JPWO2011108537A1 - 細胞支持体及び骨再生材 - Google Patents
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Abstract
Description
(a)気孔率:81%以上99.99%以下
(b)平均気孔サイズ:10〜400μm
(c)気孔間連通孔を有する、及び
(d)吸水率:1000%以上9900%以下
(a)気孔率:81%以上99.99%以下
(b)平均気孔サイズ:10〜400μm
(c)気孔間連通孔を有する、及び
(d)吸水率:1000%以上9900%以下
好ましくは、生分解性材料は、蛋白質、ポリペプチド、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、PLGA、キチン、キトサン、セルロース及びヒアルロン酸から選択される少なくとも1種以上である。
好ましくは、生分解性材料は、天然又は遺伝子組み換えゼラチン、天然又は遺伝子組み換えフィブロネクチン、あるいは天然又は遺伝子組み換えラミニンである。
好ましくは、架橋はアルデヒド類、縮合剤、又は酵素により施される。
好ましくは、生分解性材料が、遺伝子組み換えゼラチンである。
式:A−[(Gly−X−Y)n]m−B
(式中、Aは任意のアミノ酸又はアミノ酸配列を示し、Bは任意のアミノ酸又はアミノ酸配列を示し、n個のXはそれぞれ独立にアミノ酸の何れかを示し、n個のYはそれぞれ独立にアミノ酸の何れかを示し、nは3〜100の整数を示し、mは2〜10の整数を示す。なお、n個のGly-X-Yはそれぞれ同一でも異なっていてもよい。)
で示される。
式:Gly-Ala-Pro-[(Gly−X−Y)63]3−Gly
(式中、63個のXはそれぞれ独立にアミノ酸の何れかを示し、63個のYはそれぞれ独立にアミノ酸の何れかを示す。なお、63個のGly-X-Yはそれぞれ同一でも異なっていてもよい。)
で示される。
(1)配列番号1に記載のアミノ酸配列、又は
(2)配列番号1に記載のアミノ酸配列と80%以上の相同性を有し、生分解性を有するアミノ酸配列、
を有する。
本発明によればさらに、上記した本発明の細胞支持体を含む再生医療材料が提供される。
本発明によればさらに、上記した本発明の細胞支持体と移植細胞とを含む、再生医療材料が提供される。
本発明によればさらに、上記した本発明の骨再生材を含む再生医療材料が提供される。
本発明によればさらに、上記した本発明の骨再生材と移植細胞とを含む、再生医療材料が提供される。
(1)生分解性材料
(1−1)生分解性材料の種類
本発明の細胞支持体は、少なくとも1種以上の生分解性材料で構成される。本発明で用いる生分解性材料は、生体内で分解される限り、その種類は特に限定されない。本発明で用いられる生分解性材料は、Grand average of hydropathicity(GRAVY)値で表される親疎水性指標において、0.3以下−5.0以上であることが好ましく、0.0以下−3.0以上であることがさらに好ましく、上記を満たす親水性ポリペプチドが特に好ましい。Grand average of hydropathicity(GRAVY)値は、『Gasteiger E., Hoogland C., Gattiker A., Duvaud S., Wilkins M.R., Appel R.D., Bairoch A.;Protein Identification and Analysis Tools on the ExPASy Server;(In) John M. Walker (ed): The Proteomics Protocols Handbook, Humana Press (2005). pp. 571-607』及び『Gasteiger E., Gattiker A., Hoogland C., Ivanyi I., Appel R.D., Bairoch A.; ExPASy: the proteomics server for in-depth protein knowledge and analysis.; Nucleic Acids Res. 31:3784-3788(2003).』の方法により得ることができる。
本発明で用いる生分解性材料は、架橋されているものでもよいし、架橋されていないものでもよいが、架橋されているものが好ましい。架橋方法としては、熱架橋、化学架橋、アルデヒド類(例えば、ホルムアルデヒド、グルタルアルデヒドなど)による架橋、縮合剤(カルボジイミド、シアナミドなど)による架橋、酵素架橋、光架橋、UV架橋、疎水性相互作用、水素結合、イオン性相互作用など公知の方法を用いることができるが、グルタルアルデヒドを用いて架橋されていることが最も好ましい。
本発明で用いることができる遺伝子組み換えゼラチンは、コラーゲンに特徴的なGly-X-Yで示される配列(X及びYはそれぞれ独立にアミノ酸の何れかを示す)の繰り返しを有するものが好ましい(複数個のGly-X-Yはそれぞれ同一でも異なっていてもよい)。好ましくは、細胞接着シグナルを一分子中に2配列以上含まれている。本発明で用いる遺伝子組み換えゼラチンとしては、コラーゲンの部分アミノ酸配列に由来するアミノ酸配列を有する遺伝子組み換えゼラチンを用いることができ、例えばEP1014176A2、US6992172、WO2004-85473、WO2008/103041等に記載のものを用いることができるが、これらに限定されるものではない。本発明で用いる遺伝子組み換えゼラチンとして好ましいものは、以下の態様の遺伝子組み換えゼラチンである。
好ましくは、遺伝子組み換えゼラチンはテロペプタイドを有さない。
好ましくは、遺伝子組み換えゼラチンは天然コラーゲンをコードする核酸により調製された実質的に純粋なコラーゲン用材料である。
(1)配列番号1に記載のアミノ酸配列;又は
(2)配列番号1に記載のアミノ酸配列と80%以上(さらに好ましくは90%以上、最も好ましくは95%以上)の相同性を有し、生分解性を有するアミノ酸配列;
を有する遺伝子組み換えゼラチンである。
本発明の細胞支持体は、生分解性材料から構成される多孔質体であって以下の特性を有する多孔質体からなるものである。
本発明の細胞支持体(多孔質体)の気孔率は、嵩密度(ρ)と真密度(ρc)より、気孔率(P = 1−ρ/ρc (%))を求める。嵩密度(ρ)は、乾燥重量と体積から算出し、真密度(ρc)は、ハバード型形の比重瓶法により求めることができる。本発明の細胞支持体(多孔質体)の気孔率は、81%以上99.99%以下であり、好ましくは95.01%以上99.9%以下である。
本発明の細胞支持体(多孔質体)の平均気孔サイズは、内部断面構造を走査型電子顕微鏡で観察することで求められる。本発明の細胞支持体(多孔質体)の平均気孔サイズは10〜400μmであり、好ましくは50〜300μmであり、より好ましくは70〜200μmである。
本発明の細胞支持体においては、気孔間連通孔が存在している。気孔間連通孔が存在することによって、スポンジ外部からスポンジ深部に至るまで、気孔が連なることにより、スポンジへ播種した細胞が、スポンジ内部へと分散・拡散可能となる。また、気孔間連通孔は、上記機能を発揮するため、10μm以上であることが好ましい。
本発明の細胞支持体(多孔質体)の吸水率は、乾燥重量(W0)と、超純水を25℃で5分間自然に吸水させ、プラスチックシャーレ上にて余分な水を十分に除いた後の水膨潤時の重量(W1)を用いて、(W1 ÷ W0 × 100(%))により算出することができる。本発明の細胞支持体(多孔質体)の吸水率は、1000%以上9900%以下であり、好ましくは2000%以上5000%以下である。
本発明の細胞支持体は、骨再生治療用の足場基材、治療剤として用いることが出来る。本発明の細胞支持体は単独で骨再生治療剤として用いることができる。骨再生、骨新生が必要な治療である限り、疾患は限定されるものではない。加えて、本発明の細胞支持体は、移植細胞や骨誘導薬剤と併用することによっても骨再生治療剤として用いることが出来る。骨誘導薬剤としては、例えばBMP(骨形成因子)やbFGF(塩基性線維芽細胞増殖因子)が挙げられるが特に限定はされない。
遺伝子組み換えゼラチン(リコンビナントゼラチン)として以下記載のCBE3を用意した(WO2008-103041に記載)。
CBE3
分子量:51.6kD
構造: GAP[(GXY)63]3G
アミノ酸数:571個
RGD配列:12個
イミノ酸含量:33%
ほぼ100%のアミノ酸がGXYの繰り返し構造である。
CBE3のアミノ酸配列には、セリン、スレオニン、アスパラギン、チロシン及びシステインは含まれていない。
CBE3はERGD配列を有している。
等電点:9.34
GAP(GAPGLQGAPGLQGMPGERGAAGLPGPKGERGDAGPKGADGAPGAPGLQGMPGERGAAGLPGPKGERGDAGPKGADGAPGKDGVRGLAGPIGPPGERGAAGLPGPKGERGDAGPKGADGAPGKDGVRGLAGPIGPPGPAGAPGAPGLQGMPGERGAAGLPGPKGERGDAGPKGADGAPGKDGVRGLAGPP)3G
遺伝子組み換えゼラチンCBE3について、蛋白質・ポリペプチドの親疎水性の指標であるGrand average of hydropathicity(GRAVY)値を求めた。GRAVY値については、『Gasteiger E., Hoogland C., Gattiker A., Duvaud S., Wilkins M.R., Appel R.D., Bairoch A.;Protein Identification and Analysis Tools on the ExPASy Server;(In) John M. Walker (ed): The Proteomics Protocols Handbook, Humana Press (2005). pp. 571-607』及び『Gasteiger E., Gattiker A., Hoogland C., Ivanyi I., Appel R.D., Bairoch A.; ExPASy: the proteomics server for in-depth protein knowledge and analysis.; Nucleic Acids Res. 31:3784-3788(2003).』の方法により得た。その結果、遺伝子組み換えゼラチンCBE3のGRAVY値は−0.682であり、親水性が高い素材であることが明らかになった。
遺伝子組み換えゼラチンCBE3について生体内での生分解性を証明するために、マウス皮下での分解性を調べた。遺伝子組み換えゼラチンCBE3について、グルタルアルデヒド(GA)を用いて架橋を施し、遺伝子組み換えゼラチンCBE3ハイドロゲル(5%CBE3を0.1%GA架橋したゲル、及び3%CBE3を0.075%GA架橋したゲル)を作製した。得られたハイドロゲルをDDYマウス(オスの8週令)の背部皮下へ埋殖し、経時変化を病理切片、及び残存ゲル量を測定した。
遺伝子組み換えゼラチンCBE3を用いて、スポンジ(多孔質体)を作製した。本実施例では、10%CBE3のものと5%CBE3のものを作製している。以下の組成で溶液を調整し、グルタルアルデヒドを添加後、4℃にてホモジナイザー(AM-11、NIHONSEIKI製)で17,000rpmで4分間攪拌し、そのまま−80℃で3時間急冷する。
5%スポンジ10mL分(CBE3:500mg、超純水:9424μL、1N HCl:76μL、3%グルタルアルデヒド:500μL)
10%スポンジ10mL分(CBE3:1g、超純水:9348μL、1N HCl:152μL、3%グルタルアルデヒド:500μL)
実施例4で得られた遺伝子組み換えゼラチンスポンジについて、気孔率を測定した。測定に当たっては、嵩密度(ρ)と真密度(ρc)を測定し、気孔率(P = 1−ρ/ρc(%))を求めた。遺伝子組み換えゼラチンスポンジの嵩密度(ρ)は、乾燥重量と体積から算出した。真密度(ρc)は、ハバード型形の比重瓶法により求めた。サンプル数(N)=4の結果として、5%スポンジでは嵩密度が0.03g/cm3、真密度が1.01g/cm3、気孔率97%(CV値は7%)を達成していることが明らかになった。また、10%スポンジでは嵩密度が0.05g/cm3、真密度が1.23g/cm3、気孔率96%(CV値は8%)を達成していることが明らかになった。
実施例4で得られた遺伝子組み換えゼラチンスポンジについて、吸水率を測定した。吸水率は、乾燥重量(W0)と、超純水を25℃で5分間自然に吸水させ、プラスチックシャーレ上にて余分な水を十分に除いた後の水膨潤時の重量(W1)を用いて、(W1 ÷ W0 × 100(%))により算出した。 その結果、5%スポンジのサンプル数(N)=5の平均として、吸水率は3640(%)であり、高い吸水率を有していることが明らかになった。
実施例4で得られた遺伝子組み換えゼラチンスポンジについて、内部断面構造を走査型電子顕微鏡で観察した。代表的なSEM画像を図3(5%スポンジの断面)、及び図4(10%スポンジの断面)に示す。これにより、得られた遺伝子組み換えゼラチンスポンジの多孔質内部構造が明らかになった。内部気孔サイズは、10%スポンジが106.0±7.7μm(直径の個数平均として)であり、5%スポンジが114.8±15.8μmであった。また、図3及び図4からも分かるように、気孔間には気孔間連通孔が存在しており、これによって、スポンジ外部からスポンジ深部に至るまで、気孔が連なっていることが分かる。また、この気孔間連通孔は、10μm以上のサイズであることが確認できることから、細胞が概連通孔を通過可能であることも分かる。上記の結果から、スポンジへ播種した細胞が、スポンジ内部へと分散・拡散可能であることが分かる。
実施例4で得られた本発明の遺伝子組み換えゼラチンスポンジ(5%、10%)と、比較用のコラーゲンスポンジ(新田ゼラチン:35mmディッシュ用)について、同じ形状(直径8mm、高さ5mmの円柱状)に成型し、24穴培養プレート内にて細胞をスポンジ上部より播種した。播種した細胞は、ヒト間葉系幹細胞(hMSC)で、800万cells/mLの濃度で培地(タカラバイオ:MSCGM-CDTM BulletKitTM)に懸濁し、その懸濁液(250μL)をスポンジへ播種した。2時間静置後にプレート底面へ培地を添加し、Day1、Day4まで培養した。その結果、コラーゲンスポンジでは、播種した細胞がスポンジを通過して底面へと落ちてしまうものが多く存在したのに比べて、遺伝子組み換えゼラチンスポンジでは、底面へ脱落する細胞が少なかった。
実施例4で得られた本発明の遺伝子組み換えゼラチンスポンジ(5%、10%)と、比較用のアテロコラーゲンハニカムスポンジ(高研)、について、同じ形状(3mm×2mm×2mmの直方体)に成型し、24穴培養プレート内にて細胞をスポンジ上部より播種した。播種した細胞は、ヒト間葉系幹細胞(hMSC)で、800万cells/mLの濃度で培地(タカラバイオ:MSCGM-CDTM BulletKitTM)に懸濁し、その懸濁液(12μL)をスポンジへ播種した。2時間静置後にプレート底面へ培地を添加し、Day1、Day4まで培養した。その結果、比較用のアテロコラーゲンハニカムスポンジでは、播種した細胞がスポンジを通過して底面へと落ちてしまうものが多く存在したのに比べて、遺伝子組み換えゼラチンスポンジでは底面へ脱落する細胞が少なかった。
本発明の遺伝子組み換えゼラチンスポンジ内での細胞分布・細胞培養との比較として、コラーゲンゲル包埋培養を実施した。形状としては、実施例8と同じ円柱状の形態にて実施した。0.5%アテロコラーゲン溶液(高研:IPC−50、AteloCell)と、培地(タカラバイオ:MSCGM-CDTM BulletKitTM)を1:1の割合で、4℃氷上にて混合した混合培地を作成した。混合培地に、ヒト間葉系幹細胞(hMSC)を800万cells/mL濃度で懸濁し、懸濁液(500μL)を48穴プレートに播種した。37℃、5%CO2で30分静置することでゲル化させ、その後、十分量の培地を加え、4日間培養(Day4)した。培養の際、培地は毎日新しい培地に交換した。Day4のサンプルについて、ホルマリン固定、パラフィン包埋、切片を作成した。染色は、HE染色を行い、内部の細胞分布を視覚化した(図13,14)。尚、それぞれ、切片写真を区分けし、各区画に存在する細胞数をカウント後、各区画の占有面積(スポンジ内)で除することによって、単位面積当たりの細胞数を求めた。求めた単位面積当たりの細胞数について、バラツキをCV値にて、図13,14に示した。このバラツキのCV値によって、分布が均一であるかどうかが分かる。アテロコラーゲンゲル包埋培養では、Day1:45%、Day4:51%となり、非常に分布が不均一であった。結果、アテロコラーゲンゲル中で培養した細胞は、不均一な状態になることが示され、従来技術であるコラーゲンゲル包埋培養において問題とされているゲル中での細胞分布の不均一さ、が再現された。また、コラーゲンゲル包埋では、ゲル自体の形状が培養とともに歪んでくることも欠点として確認された。
本発明の遺伝子組み換えゼラチンスポンジ内での細胞分布・細胞培養との比較として、コラーゲンゲル上への細胞播種・細胞培養を実施した。形状としては、実施例8と同じ円柱状の形態にて実施した。0.5%アテロコラーゲン溶液(高研:IPC−50、AteloCell)と、培地(タカラバイオ:MSCGM-CDTM BulletKitTM)を4℃氷上で混合した混合培地を作成し、混合培地(500μL)を48穴プレートに添加した。37℃、5%CO2で30分静置することによって、コラーゲンゲルを得た。このコラーゲンゲルの上に、800万cells/mLのhMSC細胞懸濁液を500μL播種し、4日間培養(Day4)した。培養の際、培地は毎日新しい培地に交換した。Day4のサンプルについて、ホルマリン固定、パラフィン包埋、切片を作成した。染色は、HE染色を行い、内部の細胞分布を視覚化した(図15,16)。その結果、アテロコラーゲンゲル上へ播種・培養した細胞は、ゲル上からゲル内へ移動することはできず、ゲル中へ均一な分布を見せることはなかった。
遺伝子組み換えゼラチンスポンジ中で、細胞が均一に分布可能であることの要因の一つとして、遺伝子組み換えゼラチンが細胞接着性を有することが考えられる。遺伝子組み換えゼラチンの細胞接着性が高いことによって、細胞の漏出や不均一分布を抑制できる可能性があるためである。そこで、遺伝子組み換えゼラチンの細胞接着性を調べるために、遺伝子組み換えゼラチンCBE3の細胞への接着性試験を行った。
遺伝子組み換えゼラチンCBE3を用いて、パウダー(粒子形状)を作製した。本実施例では、7.5%CBE3のものを作製している。以下の組成で溶液を調整し、グルタルアルデヒドを添加後、25℃にて十分に攪拌した後、そのまま4℃で16時間架橋反応を行う。
7.5%スポンジ10mL分(CBE3:750mg、超純水:8893.6μL、1N HCl:106.4μL、3%グルタルアルデヒド:1000μL)
骨再生能を評価する動物実験モデルとしてラット頭蓋骨欠損モデルを用いた(Tissue Eng (2007) 13(3):501-12)。ラット頭蓋骨欠損モデルは、一般的に骨補填剤の評価に用いられている。
Sprague−Dawleyラット(SDラット、雄、10-12週齢)を麻酔し、右側頭頂骨にドリル(Osada Success 40, 長田電気工業)にて円形の欠損部(φ = 5 mm)を作成した(図20)。骨再生に影響する欠損部の骨片や血液を生理食塩水にて洗浄、除去。作製された欠損部へ、骨再生評価を行いたいサンプルを欠損部へ埋殖し、移植サンプルが欠損部から飛び散らないようにコラーゲン膜(BioGide)で蓋をした後、患部皮膚を縫合した。所定期間後(2週)ラットを開腹・放血させラットをサクリファイし、欠損させた患部の肉眼観察を実施した後、該頭部をホルマリン固定・脱灰してパラフィンに包埋。パラフィン包埋ブロックを薄切し、得られた切片をヘマトキシリン−エオシン(H&E)染色して、標本を作製した。評価については、病理標本を光学顕微鏡により観察し、撮影した写真から組織をNew Bone、Mesenchyme、Granulationに分けて、それぞれの面積を計算した。欠損部における再生骨(New Bone)割合、また標本中の再生骨量(μm2)を評価した。
実施例4にて作製した遺伝子組換えゼラチンスポンジ(5%)、実施例11にて作製した遺伝子組換えゼラチンパウダー(粒子状)を、実施例12で作製したラット頭蓋骨欠損部分に移植した。移植物が飛散しないように、コラーゲン製膜(BioGide、Osteohealth社)を設置した。また、患部に何も適用しない群をコントロール群とした。
動物由来天然ゼラチンAPAT(Nippi、ニッピゼラチン・ハイグレードゼラチンAPAT)を用いて、天然ゼラチンスポンジ(多孔質体)を作製した。本実施例では、5%濃度のものを作製している。以下の組成で溶液を調整し、グルタルアルデヒドを添加後、4℃にてホモジナイザー(AM-11、NIHONSEIKI製)で17,000rpmで4分間攪拌し、そのまま−80℃で3時間急冷する。
5%スポンジ10mL分(APAT:500mg、超純水:9424μL、1N HCl:76μL、3%グルタルアルデヒド:500μL)
その後、4℃で16時間静置して得られた物を、十分量の37℃の0.2Mグリシン溶液中で4時間、振盪する。その後、10Lの超純水で洗浄を8回(計4時間)繰り返してから、−80℃で2時間凍結させる。その後、凍結乾燥機にて4日間凍結乾燥を行い、天然ゼラチンスポンジ(多孔質体)を得た。
実施例14にて作製した天然ゼラチンスポンジ(5%)を実施例12で作製したラット頭蓋骨欠損部分に移植した。移植物が飛散しないように、コラーゲン製膜(BioGide、Osteohealth社)を設置した。また、患部に何も適用しない群をコントロール群とした。
Claims (26)
- 生分解性材料から構成される多孔質体であって以下の特性を有する多孔質体からなる細胞支持体。
(a)気孔率:81%以上99.99%以下
(b)平均気孔サイズ:10〜400μm
(c)気孔間連通孔を有する、及び
(d)吸水率:1000%以上9900%以下 - 生分解性材料のGrand average of hydropathicity(GRAVY)値が、0.3以下−5.0以上である、請求項1に記載の細胞支持体。
- 生分解性材料が、蛋白質、ポリペプチド、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、PLGA、キチン、キトサン、セルロース及びヒアルロン酸から選択される少なくとも1種以上である、請求項1又は2に記載の細胞支持体。
- 生分解性材料が、天然又は遺伝子組み換えゼラチン、天然又は遺伝子組み換えフィブロネクチン、あるいは天然又は遺伝子組み換えラミニンである、請求項1から3の何れか1項に記載の細胞支持体。
- 生分解性材料が架橋されている、請求項1から4の何れか1項に記載の細胞支持体。
- 架橋がアルデヒド類、縮合剤、又は酵素により施される、請求項1から5の何れか1項に記載の細胞支持体。
- 生分解性材料が、遺伝子組み換えゼラチンである、請求項1から6の何れか1項に記載の細胞支持体。
- 遺伝子組み換えゼラチンが、
式:A−[(Gly−X−Y)n]m−B
(式中、Aは任意のアミノ酸又はアミノ酸配列を示し、Bは任意のアミノ酸又はアミノ酸配列を示し、n個のXはそれぞれ独立にアミノ酸の何れかを示し、n個のYはそれぞれ独立にアミノ酸の何れかを示し、nは3〜100の整数を示し、mは2〜10の整数を示す。なお、n個のGly-X-Yはそれぞれ同一でも異なっていてもよい。)
で示される、請求項1から7の何れか1項に記載の細胞支持体。 - 遺伝子組み換えゼラチンが、
式:Gly-Ala-Pro-[(Gly−X−Y)63]3−Gly
(式中、63個のXはそれぞれ独立にアミノ酸の何れかを示し、63個のYはそれぞれ独立にアミノ酸の何れかを示す。なお、63個のGly-X-Yはそれぞれ同一でも異なっていてもよい。)
で示される、請求項1から8の何れか1項に記載の細胞支持体。 - 遺伝子組み換えゼラチンが、
(1)配列番号1に記載のアミノ酸配列、又は
(2)配列番号1に記載のアミノ酸配列と80%以上の相同性を有し、生分解性を有するアミノ酸配列、
を有する、請求項1から9の何れか1項に記載の細胞支持体。 - 生分解性材料を架橋した後、攪拌し、その後に凍結乾燥することによって製造される、請求項1から10の何れか1項に記載の細胞支持体。
- 請求項1から11の何れか1項に記載の細胞支持体を含む再生医療材料。
- 請求項1から11の何れか1項に記載の細胞支持体と移植細胞とを含む、再生医療材料。
- 生分解性材料から構成される多孔質体であって以下の特性を有する多孔質体からなる骨再生材。
(a)気孔率:81%以上99.99%以下
(b)平均気孔サイズ:10〜400μm
(c)気孔間連通孔を有する、及び
(d)吸水率:1000%以上9900%以下 - 生分解性材料のGrand average of hydropathicity(GRAVY)値が、0.3以下−5.0以上である、請求項14に記載の骨再生材。
- 生分解性材料が、蛋白質、ポリペプチド、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、PLGA、キチン、キトサン、セルロース及びヒアルロン酸から選択される少なくとも1種以上である、請求項14又は15に記載の骨再生材。
- 生分解性材料が、天然又は遺伝子組み換えゼラチン、天然又は遺伝子組み換えフィブロネクチン、あるいは天然又は遺伝子組み換えラミニンである、請求項14から16の何れか1項に記載の骨再生材。
- 生分解性材料が架橋されている、請求項14から17の何れか1項に記載の骨再生材。
- 架橋がアルデヒド類、縮合剤、又は酵素により施される、請求項14から18の何れか1項に記載の骨再生材。
- 生分解性材料が、遺伝子組み換えゼラチンである、請求項14から19の何れか1項に記載の骨再生材。
- 遺伝子組み換えゼラチンが、
式:A−[(Gly−X−Y)n]m−B
(式中、Aは任意のアミノ酸又はアミノ酸配列を示し、Bは任意のアミノ酸又はアミノ酸配列を示し、n個のXはそれぞれ独立にアミノ酸の何れかを示し、n個のYはそれぞれ独立にアミノ酸の何れかを示し、nは3〜100の整数を示し、mは2〜10の整数を示す。なお、n個のGly-X-Yはそれぞれ同一でも異なっていてもよい。)
で示される、請求項14から20の何れか1項に記載の骨再生材。 - 遺伝子組み換えゼラチンが、
式:Gly-Ala-Pro-[(Gly−X−Y)63]3−Gly
(式中、63個のXはそれぞれ独立にアミノ酸の何れかを示し、63個のYはそれぞれ独立にアミノ酸の何れかを示す。なお、63個のGly-X-Yはそれぞれ同一でも異なっていてもよい。)で示される、請求項14から21の何れか1項に記載の骨再生材。 - 遺伝子組み換えゼラチンが、
(1)配列番号1に記載のアミノ酸配列、又は
(2)配列番号1に記載のアミノ酸配列と80%以上の相同性を有し、生分解性を有するアミノ酸配列、
を有する、請求項14から22の何れか1項に記載の骨再生材。 - 生分解性材料を架橋した後、攪拌し、その後に凍結乾燥することによって製造される、請求項14から23の何れか1項に記載の骨再生材。
- 請求項14から24の何れか1項に記載の骨再生材を含む再生医療材料。
- 請求項14から24の何れか1項に記載の骨再生材と移植細胞とを含む、再生医療材料。
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