JPS5825680B2

JPS5825680B2 - 抗生物質

Info

Publication number: JPS5825680B2
Application number: JP51001258A
Authority: JP
Inventors: 哲今田; 徹長谷川; 雅彦米田; 幸正野崎
Original assignee: Takeda Chemical Industries Ltd
Current assignee: Takeda Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 1976-01-01
Filing date: 1976-01-01
Publication date: 1983-05-28
Also published as: JPS5283805A

Description

【発明の詳細な説明】本発明は新規抗生物質Ｔ−４２０８２に関する。

本発明者らは、新規な抗生物質の探索を目的として多数
の土壌から微生物を分離し、その産生ずる抗生物質を分
離探索した結果、ある種の微生物が新規な抗生物質を産
生ずること、該微生物がストレプトミセス属に属するこ
と、該微生物を適宜の培地に培養することによってダラ
ム陽性菌、抗酸性菌および真菌のあるものたとえばキャ
ンデイダ・アルビカンス、ピリキマラリア・オリゼに対
して有効な該抗生物質を培養物中に蓄積させうろことな
どを知り、これを単離し、その理化学的生物学的諸性質
から、当該物質が新規なポリエーテル系抗生物質である
ことを確め、これを抗生物質Ｔ−４２０８２と称するこ
とにして本発明を完成した。

本発明の抗生物質Ｔ−４２０８２を製造するにはストレ
プトミセス属に属する抗生物質Ｔ−４２０８２生産菌が
用いられ、その一例として本発明者らが１９７３年４月
静岡県伊東市の山地の土壌から分離したＴ−４２０８２
株があげられる。

同菌の性状は下記のとおりである。

（ａ）形態的特徴よ（分枝した基生菌糸から１μ内外の気菌糸を伸長し、
その主軸より単純分枝し側枝となり、その先端に閉鎖型
らせん状の胞子の連鎖が見られる。

胞子の形態は楕円形ないし円筒形（０，７〜１０μ×０
．９〜ｌ−４μ）でその表面にいぼ状突起（ｗａｒｔｙ
）を有する。

その他の特殊の器官すなわち球状胞子のう、鞭毛胞子、
菌核なとは認められない。

（ｂ）培養上の諸性状各種培地上での性状は第１表に示すとおりである。

特に記載しない限り、２８℃、２週間後の観察である。

（ｅ）生理的性質１生育温度範囲２ゼラチンの液化二陽性３殿粉の加水分解：陽性４脱脂乳のペプトン化：陽性脱脂乳の凝固：陰性５メラニン様色素の生産チロシン寒天：陰性ペプトン・イーストエキス・鉄寒天：陰性６炭素源の
同化性（プリートノ・ム・ボッｌ−ＩＪ−プ寒天）は第
２表のとおりである。

以上の性状からＴ−４２０８２株は明らかにストレプト
ミセス属に属していることを示している。

上記諸性状をニス・ニー・ワックスマン著「ジ・アクチ
ンミセチス」第２巻（１９６１年）、アール・ヒュツタ
ー著「システマテイク・デア・ストレプトミセスン」１
１９６７年）、インターナショナル・ストレプトミセス
・プロジェクト（ＩＳＰ）の菌種記載およびその他の文
献に記載された多くのストレプトミセス属に属する菌種
と比較すると、種の同定上重要な諸性状はストレプトミ
セス・ハイグロスコピクス・ワックスマンアンドベンリ
ッチ、１９４８（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｈｙｇｒ
ｏｓｃｏｐｉｃｕｓＷａｋｓｍａｎａｎｄＨｅ
ｎｒｉｃｉ１１９４８）によく一致する。

本発明者らは本菌株をストレプトミセス・ハイグロスコ
ピクスとし、ストレプトミセス・ハイグロスコピクスＴ
−４２０８２と命名した。

本発明に使用されるストレプトミセス・ハイグロスコピ
クスＴ−４２０８２は、工業技術院微生物工業技術研究
所および財団法人発酵研究所に微生物受託番号ＦＥＲＭ
−Ｐ／１６２６９１およびＩＦＯ１３６０９としてそれ
ぞれ寄託されている。

以上Ｔ−４２０８２株について説明したが、放線菌の諸
性質は一定したものではなく、自然的、人工的に容易に
変異することは周知のとおりであり、本発明で使用しう
る菌株は、ストレプトミセス属に属し、抗生物質Ｔ−４
２０８２を生産する菌株をすべて包含するものである。

本発明の抗生物質を製造する方法における培養は前記菌
株を微生物が利用し得る栄養物を含有する培地で行われ
る。

培地成分としては、例えば炭素源としてグルコース、殿
粉、グリセリン、デキストリン、シュークロース、水あ
め、糖蜜などを利用し得る。

また窒素源として肉エキス、乾燥酵母、酵母エキス、大
豆粉、コーン・スチーグ・リカー、小麦胚芽、綿実粉、
硫酸アンモニウム、硝酸アンモニウムなどを利用できる
。

その他必要に応じて炭酸カルシウム、塩化ナトリウム、
塩化カリウム、リン酸塩などの無機塩を添加するとか、
菌の発育を助は抗生物質Ｔ−４２０８２の生産を促進す
るような有機物および無機物を適当に添加することが出
来る。

培養法としては一般の抗生物質生産方法に準じて行われ
、液体培養法、とくに深部通気攪拌培養法が好ましい。

培養は好気的条件下に行われ、培養に適するｐＨは５〜
９、さらに好ましくは６〜８であり、培養温度は２８〜
３４℃であるが、多くの場合２８℃付近で培養するのが
好ましい。

また培養時間は３〜７日間行うのが好ましい。

培養終了後、培養物より抗生物質Ｔ−４２０８２を分離
採取するには、通常微生物の培養物から代謝産物を採取
するのに用いられる手段が単独あるいは組合わせて利用
される。

すなわち本物質が中性脂溶性であることを利用して各種
有機溶媒による抽出法、転溶法、再結晶法もしくは各種
吸着剤によるクロマトグラフィーなどを適宜組合わせて
用いることにより、目的物質を得ることができる。

上記培養によって生産された当該物質は、培養沢液中お
よび培養菌体中に含まれるので、たとえばつぎの方法が
有効に用いられる。

すなわち培養液にメタノール、エタノール、アセトン等
の水と混和しやすい溶媒を加えて瀝過し、涙液の中の溶
媒を留去したのち、水性液をｐＨ４〜９に調節し、酢酸
エチル、酢酸ブチル、クロロホルム等の水と混和しにく
い溶媒で抽出し、溶媒を留去した後残留物ヲメタノール
ー水、エタノール−水、アセトン−水などの溶媒系ある
いはエチルエーテル、クロロホルム、四塩化炭素などの
水と混和しにくい溶媒を用いて結晶化する。

また培養液を瀝過助剤を加えて瀝過し、Ｐ液を酢酸エチ
ル、クロロホルム等で抽出し、菌体をメタノール、エタ
ノール、アセトン等で抽出し、涙液抽出液と菌体抽出液
とを合わせ、溶媒を留去した後、残留物を前記の溶媒中
で結晶化する方法も用いられる。

夾雑する他成分が多い場合にはスチレン系の吸着樹脂、
シリカゲル、アルミナ等の担体のクロマトグラフィーに
付し、夾雑する不純物を分別して得られた該成分溶出区
分を減圧濃縮後、残留物を前記の溶媒から結晶化析出さ
せることにより、抗生物質Ｔ−４２０８２結晶を好収率
で得ることができる。

なお、抗生物質Ｔ−４２０８２は種々の塩、たとえばナ
トリウム塩、カリウム塩、リチウム塩、アンモニウム塩
などの塩の結晶としても得ることができる。

後記の実施例１で得られる抗生物質Ｔ− ４２０８２およびそのナトリウム塩の理化学的性質はつ
ぎのとおりである。

ＣＤ抗生物質Ｔ−４２０８２の遊離型（１）色およ
び性状：無色針状結晶（２）融点：１２０−１２２℃ （３）元素分析：実験値■Ｃ６２，７３；Ｈ９，２３；
０２６．０１ ■Ｃ６２，７４；Ｈ９，３６；０
２７．０３（％）（４）分子量：８５９（オスモメトリー法による）
（５）紫外線吸収スペクトル：特異な吸収は示さない。

（６）赤外線吸収スペクトル：臭化カリウム錠による吸
収スペクトルは第１図に示すとおりで、主な吸収（波数
）は次のとおりである。

２９４０．１７００．１４６２．１３８３．１０８５．
９７２Ｃ１ｒＬ−１゜（７）薄層クロマトグラフィー：上昇法によるシリカゲ
ル薄層クロマトグラフィーな行ない、１０％硫酸水溶液
を散布後加熱することにより褐色スポットとして検出し
た結果、第４表に示すＲｆ値が得られた。

プレート：シリカゲルプレート〔メルク社（西ドイツ）製キーゼルゲル６０〕（８）呈色反応：第５表に示すとおりである。

（９）溶解性：メタノール、エタノール、アセトン、酢
酸エチル、エチルエーテル、クロロホルム、ベンゼンお
よび四塩化炭素には可溶、シクロヘキサンには僅溶、水
および石油エーテルには極めて難溶である。

川抗生物質Ｔ−４２０８２のナトリウム塩（１）色お
よび性状：無色針状結晶（２）融点：１８０−１８２℃（褐変伴う）（３）元素
分析：実験値■Ｃ６２，０５；Ｈ８，９９；Ｎａ２
．０８ ■Ｃ６２，２７；Ｈ９，０１：Ｎａ２．
７９（％）（４）分子量：８７１．８７８（オスモメトリー法によ
る）（５）比旋光度：〔α）２５４５±０．５°（クロロ
ホルム中、ｃ＝ｉ、ｏ）（６）紫外線吸収スペクトル：２１０ｍμ以上では特異
な吸収は示さない。

（力赤外線吸収スペクトル：臭化カリウム錠による吸
収スペクトルは第２図に示すとおりである。

（８）ＮＩＶＩＲ：核磁気共鳴スペクトルは第３図
に示すとおりで、メトキシ基３個の存在が認められる。

（９）薄層クロマトグラフィー：第４表に示すとおりで
ある。

（１０）呈色反応：第５表に示すとおりである。

ａυ 溶解性：メタノール、エタノール、アセトン、酢
酸エチル、エチルエーテル、クロロホルム、ベンゼンお
よび四塩化炭素には可溶、シクロヘキサンには僅溶、水
および石油エーテルには極めて難溶である。

抗生物質Ｔ−４２０８２のナトリウム塩の生物学的性状
は第６表に示すとおりである。

抗生物質Ｔ−４２０８２・ナトリウム塩の急性毒性はマ
ウス経口投与でＬＤ５ｏは約２０００η／ｋｇであり、
マウス腹腔内投与でＬＤ５ｏは１２５〜２５０１１１９
／ｋｙである。

上記の理化学的性状にもとづき、抗生物質Ｔ−４２０８
２はポリエーテル系抗生物質であり、メトキシ基３個を
有する。

抗生物質Ｔ−４２０８２を公知のポリエーテル系抗生物
質の理化学的性状と比較すると、抗生物質Ｘ−５３７Ａ
Ｃジヤーナル・オブ・アメリカン・ケミカル・ソサイエ
テイ（ＴｈｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＡｍｅｒｉｃ
ａｎＣｈｅｍｉｃａｌ５ｏｃｉｅｔｙ）第７３巻
、第５２９５頁（１９５１））、サリノマイシン（特開
昭４７−２５３９２）、抗生物質に−１７８〔ツアイト
シュリフト・ピュア・アルゲマイネ・ミクロビオロギー
（ｚｅｉｔｓｃｈｒｉｆｔｆｕｒａｌｌｇｅｍｅｉ
ｎｅｍｉｋｒｏｂｉｏｌｏｇｉｅ）第４巻、第２３
６頁（１９６４））、抗生物質に−３５８〔ツアイトシ
ュリフト・ピュア・アルゲマイネ・ミクロビオロギー、
第４巻、第２６９頁（１９６４））、ジアネマイシン〔
ジャーナル・オブ・アンティバイオティックス（Ｔｈｅ
ＪｏｕｒｎａｌｏｆＡｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ
）第２２巻、第１６１頁（１９６９））、抗生物質Ａ−
１３ＯＡ（特公昭４８−４５５８）などは特異的な紫外
線吸収スペクトルを有するが、抗生物質Ｔ−４２０８２
は該吸収スペクトルをもたない。

抗生物質Ｘ−２０６（ケミカル・コミュニケーションズ
（ＣｈｅｍｉｃａｌＣｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ）
１９７１年第９２７頁）〕はメトキシ基を有しない。

モネンシン〔ジャーナル・オプ・アノリカン・ケミカル
・ソサイエテイ第８９巻、第５７３７頁（１９６７）
、：ｌ、ニゲリシン〔バイオケミカル・アンド・バイ
オフィジカル・リサーチ・コミュニケーションズ（Ｂ
ｉｏｃｈｅｍ１ｃａｌａｎｄＢｉｏｐｈｙｓｉｃ
ａｌＲｅ５ｅａｒｃｈＣｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎ
ｓ）第３３巻、第２９頁（１９６８）、ｌおよびグリソ
リキシン（ケミカル・コミュニケーションズ第１４２
１頁、（１９７０））は１個のメトキシ基を有する。

また抗生物質Ａ−２８６９５Ａ（特開昭４８−６８７９
５）および抗生物質Ａ−２１８（特開昭４８−８０７９
３）は４個のメトキシ基を、抗生物質Ａ−２０４ＡＣジ
ャーナル・オブ・アメリカン・ケミカル・ソサイエテイ
第９５巻、第３３９９頁（１９７３）、ｌおよび抗生
物質に一４ｌ（特開昭４９−１４６９２）は５個のメト
キシ基を有する。

したがって上記の抗生物質は３個のメトキシ基を有する
抗生物質Ｔ−４２０８２とは明らかに区別される。

抗生物質Ｔ−４２０８２と同じく３個のメトキシ基を有
するものとしては、抗生物質Ａ−２８６９５Ｂ（第開昭
４８〜６８７９５）があげられるが、抗生物質Ｔ−４２
０８２とこれとは、融点、比旋光度、赤外線吸収スペク
トルなどの性状に相違があるため、両者は互いに異なる
物質であると考えられる。

以上のことから、本願発明の抗生物質Ｔ−４２０８２は
新規化合物であると判断される。

以上記載したとおり、本発明の抗生物質Ｔ−４２０８２
はダラム陽性菌、抗酸性菌および真菌のある種のものに
対する生育阻害を示す。

従って、本抗生物質は、それらの菌を病原菌とする感染
症の治療剤として利用され得る。

たとえば本抗生物質の０．３〜ｉ−ｏ％量を含む常套の
局所用クリームや軟膏として使用しうるし、あるいは錠
剤、カプセル剤などとして１日当り通常２０−２００〜
／ｋｙ、注射剤としては１日当り通常１−２０〜／ｋｇ
投与しうる。

また、本抗生物質は補熱病菌（ピリキュラリア・オリゼ
ー）に対しても生育阻止作用を示すので農薬としての利
用も期待できる。

実施例１ブドウ糖２％、可溶性殿粉３％、生大豆粉１％、コーン
・スチープ・リカー１％、ペプトン０．５％、食塩０．
３％を含有する水溶液（ｐＨ７，０）に沈降性炭酸カル
シウム０．５％を添加した培地にストレプトミセス・ハ
イグロスコピクスＴ−４２０８２（微生物受託番号ＦＥ
ＲＭ−ＰＡ２６９１号、ＩＦｏ１３６０９）を接種
し、２８℃で４８時間振盪培養した。

この培養液１１をデキストリン５％、生大豆粉３％、ペ
プトン０．１％を含有する水溶液（ｐＨ７，０）に沈降
性炭酸カルシウムを０．５％添加した培地３０Ｊを含む
容量１００１のタンクに接種し、２８℃で通気量３０１
／分の条件下で１４０時間攪拌培養した。

上記の培養液に同量のアセトンを加えて３０分間攪拌後
沢涙液菌体とを分離した。

菌体は再度培養液と同量のアセトンに懸濁し、３０分間
攪拌後沢瀝過、涙液を前回の涙液に合わせた。

涙液はアセトンが留去されるまで減圧層線したのち、酢
酸エチルで抽出し、無水硫酸す）ＩＪウムで乾燥した
。

ついで酢酸エチル溶液を活性炭４００ｒｌｌのカラムに
通し、カラムを酢酸エチルで洗浄した。

溶出した活性区分を集めて溶媒を留去し、油状の残渣を
ベンゼンに溶解し、シリカゲル５００７７１１を充填し
たカラムに通し、ベンゼン、ベンゼン：酢酸エチル（９
：１）、ベンゼン：酢酸エチル（８：２）、ベンゼン：
酢酸エチル（１：Ｉ）、酢酸エチルの順に溶出し、活性
区分を集めて溶媒を留去すると抗生物質Ｔ−４２０８２
の粗粉末１２．５Ｓ’が得られた。

これを８０％アセトン水に溶解し、１規定の水酸化ナト
ＩＪウムでｐＨ９，０に調節し、減圧濃縮によりアセト
ンを留去すると抗生物質Ｔ〜４２０８２ナトリウム塩の
結晶が析出するので、これを集め、アセトン水中で再結
晶すると、抗生物質Ｔ−４２０８２ナトリウム塩の無色
針状結晶４グが得られた。

再結晶母液を１規定塩酸でｐＨ５，０に調節し、減圧濃
縮によりアセトンを留去し、析出した粗結晶を集め、ア
セトン水から再結晶することにより、抗生物質Ｔ−４２
０８２遊離型の無色針状結晶２．５１が得られた。

【図面の簡単な説明】

第１図は、抗生物質Ｔ−４２０８２の遊離型の赤外線吸
収スペクトル（ＫＢｒ法）を、第２図は、抗生物質Ｔ
−４２０８２ナトリウム塩の赤外線吸収スペクトル（Ｋ
Ｂｒ法）を、第３図は、抗生物質Ｔ−４２０８２す）
ＩＪウム塩の核磁気共鳴スペクトルを、それぞれ示す。

Claims

【特許請求の範囲】１次の特性を有する抗生物質Ｔ−４２０８２゜（１）
融点：１２０−１２２℃。（２）元素分析：実験値■Ｃ６２，７３；Ｈ９，２３；
０２６．０１ ■Ｃ６２，７４；Ｈ９，３６；０
２７．０３（％）（３）分子量：８５９（オスモメトリー法による）（４
）紫外線吸収スペクトル：特異な吸収は示さない。（５）赤外線吸収スペクトル：臭化カリウム錠による吸
収スペクトルの主な吸収（波数）は次のとおりである。２９４０．１７００．１４６２．１３８３．１０８５．
９７２ｃｒｒＬ−１゜（６）薄層クロマトグラフィー：上昇法によるシリカゲ
ル薄層クロマトグラフィーを行ない、１０％硫酸水溶液
を散布後加熱することにより褐色スポットとして検出し
た結果、得られたＲｆ値は次のとおりである。溶媒系Ｒｆ値酢酸エチル−ベンゼン（１：１）０．５２酢酸
エチル０．７３ベンゼン−
アセトン（９：１）０．１８ベンゼン−アセ
トン（１：１）０．８８クロロホルム−メタ
ノール（１９：１）０．８７クロロホルムー酢酸エチル
（２：３）（１６２プレート：シリカゲルプレート
〔メルク社（西ドイツ）製キーゼルゲル６０〕（力呈色反応：呈色試薬硫酸陽性（褐色）アニリンーフタール酸陽性（青藍色）バニリン
−硫酸陽性（紫色）モーリッシュ
陰性ドラーゲンドルフ陽性（淡橙色）バートン
陰性モリブテン酸陰性ベンチジン陰性ニンヒドリン陰性アルカリ性過マンガン酸力陰性リウム（８）ｅ性：メタノール、エタノール、アセトン、
酢酸エチル、エチルエーテル、クロロホルム、ベンゼン
および四塩化炭素には可溶、シクロヘキサンには僅溶、
水および石油エーテルには極めて難溶である。