JPWO2006085655A1

JPWO2006085655A1 - 軟膏剤

Info

Publication number: JPWO2006085655A1
Application number: JP2007502675A
Authority: JP
Inventors: 昭彦神谷; 淑恵篠原; 貴幸佐藤; 香西崎; 明子三輪; 貴敏飯田
Original assignee: Taisho Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Taisho Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2005-02-14
Filing date: 2006-02-14
Publication date: 2008-06-26
Also published as: CA2597537A1; CN101119730A; US7888392B2; WO2006085655A1; EP1852120A1; US20080167379A1

Abstract

式(I)[式中Ｒ1は式-(CH2)4-S-CH2-CO2Hで示される基、式-(CH2)4-S-CH2-CO2CH3で示される基、式-(CH2)4-C≡C-CO2Hで示される基、式-CH2-S-(CH2)2-S-CH2-CO2Hで示される基または式-CH2-S-(CH2)4-CO2Hで示される基のいずれかの基を示す。]で示される化合物、および油脂性基剤からなる軟膏剤は、アトピー症状に有効な化合物を配合した軟膏剤であって、皮膚刺激性が低く、保存安定性に優れた軟膏剤なので、アトピーなどの痒みに有効な医薬品として利用可能である。

Description

本発明は、皮膚刺激性が低く、保存安定性に優れた、止痒効果を有する薬剤を含有する軟膏剤に関する。

近年、アトピーをはじめとするアレルギー疾患の患者増大に伴い、優れた効果を有する薬剤が求められている。

従来、アトピーの治療剤として、ステロイド剤、免疫抑制剤などが使用されている。しかし、それらの薬剤は効果が十分でなく、また副作用などの点からも満足できるものではなかった。

そのような中、アトピーの痒みに対して優れた効果を有する式(I)

[式中Ｒ¹は式
-(CH₂)₄-S-CH₂-CO₂H
で示される基、式
-(CH₂)₄-S-CH₂-CO₂CH₃
で示される基、式
-(CH₂)₄-C≡C-CO₂H
で示される基、式
-CH₂-S-(CH₂)₂-S-CH₂-CO₂H
で示される基または式
-CH₂-S-(CH₂)₄-CO₂H
で示される基のいずれかの基を示す。]
で示される化合物などを有効成分とする薬剤が開示されている（特許文献１）。

外用剤には軟膏、クリーム、ローション、テープ等多くの剤型があり、皮膚の状態により適切な剤型と基剤の選択が必要である。アトピー性皮膚炎に適用される外用剤の場合、患者が元々乾燥肌であることや、掻破等により湿潤した部位にも安心して使用できるという点から軟膏が選ばれる場合が多い。

国際公開公報ＷＯ２００４／０１４３９４

本発明者らは、アトピーの痒みに対して優れた効果を有する薬剤を提供するため、式(I)で示される化合物を軟膏剤とすることを試みた。

軟膏を製する場合、基剤の役割である主薬配合の容易さや経皮吸収性の問題により第一選択としては親水性基剤の使用が考えられるが、親水性基剤は界面活性剤や保存料を必要とすることが多く、それが皮膚刺激性の原因となる場合はアトピー性皮膚炎への適用が制限される可能性がある。また、本願発明の有効成分は、親水性基剤を用いた軟膏では、十分な保存安定性を得ることができなかった。

更に、油脂性基剤においては、式(I)で示される化合物の溶解度が不十分なことから、式(I)で示される化合物を製剤中に溶解することが困難であった。

本発明は、優れた効果を持つ式(I)で示される化合物を安定に配合した軟膏剤を提供することを目的とする。

本発明者らは、上記課題を解決するために種々検討を重ねた結果、式(I)で示される化合物が溶解しない油脂性基剤中に、式(I)で示される化合物を固体状態または油状で分散させることによって、式(I)で示される化合物の保存安定性に優れ、皮膚刺激性が低い油脂性軟膏剤となることを見出した。さらに、得られた軟膏剤は、薬効成分が固体状態または油状で分散しているにもかかわらず、薬効成分の基剤からの放出性にも優れた軟膏剤であることを見出し本発明を完成した。

すなわち本発明は、式(I)

[式中Ｒ¹は式
-(CH₂)₄-S-CH₂-CO₂H
で示される基、式
-(CH₂)₄-S-CH₂-CO₂CH₃
で示される基、式
-(CH₂)₄-C≡C-CO₂H
で示される基、式
-CH₂-S-(CH₂)₂-S-CH₂-CO₂H
で示される基または式
-CH₂-S-(CH₂)₄-CO₂H
で示される基のいずれかの基を示す。]
で示される化合物、および油脂性基剤からなる軟膏剤である。

本発明の軟膏剤は、式(I)で示される化合物の保存安定性に優れ、皮膚刺激性が低いうえ、さらに薬物放出性、使用感にも優れていることがわかった。

軟膏剤を半透膜に充填し、リン酸塩緩衝液中で３７℃にて振とうしたときのｐH７．４の軟膏剤からの薬物放出率を示した図であり、縦軸に薬物放出率、横軸に時間を示した。ＮＣ／Ｎｇａマウスに対して本軟膏剤を塗布したときの掻破行動の回数（平均値±ＳＥ、ｎ＝８）を示した図であり、０．００１％軟膏では塗布後の掻破回数が有意に（Ｐ＜０．０５）減少したことを示す。摩擦によって皮膚バリアーを破壊したＢＡＬＢ／ｃ系マウスに対して、本軟膏剤を塗布したときの経皮水分蒸散量（ＴＥＷＬ、平均値±ＳＥ、ｎ＝８）を示した図であり、基剤のみを塗布した場合に比較して、０．００１％軟膏を塗布した場合はＴＥＷＬが有意に（Ｐ＜０．０５）減少したことを示す。

本発明で有効成分として配合する式(I)で示される化合物群は、何れも優れた効果を有し、良好に本発明の軟膏剤として製することができるが、特に式(II)

で示される化合物は、その安定性、皮膚刺激、薬物放出性、使用感に優れていることから特に好ましい。

一般的に薬物は低濃度になると安定性、均一性が低下することが多い。しかし、本発明では極めて低濃度であっても安定性、均一性、薬物放出性に優れた製剤の提供が可能である。本発明の有効成分は、軟膏中の低濃度の範囲でも薬効が発現するため、薬効が発現する量の範囲であれば本発明を適用することができるが、軟膏剤全体の０.０００００１％〜０．１％の範囲が好ましい。さらに好ましい範囲は０.００００１％〜０.０１％であり、特に好ましい範囲は０.０００１％〜０.００１％である。

本発明で使用する油脂性基剤は、油性軟膏に使用する通常のものを用いることができるが、炭化水素類、脂肪酸エステル類または動植物性油から選ばれるものが好ましく、白色ワセリン、ゲル化炭化水素、軽質流動パラフィン、流動パラフィン、アジピン酸ジイソプロピル、パルミチン酸イソプロピル、ミリスチン酸イソプロピル、ミリスチン酸オクチルドデシルおよび中鎖脂肪酸トリグリセリドからなる群から選ばれる1種または２種以上がさらに好ましい。

これらの油脂性基剤の中でも、飽和炭化水素類を含む組成物が好ましく、特に白色ワセリン、白色ワセリンと軽質流動パラフィンとの組み合わせ、白色ワセリンと流動パラフィンとの組み合わせ、白色ワセリンとパラフィンとの組み合わせ、白色ワセリンとスクワランとの組み合わせ、白色ワセリンとメチルポリシロキサンとの組み合わせ、またはゲル化炭化水素がさらに好ましい。油脂性基剤として白色ワセリンと軽質流動パラフィン、流動パラフィン、パラフィン、スクワランもしくはメチルポリシロキサンとを組み合わせて用いる場合、軽質流動パラフィン、流動パラフィン、パラフィン、スクワランもしくはメチルポリシロキサンの配合量は軟膏剤全体の１０％以下の量が好ましい。

本発明の油脂性基剤は、不純物を除去することによって精製されたものを用いると、成分の安定性を確保する点で好ましい。特にカラムクロマト法などによりシリカゲルに吸着される不純物を除去することによって精製した白色ワセリンが好ましい。

本発明の軟膏剤は、油脂性基剤中に式(I)の化合物を固体状態または油状で分散させることに特徴があり、保存安定性に優れた軟膏剤とすることができる。

ここで「油状で分散」とは、式(I)の化合物が油脂性基剤中で、結晶ではなく油状で分散している状態を示す。この状態は顕微鏡で観察すると確認できる。

この様な軟膏剤の製造法は、以下の通りである。

式(I)の化合物の分散媒として、白色ワセリン、軽質流動パラフィン、流動パラフィン、パラフィン、スクワラン、メチルポリシロキサン、中鎖脂肪酸トリグリセリド、ミリスチン酸イソプロピル、パルミチン酸イソプロピルなどを用い、必要があれば加温して添加し、混合分散体を得る。得られた混合分散体を油脂性基剤に添加して攪拌混合し、均一に分散させる。このとき、油脂性基剤の温度を式(I)で示される化合物の融点より低く、かつ油脂性基剤の融点より高い範囲に保持した状態で混合分散体を添加することが望ましい。特に式(II)で示される化合物を使用した場合は、好ましくは４５℃〜５５℃に保持する。次に、必要があれば任意成分を添加して、室温まで冷却しながら攪拌混合することにより、成分が均一に分散した軟膏剤を得ることができる。なお、分散媒を別にせずに油脂性基剤に式(I)で示される化合物を分散させても製造することができる。

本発明の軟膏剤は、式(I)に示される化合物と油脂性基剤に加え、本発明の効果を損なわない範囲で、ブチルヒドロキシアニソール、ジブチルヒドロキシトルエンなどの酸化防止剤、EDTA-２Naなどの安定化剤などを適宜配合することができる。

本発明の軟膏製剤にすることによって、皮膚刺激性が低く化合物の保存安定性が良好な製剤とすることができただけでなく、薬効成分が油脂性基剤中で固体状態または油状で分散していても、溶解型の製剤と同等の薬物放出性が示され、薬効の発現も確認された。

実施例
以下、実施例および試験例により本発明をさらに詳しく説明する。

白色ワセリン（パーフェクタ，クロンプト製）９０ｇを水浴上で加温して溶かし、約５０℃に保ち、これにあらかじめ式(II)で示される化合物１０ｍｇを中鎖脂肪酸トリグリセリド１０ｇに加え均一に分散させたものを均一に混合した。徐々に冷却し、固まるまでよくかき混ぜて軟膏剤を製した。

実施例１の中鎖脂肪酸トリグリセリドをミリスチン酸イソプロピルに替えて、同様の方法で軟膏剤を製した。

実施例１の中鎖脂肪酸トリグリセリドをパルミチン酸イソプロピルに替えて、同様の方法で軟膏剤を製した。

白色ワセリン９０ｇを水浴上で加温して溶かし、約５０℃に保ち、これにあらかじめ式(II)で示される化合物１０ｍｇを白色ワセリン１０ｇに加え均一に分散させたものを均一に混合した。徐々に冷却し、固まるまでよくかき混ぜて軟膏剤を製した。

白色ワセリン２００ｇを８０℃に加温し、シリカゲル５０ｇを充填したカラムにより精製した。実施例４の白色ワセリンをこの精製した白色ワセリンに替えて、実施例４と同様の方法で軟膏剤を製した。

実施例４の白色ワセリンを市販されている水素添加精製白色ワセリン（サンホワイトＰ−１５０，日興リカ製）に替えて、同様の方法で軟膏剤を製した。

実施例４の白色ワセリンを市販されている精製白色ワセリン（クロラータムＶ，クローダジャパン製）
に替えて、同様の方法で軟膏剤を製した。

市販されている精製白色ワセリン（クロラータムＶ，クローダジャパン製）８５ｇおよび固形パラフィン５ｇを水浴上で加温して溶かし、約５０℃に保ち、これにあらかじめ式(II)で示される化合物１０ｍｇを精製白色ワセリン１０ｇに加え均一に分散させたものを均一に混合し、徐々に冷却し、固まるまでよくかき混ぜて軟膏剤を製した。

市販されている精製白色ワセリン（クロラータムＶ，クローダジャパン製）８５ｇ及び固形パラフィン５ｇを水浴上で加温して溶かし、約５０℃に保ち、これにあらかじめ式(II)で示される化合物１０ｍｇを流動パラフィン１０ｇに加え均一にしたものをかき混ぜて、冷却し、固まるまでよくかき混ぜて軟膏剤を製した。

比較例１
白色ワセリン２５ｇ、ステアリルアルコール２０ｇ、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油６０４０ｇ及びモノステアリン酸グリセリン１ｇを水浴上で加温して溶かした。攪拌しながら、約７５℃に保ち、これにあらかじめ式(II)で示される化合物１０ｍｇ、パラオキシ安息香酸メチル０．０１ｇおよびパラオキシ安息香酸プロピル０．０１ｇをプロピレングリコール１２ｇに溶かし精製水３７．８ｇに加えて約７５℃に加温した液を加え、かき混ぜて乳液とした後、冷却し、固まるまでよくかき混ぜて軟膏剤を製した。

比較例２
マクロゴール４０００５０ｇ及びマクロゴール４００５０ｇを水浴上で６５℃に加温して溶かした後、式(II)で示される化合物１０ｍｇを加えて溶かし、室温に冷却し、固まるまでよくかき混ぜて軟膏剤を製した。

比較例３
白色ワセリン９０ｇを水浴上で加温して溶かし、約５０℃に保ち、ここにあらかじめ式(II)で示される化合物１０ｍｇを１，３−ブチレングリコール１０ｇに溶かして約５０℃に加温した液を加え、ホモミキサーを用いて均一に分散させ、室温に冷却し、固まるまでよくかき混ぜて軟膏剤を製した。

比較例４
比較例３の１，３−ブチレングリコールをプロピレングリコール１０ｇに替えて、比較例３と同様にして軟膏剤を得た。

比較例５
比較例３の１，３−ブチレングリコールをグリセリン１０ｇに替えて、比較例３と同様にして軟膏剤を得た。

試験例１
式(II)で示される化合物の製剤中における保存安定性を確認するため、５０℃における２週間保存後の対開始時含量（％）を求めた。結果を表１に示した。

表から明らかな通り、親水性基剤を用いた比較例１および比較例２の軟膏剤ではそれぞれ７７．０％、２３．９％、油脂性基剤を使用しているが式(II)で示される化合物が基剤に溶解された状態で存在する比較例３では３８．２％と低い値であった。一方、実施例１、実施例４及び実施例７においては、それぞれ９２．１％、９８．１％、及び９８．３％と高い値であり、式(II)で示される化合物を油脂性基剤に油状または固体状態で分散させることによって、保存安定性が改善されることが確認された。

試験例２
式(II)で示される化合物を油脂性基剤に油状または固体状態で分散させた軟膏剤の保存安定性を更に精査する為、実施例４、実施例５、実施例６及び実施例７の軟膏剤を製し、５０℃における４週間保存後の含量及び分解物であるＳ−オキサイド体の含量（％）を求めた。結果を表２に示した。

含量が大きく低下したものはなかったが、本軟膏剤の保存安定性の点で問題となる分解物Ｓ−オキサイド体は、精製した白色ワセリンを用いた実施例５及び７の軟膏剤において増加量が少なかった。従って、飽和炭化水素類を精製することによって、式(II)で示される化合物の保存安定性がさらに向上することが確認された。

試験例３
実施例７及び比較例３に示した軟膏剤からの薬物放出性を評価するため、製剤を半透膜中に充填してpH７．４のリン酸塩緩衝液中で３７℃にて振とうした。結果を図1に示した。図から明らかな通り、式(II)で示される化合物は徐々に緩衝液中に放出され、実施例７の軟膏剤からの放出率は比較例３の軟膏剤と同等かそれ以上であった。このことから、薬効成分が油脂性基剤中で固体状態または油状で分散していても、薬物は溶解型の製剤と同等以上に放出されることがわかった。

試験例４
文献（特開2005-247843、特開2005-247842）に記載の方法にしたがって、式（II）に示される化合物の自発掻破行動、経皮水分蒸散量の測定を行った。実施例４と同様にして式（II）に示される化合物が0.0001％および0.001％の濃度になるように調製した軟膏剤を用いて試験した結果、止痒作用を示す掻破行動の減少（図２）や、皮膚バリアー修復作用を示す経皮水分蒸散量の低減が認められた（図３）。このことから、本発明の製剤は十分な薬効が発揮されることが示された。

市販されている精製白色ワセリン（クロラータムＶ，クローダジャパン製）９５ｇを水浴上で加温して溶かし、約５０℃に保ち、これにあらかじめ式(II)で示される化合物１０ｍｇを軽質流動パラフィン５ｇに加え均一に分散させたものを均一に混合し、徐々に冷却し、固まるまでよくかき混ぜて軟膏剤を製した。

市販されている精製白色ワセリン（クロラータムＶ，クローダジャパン製）９２ｇ及び固形パラフィン３ｇを水浴上で加温して溶かし、約５０℃に保ち、これにあらかじめ式(II)で示される化合物１０ｍｇを軽質流動パラフィン５ｇに加え均一にしたものをかき混ぜて、冷却し、固まるまでよくかき混ぜて軟膏剤を製した。

市販されている精製白色ワセリン（クロラータムＶ，クローダジャパン製）９５ｇを水浴上で加温して溶かし、約５０℃に保ち、これにあらかじめ式(II)で示される化合物１０ｍｇを流動パラフィン５ｇに加え均一に分散させたものを均一に混合し、徐々に冷却し、固まるまでよくかき混ぜて軟膏剤を製した。

市販されている精製白色ワセリン（クロラータムＶ，クローダジャパン製）９５ｇを水浴上で加温して溶かし、約５０℃に保ち、これにあらかじめ式(II)で示される化合物１０ｍｇをスクワラン５ｇに加え均一に分散させたものを均一に混合し、徐々に冷却し、固まるまでよくかき混ぜて軟膏剤を製した。

市販されている精製白色ワセリン（クロラータムＶ，クローダジャパン製）９２ｇ及び固形パラフィン３ｇを水浴上で加温して溶かし、約５０℃に保ち、これにあらかじめ式(II)で示される化合物１０ｍｇをメチルポリシロキサン５ｇに加え均一にしたものをかき混ぜて、冷却し、固まるまでよくかき混ぜて軟膏剤を製した。

市販されている精製白色ワセリン（クロラータムＶ，クローダジャパン製）９５ｇを水浴上で加温して溶かし、約５０℃に保ち、これにあらかじめ式(II)で示される化合物１０ｍｇを精製オリーブスクワラン５ｇに加え均一に分散させたものを均一に混合し、徐々に冷却し、固まるまでよくかき混ぜて軟膏剤を製した。

市販されている精製白色ワセリン（クロラータムＶ，クローダジャパン製）９５ｇ及び固形パラフィン３ｇを水浴上で加温して溶かし、約５０℃に保ち、これにあらかじめ式(II)で示される化合物１０ｍｇをスクワラン５ｇに加え均一に分散させたものを均一に混合し、徐々に冷却し、固まるまでよくかき混ぜて軟膏剤を製した。

市販されている精製白色ワセリン（クロラータムＶ，クローダジャパン製）９２ｇを水浴上で加温して溶かし、約５０℃に保ち、これにあらかじめ式(II)で示される化合物１０ｍｇをメチルポリシロキサン５ｇに加え均一にしたものをかき混ぜて、冷却し、固まるまでよくかき混ぜて軟膏剤を製した。

試験例５
式(II)で示される化合物の製剤中における保存安定性を確認するため、４０℃７５％ＲＨにおける保存後の対開始時含量（％）を求めた。結果を表３に示した。

表から明らかな通り、実施例の各サンプルは、それぞれ高い安定性を示した。このことから、式(II)で示される化合物を油脂性基剤に固体状態で分散させることによって、保存安定性が改善されることが確認された。

実施例１９〜２２
市販されている精製白色ワセリン（クロラータムＶ，クローダジャパン製）９２ｇ及び固形パラフィン３ｇを水浴上で加温して溶かし、約５０℃に保ち、これにあらかじめ式(II)で示される化合物１０ｍｇを表４の添加剤及び添加量を加え均一にしたものをかき混ぜて、冷却し、固まるまでよくかき混ぜて軟膏剤を製した。

試験例６
式(II)で示される化合物の製剤中における保存安定性を確認するため、４０℃７５％ＲＨ及び５０℃における保存後の対開始時含量（％）を求めた。結果を表４に示した。

表から明らかな通り、式(II)で示される化合物を油脂性基剤に溶解させるときのそれぞれの添加剤で高い保存安定性を示すことが確認された。
実施例２３
市販されている精製白色ワセリン（クロラータムＶ，クローダジャパン製）４７５ｇを水浴上で加温して溶かし、約５０℃に保ち、これにあらかじめ式(II)で示される化合物５ｍｇを軽質流動パラフィン２５ｇに加え均一に分散させたものを均一に混合し、徐々に冷却し、固まるまでよくかき混ぜて軟膏剤を製した。
実施例２４
市販されている精製白色ワセリン（クロラータムＶ，クローダジャパン製）１６２０ｇを水浴上で加温して溶かし、約５０℃に保ち、これにあらかじめ式(II)で示される化合物１８ｍｇを同じ白色ワセリン１８０ｇに加え均一に分散させたものを均一に混合した。徐々に冷却し、固まるまでよくかき混ぜて軟膏剤を製した。

試験例７
式(II)で示される化合物の製剤中における保存安定性を確認するため、４０℃７５％ＲＨあるいは２５℃における保存後の対開始時含量（％）を求めた。結果を表５に示した。

表から明らかな通り、式(II)で示される化合物が製剤中で安定であることが確認された。
実施例２５
市販されている精製白色ワセリン（クロラータムＶ，クローダジャパン製）４７５ｇを水浴上で加温して溶かし、約５０℃に保ち、これにあらかじめ式(II)で示される化合物０．５ｍｇを軽質流動パラフィン２５ｇに加え均一に分散させたものを均一に混合し、徐々に冷却し、固まるまでよくかき混ぜて軟膏剤を製した。
実施例２６
市販されている精製白色ワセリン（クロラータムＶ，クローダジャパン製）４５０ｇを水浴上で加温して溶かし、約５０℃に保ち、これにあらかじめ式(II)で示される化合物０．５ｍｇを同じ白色ワセリン５０ｇに加え均一に分散させたものを均一に混合した。徐々に冷却し、固まるまでよくかき混ぜて軟膏剤を製した。

本発明により、アトピーの痒みに対して優れた効果を有する軟膏剤の提供が可能になったので、アトピーなどの痒みに有効な医薬品として利用可能である。

Claims

式(I)

[式中Ｒ¹は式
-(CH₂)₄-S-CH₂-CO₂H
で示される基、式
-(CH₂)₄-S-CH₂-CO₂CH₃
で示される基、式
-(CH₂)₄-C≡C-CO₂H
で示される基、式
-CH₂-S-(CH₂)₂-S-CH₂-CO₂H
で示される基または式
-CH₂-S-(CH₂)₄-CO₂H
で示される基のいずれかの基を示す。]
で示される化合物、および油脂性基剤からなる軟膏剤。
式(II)

で示される化合物、および油脂性基剤からなる軟膏剤。
式(I)で示される化合物が油脂性基剤中で固体状態または油状で分散していることを特徴とする請求項１記載の軟膏剤。
油脂性基剤が炭化水素類、脂肪酸エステル類および動植物性油からなる群から選択される少なくとも１種であることを特徴とする請求項１記載の軟膏剤。
油脂性基剤が、白色ワセリン、白色ワセリンと軽質流動パラフィンとの組み合わせ、白色ワセリンと流動パラフィンとの組み合わせ、白色ワセリンとパラフィンとの組み合わせ、白色ワセリンとスクワランとの組み合わせ、白色ワセリンとメチルポリシロキサンとの組み合わせ、またはゲル化炭化水素からなる群から選ばれる1種または２種以上である請求項４記載の軟膏剤。
白色ワセリンが、不純物を除去することによって精製した白色ワセリンである請求項５記載の軟膏剤。
式(I)で示される化合物を油脂性基剤に混合した分散体を、式(I)で示される化合物の融点より低く、かつ油脂性基剤の融点より高い範囲に保持した油脂性基剤に添加し、攪拌混合することにより製造された請求項１記載の軟膏剤。
式(II)で示される化合物を油脂性基剤に混合した分散体を、４５℃以上５５℃以下の範囲に保持した油脂性基剤に添加し、攪拌混合することにより製造された請求項２記載の軟膏剤。
式(I)で示される化合物を油脂性基剤に混合して分散体を調製し、式(I)で示される化合物の融点より低く、かつ油脂性基剤の融点より高い範囲に保持した油脂性基剤に添加し、攪拌混合することを特徴とする、式（I）で示される化合物を含有する軟膏剤の製造方法。