JPS6388195A - ウルダマイシンｇおよびその誘導体ならびにそれらの製法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 西ドイツ特許公開公報第３，４４１，９３３号にはウル
ダマイシンＡ−Ｆおよび相当するウルダマイシノンであ
るそれらのアグリコンが記載されている。これらウルダ
マイシンはタンザニアの土壌試料から単離された微生物
菌株を用いて発酵させることにより製造される。この微
生物はストレプトミセス・フラジエ（８ｔｒｅｐｔｏｍ
ｙｃｅｓ　Ｆｒａｄｉａｅ）と同定され、西ドイツ微生
物収集機関（ＤＳＭ）に寄託番号ＤＳＭ　３０９３の下
に寄託されている。相当するウルダマイシノンはウルダ
マイシンの酸加水分解またはメタツリシスにより得られ
うる。

知られたウルダマイシンおよびウルダマイシノンは抗菌
作用および＠瘍抑制作用を示しそしてそれゆえ医薬製剤
の形態で人間または動物の細菌感染の治療または腫瘍疾
患の治療に使用されうる。

ウルダマイシンＡ−Ｆの混合物の組成は微生物の培養条
件の如何によることが観察されている。従って全脂大豆
（２％）およびグルブース（２％）を含有する栄養培地
が使用される場合は主生成物（６５％）としてウルダマ
イシンＡが、一方ｎｇｓ（モルホリノエタンスルホン酸
）緩衝液をこの栄養培地に添加するとウルダマイシンム
の生成が強く抑制され、そしてウルダマイシンＣおよび
ウルダマイシンＤが主に形成される。

ウルダマイシンＥは肉エキスおよびグルコースを添加（
それぞれ２０％）した栄養培地における主生成物（５３
％）である。ウルダマイシンＢは全脂大豆（２％）、グ
ルコース（１％）、殿粉（１ｔｓ）およびＮａＨＰＯ４
（１％　）が栄養培地ト１．テ使用された場合に主生成
物として産生される。

今、ウルダマイシンＧが同様にストレプトミセス・フラ
ジエを用いて製造されうろことが見出された。収量はこ
こでも発酵の如何による。

この新規化合物およびそのアシル誘導体も知られたウル
ダマイシンと同様に抗菌作用および腫瘍抑制作用を有す
る。特にアシル誘導体はより活性が高（さえある。

それゆえ本発明は一般式Ｉ （式中Ｂ１〜Ｒ４は相互に独立して水素または（Ｃ１〜
０１８）−アシル基を意味する）を有する化合物に関す
る。

本発明はさらに、ストレプトミセス・７ラジエを培養し
、一般式Ｉを有する化合物を培養基から単離しそして場
合によりアシル化することからなる一般式Ｉを有する化
合物の製造にも関する。

本発明はまた薬剤の製造への一般式Ｉを有する化合物の
使用にも関する。

以下に本発明を特にその好ましい態様に関して説明する
。

ストレプトミセス・７ラジエは下記の特徴を有する。

胞子表面　　　　ａｍ 胞子形態　　　　Ｓａ 色素形成性　　　Ｃ− 空気中の菌糸体の色　　肉桂色 発酵にはストレプトミセス・７ラジ工％ＫＤＳＭ　３０
９３菌株が用いられる。ＤＡＭ　３０９３の代りにその
突然変異体および変種もそれらがウルダマイシンＧを合
成する限り使用されうる。かかる突然変異体はそれ自体
知られた方法で、物理的手段、例えば紫外線またはｘ、
ｌ照射のような照射、または例えばエチルメタンスルホ
ネート（略称ＥＭＥＩ　）または２−ヒト四キシー４−
メトキシベンゾフェノン（ＭＯＢ）のような化学的突然
変異原によって生成されうる。

好気性発酵に好ましい炭素源は同化しうる炭水化物およ
び糖アルコール例えばグルコース、ラクトースまたはＤ
−マンニトール、ならびに炭水化物含有天然産物例えば
麦芽エキスが適する。好ましい窒素含有栄養物質として
はアミノ酸、はプチドおよびタンパク質ならびＫそれら
の分解産物例えばペプトンまたはトリプトン、さらに肉
エキス、粉砕された種子例えばとうもろこし、小麦、豆
種、大豆または綿の木の粉砕された種子、アルコール製
造の蒸留残留物、肉粉または酵母エキス、またアンモニ
ウム塩および硝酸塩が適当である。その他に栄養溶液は
例えばアルカリ金属またはアルカリ土類金属、鉄、亜鉛
およびマンカンの塩化物、炭酸塩、硫酸塩または燐酸塩
を付加的な無機塩として含有しうる。ウルダマイシンＧ
の生成は栄養溶液の総重量に基づきそれぞれ全脂大豆α
５〜５チ好ましくは２優、ならびにグルコースα５〜４
％好ましくは２％を含有する栄養溶液中で特に良的に進
行する。

発酵は好気的に、すなわち例えば場合により空気または
酵素を導入して振盪フラスコまたは発酵器中で振盪また
は攪拌しながら液中にて遂行される。発酵は温度範囲的
１８〜４０℃、好ましくは約２５〜３０℃、特に２７〜
２８℃で行われうる。前記した条件下に定常期に達する
まで約６０〜８０時間、好ましくは７０〜７５時間微生
物を培養する。

数段階で培養するのが好ましい、すなわち、はじめに１
種またはそれ以上のライ；１培養物を液体栄養培地中に
調製し、これを次に実際の生産用培地すなわち主培養液
中に例えば容量比１：１０で接種する。予備培器物は例
えば胞子形成された菌糸体を栄養溶液中に接種しそして
これを約４８〜７２時間生育せしめることにより得られ
る。胞子形成された菌糸体はこの菌株を固形または液体
状培会基例えば酵母−麦芽一寒天上約７日間生育せしめ
ることにより得られうる。。

発酵の経過は培養液のｐＨまたは菌糸体量に基づき、薄
層クロマトグラフィーによるかまたは生物活性を検査す
ることにより監視され５る。

ウルグマイシンＧは知られた方法に従い生成物の化学的
、物理的および生物学的性質を顧慮して培養基から単離
される。培養基中または何個の単離段階における抗生物
質濃度を試股するには、例えば溶離剤としてクロロホル
ム／メタノールを用いるシリカゲル上の薄層クロマトグ
ラフィーが用いられ、形成された抗生物質曾を好都合に
は検量溶液と比較する。

ウルダマイシンＧは菌糸体または培巷ブロス中で知られ
たウルグマイシンＡ−Ｆと一緒に存在する。これら抗生
物質は濾過されてない培養ブロスから水非混和性または
水とわずかしか混和しない有機溶媒例えばクロロホルム
または酢酸エチルを用いて抽出され５る。しかしながら
これらは菌糸体中にはほんのわずかにしか存在しないの
で、例えば遠心分離によるか、または好ましくは濾過助
剤を添加してｆ適することにより培養ブロスから菌糸体
を分離するのが好都合である。

次に抗生物質は好都合には弱酸性ないし中註關範囲、好
ましくは關６〜７で上澄みまたはＰ液から単離され５る
。この目的には好都合には水非混和性またはわずかじか
混和しない有機溶媒、特にクロロホルムまたはメチレン
クロライドのようなりロル化炭化水素あるいは酢酸エチ
ルのようなエステルが使用される。着色した抽出液を場
合により蒸発および極性有機溶媒中にとったのち無極性
溶媒好都合には石油エーテルのような炭化水素を用いて
沈殿させることにより、総抽出物の約８０チまでを占め
うる強い親脂性成分を除去できる。残留物からウルダマ
イシンＧがクロマトグラフィーにより単離されうる。

脱脂された粗製抽出物からウルダマイシンＧを単離する
には、粗製抽出物を好都合にはシリカゲルカラムで清製
する。その場合溶離剤としては低分子量クロル化炭化水
素とアルカノールの混合物、例えばクロロホルムとメタ
ノールの容量比４：１の混合物またはメチレンクロライ
ドとメタノールの容量比８５：１５の混合物が良いこと
が判った。Ｕ々に着色したフラクションの形態で吸着さ
れた成分は種々に着色した溶出液の形態で連続して溶離
される。ウルダマイシンＧ（第２フラクシヨン）および
ウルダマイシンＡ（第５７２クシヨン、西ドイツ特許公
開公報第３，４４１，９３３号参照）が２つの主フラク
ション中に含有される。

純粋なウルダマイシンＧを単離するには、慣用の操作法
、例えばクロマトグラフィー、ゲル濾過、または適当な
有機溶媒中におけるその溶液からの沈殿が用いられる。

溶離剤として低級ハロゲン化炭化水素と低級アルカノー
ルとの混合物、例えばメチレンクロライド／エタノール
マタハクロロホルム／メタノールの例えば容量比９：１
の混合物を使用するシリカゲルでのクロマトグラフィー
、続いて適当な媒体例えばヒドロキシアルコキシプロピ
ルデキストラン（親指型、セファデックス（Ｓｅｐｈａ
ｄｅｘ）ＯＬＨブランド）でメタノールのような低級ア
ルカノールを用いるゲル濾過、そして次に沈殿、例えば
アセトンノヨウな極性有機溶媒中のウルダマイシンの濃
厚溶液を無極性溶媒特に例えば石油エーテルまたはｎ−
ヘキサンのような炭化水素中に滴下することによる沈殿
が特に良いことが判った。

ウルダマイシンＧは橙色、無定形の固形物であって、メ
タノール、アセトン、ＤＭＳＯ、ジオキサンおよびクロ
ロホルム中に良好に溶解するが。

水およびアルカン中には溶解しない。この物質は固形状
態においておよびメ（３〜９特にｐＨ５〜８の範囲の溶
液中で安定であり、従−って慣用の医薬製剤中に混入さ
れうる。

抗菌作用は、例えばイン・ビトロのプレート−寒天拡散
テスト（直径６簡の１試験サークル当り１０μＬ１にお
いて示されうるように、ダラム陽性ならびにダラム陰性
細菌の両方に有効である。α０６〜α３μｔ／ｄの範囲
の最小阻止濃度で感受性を示す往々のＰＦＩ菌の例をあ
げれば、アクロモバクタ−・ジエミニアニ（Ａｃｈｒｏ
ｍｏｂａｃｔｅｒｇｅｍｉｎｉａｎｉ　）、バチルス−
プレビス（Ｂａｃｉｌｌｕｓｂｒｅｖｉｓ）、バチルス
−サブチリス（Ｂ、　５ｕｂｔｉｌｉｓ）、アースロバ
クターφオーレセンス（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒａｕ
ｒａ日Ｃθｎｓ）、アースロバフタ−命りリスタロボイ
エテ（Ａ、　ｃｒｙｓｔａｌｌｏｐｏｉｅｔθ）、ブレ
ビバクテリウム・フラバム（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉ
ｕｍ　ｆｌａｖｕｍ）および穏々のストレプトミセス科
（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｔｅｓ　）の菌例えばストレ
プトミセス・アンチバイオティクス（Ｓ、　ａｎｔｉｂ
ｉｏｔｉｃｕａ）、ストレプトミセス・バイオラセオル
バ−（Ｓ、　ｖｉｏｌａｃｅｏｒｕｂｅｒ）、ストレプ
トミセス会ブラシナス（ｓ、　ｐｒａｓｉｎｕｓ）、ス
トレプトミセス・ラベンドウレ（Ｓ、　１ａｖｅｎｄｕ
ｌａｅ）、ストレフトミセス・グラッセセンス（８，ｇ
ｌａｕｃｓ−ｓｃｅｎｓ）およびストレプトミセス・ピ
リドクロモゲネス（Ｓ、　ｖｉｒｉｄｏｃｈｒｏｍｏｇ
ｅｎｅｓ）である。

人間および動物の腫瘍細胞に対するウルダマイシンＧの
腫瘍抑制作用はイン・ビトロで示されうる。

ウルダマイシンＧの相当する（ＣｒＣ＋ａ）−アシル化
合物、好ましくは（Ｃ＋〜Ｃ１ｏ）−アシル化合ａｍ特
にアセチル化合物への変換は、それ自体知られた方法に
従い、所望の有機カルボン酸のアシル残基を導入するア
シル化剤を用いて遂行される。その場合適当なカルボン
酸、または反応往訪導体特に無水物が使用される。アシ
ル化は適当な縮合剤の存在下に、例えば遊離のカルボン
酸を使用する場合はジシクロへキシルカルボジイミドの
：うなカルボジイミド化合物、またはジイミダゾリル力
ルボニルのようなカルボニル化合物の存在下に、そして
例えば反応性カルボン酸誘導体を使用する場合は塩基性
薬剤、例えばトリエチルアミンのようなトリ低級アルキ
ルアミン、あるいは例えばピリジンまたは４−ジメチル
アミノピリジンのような複素環式塩基あるいは無水酢酸
ナトリウムのような塩基性塩の存在下に実施されうる。

アシル化反応は溶媒または溶媒混合物の存在下または非
存在下に冷却下にか、室温でか、または加温下に、かつ
必要な場合は封管中および／または不活性気体例えば窒
素雰囲気中で実施されうる。適当な溶媒は例えば単純な
または置換された、例えばクロル化された脂肪族、環状
脂肪族または芳香族炭化水素であり、その場合適当なエ
ステル化試薬例えば無水酢酸、ならびに適当な塩基例え
ばピリジンが希釈剤として使用されうる。

しかしながらこの反応は無水物特に無水酢酸を用いピリ
ジンまたは酢酸ナトリウムの存在下に実施されるのが好
ましい。反応温度および反応待間は一１０℃〜＋１００
℃および２分ないし４８時間、好ましくは２０〜３０℃
および８分ないし１６時間である。無水物対塩基の比率
は２ｏ：１〜１：１好ましくは２：１である。反応混合
物中のウルダマイシンＧの濃度は０．０５〜１０％、好
ましくは０．１〜１チである。

反応終了後反応生成物は抽出により単離されうる。さら
に精製するにはこれを次に例えば、シリカゲルでクロマ
トグラフィーに付することができる。

あるいはまたモノないしトリアジル化合物は”’ｒ４Ａ
、４Ｃ，Ｂ−テトラーＯ−アシルウルダマイシンＧの塩
基性アシル分解によっても調製されうる。水性／アルコ
ール性溶液中アルカリ金属またはアルカリ土類金属の水
酸化物あるいはアルカリ金属炭酸塩のよ５な塩基が一１
０〜＋１００℃で使用される。このアシル分解は好まし
くは水性／メタノール性溶液中で飽和炭酸ナトリウム溶
液を用い２５℃で行われる。続く後処理は前記のように
して行われる。

前記アシル基は有機カルボン酸から訪導される。これら
カルボン酸には直鎖状、分枝鎖状、または星状の脂肪族
、脂肪族−芳香族または芳香族炭化水素基（これらの基
はまたそれら自身が未置換であるかまたはハロゲン例え
ば塩素才たは臭素で置換されるか、あるいはエステル化
またはエーテル化されたヒドロキシル基で置換されてい
る）が包含される。

かくして製造された化合物は同様に腫瘍抑制作用を示す
。

以下の実施例において本発明をさらに詳細に説明する。

チの表示は別に断わりなければ重量によるものとする。

実施例 １、ａ）産生性菌株の胞子懸濁液の調製５００−の三角
フラスコ中の栄養溶液（酵母エキス４．！ｉ’、麦？エ
キス１０１／、！ルコース４１％水道水ｉｚ、滅菌前の
ＰＨ７，３）１００ゴに菌株ＤＳＭ　３０９３を接種し
そして２７℃および１２Ｏｒｐｍで回転振盪器上７２時
間インキュベーションする。次に、固形化させるために
寒天２０／／ｌが添加された前記組成の培養基を含有す
る５００−の三角フラスコ中に培養液２０−を均等に分
散させそして上沿液をデカンテーションする。この培養
液を２７℃で１０〜１４日間インキュベーションする。

この時間経過後に、生成したフラスコ中の胞子を、市販
の非イオン界面活性剤１滴を含有する脱ミネラル水５０
０ｍで洗い落し、直ちに以後の使用に供するかまたは一
２２℃で貯蔵する。

ｂ）三角フラスコ中の産生性菌株の培養物または予備培
養物の調製 栄養溶液（組成、肉粉２％、麦芽エキス１０チ、炭酸カ
ルシウム１％および水を加えて１００チとなす。−は圧
熱滅菌前で７．２）１００−を含有する５００−の三角
フラスコに斜面管上に生育した培養物または胞子懸濁液
［Ｌ２−を接種し、そして振盪器上１２０　ｒｐｍおよ
び２７℃でインキュベーションする。抗生物質の産生け
７２時間後に最大に達する。１０および１００ｔの、発
酵器の接種には同じ栄養溶液から得られる４８時間令液
中培養物（５％）で充分である。

２、　ウルダマイシンＧの調製 １０／、の発酵器を下記条件で操作する。

栄養培地：全脂大豆２チ グルコース２％ ｐｉ（７，２ インキュベーション時間：　７２時間 インキュベーション温度：２７℃ 攪拌速度：２５０ｒｐｍ 通気：空気４１７分 エタノール性ポリオール溶液２〜３滴を反復して添加す
ることにより泡の発生が抑制されうる。約７０時間後（
ｐＨ−５，３）に最大生産に達する。収量はウルダマイ
シンＧ約４０■／ｌである。

五　ウルダマイシンＧの単離 Ｄｓｈｉ０９３の発酵後、濾過助剤としてセライト２優
を添加して培養ブロスを濾過する。菌糸体をアセトンで
抽出し、有機相を蒸発させそして水性残留物を酢酸エチ
ルで抽出する。培養Ｆ液は同様にｐｔ（７で酢酸エチル
を用（・て充分に抽出し尽す。この抽出液を菌糸体から
の抽出液と合し、乾燥しそして蒸発させる。油状の残留
物を充分量の石油エーテルで被覆する。析出した沈殿を
遠心分離しそして乾燥する。粗生成物をシリカゲルカラ
ム（シリカゲル６０　、Ｍａｃｈｅｒｅｙ−Ｎａｇｅｄ
）でメチレンクロライド／メタノール（８５：１５　ｖ
：ｖ）を用いてクロマトグラフィーする。溶出液の第２
フラクシヨン（黄赤色）中にウルダマイシンＧが濃縮さ
れている。これをメタノール中セファデックスＬＨ−２
０でさらに精製する。

４、　ウルダマイシンＧの特性 精製されたウルダマイシンＧを少量のアセトン中に溶解
させ、そしてこの溶液を２０倍の過剰のｎ−ヘキサン中
に滴下することにより沈殿させる。かくして得られる橙
色固体は１４１℃で分解しそして下記の性質を有する。

薄層クロマトグラフィー：（シリカゲル５ｉｌＧ−２５
＊　ＵＶ２５４＋５６６　） クロロホルム／メタノール（８５：１５；ｖ：ｖ）：Ｒ
ｆα４４ クロロホルム／メタノール（９：　１　；ｖ：ｖ）　：
ｕｆ［１３０ 負のＦＡＢ−ＭＳ：ＩＱ／＋３＝７１４（Ｍ；１２％）
；６６４（４俤）；６５４（５％）；２８１（５４チ）
；２７９（４６チ）。

Ｃ５７Ｈａ６０１４（７１４−７７）に相当ＩＰ、　（
ＫＢｒ）　：　３４２０　；２９５８　ｏｈ；　２９１
０：２８４０：１７１８；１６５０　　ｓｈ；　　１／
）４５　　日ｈ；　　１６３０；　　１６１５；１５５
５ｃｒｎ−’ ＵＶ　（メタノール）　：　２ｍａｘ（ε）＝４２６．
５（４０６０）；３１９．５（２９９０）ｎｍ ＵＶ　（メタノール／ＨＣ’ｔ）：λｍａｗ（”）−４
３０（３９５０）；５１７（２９００）　ｎｍ ＵＶ　（メタノール／　ＮａＯＨ）　：λｍａｘ（’）
　＝５７７．２（３８００）；４０４（１６５０）；　
３２４（６０４０）　ｎｍ１ＨＮＭＲ（２００ＭＨｚ　
、　ＣＤＣｌ２　）　：δ−（１５１３（ｄ、　：Ｊ−
６Ｈｚ、　５Ｃ−ＣＨ３）；　１．２４　（ｓ、　５−
ＯＨ５）：　１．２４　（ｄ、Ｊ＝６．５　Ｈｚ、　５
Ａ−ｃｎ５）　：約１．３０　（ｃｏｖｅｒｅｄ　３’
−Ｈａ）　；　　　　（１，４３（（１，Ｊ＊６Ｈｚ、
　６’−ＯＨ５）　；　１．４〜２．２　（ｃｏｍｐｌ
ｅｘ。

８Ｈ，５Ａ−Ｈ２，２Ａ−Ｈ２，３Ｃ−Ｈ２，２Ｃ’−
ＣＨ２）；　　１．８４（（１，Ｊ＝１５Ｈｚ、４−Ｈ
ａ）；　　２．１６　（ａｄ、Ｊ−１５；２Ｈｚ、　４
−Ｈ６）；　２．４６　（ｄｄｉ、　、Ｔ　＝１３；５
，２Ｈｚ、　５’−Ｈ６）　；２．５２　（ａ、Ｊ＝１
２．５；　２−Ｈａ）；　２．７９　（ａｄ、　、’＝
１２．５　；　２．５Ｈｚ、　２−Ｈ６）；　　３．１
９　（ａａ、　Ｊ＝９　；　９Ｈｚ、　　５’−Ｈ）；
　＆４〜五６（ｃｏｍｐｌｅｘ、　２Ｈ，４Ｃ−Ｈ。

６’−Ｈ）；　　３．７０　（ｅ、　巾広、　　４Ａ−
Ｈ）　；　　３．７２　（ｃｏｖｅｒｅｄ。

５ｃ−Ｈ）　ｔ　　ｌ　７３　（ｍＴ　　４’、Ｈ）　
；４−１８　（ｄｑ　Ｔ　Ｊ−６，５：２Ｈ２；　　５
Ａ−Ｈ）；　　４．８８（ｄａ、　　Ｊ−１１，５；２
Ｈｚ。

２′−Ｈ）；５．０１（０，７Ｍｍ３Ｘ２Ｈ２，１人−
Ｈ）；５．４０（８，巾広、ＩＣ−Ｈ）；　　６．４１
　（（１，Ｊ＝　１０　Ｈｚ、５−Ｈ）；＆８９　（ａ
、　Ｊ−１０Ｈｚ、　６−Ｈ）　；７．６７　（ａ、　
Ｊ＝８　；ＣＬ８Ｈｚ、　　１ｌ−Ｈ）；　７．９３　
（ｄ、　Ｊ−８；α３Ｈｚ、１Ｏ−Ｈ）；　　１２．３
３　（ｓ、巾広、ＯＨ）”　ｐｐｍ傘シグナルはＤ２０
交換後に消失 コＤ（メタノール）：λｅＸｔｒ６．（σ２０Ｘ１０’
″５）＝４０１（−９，２）；　５２９（２１，１）；
　２８９（１α０）；　　２６５（−４，７）；　　２
３５（２ＣＬＯ）ｎｍＣａＥｄｏ（ｃ−（Ｎ　、　　メ
タノール）：　　＋３７Ｓ。

５、　５’、４Ａ、４Ｃ，８−テトラ−０−アセチルウ
ルダマイシンＧの製造 ウルダマイシンＧ　２０　ｔｑを無水酢酸／ピリジン（
２：１　ｖ：ｖ　）混合物１２−中室温で５．５時・間
攪拌する。この混合物を氷上に注ぎそして５〇−ずつの
クロロホルムを用いて３回抽出する。

有機相を真空下に可縮しそして痕跡量のピリジン残分を
反復してトルエン中にとＦ）蒸発させることにより除去
する。固形残留物をシリカケ゛ル（カラム２．５Ｘ３０
α、メチレンクロライド／エタノール９５　：　５　ｖ
／ｖ　）でクロマトグラフィーに付する。２個のフラク
ションが得られる（下部の方から数える）。

（１）　　ｔｌｃ上単一なテトラ−０−アセチルークル
ダマイシンＧ１７ｒＮ！、黄色、 Ｃ２）混合フラクション４”ｙ　ｓ　黄色。

テトラ−０−アセチルーウルダマイシンＧを次にセファ
デックスシト２ｏ（カラム２．５ｘ５０ｃＩｎ。

メタノール）でクロマトグラフィーすることにより精製
してテトラ−０−アセチルーウルダマイシンＧ１６岬（
６５％）を黄色固形物として得た。

薄層りＯマドグラフィー（５ｉＩＧ２５　＊　Ｕ■５０
４　＋　５６６＋２０Ｘ２０ｃＩｎ、ガラス上［ｌＬ２
５　ｍ　（Ｍａｃｈｅｒｅｙ−Ｎａｇｅｄ））　。

展開距離１５−： りｏ　ｏ　ホ／Ｌ／　ム／　メタノール（８５’　１５
　Ｔ　ｖ　：　ｖ）　：　Ｒｆ　［Ｌ７０りａｏホルム
／メタノール（９：　１．　ｖ：ｖ）　：Ｐ、ｆＣＬ６
０ｃ４ｓＨ５４ｏ１８　（８８２，８） 融点１６１℃ 工Ｒ（ＫＢｒ）：　６４５０；　２９９０；　２９５０
；　１７８８；　１７４２；１６７０；　１６５７　ｓ
ｈ；　１６０３；　１５６６ａｎ−’Ｕｖ　（メタノー
ル）：λｔＱａＸ　（リ−３５５（３０６０）；　３１
３（３０３０）＋　２５９（１１７６０）ｎｍＩＨＩＪ
ＭＲ（２００ＭＨ２、ＣＤＣ４）　：　　δ＝０．５１
　（ｄ、　、Ｔ　−＆５Ｈ２，５Ｃ−ＣＨ３）：１．１
６（ｄ、Ｊ＝６．５Ｈ２，５Ａ−ＣＨ３）；１．２６　
（Ｂ、　３−ＣＨ５）；　１．２９　（ｄ、　Ｊ−６Ｈ
ｚ、　６’−ＣＨ，５）；１．２〜２．２　（ｃｏｍｐ
ｌｅｘ、　　ｉ２Ｈ，２Ａ−Ｈｚ、　３Ａ−Ｈｚ、　３
’−Ｈｚ、４−Ｈｚ、２Ｃ−Ｈｚ、３Ｃ−Ｈｚ）；　　
２．０１　；　２．１１；　　２．１４（３ｓ、　５’
−、４Ａ−および４Ｃ−ＯＡｃ）；　２．４９　（ｓ、
　３Ｈ。

８−ＯＡｃ）：２．５５（ｄ、Ｊ：＝１３Ｈ２，２−Ｆ
Ｊａ、Ｚ８３（己。

Ｊ””’　１３１２　Ｈ２ｐ　２　””６　）　Ｆ　’
　５９　（ｄ　ｔ　Ｊ　ｒ２　Ｈｚ　ＯＨす；１６〜１
７　（ｃｏｍｐｌｅｘ、　　２Ｈ，６’−Ｈ，５Ｃ−Ｈ
）；　１９６（ｄｑ、Ｊ−９，６Ｈ２，５Ａ−Ｈ）；＆
９８（ｍ、４′−Ｈ）；４ｆ：Ｊ６（Ｓ、　ＣＨ本）；
　　４．７０　（ｏ、　Ｊ＝３ｘ２Ｈｚ、　４Ｃ−Ｈ）
；　４８４（０，、Ｔｘ３ｘ２Ｈｚ、　４Ａ−Ｈ）　；
４８６　（ｄｄ、　、Ｔ＝９．９Ｈｚ。

５′−Ｈ）ｔ　　５−００　（ｓ、巾広、ＩＡ−Ｈ）；
　　５．００　（ｃｏｖｅｒｅｄ。

２’−Ｈ）；　　５．４９（ｄ、　　ｙ−２Ｈｚ、　　
ＩＣ−Ｈ）；　　６．４２（ｄｄ。

：ｒ−１０Ｈｚ、　　５−Ｈ）：　　６，８９　（ｄ、
　、Ｔ−１，０Ｈｚ、　６−Ｈ）；ａ０６　（ｄ、Ｊ−
８Ｈｚ、１ｌ−Ｈ）：　　ａｌ　５（ｄ、Ｊ−８Ｈｚ。

１ｏ−Ｈ）ｐｐｍ 申シグナルはＤ２０交換後に消失 ＣＤ　（メタノール）：λｅｘｔｒ；　（σ２０Ｘ　１
０−３）　＝　５０１（−４，６）；　４５０（１，４
）；　３９４（−１２，０）；　３０Ｂ（２（１３）；
　２９５　ａｈ　（１６，５）；　　２６６（−１１，
２）；２３３（２５，６）ｎｍ ＆　細胞増殖抑制作用に関するイン・ビトロ試験 この実験はＨａｍｂｕｒｇｅｒおよびＳａｌ！ｌｌ０ｎ
氏（ＮｅｗＫｎｇｌ、１．Ｍｅｄ、２９Ｂ、１３２１〜
１３２７（１９７８））の方法に従い行われた。培地は
ＭｃＣｏｙ　５　Ａと置換しそして細胞数は５Ｘ１０２
個／プレートに低下させた。

ａ）連続実験におけるＬ１２１０白血病細胞への作用 実施例４および５から得られるｄ々の濃厚の試験物質と
細胞を連続インキュベーションした。

試験すべき化合物は細胞培養物を塗布する前に寒天プレ
ートに加えた。次に糾胞培養物をＣＯ２５チおよび０２
２０％を含有する大気中相対湿度９５％および３７℃で
インキュベーター中５〜７日間生育させた。この時間経
過後直径６０μｍ以上を有する細胞コロニー数を比較の
ため試験物質なしで生育した細胞コロニー数と比較して
測定した（％）。

ｂ）１時間実験におけるＬ１２１０白血病細胞への作用 この試験においては、細胞を種々の濃度の試験物質と３
７℃で１時間インキュベーションした。次に細胞をＭＣ
ＣＯ７５Ａ溶ｐｙ、（Ｆｌｏｗ　ｃａｔａｌｏｇ。

Ｍｅｃｋｅｎｈｅｉｍ、西ドイツ）で２回洗い、そして
Ｈａｍｂｕｒｇｅｒおよび１３ａ１ｍｏｎ氏の方法によ
る寒天プレートに加える。この細胞を前記したようにし
て培養しそして細胞コロニー数を測定した（評価は已に
おけると同じ）。

薬量／作用曲線から、連続インキュベーションおよび１
時間インキュベーションについてのＩＣ５Ｑ値を測定し
た。

Ｃ）増殖実験 指数生長期にあるＬ−１２１０＠ｉ細胞（Ｒｏｇｗｅｌ
’ＩＰａｒｋ　Ｍｅｍｏｒｉａｌ工ｎｓｔｉｔｕｔｅ（
ＲｐＭ工）培地中細胞５Ｘ１０３個／ｒｎｔ）をくぼみ
２６個を有するミクロ滴定プレート中、Ｃ０２Ｓ％およ
び相対湿度９５チの空気中で種々の濃度の試験物質と共
に６７℃で７２時間インキュベーションした。６５時間
後これに５０μｔの！ｌ　−（４，５−ｖメチルチアゾ
ール−２−イル）　−２，５−’、；フェニルテトラゾ
リウムブロマイド（ＭＴＴ）　（燐酸塩緩衝食塩水（Ｐ
Ｂ８）中のＭＴＴ　ｚ、ｓｎ？／−）を加えた。このｋ
ｉＴＴは生きた細胞により赤色の水不溶性色素ホルマザ
ンに還元される。さらに７時間後に上回み培地を慎重に
除去した。ホルマザンはくぼみ１個当り１００μｔのジ
メチルスルホキシドラ添加し次に軽（振盪することによ
り溶解させた。各（ぼみの吸光をマルチサン（Ｍｕｌｔ
ｉｓａｎ）　３４０　ＣＣ光度計（Ｍθａｅｒａ、　Ｆ
ｌｏｗ　！Ａ）を用い４９２ｎｍで測定した。試験物質
を用いた細胞対試験物質なしの細胞の吸光比から結果を
計算した。

すべての場合において実験は４回実りされた。

結果の偏差は１５チより少なかった。

その結果を下記の表にまとめる。

試験物質　　　工Ｃｓｏ　Ｃμｔ／ゴ）ウルダマイシン
ｏ　　　　　３．５　　　　　　ＣＬ８５セチルーウル
ダ マイシンＧ

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １）式 I ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中Ｒ＾１〜Ｒ＾４は相互に独立して水素または（Ｃ
   ＿１−Ｃ＿１＿８）−アシル基を意味する）を有する化
   合物。 ２）Ｒ＾１〜Ｒ＾４が相互に独立して水素または（Ｃ＿
   １−Ｃ＿１＿０）−アシルを表わす特許請求の範囲第１
   項記載の化合物。 ３）Ｒ＾１〜Ｒ＾４が相互に独立して水素またはアセチ
   ルである特許請求の範囲第１項記載の化合物。 ４）式 I ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中Ｒ＾１〜Ｒ＾４は相互に独立して水素または（Ｃ
   ＿１〜Ｃ＿１＿８）−アシル基を意味する）を有する化
   合物を製造するにあたり、 ａ）ストレプトミセス・フラジエを培養し、ｂ）式 I
   （式中Ｒ＾１〜Ｒ＾４は水素を意味する）を有する化合
   物を単離しそして場合により ｃ）この化合物をアシル化する、 ことからなる方法。 ５）ストレプトミセス・フラジエＤＳＭ３０９３を用い
   ることからなる特許請求の範囲第４項記載の方法。 ６）全脂大豆０．５〜５％を含有する栄養溶液中でスト
   レプトミセス・フラジエを培養することからなる特許請
   求の範囲第４または５項記載の方法。 ７）ストレプトミセス・フラジエを１８℃〜４０℃の温
   度範囲で培養することからなる特許請求の範囲第４〜６
   項のいずれか１項記載の方法。 ８）温度範囲が２５℃〜３０℃であることからなる特許
   請求の範囲第７項記載の方法。 ９）ストレプトミセス・フラジエを４０〜８０時間培養
   することからなる特許請求の範囲第４〜８項のいずれか
   １項記載の方法。 １０）ストレプトミセス・フラジエを７０〜７５時間培
   養することからなる特許請求の範囲第９項記載の方法。 １１）薬剤の製造への特許請求の範囲第１〜３項のいず
   れか１項記載の式 I を有する化合物の使用。 １２）腫瘍および感染性疾患治療用の薬剤の製造への特
   許請求の範囲第１１項記載の使用。 １３）特許請求の範囲第１〜６項のいずれか１項記載の
   式 I を有する化合物の抗生物質としての使用。 １４）特許請求の範囲第１項記載の化合物の有効量およ
   び製剤上受容されうる担体を含有する医薬組成物。