JPWO2016117690A1 - マイクロカプセル化された水産養殖用飼料 - Google Patents

Abstract

【解決課題】 飼育水を汚染せず，しかもレプトケファルス幼生の免疫活性を高め，ウナギレプトケファルスに対して直接投餌することができ，効果的にシラスウナギまで成長させることができる餌料を提供する。【解決手段】 油溶性栄養成分を有する油相１１と，油相１１内に存在し，水溶性栄養成分を含む水相１３と，油相１１及び水相１３を含む皮膜１５を含む，マイクロカプセル化された水産養殖用飼料であって，水溶性栄養成分は，アミノ酸，オリゴペプチド，及びタンパク質の加水分解物のいずれか１つ又は２つ以上と，を含む。【選択図】図１

Description

本発明は，水産養殖用飼料に関する。特に詳しく説明すると，本発明は，ウナギのレプトケファルス幼生をシラスウナギまで効果的に成長させることができる水産養殖用飼料に関する。本発明は，生物工学的及び免疫工学的改良を加えた水産養殖用飼料に関する。

特開平１１−２５３１１１号公報（下記特許文献１（特許第２９０９５３６号））には，サメ卵粉末を海水に懸濁させたウナギの餌が開示されている。特開２００５―１３１１６号公報（下記特許文献２（特許第４５３０２４８号））には，オキアミ分解物またはフィチン酸低減処理した大豆ペプチドを含有するウナギの餌が開示されている。特開２００５―１３１１６号公報（下記特許文献２）に開示された餌も基本的にはサメ卵を含むものである。特開２０１１−２３９６９５号公報（下記特許文献３）には，アカマンボウ類の魚卵内容物を含むウナギ仔魚飼料が開示されている。特開２０１１−２３９６９６号公報（下記特許文献４）には，プロテアーゼ活性を低下させた魚卵内容物を含むウナギ仔魚飼料が開示されている。

特開平１１−５６２５７号公報（下記特許文献５）には，β―カロチンを含む栄養物をマイクロカプセル化したうなぎ稚魚の餌料生物用餌料が開示されている。特開平１１−５６２５７号公報（下記特許文献５）は，β―カロチンと，ゼラチン，アラビアゴム及び魚油を攪拌して乳化することでβ−カロチンを含むマイクロカプセル化したうなぎ稚魚の餌料生物用餌料を製造している（段落［０００８］，［０００９］及び［００１３］）。

特表２０１２−５０５１９３号公報（下記特許文献６）には，マイクロカプセル化サイトカインを含む免疫腑活剤が開示されている。特表２０１２−５０５１９３号公報（下記特許文献６）は，マロデキストリン及び保護ポリマーを用いてサイトカインを発現する酵母を含むマイクロカプセルを得る（段落［００６０］）。

特開平１０−３２７７７０号公報（下記特許文献７）は，水溶性栄養成分を含有する水相が油溶性栄養成分を含有する油相内に存在して，生分解性ポリマーの膜により被覆されているマイクロカプセルから成る飼料用マイクロカプセルが開示されている。このマイクロカプセルは，Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルションである。

特開平１１−２５３１１１号公報 特開２００５―１３１１６号公報 特開２０１１−２３９６９５号公報 特開２０１１−２３９６９６号公報 特開平１１−５６２５７号公報 特表２０１２−５０５１９３号公報 特開平１０−３２７７７０号公報

上記特許文献１〜４のように，サメ卵やアカマンボウ類の魚卵を基本とする飼料は，ニホンウナギ（Anguilla japonica）仔魚期に相当するレプトケファルス幼生を小規模で生育するために用いられていた。しかし，魚卵を基本とする飼料は，ペースト状であるため，水中で分散する。このため，魚卵を基本とする飼料を大規模養殖水槽に投与すると，餌の効率が悪いばかりではなく，培養槽内の水を汚染するという問題がある。このため，ウナギなどを大規模に養殖する際においても水質を悪化させない餌が望まれた。

このため，上記特許文献５のとおり，マイクロカプセルを用いた餌が開発された。しかし，これらは必ずしも水質の悪化を防ぐことができず，また特にウナギのレプトケファルス幼生をシラスウナギまで効果的に成長させることはできなかった。特に，特許文献５のマイクロカプセルは，いわゆるＷ／Ｏ型であり，栄養成分として油溶性栄養成分しか含めることができないという問題がある。そのため，特許文献５におけるマイクロカプセル飼料は．餌用生物飼料用，つまり，シオミズツボワムシなどのワムシ類や，ブラインシュリンプといった，養魚の種苗生産で常用されている餌用生物を対象とする栄養強化剤としての使用を主要目的としている。さらに，特許文献５がマイクロカプセルを得るためにゼラチンやアラビアゴムと言った難消化性の高い高分子物質が用いられている。特許文献５におけるマイクロカプセルは１〜２０μｍと小型であるため直接的に仔稚魚が捕食する可能性も考えられる。しかし，消化機能の弱い仔稚魚（例えばレプトケファルス幼生）は，この餌を消化しきれず，仔稚魚用飼料としての利用価値が限りなく低いという問題がある。

特許文献６には，サイトカイン発現酵母を含む懸濁液をスプレードライング法によりカプセル化した製品が記載されている。特許文献６の製品は，サイトカインを養魚へ確実に経口投与することを主な目的とするため，別途餌が必要となる。つまり，特許文献６の製品は，養魚餌料に混入されて，投餌されるものである。

本発明は，飼育水を汚染せず，しかもレプトケファルス幼生の免疫活性を高め，ウナギレプトケファルスに対して直接投餌することができ，効果的にシラスウナギまで成長させることができる餌料を提供することを目的とする。

本発明は，基本的には，水溶性栄養成分を含有する水相が油溶性栄養成分を含有する油相内に存在し，マイクロカプセル化された水産養殖用飼料であれば，水質を汚染することなく，大量培養にも適した水産養殖用飼料となるという実施例による知見に基づく。

また，免疫活性を腑活化するため免疫腑活剤を含むことで，シラスウナギまで成長させることが困難であったウナギのレプトケファルス幼生を極めて効率よくシラスウナギまで成長することができるという知見に基づく。

すなわち，本発明の第１の側面は，マイクロカプセル化された水産養殖用飼料１７に関する。この水産養殖用飼料は，油溶性栄養成分を有する油相１１と，油相１１内に存在し，水溶性栄養成分を含む水相１３と，油相１１及び水相１３を含む皮膜１５を含むマイクロカプセル化された水産養殖用飼料である。そして，水溶性栄養成分は，アミノ酸，オリゴペプチド，及びタンパク質の加水分解物のいずれか１つ又は２つ以上と，を含む。水溶性栄養成分は，単糖類，小糖類及び多糖類のいずれか１つ又は２つ以上から選択される糖類をさらに含んでもよい。

本発明の水産養殖用飼料の好ましいものは，ウナギのレプトケファルス幼生をシラスウナギまで成長させるために用いられる，ウナギのレプトケファルス幼生用飼料である。

本発明の水産養殖用飼料の好ましいものは，水溶性栄養成分が，タンパク質の加水分解物を含み，タンパク質の加水分解物は，植物性タンパク質及び動物性タンパク質のいずれか又は両方を含むタンパク質源を，タンパク質分解酵素，塩酸，又は熱水を用いて加水分解したものである。

本発明の水産養殖用飼料の好ましいものは，水溶性栄養成分が，タンパク質の加水分解物を含み，タンパク質の加水分解物は，大豆酵素処理タンパク質，魚介類自己消化分解抽出物，魚介粉酵素処理分解抽出物及び魚介肉熱水処理分解抽出物のいずれか１つ又は２つ以上を含む。

本発明の水産養殖用飼料の好ましいものは，皮膜１５が，生分解性ポリマー膜である。

本発明の水産養殖用飼料の好ましいものは，免疫腑活剤をさらに含む。免疫腑活剤の例は，乳酸菌，酵母，麹菌，枯草菌，納豆菌，ウナギ目魚類成魚腸内由来の腸内細菌，ウナギ目魚類シラスウナギ腸内由来の腸内細菌，及びウナギ目魚類レプトケファルス幼生腸内由来の腸内細菌のいずれか又は２つ以上である。これらの免疫腑活剤を含む水産養殖用飼料を用いると，従来生産が困難とされていたウナギのレプトケファルス幼生を効果的にシラスウナギまで生産することができる。

すなわち，本発明によれば，栄養素をマイクロカプセル化したため，ペースト状の魚卵餌とは異なり，大規模に魚類を養殖する際においても水質を劣化（悪化）させない水産養殖用飼料を提供できる。また，本発明によれば，レプトケファルス幼生の免疫活性を高め，効果的にシラスウナギまで成長させることができるといった，比較的種苗生産が困難な仔稚魚をも効果的に成長させることができる水産養殖用飼料を提供できる。

図１は，本発明の水産養殖用飼料の概念図である。 図２は，この実施例１における製造工程の概念図である。 図３は，実施例において得られたマイクロカプセルを蒸留水に分散させた際の図面に替る写真である。

以下，図面を用いて本発明を実施するための形態について説明する。本発明は，以下に説明する形態や実施例に限定されるものではなく，以下の形態から当業者が自明な範囲で適宜修正したものも含む。

本発明の第１の側面は，マイクロカプセル化された水産養殖用飼料に関する。マイクロカプセル化とは，水産生物が捕食等しやすい大きさに餌などの飼料を調整することを意味する。マイクロカプセル化された水産養殖用飼料は，例えば，球状，ペレット状，及び楕円球状といった任意の形状であってよく，平均最大径の例は，１ｎｍ以上１０００μｍ以下であり，１００ｎｍ以上５００μｍ以下でもよく，１μｍ以上２００μｍ以下でもよく，５μｍ以上１００μｍ以下でもよい。特に，本発明の水産養殖用飼料を，ウナギ仔魚用飼料として用いる場合には，１〜２００μｍの粒径が好ましい。ウナギ仔魚用飼料は，レプトケファルス幼生をシラスウナギまで成長させるための飼料である。ニホンウナギは，産卵場海域の水深約２００メートル付近で産卵し，その受精卵は徐々に水深を上げながら孵化し，レプトケファルス（葉形仔魚，Leptocephalus）と呼ばれる柳の葉のような形の仔魚となる。このレプトケファルスが成長して最大伸長期（６ｃｍ以上）に達すると変態を行い，扁平な体から円筒形の体へと形を変え，全長が６センチ程度でほぼ透明のシラスウナギとなるとされる。

水産養殖用飼料
水産養殖用飼料は，例えば，水産生物（水産動物）に対して餌や栄養分として与える飼料を意味する。水産養殖用飼料は，養殖業において魚介類に与える飼料として用いることができ，観賞魚の飼料やつり用のまき餌として用いることもできる。本発明の水産養殖用飼料は，単独で餌や栄養分として投与されても良いし，他の飼料と混合して投与されてもよい。

本発明の水産養殖用飼料が対象とする魚類は上記のとおり，特に限定されないものの，本発明の水産養殖用飼料は，ウナギ目魚類に好ましく用いることができ，特にウナギ目魚類の仔魚（レプトケファルス幼生）に対して好ましく用いることができる。このようなウナギ目魚類の例は，ニホンウナギ（Ａｎｇｕｉｌｌａ ｊａｐｏｎｉｃａ），ヨーロッパウナギ（Ａ．ａｎｇｕｉｌｌａ），アメリカウナギ（Ａ．ｒｏｓｔｏｒａｔａ），オオウナギ（Ａ．ｍａｒｍｏｒａｔａ），ニューギニアウナギ（Ａ．ｂｉｃｏｌｏｒ ｐａｃｉｆｉｃａ），インドネシアうなぎ（Ａ．ｂｉｃｏｌｏｒ ｂｉｃｏｌｏｒ），モザンビークウナギ（Ａ．ｍｏｓｓａｍｂｉｃａ），オーストラリアウナギ（Ａ．ａｕｓｔｒａｌｉｓ ａｕｓｔｒａｌｉｓ），オーストラリア淡水ウナギ（Ａ．ａｕｓｔｒａｌｉｓ ｓｃｈｍｉｄｔｉｉ），オストラリアヒレナガウナギ（Ａ．ｒｅｉｎｈａｒｄｔｉｉ），セレベスウナギ（Ａ．ｃｅｌｅｂｅｓｅｎｓｉｓ），ポリネシアヒレナガウナギ（Ａ．ｍｅｇａｓｔｏｍａ），太平洋短鰭ウナギ（Ａ．ｏｂｓｃｕｒａ），ニューギニア高山ウナギ（Ａ．ｉｎｔｅｒｉｏｒｉｓ），インドマダラウナギ（Ａ．ｎｅｂｕｌｏｓａ），ニュージーランドオオウナギ（Ａ．ｄｉｆｆｅｎｂａｃｈｉｉ），ルソンウナギ（Ａ．ｌｕｚｏｎｅｎｓｉｓ），ベンガルウナギ（Ａ．ｂｅｎｇａｌｅｎｓｉｓ ｂｅｎｇａｌｅｎｓｉｓ），アフリカウナギ（Ａ．ｂｅｎｇａｌｅｎｓｉｓ ｌａｂｉａｔａ），大陸淡水ウナギ（Ａ．ｂｒｅｖｉｃｅｐｓ），大陸ウナギ（Ａ．ｎｉｇｒｉｃａｎｓ），インドネシアヒレナガウナギ（Ａ．ｍａｌｇｕｍｏｒａ）などが挙げられる。他のウナギ目魚類では，マアナゴ（Ｃｏｎｇｅｒ，ｍｙｒｉａｓｔｅｒ），クロアナゴ（Ｃ．ｊａｐｏｎｉｃａ），ゴテンアナゴ（Ａｒｉｏｓｏｍａ ｍｅｅｋｉ），ギンアナゴ（Ｇｎａｔｈｏｐｈｉｓ ｎｙｓｔｒｏｍｉ ｎｙｓｔｏｒｏｍｉ），イラコアナゴ（Ｓｙｎａｐｈｏｂｒａｎｃｈｕｓ ｋａｕｐｉｉ），ウツボ（Ｇｙｍｎｏｔｈｏｒａｘ ｋｉｄａｋｏ），ハモ（Ｍｕｒａｅｎｅｓｏｘ ｃｉｎｅｒｅｕｓ），及びスズハモ（Ｍｕｒａｅｎｅｓｏｘ ｂａｇｉｏ）である。

本発明で表記するウナギ目魚類仔魚とは，孵化仔魚からレプトケファルス幼生を経てシラスウナギの段階を指す。ウナギ目魚類稚魚とは，シラスウナギが内部および外部形態共に成長した段階，外部形態的には黒色素が沈着したクロコと呼ばれる段階を指す。

図１は，本発明の水産養殖用飼料の概念図である。図１に示されるように，水産養殖用飼料は，油溶性栄養成分を有する油相１１と；油相１１内に存在し，水溶性栄養成分を含む水相１３と；油相１１及び水相１３をその内部に含む皮膜１５とを含む。なお，本発明の水産養殖用飼料は，油相１１及び水相１３が完全に分離されている必要がなく，これらの全部又は一部が混合している状態のものであっても構わない。特に水相は，油相内に分散されていてもよい。

油相１１は，例えば，動物性油及び植物性油の一方又は両方を含んでもよい。動物性油の例は，魚卵，魚油，鳥卵（例えば鶏卵），哺乳類や鳥類から抽出された油，及び油脂産生細菌由来の動物性油である。植物性油の例は，大豆油，及びとうもろこし油である。

油溶性栄養成分の例は，各種の動物性油脂，植物性油脂及びそれらから抽出・精製された脂肪酸である。油溶性栄養成分には，油溶性成分のほか脂溶性成分が含まれる。油溶性栄養成分の別の例は，油溶性ビタミン（ビタミンＡ，Ｄ，Ｅなど），及びβ―クリプトキサンチンなどのカロテノイドである。これら油溶性ビタミンは，上記した動物性油及び植物性油に含まれるもののほか，油溶性ビタミン自体を別途添加してもよい。また，油溶性栄養成分の別の例は，ＤＨＡ及びＥＰＡである。油溶性栄養成分の濃度の例は，油溶性液のうち５〜３０重量％であり，１０〜２０重量％が好ましい。

水相１３は，水溶性栄養成分を含む。水溶性栄養成分の例は，糖類，アミノ酸，オリゴペプチド，タンパク質の加水分解物，水溶性ビタミン，パントテン酸，及びニコチン酸のいずれか又は２種以上である。糖類の例は，単糖，小糖類，及び多糖類である。糖類の具体例は，ブドウ糖，１，５−アンヒドロ−Ｄ−フルクトース，麦芽糖，及びトレハロースである。レプトケファルス幼生は，消化能力が低いため，糖類として，単糖類や二糖類といった小さな分子からなる糖類が好ましい。また，本発明の飼料は，Ｗ／Ｏ／Ｗといった構造を有するマイクロカプセル化された飼料であるため，小さな分子からなる糖類を効果的に収容し，レプトケファルス幼生に摂取させることができる。

アミノ酸の例は，必須アミノ酸である。オリゴペプチドは，２〜数百（たとえば３００）のアミノ酸が結合してできたペプチドである。タンパク質の加水分解物は，例えば，植物性タンパク質及び動物性タンパク質のいずれか又は両方を含むタンパク質源を，タンパク質分解酵素，塩酸，又は熱水を用いて加水分解したものである。タンパク質の加水分解物は，例えば，大豆酵素処理タンパク質，魚介類自己消化分解抽出物，魚介粉酵素処理分解抽出物及び魚介肉熱水処理分解抽出物のいずれか１つ又は２つ以上であってもよい。

植物性タンパク質の例は，大豆タンパク質である。動物性タンパク質の例は，魚介類エキス及び動物プランクトンエキスである。大豆酵素処理タンパク質は，酵素処理を施した大豆タンパク質である。酵素の例は，プロテアーゼ（タンパク質分解酵素）である。すなわち，大豆酵素処理タンパク質は，大豆タンパク質を酵素により低分子化したものである。

魚介類自己消化分解抽出物は，魚介類が自己消化により分解したものから抽出される抽出物である。魚介類自己消化分解抽出方法の例は，例えば，特許第３２６８６５７号公報に記載されている。魚介類自己消化分解抽出方法は，魚介類自体に含まれる消化酵素により分解しても良いし，必要に応じて，酸や熱水を加え，また必要に応じてプロテアーゼを作用させ，また，魚介類自体をミンチに細断したり，攪拌を施すことにより，分解を促進しても良い。魚介類の例は，カタクチイワシ，マイワシ、スルメイカ及びオキアミである。魚介類自己消化分解抽出物は，アミノ酸類などの低分子化合物を多く含む。魚介類自己消化分解抽出物は，魚介類が自己消化により分解したものから，水溶性の部分を抽出したものが好ましい。つまり，魚介類は，骨や外骨格など，硬組織が含まれているところ，硬組織が少しでも餌に混入すると，それを取り込んだレプトケファルス幼生の消化器系が損傷することとなる。このため，分解物の水溶性部分を抽出した魚介類自己消化分解抽出物は，消化器系の弱いレプトケファルス幼生であっても好ましく取り込むことができる。

魚介粉酵素処理分解抽出物は，魚介類を粉末状にしたものを粉酵素処理して分解して得られるものを抽出したものである。酵素処理の方法は，例えば，特許第３４０８９５８号公報に記載されている。この方法は，魚介類を，拌下にタンパク質分解酵素で処理し，乳化組成物を得る。この乳化組成物は，水溶性のアミノ酸，オリゴペプチド，及びビタミン，塩等の水溶性ミネラル分を含む液相と，水不溶性の高度不飽和脂肪酸を含む油脂及び分子量二万から十万のタンパク室からなる固相から形成される。この乳化組成物を固液分離し，液体部分を魚介粉酵素処理分解抽出物として抽出すればよい。酵素処理の別の例は，特許第４８０４００３号公報に記載されるものである。

魚介肉熱水処理分解抽出物は，魚介肉を加圧下に熱水で処理して，魚介肉を分解し抽出物を得る方法である。この熱水には，適宜タンパク質分解酵素がふくまれていてもよい。具体的な熱水処理の例は，国際公開ＷＯ２００２／０３６８０２号パンフレットに開示されている。

タンパク質加水分解物の具体的な例は，大豆ペプチド，魚介類エキス，酵母エキス，及び植物プランクトンエキスである。水溶性ビタミン類の例は，ビタミンＢ１，Ｂ２，Ｂ６，及びＣである。ビタミンＣは，酸化防止剤としても機能するため好ましい。水溶性栄養成分の濃度の例は，水溶液中で１ｍｇ／ｍｌ〜５００ｍｇ／ｍｌであり，２ｍｇ／ｍｌ〜１００ｍｇ／ｍｌが好ましく，３ｍｇ／ｍｌ〜１００ｍｇ／ｍｌでもよい。溶液の例は，緩衝液であり，緩衝液の例はリン酸緩衝液である。溶液の別の例は，純水，量重水，食塩水，及び生理食塩水である。

水相１３と油相１１の重量比の例は，１：１０〜１０：１であり，１：５〜５：１でもよく，１：３〜３：１でもよい。水溶性栄養成分と油溶性栄養成分の重量比の例は，１：１０〜１０：１であり，１：５〜５：１でもよく，１：３〜３：１でもよい。糖類とアミノ酸源（アミノ酸，オリゴペプチド，タンパク質の加水分解物）の重量比の例は，１：１０〜１０：１であり，１：５〜５：１でもよく，１：３〜３：１でもよい。

本発明のマイクロカプセル飼料は，以上のような水相が油相内に存在した状態で，壁材とする生分解性ポリマーの皮膜により被覆されて構成される。本発明の水産養殖用飼料の皮膜に用いられる生分解性ポリマー例は，セルロースなどの多糖系ポリマー，ポリペプチド，核酸，脂肪族ポリエステル，及びゼラチンである。多糖系ポリマーの例は，セルロース，及びポリ乳酸ポリマーであり，これらの中では，ポリ乳酸ポリマーが好ましい。これらポリマーの数平均分子量は，１６００以上４６００００以下であり，８００００以上１６００００以下が好ましく，１４００００以上１６００００以下でもよい。特に，本発明の水産養殖用飼料が，レプトケファルス幼生に投与される場合，ポリマーの数平均分子量は，８００００以上１０００００以下が好ましい。本発明の水産養殖用飼料の皮膜の厚さの例は，１ｎｍ以上１μｍ以下であり，１μｍ以上５０μｍ以下でもよく，１０ｎｍ以上１０μｍ以下が好ましい。

本発明のマイクロカプセル飼料は，上記の水相又は油相中に，又は水相又は油相と混合しない形で皮膜内部に，さまざまな物質を添加してもよい。そのような添加物の例は，スピルリナ，乾燥スピルリナ，スピルリナ抽出物，クロレラ，乾燥クロレラ，及びクロレラ抽出物などの藻類成分である。藻類成分は，たとえば，マイクロカプセル飼料中，０．１重量％以上１０重量％以下含まれ，０．５重量％以上５重量％含まれてもよい。

本発明の水産養殖用飼料の好ましいものは，免疫腑活剤をさらに含む。免疫腑活剤の例は，乳酸菌，酵母，麹菌，枯草菌，納豆菌，ウナギ目魚類成魚腸内由来の腸内細菌，ウナギ目魚類シラスウナギ腸内由来の腸内細菌，及びウナギ目魚類レプトケファルス幼生腸内由来の腸内細菌のいずれか又は２つ以上である。これらの免疫腑活剤を含む水産養殖用飼料を用いると，従来生産が困難とされていたウナギ目魚類レプトケファルス幼生を効果的にシラスウナギまで生産することができる。免疫腑活剤は，たとえば，マイクロカプセル飼料中，０．１重量％以上１０重量％以下含まれ，０．５重量％以上５重量％含まれてもよい。ウナギ目魚類成魚腸内由来の腸内細菌，ウナギ目魚類シラスウナギ腸内由来の腸内細菌，及びウナギ目魚類レプトケファルス幼生腸内由来の腸内細菌は，例えば，健康体のウナギ目魚類成魚，ウナギ目魚類シラスウナギ，及びウナギ目魚類レプトケファルスの腸から腸内細菌を取り出したものや，取り出した腸内細菌を培養したものを用いることができる。また，これらは例えば，健康体のウナギ目魚類成魚，ウナギ目魚類シラスウナギ，及びウナギ目魚類レプトケファルスの糞を溶解させて細菌を取り出したものや，取り出した細菌を培養したものを用いてもよい。

水産養殖用飼料の製造方法
本発明は，本発明のマイクロカプセル化された水産養殖用飼料の製造方法をも提供する。
本発明の水産養殖用飼料は，カプセル化に用いられている手法を適宜採用することで，製造できる。本発明の水産養殖用飼料の基本となる製造工程は，例えば，以下のとおりである。

一次乳化工程，二次乳化工程及び蒸発工程を含む。次に，各工程を詳述する。

一次乳化工程
一次乳化工程は，油溶性栄養成分および壁材ポリマーとして生分解性ポリマーを（揮発性）有機溶媒に溶かした油性溶液（有機相）に，水溶性栄養成分の水性溶液（内水相）を添加し撹拌することよってＷ／Ｏ型エマルションを調整する工程である。

有機溶媒の例は，ハロゲン化アルキル，アリールアルキル，エーテル類などの揮発性有機溶液である。油溶性液の溶液の好ましい例は，低沸点有機溶媒であるジクロロエタン，クロロホルム，トルエン，及びジメチルエーテルであり，これらの中では，ジクロロエタンが好ましい。一次乳化工程では，上記の成分以外に公知の乳化工程において用いられる要素を適宜追加してもよい。例えば，一次乳化工程において，適当なエマルション安定剤を配合してもよい。このようなエマルション安定剤としては，ソルビタンモノエートの如きスパン系界面活性剤を始めとして，一般的にエマルション調整に用いる種々の界面活性剤，水溶性樹脂，水溶性多糖類等がある。界面活性剤の量の例は，油溶性液のうち０．５〜５重量％であり，１〜３重量％であってもよく，１〜２重量％でもよい。

一次乳化工程において，水溶性栄養成分を適当な溶液中に入れて水性溶液を得る。その際，細菌類を含む水溶性栄養成分の保護のために保護材ポリマーを加える。保護材ポリマーとしては，例えばアルギン酸塩，キトサンの如き水溶性高分子多糖類やポリビニルアルコールが挙げられる。特にアルギン酸ナトリウムが好適である。このアルギン酸ナトリウムを用いる場合の水溶性濃度は，０．５〜５重量％とするのが良く，高すぎるとＷ／Ｏ型エマルションの分散安定性が低下して凝集を生じ易くなる。

そして，エマルジョン化機（ホモジナイザー）を用いるか，撹拌しつつ，調製した油性溶液に水性溶液を少しずつ注入することによってＷ／Ｏ型エマルションを得ることができる。水性溶液：油性溶液の比（体積比）の例は，１：１〜１：１０であり，１：２〜１：１０でもよく，１：２〜１：５であってもよい。一次乳化工程は，氷冷下に行うことが好ましく，油性溶液の温度の例は，−１５℃〜４℃であり，−１０℃〜０℃であってもよい。攪拌速度の例は，１０００〜１００００ｒｐｍであり，３０００〜５０００ｒｐｍが好ましい。攪拌は超音波振動により行っても良い。攪拌時間の例は，１０分以上１時間以下であり，１０〜２０分間でもよい。

二次乳化工程
二次乳化工程は，上記の一次乳化工程で得られたＷ／Ｏ型エマルションを，一次乳化工程で用いたものとは別の水性溶液（外水相：第２の水性溶液）に添加し，撹拌することによりＷ／Ｏ／Ｗ型エマルションを調整する工程である。
第２の水性溶液は，皮膜原料や分散安定剤を含む溶液であることが好ましい。第２の水性溶液の例は，純水，蒸留水，及び生理食塩水である。この第２の水性溶液（外水相）は，水溶性の分散安定剤の水溶液である。水溶性分散安定剤としては，ポリアクリル酸ナトリウム，ポリアクリルアミド，ポリエチレンイミン，ポリエチレンオキシド，ポリビニルピロリドンなどが挙げられる。特にポリビニルアルコールが好ましい。また液滴粒子の凝集抑制のために少なくとも第三リン酸カルシウムを含むことが推奨される。蒸留水を用いて，１〜３０重量％程度の水溶液として調整するが，特に２〜１０重量％が好ましい。

二次乳化工程は，一次乳化工程よりも遅い撹拌速度でかつ短時間で行うことが好ましい。すなわち外水相となる水相に常温下でＷ／Ｏ型エマルションを添加混合すればよく，３００〜１０００ｒｐｍの撹拌速度で３〜１０分間程度続けることによって分散相であるＷ／Ｏ型エマルション液滴の各粒子中で内水相の液滴合一がなされる。この液滴合一により，Ｗ／Ｏ型エマルション液滴は内側の単一水相が外側の有機相で覆われた構造の液滴に添加する。

蒸発工程
蒸発工程は，二次乳化工程で得られたＷ／Ｏ／Ｗ型エマルションから有機溶媒を蒸発させることによって，油溶性栄養成分が含有された油相内に，水溶性栄養成分が含有された水相を内包するマイクロカプセルを形成する工程である。
前記の液滴合一後，液中乾燥によって有機相の低沸点有機溶液を揮散除去するために，攪拌下で加温と減圧の一方もしくは両方を行う。処理効率面より加温と減圧を同時に行うことが推奨される。この蒸散工程は揮発溶液の沸点よりもわずかに高い温度に加温しながらゆるやかな撹拌を行う。有機相の低沸点有機溶媒がジクロロエタンを主体とする場合，加温と減圧を同時に行う液中乾燥では最高到達温度は３５℃程度，最高減圧は３００ｈＰａ程度で済む。なお，液中乾燥における攪拌速度は，１００〜１０００ｒｐｍ程度，工程時間としては，１〜２４時間，特に３〜１０時間行うのが好ましい。得られたマイクロカプセルは濾過乾燥後凍結保存を行うか，濾過後水相中に保存することが好ましい。

上記の各工程において，必要な栄養成分や免疫腑活剤を適宜混合してもよい。

水産養殖用飼料を用いた水産養殖方法
本発明は，本発明のマイクロカプセル化された水産養殖用飼料を用いた養殖方法をも提供する。
魚介類を養殖する方法は，公知の方法を適宜採用すればよい。特に，ウナギの稚魚を養殖する場合は，例えば，特開２０１３−２３６５９８号公報に開示された装置を用いてもよい。この装置は，ウナギを常圧下で飼育して性成熟を誘導するウナギ用飼育装置である。そして，この装置は，飼育水及びウナギを収容する水槽と，水槽に飼育水を供給する給水手段と，水槽から飼育水を排出する排水手段と，飼育水の溶存酸素の濃度を調整する手段とを含む。

本発明の飼料を用いてウナギ仔魚を飼育する場合は，上記飼料を，ウナギ仔魚を飼育する水槽に直接入れ，沈降又は分散した状態で食べさせるとよい。飼育水槽の水を循環させている場合には，排水における餌のロスを抑えるため，給餌を行う間は水流を停止もしくは間欠状態にすることが好ましい。飼料は不足しないよう，常に残るように与え，１日につき１回から５回に分けて給餌することが好ましい。

以下，実施例を用いて本発明を具体的に説明する。本発明はこの実施例によって限定されるものではなく，公知の方法を適宜採用したものも本発明に含まれる。上述したマイクロカプセルの製法に従い，以下に示す組成および条件を用いて，養殖仔稚魚の飼料として好適なマイクロカプセルを製造した。図２は，実施例１における製造工程の概念図である。

内水相の調整
大豆酵素処理タンパク質（不二製油社製）と麦芽糖に対し，各２０ｍｇ/ｍｌ，１ｍｇ/ｍｌとなるようにリン酸緩衝液３６ｍｌを添加混合し，さらにオキアミ酵素処理分解抽出溶液１ｍｌを加え，さらに1重量％アルギン酸ナトリウムを加えて内水相を調整した。

有機相の調整
ジクロロエタン１０８ｍｌに対し，１５重量％のフィードオイル（三昌物産社製），５重量％のポリ乳酸ポリマー（平均分子量１０００００），１．５重量％のソルビタンモノオレエートを添加混合して有機相を調整した。

外水相の調整
蒸留水６８０ｍｌに対し，４％重量のポリビニルアルコールと０．３％重量の第三リン酸カルシウムを添加混合して外水相を調整した。

前記有機相を氷冷下で５０００ｒｐｍで１０分攪拌しながら前記内水相を添加混合して，Ｗ／Ｏ型エマルションを調整し，このＷ／Ｏ型エマルションを常温（２０℃）下で攪拌下にある前記外水相に添加してＷ／Ｏ／Ｗエマルションを調整し，続いて大気圧において１５０ｒｐｍで３０分間攪拌した、これにより，分散しているＷ／Ｏ型エマルション液滴中の内水相液滴を合一させた後，液温３５℃で，雰囲気圧３００ｈＰａで６時間液中乾燥処理を行い，製出したマイクロカプセルをろ過分離し，０．１モル濃度の塩酸水溶液で洗浄して第三リン酸カルシウムを除去し，更に蒸留水で洗浄して回収した。

以上の操作条件および組成を用いて得られたマイクロカプセルの粒径をレーザー回折式粒度分布装置で測定したところ，５〜２０μｍの粒径を有していた。

納豆菌，ドライイースト，及び乳酸菌を加えた市販されている微生物活性酵素（ＬＯＶＥいぶすき）を内水相溶液内に１ｍｌ加えた以外は，実施例１と同様にしてカプセル飼料を作製した。

上記飼料をベースとして，β―クリプトキサンチンが大量に含まれている温州ミカン乾燥上皮の微細粉末１ｇをリン酸緩衝液に加え，１０分間微速攪拌した後，１００ｒｐｍ，５分の遠心によって得られた上澄みを内水相溶液内に１ｍｌ加えた以外は，実施例１と同様にしてカプセル飼料を作製した。

実施例１におけるフィードオイルの代わりに，アブラツノザメ卵を用いた以外は，実施例１と同様にしてカプセル飼料を作製した。

スピルリナ抽出物を内水相溶液内に１ｍｌ加えた以外は，実施例１と同様にしてカプセル飼料を作製した。

麦芽糖の替わりに１，５−アンヒドロ−Ｄ−フルクトースを用いた以外は，実施例１と同様にしてカプセル飼料を作製した。

［比較例１］
特開平１１−５６２５７号公報（特許文献３）に開示された方法を用いて餌を作成した。具体的に説明すると，β―カロチンと，ゼラチン及び魚油を攪拌して乳化することでβ−カロチンを含むマイクロカプセル化したうなぎ稚魚の餌を製造した（比較例１の飼料）。

実施例１〜６及び比較例１の飼料を用いて，１００ｍｌの小型ガラス容器に対し7日齢のレプトケファルス幼生を各２０尾収容し，上記試料の摂餌試験を行った。各飼料ともに仔魚の消化管に内容物が認められ，摂餌が認められた。

実施例１〜６及び比較例１の飼料を用いて，５ｌのボール型水槽に7日齢のレプトケファルス幼生を各２００尾収容し，上記試料を用いた生残試験を行った。特開平１１−５６２５７号公報（特許文献５）に開示されたうなぎ稚魚の餌（比較例１）は，試験開始後著しく生残率が減少したが，本発明の飼料では，生残率はこれまでのサメ卵を主体とした仔魚用飼料と同等の成績を示した。また，本発明の飼料では，水槽内の水質が維持されていた。

水相の調整
蒸留水８０ｍｌに，大豆ペプチド１６ｇ，及びアルギン酸ナトリウム１ｇを加えて水相を調整した。

油相の調整
菜種油１３０ｇに，スパン８０（(Z)-9-オクタデセン酸）１．３ｇを混合し，有機相を調整した。

添加層Ｗ／Ｏの調整
菜種油３０ｇ，Ｓｐａｎ８０ ０．３ｇ，蒸留水１０ｍｌ，
塩化カルシウム０．７ｇを混合して添加層Ｗ／Ｏを調整した。

油相を２５℃にて２００ｒｐｍで撹拌しつつ，１０分間水相を添加混合して，Ｗ／Ｏ型エマルションを調整した。このＷ／Ｏ型エマルションに２５℃にて５００ｒｐｍで撹拌しつつ，５分間添加層Ｗ／Ｏを添加混合した。さらに，２５℃にて２００ｒｐｍで撹拌し，４５分間重合反応を促進させた。ろ過を行い，２０ｇのマイクロカプセルを回収した。回収したマイクロカプセル20gに蒸留水20gを添加して分散させて写真撮影を行った。得られた写真を図３に示す。すなわち，図３は，実施例において得られたマイクロカプセルを蒸留水に分散させた際の図面に替る写真である。

本発明は，特に水産業において利用されうる。

１１ 油相
１３ 水相
１５ 皮膜
１７ 水産養殖用飼料

Claims (8)

1. 油溶性栄養成分を有する油相（１１）と，
   前記油相（１１）内に存在し，水溶性栄養成分を含む水相（１３）と，
   前記油相（１１）及び前記水相（１３）を含む皮膜（１５），
   を含む，マイクロカプセル化された水産養殖用飼料であって，
   前記水溶性栄養成分は，
   アミノ酸，オリゴペプチド，及びタンパク質の加水分解物のいずれか１つ又は２つ以上と，を含む，
   水産養殖用飼料。
2. 請求項１に記載の水産養殖用飼料であって，
   前記水溶性栄養成分は，
   単糖類，小糖類及び多糖類のいずれか１つ又は２つ以上から選択される糖類をさらに含む，
   水産養殖用飼料。
3. 請求項１に記載の水産養殖用飼料であって，
   ウナギのレプトケファルス幼生をシラスウナギまで成長させるために用いられる，ウナギのレプトケファルス幼生用飼料である，水産養殖用飼料。
4. 請求項１に記載の水産養殖用飼料であって，
   前記水溶性栄養成分は，タンパク質の加水分解物を含み，
   前記タンパク質の加水分解物は，
   植物性タンパク質及び動物性タンパク質のいずれか又は両方を含むタンパク質源を，タンパク質分解酵素，塩酸，又は熱水を用いて加水分解したものである，
   水産養殖用飼料。
5. 請求項１に記載の水産養殖用飼料であって，
   前記水溶性栄養成分は，タンパク質の加水分解物を含み，
   前記タンパク質の加水分解物は，
   大豆酵素処理タンパク質，魚介類自己消化分解抽出物，魚介粉酵素処理分解抽出物及び魚介肉熱水処理分解抽出物のいずれか１つ又は２つ以上を含む，
   水産養殖用飼料。
6. 請求項１に記載の水産養殖用飼料であって，
   前記皮膜（１５）が，生分解性ポリマー膜である水産養殖用飼料。
7. 請求項１に記載の水産養殖用飼料であって，
   免疫腑活剤をさらに含む，水産養殖用飼料。
8. 請求項７に記載の水産養殖用飼料であって，
   前記免疫腑活剤が，乳酸菌，酵母，麹菌，枯草菌，納豆菌，ウナギ目魚類成魚腸内由来の腸内細菌，ウナギ目魚類シラスウナギ腸内由来の腸内細菌，及びウナギ目魚類レプトケファルス幼生腸内由来の腸内細菌のいずれか又は２つ以上を含む，水産養殖用飼料。

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