JPS635044A - 環状ジヒドロキシ化合物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は新規の環状ジヒドロキシ化合物とそれの製造方
法に関するものである。

ある種のシス１，２−ジヒドロキシシクロへキサジエン
は新規ポリマーの製造において有用である。

我々の欧州特許明細書Ａ７６６０６　Ｂにおいては。

シュー１モナス・プチダ種の突然変異体菌株、特にＰ、
プチダＮＣＩＢＩ　Ｉ　７６７およびＮＣｌＢ１１６８
０の突然変異体を使って芳香族化合物からその種のジヒ
ドロキシシクロへキサジエンを製造する方法が開示され
ている。この方法において含まれる反応を触媒する酵素
は芳香族ジオキシクゞナーゼであり、これはある種の芳
香族化合物と酸素との間の反応、例えば、々ンぜンと酸
素との間の以下の反応を触媒する。

Ｐ、プチダＮＣＩＢＩ　１７６７およびＮ０ＩＢ１１６
１３０のような菌株が芳香族と一緒に養われるとき、ジ
ヒドロオキシシクロへキサジエン化は、それらが迅速に
さらに、カテコールを経て中間的代謝の生成物へ酸化さ
れるので、蓄積することがない。しかし我々の欧州明細
書７６６０６においては、微生物の突然変異体な芳香族
基質へ露出てるときに、ジヒはロキシシクロへ奔サシエ
ンを酸化でキス、そグ）結果として、これらの化合物が
蓄積する、それら微生物突然変異体がいか疋して生成さ
れるかヲ述べられている。これらの突然変異体のうちの
あるものは、芳香族をジヒドロキシシクロへキサジエン
へ転化するのに必要とされる芳香族ジヒドロゲナーゼ酵
素の活性を誘発させるべきである場合には、ベンゼンま
たはトルエンの存在下でｍｆｆ１させねばならない。突
然変異体のうち力あるものは、ジヒドロキシシクロへキ
サジエンの生成ヲひきおこす酵素について構成！！Ｅ　
（Ｃ０ｎ５　ｔｉ　ｔｕｔｉｖｅ　）である（「構成註
白株（ｃｏｎｓｔｉｔｕｔｉｖｅ　５ｔｒａｉｎ）Ｊこ
れらの構成性菌株はジヒドロオシシクロへキサジエンを
生成させるためのａ１■以ってのＰ素誘導な必要としな
い。

本発明の分割特許島において我々は、芳香族または置換
芳香族化合物を１．２−ジヒドロオシシクロヘキサ−３
，５−：）エン環を含む相当環状ジヒト“ロキシ化合物
へ転化することができる酵素を含むシュードモナス・プ
チダの細胞を生成させる改良方法を開示しており、その
方法は、シュー１モナス・プチダの第一突然！　、ｙ！
０体菌株（後で定義する）の細胞を、芳香族または置換
芳香族化合物を相当する環状ジヒドロキシ化合物へ転化
できろ酵素の誘導をひきおこし、かつ自らはその酵素の
だめの基質ではない、ベンゼンまたはトルエン以外の、
誘導物質化合物を含む媒体の中で増殖させることから成
る。

文献において記述されている、芳香族から環式ジヒドロ
キシ化合物を生成させる別の方法は、ギブソ７Ｄ、Ｔ、
らにより、Ｂ　ｔｏｃｈｅｍｔｓｔｒｙ　、　２　、１
９７０　。

１６２６−１６３０　Ｋ記載されるものである。

欧州特許７６６０６Ｂの方法は、特に、本特許願の親特
許顧の方法てよって生成される微生物細胞を使２て実施
するときには、芳香族化合物の転化が達成されることを
可能にして、いくつかの興味アル新しい環状ジヒト９０
キシ化合物を製造することができる。

本発明によると、我々は一般式 をもつ化合物を提供するが、式中、Ｒは−Ｇ　）　＋７
ハライ１基、−０アルキル基あるいは一０７エ二ル基で
ある。

本発明による好ましい化合物はＲが一〇Ｆ３であるもの
である。

さらに本発明てよると、我々は一般式 をもつ環状ジヒドロキシ化合物の製造方法を提供し、式
中、Ｒは一〇トリハライド、−〇アルキル。

あるいは−０フエニル基であり、その方法は、−エネル
ギー源とを、クキ−１−１：ナス・プチダの第一突然変
異体菌株または構成性突然変異体菌株（ともに後で定義
する）である菌株へ、その菌株細胞の増殖をほとんどま
たは全く支持することのない培地の中で供給することか
ら成る。

本発明の好ましい化合物が本発明の方法によって製造さ
れるべきときには、置換芳香族化合物中のＲは一〇Ｆ３
である。

第−突然変異一株はシュート２モナス・グチ〆の菌株で
あり： ｌａｌ　　その中で、芳香族または置換芳香族化合物を
相当する環状ジヒドロオキシ化合物へ転化できる酵素が
誘導されることができ、 （向　それはベンぜンまたはトルエン上で増殖すること
ができず、そして、 ｔｃ＋　　それはベンゼンまたはトルエン上で増殖でき
るＰ、プチダの菌株から誘導される。

構成性突然変異体はＰ、プチダの第一突然変異体菌株か
ら生成され、芳香族または置換芳香族化合物を相当する
虚状ジヒはロキシ化合物へ転化する酵素について構成性
である。

好ましくは第一突然変異体菌株は英国スコツトラフ’　
ｆ　、　ＴバディーンのＮａｔｉｏｎａｌ　ｃｏｌｌｅ
ｃｔｉｏｎｏｆ　Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ　Ｂａｃｔｅｒ
ｉａ、　’ｒｏｒｒｅｙ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈＳｔａｔｉ
ｏｎ　Ｋおイテ保存されたＮＣＩＢＩ１６８０　　また
はＮＣＩＢＩ　１７６７から導かれる。

本発明の方法のための適当なエネルギー源の例はエタノ
ールのようなアルコール、酢酸ノヨ５　ｔｘカルボン酸
、およびグルコースのような炭水化物を含む。好ましい
エネルギー源はエタノールと酢酸である。

本発明の方法または工程における第一突然変異体菌株と
してきわめて適当である一株は、シュードモナス・プチ
ダＮＣｌＢ１１６８０または好ましくはシュートゝモナ
スｅプチダＮＣｌＢ１１７６７をそれらの突然変異発生
条件下で処理し、増殖用の単独炭素源としてトルエンま
たはベンゼンをもはや利用することができず、かつ、増
殖時に、炭素源としてピルビン酸を含む液状培地の中で
、トルエンの存在下で、２６５μｍにおいてＵＶ吸収ピ
ークをもつ物質を分泌する、突然変異体菌株を得ること
Ｋよって、調製することができる。この突然変異は化学
的手段および／または物理的手段によって行なわせても
よい。化学的突然変異は、例えば、ソノ微生物をＮ−メ
チル−Ｎ′−ニトロソグアニジンで以て処理テることに
よって行なわせてもよい。

例えは、オルンストンニよルＪｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｂ
ｉＯＩＯ−ｇｉｃａｌ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、　１９６
６　、２４１巻、３８０Ｑ−３８１０頁に記載されてい
るとおりである。物理的突然変異は電磁輻射、例えばＵ
Ｖ光によって行なわせてもよい。

本発明の方法において使用するための構成性突然変異体
菌株は、シュードモナス・プチダＮＣｌＢ１’−１７６
７の第−突然変異体一株を前述のとおりの突然変異発生
条件の下で処理し、芳香族化合物の存在しない状態での
増殖の後に芳香族化合物から環状ジヒドロキシ化合物を
生成させる能力をもつ菌を得ることによって、適切にｖ
４製される。突然変異処理生成物からの適当な構成性菌
株の選択は、炭素源としてピルビン酸またはグルコース
を含む固体寒天培地上で、突然変異後の糾胞な増殖′ｆ
ることによって容易にさせシ）ことができる。増殖後、
寒天ぺ）　１３皿上のコロニーにカテコール水中浴ｉを
スグレーし、迅速Ｖｒ黄色／緑色に変る細胞のコロニー
は、カテコールを２−ヒトゝロキシムコン酸セミアルデ
ヒドへ転化する酵素にとって構成性（Ｃ０ｎ５　ｔｉ　
ｔｕｊｉｖｅ）である〔ノザ＊　、　’ｒｏｐｉｃｓ　
１ｎｃｕｒｒｅｎｔ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　（英語版）
　】９７９，７８巻。

１４５−１８６頁〕。この酵素はシュードモナス−プチ
ダＮＣｌＢ１１６８０およびシュー戸モナス・プチダＮ
ｃＩＢ１１７６７　Ｆおけるベンゼンの醇化的劣化の諸
段階の一つを触媒し、我々は、ベンゼンを環状ジヒドロ
キシ化合物へ転化する酵素とその表現において関係づけ
られることを発見した。従って、カテコールへ露出時に
緑色に変る細胞は望ましい構成性菌株である。

構成性突然変異体菌株はグルー−スおよびカサミノ酸（
ｃａｓａｍｉｎｏ　ａｃｉｄ）のような炭素源による異
化産物抑制を受けやすい。その種の異化産物抑制を受け
にくい改良された構成性自株は前述のとおりの処理によ
るさらにその後の構成性菌株突然変異によって得てもよ
い。この改良構成性菌株は、炭素源としてグルコースお
よびカサミノ酸の混合物を含む寒天培地上の突然変異処
理にかけられた構成性菌株のコロニーを増殖することに
よって検出することができ、カテコールへ露出時に黄色
／緑色の変化をおこすそのコロニーは改善された構成性
菌株から成る。

第一突然変異体が本発明の親特許願の方法によって生成
されるときには、その突然変異体菌株の細胞は慣用的な
増殖培地（誘導物質化合物を含むよう変性された）の中
で、連続式、回分式、あるいは供給式バッチ（ｆｅｄ　
−ｂａｔｃｈ　）　　式の技法で増殖させてよい。

本発明の方法において用いるための第一突然変異体菌株
が増殖され得る増殖培地は鉱物塩水溶液と適当な炭素源
とから成る。炭素源は例えば酢酸、グルコースまたはエ
タノールであってよい。炭素源の濃度は広い範囲にわた
って変えることができるが、−船釣には１％（重量／重
量）と２０％（重量／重量）の間にある。酸素または酸
素含有ガスがこの増殖期間中に存在せねばならない。増
殖期間中の培地温度は相当に変動してもよいが、普通は
２５℃から３５℃の範囲にある。培地のｐＨは増殖中に
５．５から８．０、好ましくは６．５から７．５の範囲
に保たれる。培養の大きさは例えば１．５ｔと５００６
との間でかなり変えられる。

増殖期間に続いて、細胞は本発明の方法の中で使用され
る。細胞は例えは遠心分離または凝集沈澱によって収獲
してもよく、あるいは直接に本発明の方法の中で便用し
てよい。細胞を収獲するときには、細胞を、著しい細胞
増殖を支持することがない鉱物塩溶液、例えば燐酸塩ま
たは緩衝剤の溶液の中、あるいは、慣用的ではあるが一
種または一種以上の必須壺素に欠けるかまたはほとんど
含まない増殖培地の中、で古層懸濁させる。代表的には
、基懸濁細胞の一度は乾燥重量で１から３０’ｔ／ｌで
ある。細胞は２０℃から４０℃の温度に保たれ、ｐＨは
６，５と８．５の間に保たれる。酸素または酸素含有ガ
スは、酸素溶解ガス良度が飽和の１％より大きく保たれ
るよう、細胞懸濁液へ添加される。適当であるエネルギ
ーは、その渋皮が適当原皮、好ましくは０．０５％（重
量／重量）と０．５％（重量／重量）の間で保たれるよ
う、細胞８！〜液へ供給される。

本発明の方法において突然変異体菌株の培養体へ置換芳
香族化合物を添加する速度は毎時、細胞乾燥型ｉ１？あ
たり１代表的には約０．５から１０？である。エネルギ
ー源添加速度は転化中に変えてもよいが１代表的にシま
、毎時、細胞乾燥電食１１あたり０．１から２．Ｏ？の
範囲にある。この期間の後、細胞を遠心分離および／ま
たは凝集沈澱によって除く・新しい細胞を上澄液へ添加
し、この工程を繰返す。この工程の終りにおいて、上澄
液は代表的には本発明の化合物を約１０５’／ｌと５０
ｐｉｔの間で含む。

本発明の方法によって生成される新しい環状ジヒドロキ
シ化合物は好ましくはその水性反応混合物から適当な極
性溶剤による浴剤抽出によって抽出さｒＬる。使用して
よい極性溶剤の例は、なかでも、酢酸エチル、ジエチル
エーテル、および塩化メチンを含む。さらに好ましくは
、連続式抽出法を用いる。しかし、例えば水性培地を細
胞分離後に蒸発させ、残留物を適当溶剤、例えばメタノ
−ル、エタノールまたは塩化メチレンの中で溶解するこ
との可能性を、我々は排除するものではない。

本発明の方法によってつくられ２）ジヒドロキシ化合物
はそｎらの誘導体、例えば酢酸塩、安息香酸、ピバリン
ｆＲ＠、炭酸塩へ転化させてもよく。

それらの誘導体はそれらのポリマーおよびコピリマーへ
転化させることができる。

本発明の寄「シい化合物は、薬、除草剤および殺虫剤の
製造中間体として、あるいは、例えばある種の天然産物
が合成され得るキラル・シンンン（ｃｈ　１ｒａｌ　５
ｙｎｔｈｏｎ　）として有用である、フェノール類およ
びカテコール類を製造するのに使用できる。

増殖培地 Ｊｏｕｒｎａｌ　Ｏｆ　ＧｅｎｅｒａＩＭ　ｉｃｒｏｂ
ｔｏｌｏｇｙ　。

１９００．２３巻、４５７−４６９頁に記載のとおり。

Ｊ、Ｈ，ミラーによろＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ　ｉｎＭ
ｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｇｅｎｅｔｉｃｓ　”　Ｃ１９７２
年、ゴールドゝ・スプリングのハーバ−研究所にューヨ
ーク）出版〕に記載のとおり。

シュードモナス・プチダＮＣＩＢＩ］７６７をルリ了液
状媒体中で初期指数生長相まで増殖させた。

細胞を遠心分離によって収獲し、１■のＮ−メチル−Ｎ
’−ニトロ−Ｎ−ニトロソ−／７ニジン（ＮＴＧ）を含
むｐＨ５，５の２５ミリモル嬢度のクエン酸−クエン酸
ナトリウム緩衝液の２０ｒＩＬｌの中で、乾燥細胞重量
で０．２Ｐ／ｌの濃度で再懸濁させた。

４５分後３０℃において、細胞を遠心分離によって収獲
し、バクショップ・エルスＰン培地で以て２回洗滌し、
次に一晩この培地中で、３０℃において０．３％（重ｉ
／容＆）ピルビン酸ナトリウムを含むときに、増殖させ
た。連続稀釈を行なったのち、０．３ミリそル濃度のピ
ルビン酸ナトリウムを含むバクショップ・エルスぎン培
地寒天上にのせ、ノイント缶（ｐａ　ｉｎｔ　ｔｉｎ　
）中で保温した。各々は管壜中に０．５コのベンゼンを
含んでいた。

３０℃で３日後、１４４個の将来性のある突然変異体、
すなわち直径が０．５　ｍ以下のコロニーを取出し、０
．２％（重量／容積）ピルビン酸ナトリウムのバクショ
ップ・エルスダン培地寒天上テ再増殖させた。

これらの突然変異体の９０個を、２６０　ｎｍにおいて
吸収をもつ化合物をベンゼンから生成させるために、液
状培養（ｌ　１ｑｕｉｄ　ｃｕｌｔｕｒｅ　）で選別し
た。２６０ナノメートルにおいて３７の最大吸収をもつ
上澄液を与えた一つの突然変異体を、以後は便宜上突然
変異体菌株Ｂとよぶ。

突然変異誘発用に用いる手順は前述のとおりである。Ｎ
ＴＧで処理したのち、洗滌および稀釈した細胞をバクシ
ョップ・エルストゝン培地寒天と１０ミリモル濃度のピ
ルビン酸ナトリウムとの上にひろげた。３０℃で２日後
、コロニーにカテコールの水中溶液（０，５モル−度）
でスプレーを施こし。

５分後に黄色／緑色の変色ンおこしたものな選んだ。選
別した合計１．８Ｘ１０　　コロニーから、３５個の黄
色／緑色コロニーを選んだ。これらの各々ヲ０．３％（
重ｉ！−／容積）ピルビン酸ナトリウムを加えたバクシ
ョップ・エルストゝン培地の１６ｒｎｌの中で一晩増殖
させた。細胞を収獲し、０．４％（容積／容積）エタノ
ールを含むｐ）（７，８）２５　ｍＭ燐酸カリウム緩衝
液の３Ｏｎ／の中で再に、濁させた。

これらの培養体は２５０ｄの円にフラスコの中で、各々
０．５　ｒｎｌのトルエンの存在下において一晩保温し
た。上澄液をその後、２６５　ｎｍに吸収をもつ化合物
について検査した。２６５　ｎｍにおいて２５０の吸収
を与える構成突然変異体を選び、以後は便宜上、突然変
異菌株Ｃとよぶ。

突然変異菌株Ｃを３０℃においてルリア液状培地中で初
期指数的生長相まで増殖させ、収穫後、細胞を４０ｒｒ
Ｌｔのｏ、　１　モルＭｇ　５ｏ４−７　Ｈ２０の中で
再懸濁させた。５ｄの了りコートをカラス製ペトリ皿中
で４５秒間１．６μＷ／副２×１００の１１１１量でＵ
Ｖ照射した。細胞を次に、１０ミリモル濃度のピルビン
酸ナトリウムを加えたノでウショツプーエルストゝン培
地の５個の２０ゴアリコートの中で暗所において増殖さ
セタ。

３０℃において２日後、培養体に連続稀釈を施こし、７
５ミリそル県度のグルコースおよび１％（ｉ量／容積）
ビタミン遊離カサミノ酸（ＣａＳａ−ｍｉｎｏ　ａｃｉ
ｄ　）　（例えば米国ミシガン州デトロイトのデイフコ
社）を含むバクショップ・エルストン培地の上にひろげ
、さらに２日間３０℃において保温した。次に、コロニ
ーに前述のとおりカテコールでスプレーを施こし、黄色
／緑色コロニーを選別した。合計で４Ｘ１０’個の選別
コロニーから。

１０個を選び、７５ミリモルー度のグルコースおよび１
％（重ｔ／容積）カサミノ酸を含むノ（ウショップーエ
ルスＰン培地の１０１ｒＬｌＯ中で一晩、３０℃で増殖
させた。異化産物抑制による影響を突然変異体Ｃより受
けることが少ない構成性突然変異体が選ばれ、それは２
６５　ｎｍ　ｖｃおいて６１．２の吸収を与えた（同等
条件下の突然変異体菌株Ｃは１５．６の吸収を示した）
。この突然変異体は以後は便宜上、突然変異体菌株りと
よぶ。

本３＃明を以下の実施例によって例証する。

実施例 突然変異体りな、１％（京Ｊｌ／容積）ピルビン酸ナト
リウムを含むバクショップ・エルストン培地の２００ｔ
／中で後とうしながら３０℃で一晩増殖させた。その２
００ゴの培養体を次に、袈燐酸（２，２Ｐ／　ｔ、　　
Ｍｇ８０４番７Ｈ２０（０，８デ／ｌ　）　。

Ｋ２Ｓｏ、（０，４５ｔ／ｌ）、（ＮＨ，）２Ｓｏ４（
５Ｌ？／ｌ）。

Ｆｅ５０　　＠７ＨＯ（０，０４？／ｊ）、Ｃｕ５Ｏ，
−５Ｈ２０（Ｉダ／４）、ＭｎＳＯ４−４Ｈ２０（５〜
／４）、ＣａＣ０３（６５ｑＩ９／ｌ）を含み、４Ｍの
水酸化ナトリウムで以てｐＨ６，８へ調節し、た培地の
１０ｔＫ接梳するために使用した。これを５０　Ｏｒｐ
ｍにおいて攪拌し、２８℃で保ち、％ｖｖｍ、空気を添
加した。グルコースを４０％（重重／容積）Ｉ！に原溶
液から１７７６７時の速度で添加し、ｐＨを４Ｍ　−Ｎ
ａＯＨＴｔＣよる自動滴定によって６．８に保った。全
溶液を１２１℃で１時間オートクレーブ処理することに
より、使用前に殺−した。

１６時間後、醗酵槽中の細胞ａ度は５？／ｌであった。

コノ培養体の５ｔへ、２０ｒ１１１の無水アルコールを
添加した。ｐＨを７．３へ上げ、温度と攪拌をそれぞれ
２８℃と５　Ｏｒｐｍで維持した。空気を桶ｖｖｍ、で
添加した。１．１．１−）リフルオロトルエンな培養体
へ液として１２ｍ１／時の速度で添加した。１０ｒｎｌ
ドア、５ｒｎｌのエタノールの別の了りコートを２．５
時間後と３．５時間後に添力口した。７時間後、醗酵槽
内容物を遠心分離（１０，０ＯＯＧ、３０分間）にかけ
、上澄液を取り出した。これを６０℃の回転蒸発により
真空下で５ｔから０．５ｔへ虐縮し、欠に２ｔの塩化メ
チレンで以て２４時間、連続的に抽出した。この塩化メ
チレン溶液を真空下で２００ｍ／へ護縮し、十分なペン
タンを添加して結晶化をおこさせた。結晶（３４Ｐ）を
ヂ過により集め、真空下で乾燥した。

註記：シスー１．２−ジヒドロキシ−３−トリフルオロ
メチル−シクロヘキサ−３，５−ジエンは次の構造式を
もつ 生成物は次の特注をもっていた： １、融点　　９０−９１．５℃（補正せず）Ｃ４６，６
７４６，９ Ｈ３，９２４，０ ’ｍａｘ（液体フィルム）　　３３４０（−ＯＨ）。

１６６２．１６００（Ｃ：Ｃ）、１３１０゜１２７５．
１１７５，１１１０．１０００および８００ｃｙｎ−’ ４、　　Ｎ、ｍ、ｒ δＨ，＜０ＤＯｔ３．　ＴＭＳからｐｐｍ）４．０オ１
３８．５（０６） ５．質量分光分析 ｍ／２１８０においてモルイオ７，１６２，１５１゜１
４３および１３４において７ラグメント。

（外４名）

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、一般式▲数式、化学式、表等があります▼をもち、
   Ｒが−Ｃトリハライド、−Ｏアルキルあるいは−Ｏフェ
   ニル基である、化合物。 ２、ＲがＣＦ＿３である、特許請求の範囲第１項に記載
   の化合物。 ３、一般式▲数式、化学式、表等があります▼をもち、
   式中、Ｒが−Ｃトリハライド、−Ｏアルキルあるいは−
   Ｏフェニル基である環状ジヒドロキシ化合物の製造方法
   であつて、 一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼をもつ相当置換芳香
   族化合物とエネルギー源とを、シュードモナス・プチダ
   の第一突然変異体菌株あるいは構成性突然変異体菌株（
   ともに後で定義する）である菌株へ、その菌株の細胞の
   増殖をほとんどまたは全く支持することがない培地の中
   で供給することから成る、方法。 ４、置換芳香族化合物と生成物がＲが−ＣＦ＿３である
   式をもつ、特許請求の範囲第３項に記載の方法。 ５、エネルギー源がエタノールまたは酢酸である、特許
   請求の範囲第３項または第４項に記載の方法。 ６、第一突然変異体菌株がシュードモナス・プチダ菌株
   ＮＣＩＢ１１６８０またはＮＣＩＢ１１７６７から誘導
   される、特許請求の範囲第３項から第５項のいずれかに
   記載の方法。 ７、培地中の細胞濃度が１から３０ｇ乾燥重量／ｌの範
   囲にある、特許請求の範囲第３項から第６項のいずれか
   に記載の方法。 ８、温度が２０℃から４０℃の範囲にある、特許請求の
   範囲第３項から第７項のいずれかに記載の方法。 ９、培地ｐＨが６．５と８．５の範囲にある、特許請求
   の範囲第３項から第８項のいずれかに記載の方法。 １０、酸素または酸素含有ガスを培地へ供給して酸素ガ
   ス溶液濃度を飽和の１％より大きく保つ、特許請求の範
   囲第３項から第９項のいずれかに記載の方法。