-取代烯基、2'-胺基、2'-NH-烷基、2'-NH-取代烷基、2'-NH-烯基、2'-NH-取代烯基、2'-SO-烷基、2'-SO-取代烷基、2'-羧基、2'-CO-烷基、2'-CO-取代烷基、2'-Se-烷基、2'-Se-取代烷基、2'-SiH2-烷基、2'-SiH2-取代烷基、2'-ONO2、2'-NO2、2'-N3、2'-胺基酸殘基(自胺基酸之羧酸除去羥基而成者)、2'-O-胺基酸殘基(與上述胺基酸殘基含義相同)等。
又，作為糖部修飾核苷酸，例如亦可列舉：具有2'位之修飾基橋接於4'位之碳原子上之結構的橋接結構型人工核酸(Bridged Nucleic Acid)(BNA)，更具體而言，2'位之氧原子與4'位之碳原子經由亞甲基而橋接之鎖定人工核酸(Locked Nucleic Acid)(LNA)、及伸乙基橋接結構型人工核酸(Ethylene bridged nucleic acid)(ENA)[Nucleic Acid Research,32,e175(2004)]等，該等包含於2'-修飾核苷酸中。
進而，作為糖部修飾核苷酸，亦可列舉：肽核酸(PNA)[Acc.Chem.Res.,32,624(1999)]、氧基肽核酸(OPNA)[J.Am.Chem.Soc.,123, 4653(2001)]、肽核糖核酸(PRNA)[J.Am.Chem.Soc.,122,6900(2000)]等。
作為糖部修飾核苷酸之修飾基，較佳為2'-氰基、2'-鹵基、2'-O-氰基、2'-烷基、2'-取代烷基、2'-O-烷基、2'-O-取代烷基、2'-O-烯基、2'-O-取代烯基、2'-Se-烷基、2'-Se-取代烷基等，更佳為2'-氰基、2'-氟、2'-氯、2'-溴、2'-三氟甲基、2'-O-甲基、2'-O-乙基、2'-O-異丙基、2'-O-三氟甲基、2'-O-[2-(甲氧基)乙基]、2'-O-(3-胺基丙基)、2'-O-[2-(N,N-二甲基胺基氧基)乙基]、2'-O-[3-(N,N-二甲基胺基)丙基]、2'-O-{2-[2-(N,N-二甲基胺基)乙氧基]乙基}、2'-O-[2-(甲基胺基)-2-側氧基乙基]、2'-Se-甲基等，進而較佳為2'-O-甲基、2'-O-乙基、2'-氟等，最佳為2'-O-甲基及2'-O-乙基。
又，糖部修飾核苷酸之修飾基亦可根據其大小而定義較佳之範圍，根據氟之大小而較佳為相當於-O-丁基之大小者，根據-O-甲基之大小而更佳為相當於-O-乙基之大小者。
糖部修飾核苷酸之修飾基中之烷基與本發明之陽離子性脂質之定義中之碳數1~6之烷基含義相同。
作為糖部修飾核苷酸之修飾基中之烯基，可列舉碳數3~6之烯基，例如可列舉烯丙基、1-丙烯基、丁烯基、戊烯基、己烯基等。
作為糖部修飾核苷酸之修飾基中之鹵基，例如可列舉氟原子、氯原子、溴原子、碘原子等。
作為胺基酸殘基中之胺基酸，例如可列舉：脂肪族胺基酸(具體而言為甘胺酸、丙胺酸、纈胺酸、白胺酸、異白胺酸等)、羥基胺基酸(具體而言為絲胺酸、蘇胺酸等)、酸性胺基酸(具體而言為天冬胺酸、麩胺酸 等)、酸性胺基酸醯胺(具體而言為天冬醯胺、麩醯胺等)、鹼性胺基酸(具體而言為離胺酸、羥基離胺酸、精胺酸、鳥胺酸等)、含硫胺基酸(具體而言為半胱胺酸、胱胺酸、甲硫胺酸等)、亞胺基酸(具體而言為脯胺酸、4-羥基脯胺酸等)等。
作為糖部修飾核苷酸之修飾基中之經取代之烷基及經取代之烯基的取代基，例如可列舉：鹵基(與上述含義相同)、羥基、胺苯磺醯基、胺基、側氧基、-O-烷基(該-O-烷基之烷基部分與上述烷基含義相同)、-S-烷基(該-S-烷基之烷基部分與上述烷基含義相同)、-NH-烷基(該-NH-烷基之烷基部分與上述烷基含義相同)、二烷基胺基氧基(該二烷基胺基氧基之2個烷基部分相同或不同且與上述烷基含義相同)、二烷基胺基(該二烷基胺基之2個烷基部分相同或不同且與上述烷基含義相同)、二烷基胺基烷基氧基(該二烷基胺基烷基氧基之2個烷基部分相同或不同且與上述烷基含義相同，伸烷基部分係表示自上述烷基除去1個氫原子而成者)等，取代數較佳為1~3。
作為磷酸二酯鍵修飾核苷酸，只要為對核苷酸之磷酸二酯鍵之化學結構之一部分或全部以任意之取代基進行修飾或者取代而成者、或者以任意之原子進行取代而成者，則可為任意者，例如可列舉：將磷酸二酯鍵取代為硫代磷酸酯鍵而成之核苷酸、將磷酸二酯鍵取代為二硫代磷酸酯鍵而成之核苷酸、將磷酸二酯鍵取代為膦酸烷基酯鍵而成之核苷酸、將磷酸二酯鍵取代為胺基磷酸酯鍵而成之核苷酸等。
作為鹼基修飾核苷酸，只要為對核苷酸之鹼基之化學結構之一部分或全部以任意之取代基進行修飾或者取代而成者、或者以任意之原子進行取代而成者，則可為任意者，例如可列舉：將鹼基內之氧原子取代為硫原 子者、將氫原子取代為碳數1~6之烷基者、將甲基取代為氫原子或碳數2~6之烷基者、以碳數1~6之烷基、碳數1~6之烷醯基等保護基保護胺基者等。
進而，作為核苷酸衍生物，亦可列舉對核苷酸或糖部、磷酸二酯鍵或鹼基之至少一個經修飾之核苷酸衍生物加成脂質、磷脂質、啡、葉酸鹽、啡啶、蒽醌、吖啶、螢光素、玫瑰紅、香豆素、色素等其他化學物質而成者，具體而言，可列舉：5'-多胺加成核苷酸衍生物、膽固醇加成核苷酸衍生物、類固醇加成核苷酸衍生物、膽汁酸加成核苷酸衍生物、維生素加成核苷酸衍生物、綠色螢光色素(Cy3)加成核苷酸衍生物、紅色螢光色素(Cy5)加成核苷酸衍生物、螢光素(6-FAM)加成核苷酸衍生物、及生物素加成核苷酸衍生物等。
又，本發明中使用之核酸中，核苷酸或核苷酸衍生物可與該核酸內之其他核苷酸或核苷酸衍生物形成伸烷基結構、肽結構、核苷酸結構、醚結構、酯結構、及組合該等之至少一個而成之結構等橋接結構。
作為本發明中使用之核酸，較佳可列舉抑制標靶基因之表現之核酸，更佳可列舉具有利用RNA干擾(RNAi)而抑制標靶基因表現之作用的核酸。
作為本發明中之標靶基因，只要為產生mRNA而表現之基因，則並無特別限定，例如較佳為與腫瘤或炎症相關之基因，例如可列舉：編碼血管內皮生長因子(vascular endothelial growth factor，以下簡稱為VEGF)、血管內皮生長因子受體(vascular endothelial growth factor receptor，以下簡稱為VEGFR)、纖維母細胞生長因子、纖維母細胞生長因子受體、血小板源性生長因子、血小板源性生長因子受體、肝細胞生長 因子、肝細胞生長因子受體、Kruppel樣因子(Kruppel-like factor，以下簡稱為KLF)、表現序列標籤(Ets，Expressed Sequence Tag)轉錄因子、核因子、低氧誘導因子、細胞週期相關因子、染色體複製相關因子、染色體修復相關因子、微管相關因子、增殖訊號通路相關因子、增殖相關轉錄因子、細胞凋亡相關因子等蛋白質之基因等，具體而言，可列舉：VEGF基因、VEGFR基因、纖維母細胞生長因子基因、纖維母細胞生長因子受體基因、血小板源性生長因子基因、血小板源性生長因子受體基因、肝細胞生長因子基因、肝細胞生長因子受體基因、KLF基因、Ets轉錄因子基因、核因子基因、低氧誘導因子基因、細胞週期相關因子基因、染色體複製相關因子基因、染色體修復相關因子基因、微管相關因子基因(例如CKAP5基因等)、增殖訊號通路相關因子基因(例如KRAS基因等)、增殖相關轉錄因子基因、細胞凋亡相關因子(例如BCL-2基因等)等。
又，作為本發明中之標靶基因，例如較佳為於肝臟、肺、腎臟或脾臟中表現之基因，更佳為於肝臟中表現之基因，例如可列舉：與上述腫瘤或炎症相關之基因、B型肝炎病毒基因組、C型肝炎病毒基因組，編碼脂蛋白元(APO)、羥基甲基麩胺醯基(HMG)CoA還原酶、Kexin 9型絲胺酸蛋白酶(PCSK9)、第12因子、升糖素受體、糖皮質素受體、白三烯受體、凝血脂素A2受體、組胺H1受體、碳酸脫水酶、血管緊張素轉化酶、腎素、p53、酪胺酸磷酸酶(PTP)、鈉依存性葡萄糖輸送載體、腫瘤壞死因子、介白素、鐵調節素(Hepcidin)、轉甲狀腺素蛋白(Transthyretin)、抗凝血酶、蛋白質C、間質蛋白酶(例如TMPRSS6基因等)等蛋白質之基因等。
作為抑制標靶基因表現之核酸，例如只要為包含與編碼蛋白質等之 基因(標靶基因)之mRNA之一部分鹼基序列互補的鹼基序列，且抑制標靶基因表現之核酸，則可使用例如siRNA(short interference RNA，短干擾RNA)、miRNA(micro RNA，微RNA)等雙鏈核酸、shRNA(short hairpin RNA，短髮夾RNA)、反義核酸、核酶等單鏈核酸等中之任一核酸，較佳為雙鏈核酸。
將包含與標靶基因之mRNA之一部分鹼基序列互補之鹼基序列的核酸稱為反義鏈核酸，亦將包含與反義鏈核酸之鹼基序列互補之鹼基序列的核酸稱為正義鏈核酸。正義鏈核酸係指包含標靶基因之一部分鹼基序列之核酸本身等可與反義鏈核酸締合而形成雙鏈形成部的核酸。
所謂雙鏈核酸係指兩條鏈締合而具有雙鏈形成部之核酸。所謂雙鏈形成部係指構成雙鏈核酸之核苷酸或其衍生物構成鹼基對而形成雙鏈之部分。構成雙鏈形成部之鹼基對通常為15~27個鹼基對，較佳為15~25個鹼基對，更佳為15~23個鹼基對，進而較佳為15~21個鹼基對，尤佳為15~19個鹼基對。
作為雙鏈形成部之反義鏈核酸，例如可較佳地使用包含標靶基因之mRNA之一部分序列之核酸，或者於該核酸中置換、缺失或附加有1~3個鹼基、較佳為1~2個鹼基、更佳為1個鹼基，且具有抑制標靶蛋白質表現之活性之核酸。構成雙鏈核酸之單鏈之核酸通常包含15~30個鹼基(核苷)之鏈，較佳為15~29個鹼基，更佳為15~27個鹼基，進而較佳為15~25個鹼基，尤佳為17~23個鹼基，最佳為19~21個鹼基。
構成雙鏈核酸之反義鏈、正義鏈中之任一者或兩者之核酸可具有與雙鏈形成部相接的未於3'側或5'側形成雙鏈之追加的核酸。亦將該未形成雙鏈之部分稱為突出部(懸突)。
作為具有突出部之雙鏈核酸，可使用例如於至少一條鏈之3'末端或5'末端具有包含1~4個鹼基、通常1~3個鹼基之突出部者，可較佳地使用具有包含2個鹼基之突出部者，可更佳地使用具有包含dTdT或UU之突出部者。突出部可僅於反義鏈中具有，僅於正義鏈中具有，及於反義鏈與正義鏈兩者中具有，可較佳地使用於反義鏈與正義鏈兩者具有突出部之雙鏈核酸。
又，可使用與雙鏈形成部相接並與標靶基因之mRNA之鹼基序列一部分或全部一致的序列、或與雙鏈形成部相接並與標靶基因之mRNA之互補鏈之鹼基序列一部分或全部一致的序列。進而，作為抑制標靶基因表現之核酸，亦可使用例如藉由切丁酶(Dicer)等核糖核酸酶之作用而生成上述雙鏈核酸之核酸分子(國際公開第2005/089287號說明書)、或者不具有3'末端或5'末端之突出部之雙鏈核酸等。
又，於上述雙鏈核酸為siRNA之情形時，較佳為反義鏈自5'末端側向3'末端側之至少第1位~第17位鹼基(核苷)之序列為與標靶基因之mRNA所連接之17個鹼基序列互補的鹼基序列，更佳為該反義鏈自5'末端側向3'末端側之第1位~第19位鹼基序列為與標靶基因之mRNA所連接之19個鹼基序列互補的鹼基序列，或者第1位~第21位鹼基序列為與標靶基因之mRNA所連接之21個鹼基序列互補的鹼基序列，或者第1位~第25位鹼基序列為與標靶基因之mRNA所連接之25個鹼基序列互補的鹼基序列。
進而，於本發明中使用之核酸為siRNA之情形時，較佳為於2'位以修飾基取代該核酸中之糖之10~70%、更佳為15~60%、進而較佳為20~50%而成之核糖。所謂本發明中之於2'位以修飾基進行取代而成之核糖係表示將核糖之2'位之羥基取代為修飾基而成者，與核糖之2'位之羥基立體 構型可相同亦可不同，較佳為與核糖之2'位之羥基立體構型相同。作為於2'位以修飾基進行取代而成之核糖中之修飾基，可列舉糖部修飾核苷酸中之2'-修飾核苷酸之修飾基之定義中所例示者及氫原子，較佳為2'-氰基、2'-鹵基、2'-O-氰基、2'-烷基、2'-取代烷基、2'-O-烷基、2'-O-取代烷基、2'-O-烯基、2'-O-取代烯基、2'-Se-烷基、2'-Se-取代烷基等，更佳為2'-氰基、2'-氟、2'-氯、2'-溴、2'-三氟甲基、2'-O-甲基、2'-O-乙基、2'-O-異丙基、2'-O-三氟甲基、2'-O-[2-(甲氧基)乙基]、2'-O-(3-胺基丙基)、2'-O-[2-(N,N-二甲基)胺基氧基]乙基、2'-O-[3-(N,N-二甲基胺基)丙基]、2'-O-{2-[2-(N,N-二甲基胺基)乙氧基]乙基}、2'-O-[2-(甲基胺基)-2-側氧基乙基]、2'-Se-甲基、氫原子等，進而較佳為2'-O-甲基、2'-O-乙基、2'-氟、氫原子等，最佳為2'-O-甲基及2'-O-氟。
本發明中使用之核酸包含將核酸之結構中之磷酸部、酯部等中所含之氧原子等取代為例如硫原子等其他原子而成之衍生物。
又，反義鏈及正義鏈之5'末端之鹼基所鍵結之糖可分別藉由磷酸基或上述修飾基、或者以活體內之核酸分解酶等轉化成磷酸基或上述修飾基的基而修飾5'位之羥基。
又，反義鏈及正義鏈之3'末端之鹼基所鍵結之糖可分別藉由磷酸基或上述修飾基、或者以活體內之核酸分解酶等轉化成磷酸基或上述修飾基的基而修飾3'位之羥基。
作為單鏈之核酸，例如只要為包含含有標靶基因之連續15~27個鹼基(核苷)、較佳為15~25個鹼基、更佳為15~23個鹼基、進而較佳為15~21個鹼基、尤佳為15~19個鹼基之序列之互補序列的核酸，或者於該核酸中置換、缺失或附加有1~3個鹼基、較佳為1~2個鹼基、更佳為1個鹼 基且具有抑制標靶蛋白質表現之活性的核酸，則可為任意者。該單鏈之核酸較佳為包含15~30個鹼基(核苷)之鏈，可適宜地使用更佳為15~27個鹼基，進而較佳為15~25個鹼基、尤佳為15~23個鹼基之單鏈核酸。
作為單鏈核酸，可使用經由間隔序列(間隔寡核苷酸)連接構成上述雙鏈核酸之反義鏈及正義鏈而成者。作為間隔寡核苷酸，較佳為6~12個鹼基之單鏈核酸分子，其5'末端側之序列較佳為2個U。作為間隔寡核苷酸之例，可列舉包含UUCAAGAGA之序列之核酸。藉由間隔寡核苷酸連接之反義鏈及正義鏈之順序可為任意者成為5'側。作為該單鏈核酸，例如較佳為藉由莖環結構而具有雙鏈形成部之shRNA等單鏈核酸。shRNA等單鏈核酸通常為50~70個鹼基長。
可使用以藉由核糖核酸酶等之作用生成上述單鏈核酸或雙鏈核酸之方式設計的鹼基長度為70個以下、較佳為鹼基長度為50個以下、進而較佳為鹼基長度為30個以下之核酸。
再者，本發明中使用之核酸可使用已知之RNA或DNA合成法、及RNA或DNA修飾法而製造。
本發明之組合物係含有本發明之陽離子性脂質及核酸之組合物，例如可列舉含有本發明之陽離子性脂質與核酸之複合物、或於本發明之陽離子性脂質中組合有中性脂質及/或高分子者與核酸之複合物的組合物，含有該複合物及封入該複合物之脂質膜之組合物等。該脂質膜可為脂質單層膜(脂質1分子膜)，亦可為脂質雙層膜(脂質2分子膜)。再者，於該脂質膜中可含有本發明之陽離子性脂質、中性脂質及/或高分子。又，於該複合物及/或該脂質膜中可含有本發明之陽離子性脂質以外之陽離子性脂質。
又，作為本發明之組合物，例如亦可列舉含有本發明之陽離子性脂 質以外之陽離子性脂質與核酸之複合物、或於本發明之陽離子性脂質以外之陽離子性脂質中組合有中性脂質及/或高分子者與核酸之複合物以及封入該複合物之脂質膜，且於該脂質膜中含有本發明之陽離子性脂質的組合物等。於此情形時之脂質膜可為脂質單層膜(脂質1分子膜)，亦可為脂質雙層膜(脂質2分子膜)。又，於該脂質膜中可含有本發明之陽離子性脂質以外之陽離子性脂質、中性脂質及/或高分子。
關於本發明之組合物，更佳為含有本發明之陽離子性脂質與核酸之複合物的組合物、含有本發明之陽離子性脂質與核酸之複合物及封入該複合物之脂質膜且於該脂質膜中含有本發明之陽離子性脂質的組合物、以及含有本發明之陽離子性脂質以外之陽離子性脂質與核酸之複合物及封入該複合物之脂質膜且於該脂質膜中含有本發明之陽離子性脂質的組合物，進而較佳為含有本發明之陽離子性脂質與核酸之複合物的組合物、以及含有本發明之陽離子性脂質與核酸之複合物及封入該複合物之脂質膜且於該脂質膜中含有本發明之陽離子性脂質的組合物，最佳為含有本發明之陽離子性脂質與核酸之複合物及封入該複合物之脂質膜且於該脂質膜中含有本發明之陽離子性脂質的組合物。再者，於任一情形時，該脂質膜均可含有中性脂質及/或高分子。又，於該複合物及/或該脂質膜中亦可含有本發明之陽離子性脂質以外之陽離子性脂質。
作為複合物之形態，例如可列舉：核酸與包含脂質單(一分子)層之膜(逆微胞)之複合物、核酸與脂質體之複合物、核酸與微胞之複合物等，較佳可列舉核酸與包含脂質單層之膜之複合物，或核酸與脂質體之複合物。
作為含有複合物及封入該複合物之脂質膜的組合物，例如可列舉該複合物及以脂質雙層膜封入該複合物的脂質體等。
再者，本發明之組合物可使用一種或複數種本發明之陽離子性脂質，又，本發明之陽離子性脂質亦可混合本發明之陽離子性脂質以外之陽離子性脂質。
作為本發明之陽離子性脂質以外之陽離子性脂質，例如可列舉：日本專利特開昭61-161246號公報(美國專利5049386號說明書)中所揭示之N-[1-(2,3-二油醯氧基)丙基]-N,N,N-三甲基氯化銨(DOTMA)、N-(2,3-二(9-(Z)-十八碳烯醯氧基))-丙-1-基-N,N,N-三甲基氯化銨(DOTAP)等，國際公開第91/16024號說明書及國際公開第97/019675號說明書中所揭示之N-[1-(2,3-二油醯氧基丙基)]-N,N-二甲基-N-羥基乙基溴化銨(DORIE)、2,3-二油醯氧基-N-[2-(精胺羧醯胺基)乙基]-N,N-二甲基-1-丙基三氟乙酸銨(DOSPA)等，國際公開第2005/121348號說明書中所揭示之DLinDMA等，國際公開第2009/086558號說明書中所揭示之DLin-K-DMA、國際公開第2011/136368號說明書中所揭示之(3R,4R)-3,4-雙((Z)-十六碳-9-烯基氧基)-1-甲基吡咯啶、N-甲基-N,N-雙(2-((Z)-十八碳-6-烯基氧基)乙基)胺等，較佳可列舉：DOTMA、DOTAP、DORIE、DOSPA、1,2-二亞麻氧基-N,N-二甲基胺基丙烷(DLinDMA)、2,2-二亞麻基-4-二甲基胺基甲基-[1,3]-二氧雜環戊烷(DLin-K-DMA)等包含具有2個未經取代之烷基之三級胺部位或具有3個未經取代之烷基之四級銨部位的陽離子性脂質，更佳可列舉具有該三級胺部位之陽離子性脂質。該三級胺部位及該四級銨部位之未經取代之烷基更佳為甲基。
再者，本發明之組合物可含有核酸，亦可含有與核酸化學性質近似之化合物。
本發明之組合物可利用公知之製造方法或依據其之方法而製造，可 為利用任意製造方法而製造者。例如，於製造組合物之一的含有脂質體之組合物時，可應用公知之脂質體之製備方法。作為公知之脂質體之製備方法，例如可列舉：班厄姆(Bangham)等人之脂質體製備法[參照「分子生物學雜誌(J.Mol.Biol.)」，1965年，第13卷，p.238-252]、乙醇注入法[參照「細胞生物學雜誌(J.Cell Biol.)」，1975年，第66卷，p.621-634]、法式壓碎機法[參照「歐洲生化學會聯合會快報(FEBS Lett.)」，1979年，第99卷，p.210-214]、冷凍融解法[參照「生物化學與生物物理學集刊(Arch.Biochem.Biophys.)」，1981年，第212卷，p.186-194]、逆相蒸發法[參照「美國國家科學院院刊(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)」，1978年，第75卷，p.4194-4198]或pH值梯度法(例如參照日本專利第2572554號公報、日本專利第2659136號公報等)等。作為製造脂質體時使脂質體分散之溶液，可使用例如水、酸、鹼、各種緩衝液、生理食鹽水或胺基酸輸液等。又，於製造脂質體時，亦可添加例如檸檬酸、抗壞血酸、半胱胺酸或乙二胺四乙酸(EDTA)等抗氧化劑，例如甘油、葡萄糖或氯化鈉之類的等張劑等。又，例如亦可藉由如下方式製造脂質體：使本發明之陽離子性脂質、或本發明之陽離子性脂質與本發明之陽離子性脂質以外之陽離子性脂質的混合物等溶解於例如乙醇等有機溶劑中，將溶劑蒸餾除去後，添加生理食鹽水等進行振盪攪拌，而形成脂質體。
又，本發明之組合物例如可藉由如下方法製造：使本發明之陽離子性脂質、或本發明之陽離子性脂質與本發明之陽離子性脂質以外之陽離子性脂質的混合物預先溶解於氯仿中，繼而添加核酸之水溶液與甲醇，進行混合而形成陽離子性脂質/核酸之複合物，進而取出氯仿層，於其中添加聚乙二醇化磷脂質、中性脂質及水而形成油包水型(W/O)乳液，利用逆相 蒸發法進行處理而製造的方法(參照日本專利特表2002-508765號公報)；或使核酸溶解於酸性電解質水溶液中，添加例如本發明之陽離子性脂質、或本發明之陽離子性脂質與本發明之陽離子性脂質以外之陽離子性脂質的混合物(乙醇中)，使乙醇濃度降低至20v/v%而製備上述核酸內包脂質體，進行篩分過濾，藉由透析除去過量之乙醇後，進而提高pH值並對試樣進行透析，除去附著於組合物表面之核酸而製造的方法(參照日本專利特表2002-501511號公報及生物化學與生物物理學報(Biochimica et Biophysica Acta)，2001年，第1510卷，p.152-166)等。
本發明之組合物中，含有本發明之陽離子性脂質與核酸之複合物、或於本發明之陽離子性脂質中組合有中性脂質及/或高分子者與核酸之複合物、以及含有封入該複合物之脂質雙層膜之脂質體的組合物例如可依據國際公開第02/28367號說明書及國際公開第2006/080118號說明書等中所記載之製造方法而製造。
又，本發明之組合物中，例如含有本發明之陽離子性脂質與核酸之複合物、或於本發明之陽離子性脂質中組合有中性脂質及/或高分子者與核酸之複合物以及封入該複合物之脂質膜的組合物，含有本發明之陽離子性脂質以外之陽離子性脂質與核酸之複合物、或於本發明之陽離子性脂質以外之陽離子性脂質中組合有中性脂質及/或高分子者與核酸之複合物以及封入該複合物之脂質膜且於該脂質膜中含有本發明之陽離子性脂質的組合物等可藉由如下方式獲得：依據國際公開第02/28367號說明書及國際公開第2006/080118號說明書等中所記載之製造方法，製造各複合物，使該複合物並非溶解而是分散於水或0~20%乙醇水溶液中(A液)，另外使各脂質膜成分溶解於例如乙醇水溶液中(B液)，將等量之A液與B液混合，進而 適當地添加水。再者，作為A液及B液中之陽離子性脂質，可使用一種或複數種本發明之陽離子性脂質或本發明之陽離子性脂質以外之陽離子性脂質，又，亦可將本發明之陽離子性脂質與本發明之陽離子性脂質以外之陽離子性脂質組合而混合使用。
再者，於本發明中，含有本發明之陽離子性脂質與核酸之複合物、或於本發明之陽離子性脂質中組合有中性脂質及/或高分子者與核酸之複合物以及封入該複合物之脂質膜的組合物，含有本發明之陽離子性脂質以外之陽離子性脂質與核酸之複合物、或於本發明之陽離子性脂質以外之陽離子性脂質中組合有中性脂質及/或高分子者與核酸之複合物以及封入該複合物之脂質膜且於該脂質膜中含有本發明之陽離子性脂質的組合物等的製造中及製造後，因複合物中之核酸與脂質膜中之陽離子性脂質之靜電相互作用或複合物中之陽離子性脂質與脂質膜中之陽離子性脂質之融合，會使複合物及膜之結構產生位移者亦分別包含於如下組合物中：含有本發明之陽離子性脂質與核酸之複合物、或於本發明之陽離子性脂質中組合有中性脂質及/或高分子者與核酸之複合物以及封入該複合物之脂質膜的組合物，或含有本發明之陽離子性脂質以外之陽離子性脂質與核酸之複合物、或於本發明之陽離子性脂質以外之陽離子性脂質組合中性脂質及/或高分子而成者與核酸之複合物以及封入該複合物之脂質膜且於該脂質膜中含有本發明之陽離子性脂質的組合物等。
依據國際公開第02/28367號及國際公開第2006/080118號等中所記載之製造方法，製造核酸(與上述含義相同)、較佳為雙鏈核酸與含有本發明之陽離子性脂質及/或本發明之陽離子性脂質以外之陽離子性脂質之脂質體的複合物，使該複合物並非溶解而是分散於水或0~20%乙醇水溶液中 (A液)，另外，使本發明之陽離子性脂質及/或本發明之陽離子性脂質以外之陽離子性脂質溶解於乙醇水溶液中(B液)，將等量或體積比1：1之A液與B液混合、或者進而適當地添加水，藉此可獲得含有該核酸與該陽離子性脂質之組合物。該組合物較佳為含有陽離子性脂質與核酸之複合物及封入該複合物之脂質膜的組合物，更佳為含有該核酸與包含含有該陽離子性脂質之脂質單層膜(逆微胞)之複合物及封入該複合物之脂質膜的組合物。該等情形時之脂質膜可為脂質單層膜(脂質1分子膜)，亦可為脂質雙層膜(脂質2分子膜)。
又，本揭示之該核酸與該脂質體之複合物中之脂質體較佳為預先將大小調節為平均粒徑10nm~400nm、更佳為30nm~110nm、進而較佳為40nm~80nm的脂質體。又，於該複合物及/或脂質膜中亦可含有中性脂質及/或高分子。又，A液若可形成脂質體與該核酸之複合物，則乙醇濃度可為20~40%。
又，亦可以將A液與B液混合後成為複合物不溶解且B液中之陽離子性脂質不溶解之乙醇濃度的比、較佳為以成為複合物不溶解、B液中之陽離子性脂質不溶解且乙醇濃度為30~60%之乙醇水溶液的比將A液與B液混合而代替將等量之A液與B液混合，或者亦可以將A液與B液混合後成為複合物不溶解之乙醇濃度的比將A液與B液混合，進而添加水，藉此設為B液中之陽離子性脂質變得不溶解之乙醇濃度。
本揭示之該A液中之核酸與脂質體之複合物於將A液與B液混合，進而適當地添加水後，形態變化為包含含有陽離子性脂質之脂質單層之膜(逆微胞)與核酸之複合物。利用本揭示之製造方法而獲得之含有該核酸與該陽離子性脂質之組合物較佳為含有陽離子性脂質與核酸之複合物及封入 該複合物之脂質膜的組合物，更佳為含有包含含有陽離子性脂質之脂質單層之膜(逆微胞)與核酸之複合物及封入該複合物之脂質膜且於該脂質膜中含有陽離子性脂質的組合物，其製造性(產率及/或均勻性)優異。
於本發明之組合物中，複合物中之本發明之陽離子性脂質之分子總數相對於該核酸之磷原子之數，較佳為0.5~4倍，更佳為1.5~3.5倍，進而較佳為2~3倍。又，該複合物中之本發明之陽離子性脂質及本發明之陽離子性脂質以外之陽離子性脂質之分子總數相對於該核酸之磷原子之數，較佳為0.5~4倍，更佳為1.5~3.5倍，進而較佳為2~3倍。
於本發明之組合物中，含有複合物及封入該複合物之脂質膜的組合物中之本發明之陽離子性脂質之分子總數相對於該核酸之磷原子之數，較佳為1~10倍，更佳為2.5~9倍，進而較佳為3.5~8倍。又，該組合物中之本發明之陽離子性脂質及本發明之陽離子性脂質以外之陽離子性脂質之分子總數相對於該核酸之磷原子之數，較佳為1~10倍，更佳為2.5~9倍，進而較佳為3.5~8倍。
作為中性脂質，可為單純脂質、複合脂質或衍生脂質中之任一者，例如可列舉：磷脂質、甘油糖脂質、神經鞘糖脂質、鞘胺醇類或固醇等，但並不限定於該等。
於本發明之組合物中含有中性脂質之情形時，中性脂質之分子總數相對於本發明之陽離子性脂質及本發明之陽離子性脂質以外之陽離子性脂質之分子總數，較佳為0.1~1.8倍，更佳為0.3~1.2倍，進而較佳為0.4~1.0倍。本發明之組合物可於複合物中含有任一中性脂質，亦可於封入複合物之脂質膜中含有，更佳為至少於封入複合物之脂質膜中含有，進而較佳為於複合物及封入該複合物之脂質膜中均含有。
作為中性脂質中之磷脂質，例如可列舉：磷脂醯膽鹼(具體而言為大豆磷脂醯膽鹼、蛋黃磷脂醯膽鹼(EPC)、二硬脂醯基磷脂醯膽鹼(DSPC)、二軟脂醯基磷脂醯膽鹼(DPPC)、棕櫚醯基油醯基磷脂醯膽鹼(POPC)、二肉豆蔻醯基磷脂醯膽鹼(DMPC)、二油醯基磷脂醯膽鹼(DOPC)等)、磷脂醯乙醇胺(具體而言為二硬脂醯基磷脂醯乙醇胺(DSPE)、二軟脂醯基磷脂醯乙醇胺(DPPE)、二油醯基磷脂醯乙醇胺(DOPE)、二肉豆蔻醯基磷酯醯乙醇胺(DMPE)、16-O-單甲基PE、16-O-二甲基PE、18-1-反式PE、棕櫚醯基油醯基-磷脂醯乙醇胺(POPE)、1-硬脂醯基-2-油醯基-磷脂醯乙醇胺(SOPE)等)、甘油磷脂質(具體而言為磷脂絲胺酸、磷脂酸、磷脂醯甘油、磷脂醯肌醇、棕櫚醯基油醯基磷脂醯甘油(POPG)、溶血磷脂醯膽鹼等)、神經鞘磷脂質(具體而言為神經鞘磷脂、腦醯胺磷酯醯乙醇胺、腦醯胺磷醯甘油、腦醯胺磷醯甘油磷酸等)、甘油膦醯脂質、神經鞘膦醯脂質、天然卵磷脂(具體而言為蛋黃卵磷脂、大豆卵磷脂等)或氫化磷脂質(具體而言為氫化大豆磷脂醯膽鹼等)等天然或合成之磷脂質。
作為中性脂質中之甘油糖脂質，例如可列舉：磺醯氧核糖基甘油酯、二糖基二甘油酯、二半乳糖基二甘油酯、半乳糖基二甘油酯或糖基二甘油酯等。
作為中性脂質中之神經鞘糖脂質，例如可列舉：半乳糖基腦苷脂、乳糖基腦苷脂或神經節苷脂等。
作為中性脂質中之鞘胺醇類，例如可列舉：鞘胺糖、二十碳鞘胺糖、鞘胺醇或該等之衍生物等。作為衍生物，例如可列舉將鞘胺糖、二十碳鞘胺糖或鞘胺醇等之-NH2轉化為-NHCO(CH2)xCH3(式中，x為0~18之整數，其中較佳為6、12或18)而成者等。
作為中性脂質中之固醇，例如可列舉：膽固醇、二氫膽固醇、羊毛固醇、β-穀甾醇、菜油甾醇、豆固醇、菜籽甾醇、麥角固醇、海藻固醇或3β-[N-(N',N'-二甲基胺基乙基)胺甲醯基]膽固醇(DC-Chol)等。
作為高分子，例如可列舉包含如下高分子或該等之鹽之1種以上之微胞：蛋白質、白蛋白、聚葡萄糖、Polyfect、聚葡萄胺糖、聚葡萄糖硫酸、例如聚-L-離胺酸、聚乙烯亞胺、聚天冬醯胺酸、苯乙烯馬來酸共聚物、異丙基丙烯醯胺-丙烯醯基吡咯啶酮共聚物、聚乙二醇修飾樹枝狀聚合物、聚乳酸、聚乳酸聚乙醇酸或聚乙二醇化聚乳酸等。
此處，高分子之鹽例如包含金屬鹽、銨鹽、酸加成鹽、有機胺加成鹽、胺基酸加成鹽等。作為金屬鹽，例如可列舉：鋰鹽、鈉鹽、鉀鹽等鹼金屬鹽，鎂鹽、鈣鹽等鹼土金屬鹽，鋁鹽或鋅鹽等。作為銨鹽，例如可列舉銨或四甲基銨等之鹽。作為酸加成鹽，例如可列舉鹽酸鹽、硫酸鹽、硝酸鹽或磷酸鹽等無機酸鹽，及乙酸鹽、馬來酸鹽、富馬酸鹽或檸檬酸鹽等有機酸鹽。作為有機胺加成鹽，例如可列舉嗎啉或哌啶等之加成鹽。作為胺基酸加成鹽，例如可列舉甘胺酸、苯丙胺酸、天冬胺酸、麩胺酸或離胺酸等之加成鹽。
又，本發明之組合物均較佳為含有例如選自糖、肽、核酸及水溶性高分子中之1種以上之物質之脂質衍生物或脂肪酸衍生物、或界面活性劑等，可於複合物中含有，亦可於封入複合物之脂質膜中含有，更佳為於複合物及封入該複合物之脂質膜中均含有。
於本發明之組合物含有選自糖、肽、核酸及水溶性高分子中之1種以上之物質之脂質衍生物或脂肪酸衍生物之情形時，選自糖、肽、核酸及水溶性高分子中之1種以上之物質之脂質衍生物及脂肪酸衍生物之分子總數 相對於本發明之陽離子性脂質及本發明之陽離子性脂質以外之陽離子性脂質之分子總數，較佳為0.05~0.3倍，更佳為0.07~0.25倍，進而較佳為0.1~0.2倍。
作為選自糖、肽、核酸及水溶性高分子中之1種以上之物質之脂質衍生物或脂肪酸衍生物、或界面活性劑，較佳可列舉糖脂質、或水溶性高分子之脂質衍生物或脂肪酸衍生物，更佳可列舉水溶性高分子之脂質衍生物或脂肪酸衍生物。選自糖、肽、核酸及水溶性高分子中之1種以上之物質之脂質衍生物或脂肪酸衍生物、或界面活性劑較佳為分子之一部分具有以例如疏水性親和力、靜電相互作用等而與組合物之其他構成成分結合之性質，其他部分具有以例如親水性親和力、靜電相互作用等而與製造組合物時之溶劑結合之性質，從而具有兩面性之物質。
作為糖、肽或核酸之脂質衍生物或脂肪酸衍生物，例如可列舉：蔗糖、山梨糖醇、乳糖等糖，例如源自酪蛋白之肽、源自蛋白之肽、源自大豆之肽、麩胱苷肽等肽，或例如DNA、RNA、質粒、siRNA、ODN等核酸與上述組合物之定義之中所列舉之中性脂質或本發明之陽離子性脂質或者例如硬脂酸、棕櫚酸、肉豆蔻酸、月桂酸等脂肪酸鍵結而成者等。
又，作為糖之脂質衍生物或脂肪酸衍生物，例如亦包含上述組合物之定義之中所列舉之甘油糖脂質或神經鞘糖脂質等。
作為水溶性高分子之脂質衍生物或脂肪酸衍生物，例如可列舉：聚乙二醇、聚甘油、聚乙烯亞胺、聚乙烯醇、聚丙烯酸、聚丙烯醯胺、寡糖、糊精、水溶性纖維素、聚葡萄糖、硫酸軟骨素、聚甘油、聚葡萄胺糖、聚乙烯吡咯啶酮、聚天冬胺酸醯胺、聚-L-離胺酸、甘露聚糖、聚三葡萄糖、低聚甘油等或該等之衍生物，與上述組合物之定義之中所列舉之 中性脂質或本發明之陽離子性脂質、或者例如硬脂酸、棕櫚酸、肉豆蔻酸或月桂酸等脂肪酸鍵結而成者、該等之鹽等；更佳可列舉聚乙二醇或聚甘油等之脂質衍生物或脂肪酸衍生物及該等之鹽，進而較佳可列舉聚乙二醇之脂質衍生物或脂肪酸衍生物及該等之鹽。
作為聚乙二醇之脂質衍生物或脂肪酸衍生物，例如可列舉：聚乙二醇化脂質[具體而言為聚乙二醇-磷脂醯乙醇胺(更具體而言為1,2-二硬脂醯基-sn-甘油-3-磷酯醯乙醇胺-N-[甲氧基(聚乙二醇)-2000](PEG-DSPE)、1,2-二肉豆蔻醯基-sn-甘油-3-磷酯醯乙醇胺-N-[甲氧基(聚乙二醇)-2000](PEG-DMPE)等)、聚氧乙烯氫化蓖麻油60、蓖麻油聚氧乙烯醚(CREMOPHOR EL)等]、聚乙二醇山梨糖醇酐脂肪酸酯類(具體而言為聚氧乙烯山梨糖醇單油酸酯等)或聚乙二醇脂肪酸酯類等，更佳可列舉聚乙二醇化脂質。
作為聚甘油之脂質衍生物或脂肪酸衍生物，例如可列舉聚甘油化脂質(具體而言為聚甘油-磷脂醯乙醇胺等)或聚甘油脂肪酸酯類等，更佳可列舉聚甘油化脂質。
作為界面活性劑，例如可列舉：聚氧乙烯山梨糖醇單油酸酯(具體而言為聚山梨糖醇酯80等)、聚氧乙烯聚氧丙烯二醇(具體而言為Pluronic F68等)、山梨糖醇酐脂肪酸酯(具體而言為山梨糖醇酐單月桂酸酯、山梨糖醇酐單油酸酯等)、聚氧乙烯衍生物(具體而言為聚氧乙烯氫化蓖麻油60、聚氧乙烯月桂醇等)、甘油脂肪酸酯或聚乙二醇烷基醚等，較佳可列舉聚氧乙烯聚氧丙烯二醇、甘油脂肪酸酯或聚乙二醇烷基醚等。
又，亦可對本發明之組合物中之複合物及脂質膜任意地進行例如利用水溶性高分子等之表面改質[參照拉西奇(D.D.Lasic)、馬丁(F.Martin) 編，「隱形脂質體(Stealth Liposomes)」(美國)，CRC出版有限公司(CRC Press Inc)，1995年，p.93-102]。作為可用於表面改質之水溶性高分子，例如可列舉：聚乙二醇、聚甘油、聚乙烯亞胺、聚乙烯醇、聚丙烯酸、聚丙烯醯胺、寡醣、糊精、水溶性纖維素、葡聚糖、硫酸軟骨素、聚甘油、聚葡萄胺糖、聚乙烯吡咯啶酮、聚天冬胺酸醯胺、聚-L-離胺酸、甘露聚醣、聚三葡萄糖、低聚甘油等，較佳可列舉：葡聚糖、聚三葡萄糖、甘露聚醣、支鏈澱粉或羥基乙基澱粉等。又，表面改質可使用選自糖、肽、核酸及水溶性高分子中之1種以上之物質之脂質衍生物或脂肪酸衍生物(與上述含義相同)等。該表面改質係使本發明之組合物中之複合物及脂質膜含有選自糖、肽、核酸及水溶性高分子中之1種以上之物質之脂質衍生物或脂肪酸衍生物、或界面活性劑的方法之一。
又，亦可任意地進行藉由使標靶化配體與本發明之組合物之脂質成分之極性頭殘基共價鍵結，而直接鍵結於本發明之組合物之表面(參照國際公開第2006/116107號說明書)。
本發明之組合物中之複合物或封入複合物之脂質膜的平均粒徑可視需要而自由選擇，較佳為設為下述平均粒徑。作為調節平均粒徑之方法，例如可列舉：擠壓法、對較大之多層膜脂質體(MLV)等機械性地進行粉碎(具體而言使用高壓勻漿機(Manton Gaulin)、微噴均質機等)的方法[參照穆勒(R.H.Muller)、貝妮塔(S.Benita)、波姆(B.Bohm)編著，「用於難溶性藥劑之乳液與奈米懸浮液(Emulsion and Nanosuspensions for the Formulation of Poorly Soluble Drugs)」，德國，斯圖加特科學出版社(Scientific Publishers Stuttgart)，1998年，p.267-294]等。
本發明之組合物中之複合物之大小較佳為平均粒徑為約5nm~200 nm，更佳為約20nm~150nm，進而較佳為約30nm~100nm。
本發明之組合物(封入複合物之脂質膜)之大小較佳為平均粒徑為約10nm~300nm，更佳為約30nm~200nm，進而較佳為約50nm~150nm。
本發明之組合物中之複合物或封入複合物之脂質膜之平均粒徑可利用例如動態光散射法進行測定。
可藉由將本發明之組合物導入至哺乳類之細胞中而將本發明之組合物中之核酸導入至細胞內。
活體內之本發明之組合物向哺乳類之細胞的導入只要依據可於活體內進行之公知之轉染程序進行即可。例如，藉由將本發明之組合物靜脈內投予包括人類在內之哺乳動物，可傳遞至例如產生腫瘤或炎症之器官或部位，從而於傳遞器官或部位之細胞內導入本發明之組合物中之核酸。作為產生腫瘤或炎症之器官或部位，並無特別限定，例如可列舉胃、大腸、肝臟、肺、脾臟、胰腺、腎臟、膀胱、皮膚、血管、眼球等。又，藉由將本發明之組合物靜脈內投予包括人在內之哺乳動物，可傳遞至例如肝臟、肺、脾臟及/或腎臟，從而於傳遞器官或部位之細胞內導入本發明之組合物中之核酸。肝臟、肺、脾臟及/或腎臟之細胞可為正常細胞、與腫瘤或者炎症相關之細胞或與其他疾病相關之細胞之任一者。
若本發明之組合物中之核酸為具有利用RNA干擾(RNAi)抑制標靶基因表現之作用的核酸，則可於活體內將抑制標靶基因表現之該核酸等導入至哺乳類之細胞內，而抑制標靶基因之表現。投予對象較佳為人類。
又，若本發明中之標靶基因為例如於肝臟、肺、腎臟或脾臟中表現之基因、較佳為於肝臟中表現之基因，則可使用本發明之組合物作為與肝 臟、肺、腎臟或脾臟相關之疾病之治療劑或預防劑、較佳為與肝臟相關之疾病之治療劑或預防劑。
即，本發明亦提供一種將上述說明之本發明之組合物投予哺乳動物之與肝臟、肺、腎臟或脾臟相關之疾病的治療方法。投予對象較佳為人類，更佳為罹患與肝臟、肺、腎臟或脾臟相關之疾病的人類。
又，本發明之組合物於關於與肝臟、肺、腎臟或脾臟相關之疾病之治療劑或預防劑的活體內之藥效評估模型中，亦可用作用以驗證抑制標靶基因之有效性的工具。
本發明之組合物亦可用作基於如下目的之製劑：例如血液成分等活體成分(例如血液、消化道等)中之上述核酸之穩定化、副作用之減輕、或對包含標靶基因之表現部位之組織或器官之藥劑集聚性之增大等。
於使用本發明之組合物作為醫藥品之與肝臟、肺、腎臟或脾臟相關之疾病等之治療劑或預防劑之情形時，作為投予途徑，較理想的是使用治療時最有效果之投予途徑，例如可列舉：口腔內、呼吸道內、直腸內、皮下、肌內或靜脈內等非經口投予或經口投予，較佳可列舉靜脈內投予或肌內投予，更佳可列舉靜脈內投予。
投予量根據投予對象之病狀或年齡、投予途徑等而不同，例如只要以換算為核酸之1天投予量成為約0.1μg~1000mg之方式進行投予即可。
作為適於靜脈內投予或肌內投予之製劑，例如可列舉注射劑，亦可將藉由上述方法製備之組合物之分散液直接以例如注射劑等形態使用，亦可藉由例如過濾、離心分離等將溶劑自該分散液除去而使用，亦可將該分散液冷凍乾燥而使用，及/或將添加有例如甘露醇、乳糖、海藻糖、麥芽糖或甘胺酸等賦形劑之分散液冷凍乾燥而使用。
於注射劑之情形時，較佳為於上述組合物之分散液或者上述除去溶劑或經冷凍乾燥之組合物中，混合例如水、酸、鹼、各種緩衝液、生理食鹽水或胺基酸輸液等而製備注射劑。又，亦可添加例如檸檬酸、抗壞血酸、半胱胺酸或者EDTA等抗氧化劑或甘油、葡萄糖或氯化鈉之類的等張劑等而製備注射劑。又，亦可添加例如甘油等冷凍保存劑而進行冷凍保存。
繼而，藉由實施例、參考例及試驗例具體地說明本發明。但，本發明並不限定於該等實施例、參考例及試驗例。
再者，實施例及參考例所示之質子核磁共振光譜(1H NMR)係於270MHz、300MHz、400MHz或500MHz下測得者，有因化合物及測定條件而未能明確地觀測到交換性質子之情況。再者，作為訊號之多重度之表述，使用通常使用者，所謂br係表示表觀上寬廣之訊號。
[實施例1] 二((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基)胺(化合物B-1)
於氨(東京化成工業公司製造，約2mol/L甲醇溶液，18.0mL，36.0mmol)中，添加甲磺酸(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯酯(Nu-Chek Prep,Inc公司製造，1.55g，4.50mmol)，使用微波反應裝置於130℃下攪拌3小時。於反應液中添加飽和碳酸氫鈉水溶液，利用氯仿萃取5次。合併有機層，利用飽和鹽水進行清洗，利用無水硫酸鎂使之乾燥後進行過濾，於減壓下進行濃縮，藉此獲得(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基胺之粗產物。
於所獲得之粗產物中，添加甲磺酸(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯酯(Nu-Chek Prep,Inc公司製造，1.24g，3.60mmol)及50%氫氧化鈉水溶液(1.44g，18.0mmol)，於油浴上、110℃下攪拌60分鐘。冷卻至室溫 後，利用乙酸乙酯稀釋反應液，利用水、繼而利用飽和鹽水進行清洗，利用無水硫酸鎂使之乾燥後進行過濾，於減壓下進行濃縮。利用矽膠管柱層析法(氯仿/甲醇=100/0~95/5)將所獲得之殘渣純化，藉此獲得化合物B-1(0.838g，產率36.2%)。
ESI-MS m/z：515(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.89(t,J=6.9Hz,6H),1.30(br s,33H),1.41-1.54(m,4H),2.01-2.09(m,8H),2.59(t,J=7.2Hz,4H),2.77(t,J=5.6Hz,4H),5.28-5.43(m,8H)。
[實施例2] 二((Z)-十八碳-9-烯基)胺(化合物B-2)
利用與參考例1相同之方法，使用氨(東京化成工業公司製造，約2mol/L甲醇溶液，12.0mL，24.0mmol)及甲磺酸(Z)-十八碳-9-烯酯(Nu-Chek Prep,Inc公司製造，1.87g，5.40mmol)，而獲得化合物B-2(0.562g，產率36.2%)。
ESI-MS m/z：519(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.88(t,J=6.7Hz,6H),1.29(br s,45H),1.41-1.52(m,4H),1.97-2.05(m,8H),2.58(t,J=7.2Hz,4H),5.28-5.40(m,4H)。
[實施例3] 二((Z)-十六碳-9-烯基)胺(化合物B-3)
利用與參考例1相同之方法，使用氨(SIGMA-ALDRICH公司製造，約7mol/L甲醇溶液，1.66mL，11.6mmol)及甲磺酸(Z)-十六碳-9-烯酯(Nu-Chek Prep,Inc公司製造，0.488g，1.46mmol)，而獲得化合物B-3(0.243g，產率36.0%)。
1H-NMR(CDCl3)δ：0.89(t,J=6.9Hz,6H),1.24-1.37(m,37H), 1.43-1.52(m,4H),1.98-2.05(m,8H),2.58(t,J=7.2Hz,4H),5.31-5.38(m,4H)。
[實施例4] 二((11Z,14Z)-二十碳-11,14-二烯基)胺(化合物B-4)
利用與參考例1相同之方法，使用氨(SIGMA-ALDRICH公司製造，約7mol/L甲醇溶液，1.60mL，11.2mmol)及甲磺酸(11Z,14Z)-二十碳-11,14-二烯酯(Nu-Chek Prep,Inc公司製造，0.521g，1.40mmol)，而獲得化合物B-4(0.292g，產率36.6%)。
1H-NMR(CDCl3)δ：0.89(t,J=6.8Hz,6H),1.24-1.39(m,41H),1.43-1.51(m,4H),2.02-2.08(m,8H),2.58(t,J=7.3Hz,4H),2.77(t,J=6.7Hz,4H),5.30-5.41(m,8H)。
[實施例5] 二((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基)胺基甲酸3-(二甲基胺基)丙酯(化合物A-1)
使實施例1中所獲得之化合物B-1(1.35g，2.63mmol)溶解於氯仿(18mL)中，添加利用依據「美國化學會誌(J.Am.Chem.Soc.)」、1981年、第103卷、p.4194-4199中記載之方法的方法而合成之碳酸3-(二甲基胺基)丙基-4-硝基苯基酯鹽酸鹽(化合物VI-1)(1.20g，3.94mmol)及三乙胺(1.47mL，10.5mmol)，使用微波反應裝置於110℃下攪拌60分鐘。於反應液中添加化合物VI-1(200mg，0.658mmol)，使用微波反應裝置於110℃下攪拌20分鐘。於反應液中添加化合物VI-1(200mg，0.658mmol)，使用微波反應裝置於110℃下攪拌20分鐘。於反應液中添加化合物VI-1(200mg，0.658mmol)，使用微波反應裝置於110℃下攪拌20分 鐘。利用氯仿稀釋反應液，利用1mol/L氫氧化鈉水溶液清洗3次，繼而利用飽和鹽水進行清洗，利用無水硫酸鎂使之乾燥後進行過濾，於減壓進行濃縮。使所獲得之殘渣溶解於少量之正己烷/乙酸乙酯(1/4)中並使之吸附於胺基修飾矽膠墊上，利用正己烷/乙酸乙酯(1/4)使之溶出，於減壓進行濃縮。利用矽膠管柱層析法(氯仿/甲醇=100/0~95/5)將所獲得之殘渣純化，藉此獲得化合物A-1(1.39g，產率82.2%)。
ESI-MS m/z：644(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.89(t,J=6.7Hz,6H),1.29(br s,32H),1.45-1.56(m,4H),1.74-1.85(m,2H),2.00-2.09(m,8H),2.23(s,6H),2.35(t,J=7.4Hz,2H),2.77(t,J=5.8Hz,4H),3.13-3.23(m,4H),4.10(t,J=6.4Hz,2H),5.28-5.43(m,8H)。
[實施例6] 二((Z)-十八碳-9-烯基)胺基甲酸3-(二甲基胺基)丙酯(化合物A-2)
利用與實施例5相同之方法，使用實施例2中所獲得之化合物B-2(0.156g，0.301mmol)代替化合物B-1，而獲得化合物A-2(0.267g，產率88.7%)。
ESI-MS m/z：648(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.88(t,J=6.6Hz,6H),1.28(br s,44H),1.45-1.55(m,4H),1.75-1.85(m,2H),1.97-2.04(m,8H),2.23(s,6H),2.34(t,J=7.6Hz,2H),3.13-3.24(m,4H),4.10(t,J=6.4Hz,2H),5.28-5.40(m,4H)。
[實施例7] 二((Z)-十六碳-9-烯基)胺基甲酸3-(二甲基胺基)丙酯(化合物A-3)
利用與實施例5相同之方法，使用實施例3中所獲得之化合物B-3(0.164g，0.355mmol)代替化合物B-1，而獲得化合物A-3(0.116g，產 率55.2%)。
ESI-MS m/z：592(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.88(t,J=6.9Hz,6H),1.21-1.38(m,36H),1.47-1.54(m,4H),1.75-1.83(m,2H),2.00-2.04(m,8H),2.22(s,6H),2.34(t,J=7.4Hz,2H),3.11-3.24(m,4H),4.10(t,J=6.4Hz,2H),5.30-5.38(m,4H)。
[實施例8] 二((11Z,14Z)-二十碳-11,14-二烯基)胺基甲酸3-(二甲基胺基)丙酯(化合物A-4)
利用與實施例5相同之方法，使用實施例4中所獲得之化合物B-4(0.288g，0.505mmol)代替化合物B-1，而獲得化合物A-4(0.290g，產率82.2%)。
ESI-MS m/z：700(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.89(t,J=6.8Hz,6H),1.21-1.40(m,40H),1.46-1.54(m,4H),1.76-1.83(m,2H),2.02-2.08(m,8H),2.23(s,6H),2.35(t,J=7.6Hz,2H),2.77(t,J=6.7Hz,4H),3.10-3.24(m,4H),4.10(t,J=6.4Hz,2H),5.30-5.41(m,8H)。
[實施例9] 二((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基)胺基甲酸2-(二甲基胺基)乙酯(化合物A-5)
利用與實施例5相同之方法，使用實施例1中所獲得之化合物B-1(0.215g，0.418mmol)、及代替化合物VI-1之碳酸2-(二甲基胺基)乙基-4-硝基苯基酯鹽酸鹽(化合物VI-2)(0.162g，0.557mmol)，而獲得化合物A-5(0.184g，產率70.0%)。
ESI-MS m/z：630(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.89(t,J=6.8 Hz,6H),1.12-1.39(m,32H),1.45-1.54(m,4H),2.00-2.07(m,8H),2.28(s,6H),2.57(t,J=7.2Hz,2H),2.77(t,J=6.7Hz,4H),3.11-3.24(m,4H),4.17(t,J=6.7Hz,2H),5.28-5.41(m,8H)。
[參考例1]5-胺基-N,N-二((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基)戊醯胺(化合物XI-1)
使實施例1中所獲得之化合物B-1(150mg，0.292mmol)溶解於氯仿(4mL)中，添加5-(第三丁氧基羰基胺基)戊酸(東京化成工業公司製造，95mg，0.438mmol)、二異丙基乙基胺(0.255mL，1.46mmol)及HATU(O-(7-偶氮苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯)(ALDRICH公司製造，222mg，0.584mmol)，於室溫下攪拌4小時。於反應混合物中添加飽和碳酸氫鈉水溶液，利用乙酸乙酯萃取水層。利用水、飽和鹽水清洗有機層，利用無水硫酸鎂使之乾燥後進行過濾，於減壓進行濃縮。利用矽膠管柱層析法(氯仿/甲醇=100/0~97/3)將所獲得之殘渣純化，藉此獲得5-(二((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基)胺基)-5-側氧基戊基胺基甲酸第三丁酯。
使5-(二((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基)胺基)-5-側氧基戊基胺基甲酸第三丁酯溶解於二氯甲烷(4mL)中，添加三氟乙酸(0.450mL，5.84mmol)，於室溫下攪拌4小時。於反應混合物中添加飽和碳酸氫鈉水溶液，利用氯仿萃取水層。利用飽和鹽水清洗有機層，利用無水硫酸鎂使之乾燥後進行過濾，於減壓進行濃縮。利用矽膠管柱層析法(氯仿/甲醇=100/0~90/10)將所獲得之殘渣純化，藉此獲得化合物XI-1(124mg，產率96.1%)。
ESI-MS m/z：614(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.89(t,J=6.8 Hz,6H),1.28-1.38(m,32H),1.43-1.57(m,6H),1.63-1.73(m,2H),2.05(q,J=7.0Hz,8H),2.30(t,J=7.2Hz,2H),2.71(t,J=7.2Hz,2H),2.77(t,J=6.2Hz,4H),3.19(t,J=7.7Hz,2H),3.28(t,J=7.7Hz,2H),5.28-5.43(m,8H)。
[參考例2]5-(二甲基胺基)-N,N-二((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基)戊醯胺(化合物XI-2)
使參考例1中所獲得之化合物XI-1(90.0mg，0.147mmol)溶解於1,2-二氯乙烷(2mL)與甲醇(2mL)中，添加甲醛(0.219mL，2.94mmol)及三乙醯氧基硼氫化鈉(Acros Organics公司製造，311mg，1.47mmol)，於室溫下攪拌5小時。於反應溶液中添加飽和碳酸氫鈉水溶液，利用乙酸乙酯萃取水層。利用飽和氯化鈉水溶液清洗有機層，利用無水硫酸鎂使之乾燥後進行過濾，於減壓進行濃縮。利用矽膠管柱層析法(氯仿/甲醇=100/0~75/25)將所獲得之殘渣純化，藉此獲得化合物XI-2(88.2mg，產率93.9%)。
ESI-MS m/z：642(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.89(t,J=7.0Hz,6H),1.26-1.38(m,32H),1.46-1.71(m,8H),2.05(q,J=7.0Hz,8H),2.22(s,6H),2.29(q,J=7.0Hz,4H),2.77(t,J=6.2Hz,4H),3.19(t,J=7.9Hz,2H),3.28(t,J=7.7Hz,2H),5.28-5.42(m,8H)。
[參考例3]二((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基)胺基甲酸3-胺基丙酯(化合物XI-3)
使實施例1中所獲得之化合物B-1(146mg，0.284mmol)溶解於N,N-二甲基甲醯胺(5mL)中，添加利用依據「美國化學會誌(J.Am.Chem.Soc.)」、1981年、第103卷、p.4194-4199中記載之方法的方法而合成之3- ((4-硝基苯氧基)羰氧基)丙基胺基甲酸第三丁酯(145mg，0.426mmol)及三乙胺(0.158mL，1.14mmol)，於室溫下攪拌一整夜。於反應混合物中添加水，利用乙酸乙酯萃取水層。利用水、飽和鹽水清洗有機層，利用無水硫酸鎂使之乾燥後進行過濾，於減壓進行濃縮。利用矽膠管柱層析法(氯仿/甲醇=100/0~98/2)將所獲得之殘渣純化，藉此獲得二((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基)胺基甲酸3-((N-丁氧基羰基)胺基)丙酯。
使二((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基)胺基甲酸3-((N-丁氧基羰基)胺基)丙酯溶解於二氯甲烷(4mL)中，添加三氟乙酸(0.242mL，3.13mmol)，於室溫下攪拌8小時。於反應混合物中添加飽和碳酸氫鈉水溶液，利用氯仿萃取水層。利用飽和鹽水清洗有機層，利用無水硫酸鎂使之乾燥後進行過濾，於減壓進行濃縮。利用矽膠管柱層析法(NH矽膠，氯仿/甲醇=100/0~90/10)將所獲得之殘渣純化，藉此獲得化合物XI-3(75.6mg，產率43.3%)。
ESI-MS m/z：616(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.89(t,J=6.8Hz,6H),1.26-1.38(m,32H),1.46-1.54(m,4H),1.73-1.82(m,2H),2.05(q,J=6.6Hz,8H),2.76-2.80(m,6H),3.18(br s,4H),4.15(t,J=6.2Hz,2H),5.29-5.43(m,8H)。
[參考例4]碳酸2-(1-甲基吡咯啶-2-基)乙基-4-硝基苯基酯鹽酸鹽(化合物VI-3)
於氯甲酸4-硝基苯酯(東京化成工業公司製造，1.761g，8.56mmol)之二乙醚(20mL)溶液中，添加2-(1-甲基吡咯啶-2-基)乙醇(東京化成工業公司製造，1.0mL，7.13mmol)之二乙醚(20mL)溶液，於室溫下攪拌一整夜。將反應液減壓濃縮，由乙醇/二乙醚(1/1)使所獲得之殘渣結晶化， 並進行濾取，藉此獲得化合物VI-3(1.27g，產率54%)。
1H-NMR(DMSO-d6)δ：1.59-1.77(m,2H),1.82-2.09(m,3H),2.15-2.26(m,1H),2.76(s,3H),2.93-3.05(m,2H),3.61-3.20(m,3H),4.80(br s,1H),6.95(d,J=9.2Hz,2H),8.11(d,J=9.2Hz,2H)。
[參考例5]碳酸4-硝基苯基-3-(哌啶-1-基)丙基酯鹽酸鹽(化合物VI-4)
於氯甲酸4-硝基苯酯(1.58g，7.67mmol)之二乙醚(32mL)溶液中，添加3-(哌啶-1-基)丙烷-1-醇(SIGMA-ALDRICH公司製造，1.00mL，6.39mmol)，於室溫下攪拌一整夜。將反應液減壓濃縮，由乙醇使所獲得之殘渣結晶化，並進行濾取，藉此獲得化合物VI-4(1.86g，產率84%)。
ESI-MS m/z：309(M+H)+；1H-NMR(DMSO-d6)δ：1.28-1.49(m,1H),1.62-1.89(m,5H),2.10-2.26(m,2H),2.76-2.96(m,2H),3.04-3.19(m,2H),3.36-3.49(m,2H),4.33(t,J=6.1Hz,2H),7.58(d,J=9.2Hz,2H),8.33(d,J=9.2Hz,2H),10.37(br s,1H)。
[參考例6]碳酸4-硝基苯基-3-(吡咯啶-1-基)丙酯鹽酸鹽(化合物VI-5)
於氯甲酸4-硝基苯酯(596mg，2.84mmol)之二乙醚(10mL)溶液中，添加3-(吡咯啶-1-基)丙烷-1-醇(ABCR公司製造，386mg，2.84mmol)二乙醚(10mL)溶液，於室溫下攪拌2小時。將反應液減壓濃縮，由乙醇使所獲得之殘渣結晶化，並進行濾取，藉此獲得化合物VI-5(498mg，產率53%)。
1H-NMR(DMSO-d6)δ：1.76-1.84(m,2H),1.85-2.00(m,4H),3.11-3.16(m,2H),3.30-3.44(m,4H),3.47(t,J=6.0Hz,2H),4,77(br s,1H),6.95(d,J=9.2Hz,2H),8.11(d,J=9.2Hz,2H)。
[實施例10] 二((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基)胺基甲酸2-(1-甲基吡咯啶-2-基)乙酯(化合物A-6)
使實施例1中所獲得之化合物B-1(0.161g，0.314mmol)溶解於乙腈(3.0mL)中，添加參考例4中所獲得之化合物VI-3(0.156g，0.470mmol)及三乙胺(0.219mL，1.57mmol)，於80℃下攪拌2小時。利用乙酸乙酯稀釋反應液，利用水進行清洗，利用無水硫酸鎂使之乾燥後進行過濾，於減壓進行濃縮。利用胺基矽膠管柱層析法(正己烷/乙酸乙酯=80/20)將所獲得之殘渣純化，藉此獲得化合物A-6(0.172g，產率82%)。
ESI-MS m/z：670(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.89(t,J=6.9Hz,6H),1.20-1.40(m,32H),1.45-1.57(m,6H),1.62-1.83(m,2H),1.94-2.18(m,12H),2.31(s,3H),2.77(t,J=6.7Hz,4H),3.03-3.26(m,5H),4.06-4.17(m,2H),5.29-5.42(m,8H)。
[實施例11] 二((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基)胺基甲酸3-(哌啶-1-基)丙酯(化合物A-7)
利用與實施例5相同之方法，使用參考例5中所獲得之化合物VI-4代替化合物VI-1，而獲得化合物A-7(0.387g，產率81%)。
ESI-MS m/z：684(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.89(t,J=6.9Hz,6H),1.21-1.62(m,42H),1.79-1.86(m,2H),2.02-2.08(m,8H),2.32-2.42(m,6H),2.77(t,J=6.7Hz,4H),3.10-3.43(m,4H),4.09(t,J=6.4Hz,2H),5.29-5.42(m,8H)。
[實施例12] 二((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基)胺基甲酸3-(吡咯啶-1-基)丙酯(化合物A-8)
利用與實施例10相同之方法，使用參考例6中所獲得之化合物VI-5(0.168g，0.508mmol)代替化合物VI-3，而獲得化合物A-8(0.225g，產率99%)。
ESI-MS m/z：670(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.89(t,J=6.9Hz,6H),1.21-1.40(m,32H),1.46-1.55(m,4H),1.76-1.80(m,4H),1.82-1.89(m,2H),2.01-2.08(m,8H),2.47-2.55(m,6H),2.77(t,J=6.7Hz,4H),3.11-3.24(m,4H),4.11(t,J=6.4Hz,2H),5.29-5.42(m,8H)。
[參考例7]2-硝基-N-((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基)苯磺醯胺(化合物IId-1)
於甲磺酸(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯酯(Nu-Chek Prep,Inc公司製造，2.85g，8.27mmol)之乙腈(30ml)溶液中，添加碳酸銫(6.74g，20.67mmol)、四丁基碘化銨(東京化成工業公司製造，3.05g，8.27mmol)及N-(第三丁氧基羰基)-2-硝基苯磺醯胺(東京化成工業公司製造，2.50g，8.27mmol)，於加熱回流下使之反應3小時。使反應液冷卻至室溫，添加水，利用乙酸乙酯進行萃取。利用無水硫酸鎂使有機層乾燥後進行過濾，於減壓進行濃縮。利用管柱層析法(正己烷/乙酸乙酯=91/9~70/30)將殘渣純化，而獲得(2-硝基苯基)磺醯基((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯-1-基)胺基甲酸第三丁酯(3.21g，產率70.5%)。
於(2-硝基苯基)磺醯基((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯-1-基)胺基甲酸第三丁酯(3.21g，5.83mmol)之二氯甲烷(22.5ml)溶液中，添加三氟乙酸(9.63ml，126mmol)，於室溫下攪拌0.5小時。於反應液中添加二氯甲烷及氫氧化鈉水溶液(1mol/L，100mL)，進而添加飽和碳酸氫鈉水溶液，將水層之pH值調整為8以上。利用二氯甲烷萃取所獲得之混合物，利用飽 和鹽水進行清洗，利用無水硫酸鎂使之乾燥後進行過濾，於減壓進行濃縮。利用管柱層析法(正己烷/氯仿=50/50~0/100)將殘渣純化，而獲得化合物IId-1(2.48g，產率94%)。
ESI-MS m/z：451(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.89(t,J=7.0Hz,3H),1.22-1.39(m,16H),1.52(m,2H),2.01-2.05(m,4H),2.77(t,J=6.6Hz,2H),3.09(q,J=6.7Hz,2H),5.23(m,1H),5.31-5.42(m,4H),7.71-7.76(m,2H),7.78-7.87(1H),8.13-8.15(m,1H)。
[實施例13] 十二烷基((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯-1-基)胺(化合物B-5)
於參考例7中所獲得之化合物IId-1(0.714g，1.584mmol)及1-溴十二烷(東京化成工業製造，0.474g，1.90mmol)之乙腈(6ml)溶液中，添加四丁基碘化銨(東京化成工業公司製造，0.585g，1.58mmol)及碳酸銫(1.03g，3.17mmol)，於60℃下攪拌1小時。於反應液中添加水，利用正己烷萃取3次。利用管柱層析法(正己烷/乙酸乙酯=94/6~84/16)將萃取液純化，而獲得N-十二烷基-2-硝基-N-((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯-1-基)苯磺醯胺(0.750g，產率76%)。
於N-十二烷基-2-硝基-N-((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯-1-基)苯磺醯胺(0.748g，1.21mmol)之乙腈(7ml)溶液中，添加1-十二烷硫醇(東京化成工業公司製造，0.611g，3.02mmol)及1,8-二氮雜雙環[5.4.0]-7-十一烯(Nacalai Tesque公司製造，0.460g，3.02mmol)，於60℃下攪拌1小時攪拌。於反應液中添加水，利用乙酸乙酯萃取2次。合併有機層，利用飽和鹽水進行清洗，利用無水硫酸鎂使之乾燥後進行過濾，於減壓進行濃縮。利用管柱層析法(正己烷/乙酸乙酯=80：20、繼而氯仿/甲醇=100/0 ~88/12)將殘渣純化，藉此獲得化合物B-5(0.534g，定量之產率)。
ESI-MS m/z：434(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.88(t,J=6.9Hz,3H),0.89(t,J=6.9Hz,3H),1.24-1.38(m,35H),1.49-1.54(m,4H),2.05(q,J=7.0Hz,4H),2.62(t,J=7.4Hz,4H),2.77(t,J=6.8Hz,2H),5.30-5.41(m,4H)。
[實施例14] 癸基((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯-1-基)胺(化合物B-6)
利用與實施例13相同之方法，使用參考例7中所獲得之化合物IId-1(0.619g，1.37mmol)、及代替1-溴十二烷之1-溴癸烷(東京化成工業公司製造，0.365g，1.65mmol)，而獲得化合物B-6(0.423g，產率76%)。
ESI-MS m/z：406(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.88(t,J=7.1Hz,3H),0.89(t,J=6.9Hz,3H),1.25-1.38(m,31H),1.46-1.50(m,4H),2.05(q,J=7.0Hz,4H),2.59(t,J=7.2Hz,4H),2.77(t,J=6.9Hz,2H),5.31-5.40(m,4H)。
[實施例15] ((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯-1-基)(辛基)胺(化合物B-7)
利用與實施例13相同之方法，使用參考例7中所獲得之化合物IId-1(0.714g，1.58mmol)、及代替1-溴十二烷之1-溴辛烷(東京化成工業公司製造，0.367g，1.90mmol)，而獲得化合物B-7(0.519g，產率87%)。
ESI-MS m/z：378(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.88(t,J=7.1Hz,3H),0.89(t,J=6.9Hz,3H),1.24-1.39(m,27H),1.48-1.54(m,4H),2.05(q,J=7.0Hz,4H),2.62(t,J=7.4Hz,4H),2.77(t,J=6.6Hz,2H),5.30-5.41(m,4H)。
[實施例16] 十二烷基((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基)胺基甲酸3-(二甲基胺基)丙酯(化合物A-9)
利用與實施例5相同之方法，使用實施例13中所獲得之化合物B-5(0.260g，0.600mmol)代替化合物B-1，而獲得化合物A-9(0.309g，產率91%)。
ESI-MS m/z：563(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.88(t,J=6.9Hz,3H),0.89(t,J=6.9Hz,3H),1.23-1.38(m,34H),1.48-1.53(m,4H),1.77-1.82(m,2H),2.05(q,J=7.1Hz,4H),2.23(s,6H),2.34(t,J=7.6Hz,2H),2.77(t,J=6.6Hz,2H),3.13-3.22(m,4H),4.10(t,J=6.5Hz,2H),5.30-5.41(m,4H)。
[實施例17] 癸基((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基)胺基甲酸3-(二甲基胺基)丙酯(化合物A-10)
利用與實施例5相同之方法，使用實施例14中所獲得之化合物B-6(0.185g，0.456mmol)代替化合物B-1，而獲得化合物A-10(0.228g，產率93%)。
ESI-MS m/z：535(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.88(t,J=6.8Hz,3H),0.89(t,J=6.7Hz,3H),1.24-1.38(m,30H),1.48-1.53(m,4H),1.77-1.82(m,2H),2.05(q,J=7.0Hz,4H),2.22(s,6H),2.34(t,J=7.5Hz,2H),2.77(t,J=6.8Hz,2H),3.14-3.22(m,4H),4.10(t,J=6.4Hz,2H),5.31-5.40(m,4H)。
[實施例18] ((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基)(辛基)胺基甲酸3-(二甲基胺基)丙酯(化合物A-11)
利用與實施例5相同之方法，使用實施例15中所獲得之化合物B-7(0.227g，0.600mmol)代替化合物B-1，而獲得化合物A-11(0.275g，產率90%)。
ESI-MS m/z：507(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.88(t,J=6.9Hz,3H),0.89(t,J=6.9Hz,3H),1.22-1.39(m,26H),1.47-1.54(m,4H),1.76-1.82(m,2H),2.05(q,J=6.0Hz,4H),2.23(s,6H),2.34(t,J=7.6Hz,2H),2.77(t,J=6.6Hz,2H),3.12-3.22(m,4H),4.10(t,J=6.5Hz,2H),5.30-5.41(m,4H)。
[參考例8]甲磺酸2-((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯氧基)乙酯(化合物IIIc-1)
於甲磺酸(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯-1-酯(983mg，2.85mmol)中，添加乙二醇(3.16ml，57.1mmol)及1,4-二烷(5ml)，於加熱回流下攪拌1天。使反應液冷卻至室溫後，添加氫氧化鈉水溶液(0.5mol/L)，利用正己烷萃取2次。合併有機層，利用飽和鹽水進行清洗，利用無水硫酸鎂使之乾燥後進行過濾，於減壓進行濃縮。利用管柱層析法(氯仿100%)將殘渣純化，藉此獲得2-((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯氧基)乙醇(668mg，產率75%)。
於2-((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯氧基)乙醇(660mg，2.13mmol)及三乙胺(0.444mL，3.19mmol)之二氯甲烷(9ml)溶液中，於0℃下添加甲磺酸酐(SIGMA-ALDRICH公司製造，0.247ml，3.19mmol)，於室溫下攪拌40分鐘。於反應液中添加水，利用氯仿進行萃取。利用鹽酸(1mol/L)、飽和碳酸氫鈉水溶液、飽和鹽水清洗有機層，利用無水硫酸鎂使 之乾燥後進行過濾，於減壓下進行濃縮，而獲得化合物IIIc-1。
[實施例19] (9Z,12Z)-N-(2-((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯氧基)乙基)十八碳-9,12-二烯-1-胺(化合物B-8)
利用與實施例13相同之方法，使用參考例7中所獲得之化合物IId-1(0.798g，1.77mmol)、及代替1-溴十二烷之參考例8中所獲得之化合物IIIc-1(0.826g，2.13mmol)，而獲得化合物B-8(0.676g，產率68%)。
ESI-MS m/z：558(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.89(t,J=6.9Hz,6H),1.27-1.38(m,32H),1.46-1.52(m,2H),1.54-1.60(m,3H),2.05(q,J=7.0Hz,8H),2.61(t,J=7.3Hz,2H),2.77(t,J=5.5Hz,6H),3.42(t,J=6.8Hz,2H),3.52(t,J=5.4Hz,2H),5.30-5.41(m,8H)。
[實施例20] ((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基)(2-((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯氧基)乙基)胺基甲酸3-(二甲基胺基)丙酯(化合物A-12)
利用與實施例5相同之方法，使用實施例19中所獲得之化合物B-8(0.184g，0.330mmol)代替化合物B-1，而獲得化合物A-12(0.208g，產率92%)。
ESI-MS m/z：687(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.89(t,J=6.9Hz,6H),1.25-1.38(m,32H),1.50-1.57(m,4H),1.77-1.83(m,2H),2.05(q,J=7.0Hz,8H),2.22(s,6H),2.34(t,J=7.4Hz,2H),2.77(t,J=6.6Hz,4H),3.23-3.54(m,8H),4.11(t,J=6.5Hz,2H),5.30-5.41(m,8H)。
[參考例9]N,N-雙(2-((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯氧基)乙基)胺(化合物XI-4)
於氫化鈉(油性，60%，1.69g，42.2mmol)中，一面攪拌一面緩慢地添加N-苄基二乙醇胺(東京化成工業公司製造，1.65g，8.44mmol)之甲苯(10mL)溶液後，滴加甲磺酸(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯酯(Nu-Chek Prep,Inc公司製造，6.69g，19.4mmol)之甲苯(10mL)溶液。於加熱回流下攪拌所獲得之混合物4小時。使之冷卻至室溫後，利用乙醇停止反應。於所獲得之混合物中添加飽和鹽水，利用乙酸乙酯萃取2次。合併有機層，利用無水硫酸鎂使之乾燥後，於減壓進行濃縮。利用矽膠管柱層析法(氯仿/甲醇=100/0~99/1)將殘渣純化，藉此獲得N-苄基-N,N-雙(2-((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯氧基)乙基)胺(4.01g，產率69%)。
使N-苄基-N,N-雙(2-((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯氧基)乙基)胺(4.01g，5.89mmol))溶解於1,2-二氯乙烷(29mL)中，添加氯甲酸1-氯乙酯(東京化成工業公司製造，1.90mL，17.4mmol)，於130℃下攪拌1小時。於反應溶液中添加甲醇(29mL)，於130℃下進而攪拌1小時。使之冷卻至室溫後，於反應液中添加飽和碳酸氫鈉水溶液，利用氯仿萃取2次。合併有機層，利用飽和鹽水進行清洗，利用無水硫酸鎂使之乾燥後，於減壓進行濃縮。利用胺基矽膠管柱層析法(正己烷/乙酸乙酯=90/10~75/25)將殘渣純化，藉此獲得化合物XI-4(5.56g，產率92%)。
ESI-MS m/z：621(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.89(t,J=7.0Hz,6H),1.27-1.30(m,33H),1.53-1.59(m,4H),2.05(q,J=7.1Hz,8H),2.77(t,J=6.8Hz,4H),2.80(t,J=5.4Hz,4H),3.42(t,J=6.8Hz,4H),3.53(t,J=5.4Hz,4H),5.30-5.41(m,8H)。
[參考例10]雙(2-((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯氧基)乙基)胺基甲酸3-(二甲基胺基)丙酯(化合物XI-5)
利用與實施例5相同之方法，使用參考例9中所獲得之化合物XI-4(1.20g，1.99mmol)代替化合物B-1，而獲得化合物XI-5(1.32g，產率91%)。
ESI-MS m/z：732(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.89(t,J=7.0Hz,6H),1.27-1.30(m,30H),1.51-1.57(m,4H),1.77-1.83(m,4H),2.05(q,J=7.0Hz,8H),2.23(s,6H),2.34(t,J=7.5Hz,2H),2.77(t,J=6.7Hz,4H),3.38-3.54(m,12H),4.12(t,J=6.5Hz,2H),5.30-5.41(m,8H)。
[參考例11]3-(二((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基)胺基)丙酸乙酯(化合物XI-6)
使實施例1中所獲得之化合物B-1(0.788g，1.53mmol)溶解於乙醇(8mL)中，添加丙烯酸乙酯(東京化成工業公司製造，1.67mL，15.3mmol)及乙醇鈉(和光純藥工業公司製造，0.0520g，0.767mmol)，於加熱回流下攪拌3小時。將反應液減壓濃縮後，利用矽膠管柱層析法(正己烷/乙酸乙酯=85/15)將所獲得之殘渣純化，藉此獲得化合物XI-6(0.699g，產率74%)。
ESI-MS m/z：615(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.89(t,J=6.9Hz,6H),1.21-1.45(m,39H),2.02-2.08(m,8H),2.35-2.44(m,6H),2.75-2.80(m,6H),4.12(q,J=7.0Hz,2H),5.30-5.42(m,8H)。
[實施例21] 3-(二((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基)胺基)丙烷-1-醇(化合物C-1)
使參考例11中所獲得之化合物XI-6(0.199g，0.324mmol)溶解於四氫呋喃(2mL)中，於冰浴冷卻下，添加氫化鋰鋁(純正化學公司製造，0.012g，0.324mmol)，並攪拌3小時。於反應液中添加水(0.0600mL， 3.33mmol)及氟化鈉(Nacalai Tesque公司製造，0.408g，9.72mmol)，於室溫下攪拌0.5小時。藉由矽藻土過濾除去不溶物。使濾液濃縮後，利用矽膠管柱層析法(氯仿/甲醇=98/2)將其純化，藉此獲得化合物C-1(0.181g，產率98%)。
ESI-MS m/z：573(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.89(t,J=6.9Hz,6H),1.21-1.40(m,32H),1.42-1.51(m,4H),1.64-1.71(m,2H),2.02-2.08(m,8H),2.40(t,J=7.3Hz,4H),2.64(t,J=5.3Hz,2H),2.77(t,J=6.7Hz,4H),3.79(t,J=5.3Hz,2H),5.30-5.42(m,8H)。
[參考例12]3-(二((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基)胺基)丙烷-1,2-二醇(化合物XI-7)
使實施例1中所獲得之化合物B-1(0.228g，0.444mmol)溶解於二氯乙烷(2mL)中，添加甲醇(2mL)及2,3-二羥基丙醛(Nacalai Tesque公司製造，0.400g，4.44mmol)，於室溫下攪拌0.5小時。於反應液中添加三乙醯氧基硼氫化鈉(東京化成工業公司製造，0.470g，2.22mmol)，於室溫下攪拌一整夜。於反應液中添加2,3-二羥基丙醛(0.400g，4.44mmol)，於室溫下攪拌3小時。於反應液中添加三乙醯氧基硼氫化鈉(0.470g，2.22mmol)，於室溫下攪拌一整夜。於反應液中添加飽和碳酸氫鈉水溶液，利用氯仿萃取2次。合併有機層，利用飽和鹽水進行清洗，利用無水硫酸鎂使之乾燥後進行過濾，於減壓進行濃縮。利用胺基矽膠管柱層析法(正己烷/乙酸乙酯=50/50)將所獲得之殘渣純化，藉此獲得化合物XI-7(0.0449g，產率17%)。
ESI-MS m/z：589(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.89(t,J=6.9Hz,6H),1.19-1.51(m,36H),2.02-2.08(m,8H),2.38-2.62(m,6H),2.77 (t,J=6.7Hz,4H),3.46-3.50(m,1H),3.69-3.77(m,2H),5.30-5.42(m,8H)。
[參考例13]3-((3R,4R)-3,4-雙((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯氧基)吡咯啶-1-基)丙烷-1-醇(化合物XI-8)
化合物XI-8係利用國際公開第2011/136368號說明書中記載之方法進行合成。
[實施例22] 二((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基)胺基甲酸4-(二甲基胺基)丁酯(化合物A-13) 步驟1
於氯甲酸4-硝基苯酯(0.867g，4.21mmol)之二氯甲烷(20mL)溶液中，添加4-(第三丁基二甲基矽烷基)氧基-1-丁醇(SIGMA-ALDRICH公司製造，1.0mL，4.21mmol)及三乙胺(0.881mL，6.32mmol)，於室溫下攪拌1小時。於反應液中添加飽和碳酸氫鈉水溶液，利用氯仿萃取2次。利用無水硫酸鎂使有機層乾燥後進行過濾，於減壓進行濃縮。利用矽膠管柱層析法(正己烷/乙酸乙酯=90/10)將所獲得之殘渣純化，藉此獲得碳酸4-(第三丁基二甲基矽烷基氧基)丁基-4-硝基苯基酯(1.44g，產率92%)。
步驟2
利用與實施例10相同之方法，使用步驟1中所獲得之碳酸4-(第三丁基二甲基矽烷基氧基)丁基-4-硝基苯基酯(0.640g，1.733mmol)代替化合物VI-3，而獲得二((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基)胺基甲酸4-(第三丁基二甲基矽烷基氧基)丁酯之粗純化物。使所獲得之二((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基)胺基甲酸4-(第三丁基二甲基矽烷基氧基)丁酯之粗純化物溶解於四 氫呋喃(10mL)中，添加四丁基氟化銨(東京化成工業公司製造，約1mol/L之四氫呋喃溶液，2.14mL，2.14mmol)，於室溫下攪拌1小時。於反應液中添加四正丁基氟化銨(約1mol/L之四氫呋喃溶液，2.14mL，2.14mmol)，於室溫下攪拌2小時後，於50℃下攪拌1小時。於反應液中添加飽和碳酸氫鈉水溶液，利用乙酸乙酯萃取2次。利用無水硫酸鎂使有機層乾燥後進行過濾，於減壓進行濃縮。利用矽膠管柱層析法(氯仿/甲醇=95/5)將所獲得之殘渣純化，藉此獲得二((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基)胺基甲酸4-羥基丁酯(0.652g，產率73%)。
步驟3
於步驟2中所獲得之二((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基)胺基甲酸4-羥基丁酯(0.193g，0.306mmol)之二氯甲烷(2mL)溶液中，於冰浴冷卻下添加甲磺醯氯(純正化學公司製造，0.0360mL，0.460mmol)及三乙胺(0.0930mL，0.919mmol)，於0℃下攪拌30分鐘。於反應液中添加飽和碳酸氫鈉水溶液，利用氯仿萃取2次。利用無水硫酸鎂使有機層乾燥後進行過濾，於減壓進行濃縮。使所獲得之殘渣溶解於四氫呋喃(1mL)中，添加二甲基胺(ALDRICH公司製造，約2mol/L之四氫呋喃溶液，1.53mL，3.06mmol)，使用微波反應裝置於100℃下攪拌1小時後，使用微波反應裝置於130℃下攪拌1小時。將反應液減壓濃縮，利用胺基矽膠管柱層析法(正己烷/乙酸乙酯=80/20)將所獲得之殘渣純化，藉此獲得化合物A-13(0.159g，產率79%)。
ESI-MS m/z：658(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.90(q,J=6.5Hz,6H),1.20-1.38(m,32H),1.45-1.56(m,6H),1.61-1.69(m,2H),2.01-2.08(m,8H),2.21(s,6H),2.28(t,J=7.6Hz,2H),2.77(t,J=6.6 Hz,4H),3.12-3.23(m,4H),4.07(t,J=6.6Hz,2H),5.29-5.42(m,8H)。
[參考例14]碳酸(1-甲基哌啶-4-基)甲基-4-硝基苯基酯鹽酸鹽(化合物VI-6)
於氯甲酸4-硝基苯酯(1.50g，7.28mmol)之四氫呋喃(32mL)溶液中，添加1-甲基-4-哌啶甲醇(東京化成工業公司製造，1.0mL，7.28mmol)，於室溫下攪拌2小時。藉由將所析出結晶濾取而獲得化合物VI-6(1.55g，產率64%)。
ESI-MS m/z：295(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：1.93-2.19(m,4H),2.68-2.82(m,3H),3.51-3.62(m,5H),4.21(d,J=6.0Hz,2H),7.38(d,J=9.1Hz,2H),8.27(d,J=9.1Hz,2H),12.44(br s,1H)。
[參考例15]碳酸(1-甲基哌啶-3-基)甲基-4-硝基苯基酯鹽酸鹽(化合物VI-7)
利用與參考例14相同之方法，使用1-甲基-3-哌啶甲醇(東京化成工業公司製造，1.0mL，7.21mmol)代替1-甲基-4-哌啶甲醇，而獲得化合物VI-7(2.32g，產率97%)。
ESI-MS m/z：295(M+H)+.
[參考例16]碳酸(1-甲基哌啶-2-基)甲基-4-硝基苯基酯鹽酸鹽(化合物VI-8)
利用與參考例14相同之方法，使用1-甲基-2-哌啶甲醇(東京化成工業公司製造，1.0mL，7.43mmol)代替1-甲基-4-哌啶甲醇，而獲得化合物VI-8(2.37g，產率96%)。
1H-NMR(CDCl3)δ：1.51-1.63(m,1H),1.81-2.38(m,5H),2.85-2.99(m,4H),3.21-3.30(m,1H),3.49-3.60(m,1H),4.66(dd,J=13.1,2.4Hz,1H),4.78-4.86(m,1H),7.47(d,J=9.1Hz,2H),8.28(d,J=9.1Hz,2H),12.40(br s,1H)。
[參考例17]碳酸3-(氮雜環庚烷-1-基)丙基-4-硝基苯基酯鹽酸鹽(化合物VI-9)
利用與參考例14相同之方法，使用3-(氮雜環庚烷-1-基)丙醇(CHEMBRIDGE公司製造，0.700g，4.45mmol)代替1-甲基-4-哌啶甲醇，而獲得化合物VI-9(1.47g，產率92%)。
ESI-MS m/z：323(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：1.60-1.75(m,2H),1.79-1.94(m,5H),2.15-2.27(m,2H),2.44-2.53(m,2H),2.90-3.02(m,2H),3.14-3.24(m,2H),3.55-3.65(m,2H),4.41(t,J=5.9Hz,2H),7.37-7.43(m,2H),8.25-8.32(m,2H),12.48(br s,1H)。
[參考例18]碳酸1-甲基哌啶-4-基-4-硝基苯基酯鹽酸鹽(化合物VI-10)
利用與參考例14相同之方法，使用1-甲基哌啶-4-醇(SIGMA-ALDRICH公司製造，0.300g，2.60mmol)代替1-甲基-4-哌啶甲醇，而獲得化合物VI-10(0.740g，產率90%)。
ESI-MS m/z：281(M+H)+.
[參考例19]碳酸1-甲基哌啶-3-基-4-硝基苯基酯鹽酸鹽(化合物VI-11)
利用與參考例14相同之方法，使用1-甲基哌啶-3-醇(SIGMA-ALDRICH公司製造，0.305g，2.65mmol)代替1-甲基-4-哌啶甲醇，而獲得化合物VI-11(0.410g，產率49%)。
ESI-MS m/z：281(M+H)+.
[參考例20]碳酸(1-甲基吡咯啶-3-基)甲基-4-硝基苯基酯鹽酸鹽(化合物VI-12)
利用與參考例14相同之方法，使用(1-甲基-3-吡咯啶基)甲醇(Matrix Scientific公司製造，0.500g，7.43mmol)代替1-甲基-4-哌啶甲醇，而獲得化合物VI-12(0.943g，產率69%)。
ESI-MS m/z：281(M+H)+.
[實施例23] 二((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯-1-基)胺基甲酸(1-甲基哌啶-4-基)甲酯(化合物A-14)
利用與實施例10相同之方法，使用參考例14中所獲得之化合物VI-6(0.228g，0.689mmol)代替化合物VI-3，而獲得化合物A-14(0.258g，產率84%)。
ESI-MS m/z：670(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.89(t,J=6.9Hz,6H),1.22-1.39(m,32H),1.46-1.54(m,4H),1.56-1.66(m,3H),1.67-1.74(m,2H),1.88-1.95(m,2H),2.05(q,J=6.9Hz,8H),2.26(s,3H),2.77(t,J=6.8Hz,4H),2.85(d,J=11.7Hz,2H),3.13-3.23(m,4H),3.92(d,J=6.3Hz,2H),5.30-5.42(m,8H)。
[實施例24] 二((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯-1-基)胺基甲酸(1-甲基哌啶-3-基)甲酯(化合物A-15)
利用與實施例10相同之方法，使用參考例15中所獲得之化合物VI-7(0.238g，0.719mmol)代替化合物VI-3，而獲得化合物A-15(0.239g，產率74%)。
ESI-MS m/z：670(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.89(t,J=6.9Hz,6H),0.92-1.02(m,1H),1.22-1.39(m,32H),1.46-1.54(m,4H),1.55-1.65(m,1H),1.66-1.74(m,3H),1.82-1.89(m,1H),1.91-2.00(m,1H),2.05(q,J=7.0Hz,8H),2.26(s,3H),2.74-2.80(m,5H),2.84-2.89(m,1H),3.12-3.23(m,4H),3.87(dd,J=10.7,7.6Hz,1H),3.97(dd,J =10.7,5.4Hz,1H),5.30-5.41(m,8H)。
[實施例25] 二((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯-1-基)胺基甲酸(1-甲基哌啶-2-基)甲酯(化合物A-16)
利用與實施例10相同之方法，使用參考例16中所獲得之化合物VI-8(0.256g，0.774mmol)代替化合物VI-3，而獲得化合物A-16(0.313g，產率91%)。
ESI-MS m/z：670(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.89(t,J=6.9Hz,6H),1.22-1.39(m,32H),1.46-1.64(m,8H),1.71-1.76(m,2H),2.02-2.12(m,10H),2.32(s,3H),2.77(t,J=6.8Hz,4H),2.79-2.84(m,1H),3.11-3.24(m,4H),4.05(dd,J=11.1,4.9Hz,1H),4.17(dd,J=11.1,4.9Hz,1H),5.30-5.42(m,8H)。
[實施例26] 二((Z)-十八碳-9-烯基)胺基甲酸2-(1-甲基吡咯啶-2-基)乙酯(化合物A-17)
利用與實施例10相同之方法，使用實施例2中所獲得之化合物B-2(0.300g，0.579mmol)代替化合物B-1，而獲得化合物A-17(0.360g，產率92%)。
ESI-MS m/z：674(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.88(t,J=6.9Hz,6H),1.21-1.38(m,44H),1.45-1.85(m,8H),1.93-2.18(m,12H),2.32(s,3H),3.03-3.26(m,5H),4.05-4.18(m,2H),5.30-5.39(m,4H)。
[實施例27] 二((Z)-十八碳-9-烯基)胺基甲酸(1-甲基哌啶-3-基)甲酯(化合物A-18)
利用與實施例10相同之方法，使用代替化合物B-1之實施例2中所獲 得之化合物B-2(0.300g，0.579mmol)、及代替化合物VI-3之參考例15中所獲得之化合物VI-7(0.287g，0.896mmol)，而獲得化合物A-18(0.390g，產率100%)。
ESI-MS m/z：674(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.85-1.04(m,7H),1.20-1.38(m,44H),1.46-1.74(m,8H),1.82-2.06(m,10H),2.26(s,3H),2.74-2.82(m,1H),2.83-2.89(m,1H),3.10-3.25(m,4H),3.87(dd,J=10.5,7.3Hz,1H),3.98(dd,J=10.5,5.3Hz,1H),5.30-5.39(m,4H)。
[實施例28] 二((11Z,14Z)-二十碳-11,14-二烯基)胺基甲酸2-(1-甲基吡咯啶-2-基)乙酯(化合物A-19)
利用與實施例10相同之方法，使用實施例4中所獲得之化合物B-4(0.300g，0.526mmol)代替化合物B-1，而獲得化合物A-19(0.369g，產率97%)。
ESI-MS m/z：726(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.89(t,J=6.9Hz,6H),1.21-1.40(m,40H),1.44-1.85(m,8H),1.93-2.18(m,12H),2.32(s,3H),2.77(t,J=6.4Hz,4H),3.04-3.27(m,5H),4.05-4.18(m,2H),5.29-5.42(m,8H)。
[實施例29] 二((11Z,14Z)-二十碳-11,14-二烯基)胺基甲酸(1-甲基哌啶-3-基)甲酯(化合物A-20)
利用與實施例10相同之方法，使用代替化合物B-1之實施例4中所獲得之化合物B-4(0.300g，0.526mmol)、及代替化合物VI-3之參考例15中 所獲得之化合物VI-7(0.261g，0.789mmol)，而獲得化合物A-20(0.374g，產率98%)。
ESI-MS m/z：726(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.85-1.04(m,7H),1.21-1.40(m,40H),1.45-1.75(m,8H),1.82-2.09(m,10H),2.26(s,3H),2.74-2.90(m,6H),3.11-3.24(m,4H),3.87(dd,J=10.5,7.5Hz,1H),3.98(dd,J=10.5,5.5Hz,1H),5.29-5.43(m,8H)。
[實施例30] 二((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯-1-基)胺基甲酸(1-甲基吡咯啶-2-基)甲酯(化合物A-21)
使實施例1中所獲得之化合物B-1(0.0831g，0.162mmol)溶解於二氯乙烷(1mL)中，添加1,1'-羰基二咪唑(Nacalai Tesque公司製造，0.0394g，0.243mmol)，於室溫下攪拌一整夜。於反應液中添加碘甲烷(東京化成工業公司製造，0.101mL，1.62mmol)，於60℃下攪拌一整夜。將反應液減壓濃縮。使所獲得之殘渣溶解於四氫呋喃(1mL)中，添加1-甲基吡咯啶-2-甲醇(和光純藥工業公司製造，0.0372g，0.323mmol)及三乙胺(0.0563mL，0.404mmol)，於室溫下攪拌一整夜後，於60℃下攪拌反應液3小時。於反應液中添加飽和碳酸氫鈉水溶液，利用正己烷萃取2次。利用無水硫酸鎂使有機層乾燥後進行過濾，於減壓進行濃縮。利用胺基矽膠管柱層析法(正己烷/乙酸乙酯=90/10)將所獲得之殘渣純化，藉此獲得化合物A-21(0.0318g，產率30%)。
ESI-MS m/z：656(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.89(t,J=6.9Hz,6H),1.24-1.39(m,32H),1.46-1.67(m,5H),1.67-1.85(m,2H),1.89-2.00(m,1H),2.05(q,J=7.0Hz,8H),2.21-2.30(m,1H),2.42(s, 3H),2.43-2.51(m,1H),2.77(t,J=6.6Hz,4H),3.03-3.08(m,1H),3.11-3.25(m,4H),4.00(dd,J=10.5,6.0Hz,1H),4.08(dd,J=10.5,5.5Hz,1H),5.29-5.42(m,8H)。
[實施例31] 二(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基胺基甲酸(1-甲基吡咯啶-3-基)甲酯(化合物A-22)
利用與實施例10相同之方法，使用參考例20中所獲得之化合物VI-12(0.277g，0.876mmol)代替化合物VI-3，而獲得化合物A-22(0.263g，產率66%)。
ESI-MS m/z：656(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.89(t,J=6.9Hz,6H),1.20-1.40(m,32H),1.44-1.78(m,5H),1.92-2.09(m,9H),2.24(dd,J=9.4,6.2Hz,1H),2.34(s,3H),2.39-2.63(m,3H),2.68-2.80(m,5H),3.10-3.25(m,4H),3.95(dd,J=10.5,7.8Hz,1H),4.03(dd,J=10.5,6.4Hz,1H),5.28-5.42(m,8H)。
[實施例32] 二(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基胺基甲酸2-(1-甲基哌啶-2-基)乙酯(化合物A-23) 步驟1
於氯甲酸4-硝基苯酯(0.844g，7.19mmol)之四氫呋喃(12mL)溶液中，添加2-(1-甲基哌啶-2-基)乙醇(Matrix Scientific公司製造，0.500g，3.49mmol)，於室溫下攪拌一整夜。將反應液減壓濃縮，而獲得碳酸2-(1-甲基哌啶-2-基)乙基-4-硝基苯基酯鹽酸鹽之粗純化物。
步驟2
利用與實施例10相同之方法，使用步驟1中所獲得之碳酸2-(1-甲基哌啶-2-基)乙基-4-硝基苯基酯鹽酸鹽之粗純化物(0.302g，0.876mmol)代替化合物VI-3，而獲得化合物A-23(0.299g，產率75%)。
ESI-MS m/z：684(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.89(t,J=6.9Hz,6H),1.19-1.40(m,32H),1.45-1.75(m,11H),1.93-2.11(m,11H),2.27(s,3H),2.74-2.86(m,5H),3.10-3.24(m,4H),4.06-4.19(m,2H),5.29-5.42(m,8H)。
[實施例33] 二((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯-1-基)胺基甲酸3-(氮雜環庚烷-1-基)丙酯(化合物A-24)
利用與實施例10相同之方法，使用參考例17中所獲得之化合物VI-9代替化合物VI-3，而獲得化合物A-24(0.136g，產率67%)。
ESI-MS m/z：698(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.86-0.94(m,6H),1.22-1.41(m,36H),1.45-1.67(m,8H),1.75-1.85(m,2H),2.00-2.11(m,8H),2.55(t,J=7.5Hz,2H),2.62(t,J=5.1Hz,4H),2.77(t,J=5.9Hz,4H),3.13-3.23(m,4H),4.10(t,J=6.4Hz,2H),5.28-5.45(m,8H)。
[實施例34] ((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基)(2-((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯氧基)乙基)胺基甲酸3-(哌啶-1-基)丙酯(化合物A-29)
利用與實施例10相同之方法，使用代替化合物B-1之實施例19中所獲得之化合物B-8(0.150g，0.269mmol)、及代替化合物VI-3之參考例5中所獲得之化合物VI-4(0.201g，0.672mmol)，而獲得化合物A-29(0.170 g，產率87%)。
ESI-MS m/z：728(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.89(t,J=6.8Hz,6H),1.22-1.40(m,32H),1.40-1.63(m,14H),1.78-1.87(m,2H),2.05(q,J=6.6Hz,8H),2.33-2.41(m,6H),2.77(t,J=6.0Hz,4H),3.20-3.31(m,2H),3.40(t,J=6.6Hz,4H),3.46-3.57(m,2H),4.10(t,J=6.4Hz,2H),5.27-5.45(m,8H)。
[實施例35] ((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基)(2-((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯氧基)乙基)胺基甲酸2-(1-甲基吡咯啶-2-基)乙酯(化合物A-30)
利用與實施例10相同之方法，使用實施例19中所獲得之化合物B-8(0.120g，0.215mmol)代替化合物B-1，而獲得化合物A-30(0.140g，產率91%)。
ESI-MS m/z：714(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.89(t,J=6.8Hz,6H),1.21-1.40(m,32H),1.45-1.59(m,6H),1.64-1.82(m,2H),1.93-2.17(m,12H),2.31(s,3H),2.70-2.81(m,4H),3.06(t,J=7.8Hz,1H),3.20-3.31(m,2H),3.40(t,J=5.9Hz,4H),3.46-3.58(m,2H),4.06-4.17(m,2H),5.28-5.44(m,8H)。
[實施例36] ((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基)(2-((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯氧基)乙基)胺基甲酸3-(氮雜環庚烷-1-基)丙酯(化合物A-31)
利用與實施例10相同之方法，使用代替化合物B-1之實施例19中所獲得之化合物B-8(0.150g，0.269mmol)、及代替化合物VI-3之參考例17中所獲得之化合物VI-9(0.145g，0.403mmol)，而獲得化合物A-31(0.170 g，產率85%)。
ESI-MS m/z：742(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.89(t,J=6.8Hz,6H),1.21-1.39(m,32H),1.48-1.65(m,12H),1.72-1.85(m,2H),2.05(q,J=6.6Hz,8H),2.55(t,J=7.5Hz,2H),2.61(t,J=5.3Hz,4H),2.77(t,J=5.9Hz,4H),3.21-3.30(m,2H),3.40(t,J=6.8Hz,4H),3.46-3.55(m,2H),4.10(t,J=6.4Hz,2H),5.26-5.42(m,8H)。
[實施例37] ((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基)(2-((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯氧基)乙基)胺基甲酸(1-甲基哌啶-3-基)甲酯(化合物A-32)
利用與實施例10相同之方法，使用代替化合物B-1之實施例19中所獲得之化合物B-8(0.150g，0.269mmol)、及代替化合物VI-3之參考例15中所獲得之化合物VI-7(0.133g，0.403mmol)，而獲得化合物A-32(0.145g，產率76%)。
ESI-MS m/z：714(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.91(t,J=6.8Hz,6H),1.23-1.45(m,32H),1.49-1.77(m,9H),1.83-2.03(m,2H),2.07(q,J=6.6Hz,8H),2.28(s,3H),2.76-2.91(m,2H),2.80(t,J=5.9Hz,4H),3.21-3.33(m,2H),3.43(t,J=6.4Hz,4H),3.48-3.58(m,2H),3.85-4.05(m,2H),5.30-5.47(m,8H)。
[參考例21]甲磺酸2-((Z)-十八碳-9-烯基氧基)乙酯(化合物IIIc-2)
利用與實施例8相同之方法，使用甲磺酸(Z)-十八碳-9-烯-1-酯(2.00g，5.77mmol)代替甲磺酸(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯-1-酯，而獲得化合物IIIc-2(1.29g，產率57%)。
ESI-MS m/z：391(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.89(t,J=6.6 Hz,3H),1.22-1.38(m,22H),1.50-1.62(m,2H),1.97-2.05(m,4H),3.06(s,3H),3.48(t,J=6.8Hz,2H),3.67-3.72(m,2H),4.36-4.39(m,2H),5.35(t,J=5.5Hz,2H)。
[參考例22]甲磺酸2-((Z)-十六碳-9-烯基氧基)乙酯(化合物IIIc-3)
利用與實施例8相同之方法，使用甲磺酸(Z)-十六碳-9-烯-1-酯(2.00g，6.28mmol)代替甲磺酸(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯-1-酯，而獲得化合物IIIc-3(1.52g，產率67%)。
ESI-MS m/z：363(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.90(t,J=6.6Hz,3H),1.25-1.38(m,18H),1.53-1.62(m,2H),1.98-2.06(m,4H),3.07(s,3H),3.49(t,J=6.6Hz,2H),3.68-3.72(m,2H),4.36-4.40(m,2H),5.36(t,J=5.5Hz,2H)。
[實施例38] (9Z,12Z)-N-(2-((Z)-十八碳-9-烯基氧基)乙基)十八碳-9,12-二烯-1-胺(化合物B-9)
利用與實施例13相同之方法，使用參考例7中所獲得之化合物IId-1(0.800g，1.78mmol)、及代替1-溴十二烷之參考例21中所獲得之化合物IIIc-2(0.728g，1.86mmol)，而獲得化合物B-9(0.600g，產率60%)。
ESI-MS m/z：560(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.86-0.94(m,6H),1.24-1.39(m,40),1.51-1.62(m,2H),1.96-2.10(m,8H),2.68(t,J=7.3Hz,2H),2.78(t,J=6.0Hz,2H),2.85(t,J=5.1Hz,2H),3.45(t,J=6.8Hz,2H),3.57(t,J=5.1Hz,2H),5.30-5.44(m,6H)。
[實施例39] (9Z,12Z)-N-(2-((Z)-十六碳-9-烯基氧基)乙基)十八碳-9,12-二烯-1-胺(化 合物B-10)
利用與實施例13相同之方法，使用參考例7中所獲得之化合物IId-1(0.610g，1.35mmol)、及代替1-溴十二烷之參考例22中所獲得之化合物IIIc-3(0.589g，1.62mmol)，而獲得化合物B-10(0.550g，產率76%)。
ESI-MS m/z：532(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.85-0.93(m,6H),1.23-1.38(m,34H),1.45-1.54(m,4H),1.94-2.11(m,8H),2.60(t,J=7.3Hz,2H),2.77(t,J=5.4Hz,4H),3.43(t,J=6.8Hz,2H),3.53(t,J=5.4Hz,2H),5.29-5.44(m,6H)。
[實施例40] (2-((Z)-十八碳-9-烯基氧基)乙基)((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基)胺基甲酸3-(哌啶-1-基)丙酯(化合物A-33)
利用與實施例10相同之方法，使用代替化合物B-1之實施例38中所獲得之化合物B-9(0.130g，0.232mmol)、及代替化合物VI-3之參考例5中所獲得之化合物VI-4(0.120g，0.348mmol)，而獲得化合物A-33(0.137g，產率81%)。
ESI-MS m/z：729(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.84-0.92(m,6H),1.20-1.36(m,38H),1.40-1.62(m,10H),1.77-1.87(m,2H),1.96-2.09(m,8H),2.37(t,J=7.5Hz,6H),2.77(t,J=5.9Hz,2H),3.20-3.31(m,2H),3.40(t,J=6.6Hz,4H),3.45-3.56(m,2H),4.10(t,J=6.4Hz,2H),5.28-5.44(m,6H)。
[實施例41] (2-((Z)-十八碳-9-烯基氧基)乙基)((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基)胺基甲 酸2-(1-甲基吡咯啶-2-基)乙酯(化合物A-34)
利用與實施例10相同之方法，使用實施例38中所獲得之化合物B-9(0.130g，0.232mmol)代替化合物B-1，而獲得化合物A-34(0.131g，產率79%)。
ESI-MS m/z：716(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.85-0.92(m,6H),1.20-1.39(38H,m),1.47-1.61(m,8H),1.66-1.83(m,2H),1.93-2.18(10H,m),2.32(s,3H),2.78(t,J=5.9Hz,2H),3.07(t,J=8.4Hz,1H),3.21-3.31(m,2H),3.41(t,J=6.6Hz,4H),3.47-3.56(m,2H),4.08-4.19(m,2H),5.29-5.43(m,6H)。
[實施例42] (2-((Z)-十八碳-9-烯基氧基)乙基)((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基)胺基甲酸3-(二甲基胺基)丙酯(化合物A-35)
利用與實施例10相同之方法，使用代替化合物B-1之實施例38中所獲得之化合物B-9(0.130g，0.232mmol)、及代替化合物VI-3之化合物VI-1(0.106g，0.348mmol)，而獲得化合物A-35(0.100g，產率63%)。
ESI-MS m/z：690(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.85-0.92(m,6H),1.20-1.39(m,38H),1.45-1.59(m,4H),1.74-1.84(m,2H),1.96-2.09(m,8H),2.23(s,6H),2.34(t,J=7.5Hz,2H),2.77(t,J=5.7Hz,2H),3.21-3.30(m,2H),3.35-3.44(m,4H),3.45-3.55(m,2H),4.11(t,J=6.4Hz,2H),5.26-5.44(m,6H)。
[實施例43] (2-((Z)-十六碳-9-烯基氧基)乙基)((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基)胺基甲酸3-(二甲基胺基)丙酯(化合物A-36)
利用與實施例10相同之方法，使用代替化合物B-1之實施例39中所獲得之化合物B-10(0.150g，0.282mmol)、及代替化合物VI-3之化合物VI-1(0.095g，0.310mmol)，而獲得化合物A-36(0.148g，產率79%)。
ESI-MS m/z：662(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.85-0.94(m,6H),1.21-1.39(m,34H),1.47-1.59(m,4H),1.76-1.84(m,2H),1.94-2.09(m,8H),2.23(s,6H),2.34(t,J=7.3Hz,2H),2.77(t,J=6.3Hz,2H),3.20-3.31(m,2H),3.31-3.45(m,4H),3.45-3.57(m,2H),4.11(t,J=6.3Hz,2H),5.27-5.46(m,6H)。
[實施例44] (2-((Z)-十六碳-9-烯基氧基)乙基)((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基)胺基甲酸3-(哌啶-1-基)丙酯(化合物A-37)
利用與實施例10相同之方法，使用代替化合物B-1之實施例39中所獲得之化合物B-10(0.150g，0.282mmol)、及代替化合物VI-3之參考例5中所獲得之化合物VI-4(0.107g，0.310mmol)，而獲得化合物A-37(0.148g，產率75%)。
ESI-MS m/z：702(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.82-0.96(m,6H),1.23-1.39(m,34H),1.39-1.48(m,2H),1.49-1.61(m,8H),1.79-1.86(m,2H),1.95-2.09(m,8H),2.33-2.42(m,6H),2.78(t,J=6.8Hz,2H),3.21-3.32(m,2H),3.34-3.44(m,4H),3.46-3.56(m,2H),4.10(t,J=6.3Hz,2H),5.29-5.44(m,6H)。
[實施例45] 3-(二((Z)-十八碳-9-烯基)胺基)丙烷-1-醇(化合物C-2) 步驟1
利用與參考例11相同之方法，使用實施例2中所獲得之化合物B-2(500mg，0.965mmol)代替化合物B-1，而獲得3-(二((Z)-十八碳-9-烯基)胺基)丙酸乙酯(548mg，產率92%)。
步驟2
利用與實施例21相同之方法，使用3-(二((Z)-十八碳-9-烯基)胺基)丙酸乙酯(548mg，0.887mmol)代替化合物XI-6，而獲得化合物C-2(0.445g，產率87%)。
ESI-MS m/z：577(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.88(t,J=6.9Hz,6H),1.24-1.42(m,44H),1.42-1.50(m,4H),1.65-1.70(m,2H),2.01(q,J=6.4Hz,8H),2.40(t,J=7.5Hz,4H),2.63(t,J=5.5Hz,2H),3.79(t,J=5.3Hz,2H),5.30-5.39(m,4H)。
[實施例46] 3-(二((11Z,14Z)-二十碳-11,14-二烯基)胺基)丙烷-1-醇(化合物C-3) 步驟1
利用與參考例11相同之方法，使用實施例4中所獲得之化合物B-4(400mg，0.702mmol)代替化合物B-1，而獲得3-(二((11Z,14Z)-二十碳-11,14-二烯基)胺基)丙酸乙酯(548mg，產率90%)。
步驟2
利用與實施例21相同之方法，使用3-(二((11Z,14Z)-二十碳-11,14-二烯基)胺基)丙酸乙酯(424mg，0.633mmol)代替化合物XI-6，而獲得化合物C-3(352mg，產率88%)。
ESI-MS m/z：629(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.89(t,J=6.9Hz,6H),1.24-1.40(m,40H),1.42-1.50(m,4H),1.64-1.70(m,2H), 2.02-2.08(m,8H),2.40(t,J=7.5Hz,4H),2.63(t,J=5.3Hz,2H),2.78(t,J=6.4Hz,4H),3.79(t,J=5.0Hz,2H),5.29-5.42(m,8H)。
[實施例47] 2-(二((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基)胺基)乙醇(化合物C-4) 步驟1
於實施例1中所獲得之化合物B-1(600mg，1.17mmol)之1,2-二氯乙烷(2.0mL)溶液中，添加碳酸鉀(243mg，1.76mmol)及溴乙酸乙酯(195μL，1.76mmol)，於85℃下攪拌一整夜。於所獲得之混合物中添加水，利用庚烷萃取2次。合併有機層，利用水進行清洗，利用無水硫酸鈉使之乾燥，並進行過濾，於減壓進行濃縮。利用胺基矽膠管柱層析法(庚烷/乙酸乙酯=100/0~95/5)將殘渣純化，藉此獲得2-(二((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基)胺基)乙酸乙酯(527mg，產率75%)。
步驟2
利用與實施例21相同之方法，使用2-(二((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基)胺基)乙酸乙酯(527mg，0.878mmol)代替化合物XI-6，而獲得化合物C-4(433mg，產率88%)。
ESI-MS m/z：559(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.89(t,J=6.9Hz,6H),1.24-1.39(m,32H),1.39-1.46(m,4H),2.02-2.08(m,8H),2.43(t,J=7.5Hz,4H),2.57(t,J=5.3Hz,2H),2.77(t,J=6.2Hz,4H),3.52(t,J=5.5Hz,2H),5.29-5.41(m,8H)。
[實施例48] 4-(二((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基)胺基)丁烷-1-醇(化合物C-5) 步驟1
於實施例1中所獲得之化合物B-1(500mg，0.973mmol)之1,2-二氯乙烷(2.0mL)溶液中，添加碳酸鉀(202mg，1.46mmol)及第三丁基(4-碘丁氧基)二甲基矽烷(SIGMA-ALDRICH公司製造，378μL，1.46mmol)，於85℃下攪拌4小時。於所獲得之混合物中添加水，利用庚烷萃取2次。合併有機層，利用水進行清洗，利用無水硫酸鈉使之乾燥，並進行過濾，於減壓進行濃縮。利用矽膠管柱層析法(庚烷/乙酸乙酯=95/5~80/20)將殘渣純化，藉此獲得(4-(第三丁基二甲基矽烷基氧基)丁基)二((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基)胺(233mg，產率34%)。
步驟2
於(4-(第三丁基二甲基矽烷基氧基)丁基)二((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基)胺(233mg，0.333mmol)之四氫呋喃(5mL)溶液中，添加四丁基氟化銨(1mol/L之四氫呋喃溶液，0.666mL，0.666mmol)，於室溫下攪拌一整夜。於所獲得之混合物中添加飽和鹽水，利用乙酸乙酯萃取。利用無水硫酸鈉使有機層乾燥，並進行過濾，於減壓進行濃縮。利用胺基矽膠管柱層析法(庚烷/乙酸乙酯=90/10)將殘渣純化，進而利用矽膠管柱層析法(乙酸乙酯/甲醇=100/0~90/10)將其純化，藉此獲得化合物C-5(160mg，產率82%)。
ESI-MS m/z：587(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.89(t,J=6.9Hz,6H),1.23-1.40(m,32H),1.43-1.51(m,4H),1.62-1.68(m,4H),2.05(q,J=7.0Hz,8H),2.41-2.45(m,6H),2.77(t,J=6.6Hz,4H),3.53-3.56(m,2H),5.29-5.42(m,8H)。
[參考例23]2,3-雙((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯氧基)丙基(甲基)胺基甲酸3-(二甲基胺基)丙酯(化合物XI-9) 步驟1
於利用國際公開第2009/129395號說明書中記載之方法而合成之2,3-雙((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯氧基)丙烷-1-醇(0.303g，0.514mmol)之二氯甲烷(4ml)溶液中，於0℃下添加三乙胺(0.108ml，0.772mmol)及甲磺醯氯(0.060ml，0.772mmol)，於室溫下攪拌3小時。於反應液中添加飽和碳酸氫鈉水，利用乙酸乙酯萃取，利用飽和鹽水進行清洗，利用無水硫酸鎂使之乾燥後進行過濾，於減壓進行濃縮。
使所獲得之殘渣溶解於二氯甲烷(4mL)中，添加甲基胺(7mol/L甲醇溶液，2.20mL)，使用微波反應裝置於110℃下攪拌5分鐘。於反應液中添加水，利用正己烷進行萃取，利用飽和鹽水進行清洗，利用無水硫酸鎂使之乾燥後進行過濾，於減壓進行濃縮。利用胺基矽膠管柱層析法(正己烷/乙酸乙酯=95/5~70/30)將所獲得之殘渣純化，而獲得N-甲基-2,3-雙((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯-1-基氧基)丙烷-1-胺(0.278g，產率90%)。
ESI-MS m/z：603(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.89(t,J=7.1Hz,6H),1.27-1.39(m,34H),1.51-1.58(m,3H),2.05(q,J=7.1Hz,8H),2.44(s,3H),2.64-2.70(m,2H),2.77(t,J=6.9Hz,4H),3.41-3.50(m,5H),3.54-3.58(m,1H),3.61-3.65(m,1H),5.30-5.41(m,8H)。
步驟2
於N-甲基-2,3-雙((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯-1-基氧基)丙烷-1-胺(0.220g，0.365mmol)之乙腈(2mL)懸浮液中，添加化合物VI-1(0.167g，0.548mmol)及三乙胺(0.255mL，1.827mmol)，於80℃下攪拌一整夜。利用飽和碳酸氫鈉水稀釋反應液，利用乙酸乙酯進行萃取。利用飽和鹽水清洗有機層，利用無水硫酸鎂使之乾燥後進行過濾，於減壓進行濃 縮。利用胺基矽膠管柱層析法(正己烷/乙酸乙酯=80/20~65/35)將殘渣純化，而獲得化合物XI-9(0.178g，產率67%)。
ESI-MS m/z：732(M+H)+；1H-NMR(CDCl3)δ：0.89(t,J=6.9Hz,6H),1.26-1.38(m,32H),1.51-1.59(m,4H),1.77-1.83(m,2H),2.05(q,J=7.0Hz,8H),2.22(s,6H),2.34(t,J=7.4Hz,2H),2.77(t,J=6.8Hz,4H),2.97(s,3H),3.19-3.25(m,1H),3.38-3.65(m,8H),4.12(t,J=6.3Hz,2H),5.30-5.41(m,8H)。
[實施例49]
使用實施例5~9中所獲得之化合物(化合物A-1~5)，以如下方式製備組合物。所使用之核酸係包含正義鏈[5'-rGmUrCrAmUrCrArCrArCmUrGrArAmUrArCrCrArAmU-3'(附r及m之鹼基所鍵結之糖係分別使核糖及2'位之羥基取代為-O-甲基而成之核糖)]與反義鏈[5'-rArUrUrGrGrUrArUrUrCrArGrUrGrUrGrArUrGrArCrArC-3'(鹼基所鍵結之糖均為核糖，對5'末端進行有磷酸化)]的抑制脂蛋白元B(Apolipoprotein-B，以下表示為apo-b)基因表現之抗APO-B siRNA，且自Gene Design公司獲取(以下稱為apo-b siRNA)。
以成為化合物A-1~5之各者/1,2-二肉豆蔻醯基-sn-甘油-3-磷酯醯乙醇胺-N-(甲氧基(聚乙二醇)-2000)鈉鹽(PEG-DMPE Na，N-(羰基甲氧基聚乙二醇2000)-1,2-二肉豆蔻醯基-sn-甘油-3-磷酯醯乙醇胺鈉鹽，日油公司製造)/二硬脂醯基磷脂醯膽鹼(DSPC，1,2-二硬脂醯基-sn-甘油-3-磷膽鹼，日油公司製造)/膽固醇(日油公司製造)=8.947/1.078/5.707/13.698mmol/L之方式，稱量各試樣並使之溶解於90vol%乙醇中，而製備脂質膜 之構成成分之溶液。另一方面，利用Tris-EDTA緩衝液(200mM Tris-HCl，20mM EDTA，Invitrogen製造)、及20mM檸檬酸緩衝液(pH值5.0)稀釋apo-b siRNA/蒸餾水(24mg/mL)，製備1.5mg/mL之apo-b siRNA水溶液(2mM Tris-EDTA緩衝液，20mM檸檬酸緩衝液，pH值5.0)。
將所獲得之脂質溶液加溫至37℃後，將500μL移至製劑製備用之容器中，於攪拌下添加所獲得之apo-b siRNA水溶液500μL。於所獲得之脂質核酸混合懸浮液1000μL中，於攪拌下添加20mM檸檬酸緩衝液(含有300mM NaCl，pH值6.0)1000μL，進而滴加DPBS(Dulbecco's Phosphate-Buffered Saline，杜貝可磷酸緩衝生理食鹽水，Invitrogen製造)3310μL而獲得粗製劑。所獲得之粗製劑係使用Amicon Ultra(Millipore公司製造)進行濃縮後，利用DPBS稀釋，使用0.2μm之過濾器(東洋濾紙公司製造)於清潔台內進行過濾。測定所獲得之組合物之siRNA濃度，以使siRNA濃度成為0.3或0.03mg/mL之方式使用DPBS進行稀釋，藉此獲得製劑(含有化合物A-1~5之各者及核酸之組合物)。
利用粒徑測定裝置(Zetasizer Nano ZS，Malvern公司製造，以下相同)測定製劑(組合物)之平均粒徑。將結果示於第8表。
比較例1
將化合物1設為利用依據專利文獻1中記載之方法的方法而合成之DLin-KC2-DMA及參考例1~3中所獲得之化合物(化合物XI-1~3)，除此以外，以與實施例49相同之方式獲得製劑。
將比較例中使用之化合物(DLin-KC2-DMA及化合物XI-1~3)之結構式示於第9表。
利用粒徑測定裝置測定製劑(組合物)之平均粒徑。將結果示於第10表。
試驗例1
分別藉由以下方法將實施例49中所獲得之各製劑(含有化合物A-1、3~5之各者及核酸之組合物)及比較例1中所獲得之各製劑(含有DLin-KC2-DMA及化合物XI-1~3之各者、以及核酸之組合物)導入至源自人類肝癌之細胞株HepG2細胞(HB-8065)中。
將利用Opti-MEM(GIBCO公司，31985)以使核酸之最終濃度成為3-100nM之方式進行稀釋之各製劑，以每孔20μL分注於96孔之培養皿中後，以成為細胞數6250/80μL/孔之方式接種懸浮於包含1.25%胎牛血清(FBS，SAFC Biosciences公司，12203C)之Opti-MEM中的HepG2細胞，於37℃、5% CO2條件下進行培養，藉此將各製劑導入至HepG2細胞內。又，接種未進行任何處理之細胞作為陰性對照之群。
將導入各製劑之細胞於37℃之5% CO2恆溫箱內培養24小時，利用冰浴冷卻之磷酸緩衝化生理食鹽水(PBS，GIBCO社，14190)進行清洗，使用Cells-to-Ct Kit(應用生物科技(ABI)公司，AM1728)，依據製品所隨附之說明書中記載之方法，進行總RNA之回收、與利用以所獲得之總RNA為模板之反轉錄反應之cDNA的製作。
以所獲得之cDNA為模板，以通用探針庫(Universal Probe Library，Roche Applied Science公司，04683633001)為探針，使用ABI7900HT Fast(ABI公司製造)，依據隨附之使用說明書中記載之方法進行PCR反應，藉此使apo-b基因及作為構成性表現基因之甘油醛3-磷酸脫氫酶(D-glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，以下表示為gapdh)基因進行PCR反應，並分別測定mRNA增加量，將gapdh之mRNA增加量設為內部對照，算出apo-b之mRNA之準定量值。將同樣地測得之陰性對照中之apo-b之mRNA之準定量值設為1，根據apo-b之mRNA之準定量值求出apo-b之mRNA之表現率。將所獲得之apo-b之mRNA之表現率之結果示於圖1。
根據圖1可明確，實施例49中所獲得之製劑(含有化合物A-1、3~5之各者、及核酸之組合物)及比較例1中所獲得之各製劑中，含有DLin-KC2-DMA、化合物XI-1及化合物XI-3之各者、以及核酸的組合物係抑制導入至源自人類肝癌之細胞株HepG2細胞內之後之apo-b基因之mRNA之表現。另一方面，比較例1中所獲得之各製劑之中，含有化合物XI-2及核酸之組合物未抑制導入至源自人類肝癌之細胞株HepG2細胞內之後之apo-b基因之mRNA之表現。
試驗例2
分別藉由以下方法對實施例49中所獲得之各製劑(含有化合物A-1~5之各者及核酸之組合物)及比較例1中所獲得之各製劑(含有DLin-KC2-DMA及化合物XI-1~3之各者、以及核酸之組合物)實施活體內藥效評估試驗。再者，各製劑係根據試驗利用DPBS進行稀釋而使用。
將小鼠(Balb/c，自CLEA Japan獲取)馴化飼養後，將各製劑以siRNA濃度計為3或0.3mg/kg靜脈內投予小鼠。自投予起48小時後進行採血，使用小型冷卻離心機(05PR-22，日立公司製造)於3000rpm、20分 鐘、4℃下對抽取之血液進行離心分離。使用Cholesterol Assay Kit(Cayman Chemical公司製造，Cat#：10007640)，依據製品之說明書中所記載之方法，利用ARVO(530nm/595nm)或EnVision(531nm/595nm)測定標準溶液及血清樣本之螢光度。根據所獲得之螢光度製作校準曲線，算出血清中之膽固醇濃度。
將所算出之血清中之膽固醇濃度之結果示於圖2及3。
根據圖2及3可明確，於活體內對實施例49中所獲得之製劑(含有抑制apo-b基因表現之抗APO-B siRNA與化合物A-1~5之各者之組合物)進行藥效評估試驗而得的膽固醇濃度之測定結果低於利用比較例1中所獲得之各製劑中含有化合物XI-1~3及核酸之組合物之測定結果，表現出藉由投予實施例22中所獲得之製劑，可較強地抑制apo-b基因表現。
由此明確，本發明之組合物可將核酸導入至細胞內等，本發明之陽離子性脂質為可於活體內將核酸容易地傳遞至細胞內的陽離子性脂質。
[實施例50]
使用實施例10中所獲得之化合物(化合物A-6)，以如下方式製備組合物。所使用之核酸係包含正義鏈[5'-rGrGrAfUfCrAfUfCfUfCrArArGfUfCfUfUrAfCdTdT-3'(附r、d及f之鹼基所鍵結之糖係分別使核糖、脫氧核糖及2'位之羥基經氟取代而成的核糖，自5'末端側向3'末端側之第20個鹼基所鍵結之脫氧核糖與第21個鹼基所鍵結之脫氧核糖的鍵為硫代磷酸酯鍵)]、與反義鏈[5'-rGfUrArArGrAfCfUfUrGrArGrAfUrGrAfUfCfCdTdT-3'(附r、d及f之鹼基所鍵結之糖係分別使核糖、脫氧核糖及2'位之羥基取代為氟而成之核糖，自5'末端側向3'末端側之第20個鹼基所鍵結之脫氧核糖與第21個鹼基 所鍵結之脫氧核糖的鍵為硫代磷酸酯鍵)]的抑制凝血因子VII(Coagulation Factor VII，以下表示為f7)基因表現之抗f7 siRNA，且自Gene Design公司獲取(以下稱為f7 siRNA)。
以成為化合物A-6/PEG-DMPE Na(日油公司製造)/DSPC(日油公司製造)/膽固醇(日油公司製造)=3.532/0.270/1.156/2.401mmol/L之方式，稱量各試樣並使之溶解於100vol%乙醇中，而製備脂質膜之構成成分之溶液。另一方面，利用Tris-EDTA緩衝液(200mM Tris-HCl，20mM EDTA，Invitrogen製造)、及20mM檸檬酸緩衝液(pH值4.0)稀釋f7 siRNA/蒸餾水(24mg/mL)，而製備0.375mg/mL之f7 siRNA水溶液(2mM Tris-EDTA緩衝液，20mM檸檬酸緩衝液，pH值4.0)。
將所獲得之脂質溶液加溫至37℃後，將800μL移至製劑製備用之容器中，於攪拌下添加所獲得之f7 siRNA水溶液800μL。於所獲得之脂質核酸混合懸浮液1600μL中，於攪拌下添加20mM檸檬酸緩衝液(含有300mM NaCl，pH值6.0)1600μL，進而滴加DPBS(Invitrogen製造)7086μL而獲得粗製劑。所獲得之粗製劑係使用Amicon Ultra(Millipore公司製造)進行濃縮後，利用DPBS稀釋，使用0.45μm之過濾器(東洋濾紙公司製造)於清潔台內進行過濾。測定所獲得之組合物之siRNA濃度，以使siRNA濃度成為0.03mg/mL之方式使用DPBS進行稀釋，藉此獲得製劑(含有化合物A-6及核酸之組合物)。
利用粒徑測定裝置測定製劑(組合物)之平均粒徑。將結果示於第11表。
[實施例51]
實施例1~48中所獲得之化合物中，分別使用化合物A-1、A-5、A-7 ~21、A-28~36、B-1、B-8及C-1~5，以與實施例50相同之方式獲得製劑(含有化合物A-1、A-5、A-7~21、A-28~36、B-1、B-8及C-1~5之各者、及核酸之組合物)。
利用粒徑測定裝置測定製劑(組合物)之平均粒徑。將結果示於第11表。
比較例2
將化合物A-6設為參考例9~13中所獲得之化合物(化合物XI-4~8)，除此以外，以與實施例50相同之方式獲得製劑。
將比較例2中使用之化合物(化合物XI-4~8)之結構式示於第12表。
利用粒徑測定裝置測定製劑(組合物)之平均粒徑。將結果示於第13表。
試驗例3
分別藉由以下方法對實施例50及51中所獲得之各製劑(含有化合物A-1、A-5~21、A-28~36、B-1、B-8及C-1~5之各者、及核酸之組合物)及比較例2中所獲得之各製劑(含有化合物XI-4~8及核酸之組合物)實施活體內藥效評估試驗。再者，各製劑係根據試驗利用DPBS或生理食鹽水進行稀釋而使用。
將小鼠(Balb/c，自CLEA Japan獲取)馴化飼養後，將各製劑以 siRNA濃度計為0.3、0.1及/或0.03mg/kg靜脈內投予小鼠。自投予其48小時後採血，使用微量高速冷卻離心機(TOMY MX305，TOMY SEIKO公司製造)於8000rpm、8分鐘、4℃下對抽取之血液進行離心分離。使用BIOPHEN VII kit(ANIARA公司製造，cat#：A221304)，依據製品之說明書中所記載之方法，利用ARVO(405nm)測定標準溶液及血漿樣本之吸光度。根據所獲得之吸光度製作校準曲線，算出血漿中之因子VII蛋白質濃度。再者，例數設為各群3隻。
將所算出之血漿中之因子VII蛋白質濃度之結果示於圖4~9。
根據圖4~8可明確，於活體內對實施例50及51中所獲得之各製劑(含有抑制因子VII基因表現之抗因子VII siRNA、及化合物A-6、A-1、A-7~12、B-1、B-8、C-1、A-5、A-13~21、A-28~26、及C-2~5之各者之組合物)進行藥效評估試驗而得的血漿中因子VII蛋白質濃度之測定結果為藉由投予實施例50及51中所獲得之各製劑，而較強地抑制因子VII基因表現。
由此明確，本發明之組合物可將核酸導入至細胞內等，本發明之陽離子性脂質為於活體內可將核酸容易地傳遞至細胞內的陽離子性脂質。
[實施例52]
使用實施例5中所獲得之化合物A-1，以如下方式製備組合物。
作為核酸，利用蒸餾水將與實施例50中使用者相同之核酸製備成24mg/mL而使用。
以成為化合物A-1/PEG-DMPE Na(日油公司製造)=57.3/5.52mmol/L之方式稱量各試樣，使之懸浮於含有鹽酸及乙醇之水溶液中，利用渦流(vortex)攪拌器反覆進行攪拌及加溫，而獲得均勻之懸浮液。於室 溫下使該懸浮液通過0.2μm之聚碳酸酯薄膜過濾器，進而通過0.05μm之聚碳酸酯薄膜過濾器，而獲得化合物A-1/PEG-DMPE Na之粒子(脂質體)之分散液。利用粒徑測定裝置測定所獲得之脂質體之平均粒徑，確認到為30nm至100nm之範圍內。以脂質體之分散液：f7 siRNA溶液=3：1之比例將所獲得之脂質體之分散液與f7 siRNA溶液混合，進而添加3倍量之蒸餾水，並進行混合，藉此製備化合物A-1/PEG-DMPE Na/f7 siRNA複合物之分散液。
另一方面，以成為A-1/PEG-DMPE Na(日油公司製造)/DSPC(日油公司製造)/膽固醇(日油公司製造)=8.947/1.078/5.707/13.698mmol/L之方式稱量各試樣並使之溶解於90vol%乙醇，而製備脂質膜構成成分之溶液。
將所獲得之脂質膜構成成分之溶液加溫後，以1：1之比例混合所獲得之化合物A-1/PEG-DMPE Na/f7 siRNA複合物之分散液，進而混合數倍量之蒸餾水，而獲得粗製劑。
所獲得之粗製劑係使用Amicon Ultra(Millipore公司製造)進行濃縮後，利用生理食鹽水稀釋，使用0.2μm之過濾器(東洋濾紙公司製造)於清潔台內進行過濾。測定所獲得之組合物之siRNA濃度，以使siRNA濃度成為0.03、0.01或0.003mg/mL之方式使用生理食鹽水進行稀釋，藉此獲得製劑(含有化合物A-1及核酸之組合物)。
利用粒徑測定裝置測定製劑(組合物)之平均粒徑。將結果示於第14表。
[實施例53]
實施例1~48中所獲得之化合物中，分別使用化合物A-5~7、A- 10、A-12~21、A-28~36、B-8及C-1~5，以與實施例52相同之方式獲得製劑(含有化合物A-5~7、A-10、A-12~21、A-28~36、B-8及C-1~5之各者、及核酸之組合物)。
利用粒徑測定裝置測定製劑(組合物)之平均粒徑。將結果示於第14表。
比較例3
將化合物A-1設為參考例23中所獲得之化合物XI-9，除此以外，以與實施例52相同之方式獲得製劑。
將比較例3中使用之化合物(化合物XI-9)之結構式示於第12表。
利用粒徑測定裝置測定製劑(組合物)之平均粒徑。將結果示於第13表。
試驗例4
藉由與試驗例3相同之方法對實施例52及53中所獲得之各製劑、或者與實施例52或53同樣地獲得之製劑(含有化合物A-1、A-5~7、A-10、A-12~21、A-28~36、B-8及C-1~5之各者、及核酸之組合物)、及比較例3中所獲得之製劑(含有化合物XI-9及核酸之組合物)實施活體內藥效評估試 驗。將所算出之血漿中之因子VII蛋白質濃度之結果示於圖10~13。
[實施例54]
分別使用實施例5、11及17中所獲得之化合物(化合物A-1、A-7及A-10)，以如下方式製備組合物。作為核酸，使用與實施例50中使用者相同之核酸。
以成為化合物A-1、A-7或A-10之各者/PEG-DMPE Na(日油公司製造)/DSPC(日油公司製造)/膽固醇(日油公司製造)=7.030/0.755/2.038/4.892mmol/L之方式，稱量各試樣並使之溶解於100vol%乙醇中，而製備脂質膜之構成成分之溶液。另一方面，利用Tris-EDTA緩衝液(200mM Tris-HCl，20mM EDTA，Invitrogen製造)及20mM檸檬酸緩衝液(pH值4.0)稀釋f7 siRNA/蒸餾水(24mg/mL)，而製備0.536mg/mL之f7 siRNA水溶液(2mM Tris-EDTA緩衝液，20mM檸檬酸緩衝液，pH值4.0)。
將所獲得之脂質溶液加溫至37℃後，將560μL移至製劑製備用之容器中，於攪拌下添加所獲得之f7 siRNA水溶液560μL。於所獲得之脂質核酸混合懸浮液1120μL中，於攪拌下添加20mM檸檬酸緩衝液(含有300mM NaCl，pH值6.0)1120μL，進而滴加DPBS(Invitrogen製造)4960μL而獲得粗製劑。所獲得之粗製劑係使用Amicon Ultra(Millipore公司製造)進行濃縮後，利用DPBS稀釋，使用0.45μm之過濾器(東洋濾紙公司製造)於清潔台內進行過濾。進而測定所獲得之組合物之siRNA濃度，以使siRNA濃度成為0.03或0.01mg/mL之方式使用DPBS進行稀釋，藉此獲得製劑(含有化合物A-1、A-7及A-10之各者、及核酸之組合物)。
利用粒徑測定裝置測定製劑(組合物)之平均粒徑。將結果示於第15 表。
試驗例5
藉由與試驗例3相同之方法對實施例54中所獲得之各製劑(含有化合物A-1、A-7或者A-10之各者、及核酸之組合物)實施活體內藥效評估試驗。將所算出之血漿中之因子VII蛋白質濃度之結果示於圖14。
[產業上之可利用性]
藉由將含有本發明之陽離子性脂質及核酸之組合物投予哺乳類等，可將該核酸容易地導入至例如細胞內等。
[序列表自由內容]
序列編號1-脂蛋白元B siRNA正義鏈
序列編號2-脂蛋白元B siRNA反義鏈
序列編號3-凝血因子VII siRNA正義鏈
序列編號4-凝血因子VII siRNA反義鏈
<110> 日商協和醱酵麒麟有限公司
<120> 陽離子性脂質
<130> 2013P00016
<160> 4
<210> 1
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 脂蛋白元B siRNA正義鏈
<220>
<221> 修飾鹼基
<222> (2)..(2)
<223> um
<220>
<221> 修飾鹼基
<222> (5)..(5)
<223> um
<220>
<221> 修飾鹼基
<222> (11)..(11)
<223> um
<220>
<221> 修飾鹼基
<222> (15)..(15)
<223> um
<220>
<221> 修飾鹼基
<222> (21)..(21)
<223> um
<400> 1
<210> 2
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 脂蛋白元B siRNA反義鏈
<220>
<221> 未歸類之特性
<222> (1)..(1)
<223> 5'-磷酸化腺苷
<400> 2
<210> 3
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 凝血因子VII siRNA正義鏈
<220>
<221> 未歸類之特性
<222> (1)..(19)
<223> RNA
<220>
<221> 未歸類之特性
<222> (4)..(4)
<223> n=尿嘧啶
<220>
<221> 未歸類之特性
<222> (7)..(7)
<223> n=尿嘧啶
<220>
<221> 未歸類之特性
<222> (9)..(9)
<223> n=尿嘧啶
<220>
<221> 未歸類之特性
<222> (14)..(14)
<223> n=尿嘧啶
<220>
<221> 未歸類之特性
<222> (16)..(17)
<223> n=尿嘧啶
<220>
<221> 修飾鹼基
<222> (4)..(5)
<223> 2'-氟基
<220>
<221> 修飾鹼基
<222> (7)..(10)
<223> 2'-氟基
<220>
<221> 修飾鹼基
<222> (14)..(17)
<223> 2'-氟基
<220>
<221> 修飾鹼基
<222> (19)..(19)
<223> 2'-氟基
<220>
<221> 未歸類之特性
<222> (21)..(21)
<223> 5'-硫代磷酸化胸苷
<400> 3
<210> 4
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 凝血因子VII siRNA反義鏈
<220>
<221> 未歸類之特性
<222> (1)..(19)
<223> RNA
<220>
<221> 未歸類之特性
<222> (2)..(2)
<223> n=尿嘧啶
<220>
<221> 未歸類之特性
<222> (8)..(9)
<223> n=尿嘧啶
<220>
<221> 未歸類之特性
<222> (14)..(14)
<223> n=尿嘧啶
<220>
<221> 未歸類之特性
<222> (17)..(17)
<223> n=尿嘧啶
<220>
<221> 修飾鹼基
<222> (2)..(2)
<223> 2'-氟基
<220>
<221> 修飾鹼基
<222> (7)..(9)
<223> 2'-氟基
<220>
<221> 修飾鹼基
<222> (14)..(14)
<223> 2'-氟基
<220>
<221> 修飾鹼基
<222> (17)..(19)
<223> 2'-氟基
<220>
<221> 未歸類之特性
<222> (21)..(21)
<223> 5'-硫代磷酸化胸苷
<400> 4

Claims (14)

  1. 一種陽離子性脂質，其以下述式(C)表示， (式中，R8為碳數8~24之直鏈狀或支鏈狀之烯基或炔基，R9為碳數8~24之直鏈狀或支鏈狀之烷基、烯基或炔基、烷氧基乙基、烷氧基丙基、烯氧基乙基、烯氧基丙基、炔氧基乙基或炔氧基丙基，X3為碳數1~3之伸烷基，R10為氫原子或碳數1~3之烷基)。
  2. 如請求項1之陽離子性脂質，其中R8及R9分別為十四烷基、十六烷基、(Z)-十四碳-9-烯基、(Z)-十六碳-9-烯基、(Z)-十八碳-6-烯基、(Z)-十八碳-9-烯基、(E)-十八碳-9-烯基、(Z)-十八碳-11-烯基、(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基、(9Z,12Z,15Z)-十八碳-9,12,15-三烯基、(Z)-二十碳-11-烯基、(11Z,14Z)-二十碳-11,14-二烯基或(Z)-二十二碳-13-烯基。
  3. 如請求項1之陽離子性脂質，其中R8及R9分別為十六烷基、(Z)-十六碳-9-烯基、(Z)-十八碳-6-烯基、(Z)-十八碳-9-烯基、(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯基、(Z)-二十碳-11-烯基或(11Z,14Z)-二十碳-11,14-二烯基。
  4. 如請求項1至3中任一項之陽離子性脂質，其中X3為亞甲基或伸乙基。
  5. 如請求項1至3中任一項之陽離子性脂質，其中R10為氫原子或甲基。
  6. 一種組合物，其含有式(C)表示之陽離子性脂質及核酸， (式中，R8為碳數8~24之直鏈狀或支鏈狀之烷基、烯基或炔基，R9為碳數8~24之直鏈狀或支鏈狀之烷基、烯基或炔基、烷氧基乙基、烷氧基丙基、烯氧基乙基、烯氧基丙基、炔氧基乙基或炔氧基丙基，X3為碳數1~3之伸烷基，R10為氫原子或碳數1~3之烷基)。
  7. 如請求項6之組合物，其中該陽離子性脂質與該核酸形成複合物，或者於該陽離子性脂質中組合有中性脂質及/或高分子者與該核酸形成複合物。
  8. 如請求項6之組合物，其中該陽離子性脂質與該核酸形成複合物，或者於該陽離子性脂質中組合有中性脂質及/或高分子者與該核酸形成複合物，且該組合物含有封入該複合物之脂質膜。
  9. 如請求項6至8中任一項之組合物，其中核酸係具有利用RNA干擾(RNAi)而抑制標靶基因表現之作用的核酸。
  10. 如請求項9之組合物，其中標靶基因係於肝臟、肺、腎臟或脾臟中表現之基因。
  11. 一種醫藥，其係包含如請求項9之組合物的用於治療疾病之醫藥。
  12. 如請求項11之醫藥，其係靜脈內投予用。
  13. 一種與肝臟、肺、腎臟或脾臟相關之疾病之治療劑，其包含如請求項10之組合物。
  14. 如請求項13之與肝臟、肺、腎臟或脾臟相關之疾病之治療劑，其係靜脈內投予用。
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