JPS63287484A - クレアチンアミジノヒドラーゼ、新規プラスミド及び微生物、酵素の製法及びクレアチニン含量の測定法 - Google Patents
クレアチンアミジノヒドラーゼ、新規プラスミド及び微生物、酵素の製法及びクレアチニン含量の測定法Info
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- JPS63287484A JPS63287484A JP63113706A JP11370688A JPS63287484A JP S63287484 A JPS63287484 A JP S63287484A JP 63113706 A JP63113706 A JP 63113706A JP 11370688 A JP11370688 A JP 11370688A JP S63287484 A JPS63287484 A JP S63287484A
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Classifications
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- C12N9/78—Hydrolases (3) acting on carbon to nitrogen bonds other than peptide bonds (3.5)
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
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Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は野生型酵素よりも安定であり、従って血清、血
漿又は尿中リクノアチニン宮蓋の酵素による測定の危め
により好適なりレアチンアミジノヒドロラーゼの突然変
異体に関する。
漿又は尿中リクノアチニン宮蓋の酵素による測定の危め
により好適なりレアチンアミジノヒドロラーゼの突然変
異体に関する。
酵素クレアチンアミジノヒドロラーゼ−ＥＣ３，！：）
−３−３はタレアチニン測定用に工業的に使用される・
これは特に臨床分析で、血清又は尿中に健康な生体の含
意とは異なるりＶアチニン含量が表れる腎−病の診断に
使用される。例んはクレアチ／による誘導下に後処理に
見合う重のクレアチンアミジノヒドロラーゼを製造する
ことができるシュードモナス徨のような微生物が公知で
あるが、達成される収率及び酵素の単離費用力ら依然と
して酵素の工業的使用全制限する要素となっている。西
ドイツ特許出願公開公報第３５００１８４号明細書に記
載されているように、クレアチンアミジノヒドロラーゼ
を：２−ドする遺伝子をシェードモナス・プチダから単
離し、例えばシラスミドルｎＲ３２２中ｉｃ移入するこ
とができる。Ｅ・コリー（Ｅ−ｃｏｌｉ）又はシェード
モナス・プチダ（ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｐｕｔｉｄ＆
）属の微生物の変形により、この構成性クレアチンア
ミジノヒドロラーゼを得ることができる・このクレアチ
ンアミジノヒドロラーゼの遺伝子工学的製造は誘発され
友、プラスミドを含有しない微生物からの単離より、よ
り効果的かつ容易に実施される。しかしこの方法は、こ
れかり得られる野生型＃木が限定され九洗浄剤安定性及
び熱安定性を有するにすぎず、従って臨床的試験法で使
用するために極めて好適であるとはいえないという欠点
を有する。
−３−３はタレアチニン測定用に工業的に使用される・
これは特に臨床分析で、血清又は尿中に健康な生体の含
意とは異なるりＶアチニン含量が表れる腎−病の診断に
使用される。例んはクレアチ／による誘導下に後処理に
見合う重のクレアチンアミジノヒドロラーゼを製造する
ことができるシュードモナス徨のような微生物が公知で
あるが、達成される収率及び酵素の単離費用力ら依然と
して酵素の工業的使用全制限する要素となっている。西
ドイツ特許出願公開公報第３５００１８４号明細書に記
載されているように、クレアチンアミジノヒドロラーゼ
を：２−ドする遺伝子をシェードモナス・プチダから単
離し、例えばシラスミドルｎＲ３２２中ｉｃ移入するこ
とができる。Ｅ・コリー（Ｅ−ｃｏｌｉ）又はシェード
モナス・プチダ（ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｐｕｔｉｄ＆
）属の微生物の変形により、この構成性クレアチンア
ミジノヒドロラーゼを得ることができる・このクレアチ
ンアミジノヒドロラーゼの遺伝子工学的製造は誘発され
友、プラスミドを含有しない微生物からの単離より、よ
り効果的かつ容易に実施される。しかしこの方法は、こ
れかり得られる野生型＃木が限定され九洗浄剤安定性及
び熱安定性を有するにすぎず、従って臨床的試験法で使
用するために極めて好適であるとはいえないという欠点
を有する。
本発明の課題は、公知技術の前記欠点を全くか又はごく
価かにしか有さないクレアチンアミジノヒドロラーゼ突
然変異体を製造することをある＠ 〔課題を解決するための手段〕こ の課題は、反応 りレアチン 十Ｈ２Ｏ→サルコシン＋尿素金野生型酵素
に相応して接触するクレアチンアミジノヒドロラーゼ突
然変異体によって解決され、これは野生型酵素に比べて
１０９位で少なくとも１個のアミノ酸交換が行なわれて
いること？：％徴とする・この交換はバリンによって変
換され友アミノ酸アラニンに関する。このように突然変
異された酵素は野生型酵素よりも遥かに良好な安定性を
有する。このアミノ酸交換は別とじて酵素活性を損うこ
となしにアミノ酸面でその他の突然変異が存在してもよ
く、その際もつと高い安定性が得られる。有利な酵素は
１０９位でのアミノ酸交換の外に更に１個のアミノ酸交
換を含む・ 本発明のその他の目的はプラスミドｐＢＴ１０９及びｐ
ＢＴ １１９である。これらは、野生型のクレアチンア
ミジノヒドロラーゼ遺伝子を含むが、その際両刀のプラ
スミドでＤＮＡ面で既にアミノ酸交換が酵素の１０９位
で及びｐＢＴ １１９ではその他の位置、すなわち６５
５位でＶａｌからＭｅ ｔｈの交換の形で、野生型遺伝
子中でこのアミノ酸をコードするトリプレット（Ｔｒｉ
ｐｌｅｔｔ ）の相応する交換によって確定されている
。ｐＢＴ １１９の配列決定（８ｅｑｕｅｎｚ ）によ
って、コード（ｔ［で配列の１０６６位でＧがＡに変わ
っているので（Ｇ→Ａ）、野生型のトリプレツ） ＧＴ
（）がｉｆラスミ）’ｐＢ’ｌ’ １０５）を含有し、
その他の有利な微生物Ｅ・コＩＪ −ＤＳＭ ４１０６
は本発明によれば！ラスミドｐＢＴ１１９’ｃｔ有する
。本発明によればその他の有利な微生物は、前記突然変
異を含むりＶアチンアミジノヒドロラーゼを構成性に発
現するＥ・コリー又はシェードモナス・プチダ属のよう
なものである。
価かにしか有さないクレアチンアミジノヒドロラーゼ突
然変異体を製造することをある＠ 〔課題を解決するための手段〕こ の課題は、反応 りレアチン 十Ｈ２Ｏ→サルコシン＋尿素金野生型酵素
に相応して接触するクレアチンアミジノヒドロラーゼ突
然変異体によって解決され、これは野生型酵素に比べて
１０９位で少なくとも１個のアミノ酸交換が行なわれて
いること？：％徴とする・この交換はバリンによって変
換され友アミノ酸アラニンに関する。このように突然変
異された酵素は野生型酵素よりも遥かに良好な安定性を
有する。このアミノ酸交換は別とじて酵素活性を損うこ
となしにアミノ酸面でその他の突然変異が存在してもよ
く、その際もつと高い安定性が得られる。有利な酵素は
１０９位でのアミノ酸交換の外に更に１個のアミノ酸交
換を含む・ 本発明のその他の目的はプラスミドｐＢＴ１０９及びｐ
ＢＴ １１９である。これらは、野生型のクレアチンア
ミジノヒドロラーゼ遺伝子を含むが、その際両刀のプラ
スミドでＤＮＡ面で既にアミノ酸交換が酵素の１０９位
で及びｐＢＴ １１９ではその他の位置、すなわち６５
５位でＶａｌからＭｅ ｔｈの交換の形で、野生型遺伝
子中でこのアミノ酸をコードするトリプレット（Ｔｒｉ
ｐｌｅｔｔ ）の相応する交換によって確定されている
。ｐＢＴ １１９の配列決定（８ｅｑｕｅｎｚ ）によ
って、コード（ｔ［で配列の１０６６位でＧがＡに変わ
っているので（Ｇ→Ａ）、野生型のトリプレツ） ＧＴ
（）がｉｆラスミ）’ｐＢ’ｌ’ １０５）を含有し、
その他の有利な微生物Ｅ・コＩＪ −ＤＳＭ ４１０６
は本発明によれば！ラスミドｐＢＴ１１９’ｃｔ有する
。本発明によればその他の有利な微生物は、前記突然変
異を含むりＶアチンアミジノヒドロラーゼを構成性に発
現するＥ・コリー又はシェードモナス・プチダ属のよう
なものである。
不発明による突然変異嘔れた酵素の製造は、自体公却の
遺伝子工学的方法により主として野生型遺伝子の配列を
有するが、少なくとも自然遺伝子の３５６位でデオ中シ
〜ヌクレオチｒＣの代りにＴをを有するクレアチンアミ
ジノ１ドロラーゼ遺伝子を含有する組換えＤＮＡを好適
な表現系で表現させることによって実施する。有利には
更にその他の位置で塩基を交換した遺伝子を表現する。
遺伝子工学的方法により主として野生型遺伝子の配列を
有するが、少なくとも自然遺伝子の３５６位でデオ中シ
〜ヌクレオチｒＣの代りにＴをを有するクレアチンアミ
ジノ１ドロラーゼ遺伝子を含有する組換えＤＮＡを好適
な表現系で表現させることによって実施する。有利には
更にその他の位置で塩基を交換した遺伝子を表現する。
特に有利には１０６３位にＧの代りにＡが存在するＯ
有利には組換えＤＮＡとしてプラスミド１０９、ＤＳＭ
４１０８ Ｐ又はｐＢＴ １１９、ＤＳＭ４１０７Ｐ
の１つを発現する＠しかし組換えＬＩＪＡとして西トイ
ｙ時Ｉｆｆｍ ６５００１８４ Ａ １ ’ｉ＋明ｍ薔
Ｖｃ公開され交野生型ｃｉ＃索用のＤＮＡ配列又は遺伝
暗号に工９同じアミノ酸配列をコードするそれと同じよ
うなものを含有する組換えＤＮＡを便用することもでき
るが、その際自然遺伝子の３５６位にＣの代りにデオキ
シリボヌクレオチドＴが含有さ几ている。この糧の組換
えＤＮＡで付加的に、酵素中で七の池のアミノ酸突然変
異を惹起するその他の＠基交換金含むことができる０そ
の際有利には１０６３位でＧがＡに交換されている。
４１０８ Ｐ又はｐＢＴ １１９、ＤＳＭ４１０７Ｐ
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ｙ時Ｉｆｆｍ ６５００１８４ Ａ １ ’ｉ＋明ｍ薔
Ｖｃ公開され交野生型ｃｉ＃索用のＤＮＡ配列又は遺伝
暗号に工９同じアミノ酸配列をコードするそれと同じよ
うなものを含有する組換えＤＮＡを便用することもでき
るが、その際自然遺伝子の３５６位にＣの代りにデオキ
シリボヌクレオチドＴが含有さ几ている。この糧の組換
えＤＮＡで付加的に、酵素中で七の池のアミノ酸突然変
異を惹起するその他の＠基交換金含むことができる０そ
の際有利には１０６３位でＧがＡに交換されている。
発現系としてはＥ・コリー又はシュードモナスプチダ属
の微生物が有利である。特に有利にはＥ・コリーｇＤｌ
：５６５４、ＤＳＭ ２１０２又はシュードモナスプチ
ダ、ＤＳＭ２１０６の微生物を使用する。その他の本発
明による製造法は、Ｅ・コリーＤＳＭ ４１０５及びＥ
・コリーＤ８Ｍ４１０６の有利な微生物の培１によって
特徴付ゆられる。
の微生物が有利である。特に有利にはＥ・コリーｇＤｌ
：５６５４、ＤＳＭ ２１０２又はシュードモナスプチ
ダ、ＤＳＭ２１０６の微生物を使用する。その他の本発
明による製造法は、Ｅ・コリーＤＳＭ ４１０５及びＥ
・コリーＤ８Ｍ４１０６の有利な微生物の培１によって
特徴付ゆられる。
本発明のその他の目的は血清、血清又は尿中のクレアチ
ニン含量を測定する友めに、野生型酵素よりも安定であ
る不発明による突然変異されたクレアチンアミジノヒド
ロラーゼで使用することをある。
ニン含量を測定する友めに、野生型酵素よりも安定であ
る不発明による突然変異されたクレアチンアミジノヒド
ロラーゼで使用することをある。
西ドイツ特許第６５ＵＯ１８４Ａ１号明則書に記載のク
ローン化されたクレアチンアミジノヒドロラーゼの研究
によって、酵素が下記反応順序の速度を決定する工４を
接触することが判明した〇 基質変換速度の上昇は、最適な条件下で酵素量の増加に
よって達成されない。この酵素は６７°Ｃで血清、血清
又は尿素中のクレアチニン含量を測定するための試験条
件下で限られ九安定性を有し、これによって前記温度で
基質変換の減少が起る。アラニンからバリンへの野生型
酵素の１０９のアミノ酸の突然変異を含む本発明による
クレアチンアミジノヒドロラーゼは、比較して種々の試
験条件（清浄剤添加）下でほぼ同じ出発譚索活注で第１
表に記載の比較実験結果が示すよりに既に者しく増強し
交情浄剤安定性を有する。ｌｌｌｋ通条件下での温度挙
動を第２表に表す◎ 第 ２ 表 種々の温度における最適条件下の酵素測定試験条件＝２
ＯミリＥｋ／ｌｏ緩衝剤、ｐＨ８，０１−クレアチンア
ミジノヒドロラーゼ野生型：ｉ、ｏｓｖ蛋白［／ｄ（８
，ＯＵ／４〕 ２−クレアチンアミジノヒドロラーゼ突然変異体：１．
１０〜ｔｉ白質／”（８−７Ｕ、Ａダ） （アミノ酸１０９−ＶａｌＪ 酵素１ｔ１１ｒ記試験条件下に恒温保愕し、引続き酵素
測定を組合せ試業”ハルンシュトツ２（Ｍａｒｎｓｔｏ
ｆｆ ）”（ＢＭ注文用商品番号１２４）７０）を使用
して冥施し友＠ この突然変異に加えてなおその他にアミノ酸突然変異を
Ｗする本発明によるクレアチンアミジノヒドロラーゼ＃
索は同様にほぼ同じ出発酵素活性において野生型酵素と
比してなお大きな安定性を有する（例１ 第６表）。
ローン化されたクレアチンアミジノヒドロラーゼの研究
によって、酵素が下記反応順序の速度を決定する工４を
接触することが判明した〇 基質変換速度の上昇は、最適な条件下で酵素量の増加に
よって達成されない。この酵素は６７°Ｃで血清、血清
又は尿素中のクレアチニン含量を測定するための試験条
件下で限られ九安定性を有し、これによって前記温度で
基質変換の減少が起る。アラニンからバリンへの野生型
酵素の１０９のアミノ酸の突然変異を含む本発明による
クレアチンアミジノヒドロラーゼは、比較して種々の試
験条件（清浄剤添加）下でほぼ同じ出発譚索活注で第１
表に記載の比較実験結果が示すよりに既に者しく増強し
交情浄剤安定性を有する。ｌｌｌｋ通条件下での温度挙
動を第２表に表す◎ 第 ２ 表 種々の温度における最適条件下の酵素測定試験条件＝２
ＯミリＥｋ／ｌｏ緩衝剤、ｐＨ８，０１−クレアチンア
ミジノヒドロラーゼ野生型：ｉ、ｏｓｖ蛋白［／ｄ（８
，ＯＵ／４〕 ２−クレアチンアミジノヒドロラーゼ突然変異体：１．
１０〜ｔｉ白質／”（８−７Ｕ、Ａダ） （アミノ酸１０９−ＶａｌＪ 酵素１ｔ１１ｒ記試験条件下に恒温保愕し、引続き酵素
測定を組合せ試業”ハルンシュトツ２（Ｍａｒｎｓｔｏ
ｆｆ ）”（ＢＭ注文用商品番号１２４）７０）を使用
して冥施し友＠ この突然変異に加えてなおその他にアミノ酸突然変異を
Ｗする本発明によるクレアチンアミジノヒドロラーゼ＃
索は同様にほぼ同じ出発酵素活性において野生型酵素と
比してなお大きな安定性を有する（例１ 第６表）。
従って本発明によるクレアチンアミジノヒドロラーゼ突
然変異体を用いて、クレアチニン測屋で野生型酵素の清
浄剤安定性及び熱安定性により生じる酵素活性の損失を
回避し、この糧の測定を従来可能であったより長い時間
に眞ってもａ案に実施することが可能である。改良され
た特性によりタレアテニン試験で酵素ｔを減らすことも
できる。
然変異体を用いて、クレアチニン測屋で野生型酵素の清
浄剤安定性及び熱安定性により生じる酵素活性の損失を
回避し、この糧の測定を従来可能であったより長い時間
に眞ってもａ案に実施することが可能である。改良され
た特性によりタレアテニン試験で酵素ｔを減らすことも
できる。
久に実施例につき本発明を詳説する。
例 １
Ｅ・コリーＤＳＭ ４１０５、’・コリーＤＳＭ４１０
６及び比較用にＥ・コリーＤＳＭ ３１４３（西ドイツ
特許第３５００１８４Ａ１号明細書）の細胞を１ｚ６Ｉ
酵桶中で一夜培養し次。
６及び比較用にＥ・コリーＤＳＭ ３１４３（西ドイツ
特許第３５００１８４Ａ１号明細書）の細胞を１ｚ６Ｉ
酵桶中で一夜培養し次。
培地
完全培地（酵母／ペプトンエキス）
０．４９６グルコース
１００ミリモル／ｊ燐識塩緩衝剤
８０００ ｒｐｍで１５分間遠心分離し友後に細胞倉７
レンチ・プｖｘ （Ｆｒｅｎｃｈ Ｐｒｅｓｓ ）中で
溶解し、クレアチンアミジノヒドロラーゼを分子帥〔セ
ファクリｈ （５ｅｐｈａｃｒｙｌ ） ８２Ｏ０ ）
を用いて分別することによって精製した。
レンチ・プｖｘ （Ｆｒｅｎｃｈ Ｐｒｅｓｓ ）中で
溶解し、クレアチンアミジノヒドロラーゼを分子帥〔セ
ファクリｈ （５ｅｐｈａｃｒｙｌ ） ８２Ｏ０ ）
を用いて分別することによって精製した。
得られ九酵素を第６表に記載し次条件で恒温保持し、引
続き組合せ試薬１ハルンシュトツフ”（ＢＭ注文用商品
番号１２４ ７７０）を使用して酵素測定を冥施し７ｔ
ａ 第３表に野生型＃索（西ドイツ時許第３５００１４８Ａ
Ｉ号明細畳−Ｅ・コト（Ｄ８Ｍ ３１４６）と比較した
本発明によるタレアチンアミシノヒドロラーゼ央然変異
体の安定性挙動を記載する。
続き組合せ試薬１ハルンシュトツフ”（ＢＭ注文用商品
番号１２４ ７７０）を使用して酵素測定を冥施し７ｔ
ａ 第３表に野生型＃索（西ドイツ時許第３５００１４８Ａ
Ｉ号明細畳−Ｅ・コト（Ｄ８Ｍ ３１４６）と比較した
本発明によるタレアチンアミシノヒドロラーゼ央然変異
体の安定性挙動を記載する。
列 ２
シラスミドｐＢＴ １０９を含有する微生物Ｅ・コリー
Ｄ８Ｍ ４１０５からの安定なりレアチンアミジノヒド
ロラーゼ突然変異体を西ドイツ特許第３５ ００１８４
ＡＩに記載しであるようにして１００１（Ｄｒｌｌｍ−
１）ｈら単離しｔ、比活性１０．４Ｕ／ａ９の蛋白質１
２１１ｉが得られた。これは収率６３％に相応する。
Ｄ８Ｍ ４１０５からの安定なりレアチンアミジノヒド
ロラーゼ突然変異体を西ドイツ特許第３５ ００１８４
ＡＩに記載しであるようにして１００１（Ｄｒｌｌｍ−
１）ｈら単離しｔ、比活性１０．４Ｕ／ａ９の蛋白質１
２１１ｉが得られた。これは収率６３％に相応する。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、野生型酵素のアミノ酸配列の１０９位でアラニンが
バリンによって変換されていることを特徴とする クレアチン＋Ｈ＿２Ｏ→サルコシン＋尿素 の反応を接触するクレアチンアミジノヒドロラーゼ。 ２、付加的に野生型酵素の１個又は数個のその他のアミ
ノ酸が突然変異されていることを特徴とする請求項１に
記載のクレアチンアミジノヒドロラーゼ。 ６、請求項１に記載のクレアチンアミジノヒドロラーゼ
に関する遺伝子を有することを特徴とするプラスミドｐ
ＢＴ１０９、ＤＳＭ４１０８Ｐ。 ４、請求項２に記載のクレアチンアミジノヒドロラーゼ
に関する遺伝子を有することを特徴とするプラスミドｐ
ＢＴ１１９、ＤＳＭ４１０７Ｐ。 ５、プラズミドｐＢＴ１０９を有することを特徴とする
微生物Ｅ・コリー、ＤＳＭ４１０５。 ６、プラスミドｐＢＴ１１９を有することを特徴とする
微生物Ｅ・コリー、ＤＳＭ４１０６。 ７、構成性に請求項１又は２のいずれか１項に記載のク
レアチンアミジノヒドロラーゼを生成することを特徴と
する、Ｅ・コリー又はシュードモナス・プチダ属の微生
物。 ８、公知の遺伝子工学的方法により好適な発現系で、自
然遺伝子の３５６位でＣの代りにデオキシリボヌクレオ
チドＴを有するクレアチンアミジノヒドロラーゼ遺伝子
を有する組換えＤＮＡを発現させることを特徴とする、
請求項１による酵素の製法。 ９、組換えＤＮＡとしてプラスミドｐＢＴ１０９、ＤＳ
Ｍ４１０８Ｐを発現することを特徴とする請求項８に記
載の方法。 １０、【遺伝子配列があります】 の配列又は遺伝暗号により同じアミノ酸配列をコードす
るその同等のものを有する組換えＤＮＡを使用すること
を特徴とする請求項８に記載の方法。 １１、公知の遺伝子工学的方法により好適な発現系で、
Ｔ中の塩基Ｃの突然変異に加えて自然遺伝子の３２６位
で酵素中でのその他のアミノ酸交換作用をするもう１つ
の突然変異を含むクレアチンアミジノヒドロラーゼ遺伝
子を有する組換えＤＮＡを発現させることを特徴とする
、請求項２による酵素の製法。 １２、１０６３位で塩基ＧからＡへの突然変異を含む組
換えクレアチンアミジノヒドロラーゼ遺伝子を発現する
ことを特徴とする、請求項１１に記載の方法。 １３、組換えＤＮＡとしてプラスミドｐＢＴ１１９、Ｄ
ＳＭ４１０７Ｐを発現することを特徴とする請求項に記
載の方法。 １４、発現系としてＥ・コリー又はシュードモナス・プ
チダ属の微生物を使用することを特徴とする請求項８か
ら１３までのいずれか１項に記載の方法。 １５、Ｅ・コリーＥＤ８６５４（ＤＳＭ２１０２）を使
用することを特徴とする請求項１４に記載の方法。 １６、シュードモナス・プチダ（ＤＳＭ２１０６）を使
用することを特徴とする請求項１４記載の方法。 １７、Ｅ・コリーＤＳＭ４１０５を培養することを特徴
とする請求項８及び９のいずれか１項に記載の方法。 １８、Ｅ・コリーＤＳＭ４１０６を培養することを特徴
とする請求項１１、１２及び１３のいずれか１項に記載
の方法。 １９、血清、血漿又は尿中のルアチニン含量を測定する
ために請求項１及び２のいずれか１項に記載の酵素を使
用することを特徴とする、クレアチニン含量の測定法。
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE3715841.4 | 1987-05-12 | ||
| DE3715841 | 1987-05-12 | ||
| DE3803175.2 | 1988-02-03 | ||
| DE3803175A DE3803175A1 (de) | 1987-05-12 | 1988-02-03 | Stabile creatinamidinohydrolase-mutanten |
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|---|---|
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| JPH0336514B2 JPH0336514B2 (ja) | 1991-05-31 |
Family
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| JP63113706A Granted JPS63287484A (ja) | 1987-05-12 | 1988-05-12 | クレアチンアミジノヒドラーゼ、新規プラスミド及び微生物、酵素の製法及びクレアチニン含量の測定法 |
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| DE3500184A1 (de) * | 1985-01-04 | 1986-08-14 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Mikroorganismus und plasmid fuer konstitutive creatinamidinohydrolase-bildung sowie verfahren zur herstellung derselben |
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-
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