JPWO2007114125A1 - 微生物によるアダマンタン水酸化体の製造方法 - Google Patents
微生物によるアダマンタン水酸化体の製造方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JPWO2007114125A1 JPWO2007114125A1 JP2008508544A JP2008508544A JPWO2007114125A1 JP WO2007114125 A1 JPWO2007114125 A1 JP WO2007114125A1 JP 2008508544 A JP2008508544 A JP 2008508544A JP 2008508544 A JP2008508544 A JP 2008508544A JP WO2007114125 A1 JPWO2007114125 A1 JP WO2007114125A1
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- adamantyl
- monohydroxy
- phthalimide
- phthalimide derivative
- extract
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- NJIUHDIQGAOGCO-UHFFFAOYSA-N O=C(c1c2cccc1)N(C1C3CC(C4)CC1CC4C3)C2=O Chemical compound O=C(c1c2cccc1)N(C1C3CC(C4)CC1CC4C3)C2=O NJIUHDIQGAOGCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
- C12P17/10—Nitrogen as only ring hetero atom
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D209/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
- C07D209/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom condensed with one carbocyclic ring
- C07D209/44—Iso-indoles; Hydrogenated iso-indoles
- C07D209/48—Iso-indoles; Hydrogenated iso-indoles with oxygen atoms in positions 1 and 3, e.g. phthalimide
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
- C12N1/145—Fungal isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/645—Fungi ; Processes using fungi
Abstract
機能性樹脂や医薬品の中間体として有用であるＮ−（モノヒドロキシ−２−アダマンチル）−フタルイミド誘導体の高収率かつ安価な製造方法を提供することにある。土壌から分離したナカタエア属、リゾクトニア属、カエトミウム属に属する糸状菌は、Ｎ−（２−アダマンチル）−フタルイミド誘導体から、Ｎ−（モノヒドロキシ−２−アダマンチル）−フタルイミド誘導体を培地中に高生産することができる。
Description
本発明は、微生物を用いるモノヒドロキシ−２−アダマンタナミンのアミノ保護体（たとえば、Ｎ−（モノヒドロキシ−２−アダマンチル）−フタルイミド誘導体）の生産方法に関する。モノヒドロキシ−２−アダマンタナミンのアミノ保護体は、モノヒドロキシ−２−アダマンタナミンの原料であり、モノヒドロキシ−２−アダマンタナミンは、医薬品の中間体として有用である。
フォトリソグラフィー分野における感光性樹脂などの機能性樹脂のモノマー（特許文献１）や、医薬品の分野における１１ベータ−ヒドロキシステロイド デヒドロゲナーゼI型酵素（11βHSD１）の阻害剤（特許文献２、２７ページ）として、アダマンタンの水酸化体は知られている。また、ＤＰＰＩＶ阻害剤としても、アダマンチル基を有する化合物が知られている。そしてこれらの化合物を合成する場合、アダマンタンの水酸化体の一部の置換基を保護した化合物は、その反応性から合成中間体として有用といえる。
そして、微生物を用いたアダマンタン誘導体の水酸化体の生産方法は以前から知られている。例えば、ボーベリア・スルフレッセンス（Ｂｅａｕｖｅｒｉａ ｓｕｌｆｕｒｅｓｃｅｎｓ）の生体内変換を用いて、ベンジルアミドで保護されたアダマンタミン誘導体の水酸化体を生産できる（非特許文献１）。また、フタルイミドで保護されたアダマンタン誘導体についても、スポロトリカム・スルフレッセンス（Ｓｐｏｒｏｔｒｉｃｈｕｍ ｓｕｌｆｕｒｅｓｃｅｎｓ）の生体内変換により、ジヒドロキシ体を生産できることが報告されている（非特許文献２）。
特開２００６−６３０６１
国際公開第ＷＯ０４／０５６７４４号パンフレット
「ジャーナル オブ オーガニック ケミストリー （Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）」、１９９２年、５７巻、ｐ.７２０９‐７２１２
「ザ ジャーナル オブ オーガニック ケミストリー(Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ)」、１９６８年、３３巻、ｐ.３２０１−３２０７
本発明の解決しようとする課題は、機能性樹脂や医薬品の中間体として有用であるモノヒドロキシ−２−アダマンタナミンの原料となるモノヒドロキシ−２−アダマンタナミンのアミノ保護体（たとえば、Ｎ−（モノヒドロキシ−２−アダマンチル）−フタルイミド誘導体）の微生物を用いた高収率かつ安定な製造方法を提供することにある。
本発明者らは、上記の目的を達成すべく鋭意研究を行った。その結果、本発明者らにより土壌から分離された糸状菌が以下に示すように、Ｎ−（２−アダマンチル）−フタルイミド誘導体から、Ｎ−（モノヒドロキシ−２−アダマンチル）−フタルイミド誘導体を生産することを初めて見出した。またこの糸状菌を用いて液体培養することにより、Ｎ−（モノヒドロキシ−２−アダマンチル）−フタルイミド誘導体を培地中に高生産させることに成功し、本発明を完成した。
すなわち、本発明は、
（１）糸状菌またはその抽出物を用いて、Ｎ−（２−アダマンチル）−フタルイミド誘導体を水酸化することを特徴とする、Ｎ−（モノヒドロキシ−２−アダマンチル）−フタルイミド誘導体を生産する方法、
（２）
糸状菌がナカタエア属（Ｎａｋａｔａｅａ）、リゾクトニア属（Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ）、カエトミウム属（Ｃｈａｅｔｏｍｉｕｍ）の群から選択される、前記（１）記載の方法、
（３）
糸状菌がナカタエア・シグモイデア（Ｎａｋａｔａｅａ ｓｉｇｍｏｉｄｅａ）リゾクトニア・ソラニ（Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ｓｏｌａｎｉ）またはカエトミウム・コクリオデス（Ｃｈａｅｔｏｍｉｕｍ ｃｏｃｈｌｉｏｄｅｓ）である、前記（２）記載の方法、
（４）
糸状菌により行われる、前記（１）〜（３）のいずれか１項に記載の方法、
（５）
糸状菌の抽出物により行われ、抽出物が水酸化酵素を含有する、前記（１）記載の方法、
（６）
前記Ｎ−（２−アダマンチル）−フタルイミド誘導体が以下の式で表わされる化合物である前記（１）記載の方法、
（７）
前記Ｎ−（モノヒドロキシ−２−アダマンチル）−フタルイミド誘導体が以下のいずれかの式で表わされる化合物である前記（１）記載の方法、
（８）
糸状菌を培地中で培養する工程、及び培養液から前記Ｎ−（モノヒドロキシ−２−アダマンチル）−フタルイミド誘導体を分離する工程を含む、前記（１）記載の方法、
（９）
Ｎ−（モノヒドロキシ−２−アダマンチル）−フタルイミド誘導体を生産する能力を有するナカタエア属（Ｎａｋａｔａｅａ）、リゾクトニア属（Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ）、カエトミウム属（Ｃｈａｅｔｏｍｉｕｍ）のいずれかの属に属する微生物の菌体、
（１０）
ナカタエア・シグモイデアＲＦ−９４７５株（ＦＥＲＭ ＡＢＰ−１０７９１）、リゾクトニア・ソラニＲＦ−９４０２株（ＦＥＲＭ ＡＢＰ−１０７９０）またはカエトミウム・コクリオデスＲＦ−５７３３株（ＦＥＲＭ ＡＢＰ−１０７８９）のいずれかの株、
（１１）
以下の式で表される、いずれかの化合物、
（１２）
ナカタエア属（Ｎａｋａｔａｅａ）、リゾクトニア属（Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ）、カエトミウム属（Ｃｈａｅｔｏｍｉｕｍ）のいずれかの属に属する微生物の菌またはその抽出物により、２−アダマンタナミンのアミノ保護体からモノヒドロキシ−２−アダマンタナミンのアミノ保護体を生産する方法、
（１３）
（１）〜（８）および（１２）のいずれかに記載の方法により得られた、Ｎ−（モノヒドロキシ−２−アダマンチル）−フタルイミド誘導体を脱保護することを特徴とする、化合物（Ｉ）：
で示される化合物の製造方法。
（１４）
前記（１３）記載の方法により得られた式（Ｉ）で示される化合物を、
式（ＩＩ）：Ａ−Ｒ１−Ｒ２−Ｒ３−Ｘ
（式中、Ａは置換されていてもよい環式炭化水素基または置換されていてもよい複素環式基であり、Ｒ１は単結合、−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｏ−または−ＮＲ４−であり、Ｒ２は単結合または置換されていてもよいアルキレンであり、Ｒ３は単結合または−Ｃ（＝Ｏ）−であり、Ｘは水酸基、ハロゲンまたは水酸基から導かれる脱離基であり、Ｒ４は水素または置換されていてもよいアルキルである）で示される化合物と反応させることを特徴とする、式（ＩＩＩ）：
で示される化合物の製造方法、
に関する。
（１）糸状菌またはその抽出物を用いて、Ｎ−（２−アダマンチル）−フタルイミド誘導体を水酸化することを特徴とする、Ｎ−（モノヒドロキシ−２−アダマンチル）−フタルイミド誘導体を生産する方法、
（２）
糸状菌がナカタエア属（Ｎａｋａｔａｅａ）、リゾクトニア属（Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ）、カエトミウム属（Ｃｈａｅｔｏｍｉｕｍ）の群から選択される、前記（１）記載の方法、
（３）
糸状菌がナカタエア・シグモイデア（Ｎａｋａｔａｅａ ｓｉｇｍｏｉｄｅａ）リゾクトニア・ソラニ（Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ｓｏｌａｎｉ）またはカエトミウム・コクリオデス（Ｃｈａｅｔｏｍｉｕｍ ｃｏｃｈｌｉｏｄｅｓ）である、前記（２）記載の方法、
（４）
糸状菌により行われる、前記（１）〜（３）のいずれか１項に記載の方法、
（５）
糸状菌の抽出物により行われ、抽出物が水酸化酵素を含有する、前記（１）記載の方法、
（６）
前記Ｎ−（２−アダマンチル）−フタルイミド誘導体が以下の式で表わされる化合物である前記（１）記載の方法、
（７）
前記Ｎ−（モノヒドロキシ−２−アダマンチル）−フタルイミド誘導体が以下のいずれかの式で表わされる化合物である前記（１）記載の方法、
（８）
糸状菌を培地中で培養する工程、及び培養液から前記Ｎ−（モノヒドロキシ−２−アダマンチル）−フタルイミド誘導体を分離する工程を含む、前記（１）記載の方法、
（９）
Ｎ−（モノヒドロキシ−２−アダマンチル）−フタルイミド誘導体を生産する能力を有するナカタエア属（Ｎａｋａｔａｅａ）、リゾクトニア属（Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ）、カエトミウム属（Ｃｈａｅｔｏｍｉｕｍ）のいずれかの属に属する微生物の菌体、
（１０）
ナカタエア・シグモイデアＲＦ−９４７５株（ＦＥＲＭ ＡＢＰ−１０７９１）、リゾクトニア・ソラニＲＦ−９４０２株（ＦＥＲＭ ＡＢＰ−１０７９０）またはカエトミウム・コクリオデスＲＦ−５７３３株（ＦＥＲＭ ＡＢＰ−１０７８９）のいずれかの株、
（１１）
以下の式で表される、いずれかの化合物、
（１２）
ナカタエア属（Ｎａｋａｔａｅａ）、リゾクトニア属（Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ）、カエトミウム属（Ｃｈａｅｔｏｍｉｕｍ）のいずれかの属に属する微生物の菌またはその抽出物により、２−アダマンタナミンのアミノ保護体からモノヒドロキシ−２−アダマンタナミンのアミノ保護体を生産する方法、
（１３）
（１）〜（８）および（１２）のいずれかに記載の方法により得られた、Ｎ−（モノヒドロキシ−２−アダマンチル）−フタルイミド誘導体を脱保護することを特徴とする、化合物（Ｉ）：
で示される化合物の製造方法。
（１４）
前記（１３）記載の方法により得られた式（Ｉ）で示される化合物を、
式（ＩＩ）：Ａ−Ｒ１−Ｒ２−Ｒ３−Ｘ
（式中、Ａは置換されていてもよい環式炭化水素基または置換されていてもよい複素環式基であり、Ｒ１は単結合、−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｏ−または−ＮＲ４−であり、Ｒ２は単結合または置換されていてもよいアルキレンであり、Ｒ３は単結合または−Ｃ（＝Ｏ）−であり、Ｘは水酸基、ハロゲンまたは水酸基から導かれる脱離基であり、Ｒ４は水素または置換されていてもよいアルキルである）で示される化合物と反応させることを特徴とする、式（ＩＩＩ）：
で示される化合物の製造方法、
に関する。
本発明のＮ−（モノヒドロキシ−２−アダマンチル）−フタルイミド誘導体の製造法は、安定したＮ−（モノヒドロキシ−２−アダマンチル）−フタルイミド誘導体の生産・供給を実現するものであり、Ｎ−（モノヒドロキシ−２−アダマンチル）−フタルイミド誘導体を効率よく、安全で安価に製造することが可能となる。また、本発明の微生物は、上記Ｎ−（モノヒドロキシ−２−アダマンチル）−フタルイミド誘導体の製造法に、好適に使用することができる。
次に、本発明を詳細に説明する。
本発明のＮ−（モノヒドロキシ−２−アダマンチル）−フタルイミド誘導体の製造法は、Ｎ−（モノヒドロキシ−２−アダマンチル）−フタルイミド誘導体の生産能を有する糸状菌を培地で培養し、培地中にＮ−（モノヒドロキシ−２−アダマンチル）−フタルイミド誘導体を生産・蓄積させ、これを採取することを含む。
本発明のＮ−（モノヒドロキシ−２−アダマンチル）−フタルイミド誘導体の製造法は、Ｎ−（モノヒドロキシ−２−アダマンチル）−フタルイミド誘導体の生産能を有する糸状菌を培地で培養し、培地中にＮ−（モノヒドロキシ−２−アダマンチル）−フタルイミド誘導体を生産・蓄積させ、これを採取することを含む。
Ｎ−（２−アダマンチル）−フタルイミド誘導体とは、本発明の生産方法の出発原料となりうる化合物であり、実施例に示すＮ−（２−アダマンチル）−フタルイミドの他、その誘導体、例えばフタロイル基のベンゼン環部分が、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉなどのハロゲン、アルキル、ヒドロキシ、アルコキシ、ニトロ、アリール、アリールアルキル、カルボキシ、エステル、カルバモイルなどで置換された化合物や、アダマンチル基の水酸化される以外の部分がＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉなどのハロゲン、アルキル、ヒドロキシ、アルコキシ、ニトロ、アリール、アリールアルキル、カルボキシ、エステル、カルバモイルなどで置換された化合物、また、ベンゼン環部分及びアダマンタン部分が上記の置換基で置換された化合物も含まれる。
Ｎ−（モノヒドロキシ−２−アダマンチル）−フタルイミド誘導体とは、Ｎ−（２−アダマンチル）−フタルイミド誘導体を出発原料として本発明の方法によって生産される化合物であり、実施例に示すＮ−（モノヒドロキシ−２−アダマンチル）−フタルイミドの他、その誘導体、例えばフタロイル基のベンゼン環が、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉなどのハロゲン、アルキル、ヒドロキシ、アルコキシ、ニトロ、アリール、アリールアルキル、カルボキシ、アルコキシカルボニル、カルバモイルなどで置換される化合物も含まれる。特に、好ましい態様としては、Ｎ−（５−ヒドロキシ−２−アダマンチル）−フタルイミドもしくは、Ｎ−（６−ヒドロキシ−２−アダマンチル）−フタルイミドである。
「アルキル」とは、炭素数１〜１０個の直鎖状又は分枝状のアルキル基を意味し、例えば、メチル、エチル、n-プロピル、イソプロピル、n-ブチル、イソブチル、sec-ブチル、tert-ブチル、n-ぺンチル、イソぺンチル、ネオぺンチル、n-ヘキシル、イソヘキシル、n-ヘプチル、n-オクチル、n-ノニル、n-デシル等が挙げられる。好ましくは、炭素数１〜６または１〜４個のアルキルであり、例えば、メチル、エチル、n-プロピル、イソプロピル、n-ブチル、イソブチル、sec-ブチル、tert-ブチル、n-ぺンチル、イソぺンチル、ネオぺンチル、n-ヘキシル、イソヘキシルが挙げられる。アルコキシのアルキル部分は、上記のアルキルと同意義である。
「アリール」とは、単環芳香族炭化水素基（例：フェニル）及び多環芳香族炭化水素基（例：１−ナフチル、２−ナフチル、１−アントリル、２−アントリル、９−アントリル、１−フェナントリル、２−フェナントリル、３−フェナントリル、４−フェナントリル、９−フェナントリル等）が挙げられる。アリールアルキルは、上記のアリールで置換された上記アルキルを意味する。アルコキシカルボニルのアルコキシ部分は、上記のアルキルと同意義である。
「環式炭化水素基」とは、「シクロアルキル」、「シクロアルケニル」、「アリール」を包含する。
「シクロアルキル」とは、炭素数３〜１５の環状飽和炭化水素基を意味し、例えば、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチル、橋かけ環式炭化水素基、スピロ炭化水素基などが挙げられる。
「橋かけ環式炭化水素基」とは、２つ以上の環が２個またはそれ以上の原子を共有している炭素数５〜８の脂肪族環から水素を１つ除いてできる基を包含する。具体的にはビシクロ［２．１．０］ペンチル、ビシクロ［２．２．１］ヘプチル、ビシクロ［２．２．２］オクチルおよびビシクロ［３．２．１］オクチル、トリシクロ［２．２．１．０］ヘプチルなどが挙げられる。
「スピロ炭化水素基」とは、２つの炭化水素環が１個の炭素原子を共有して構成されている環から水素を１つ除いてできる基を包含する。具体的にはスピロ［３．４］オクチルなどが挙げられる。
「シクロアルケニル」とは、炭素数３〜７個の環状の不飽和脂肪族炭化水素基を意味し、例えば、シクロプロペニル、シクロブテニル、シクロペンテニル、シクロヘキセニル、シクロヘプテニルが挙げられ、好ましくはシクロプロペニル、シクロブテニル、シクロペンテニル、シクロヘキセニルである。シクロアルケニルには、環中に不飽和結合を有する橋かけ環式炭化水素基およびスピロ炭化水素基も含む。
「複素環式基」とは、「ヘテロアリール、ヘテロサイクル」を包含する。
「ヘテロアリール」とは、単環芳香族複素環式基及び縮合芳香族複素環式基を意味する。単環芳香族複素環式基は、酸素原子、硫黄原子、および／又は窒素原子を環内に１〜４個含んでいてもよい５〜８員の芳香環から誘導される、置換可能な任意の位置に結合手を有していてもよい基を意味する。縮合芳香族複素環式基は、酸素原子、硫黄原子、および／又は窒素原子を環内に１〜４個含んでいてもよい５〜８員の芳香環が、１〜４個の５〜８員の芳香族炭素環もしくは他の５〜８員の芳香族ヘテロ環と縮合している、置換可能な任意の位置に結合手を有していてもよい基を意味する。例えば、フリル（例：２−フリル、３−フリル）、チエニル（例：２−チエニル、３−チエニル）、ピロリル（例：１−ピロリル、２−ピロリル、３−ピロリル）、イミダゾリル（例：１−イミダゾリル、２−イミダゾリル、４−イミダゾリル）、ピラゾリル（例：１−ピラゾリル、３−ピラゾリル、４−ピラゾリル）、トリアゾリル（例：１，２，４−トリアゾール−１−イル、１，２，４−トリアゾール−３−イル、１，２，４−トリアゾール−４−イル）、テトラゾリル（例：１−テトラゾリル、２−テトラゾリル、５−テトラゾリル）、オキサゾリル（例：２−オキサゾリル、４−オキサゾリル、５−オキサゾリル）、イソキサゾリル（例：３−イソキサゾリル、４−イソキサゾリル、５−イソキサゾリル）、チアゾリル（例：２−チアゾリル、４−チアゾリル、５−チアゾリル）、チアジアゾリル、イソチアゾリル（例：３−イソチアゾリル、４−イソチアゾリル、５−イソチアゾリル）、ピリジル（例：２−ピリジル、３−ピリジル、４−ピリジル）、ピリダジニル（例：３−ピリダジニル、４−ピリダジニル）、ピリミジニル（例：２−ピリミジニル、４−ピリミジニル、５−ピリミジニル）、フラザニル（例：３−フラザニル）、ピラジニル（例：２−ピラジニル）、オキサジアゾリル（例：１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）、ベンゾフリル（例：２−ベンゾ［ｂ］フリル、３−ベンゾ［ｂ］フリル、４−ベンゾ［ｂ］フリル、５−ベンゾ［ｂ］フリル、６−ベンゾ［ｂ］フリル、７−ベンゾ［ｂ］フリル）、ベンゾチエニル（例：２−ベンゾ［ｂ］チエニル、３−ベンゾ［ｂ］チエニル、４−ベンゾ［ｂ］チエニル、５−ベンゾ［ｂ］チエニル、６−ベンゾ［ｂ］チエニル、７−ベンゾ［ｂ］チエニル）、ベンズイミダゾリル（例：１−ベンゾイミダゾリル、２−ベンゾイミダゾリル、４−ベンゾイミダゾリル、５−ベンゾイミダゾリル）、ジベンゾフリル、ベンゾオキサゾリル、キノキサリル（例：２−キノキサリニル、５−キノキサリニル、６−キノキサリニル）、シンノリニル（例：３−シンノリニル、４−シンノリニル、５−シンノリニル、６−シンノリニル、７−シンノリニル、８−シンノリニル）、キナゾリル（例：２−キナゾリニル、４−キナゾリニル、５−キナゾリニル、６−キナゾリニル、７−キナゾリニル、８−キナゾリニル）、キノリル（例：２−キノリル、３−キノリル、４−キノリル、５−キノリル、６−キノリル、７−キノリル、８−キノリル）、フタラジニル（例：１−フタラジニル、５−フタラジニル、６−フタラジニル）、イソキノリル（例：１−イソキノリル、３−イソキノリル、４−イソキノリル、５−イソキノリル、６−イソキノリル、７−イソキノリル、８−イソキノリル）、プリル、プテリジニル（例：２−プテリジニル、４−プテリジニル、６−プテリジニル、７−プテリジニル）、カルバゾリル、フェナントリジニル、アクリジニル（例：１−アクリジニル、２−アクリジニル、３−アクリジニル、４−アクリジニル、９−アクリジニル）、インドリル（例：１−インドリル、２−インドリル、３−インドリル、４−インドリル、５−インドリル、６−インドリル、７−インドリル）、イソインドリル、ファナジニル（例：１−フェナジニル、２−フェナジニル）又はフェノチアジニル（例：１−フェノチアジニル、２−フェノチアジニル、３−フェノチアジニル、４−フェノチアジニル）等が挙げられる。
「ヘテロサイクル」とは、酸素原子、硫黄原子、及び／又は窒素原子を環内に１〜４個含んでいてもよく、置換可能な任意の位置に結合手を有していてもよい非芳香族複素環式基を意味する。また、そのような非芳香族複素環式基がさらに炭素数１〜４のアルキル鎖で架橋されていてもよく、シクロアルカン（５〜６員環が好ましい）やベンゼン環が縮合していてもよい。非芳香族であれば、飽和でも不飽和でもよい。例えば、１−ピロリニル、２−ピロリニル、３−ピロリニル、１−ピロリジニル、２−ピロリジニル、３−ピロリジニル、１−イミダゾリニル、２−イミダゾリニル、４−イミダゾリニル、１−イミダゾリジニル、２−イミダゾリジニル、４−イミダゾリジニル、１−ピラゾリニル、３−ピラゾリニル、４−ピラゾリニル、１−ピラゾリジニル、３−ピラゾリジニル、４−ピラゾリジニル、ピペリジノ、２−ピペリジニル、３−ピペリジニル、４−ピペリジニル、１−ピペラジニル、２−ピペラジニル、２−モルホリニル、３−モルホリニル、モルホリノ、テトラヒドロピラニル等があげられる。
「アルキレン」とは、メチレンが１〜６個連続した２価の基を包含し、具体的にはメチレン、エチレン、トリメチレン、テトラメチレン、ペンタメチレンおよびヘキサメチレン等が挙げられる。
「水酸基から導かれる脱離基」とは、−ＯＭｓ、−ＯＴｓ、−ＯＴｆ、−ＯＮｓ等があげられる。ここで、「Ｍｓ」はメタンスルホニル基、「Ｔｓ」はパラトルエンスルホニル基、「Ｔｆ」はトリフルオロメタンスルホニル基、「Ｎｓ」はオルトニトロベンゼンスルホニル基を表す。
「アルキル」とは、炭素数１〜１０個の直鎖状又は分枝状のアルキル基を意味し、例えば、メチル、エチル、n-プロピル、イソプロピル、n-ブチル、イソブチル、sec-ブチル、tert-ブチル、n-ぺンチル、イソぺンチル、ネオぺンチル、n-ヘキシル、イソヘキシル、n-ヘプチル、n-オクチル、n-ノニル、n-デシル等が挙げられる。好ましくは、炭素数１〜６または１〜４個のアルキルであり、例えば、メチル、エチル、n-プロピル、イソプロピル、n-ブチル、イソブチル、sec-ブチル、tert-ブチル、n-ぺンチル、イソぺンチル、ネオぺンチル、n-ヘキシル、イソヘキシルが挙げられる。アルコキシのアルキル部分は、上記のアルキルと同意義である。
「アリール」とは、単環芳香族炭化水素基（例：フェニル）及び多環芳香族炭化水素基（例：１−ナフチル、２−ナフチル、１−アントリル、２−アントリル、９−アントリル、１−フェナントリル、２−フェナントリル、３−フェナントリル、４−フェナントリル、９−フェナントリル等）が挙げられる。アリールアルキルは、上記のアリールで置換された上記アルキルを意味する。アルコキシカルボニルのアルコキシ部分は、上記のアルキルと同意義である。
「環式炭化水素基」とは、「シクロアルキル」、「シクロアルケニル」、「アリール」を包含する。
「シクロアルキル」とは、炭素数３〜１５の環状飽和炭化水素基を意味し、例えば、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチル、橋かけ環式炭化水素基、スピロ炭化水素基などが挙げられる。
「橋かけ環式炭化水素基」とは、２つ以上の環が２個またはそれ以上の原子を共有している炭素数５〜８の脂肪族環から水素を１つ除いてできる基を包含する。具体的にはビシクロ［２．１．０］ペンチル、ビシクロ［２．２．１］ヘプチル、ビシクロ［２．２．２］オクチルおよびビシクロ［３．２．１］オクチル、トリシクロ［２．２．１．０］ヘプチルなどが挙げられる。
「スピロ炭化水素基」とは、２つの炭化水素環が１個の炭素原子を共有して構成されている環から水素を１つ除いてできる基を包含する。具体的にはスピロ［３．４］オクチルなどが挙げられる。
「シクロアルケニル」とは、炭素数３〜７個の環状の不飽和脂肪族炭化水素基を意味し、例えば、シクロプロペニル、シクロブテニル、シクロペンテニル、シクロヘキセニル、シクロヘプテニルが挙げられ、好ましくはシクロプロペニル、シクロブテニル、シクロペンテニル、シクロヘキセニルである。シクロアルケニルには、環中に不飽和結合を有する橋かけ環式炭化水素基およびスピロ炭化水素基も含む。
「複素環式基」とは、「ヘテロアリール、ヘテロサイクル」を包含する。
「ヘテロアリール」とは、単環芳香族複素環式基及び縮合芳香族複素環式基を意味する。単環芳香族複素環式基は、酸素原子、硫黄原子、および／又は窒素原子を環内に１〜４個含んでいてもよい５〜８員の芳香環から誘導される、置換可能な任意の位置に結合手を有していてもよい基を意味する。縮合芳香族複素環式基は、酸素原子、硫黄原子、および／又は窒素原子を環内に１〜４個含んでいてもよい５〜８員の芳香環が、１〜４個の５〜８員の芳香族炭素環もしくは他の５〜８員の芳香族ヘテロ環と縮合している、置換可能な任意の位置に結合手を有していてもよい基を意味する。例えば、フリル（例：２−フリル、３−フリル）、チエニル（例：２−チエニル、３−チエニル）、ピロリル（例：１−ピロリル、２−ピロリル、３−ピロリル）、イミダゾリル（例：１−イミダゾリル、２−イミダゾリル、４−イミダゾリル）、ピラゾリル（例：１−ピラゾリル、３−ピラゾリル、４−ピラゾリル）、トリアゾリル（例：１，２，４−トリアゾール−１−イル、１，２，４−トリアゾール−３−イル、１，２，４−トリアゾール−４−イル）、テトラゾリル（例：１−テトラゾリル、２−テトラゾリル、５−テトラゾリル）、オキサゾリル（例：２−オキサゾリル、４−オキサゾリル、５−オキサゾリル）、イソキサゾリル（例：３−イソキサゾリル、４−イソキサゾリル、５−イソキサゾリル）、チアゾリル（例：２−チアゾリル、４−チアゾリル、５−チアゾリル）、チアジアゾリル、イソチアゾリル（例：３−イソチアゾリル、４−イソチアゾリル、５−イソチアゾリル）、ピリジル（例：２−ピリジル、３−ピリジル、４−ピリジル）、ピリダジニル（例：３−ピリダジニル、４−ピリダジニル）、ピリミジニル（例：２−ピリミジニル、４−ピリミジニル、５−ピリミジニル）、フラザニル（例：３−フラザニル）、ピラジニル（例：２−ピラジニル）、オキサジアゾリル（例：１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）、ベンゾフリル（例：２−ベンゾ［ｂ］フリル、３−ベンゾ［ｂ］フリル、４−ベンゾ［ｂ］フリル、５−ベンゾ［ｂ］フリル、６−ベンゾ［ｂ］フリル、７−ベンゾ［ｂ］フリル）、ベンゾチエニル（例：２−ベンゾ［ｂ］チエニル、３−ベンゾ［ｂ］チエニル、４−ベンゾ［ｂ］チエニル、５−ベンゾ［ｂ］チエニル、６−ベンゾ［ｂ］チエニル、７−ベンゾ［ｂ］チエニル）、ベンズイミダゾリル（例：１−ベンゾイミダゾリル、２−ベンゾイミダゾリル、４−ベンゾイミダゾリル、５−ベンゾイミダゾリル）、ジベンゾフリル、ベンゾオキサゾリル、キノキサリル（例：２−キノキサリニル、５−キノキサリニル、６−キノキサリニル）、シンノリニル（例：３−シンノリニル、４−シンノリニル、５−シンノリニル、６−シンノリニル、７−シンノリニル、８−シンノリニル）、キナゾリル（例：２−キナゾリニル、４−キナゾリニル、５−キナゾリニル、６−キナゾリニル、７−キナゾリニル、８−キナゾリニル）、キノリル（例：２−キノリル、３−キノリル、４−キノリル、５−キノリル、６−キノリル、７−キノリル、８−キノリル）、フタラジニル（例：１−フタラジニル、５−フタラジニル、６−フタラジニル）、イソキノリル（例：１−イソキノリル、３−イソキノリル、４−イソキノリル、５−イソキノリル、６−イソキノリル、７−イソキノリル、８−イソキノリル）、プリル、プテリジニル（例：２−プテリジニル、４−プテリジニル、６−プテリジニル、７−プテリジニル）、カルバゾリル、フェナントリジニル、アクリジニル（例：１−アクリジニル、２−アクリジニル、３−アクリジニル、４−アクリジニル、９−アクリジニル）、インドリル（例：１−インドリル、２−インドリル、３−インドリル、４−インドリル、５−インドリル、６−インドリル、７−インドリル）、イソインドリル、ファナジニル（例：１−フェナジニル、２−フェナジニル）又はフェノチアジニル（例：１−フェノチアジニル、２−フェノチアジニル、３−フェノチアジニル、４−フェノチアジニル）等が挙げられる。
「ヘテロサイクル」とは、酸素原子、硫黄原子、及び／又は窒素原子を環内に１〜４個含んでいてもよく、置換可能な任意の位置に結合手を有していてもよい非芳香族複素環式基を意味する。また、そのような非芳香族複素環式基がさらに炭素数１〜４のアルキル鎖で架橋されていてもよく、シクロアルカン（５〜６員環が好ましい）やベンゼン環が縮合していてもよい。非芳香族であれば、飽和でも不飽和でもよい。例えば、１−ピロリニル、２−ピロリニル、３−ピロリニル、１−ピロリジニル、２−ピロリジニル、３−ピロリジニル、１−イミダゾリニル、２−イミダゾリニル、４−イミダゾリニル、１−イミダゾリジニル、２−イミダゾリジニル、４−イミダゾリジニル、１−ピラゾリニル、３−ピラゾリニル、４−ピラゾリニル、１−ピラゾリジニル、３−ピラゾリジニル、４−ピラゾリジニル、ピペリジノ、２−ピペリジニル、３−ピペリジニル、４−ピペリジニル、１−ピペラジニル、２−ピペラジニル、２−モルホリニル、３−モルホリニル、モルホリノ、テトラヒドロピラニル等があげられる。
「アルキレン」とは、メチレンが１〜６個連続した２価の基を包含し、具体的にはメチレン、エチレン、トリメチレン、テトラメチレン、ペンタメチレンおよびヘキサメチレン等が挙げられる。
「水酸基から導かれる脱離基」とは、−ＯＭｓ、−ＯＴｓ、−ＯＴｆ、−ＯＮｓ等があげられる。ここで、「Ｍｓ」はメタンスルホニル基、「Ｔｓ」はパラトルエンスルホニル基、「Ｔｆ」はトリフルオロメタンスルホニル基、「Ｎｓ」はオルトニトロベンゼンスルホニル基を表す。
本発明の方法で用いられるＮ−（モノヒドロキシ−２−アダマンチル）−フタルイミド誘導体の生産能を有する糸状菌としては、Ｎ−（モノヒドロキシ−２−アダマンチル）−フタルイミド誘導体またはその塩を産生する能力を有する微生物であればいかなる微生物でもよい。このような微生物として、例えば、Ｎ−（モノヒドロキシ−２−アダマンチル）−フタルイミド誘導体の生産能を有し、かつ、ナカタエア属（Ｎａｋａｔａｅａ）、リゾクトニア属（Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ）、カエトミウム属（Ｃｈａｅｔｏｍｉｕｍ）に属する微生物が挙げられる。
Ｎ−（モノヒドロキシ−２−アダマンチル）−フタルイミド誘導体の生産能を有する微生物は、微生物を好適な培地、好ましくは液体培地で培養し、培養液中に蓄積されたＮ−（モノヒドロキシ−２−アダマンチル）−フタルイミド誘導体の有無によって、検索することができる。培地中のＮ−（モノヒドロキシ−２−アダマンチル）−フタルイミド誘導体の検出は、例えば、本発明により得られるＮ−（モノヒドロキシ−２−アダマンチル）−フタルイミド誘導体を標準品として用いたＨＰＬＣにより、行うことができる。
本発明に用いる微生物の具体的な例としては、Ｎ−（モノヒドロキシ−２−アダマンチル）−フタルイミド誘導体生産能を有する微生物として、今回新たに分離したＲＦ−９４０２株がある。この菌株は、リゾクトニア属（Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ）に属する糸状菌であり、本発明の方法に最も好適に用いられるＮ−（モノヒドロキシ−２−アダマンチル）−フタルイミド誘導体生産菌の一例である。同菌株は、好適な条件で培養すると、Ｎ−（モノヒドロキシ−２−アダマンチル）−フタルイミド誘導体を菌体外に生産する。
この他に、カエトミウム属（Ｃｈａｅｔｏｍｉｕｍ）に属するＲＦ−５７３３株、ナカタエア属（Ｎａｋａｔａｅａ）ＲＦ−９４７５株についても同様の特徴を有することを見出した。
これらの菌学的性質を以下に記載する。
この他に、カエトミウム属（Ｃｈａｅｔｏｍｉｕｍ）に属するＲＦ−５７３３株、ナカタエア属（Ｎａｋａｔａｅａ）ＲＦ−９４７５株についても同様の特徴を有することを見出した。
これらの菌学的性質を以下に記載する。
ＲＦ−９４０２株は、ポテトデキストロース寒天培地上での生育は旺盛だが、明瞭なコロニーを形成せず、部分的にフェルト状あるいは粉状を呈する。気中菌糸は淡褐色〜褐色で、幅は７−２０μm、概ね直角に分枝し、分枝部でくびれる。茶褐色の菌核を形成するが、分生子および胞子は見られない。
ＲＦ−５７３３株は、ポテトデキストロース寒天培地上で上部に開口した亜球形〜卵形のペルセシアを形成する。ペルセシアは二種の頂毛を有し、一種は基部から生じ、細く緩く波打ち、もう一方は下部がまっすぐで上は３−５回螺旋状に巻く。子嚢はこん棒状で、８個のレモン型の子嚢胞子を格納する。子嚢胞子のサイズは７．５−１０．０ × ６．５−８．０μmであった。
ＲＦ−９４７５株は、ポテトデキストロース寒天培地上での生育は旺盛で、豊富な気中菌糸を伴い、ルーズフェルト状のコロニーを形成する。気中菌糸は無色で直径１．０〜２．０μｍ、寒天中の栄養菌糸は褐色で直径２．０〜５．０μｍである。ポテトデキストロース寒天培地、コーンミール寒天培地、モルトエキス寒天培地などの上で、分生子や菌核、有性生殖器官の形成は認められない。
これらの所見を基に、菌類図鑑 下（１９７７年 講談社）、日本菌類誌 第三巻第三号 (１９９５年 養賢堂)などで検索し、ＲＦ−９４０２株はリゾクトニア・ソラニ（Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ｓｏｌａｎｉ）、ＲＦ−５７３３株はカエトミウム・コクリオデス（Ｃｈａｅｔｏｍｉｕｍ ｃｏｃｈｌｉｄｏｄｅｓ）、ＲＦ−９４７５株は ナカタエア・シグモイデア（Ｎａｋａｔａｅａ ｓｉｇｍｏｉｄｅａ）と同定し、リゾクトニア・ソラニＲＦ−９４０２、カエトミウム・コクリオデスＲＦ−５７３３、ナカタエア・シグモイデアＲＦ−９４７５とそれぞれ命名した。
これらの糸状菌は、平成１９年２月２６日に、独立行政法人 産業技術総合研究所内 特許生物寄託センター(茨城県つくば市東１−１−１ 中央第６)に、「Ｃｈａｅｔｏｍｉｕｍ ｃｏｃｈｌｉｄｏｄｅｓ ＲＦ−５７３３」（受領番号ＦＥＲＭ ＡＢＰ−１０７８９）、「Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ｓｏｌａｎｉ ＲＦ−９４０２」（受領番号ＦＥＲＭ ＡＢＰ−１０７９０）および「Ｎａｋａｔａｅａ ｓｉｇｍｏｉｄｅａ ＲＦ−９４７５」（受領番号ＦＥＲＭ ＡＢＰ−１０７９１）なる表示で特許手続上の微生物の寄託の国際的承認に関するブタペスト条約に基づいて国際寄託されている。
ＲＦ−５７３３株は、ポテトデキストロース寒天培地上で上部に開口した亜球形〜卵形のペルセシアを形成する。ペルセシアは二種の頂毛を有し、一種は基部から生じ、細く緩く波打ち、もう一方は下部がまっすぐで上は３−５回螺旋状に巻く。子嚢はこん棒状で、８個のレモン型の子嚢胞子を格納する。子嚢胞子のサイズは７．５−１０．０ × ６．５−８．０μmであった。
ＲＦ−９４７５株は、ポテトデキストロース寒天培地上での生育は旺盛で、豊富な気中菌糸を伴い、ルーズフェルト状のコロニーを形成する。気中菌糸は無色で直径１．０〜２．０μｍ、寒天中の栄養菌糸は褐色で直径２．０〜５．０μｍである。ポテトデキストロース寒天培地、コーンミール寒天培地、モルトエキス寒天培地などの上で、分生子や菌核、有性生殖器官の形成は認められない。
これらの所見を基に、菌類図鑑 下（１９７７年 講談社）、日本菌類誌 第三巻第三号 (１９９５年 養賢堂)などで検索し、ＲＦ−９４０２株はリゾクトニア・ソラニ（Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ｓｏｌａｎｉ）、ＲＦ−５７３３株はカエトミウム・コクリオデス（Ｃｈａｅｔｏｍｉｕｍ ｃｏｃｈｌｉｄｏｄｅｓ）、ＲＦ−９４７５株は ナカタエア・シグモイデア（Ｎａｋａｔａｅａ ｓｉｇｍｏｉｄｅａ）と同定し、リゾクトニア・ソラニＲＦ−９４０２、カエトミウム・コクリオデスＲＦ−５７３３、ナカタエア・シグモイデアＲＦ−９４７５とそれぞれ命名した。
これらの糸状菌は、平成１９年２月２６日に、独立行政法人 産業技術総合研究所内 特許生物寄託センター(茨城県つくば市東１−１−１ 中央第６)に、「Ｃｈａｅｔｏｍｉｕｍ ｃｏｃｈｌｉｄｏｄｅｓ ＲＦ−５７３３」（受領番号ＦＥＲＭ ＡＢＰ−１０７８９）、「Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ｓｏｌａｎｉ ＲＦ−９４０２」（受領番号ＦＥＲＭ ＡＢＰ−１０７９０）および「Ｎａｋａｔａｅａ ｓｉｇｍｏｉｄｅａ ＲＦ−９４７５」（受領番号ＦＥＲＭ ＡＢＰ−１０７９１）なる表示で特許手続上の微生物の寄託の国際的承認に関するブタペスト条約に基づいて国際寄託されている。
リゾクトニア・ソラニＲＦ−９４０２、カエトミウム・コクリオデスＲＦ−５７３３、及びナカタエア・シグモイデアＲＦ−９４７５は、例えば、ポテト・デキストロース寒天培地のスラント上での保存、又は１０％グリセリンを添加したポテト・デキストロースブロスを保護剤として用いたマイナス８０℃以下での凍結保存により、安定に保存することができる。
以上、Ｎ−（モノヒドロキシ−２−アダマンチル）−フタルイミド誘導体生産菌の一例である、ＲＦ−９４０２株、ＲＦ−５７３３株、及びＲＦ−９４７５株について説明したが、一般的には糸状菌類はその菌学的性状が極めて変化しやすく、一定したものではない。菌類は、自然的あるいは通常行われている紫外線照射、Ｘ線照射、変異誘発剤（例えば、Ｎ−メチル−Ｎ'−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジンなど）を用いた人為的変異手段により変異することは周知の事実である。このような自然変異株ならびに人工変異株も含め、糸状菌に属し、Ｎ−（モノヒドロキシ−２−アダマンチル）−フタルイミド誘導体を生産する能力を有する菌株はすべて本発明に使用することができる。
リゾクトニア属に属する糸状菌としては、リゾクトニア・ソラニ（Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ｓｏｌａｎｉ）、リゾクトニア・アデロリディイ（Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ａｄｅｒｈｏｌｄｉｉ）、リゾクトニア・アエレア（Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ａｅｒｅａ）、リゾクトニア・アルピナ（Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ａｌｐｉｎａ）等が挙げられる。
カエトミウム属に属する糸状菌としては、カエトミウム・コクリオデス（Ｃｈａｅｔｏｍｉｕｍ ｃｏｃｈｌｉｏｄｅｓ）、カエトミウム・フニコラ（Ｃｈａｅｔｏｍｉｕｍ ｆｕｎｉｃｏｌａ）カエトミウム・インディカム（Ｃｈａｅｔｏｍｉｕｍ ｉｎｄｉｃｕｍ）、カエトミウム・オリバセウム（Ｃｈａｅｔｏｍｉｕｍ ｏｌｉｖａｃｅｕｍ）等が挙げられる。
ナカタエア属に属する糸状菌としては、Ｎａｋａｔａｅａ ｃｕｒｖｕｌａｒｉｏｉｄｅｓ（ナカタエア カーブラリオイデス）、Ｎａｋａｔａｅａ ｃｙｌｉｎｄｒｏｓｐｏｒａ（ナカタエア シリンドロスポラ）、Ｎａｋａｔａｅａ ｆｕｓｉｓｐｏｒａ（ナカタエア フシスポラ）等が挙げられる。
カエトミウム属に属する糸状菌としては、カエトミウム・コクリオデス（Ｃｈａｅｔｏｍｉｕｍ ｃｏｃｈｌｉｏｄｅｓ）、カエトミウム・フニコラ（Ｃｈａｅｔｏｍｉｕｍ ｆｕｎｉｃｏｌａ）カエトミウム・インディカム（Ｃｈａｅｔｏｍｉｕｍ ｉｎｄｉｃｕｍ）、カエトミウム・オリバセウム（Ｃｈａｅｔｏｍｉｕｍ ｏｌｉｖａｃｅｕｍ）等が挙げられる。
ナカタエア属に属する糸状菌としては、Ｎａｋａｔａｅａ ｃｕｒｖｕｌａｒｉｏｉｄｅｓ（ナカタエア カーブラリオイデス）、Ｎａｋａｔａｅａ ｃｙｌｉｎｄｒｏｓｐｏｒａ（ナカタエア シリンドロスポラ）、Ｎａｋａｔａｅａ ｆｕｓｉｓｐｏｒａ（ナカタエア フシスポラ）等が挙げられる。
本発明の方法を実施するに当っては、糸状菌に属するＮ−（モノヒドロキシ−２−アダマンチル）−フタルイミド誘導体生産菌を、用いる微生物に好適な培地、例えば、通常の微生物が利用しうる栄養物を含有する培地、好ましくは液体培地中において培養する。本生産菌の培養には、微生物の培養に用いられる通常の培養方法が適用される。栄養源としては、使用される微生物が資化しうる炭素源、窒素源および無機塩などを程よく含有する培地であれば天然培地、合成培地のいずれでも利用できる。
用いる培地に含有される微生物が資化しうる炭素源としては、グルコース、フルクトース、ガラクトース、グリセロール、可溶性デンプン、グルタミン酸、糖蜜、動・植物油等を利用できる。また、窒素源としては、麦芽エキス、コーンステイープリカー、肉エキス、ペプトン、酵母エキス、硫酸アンモニウム、硝酸ナトリウム、尿素などを使用できる。そのほか必要に応じ、ナトリウム、カリウム、カルシウム、ビタミン類、マグネシウム、塩素、硫酸およびその他のイオンを生成することができる無機塩類を培地中に添加することができる。また、使用するＮ−（モノヒドロキシ−２−アダマンチル）−フタルイミド誘導体生産菌の発育を助け、Ｎ−（モノヒドロキシ−２−アダマンチル）−フタルイミド誘導体の生産を促進するような無機物質および（または）有機物質を適当に添加できる。例えば、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン、α−シクロデキストリン、β−シクロデキストリン、γ−シクロデキストリン、メチル−β−シクロデキストリンなどの包接剤が挙げられる。
リゾクトニア・ソラニＲＦ−９４０２、カエトミウム・コクリオデスＲＦ−５７３３、ナカタエア・シグモイデアＲＦ―９４７５の生育に好適な培地としては、ポテト・デキストロース寒天培地、麦芽エキス寒天培地、Ｖ−８ジュース寒天培地及びポテトキャロット寒天培地が挙げられる。
Ｎ−（モノヒドロキシ−２−アダマンチル）−フタルイミド誘導体生産菌の培養方法には、好気的条件下での培養法、特に通気下の深部液体培養法が最も適している。培養に適当な温度は、１０〜３０℃であるが、多くの場合１５〜３０℃で培養するのがよい。Ｎ−（モノヒドロキシ−２−アダマンチル）−フタルイミド誘導体の生産は、用いた培地の種類や培養条件によって異なるが、振とう培養、タンク培養とも３〜１０日間の培養でその蓄積量が最高に達する。
培養物中に生産されたＮ−（モノヒドロキシ−２−アダマンチル）−フタルイミド誘導体の蓄積量が最高に達した時点で培養を停止し、その培養物から、発酵生産物を採取する一般的な方法に準じてＮ−（モノヒドロキシ−２−アダマンチル）−フタルイミド誘導体の分離を行うのがよい。具体的には、例えば、溶媒抽出、イオン交換クロマトグラフィー、活性炭処理、結晶化、膜分離等により、Ｎ−（モノヒドロキシ−２−アダマンチル）−フタルイミド誘導体を培地から単離することができる。
Ｎ−（モノヒドロキシ−２−アダマンチル）−フタルイミド誘導体を効率よく生産させる培養条件は、前記培地成分の組成、培養温度、撹拌速度、ｐＨ、通気量、種母の培養時間、種母の接種量等を、使用する生産菌株の種類および外部条件等に応じて、適宜に調節あるいは選択して設定する。液体培養において発泡がある場合は、シリコーン油、植物油および界面活性剤等の消泡剤を単独または混合して適宜に培地に配合する。
包接剤存在下でＮ−（２−アダマンチル）−フタルイミド誘導体１０g／L以上を溶解状態で添加することも可能で、実施例に示した方法を改良し培養開始時に２％、培養２日目に８％を添加するなどの方法を取ることにより８０％を超える変換率を得ることができる。
糸状菌は、真菌菌糸全体としてまたは水酸化酵素を含有する抽出物の形で生体内変換に使用することができる。抽出物とは、真菌の菌体を破砕して処理を施したものであり、可溶性の酵素を含有するものを意味する。抽出物の酵素、特に水酸化酵素は、場合によっては、例えば酵素の天然の補助因子、バッファー、塩を加えることによって、安定化させることができる。抽出物の水酸化酵素は固定化型で使用することもできる。
本発明には、ナカタエア属（Ｎａｋａｔａｅａ）、リゾクトニア属（Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ）、カエトミウム属（Ｃｈａｅｔｏｍｉｕｍ）のいずれかの属に属する微生物の菌またはその抽出物により、２−アダマンタナミンのアミノ保護体からモノヒドロキシ−２−アダマンタナミンのアミノ保護体を生産する方法も包含される。
ナカタエア属（Ｎａｋａｔａｅａ）、リゾクトニア属（Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ）、カエトミウム属（Ｃｈａｅｔｏｍｉｕｍ）のいずれかの属に属する微生物としては、上記に記載された微生物などを用いることができる。
２−アダマンタナミンのアミノ保護体としては、アダマンタナミンのアミノ基が保護された化合物であれば、いずれの化合物も包含される。なお、アダマンタン部分の水酸化される以外の部分がＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉなどのハロゲン、アルキル、ヒドロキシ、アルコキシ、ニトロ、アリール、アリールアルキル、カルボキシ、エステル、カルバモイルなどで置換されていてもよい。好ましくは、Ｎ−（２−アダマンチル）−フタルイミド誘導体、Ｎ−（２−アダマンチル）−フタルイミド、Ｎ−ベンゾイル−２−アダマンタナミン誘導体、Ｎ−ベンゾイル−２−アダマンタナミン、Ｎ−アセチル−２−アダマンタナミン誘導体、Ｎ−アセチル−２−アダマンタナミンなどが挙げられる。
モノヒドロキシ−２−アダマンタナミンのアミノ保護体は、上記の２−アダマンタナミンのアミノ保護体がモノ水酸化された化合物を意味する。
本発明により得られた、モノヒドロキシ−２−アダマンタナミンのアミノ保護体、Ｎ−（モノヒドロキシ−２−アダマンチル）−フタルイミド誘導体は、保護基をはずすことにより、容易にモノヒドロキシ−２−アダマンタナミンに変換することができる。
本発明には、ナカタエア属（Ｎａｋａｔａｅａ）、リゾクトニア属（Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ）、カエトミウム属（Ｃｈａｅｔｏｍｉｕｍ）のいずれかの属に属する微生物の菌またはその抽出物により、２−アダマンタナミンのアミノ保護体からモノヒドロキシ−２−アダマンタナミンのアミノ保護体を生産する方法も包含される。
ナカタエア属（Ｎａｋａｔａｅａ）、リゾクトニア属（Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ）、カエトミウム属（Ｃｈａｅｔｏｍｉｕｍ）のいずれかの属に属する微生物としては、上記に記載された微生物などを用いることができる。
２−アダマンタナミンのアミノ保護体としては、アダマンタナミンのアミノ基が保護された化合物であれば、いずれの化合物も包含される。なお、アダマンタン部分の水酸化される以外の部分がＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉなどのハロゲン、アルキル、ヒドロキシ、アルコキシ、ニトロ、アリール、アリールアルキル、カルボキシ、エステル、カルバモイルなどで置換されていてもよい。好ましくは、Ｎ−（２−アダマンチル）−フタルイミド誘導体、Ｎ−（２−アダマンチル）−フタルイミド、Ｎ−ベンゾイル−２−アダマンタナミン誘導体、Ｎ−ベンゾイル−２−アダマンタナミン、Ｎ−アセチル−２−アダマンタナミン誘導体、Ｎ−アセチル−２−アダマンタナミンなどが挙げられる。
モノヒドロキシ−２−アダマンタナミンのアミノ保護体は、上記の２−アダマンタナミンのアミノ保護体がモノ水酸化された化合物を意味する。
本発明により得られた、モノヒドロキシ−２−アダマンタナミンのアミノ保護体、Ｎ−（モノヒドロキシ−２−アダマンチル）−フタルイミド誘導体は、保護基をはずすことにより、容易にモノヒドロキシ−２−アダマンタナミンに変換することができる。
本発明を実施例により更に具体的に説明する。
以下に示す方法により社内の菌株ライブラリーをスクリーニングし、２−アダマンタンフタルイミド水酸化反応を行う株を見出した。
[スクリーニング条件]
グルコース ２．０％、 ソイビーンミール ０．５％、 イーストエクストラクト(Ｄｉｆｃｏ) ０．５％、塩化ナトリウム ０．５％、 リン酸カリウム ０．５％、 ヒドロキシプロピル-β−シクロデキストリン１．４％ 水道水（ＰＨ７に希塩酸で調整）の組成の培地２００ｍｌを１２１℃、２０分間滅菌した。２−アダマンタンフタルイミド４０mｇをＤＭＳＯ 溶液(１．０ｍｌ)として添加した後、１ｍｌずつを無菌的に２４穴マルチプレート８枚に分注し、変換用カビライブラリーを胞子懸濁液として接種し、毎分４００回転（丸菱バイオエンジ製 ＭＢＳＳ−１００）で、２８℃、７日間培養した。
[抽出・分析]
発酵終了した２４穴マルチプレート培養液は、１ウェルあたり１ｍｌのアセトンを加え撹拌抽出した後、９６穴ディーププレートに移し変え、毎分２５００回転で１５分間遠心分離し、上澄み液を逆相ＨＰＬＣ分析に供した。
[結果]
変換反応の結果、新たなピークの検出されるサンプルについてＥＳＩ−ＭＳにより水酸基が１つ付与したと推定されるピークとしてＰ５、Ｐ６を同定した。基質を８０％以上これらの化合物に効率的変換する株として以下の３株を選択した。無胞子不完全菌ＲＦ−９４７５はＰ５、Ｐ６に相当する化合物の両方をほぼ等量作るのに対し、リゾクトニア・ソラニＲＦ−９４０２株、及びケトミウム・コクリオデスＲＦ−５７３３は基質の８０％以上をそれぞれＰ５、Ｐ６に変換する。
なお、先行技術（ジャーナル オブ オーガニック ケミストリー、１９９２年、５７巻、ｐ.７２１２‐７２１６）に記載されるボーベリア・スルフレッセンス（またはボーベリア・バッシアーナ）ＡＴＣＣ−７１５９株についてもこの方法でスクリーニングを行ったが、反応率は２０％と顕著な水酸化体の生成は認められなかった。
[スクリーニング条件]
グルコース ２．０％、 ソイビーンミール ０．５％、 イーストエクストラクト(Ｄｉｆｃｏ) ０．５％、塩化ナトリウム ０．５％、 リン酸カリウム ０．５％、 ヒドロキシプロピル-β−シクロデキストリン１．４％ 水道水（ＰＨ７に希塩酸で調整）の組成の培地２００ｍｌを１２１℃、２０分間滅菌した。２−アダマンタンフタルイミド４０mｇをＤＭＳＯ 溶液(１．０ｍｌ)として添加した後、１ｍｌずつを無菌的に２４穴マルチプレート８枚に分注し、変換用カビライブラリーを胞子懸濁液として接種し、毎分４００回転（丸菱バイオエンジ製 ＭＢＳＳ−１００）で、２８℃、７日間培養した。
[抽出・分析]
発酵終了した２４穴マルチプレート培養液は、１ウェルあたり１ｍｌのアセトンを加え撹拌抽出した後、９６穴ディーププレートに移し変え、毎分２５００回転で１５分間遠心分離し、上澄み液を逆相ＨＰＬＣ分析に供した。
[結果]
変換反応の結果、新たなピークの検出されるサンプルについてＥＳＩ−ＭＳにより水酸基が１つ付与したと推定されるピークとしてＰ５、Ｐ６を同定した。基質を８０％以上これらの化合物に効率的変換する株として以下の３株を選択した。無胞子不完全菌ＲＦ−９４７５はＰ５、Ｐ６に相当する化合物の両方をほぼ等量作るのに対し、リゾクトニア・ソラニＲＦ−９４０２株、及びケトミウム・コクリオデスＲＦ−５７３３は基質の８０％以上をそれぞれＰ５、Ｐ６に変換する。
なお、先行技術（ジャーナル オブ オーガニック ケミストリー、１９９２年、５７巻、ｐ.７２１２‐７２１６）に記載されるボーベリア・スルフレッセンス（またはボーベリア・バッシアーナ）ＡＴＣＣ−７１５９株についてもこの方法でスクリーニングを行ったが、反応率は２０％と顕著な水酸化体の生成は認められなかった。
[種培養]
グルコース２．０％、 ソイビーンミール ０．５％、 イーストエクストラクト(Ｄｉｆｃｏ)０．５％、 塩化ナトリウム０．５％、 リン酸カリウム０．５％ 水道水（ＰＨ７に調整、希塩酸）の組成の培地１００ｍｌを５００ｍｌ容広口フラスコに分注し、１２１℃、２０分間滅菌した。この培地にＨｅｌｍｉｎｔｈｏｓｐｏｒｉｕｍ ｓｉｇｍｏｉｄｅｕｍ（ヘルミントスポリウム シグモイデウム） ＲＦ−９４７５株を寒天斜面培養物よりかきとり接種し、振幅７０ｍｍ、毎分１８０回転で、２８℃、２日間培養し、種培養とした。
[生体触媒反応]
グルコース２．０％、 ソイビーンミール０．５％、 イーストエクストラクト(Ｄｉｆｃｏ) ０．５％、 塩化ナトリウム０．５％、リン酸カリウム０．５％、ヒドロキシプロピル-β−シクロデキストリン１．４％ 水道水（ＰＨ７．０に調整、希塩酸）の組成の培地１００ｍｌを５００ｍｌ容広口フラスコ ５０本に分注し、１２１℃、２０分間滅菌した。フラスコ当たり２−アダマンタンフタルイミド１００mｇをＤＭＳＯ２ｍｌ溶液とし、無菌的に添加した後、種培養物４ｍｌずつ接種し、振幅７０ｍｍ、毎分１８０回転で、２８℃、４日間培養した。逆相ＨＰＬＣ分析の結果、５７．２％の基質をＰ５に、４３．７％ の基質をＰ６に変換した。
[抽出]
フラスコ５０本分の発酵終了液は、酢酸エチル３Ｌで抽出した後、ｎ−ブタノール１Ｌで再抽出した。両抽出液を合わせ、減圧下、濃縮乾固し、１１．３９ｇの粗抽出物を得た。
[単離・精製]
得られた粗抽出物１１．３９ｇはシリカゲル(ＭＳゲルＤ−１５０−６０Ａ、旭硝子株式会社製) ２００ｇを充填した中圧カラム(内径３ｃｍ、 長さ５０ｃｍ)を用い、酢酸エチルで溶出し、有効画分を濃縮乾固し、５．０１ｇの粗抽出物を得た。
得られた粗抽出物５．０１ｇは、Ｄｅｖｅｌｏｓｉｌ ＵＧ−Ｃ１８ １５／３０ (内径５ｃｍ、長さ５０ｃｍ)カラムを用い、アセトニトリル/水 ０．１％蟻酸酸性 ３０〜６０％(４０分)のグラディエント、流速５０ｍｌ/分でクロマトを行った。
有効画分を減圧濃縮し、凍結乾燥により ２−アダマンタンフタルイミド-Ｐ５、Ｐ６ の精製品として各々１．３６ｇ、１．０２ｇを得た。
それぞれの物性値は以下の通りである。
２−アダマンタンフタルイミド-Ｐ５：
ＥＳＩＭＳ ｍ／ｚ：２９８［Ｍ＋Ｈ］＋、２８０［Ｍ＋Ｈ−Ｈ２０］＋
１Ｈ ＮＭＲ(ＤＭＳＯ-d６) δ : ７.８１７(４Ｈ、 s)、 ４.４８(１Ｈ、 ｂｒ．ｓ)、 ４.１３(１Ｈ、 ｂｒ．ｓ)、 ２.６９(１Ｈ、 ｂｒ．ｓ)、 ２.１０(２Ｈ、 ｂｒ．ｄ、 J＝〜１３Ｈz)、 ２.０５(１Ｈ、ｍ)、 １.７８(２Ｈ、 ｂｒ．ｄ、 J＝〜１２Ｈz)、 １.７０(２Ｈ、 ｂｒ．ｄ、 J＝〜１２Ｈz)、 １.６５(２Ｈ、 ｂｒ．ｄ、 J＝〜３Ｈz)、 １.４４(２Ｈ、 ｂｒ．ｄ、 J＝〜１３Ｈz)
１３Ｃ ＮＭＲ(ＤＭＳＯ-ｄ６) δ : １６８.９６、 １３４.２２、 １３１.４３、 １２２.５７、 ６５.４８、 ５９.５０、 ４５.２９、 ４５.１５、 ３１.８６、 ３１.２０、 ２８.６１
２−アダマンタンフタルイミド-Ｐ６：
ＥＳＩＭＳ ｍ／ｚ：２９８［Ｍ＋Ｈ］＋、２８０［Ｍ＋Ｈ−Ｈ２０］＋
１Ｈ ＮＭＲ(ＤＭＳＯ-ｄ６) δ: ７.８１７(４Ｈ、 s)、 ４.６３１(１Ｈ、 d、 J＝３.３Ｈz)、 ４.１７(１Ｈ、 ｂｒ．ｓ)、 ３.６８(１Ｈ、 ｂｒ．ｑ、 J＝〜３Ｈz)、 ２.４３(１Ｈ、 ｂｒ．ｓ)、 ２.３７(１Ｈ、 ｂｒ．ｓ)、 ２.３０５(１Ｈ、 dq、 J＝１３.１、 ３.１Ｈz)、 ２.２２４(１Ｈ、 ｄｑ、 J＝１２.４、 ３.０Ｈz)、 １.９４(２Ｈ、 m)、 １.９０(１Ｈ、 m)、 １.８０(１Ｈ、 ｂｒ．ｑ、 J＝〜３Ｈz)、 １.７８(１Ｈ、 m)、 １.７２(１Ｈ、 ｂｒ．ｑ、 J＝〜３Ｈz)、 １.５４(２Ｈ、 ｂｒ．ｄ、 J＝〜１３Ｈz)
１３Ｃ ＮＭＲ(ＤＭＳＯ-d６) δ : １６８.９１、 １３４.１９、 １３１.４１、 １２２.５４、 ７１.９１、 ６０.２５、 ３６.４２、 ３３.３６、 ３２.７９、 ３１.４１、 ３１.３４、 ２９.８６、 ２９.１１、 ２５.９０
グルコース２．０％、 ソイビーンミール ０．５％、 イーストエクストラクト(Ｄｉｆｃｏ)０．５％、 塩化ナトリウム０．５％、 リン酸カリウム０．５％ 水道水（ＰＨ７に調整、希塩酸）の組成の培地１００ｍｌを５００ｍｌ容広口フラスコに分注し、１２１℃、２０分間滅菌した。この培地にＨｅｌｍｉｎｔｈｏｓｐｏｒｉｕｍ ｓｉｇｍｏｉｄｅｕｍ（ヘルミントスポリウム シグモイデウム） ＲＦ−９４７５株を寒天斜面培養物よりかきとり接種し、振幅７０ｍｍ、毎分１８０回転で、２８℃、２日間培養し、種培養とした。
[生体触媒反応]
グルコース２．０％、 ソイビーンミール０．５％、 イーストエクストラクト(Ｄｉｆｃｏ) ０．５％、 塩化ナトリウム０．５％、リン酸カリウム０．５％、ヒドロキシプロピル-β−シクロデキストリン１．４％ 水道水（ＰＨ７．０に調整、希塩酸）の組成の培地１００ｍｌを５００ｍｌ容広口フラスコ ５０本に分注し、１２１℃、２０分間滅菌した。フラスコ当たり２−アダマンタンフタルイミド１００mｇをＤＭＳＯ２ｍｌ溶液とし、無菌的に添加した後、種培養物４ｍｌずつ接種し、振幅７０ｍｍ、毎分１８０回転で、２８℃、４日間培養した。逆相ＨＰＬＣ分析の結果、５７．２％の基質をＰ５に、４３．７％ の基質をＰ６に変換した。
[抽出]
フラスコ５０本分の発酵終了液は、酢酸エチル３Ｌで抽出した後、ｎ−ブタノール１Ｌで再抽出した。両抽出液を合わせ、減圧下、濃縮乾固し、１１．３９ｇの粗抽出物を得た。
[単離・精製]
得られた粗抽出物１１．３９ｇはシリカゲル(ＭＳゲルＤ−１５０−６０Ａ、旭硝子株式会社製) ２００ｇを充填した中圧カラム(内径３ｃｍ、 長さ５０ｃｍ)を用い、酢酸エチルで溶出し、有効画分を濃縮乾固し、５．０１ｇの粗抽出物を得た。
得られた粗抽出物５．０１ｇは、Ｄｅｖｅｌｏｓｉｌ ＵＧ−Ｃ１８ １５／３０ (内径５ｃｍ、長さ５０ｃｍ)カラムを用い、アセトニトリル/水 ０．１％蟻酸酸性 ３０〜６０％(４０分)のグラディエント、流速５０ｍｌ/分でクロマトを行った。
有効画分を減圧濃縮し、凍結乾燥により ２−アダマンタンフタルイミド-Ｐ５、Ｐ６ の精製品として各々１．３６ｇ、１．０２ｇを得た。
それぞれの物性値は以下の通りである。
２−アダマンタンフタルイミド-Ｐ５：
ＥＳＩＭＳ ｍ／ｚ：２９８［Ｍ＋Ｈ］＋、２８０［Ｍ＋Ｈ−Ｈ２０］＋
１Ｈ ＮＭＲ(ＤＭＳＯ-d６) δ : ７.８１７(４Ｈ、 s)、 ４.４８(１Ｈ、 ｂｒ．ｓ)、 ４.１３(１Ｈ、 ｂｒ．ｓ)、 ２.６９(１Ｈ、 ｂｒ．ｓ)、 ２.１０(２Ｈ、 ｂｒ．ｄ、 J＝〜１３Ｈz)、 ２.０５(１Ｈ、ｍ)、 １.７８(２Ｈ、 ｂｒ．ｄ、 J＝〜１２Ｈz)、 １.７０(２Ｈ、 ｂｒ．ｄ、 J＝〜１２Ｈz)、 １.６５(２Ｈ、 ｂｒ．ｄ、 J＝〜３Ｈz)、 １.４４(２Ｈ、 ｂｒ．ｄ、 J＝〜１３Ｈz)
１３Ｃ ＮＭＲ(ＤＭＳＯ-ｄ６) δ : １６８.９６、 １３４.２２、 １３１.４３、 １２２.５７、 ６５.４８、 ５９.５０、 ４５.２９、 ４５.１５、 ３１.８６、 ３１.２０、 ２８.６１
２−アダマンタンフタルイミド-Ｐ６：
ＥＳＩＭＳ ｍ／ｚ：２９８［Ｍ＋Ｈ］＋、２８０［Ｍ＋Ｈ−Ｈ２０］＋
１Ｈ ＮＭＲ(ＤＭＳＯ-ｄ６) δ: ７.８１７(４Ｈ、 s)、 ４.６３１(１Ｈ、 d、 J＝３.３Ｈz)、 ４.１７(１Ｈ、 ｂｒ．ｓ)、 ３.６８(１Ｈ、 ｂｒ．ｑ、 J＝〜３Ｈz)、 ２.４３(１Ｈ、 ｂｒ．ｓ)、 ２.３７(１Ｈ、 ｂｒ．ｓ)、 ２.３０５(１Ｈ、 dq、 J＝１３.１、 ３.１Ｈz)、 ２.２２４(１Ｈ、 ｄｑ、 J＝１２.４、 ３.０Ｈz)、 １.９４(２Ｈ、 m)、 １.９０(１Ｈ、 m)、 １.８０(１Ｈ、 ｂｒ．ｑ、 J＝〜３Ｈz)、 １.７８(１Ｈ、 m)、 １.７２(１Ｈ、 ｂｒ．ｑ、 J＝〜３Ｈz)、 １.５４(２Ｈ、 ｂｒ．ｄ、 J＝〜１３Ｈz)
１３Ｃ ＮＭＲ(ＤＭＳＯ-d６) δ : １６８.９１、 １３４.１９、 １３１.４１、 １２２.５４、 ７１.９１、 ６０.２５、 ３６.４２、 ３３.３６、 ３２.７９、 ３１.４１、 ３１.３４、 ２９.８６、 ２９.１１、 ２５.９０
[種培養]
グルコース２．０％、 ソイビーンミール ０．５％、 イーストエクストラクト(Ｄｉｆｃｏ)０．５％、 塩化ナトリウム０．５％、リン酸カリウム０．５％ 水道水（ＰＨ７に調整、希塩酸）の組成の培地１００ｍｌを５００ｍｌ容広口フラスコに分注し、１２１℃、２０分間滅菌した。この培地に Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ｓｏｌａｎｉ（リゾクトニア ソラニ）ＲＦ−９４０２株を寒天斜面培養物より接種し、振幅 ７０mm、毎分１８０回転で、２８℃、３日間培養し、種培養とした。
[生体触媒反応]
グルコース ２.０％、 ソイビーンミール ０.５％、 イーストエクストラクト(Ｄｉｆｃｏ) ０.５％、 塩化ナトリウム ０.５％、 リン酸カリウム ０.５％、ヒドロキシプロピル-β−シクロデキストリン １.４％ 水道水（ＰＨ７に調整、希塩酸）の組成の培地 １００ｍｌを５００ｍｌ容広口フラスコ ３本に分注し、１２１℃、２０分間滅菌した。フラスコ当たり ２−アダマンタンフタルイミド ２０mｇ、４０mｇ、１００mｇをＤＭＳＯ ０.４ｍｌ、０.８ｍｌ、２ｍｌ溶液とし、無菌的に添加した後、種培養物 ４ｍｌずつ接種し、振幅 ７０mm、毎分１８０回転で、２８℃、３日間培養した。逆相ＨＰＬＣ分析の結果、８８.２％の基質をＰ５に変換した。
[抽出]
フラスコ３本分の発酵終了液は、ｎ−ブタノール１５０ｍｌで抽出した。抽出液は、減圧下、濃縮乾固し、０.２５３ｇの粗抽出物を得た。
[単離・精製]
得られた粗抽出物０.２５３ｇは、Ｕｎｉｓｏｎ ＵＳ−Ｃ１８ (内径 ２ｃｍ、長さ１５ｃｍ)カラムを用い、アセトニトリル/水０.１％蟻酸酸性 ３０-９５％(２０分)のグラディエント、流速１５ｍｌ/分でクロマトを行った。
有効画分を減圧濃縮し、凍結乾燥により ２−アダマンタンフタルイミド-Ｐ５の精製品６５.４mｇを得た。
グルコース２．０％、 ソイビーンミール ０．５％、 イーストエクストラクト(Ｄｉｆｃｏ)０．５％、 塩化ナトリウム０．５％、リン酸カリウム０．５％ 水道水（ＰＨ７に調整、希塩酸）の組成の培地１００ｍｌを５００ｍｌ容広口フラスコに分注し、１２１℃、２０分間滅菌した。この培地に Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ｓｏｌａｎｉ（リゾクトニア ソラニ）ＲＦ−９４０２株を寒天斜面培養物より接種し、振幅 ７０mm、毎分１８０回転で、２８℃、３日間培養し、種培養とした。
[生体触媒反応]
グルコース ２.０％、 ソイビーンミール ０.５％、 イーストエクストラクト(Ｄｉｆｃｏ) ０.５％、 塩化ナトリウム ０.５％、 リン酸カリウム ０.５％、ヒドロキシプロピル-β−シクロデキストリン １.４％ 水道水（ＰＨ７に調整、希塩酸）の組成の培地 １００ｍｌを５００ｍｌ容広口フラスコ ３本に分注し、１２１℃、２０分間滅菌した。フラスコ当たり ２−アダマンタンフタルイミド ２０mｇ、４０mｇ、１００mｇをＤＭＳＯ ０.４ｍｌ、０.８ｍｌ、２ｍｌ溶液とし、無菌的に添加した後、種培養物 ４ｍｌずつ接種し、振幅 ７０mm、毎分１８０回転で、２８℃、３日間培養した。逆相ＨＰＬＣ分析の結果、８８.２％の基質をＰ５に変換した。
[抽出]
フラスコ３本分の発酵終了液は、ｎ−ブタノール１５０ｍｌで抽出した。抽出液は、減圧下、濃縮乾固し、０.２５３ｇの粗抽出物を得た。
[単離・精製]
得られた粗抽出物０.２５３ｇは、Ｕｎｉｓｏｎ ＵＳ−Ｃ１８ (内径 ２ｃｍ、長さ１５ｃｍ)カラムを用い、アセトニトリル/水０.１％蟻酸酸性 ３０-９５％(２０分)のグラディエント、流速１５ｍｌ/分でクロマトを行った。
有効画分を減圧濃縮し、凍結乾燥により ２−アダマンタンフタルイミド-Ｐ５の精製品６５.４mｇを得た。
[種培養]
１) グルコース ２.０％、 ソイビーンミール ０.５％、 イーストエクストラクト(Ｄｉｆｃｏ) ０.５％、 塩化ナトリウム ０.５％、リン酸カリウム ０.５％ 水道水（ＰＨ７に調整、希塩酸）の組成の培地１００ｍｌを５００ｍｌ容広口フラスコに分注し、１２１℃、２０分間滅菌した。この培地にボーベリア・バッシアーナＡＴＣＣ−７１５９株を寒天斜面培養物より胞子懸濁液とし接種し、振幅７０mm、毎分１８０回転で、２８℃、２日間培養し、種培養とした。
２) グルコース １０ｇ、Ｃ．Ｓ．Ｌ ２０ｇ 水道水 １L (ＰＨ ７.０に調整、希苛性ソーダ) の組成の培地１００ｍｌを５００ｍｌ容広口フラスコに分注し、１２１℃、２０分間滅菌した。この培地にボーベリア・バッシアーナＡＴＣＣ−７１５９株を寒天斜面培養物より胞子懸濁液とし接種し、振幅７０mm、毎分１８０回転で、２８℃、２日間培養し、種培養とした。
[生体触媒反応]
グルコース ２.０％、 ソイビーンミール ０.５％、 イーストエクストラクト(Ｄｉｆｃｏ) ０.５％、 塩化ナトリウム ０.５％、リン酸カリウム ０.５％ 水道水（ＰＨ７に調整、希塩酸）の組成の培地 ５０ｍｌを含む５００ｍｌ容広口フラスコ １本とグルコース １.０％、Ｃ．Ｓ．Ｌ ２.０％ 水道水 (ＰＨ ７.０に調整、希苛性ソーダ) の組成の培地 ５０ｍｌを５００ｍｌ容広口フラスコ１本に分注し、１２１℃、２０分間滅菌した。フラスコ当たり ２−アダマンタンフタルイミド １０mｇをＤＭＳＯ ０.２ｍｌ溶液とし、無菌的に添加した後、種培養物 ５ｍｌずつ接種し、振幅 ７０mm、毎分１８０回転で、２８℃、３日間培養した。逆相ＨＰＬＣ分析の結果、２３.６ ％の基質をＰ５に、１.１ ％ の基質をＰ６ に変換した。
[抽出]
フラスコ２本分の発酵終了液は、ｎ-ブタノール１００ｍｌで抽出した。抽出液は、減圧下、濃縮乾固し、０．０９７ｇの粗抽出物を得た。
[単離・精製]
得られた粗抽出物０．０９７ｇはＵｎｉｓｏｎ ＵＳ−Ｃ１８ (内径２ｃｍ、長さ１５ｃｍ)カラムを用い、アセトニトリル/水 ２０−９５％（２０分）のグラディエント、流速１５ｍｌ/分でクロマトを行った。有効画分を減圧濃縮し、凍結乾燥により ２−アダマンタンフタルイミド-Ｐ５、Ｐ６ の精製品として各々２．４mｇ、０．１mｇを得た。
１) グルコース ２.０％、 ソイビーンミール ０.５％、 イーストエクストラクト(Ｄｉｆｃｏ) ０.５％、 塩化ナトリウム ０.５％、リン酸カリウム ０.５％ 水道水（ＰＨ７に調整、希塩酸）の組成の培地１００ｍｌを５００ｍｌ容広口フラスコに分注し、１２１℃、２０分間滅菌した。この培地にボーベリア・バッシアーナＡＴＣＣ−７１５９株を寒天斜面培養物より胞子懸濁液とし接種し、振幅７０mm、毎分１８０回転で、２８℃、２日間培養し、種培養とした。
２) グルコース １０ｇ、Ｃ．Ｓ．Ｌ ２０ｇ 水道水 １L (ＰＨ ７.０に調整、希苛性ソーダ) の組成の培地１００ｍｌを５００ｍｌ容広口フラスコに分注し、１２１℃、２０分間滅菌した。この培地にボーベリア・バッシアーナＡＴＣＣ−７１５９株を寒天斜面培養物より胞子懸濁液とし接種し、振幅７０mm、毎分１８０回転で、２８℃、２日間培養し、種培養とした。
[生体触媒反応]
グルコース ２.０％、 ソイビーンミール ０.５％、 イーストエクストラクト(Ｄｉｆｃｏ) ０.５％、 塩化ナトリウム ０.５％、リン酸カリウム ０.５％ 水道水（ＰＨ７に調整、希塩酸）の組成の培地 ５０ｍｌを含む５００ｍｌ容広口フラスコ １本とグルコース １.０％、Ｃ．Ｓ．Ｌ ２.０％ 水道水 (ＰＨ ７.０に調整、希苛性ソーダ) の組成の培地 ５０ｍｌを５００ｍｌ容広口フラスコ１本に分注し、１２１℃、２０分間滅菌した。フラスコ当たり ２−アダマンタンフタルイミド １０mｇをＤＭＳＯ ０.２ｍｌ溶液とし、無菌的に添加した後、種培養物 ５ｍｌずつ接種し、振幅 ７０mm、毎分１８０回転で、２８℃、３日間培養した。逆相ＨＰＬＣ分析の結果、２３.６ ％の基質をＰ５に、１.１ ％ の基質をＰ６ に変換した。
[抽出]
フラスコ２本分の発酵終了液は、ｎ-ブタノール１００ｍｌで抽出した。抽出液は、減圧下、濃縮乾固し、０．０９７ｇの粗抽出物を得た。
[単離・精製]
得られた粗抽出物０．０９７ｇはＵｎｉｓｏｎ ＵＳ−Ｃ１８ (内径２ｃｍ、長さ１５ｃｍ)カラムを用い、アセトニトリル/水 ２０−９５％（２０分）のグラディエント、流速１５ｍｌ/分でクロマトを行った。有効画分を減圧濃縮し、凍結乾燥により ２−アダマンタンフタルイミド-Ｐ５、Ｐ６ の精製品として各々２．４mｇ、０．１mｇを得た。
化合物1(2.0g)のエタノール溶液(20ml)にメチルヒドラジン(776mg)を加え、24時間加熱還流を行った。反応終了後、溶媒を留去し、残渣を2N塩酸水溶液(30ml)で希釈した。水層を酢酸エチルで洗浄(50ml×2)した後に、減圧下、1/3程度に濃縮した。析出した結晶を濾取し、イソプロピルアルコールで洗浄した。目的物2(890mg)を無色結晶として得た。
NMR(d6-DMSO); 1.33-1.42(m,2H), 1.58-1.72(m,6H), 1.85-1.95(m,2H), 1.98-2.05(m,1H), 2.06-2.14(m,2H), 3.18-3.28(m,1H), 8.10-8.20(br, 3H).
化合物３(150mg)のジメチルホルムアミド溶液（ＤＭＦ）(5ml)に、窒素雰囲気下、モノヒドロキシ−２−アダマンタナミン(140mg)、1-ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢＴ）(31mg)、1-(3-ジメチルアミノプロピル)-3-エチルカルボジイミド塩酸塩（ＷＳＣ）(174mg)、トリエチルアミン（ＴＥＡ）(180μl)を加え、室温で14時間攪拌した。反応終了後、2N塩酸水溶液(30ml)を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水の順に洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を留去し、残渣をシリカゲルクロマトグラフィーで精製し、化合物４(226mg)を得た。
NMR:(CDCl3);1.06(d,J=6.6Hz,6H),1.53-2.20(m,14H),3.72(s,3H),3.98(d,J=6.6Hz,2H),6.25-6.30(m,1H),7.71(s,1H)
機能性樹脂や医薬品の中間体として有用であるＮ−（モノヒドロキシ−２−アダマンチル）−フタルイミド誘導体の安価で高収率の製造方法として利用することができる。
Claims (14)
- 糸状菌またはその抽出物を用いて、Ｎ−（２−アダマンチル）−フタルイミド誘導体を水酸化することを特徴とする、Ｎ−（モノヒドロキシ−２−アダマンチル）−フタルイミド誘導体を生産する方法。
- 糸状菌がナカタエア属（Ｎａｋａｔａｅａ）、リゾクトニア属（Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ）、カエトミウム属（Ｃｈａｅｔｏｍｉｕｍ）の群から選択される、請求項１記載の方法。
- 糸状菌がナカタエア・シグモイデア（Ｎａｋａｔａｅａ ｓｉｇｍｏｉｄｅａ）リゾクトニア・ソラニ（Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ｓｏｌａｎｉ）またはカエトミウム・コクリオデス（Ｃｈａｅｔｏｍｉｕｍ ｃｏｃｈｌｉｏｄｅｓ）である、請求項２記載の方法。
- 糸状菌により行われる、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
- 糸状菌の抽出物により行われ、抽出物が水酸化酵素を含有する、請求項１記載の方法。
- 前記Ｎ−（２−アダマンチル）−フタルイミド誘導体が以下の式で表わされる化合物である請求項１記載の方法。
- 前記Ｎ−（モノヒドロキシ−２−アダマンチル）−フタルイミド誘導体が以下のいずれかの式で表わされる化合物である請求項１記載の方法。
- 糸状菌を培地中で培養する工程、及び培養液から前記Ｎ−（モノヒドロキシ−２−アダマンチル）−フタルイミド誘導体を分離する工程を含む、請求項１記載の方法。
- Ｎ−（モノヒドロキシ−２−アダマンチル）−フタルイミド誘導体を生産する能力を有するナカタエア属（Ｎａｋａｔａｅａ）、リゾクトニア属（Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ）、カエトミウム属（Ｃｈａｅｔｏｍｉｕｍ）のいずれかの属に属する微生物の菌体。
- ナカタエア・シグモイデアＲＦ−９４７５株（ＦＥＲＭ ＡＢＰ−１０７９１）、リゾクトニア・ソラニＲＦ−９４０２株（ＦＥＲＭ ＡＢＰ−１０７９０）またはカエトミウム・コクリオデスＲＦ−５７３３株（ＦＥＲＭ ＡＢＰ−１０７８９）のいずれかの株。
- 以下の式で表される、いずれかの化合物。
- ナカタエア属（Ｎａｋａｔａｅａ）、リゾクトニア属（Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ）、カエトミウム属（Ｃｈａｅｔｏｍｉｕｍ）のいずれかの属に属する微生物の菌またはその抽出物により、２−アダマンタナミンのアミノ保護体からモノヒドロキシ−２−アダマンタナミンのアミノ保護体を生産する方法。
- 請求項１〜８および１２のいずれかに記載の方法により得られた、Ｎ−（モノヒドロキシ−２−アダマンチル）−フタルイミド誘導体を脱保護することを特徴とする、化合物（Ｉ）：
で示される化合物の製造方法。 - 請求項１３記載の方法により得られた式（Ｉ）で示される化合物を、
式（ＩＩ）：Ａ−Ｒ１−Ｒ２−Ｒ３−Ｘ
（式中、Ａは置換されていてもよい環式炭化水素基または置換されていてもよい複素環式基であり、Ｒ１は単結合、−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｏ−または−ＮＲ４−であり、Ｒ２は単結合または置換されていてもよいアルキレンであり、Ｒ３は単結合または−Ｃ（＝Ｏ）−であり、Ｘは水酸基、ハロゲンまたは水酸基から導かれる脱離基であり、Ｒ４は水素または置換されていてもよいアルキルである）で示される化合物と反応させることを特徴とする、式（ＩＩＩ）：
で示される化合物の製造方法。
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2006096279 | 2006-03-31 | ||
| JP2006096279 | 2006-03-31 | ||
| PCT/JP2007/056542 WO2007114125A1 (ja) | 2006-03-31 | 2007-03-28 | 微生物によるアダマンタン水酸化体の製造方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPWO2007114125A1 true JPWO2007114125A1 (ja) | 2009-08-13 |
Family
ID=38563394
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2008508544A Pending JPWO2007114125A1 (ja) | 2006-03-31 | 2007-03-28 | 微生物によるアダマンタン水酸化体の製造方法 |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPWO2007114125A1 (ja) |
| TW (1) | TW200808970A (ja) |
| WO (1) | WO2007114125A1 (ja) |
Families Citing this family (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102659659B (zh) | 2005-11-21 | 2014-07-23 | 盐野义制药株式会社 | 具有I型11β羟基类固醇脱氢酶抑制活性的杂环化合物 |
| PL2163543T3 (pl) * | 2007-05-18 | 2015-06-30 | Shionogi & Co | Heterocykliczna pochodna zawierająca azot o aktywności hamującej dehydrogenazę 11-beta-hydroksysteroidową typu I |
| JP5550041B2 (ja) * | 2007-09-27 | 2014-07-16 | 塩野義製薬株式会社 | チトクロームｐ４５０を用いたアダマンタン水酸化体の製造方法 |
| US8507493B2 (en) | 2009-04-20 | 2013-08-13 | Abbvie Inc. | Amide and amidine derivatives and uses thereof |
| JP5686413B2 (ja) | 2009-12-22 | 2015-03-18 | 塩野義製薬株式会社 | アダマンタンアミン誘導体 |
| CN103209957A (zh) | 2010-08-09 | 2013-07-17 | 盐野义制药株式会社 | 氨基金刚烷氨基甲酸酯衍生物的制备方法 |
| WO2012124781A1 (ja) | 2011-03-17 | 2012-09-20 | 塩野義製薬株式会社 | ピラゾールカルボン酸誘導体の製造方法 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2001017193A (ja) * | 1999-07-08 | 2001-01-23 | Sumitomo Chem Co Ltd | モノヒドロキシアダマンタンエステル類の製造方法 |
| JP2001017194A (ja) * | 1999-07-08 | 2001-01-23 | Sumitomo Chem Co Ltd | モノヒドロキシアダマンタン誘導体の製造方法 |
| WO2004056744A1 (en) * | 2002-12-23 | 2004-07-08 | Janssen Pharmaceutica N.V. | Adamantyl acetamides as hydroxysteroid dehydrogenase inhibitors |
| JP2005229859A (ja) * | 2004-02-18 | 2005-09-02 | Daicel Chem Ind Ltd | アダマンタノールの製造方法 |
-
2007
- 2007-03-28 WO PCT/JP2007/056542 patent/WO2007114125A1/ja active Application Filing
- 2007-03-28 JP JP2008508544A patent/JPWO2007114125A1/ja active Pending
- 2007-03-30 TW TW096111271A patent/TW200808970A/zh unknown
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2001017193A (ja) * | 1999-07-08 | 2001-01-23 | Sumitomo Chem Co Ltd | モノヒドロキシアダマンタンエステル類の製造方法 |
| JP2001017194A (ja) * | 1999-07-08 | 2001-01-23 | Sumitomo Chem Co Ltd | モノヒドロキシアダマンタン誘導体の製造方法 |
| WO2004056744A1 (en) * | 2002-12-23 | 2004-07-08 | Janssen Pharmaceutica N.V. | Adamantyl acetamides as hydroxysteroid dehydrogenase inhibitors |
| JP2005229859A (ja) * | 2004-02-18 | 2005-09-02 | Daicel Chem Ind Ltd | アダマンタノールの製造方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| TW200808970A (en) | 2008-02-16 |
| WO2007114125A1 (ja) | 2007-10-11 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JPWO2007114125A1 (ja) | 微生物によるアダマンタン水酸化体の製造方法 | |
| Song et al. | Purification and characterization of prodigiosin produced by integrated bioreactor from Serratia sp. KH-95 | |
| Kanazawa et al. | Cylindramide: Cytotoxic tetramic acid lactam from the marine sponge Halichondria cylindrata Tanita & Hoshino | |
| TWI240753B (en) | Process for the preparation of dihydroxy esters and derivatives thereof | |
| US8614080B2 (en) | Method for producing hydroxylated adamantane using cytochrome P450 | |
| US10294211B2 (en) | Process for isolating and purifying ambrox | |
| WO2010024444A1 (ja) | 光学活性なアミン誘導体の製造方法 | |
| JP2013067649A (ja) | ヒドロキシアダマンタンアミンの製造方法 | |
| Wei et al. | Colletotrilactam A–D, novel lactams from Colletotrichum gloeosporioides GT-7, a fungal endophyte of Uncaria rhynchophylla | |
| CN1914198A (zh) | 大环内酯类化合物的稳定化方法 | |
| Mihovilovic et al. | Biooxidation of ketones with a cyclobutanone structural motif by recombinant whole-cells expressing 4-hydroxyacetophenone monooxygenase | |
| JP2014226048A (ja) | 芳香族化合物の製造方法 | |
| Cutignano et al. | Polypropionates from Bulla occidentalis: Chemical markers and trophic relationships in cephalaspidean molluscs | |
| MX2012007718A (es) | Aumento de la produccion de metionina mediante la sobreexpresion de succinato deshidrogenasa. | |
| DE102006039189B4 (de) | Enantioselektive Darstellung von aliphatischen azyklischen Estern und Ketonen | |
| US9862978B2 (en) | Method for preparing (2RS)-amino-(3S)-hydroxy-butyric acid and its derivatives | |
| CN114621986B (zh) | 一种生物合成紫杉醇侧链的方法 | |
| PL435581A1 (pl) | Sposób wytwarzania 3'-hydroksy-5,7-dimetoksyflawonu | |
| PL438510A1 (pl) | Sposób wytwarzania 5,7,4'-trihydroksy-8-metoksyflawonu | |
| PL435580A1 (pl) | Sposób wytwarzania 3'4'-dihydroksy-5,7-dimetoksyflawonu | |
| JP4898129B2 (ja) | 光学活性ビニルアルコール類の製造方法 | |
| FR2646669A1 (fr) | Procede de separation enantiomeriquement selective des esters des acides halogeno-2 propioniques | |
| PL438509A1 (pl) | Sposób wytwarzania 5,7,4'-trihydroksy-8-metoksyflawonu | |
| PL435578A1 (pl) | Sposób wytwarzania 3'4'-dihydroksy-5,7-dimetoksyflawonu | |
| PL435579A1 (pl) | Sposób wytwarzania 3'-hydroksy-5,7-dimetoksyflawonu |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20091210 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20120327 |
|
| A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20120807 |