JPS6349075A - イプシロン―ポリ―ｌ―リシンを生産する菌株 - Google Patents
イプシロン―ポリ―ｌ―リシンを生産する菌株Info
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- RZLVQBNCHSJZPX-UHFFFAOYSA-L zinc sulfate heptahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.O.O.[Zn+2].[O-]S([O-])(=O)=O RZLVQBNCHSJZPX-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
- C12P21/02—Preparation of peptides or proteins having a known sequence of two or more amino acids, e.g. glutathione
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/465—Streptomyces
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- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
（産業上の利用分野）
本発明はイプシロン−ポリ−Ｌ−リシン（以下εＰＬと
略記する）を著量に生産する菌株とその使用方法に関す
る。
略記する）を著量に生産する菌株とその使用方法に関す
る。
（従来の技術とその問題点）
εＰＬは以下の構造式で表されるように、Ｌ−リシンの
ε位のアミノ基が、隣り合うし一リジンのカルボン酸と
アミド結合で結合した高分子化合物である。
ε位のアミノ基が、隣り合うし一リジンのカルボン酸と
アミド結合で結合した高分子化合物である。
当該物質は必須アミノ酸であるＬ−リシンのポリマーで
あるので安全性が高くかつカチオン含量が高いので特異
な物性を有する。従って、それらの性質を利用してトイ
レタリー用品、化粧品、飼料添加物、医薬、農薬、食品
添加物、電子材料等の用途が期待できる。
あるので安全性が高くかつカチオン含量が高いので特異
な物性を有する。従って、それらの性質を利用してトイ
レタリー用品、化粧品、飼料添加物、医薬、農薬、食品
添加物、電子材料等の用途が期待できる。
従来、当該物質はストレプトマイセス属に属するεＰＬ
産生菌であるストレプトマイセス・アルプラス・サブス
ピーシーズ・リジノボリメラス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃ
ｅｓ ａｌｂｕｌｕｓ ５ｕｂｓｐ、 ｌｙｓｉｎｏ
ｐｏｌｙｍｅｒｕｓ）隘３４６−Ｄ株（徽工研菌寄第３
８３４号）を培地に培養して、得られる培養物から分離
精製して得られている（特公昭５９−２０３５９号）。
産生菌であるストレプトマイセス・アルプラス・サブス
ピーシーズ・リジノボリメラス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃ
ｅｓ ａｌｂｕｌｕｓ ５ｕｂｓｐ、 ｌｙｓｉｎｏ
ｐｏｌｙｍｅｒｕｓ）隘３４６−Ｄ株（徽工研菌寄第３
８３４号）を培地に培養して、得られる培養物から分離
精製して得られている（特公昭５９−２０３５９号）。
しかし、この先願の菌株では培養液１２当りせいぜい０
．５ｇ程度のεＰＬの生産性しかなく、従って生産コス
トが高く、当該物質の広範な利用が妨げられていた。
．５ｇ程度のεＰＬの生産性しかなく、従って生産コス
トが高く、当該物質の広範な利用が妨げられていた。
本発明者らは、εＰＬを著量に生産する株を得、これを
用いてεＰＬを多量に製造することを目的として研究を
重ね、以下に述べる発明に到達した。
用いてεＰＬを多量に製造することを目的として研究を
重ね、以下に述べる発明に到達した。
（問題点を解決するための手段）
本発明はεＰＬを産生ずる菌株を変異処理して得られる
εＰＬを著量に生産する変異株を提供する。また、本発
明はこの変異株を使用して、これを培地で培養し、εＰ
Ｌを培養液中に著量に生成蓄積せしめ、これを採取する
ことを特徴とする。
εＰＬを著量に生産する変異株を提供する。また、本発
明はこの変異株を使用して、これを培地で培養し、εＰ
Ｌを培養液中に著量に生成蓄積せしめ、これを採取する
ことを特徴とする。
変異株はεＰＬを著量に生産する菌株であり、ストレプ
トマイセス・アルプラス・サブスピーシーズ・リジノボ
リメラスＮ１１３４６−Ｄ株のＬ −ＩＪシンのアナロ
グ物質に耐性を有する変異株、あるいは同菌のプラスミ
ド増幅性変異株が好ましい。
トマイセス・アルプラス・サブスピーシーズ・リジノボ
リメラスＮ１１３４６−Ｄ株のＬ −ＩＪシンのアナロ
グ物質に耐性を有する変異株、あるいは同菌のプラスミ
ド増幅性変異株が好ましい。
Ｌ−リシンのアナログ物質は、Ｓ−アミノエチル−Ｌ−
システイン、または、このＳ−アミノエチル−Ｌ−シス
テインにＬ−スレオニン、グリシン、Ｌ−ホモセリンお
よびＬ−メチオニンの中から選ばれる一種または数種の
物質を添加したものが好ましい。
システイン、または、このＳ−アミノエチル−Ｌ−シス
テインにＬ−スレオニン、グリシン、Ｌ−ホモセリンお
よびＬ−メチオニンの中から選ばれる一種または数種の
物質を添加したものが好ましい。
また、ストレプトマイセス・アルプラス・サブスピーシ
ーズ・リジノポリメラス１ｌｈ３４６−Ｄ株のプラスミ
ド増幅性変異株は、同菌にプラスミドを増幅させる処理
を施した菌株であり、例えばクロラムフェニコール処理
によりプラスミド増幅性変異株５０８３３株（微工研条
寄第１１１０号）が得られる。
ーズ・リジノポリメラス１ｌｈ３４６−Ｄ株のプラスミ
ド増幅性変異株は、同菌にプラスミドを増幅させる処理
を施した菌株であり、例えばクロラムフェニコール処理
によりプラスミド増幅性変異株５０８３３株（微工研条
寄第１１１０号）が得られる。
以下に本発明の詳細な説明する。
先ず、本発明の菌株の取得方法を述べる。Ｌ−リシンの
アナログ物質に耐性を有する変異株、例えばＳ−アミノ
エチル−Ｌ−システインの耐性変異株は、例えば以下の
方法で取得する。
アナログ物質に耐性を有する変異株、例えばＳ−アミノ
エチル−Ｌ−システインの耐性変異株は、例えば以下の
方法で取得する。
ストレプトマイセス・アルプラス・サブスピーシーズ・
リジノボリメラスｍ３４６−Ｄ株の胞子をトリス−マレ
イン酸緩衝液（ｐＨ９，０）に）懸濁し、これにＮ−メ
チル−Ｎ−ニトロ−Ｎｏ −ニトロソグアニジンを添加
する。
リジノボリメラスｍ３４６−Ｄ株の胞子をトリス−マレ
イン酸緩衝液（ｐＨ９，０）に）懸濁し、これにＮ−メ
チル−Ｎ−ニトロ−Ｎｏ −ニトロソグアニジンを添加
する。
これを振とう後、遠心分離機により胞子を集め、滅菌水
で洗浄し、培地に接種し、振とう培養して菌を生育させ
る。菌を含む培地（以下、培養液という）を希釈する。
で洗浄し、培地に接種し、振とう培養して菌を生育させ
る。菌を含む培地（以下、培養液という）を希釈する。
次に、Ｓ−アミノエチル−Ｌ−システイン、あるいはこ
れにグリシン、Ｌ−スレオニン、Ｌ−ホモセリン、Ｌ−
メチオニンのアミノ酸類から一種あるいは数種を選んで
前記培地と同じ組成の寒天培地に添加する。
れにグリシン、Ｌ−スレオニン、Ｌ−ホモセリン、Ｌ−
メチオニンのアミノ酸類から一種あるいは数種を選んで
前記培地と同じ組成の寒天培地に添加する。
その際、寒天培地１〜ｌ当り０．５〜ｌ Ｏｍｇ、好ま
しくは２ｍｇの濃度になるようにＳ−アミノエチル−Ｌ
−システイン、または同じ濃度になるようにＳ−アミノ
エチルーＬ−システインと寒天培地ｌ ｍｌ当り０．２
〜５ｍｇ、好ましくは１ｍｇの濃度になるように前記ア
ミノ酸類を加えたものを用いる。この寒天培地に、先の
培養希釈液を塗布する。この寒天培地を保温した後、コ
ロニーとして生育した菌株がＳ−アミノエチル−Ｌ−シ
ステイン耐性変異株である。このとき、Ｓ−アミノエチ
ル−Ｌ−システインのみを添加した寒天培地で生育した
菌株が耐性変異株８１５１２株であり、Ｓ−アミノエチ
ル−Ｌ−システインにグリシンを添加した寒天培地に生
育した菌株が耐性変異株１１０１１Ａ−１株（微工研条
寄第１１０９号）であり、さらに、Ｓ−アミノエチル−
Ｌ−システインにＬ−スレオニンを添加した寒天培地で
生育した菌株が耐性変異株８１５０２株である。
しくは２ｍｇの濃度になるようにＳ−アミノエチル−Ｌ
−システイン、または同じ濃度になるようにＳ−アミノ
エチルーＬ−システインと寒天培地ｌ ｍｌ当り０．２
〜５ｍｇ、好ましくは１ｍｇの濃度になるように前記ア
ミノ酸類を加えたものを用いる。この寒天培地に、先の
培養希釈液を塗布する。この寒天培地を保温した後、コ
ロニーとして生育した菌株がＳ−アミノエチル−Ｌ−シ
ステイン耐性変異株である。このとき、Ｓ−アミノエチ
ル−Ｌ−システインのみを添加した寒天培地で生育した
菌株が耐性変異株８１５１２株であり、Ｓ−アミノエチ
ル−Ｌ−システインにグリシンを添加した寒天培地に生
育した菌株が耐性変異株１１０１１Ａ−１株（微工研条
寄第１１０９号）であり、さらに、Ｓ−アミノエチル−
Ｌ−システインにＬ−スレオニンを添加した寒天培地で
生育した菌株が耐性変異株８１５０２株である。
また、プラスミド増幅性変異株は、例えば以下の方法で
取得する。ストレプトマイセス・アルプラス・サブスピ
ーシーズ・リジノボリメラス患３４６−Ｄ株あるいは、
Ｓ−アミノエチル−Ｌ−システイン耐性変異株を培地に
接種し、振とう培養した後にクロラムフェニコールを添
加し、培養を続ける。遠心分離して菌体を集め、洗浄し
た後、寒天培地に菌を塗布する。静置培養した後、ブド
ウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ
）を含む普通寒天培地を重層し、さらに培養し生成した
ブドウ球菌の生育阻止円の大きな株が、目的のブラズミ
ド増幅性ｃＰＬ高生産株、すなわち、プラスミド増幅性
変異株５０８３３株（微工研条寄第１１１０号）である
。これらの変異株のうち、１１’０１１Ａ−１株および
５０８３３株の苗字的性質を示すと次の通りである。
取得する。ストレプトマイセス・アルプラス・サブスピ
ーシーズ・リジノボリメラス患３４６−Ｄ株あるいは、
Ｓ−アミノエチル−Ｌ−システイン耐性変異株を培地に
接種し、振とう培養した後にクロラムフェニコールを添
加し、培養を続ける。遠心分離して菌体を集め、洗浄し
た後、寒天培地に菌を塗布する。静置培養した後、ブド
ウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ
）を含む普通寒天培地を重層し、さらに培養し生成した
ブドウ球菌の生育阻止円の大きな株が、目的のブラズミ
ド増幅性ｃＰＬ高生産株、すなわち、プラスミド増幅性
変異株５０８３３株（微工研条寄第１１１０号）である
。これらの変異株のうち、１１’０１１Ａ−１株および
５０８３３株の苗字的性質を示すと次の通りである。
（１） 形態学的性質
シュークロース・硝酸塩寒天培地上で３０℃、１０日間
生育したｌｌ０ＩＩＡ−１株および５０８３３株の気菌
糸および基生菌糸を顕微鏡で観察した結果を次に示す。
生育したｌｌ０ＩＩＡ−１株および５０８３３株の気菌
糸および基生菌糸を顕微鏡で観察した結果を次に示す。
■ 胞子形成菌糸の分枝法および形態：単純分枝、閉鎖
らせん状（ｃｌｏｓｅｄ ５ｐｉｒａｌ）■ 胞子の数
二 数十個 ■ 胞子の表面構造および大きさ： 胞子は円ないし楕円形で大きさは約１．２〜１．５μで
あり、その表面構造はスバイニ−（Ｓｐｉｎｙ）である
。
らせん状（ｃｌｏｓｅｄ ５ｐｉｒａｌ）■ 胞子の数
二 数十個 ■ 胞子の表面構造および大きさ： 胞子は円ないし楕円形で大きさは約１．２〜１．５μで
あり、その表面構造はスバイニ−（Ｓｐｉｎｙ）である
。
■ Ｔ便毛胞子、菌核および胞子のうの有無存在が認め
られない。
られない。
■ 胞子柄の着生位置： 気菌糸上
（２）各種培地上における生育状態
下記の各種培地上における性状はそれぞれ３０゛Ｃで１
０〜１４日間培養後の観察結果である。
０〜１４日間培養後の観察結果である。
イ）１１０１１Ａ−１株（倣工研条寄第１１０９号）口
）５０８３３株（微工研条寄第１１１０号）（３）生理
的性質 １１０１１Ａ−１株および５０８３３株の生理的性質は
次の通りである。
）５０８３３株（微工研条寄第１１１０号）（３）生理
的性質 １１０１１Ａ−１株および５０８３３株の生理的性質は
次の通りである。
■ 生育温度範囲
約１５〜４０℃。生育最適温度：３０℃付近。
■ ゼラチンの液化、でん粉の加水分解および脱脂牛乳
のペプトン化： すべで陽性 ■ 脱脂牛乳の凝固： 陰性 ■ メラニン様色素の生成 チロシン寒天培地上では褐色の色素を生成する。
のペプトン化： すべで陽性 ■ 脱脂牛乳の凝固： 陰性 ■ メラニン様色素の生成 チロシン寒天培地上では褐色の色素を生成する。
■ 細胞壁組成
細胞壁組成成分中のジアミノピメリン酸の型についてベ
ラカー（Ｂｅｃｋｅｒ）らの方法〔アプライド・マイク
ロバイオロジー第１３巻第２３６頁（１９６５年〕参照
〕により分析した結果、Ｌ、 Ｌ型であった。
ラカー（Ｂｅｃｋｅｒ）らの方法〔アプライド・マイク
ロバイオロジー第１３巻第２３６頁（１９６５年〕参照
〕により分析した結果、Ｌ、 Ｌ型であった。
（４）各種炭素源の同化性（プリドハム・ゴツトリープ
寒天培地上） Ｌ−アラビノース − Ｄ−キシロース − Ｄ−グルコース 士 り−フラクトース ＋ Ｌ−ラムノース − Ｄ−ガラクトース ＋ シュークロース − ラフィノース − Ｄ−マンニトール ＋ ｉミーイノシトール ＋ サリシン − 註）＋：同化する、 −二同化しない。
寒天培地上） Ｌ−アラビノース − Ｄ−キシロース − Ｄ−グルコース 士 り−フラクトース ＋ Ｌ−ラムノース − Ｄ−ガラクトース ＋ シュークロース − ラフィノース − Ｄ−マンニトール ＋ ｉミーイノシトール ＋ サリシン − 註）＋：同化する、 −二同化しない。
以上記述したように、本発明の変異株の菌学的性質は原
菌株であるストレプトマイセス・アルプラス・サブスピ
ーシーズ・リジノポリメラスＮｃ３４６−Ｄ株の菌学的
性質と類似している。
菌株であるストレプトマイセス・アルプラス・サブスピ
ーシーズ・リジノポリメラスＮｃ３４６−Ｄ株の菌学的
性質と類似している。
次にこれらの方法で得られた変異株を用いて本発明方法
によりεＰＬを製造する。なお、文中の％は特に記さな
いかぎり重ｆｆｉ（ｇ）／容ｆｉ（ｍｊり％を示す。
によりεＰＬを製造する。なお、文中の％は特に記さな
いかぎり重ｆｆｉ（ｇ）／容ｆｉ（ｍｊり％を示す。
まず、得られた変異株を培地に接種して培養し、培養液
から生成蓄積したεＰＬを分離・精製する。
から生成蓄積したεＰＬを分離・精製する。
培地は炭素源、窒素源、無機塩、ビタミンが含まれてい
れば、いかなるものでもよいが、好ましくは炭素源とし
てブドウ糖５％、あるいはグリセリン５％を含み、窒素
源として硫酸アンモニウム、あるいはＬ−リシンあるい
はペプトンを含むものが良い。培養途中で炭素源、窒素
源を逐次添加してもよい。ｐＨは培養初期はｐＨ４，０
になるまで下がるにまかせ、その後水酸化ナトリウム水
溶液等のアルカリでｐ）（４，０を維持するようにして
も良い。培養液から遠心分離機あるいはフィルターで国
体を除いた後、濾過液を精製・脱色し、これを濃縮する
。濃縮液からアセトン、エタノール等の有機溶媒でεＰ
Ｌを晶析する。
れば、いかなるものでもよいが、好ましくは炭素源とし
てブドウ糖５％、あるいはグリセリン５％を含み、窒素
源として硫酸アンモニウム、あるいはＬ−リシンあるい
はペプトンを含むものが良い。培養途中で炭素源、窒素
源を逐次添加してもよい。ｐＨは培養初期はｐＨ４，０
になるまで下がるにまかせ、その後水酸化ナトリウム水
溶液等のアルカリでｐ）（４，０を維持するようにして
も良い。培養液から遠心分離機あるいはフィルターで国
体を除いた後、濾過液を精製・脱色し、これを濃縮する
。濃縮液からアセトン、エタノール等の有機溶媒でεＰ
Ｌを晶析する。
（発明の効果）
本発明の変異株はεＰＬを著量に生産する能力を有して
おり、該変異株を培養することによって公知の菌株を用
いるよりも著量にεＰＬを産生ずることができるので、
εＰＬの生産コストを従来に比べて大幅に引き下げるこ
とができる。
おり、該変異株を培養することによって公知の菌株を用
いるよりも著量にεＰＬを産生ずることができるので、
εＰＬの生産コストを従来に比べて大幅に引き下げるこ
とができる。
（実施例）
以下、本発明を実施例につき詳細に述べる。
実施例Ｉ
Ｓ−アミノエチル−Ｌ−システイン耐性株の取得：
ストレプトマイセス・アルプラス・サブスピーシーズ・
リジノポリメラス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓａｌｂｕ
ｌｕｓ ５ｕｂｓｐ、 ｌｙｓｉｎｏｐｏｌｙｍｅｒｕ
Ｓ） ｍ ３４６−０株の胞子１白金耳ヱをトリス−マ
レインｌ用液（ｐ Ｈ９，０） ５ ｍｉに懸濁し、こ
れにＮ−メチル−Ｎ＝ニトロ−Ｎ“ −ニトロソグアニ
ジン’ｃ １．５ｍｇ／ｍｌの濃度になるように添加し
た。これを、３０分間、３０℃で振とうした後、遠心分
離機により胞子を集め、滅菌水で洗浄し、ブドウ糖５％
、硫酸アンモニウム１％、酵母エキス０．５％、リン酸
二水素−カリウム・７水塩０．１３６％、リン酸−水素
二ナトリウム・１２水塩０．１５８％、硫酸マグネシウ
ム・７水塩０．０５％、硫酸亜鉛・７水塩０．００４％
、硫酸第一鉄・７水塩０．００３％、ｐＨ６，８の培地
（以下第１培地と呼ぶ）５艷に接種し、−昼夜３０°Ｃ
で振とう培養し、菌を生育させた。
リジノポリメラス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓａｌｂｕ
ｌｕｓ ５ｕｂｓｐ、 ｌｙｓｉｎｏｐｏｌｙｍｅｒｕ
Ｓ） ｍ ３４６−０株の胞子１白金耳ヱをトリス−マ
レインｌ用液（ｐ Ｈ９，０） ５ ｍｉに懸濁し、こ
れにＮ−メチル−Ｎ＝ニトロ−Ｎ“ −ニトロソグアニ
ジン’ｃ １．５ｍｇ／ｍｌの濃度になるように添加し
た。これを、３０分間、３０℃で振とうした後、遠心分
離機により胞子を集め、滅菌水で洗浄し、ブドウ糖５％
、硫酸アンモニウム１％、酵母エキス０．５％、リン酸
二水素−カリウム・７水塩０．１３６％、リン酸−水素
二ナトリウム・１２水塩０．１５８％、硫酸マグネシウ
ム・７水塩０．０５％、硫酸亜鉛・７水塩０．００４％
、硫酸第一鉄・７水塩０．００３％、ｐＨ６，８の培地
（以下第１培地と呼ぶ）５艷に接種し、−昼夜３０°Ｃ
で振とう培養し、菌を生育させた。
その培養液をＭＳ溶液（Ｍｉ成は硫酸マグネシウム・７
水塩０．０５％、塩化ナトリウム０．５％、ツイーン８
００．０５％）で５００倍に希釈する。次いで、この希
釈培養液を、寒天培地１ ｍｌ当り２ｍｇの４度になる
ようにＳ−アミノエチル−Ｌ−システイン、またはこの
濃度になるようにＳ−アミノエチル−１５−システイン
および寒天培地ｌ−当り１■の４度になるようにグリシ
ンまたはＬ−スレオニンを添加した前述の第１培地と同
じ組成の寒天培地に塗布した。この寒天培地を、３０℃
で４８時間保温し、コロニーとして生育させ、Ｓ−アミ
ノエチル−Ｌ−システイン耐性変異株を得た。
水塩０．０５％、塩化ナトリウム０．５％、ツイーン８
００．０５％）で５００倍に希釈する。次いで、この希
釈培養液を、寒天培地１ ｍｌ当り２ｍｇの４度になる
ようにＳ−アミノエチル−Ｌ−システイン、またはこの
濃度になるようにＳ−アミノエチル−１５−システイン
および寒天培地ｌ−当り１■の４度になるようにグリシ
ンまたはＬ−スレオニンを添加した前述の第１培地と同
じ組成の寒天培地に塗布した。この寒天培地を、３０℃
で４８時間保温し、コロニーとして生育させ、Ｓ−アミ
ノエチル−Ｌ−システイン耐性変異株を得た。
このうち、Ｓ−アミノエチル−Ｌ−システインのみ添加
した寒天培地中の１株が８１５１２株である。Ｓ−アミ
ノエチル−Ｌ−システインにグリシンを添加した寒天培
地中の１株がｌｌ０ＩＩＡ−１株（微工研条寄第１１０
９号）である。Ｓ−アミノエチル−１５−システインに
Ｌ−スレオニンを添加した寒天培地中の１株が８１５０
２株である。
した寒天培地中の１株が８１５１２株である。Ｓ−アミ
ノエチル−Ｌ−システインにグリシンを添加した寒天培
地中の１株がｌｌ０ＩＩＡ−１株（微工研条寄第１１０
９号）である。Ｓ−アミノエチル−１５−システインに
Ｌ−スレオニンを添加した寒天培地中の１株が８１５０
２株である。
εＰＬの生産：
前記第１培地と同じ組成の培地５ ｍｌ、にＳ−アミノ
エチル−Ｌ−システイン耐性株８１５１２株を１白金耳
７接種し、３０℃で８日間振とう培養した。培養終了後
、培養液中のεＰＬの濃度をイツァキ（Ｉ ｔｚｈａｋ
ｉ）の方法で測定した。
エチル−Ｌ−システイン耐性株８１５１２株を１白金耳
７接種し、３０℃で８日間振とう培養した。培養終了後
、培養液中のεＰＬの濃度をイツァキ（Ｉ ｔｚｈａｋ
ｉ）の方法で測定した。
その結果を表１に示す。
実施例２および３
Ｓ−アミノエチル−Ｌ−システイン耐性変異株８１５１
２株の代わりに、Ｓ−アミノエチル−Ｌ−システイン＋
グリシン耐性変異株１１０１１Ａ−１株（倣工研条寄第
１１０９号）（実施例２）、Ｓ−アミノエチル−Ｌ−シ
ステイン＋Ｌ−スレオニン耐性変異株８１５０２株（実
施例３）を用いた以外は、実施例１と同様の方法で培養
し、εＰＬの濃度を同様の方法で測定した。
２株の代わりに、Ｓ−アミノエチル−Ｌ−システイン＋
グリシン耐性変異株１１０１１Ａ−１株（倣工研条寄第
１１０９号）（実施例２）、Ｓ−アミノエチル−Ｌ−シ
ステイン＋Ｌ−スレオニン耐性変異株８１５０２株（実
施例３）を用いた以外は、実施例１と同様の方法で培養
し、εＰＬの濃度を同様の方法で測定した。
その結果を表１に示す。
実施例４
プラスミド増幅性変異株の取得：
実施例１で得られたＳ−アミノエチル−Ｌ−システイン
耐性変異株を、実施例１に記載した第１培地と同じ組成
の培地５ ｍｌに接種する。
耐性変異株を、実施例１に記載した第１培地と同じ組成
の培地５ ｍｌに接種する。
これを３０℃２日間振とう培養した後に、クロラムフェ
ニコールを培養ン夜１１当り５０から５００ ｍｇ、好
ましくは１００ｍｇの；湿度になるように添加し、さら
に５から１０時間好ましくは８時間培養を続ける。
ニコールを培養ン夜１１当り５０から５００ ｍｇ、好
ましくは１００ｍｇの；湿度になるように添加し、さら
に５から１０時間好ましくは８時間培養を続ける。
遠心分離して菌体を集め、滅苗水あるいは生理食塩水で
洗浄した後、第１培地と同じ組成の培地に寒 天１．
７％を加えた寒天培地に菌を塗布する。
洗浄した後、第１培地と同じ組成の培地に寒 天１．
７％を加えた寒天培地に菌を塗布する。
８日間３０℃で静置培養した後、ブドウ球菌（Ｓｔａｐ
ｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）を含む普通寒天
培地を重層し、さらに１夜培養し生成したブドウ球菌の
生育阻止円の大きな株がプラスミド増幅性ｃＰＬ高生産
株である。この中の１株が５０８３３株（微工研条寄第
１１１０号）である。
ｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）を含む普通寒天
培地を重層し、さらに１夜培養し生成したブドウ球菌の
生育阻止円の大きな株がプラスミド増幅性ｃＰＬ高生産
株である。この中の１株が５０８３３株（微工研条寄第
１１１０号）である。
εＰＬの生産：
得られたプラスミド増幅性変異株５０８３３株を用いた
以外は、実施例１と同様の方法で培養し、εＰＬの濃度
も同様の方法で測定した。
以外は、実施例１と同様の方法で培養し、εＰＬの濃度
も同様の方法で測定した。
その結果を表１に示す。
比較例Ｉ
Ｓ−アミノエチル−Ｌ−システイン耐性変異株８２５１
２株の代わりに、ストレプトマイセス・アルプラス・サ
ブスピーシーズ・リジノポリメラスｍ３４６−Ｉ）株を
用いた以外は、実施例１と同様の方法で培養し、εＰＬ
のｔ農度を同様の方法で測定した。
２株の代わりに、ストレプトマイセス・アルプラス・サ
ブスピーシーズ・リジノポリメラスｍ３４６−Ｉ）株を
用いた以外は、実施例１と同様の方法で培養し、εＰＬ
のｔ農度を同様の方法で測定した。
その結果を表１に示す。
表１
実施例１ ０．６７
２ ０．８８
３ ０．７２
４ １．８０
比較例１ ０．２０
実施例５
実施例１に記載した第１培地と同じ組成の培地１．５１
に０．０５容量％のポリオキシアルキレングリコール誘
導体消泡剤を加え、Ｓ−アミノエチル−Ｌ−システイン
耐性変異株１１０１１Ａ−１株を前培養した培養？１５
０ ｍｌを接種し、６００ｒｐｍ、通気量２／／ｍｉｎ
、、３０℃で培養した。
に０．０５容量％のポリオキシアルキレングリコール誘
導体消泡剤を加え、Ｓ−アミノエチル−Ｌ−システイン
耐性変異株１１０１１Ａ−１株を前培養した培養？１５
０ ｍｌを接種し、６００ｒｐｍ、通気量２／／ｍｉｎ
、、３０℃で培養した。
２４時間後に、ブドウ糖５％、硫酸アンモニウム１％を
無凹的に添加した。ｐＨ低下後、ｐＨが４，０以下にな
らないように６Ｎ水酸化ナトリウムをｐＨコントローラ
ーで自動的に連続制御しながら加えた。培養後、遠心分
離機で菌体を除去し培養液中のεＰＬをアニオン交換樹
脂Ｉ ＲＡ−４０２、カチオン交換樹脂（ＲＣ−５０、
活性炭カルボラフイン５０ｗで精製して表２に示す結果
を得た。
無凹的に添加した。ｐＨ低下後、ｐＨが４，０以下にな
らないように６Ｎ水酸化ナトリウムをｐＨコントローラ
ーで自動的に連続制御しながら加えた。培養後、遠心分
離機で菌体を除去し培養液中のεＰＬをアニオン交換樹
脂Ｉ ＲＡ−４０２、カチオン交換樹脂（ＲＣ−５０、
活性炭カルボラフイン５０ｗで精製して表２に示す結果
を得た。
比較例２
Ｓ−アミノエチル−Ｌ−システイン耐性変異株１１０１
１Ａ−１株の代わりに、ストレプトマイセス・アルプラ
ス・サブスピーシーズ・リジノボリメラス＋１ｋＬ３４
６−Ｄ株を用いた以外は実施例５と同様の方法で培養し
、同様に精製して表２に示す結果を得た。
１Ａ−１株の代わりに、ストレプトマイセス・アルプラ
ス・サブスピーシーズ・リジノボリメラス＋１ｋＬ３４
６−Ｄ株を用いた以外は実施例５と同様の方法で培養し
、同様に精製して表２に示す結果を得た。
表２
実施例５ ４．７７ ９９．９
手続ネ１■正吉
昭和６１年 ８月２１８
事件との関係 特許出願人
〒５３０大阪府大阪市北区中之島三丁目６番３２号（２
０？）チッソ株式会社 代表者 野 木 貞 雄 ４、代理人 ｌ）明細ロ第１６頁第１９行目「５００倍」を、ｒ５０
００倍」に訂正する。
０？）チッソ株式会社 代表者 野 木 貞 雄 ４、代理人 ｌ）明細ロ第１６頁第１９行目「５００倍」を、ｒ５０
００倍」に訂正する。
２）同第１９頁第４〜５行目
「塩水で 洗浄した後、第１培地と同し組成の培地に寒
天１．７％を加えた寒天培地に閏を塗布する。」を、
「塩水で洗浄した後、第１培地と同し組成の培地に寒天
１．７％を加えた寒天培地に菌を塗布する。」に１１″
Ｅｔａ、 ウよ手続主甫正書（方式
） ％式％ １、事件の表示 昭和６１年特許願第１９２１５７号
３、補正をする者 事件との関係 特許出願人 〒５３０大阪府大阪市北区中之島三丁目６番３２号（２
０？）チッソ株式会社 代表者 野 木 貞 雄 ４、代理人 された発明の数を２に補正する。
天１．７％を加えた寒天培地に閏を塗布する。」を、
「塩水で洗浄した後、第１培地と同し組成の培地に寒天
１．７％を加えた寒天培地に菌を塗布する。」に１１″
Ｅｔａ、 ウよ手続主甫正書（方式
） ％式％ １、事件の表示 昭和６１年特許願第１９２１５７号
３、補正をする者 事件との関係 特許出願人 〒５３０大阪府大阪市北区中之島三丁目６番３２号（２
０？）チッソ株式会社 代表者 野 木 貞 雄 ４、代理人 された発明の数を２に補正する。
Claims (14)
- （１）イプシロン−ポリ−Ｌ−リシンを産生する菌株を
変異処理して得られるイプシロン−ポリ−Ｌ−リシンを
著量に生産する菌株。 - （２）イプシロン−ポリ−Ｌ−リシンを著量に生産する
菌株が、Ｌ−リシンのアナログ物質に耐性を有する菌株
である特許請求の範囲第１項記載の菌株。 - （３）Ｌ−リシンのアナログ物質が、Ｓ−アミノエチル
−Ｌ−システイン、または、このＳ−アミノエチル−Ｌ
−システインにＬ−スレオニン、グリシン、Ｌ−ホモセ
リン、およびＬ−メチオニンの中から選ばれる一種また
は二種以上の物質を添加したものである特許請求の範囲
第２項記載の菌株。 - （４）イプシロン−ポリ−Ｌ−リシンを著量に生産する
菌株が、ストレプトマイセス・アルブラス・サブスピー
シーズ・リジノポリメラス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ
ａｌｂｕｌｕｓｓｕｂｓｐ．ｌｙｓｉｎｏｐｏｌｙｍｅ
ｒｕｓ）Ｎｏ．３４６−Ｄ株のＳ−アミノエチル−Ｌ−
システインにグリシンを添加したものに耐性を持つ変異
株１１０１１Ａ−１株（微工研条寄第１１０９号）であ
る特許請求の範囲第３項記載の菌株。 - （５）イプシロン−ポリ−Ｌ−リシンを著量に生産する
菌株が、プラスミドを増幅させる処理を施した菌株であ
る特許請求の範囲第１項記載の菌株。 - （６）プラスミドを増幅させる処理がクロラムフェニコ
ール処理である特許請求の範囲第５項記載の菌株。 - （７）イプシロン−ポリ−Ｌ−リシンを著量に生産する
菌株がストレプトマイセス・アルブラス・サブスピーシ
ーズ・リジノポリメラス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓａ
ｌｂｕｌｕｓｓｕｂｓｐ．ｌｙｓｉｎｏｐｏｌｙｍｅｒ
ｕｓ）Ｎｏ．３４６−Ｄ株のプラスミド増幅性変異株５
０８３３株（微工研条寄第１１１０号）である特許請求
の範囲第６項記載の菌株。 - （８）イプシロン−ポリ−Ｌ−リシンを産生する菌株を
変異処理して得られるイプシロン−ポリ−Ｌ−リシンを
著量に生産する菌株を培地に培養し、培養液中にイプシ
ロン−ポリ−Ｌ−リシンを生成蓄積せしめ、これを採取
することを特徴とするイプシロン−ポリ−Ｌ−リシンを
著量に生産する菌株の使用方法。 - （９）イプシロン−ポリ−Ｌ−リシンを著量に生産する
菌株が、Ｌ−リシンのアナログ物質に耐性を有する菌株
である特許請求の範囲第８項記載の使用方法。 - （１０）Ｌ−リシンのアナログ物質が、Ｓ−アミノエチ
ル−Ｌ−システイン、または、このＳ−アミノエチル−
Ｌ−システインにＬ−スレオニン、グリシン、Ｌ−ホモ
セリン、およびＬ−メチオニンの中から選ばれる一種ま
たは二種以上の物質を添加したものである特許請求の範
囲第９項記載の使用方法。 - （１１）イプシロン−ポリ−Ｌ−リシンを著量に生産す
る菌株が、ストレプトマイセス・アルブラス・サブスピ
ーシーズ・リジノポリメラス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅ
ｓａｌｂｕｌｕｓｓｕｂｓｐ．ｌｙｓｉｎｏｐｏｌｙｍ
ｅｒｕｓ）Ｎｏ．３４６−Ｄ株のＳ−アミノエチル−Ｌ
−システインにグリシンを添加したものに耐性を持つ変
異株１１０１１Ａ−１株（微工研条寄第１１０９号）で
ある特許請求の範囲第１０項記載の使用方法。 - （１２）イプシロン−ポリ−Ｌ−リシンを著量に生産す
る菌株が、プラスミドを増幅させる処理を施した菌株で
ある特許請求の範囲第８項記載の使用方法。 - （１３）プラスミドを増幅させる処理がクロラムフェニ
コール処理である特許請求の範囲第１２項記載の使用方
法。 - （１４）イプシロン−ポリ−Ｌ−リシンを著量に生産す
る菌株がストレプトマイセス・アルブラス・サブスピー
シーズ・リジノポリメラス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ
ａｌｂｕｌｕｓｓｕｂｓｐ．ｌｙｓｉｎｏｐｏｌｙｍｅ
ｒｕｓ）Ｎｏ．３４６−Ｄ株のプラスミド増幅性変異株
５０８３３株（微工研条寄第１１１０号）である特許請
求の範囲第１３項記載の使用方法。
Priority Applications (7)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP61192157A JPS6349075A (ja) | 1986-08-19 | 1986-08-19 | イプシロン―ポリ―ｌ―リシンを生産する菌株 |
| DE8787111253T DE3785266T2 (de) | 1986-08-19 | 1987-08-04 | Stamm zur massenproduktion von epsilon-poly-l-lysin, methode, um diesen stamm zu gebrauchen, und methode zur herstellung von epsilon-poly-l-lysin. |
| EP87111253A EP0256423B1 (en) | 1986-08-19 | 1987-08-04 | Strain mass-producing epsilon-poly-l-lysine, a method for using its strain and a method for producing epsilon-poly-l-lysine |
| JP27773890A JPH03143398A (ja) | 1986-08-19 | 1990-10-18 | イプシロン―ポリ―ｌ―リシンの製造方法 |
| JP4548791A JPH0675501B2 (ja) | 1986-08-19 | 1991-02-19 | イプシロン−ポリ−ｌ−リシンを生産する菌株 |
| US07/864,183 US5294552A (en) | 1986-08-19 | 1992-04-03 | Strain mass-producing ε-poly-L-lysine |
| US08/200,361 US5434060A (en) | 1986-08-19 | 1994-02-23 | Method for producing ε-poly-L-lysine |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP61192157A JPS6349075A (ja) | 1986-08-19 | 1986-08-19 | イプシロン―ポリ―ｌ―リシンを生産する菌株 |
Related Child Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP27773890A Division JPH03143398A (ja) | 1986-08-19 | 1990-10-18 | イプシロン―ポリ―ｌ―リシンの製造方法 |
| JP4548791A Division JPH0675501B2 (ja) | 1986-08-19 | 1991-02-19 | イプシロン−ポリ−ｌ−リシンを生産する菌株 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6349075A true JPS6349075A (ja) | 1988-03-01 |
| JPH0342070B2 JPH0342070B2 (ja) | 1991-06-26 |
Family
ID=16286641
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP61192157A Granted JPS6349075A (ja) | 1986-08-19 | 1986-08-19 | イプシロン―ポリ―ｌ―リシンを生産する菌株 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6349075A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0557954A3 (en) * | 1992-02-26 | 1994-10-26 | Chisso Corp | A process for producing epsilon-poly-l-lysine |
| WO1998048033A1 (en) * | 1995-10-24 | 1998-10-29 | Chisso Corporation | STRAIN PRODUCING REMARKABLE AMOUNT OF ε-POLY-L-LYSINE AND PROCESS FOR PRODUCING ε-POLY-L-LYSINE BY USING THE SAME |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP7123414B2 (ja) | 2017-08-23 | 2022-08-23 | 公立大学法人福井県立大学 | クリック官能基をもつε－ポリ－Ｌ－リジン誘導体、その製法、及びその用途 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS61192158A (ja) * | 1985-02-21 | 1986-08-26 | Canon Inc | 画像読み取り装置 |
-
1986
- 1986-08-19 JP JP61192157A patent/JPS6349075A/ja active Granted
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS61192158A (ja) * | 1985-02-21 | 1986-08-26 | Canon Inc | 画像読み取り装置 |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0557954A3 (en) * | 1992-02-26 | 1994-10-26 | Chisso Corp | A process for producing epsilon-poly-l-lysine |
| WO1998048033A1 (en) * | 1995-10-24 | 1998-10-29 | Chisso Corporation | STRAIN PRODUCING REMARKABLE AMOUNT OF ε-POLY-L-LYSINE AND PROCESS FOR PRODUCING ε-POLY-L-LYSINE BY USING THE SAME |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0342070B2 (ja) | 1991-06-26 |
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