JPWO2015093116A1 - 細胞の蛍光免疫染色方法ならびにそのためのシステムおよびキット - Google Patents
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Abstract
Description
(1)抗原抗体反応により結合している抗原と蛍光標識抗体とを解離させる処理を含む、抗原抗体解離工程;
(2)細胞が有する少なくとも1種の抗原に、当該抗原に対応した少なくとも1種の蛍光標識抗体を、抗原抗体反応により結合させる処理を含む、蛍光免疫染色工程。
[3] 前記細胞が最初の抗原抗体解離工程の前に固定化処理されている、[1]または[2]に記載の蛍光免疫染色方法。
[7] [1]〜[6]のいずれか一項に記載の蛍光免疫染色方法を利用した細胞観察システムであって、
細胞が有する少なくとも1種の抗原に、当該抗原に対応した蛍光標識抗体を抗原抗体反応により結合させる処理のために、当該蛍光標識抗体溶液を送液し、最初の蛍光免疫染色工程を行った後、下記(1)および(2)を含む工程のセットを少なくとも1回行うための手段を備えることを特徴とする、細胞観察システム:
(1)抗原抗体反応により結合している抗原と蛍光標識抗体とを解離させる処理のために解離液を送液する、抗原抗体解離工程;
(2)細胞が有する少なくとも1種の抗原に、当該抗原に対応した少なくとも1種の蛍光標識抗体を、抗原抗体反応により結合させる処理のために、当該蛍光標識抗体溶液を送液する、蛍光免疫染色工程。
細胞が有する少なくとも1種の抗原に対応した蛍光標識抗体を調製するための試薬、および抗原抗体反応により結合している抗原と蛍光標識抗体とを解離させる処理のための試薬を含む、蛍光免疫染色キット。
[9]に記載の蛍光免疫染色キットの構成品と、細胞回収デバイスおよび/または試薬収容器を含む、細胞観察キット。
図1に、本発明の蛍光免疫染色方法の実施形態の一例を表す、工程のフローチャートおよび各工程における免疫染色の状態の模式図を示す。
(1)抗原抗体反応により結合している抗原と蛍光標識抗体とを解離させる処理を含む、解離工程;
(2)細胞が有する少なくとも1種の抗原に、当該抗原に対応した蛍光標識抗体を抗原抗体反応により結合させる処理を含む、染色工程。
なお、(1)の解離工程および(2)の染色工程を含む工程のセットには、さらに、洗浄工程、観察工程など他の工程が含まれていてもよい。
染色工程では、細胞と蛍光標識抗体溶液とを接触させることにより、細胞が有する抗原にその蛍光標識抗体を結合させるようにする。細胞が有する抗原は、細胞表面に存在するものであってもよいし、細胞内部(原形質)に存在するものであってもよい。ただし、細胞内部の抗原を免疫染色の対象とする場合は、必要に応じて、細胞に対してあらかじめ浸透化処理をしておくようにする。
細胞表面上の複数の種類の抗原に結合させるための蛍光標識抗体(さらに任意で核染色剤等)は、任意の順序で、1種類ずつ順番に細胞と接触させるようにしてもよいし、2種類以上またはすべてを同時に細胞と接触させるようにしてもよい。
抗原抗体解離工程では、細胞と解離液とを接触させることより、蛍光免疫染色工程で抗原に結合した蛍光標識抗体を解離させるようにする。この際、任意で用いてもよい、核染色剤のように抗原抗体反応以外の様式で結合している蛍光物質は、解離剤の影響を実質的に受けずに結合を維持したままである。抗原抗体解離工程の時間、すなわち細胞と解離液とを接触させる時間は、用いる解離剤の種類および濃度に応じて十分に解離する効果が得られるよう、適宜調整することができるが、例えば、pH1〜6の酸を解離剤として用いる場合は、通常は10秒〜30分間程度とすればよい。ただし、抗原性を失う程度の過剰な反応にならないように適宜調整するのが良い。
蛍光免疫染色の対象とする細胞(集団)は特に限定されるものではないが、代表例としては、血液、尿、リンパ液、組織液、体腔液など、ヒトまたはその他の動物から採取された検体に含まれる細胞、あるいは培養された細胞(細胞株)が挙げられる。
免疫染色の対象とする抗原は特に限定されるものではないが、CTC等の稀少細胞やその他の特徴的な細胞を検出する場合には、そのような細胞と他の細胞と区別するために利用されているマーカー分子を免疫染色の対象に含めることが好適である。マーカー分子には、細胞表面に発現するタンパク質と、細胞内部(細胞質)に発現するタンパク質があるが、本発明ではどちらを対象としてもよい。細胞表面に発現するタンパク質としては、例えば、白血球で陽性となりMCF−7(乳癌細胞)等のCTCで陰性となるCD45、白血球で陽性となりMCF−7等の上皮細胞としての性質を有するCTCで陽性となるEpCAM(Epithelial cell adhesion molecule:上皮細胞接着分子)などが挙げられる。細胞内部に発現するタンパク質としては、例えば、MCF−7等のCTCで陽性となり白血球では陰性となるサイトケラチンが挙げられる。これらの例示した抗原を対象として免疫染色を行った場合に、CD45が陰性で、サイトケラチンが陽性の細胞が検出されれば、その細胞はMCF−7であると判定することができる。
免疫染色のための蛍光物質は特に限定されるものではないが、例えば公知の様々な蛍光色素(分子)を用いることが好適である。免疫染色のための蛍光物質同士の励起光波長および蛍光波長ならびに次に述べる核染色の蛍光波長の関係性を考慮し、適切な複数枚のカットフィルターを用いることでそれぞれの蛍光をうまく測定できるよう、適切な励起光波長および蛍光波長を有する蛍光物質を選択して用いればよい。
抗原抗体解離工程では、抗原抗体反応により結合している抗原と蛍光標識抗体とを解離させる処理のための試薬である解離剤(その水溶液である解離液)を用いる。解離液として用いる水溶液は、蛍光免疫染色方法を実施する前にあらかじめ調製しておけばよい。
ヒトまたはその他の動物から採取された検体は、そこに含まれる細胞に対する免疫染色を行う上で必要な前処理を、あらかじめを行っておくことが適切である。検体としては、例えば血液(末梢血)、尿、リンパ液、組織液、体腔液など、細胞を含有している可能性のあるものを用いることができる。これらの検体に応じた前処理方法は公知であるが、以下、代表的な検体である血液についての前処理方法について説明する。
採取されて体外に取り出された血液(全血)は、そのまま空気に触れさせると時間の経過と共に凝固し、そこに含まれる細胞を回収して観察することができなくなる。そのため、採取された血液は直ちに抗凝固処理することが好ましい。
密度勾配遠心処理は、細胞を含む血液中の成分を比重に従って分画することができ、特に血液中に多量に含まれている赤血球を除去して、CTC等の目的細胞を含む白血球のみを細胞観察の対象とするために用いることができる。
蛍光免疫染色処理に先立って、あるいはそれと同時に、細胞に対して必要に応じて、固定化処理、浸透化処理、ブロッキング処理、その他の前処理を行ってもよい。これらの前処理は、所期の効果が発揮される限り、任意の時点で、任意の順序で行うことができる。例えば、密度勾配遠心処理で細胞画分を得た後、観察用基板に固相化する前に、細胞の固定化処理をし、観察用基板に固相化した後、浸透化処理およびブロッキング処理を同時に行う(つまり浸透化剤およびブロッキング剤の両方を含む溶液で細胞を処理する)ようにしてもよい。なお、観察用基板に固相化する前に細胞を固定化する場合、固定化によっても細胞は観察用基板に吸着する能力を失っていないので、固相化の際には細胞の吸着(細胞と基板との物理的(分子間)相互作用)を利用することができる。また、観察用基板に固相化した後に細胞を固定化する場合、すでに細胞が観察用基板に吸着していれば、その後に固定化しても吸着による固相化を保持することができる。また、場合によっては、細胞に対する前処理を、血液等の検体から細胞画分を分離する前に行う(例えば血液検体を採取した直後に血液の抗凝固処理とともに細胞の固定化処理等を行い、その後密度勾配遠心処理を行って細胞画分を得る)ようにすることも可能である。
固定化処理は、細胞の自己分解や腐敗を遅延させ、その形態や抗原性を保持するために行われる処理であり、本発明では、CTC等の目的細胞の検出性を高めるとともに、抗原抗体解離工程で用いる酸等の解離剤が細胞または抗原に与えるダメージを抑えることが可能となる。特に結合と解離を複数回繰り返して実験を行うような場合、解離剤のダメージが細胞に与える影響は格段に大きくなるため、通常であれば細胞劣化が大きくなり実験が継続出来ないこともあり得る。しかし本工程のように固定化処理を行うことで細胞が形態や抗原性の保持力が高まり、複数回繰り返して実験を行うような場合であっても免疫染色性が劣化しにくくなるという効果をもたらす。
浸透化処理は、細胞膜の透過性を向上させて細胞の外部から細胞の内部に物質が浸透しやすくするための処理であり、本発明では、細胞内(原形質)にある抗原に対して蛍光標識抗体を結合させやすくして免疫染色性を向上させるという効果をもたらす。
ブロッキング剤は、細胞の目的抗原以外の部位が非特異的に染色されるのを防ぐために用いられる。細胞のブロッキング処理は、染色工程前あるいは染色工程中に実施すればよく、いずれか一方で実施しても、両方で実施してもよい。ブロッキング剤を入れた細胞を固相化する場合は、上述したように観察用基板にマイクロチャンバー等を形成しておく(後述する細胞の固相化方法に関する構造的手法を用いる)必要がある。また、細胞表面の観察用基板との吸着(相互作用)を起こしやすい部位を被覆することにより、マイクロチャンバー等の細胞の固相化に関与する部位以外に細胞が吸着してしまうことを防止し、所定の部位に細胞を収容されるようにするためにも用いられる。
免疫染色した細胞を観察する際には、細胞を固相化する、つまり細胞観察用基板上の細胞の位置が動かないようにするが好ましい。細胞を固相化することにより、観察の対象とする細胞の位置を特定しやすくなり、蛍光免疫染色されている細胞の観察画像を複数枚重ねあわせて、稀少細胞等の目的細胞を検出することができ、さらに必要に応じて、検出された目的細胞を回収することも可能となる。
固相化の構造的手法を用いるためには、例えば、細胞観察用基板の表面に微細なチャンバーまたは溝を複数形成することが挙げられる。そのような微細な構造が形成された細胞観察用基板の表面を、細胞懸濁液(液滴)を移動させると、流れと自重によって細胞をチャンバーまたは溝の中に落とし、その中に収容することができる。収容された細胞はチャンバーまたは溝の中だけに移動が制限される。
固相化の相互作用的手法を用いるためには、例えば、ポリスチレン、ポリメチルメタクリレート、ポリカーボネート等のプラスチックや、ガラスから成る、細胞と基板とが物理的な(分子間の)相互作用によって吸着しやすい材料で細胞観察用基板を作製することが挙げられる。疎水性のプラスチックの基板表面には、大気雰囲気化でUVを照射するUVオゾン処理や酸素プラズマ処理によって適度に親水化してもよく、ガラスの基板表面には、ポリリジンなどの細胞の接着性を向上する分子を塗布してもよい。
図2に、本発明の細胞観察システムの実施形態の一例を表す模式図を示す。
図3に、本発明の細胞観察システムを用いた細胞観察方法の実施形態の一例(染色工程を3回行う場合)を表す、工程のフローチャートを示す。
(1)抗原抗体反応により結合している抗原と蛍光標識抗体とを解離させる処理のために解離液を送液する、抗原抗体解離工程;
(2)細胞が有する少なくとも1種の抗原に、当該抗原に対応した少なくとも1種の蛍光標識抗体を、抗原抗体反応により結合させる処理のために、当該蛍光標識抗体溶液を送液する、蛍光免疫染色工程。
細胞検出装置100は、細胞回収デバイス10の流路1に各種の液体を送液するための送液系機構110、細胞回収デバイス10で回収され、蛍光標識された細胞を観察するための光学系機構120、細胞回収デバイス10を保持する細胞回収デバイスホルダー160、試薬収容器を保持する試薬収容器ホルダー170、ならびに細胞検出装置100が備える各種の機器類を制御するための制御手段190を備える。送液系機構110および光学系機構120は、任意の位置で液の吸引・吐出および細胞観察を可能にするための、空間的な移動手段を備えることが望ましい。
送液系機構110は、制御手段190の制御により、試薬収容器20の細胞懸濁液、染色液、解離液、洗浄液、その他の試薬類それぞれの収納部と細胞回収デバイスの流入口2との間を移動し、それらの液の吸引および吐出を行う機構である。具体的には、送液系機構110によって、試薬収容器に収容されている細胞懸濁液等の液体を所定の量吸引し、細胞回収デバイス10の流入口2で所定の流量で吐出して、流路1に導入する。また、送液により所定の処理が終わった後は、流路1を満たしていた液体を流入口2から吸引して排出し、試薬収容器20の廃液収納部で吐出する。送液系機構110は、例えば、シリンジポンプ、交換可能なチップ、X軸方向(図2の左右方向)およびZ軸方向(図2の上下方向)に移動可能なアクチュエーターなどを用いて構築することができる。シリンジポンプは、細胞観察に関する各工程において、所望の流量で吸引および吐出ができる能力を有する。
光学系機構120は、例えば、光源としてのレーザーダイオード(LD)、集光レンズ、ピンホール部材、ダイクロックミラー、蛍光フィルター、光電子増倍管(PMT)などによって構築することができる。LDは、蛍光標識抗体に用いられている蛍光物質の励起波長に対応したものとし、必要であれば複数用意してダイクロックミラーで適切なものが照射されるようにしてもよい。蛍光フィルターは、蛍光標識抗体に用いられている蛍光物質の蛍光波長に対応したものとし、必要であれば複数枚用意してフィルター切り替え器で交換しながら用いるようにしてもよい。
制御手段190としては、細胞検出装置100の各種の機器類に接続され、それらの機器類の制御プログラムを実行可能なパーソナルコンピュータを用いることができる。制御プログラムは、パーソナルコンピュータが内蔵する記憶媒体に記憶されていてもよいし、ネットワークまたは取り外し可能な記憶媒体を介してパーソナルコンピュータが利用できる状態に置かれていてもよい。
細胞回収デバイス10は、流路基板11および流路形成部材12によって構築されており、これらによって閉鎖されている空間が、細胞懸濁液等の液体を送液して満たすことのできる流路1となっている。流路基板11と流路形成部材12とは、観察やメンテナンスのしやすさの観点から、係合、ねじ固定、粘着等の手段で取り付け・取り外しが可能なようになっていてもよい。
試薬収容器20には、細胞懸濁液、染色液(蛍光標識抗体溶液、必要に応じて核染色剤溶液等)、解離液、洗浄液など、細胞観察を行う上で流路1に送液する必要のある各種の液体が収容されている。例えば、解離液、洗浄液など比較的保存性の高い液体は、密封された状態であらかじめ試薬収容器20の所定の部位に収容しておくことが可能であり、細胞懸濁液、染色液など細胞観察の直前に調製する必要のある液体は、調製後に試薬収容器20の所定の部位に添加して収容させることができるようにする。染色液、解離液、洗浄液など、細胞観察の際に複数回使用される溶液は、各工程に対応した容量の溶液を別個の部位に収容しておいてもよいし、各工程で同一の組成の溶液を繰り返し使用する場合はそれらの合計の用量の液体を1つの部位に収容しておいてもよい。また、試薬収容器20には必要に応じて、送液後に吸引して流路1から排出させた廃液を貯留する部位を設けておくようにする。
細胞懸濁液は、例えば、稀少細胞またはその他の目的細胞を含んでいる可能性がある、血液、尿、リンパ液、組織液、体腔液等の検体、あるいはそれらの検体から得られた細胞画分や精製物などの前処理物を、PBS等の適切な溶媒で希釈することにより調製することができる。また、細胞懸濁液は、試験、研究等のために培養した、稀少細胞またはその他の目的細胞の細胞株、あるいは目的細胞を含む細胞集団を、PBS等に分散させて調製したものであってもよい。患者の血中細胞モデルとして、健常者から採取された血中細胞の懸濁液にCTC等の稀少細胞の細胞株を添加したものを、細胞懸濁液として用いてもよい。
細胞観察システム200を用いた細胞観察方法では、図3のフローチャートに示すように、染色工程、解離工程、洗浄工程、測定工程、さらに任意で固定化工程などが複数回行われ、それぞれについて以下のような操作が行われる。
細胞回収工程では、流路1に細胞懸濁液を送液し、所定の時間静置してマイクロチャンバー5内に細胞を沈降させるようにして、細胞をマイクロチャンバー5内に回収する。細胞の回収効率を高めるために、送液の流量(流速)や向きに変化を付けてもよい。例えば、短時間送液した後、短時間静置するといったパターン(間欠送液)にしたり、流入口2から流出口3への順方向に送液した後、その逆方向送液するといったパターンにすることにより、流路基板1のマイクロチャンバー5以外の表面に残存したり、最後までマイクロチャンバー5内に回収されずに廃棄されたりする稀少細胞等の目的細胞を極力減らすことが可能になる。
染色工程では、染色液、すなわち蛍光標識抗体や核染色剤が溶解した水溶液を送液し、所定の時間流路1を満たして細胞と反応させ、蛍光標識抗体と抗原との抗原抗体反応による結合や核染色剤とDNAとのインターカレートによる結合が十分になされるようにする。この細胞観察システムにおける染色工程に関する事項は、前述した蛍光免疫染色方法における染色工程に関する事項に準じたものとすることができる。
解離工程では、解離液を送液し、所定の時間流路1を満たして細胞と反応させ、抗原抗体反応により結合した蛍光標識抗体を抗原から十分に解離させるようにする。この細胞観察システムにおける解離工程に関する事項は、前述した蛍光免疫染色方法における解離工程に関する事項に準じたものとすることができる。
解離工程は、染色工程後、観察工程の前に、または解離工程の後、次の染色工程の前に設けられる工程であり、洗浄液を送液して流路1内に残存する染色液や解離液を洗い流すことにより、測定工程・観察工程や次の染色工程に対する悪影響を排除する。洗浄液は、細胞懸濁液等の溶媒として用いられているものと同じPBS等だけであってもよいし、そのPBS等の溶媒に必要に応じて界面活性剤を添加したものであってもよい。洗浄液は、必要に応じて複数回、送液および回収を繰り返してもよい。
固定化処理を細胞懸濁液調製(細胞前処理工程)の際、あるいは1回目の染色工程と同時に実施するだけでなく、繰り返し実施してもよい。その場合、染色工程と同時に固定化処理を行うこともできるが、解離工程の後、次の染色工程の前に単独で固定化工程を設けることもできる。その場合は、解離工程の後に、洗浄工程を実施し、その後、固定化液、すなわち固定化剤が溶解した水溶液を送液し、所定の時間流路1を満たして細胞と反応させる。これによって、細胞の形態や抗原性を保持することができ、解離液によるダメージを抑えることができる。固定化工程後は、必要に応じて洗浄工程を実施してもよい。
測定工程では、PBS等を送液して流路を満たした後、所定の励起光を照射し、光学系機構(PMT、PD等)をマイクロチャンバーの配置に沿って走査させながら位置(移動距離)ごとに、フィルターを通過した蛍光の強度を測定する。測定対象とする蛍光に応じて、励起光の光源または励起フィルターと蛍光フィルターとを切り替えればよい。所定の蛍光標識抗体が結合した細胞が収容されているマイクロチャンバーの位置では、測定される蛍光強度が高くなる。すべての蛍光標識抗体についての蛍光強度の測定結果が、目的細胞が示すはずのパターンと一致しているマイクロチャンバーに、目的細胞が収容されていると推定することができる。さらに、目的細胞の精細な蛍光画像を各回の免疫染色後に取得することによって、細胞内の抗原の局在を特定することができ、その細胞の性質を知ることができる。
(蛍光免疫染色キット)
本発明の蛍光免疫染色方法を実施するために利用することのできる蛍光免疫染色キットは、例えば、細胞が有する少なくとも1種の抗原に対応した蛍光標識抗体を調製するための試薬と、抗原抗体反応により結合している抗原と蛍光標識抗体とを解離させる処理のための試薬とを含む。蛍光標識抗体を調製するための試薬は、例えば、標的とする抗原に対応したモノクローナル抗体、蛍光色素、およびそれらを結合して複合体を形成するための試薬を含む。抗原抗体反応により結合している抗原と蛍光標識抗体とを解離させる処理のための試薬は、前述したような解離液そのものであってもよいし、そのような解離液を調製するための解離剤と希釈液であってもよい。
本発明の細胞観察システムを実施するために利用することのできる細胞観察キットは、例えば、上述したような蛍光免疫染色キットの構成品に加えて、細胞回収デバイスまたは試薬収容器、あるいはこれらの両方を含む。このような細胞観察キットは、必要に応じて、その他の試薬、試薬を調製するための器具、使用説明書などを含んでいてもよい。その他の試薬としては、例えば、前述したような核染色液、洗浄液、あるいはこれらを調製するための核染色剤、洗浄剤、とそれらの希釈液(PBS等の溶媒)が挙げられる。
密度勾配遠心を利用して赤血球を除去した血液検体にMCF−7細胞(乳癌細胞)を添加したものをサンプルとした。このサンプルを遠心して上清を除いた後、20v/v%ホルマリン液(和光純薬)(ホルムアルデヒドの濃度としては、8w/w%)をホルムアルデヒドが4w/w%になるようにPBSで希釈した溶液と、20分間室温で反応させて、細胞の固定化処理を行った。固定化された細胞サンプルは、使用する直前にPBSで2回遠心洗浄を行った後、1.5mLのプロテオセーブ(登録商標、住友ベークライト)2本に分け(それぞれA、Bと称する)、遠心して上清を除いた。
密度勾配遠心を利用して赤血球を除去した血液検体にMCF−7細胞(乳癌細胞)を添加したものをサンプルとした。このサンプルを遠心して上清を除いた後、20v/v%ホルマリン液(和光純薬)(ホルムアルデヒドの濃度としては、8w/w%)をホルムアルデヒドが4w/w%になるようにPBSで希釈した溶液と、20分間室温で反応させて、細胞の固定化処理を行った。固定化された細胞サンプルは、使用する直前にPBSで2回遠心洗浄を行った後、細胞の吸着(相互作用的手法)を利用してポリスチレンの基板上に固相化した。
上記の1回目の染色後、抗体解離後、および2回目の染色後の顕微鏡画像を図4に示す。
2 流入口
3 流出口
4 リザーバー
5 マイクロチャンバー
10 細胞回収デバイス
11 流路基板
12 流路形成部材
12a 枠部材
12b 天板部材
20 試薬収容器
CL 細胞懸濁液
100 細胞検出装置
110 送液系機構
111 チップ
120 光学系機構
160 細胞回収デバイスホルダー
170 試薬収容器ホルダー
190 制御手段
200 細胞観察システム
Claims (10)
- 細胞が有する少なくとも1種の抗原に、当該抗原に対応した蛍光標識抗体を抗原抗体反応により結合させる処理を含む、最初の蛍光免疫染色工程を行った後、下記(1)および(2)を含む工程のセットを少なくとも1回行うことを特徴とする、蛍光免疫染色方法:
(1)抗原抗体反応により結合している抗原と蛍光標識抗体とを解離させる処理を含む、抗原抗体解離工程;
(2)細胞が有する少なくとも1種の抗原に、当該抗原に対応した少なくとも1種の蛍光標識抗体を、抗原抗体反応により結合させる処理を含む、蛍光免疫染色工程。 - 前記抗原抗体解離工程における処理を、pHが1.0〜6.0の酸を用いて行う、請求項1に記載の蛍光免疫染色方法。
- 前記細胞が最初の抗原抗体解離工程の前に固定化処理されている、請求項1または2に記載の蛍光免疫染色方法。
- 前記細胞が、細胞観察用基板上に、細胞表面の抗原と細胞観察用基板に固定されている抗体との間の抗原抗体反応による結合以外の手段で固相化されている、請求項1〜3のいずれか一項に記載の蛍光免疫染色方法。
- 前記最初の蛍光免疫染色工程および2回目以降の蛍光免疫染色工程において、少なくとも1種の抗原を同一の種類のものとする、請求項1〜4のいずれか一項に記載の蛍光免疫染色方法。
- 前記細胞が検体に含まれる細胞または培養された細胞である、請求項1〜5の何れか一項に記載の蛍光免疫染色方法。
- 請求項1〜6のいずれか一項に記載の蛍光免疫染色方法を利用した細胞観察システムであって、
細胞が有する少なくとも1種の抗原に、当該抗原に対応した蛍光標識抗体を抗原抗体反応により結合させる処理のために、当該蛍光標識抗体溶液を送液し、最初の蛍光免疫染色工程を行った後、下記(1)および(2)を含む工程のセットを少なくとも1回行うための手段を備えることを特徴とする、細胞観察システム:
(1)抗原抗体反応により結合している抗原と蛍光標識抗体とを解離させる処理のために解離液を送液する、抗原抗体解離工程;
(2)細胞が有する少なくとも1種の抗原に、当該抗原に対応した少なくとも1種の蛍光標識抗体を、抗原抗体反応により結合させる処理のために、当該蛍光標識抗体溶液を送液する、蛍光免疫染色工程。 - さらに、蛍光免疫染色された細胞から発せられる蛍光の強度を測定する手段およびその測定結果を統合する手段、蛍光免疫染色された細胞の蛍光画像を撮影する手段およびその撮影画像を統合する手段、またはこれらの両方を備えた、請求項7に記載の細胞観察システム。
- 請求項1〜6のいずれか一項に記載の蛍光免疫染色方法に利用するためのキットであって、
細胞が有する少なくとも1種の抗原に対応した蛍光標識抗体を調製するための試薬、および抗原抗体反応により結合している抗原と蛍光標識抗体とを解離させる処理のための試薬を含む、蛍光免疫染色キット。 - 請求項7または8に記載の細胞観察システムに利用するためのキットであって、
請求項9に記載の蛍光免疫染色キットの構成品と、細胞回収デバイスおよび/または試薬収容器を含む、細胞観察キット。
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