KR900007648B1 - 안정한 크레아틴 아미디노 가수분해효소 돌연변이체 - Google Patents

안정한 크레아틴 아미디노 가수분해효소 돌연변이체 Download PDF

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Abstract

내용 없음.

Description

안정한 크레아틴 아미디노 가수분해효소 돌연변이체
제1도는 재조합 DNA의 아미노산 서열이다.
본 발명은 야생형(wild type) 효소보다 더 안정하여 혈청, 혈장 및 요(urine)의 크레아티닌(creatinine) 함량을 효소적으로 정량하는데 더 적당한, 크레아틴 아미디노 가수분해효소의 돌연변이에 관한 것이다.
크레아틴 아미디노 가수분해효소(EC 3.5.3.3)는 크레아틴의 정량에 공업적으로 사용된다. 이것은 특히 건강한 유기체의 것과 다른 크레아티닌 함량이 혈청 및 요에 존재하는 신장병의 진단을 위해 임상 분석에 사용된다. 예를 들어 슈도모나스(Pseudomonas) 형태의 미생물이 공지되는데 이것은 크레아틴에 의한 유도(induction)로 작용할 만한 양의 크레아틴 아미디노 가수분해효소를 생산할 수 있지만 효소를 분리하는 비용 및 이룰 수 있는 수율이 효소의 공업적 사용에 대한 제한 요소이다.
독일연방공화국 특허 명세서 제35 00 184호에 기재된 바와 같이, 슈도모나스 푸티다(Pseudomonas)로부터 크레아틴 아미디노 가수분해효소를 암호화(cording)하는 유전자를 분리하고 그것을 예를 들어, 플라스미드 pBR 322내로 삽입하는 것이 가능하다. 대장균(Escherichia coli) 또는 슈나모나스 푸티다속의 미생물의 형질전환 후에, 이것으로부터 크레아틴 아미디노 가수분해효소를 얻는 것이 가능하다. 이러한 크레아틴 아미디노 가수분해효소의 유전공학적 생산은 플라스미드를 함유하지 않는 유도된 미생물로부터 분리하는 것보다 실행하기가 더 쉽고 더 효과적이다. 그러나, 이 방법은 이것으로부터 얻은 야생형 효소가 단지 제한된 세정제 및 열 안정성을 가지므로 임상 테스트 방법에 사용하는데 있어 매우 적당하지 않다는 불리한 점을 갖는다.
선행 업계의 기술된 불리한 점을 나타내지 않거나 단지 약간 나타내는 크레아틴 아미디노 가수분해효소 돌연변이체를 제공하는 것이 본 발명의 목적이다.
본 발명에 따라, 야생형 효소에 상응하고 다음 반응을 촉매하는 크레아틴 아미디노
크레아틴 +H2O → 사코신 + 요소
가수분해효소에 의해 본 목적이 성취되는데, 여기서 야생형 효소와 비교하여 최소한 하나의 아미노산 교환이 위치 109에서 일어난다. 이 교환은 발린으로 대체된 알라닌과 관계가 있다. 이렇게 돌연변이된 효소는 야생형 효소보다 상당히 양호한 안정성을 갖는다.
이런 아미노산 교환외에, 효소적 활성의 손상없이 아미노산면(plane) 상의 기타 돌연변이가 또한 존재할 수 있고 여전히 높은 안정성이 이루어질 수 있다. 위치 109에서의 아미노산 교환외에, 바람직한 효소는 또다른 아미노산 교환을 포함한다.
본 발명은 또한 플라스미드 pBT l09 및 pBT 119를 제공한다. 이것들은 야생형의 크레아틴 아미디노 가수분해효소 유전자를 함유하지만, 이 두 플라스미드에서, DNA 면상에 위치 109에서의 아미노산 교환이 있을뿐 아니라 pBT 119의 경우 또 다른 위치, 즉 위치 355에서 야생형 유전자내 이들 아미노산을 암호화하는 트리플레트(triplet)의 상응하는 교환에 의해 메티오닌으로 발린이 교환하는 형태가 있다. pBT 119의 서열화(esquencing)에 의해, 암호화 스트랜드(strand)내 서열의 위치 1063에서 야생형 트리플레트 GTG가 ATG로 바뀌도록 G가 A로 (G→A) 교체됨을 알았다. 본 발명에 따른 대장균속의 바람직한 미생물, 대장균 DSM 4105는 플라스미드 pBT 109를 함유하며 본 발명에 따른 또 다른 바람직한 미생물 대장균 DSM 4l06은 플라스미드 pBT 119를 함유한다. 본 발명에 따라서, 또 다른 바람직한 미생물은 상기 돌연변이를 함유하는 크레아틴 아미디노 가수분해효소를 상시적(常時的)으로 발현시키는 대장균 또는 슈도모나스 푸티다 속의 미생물이다.
본 발명의 돌연변이된 효소의 제조는 공지된 유전자 공학적 방법에 따라 본질적으로 야생형 유전자의 서열을 갖지만 최소한 천연 유전자의 위치 326에서 데옥시리보누클레오타이드 G 대신에 T를 함유하는 크레아틴 아미디노 가수분해효소 유전자를 포함하는 재조합 DNA가 적당한 발현 시스템내에서 발현되는 것으로 일어난다. 더구나 염기가 또 다른 위치에서 교환된 유전자가 바람직하게 발현된다. 특히 바람직하게, 위치1063에서 A가 G 대신에 존재한다.
재조합 DNA로서, 플라스미드 pBT 109, DSM 4108 P 또는 pBT 119, DSM 4107P가 바람직하게 발현된다. 그러나, 재조합 DNA로서, 독일연방공화국 특허 명세서 제35 00 184호에 기술된 야생형 효소의 DNA 서열을 함유하거나 또는 천연 유전자의 위치 326에서 데옥시리보누클레오타이드 T가 C 대신에 존재하는 동일한 아미노산 서열의 유전 암호에 따라 암호화한 그것의 동등한 것을 함유하는 어느 재조합 DNA가 또한 사용될 수 있다. 이러한 재조합 DNA에서, 부가하여 효소의 또다른 아미노산 돌연변이를 일어나게하는 또다른 염기 교환을 함유할 수 있다. 위치 1063에서, G는 A로 바람직하게 교환된다.
발현 시스템으로서, 대장균이나 슈도모나스 푸티다 속의 미생물이 바람직하다. 특히 바람직하게, 대장균ED 8654, DSM 2102, 또는 슈도모나스 푸티다 DSM 2106가 사용된다. 본 발명에 따른 또 다른 생산 방법은 바람직한 미생물 대장균 DSM 4105 및 대장균 DSM 4106를 배양하는 것을 포함한다.
본 발명은 또한 혈청, 혈장 및 요내의 크레아티닌 함량을 정량하는데, 야생형 효소보다 더 안정한 본 발명의 돌연변이된 크레아틴 아미디노 가수분해효소를 사용하는 것에 관한 것이다.
독일연방공화국, 특허 명세서 제35 00 184호에 기재된 클론(clone)된 크레아틴 아미디노 가수분해효소의 조사로 효소가 다음 연속 반응의 속도 결정 단계를 촉매함을 알았다.
크레아틴 아미디노 가수분해효소
크레아틴+H2O----------------------------＞ 사코신+요소
기질 반응 속도의 증가는 최적 작용 조건하에서 효소량의 증가로 이루어질 수 없다. 37℃에서 혈청, 혈장 또는 요의 크레아틴 함량을 정량하는 테스트 조건하에서, 효소는 제한된 안정성을 나타내며 이것으로 상기 언급된 온도에서 기질반응이 감소하게 된다. 비교하여, 야생형 효소의 아미노산 109에서 알라닌의 발린으로의 돌연변이를 함유하는 본 발명의 크레아틴 아미디노 가수분해효소는 다양한 테스트 조건(세정제 부가)하에서 대략 동일한 초기 효소 활성의 경우에 다음 표1에 표시된 비교 실험 결과에 의해 나타난 바와 같이 강하게 증가된 세정제 안정성을 갖는다. 최적 조건하의 온도 작용이 다음 표2에 표시된다.
[표 1]
Figure kpo00002
효소를 표에 주어진 조건하에서 배양하고 계속해서 효소 정량을 테스트 복합물 "요소"(BM Order No.124770)의 사용으로 실행하였다.
[표 2]
최척 조건하 다른 온도에서 효소 정량
테스트 조건 : 20 밀리몰/리터 인산염 완충제(pH 8.0)
1=야생형 크레아틴 아미디노 가수분해효소 : 1.05mg 단백질/ml(8.0 U/mg)
2=크레아틴 아미디노 가수분해효소 돌연변이체 : 1.10mg 단백질/ml(8.7 U/mg)
(아미노산 109=발린)
Figure kpo00003
효소를 주어진 테스트 조건하에서 배양하고 계속해서 효소 정량을 테스트 복합물 "요소" (BM Order No.124 770)의 사용으로 실행하였다.
이러한 돌연변이에 부가하여 또 다른 아미노산 돌연변이를 가지는 본 발명의 크레아틴 아미디노 가수분해효소는 대부분의 동일한 초기 효소 활성의 경우에 야생형 효소와 비교하여 여전히 높은 안정성을 갖는다(실시예 1. 표 3 참조)
그러므로, 본 발명의 크레아틴 아미디노 가수분해효소 돌연 변이체로서, 크레아티닌 정량의 경우 야생형 효소의 세정제 및 열 안정성에 의한 효소 활성의 손실을 막고 이러한 정량을 지금까지 가능한 것보다 더 긴시간에 걸쳐 실행하는 것이 가능하다. 향상된 특성 때문에, 크레아티닌 테스트에 있어 효소량의 감소가 또한 가능하다.
다음 실시예는 본 발명을 설명하는 목적으로 주어진다.
실시예 1
대장균 DSM 4105, 대장균 DSM 4106 및 비교하기 위해 대장균 DSM 3143(독일연방공화국 특허 명세서 제35 00 184호)의 세포들을 11 발효조에서 밤새 배양하였다.
배지
완전한 배지(효모/펩톤 추출물)
0.4% 글루코스
100 밀리몰/리터 인산염 완충제
800 r.p.m 에서 15분 동안 원심분리한 후에, 세포를 French 압착기에서 부수고 크레아틴 아미디노 가수분해효소를 분자체(molecular sieve)(Sephacryl S 200)에서 분별로 정제하였다.
얻은 효소를 다음 표3에 주어진 조건하에서 배양하고 계속해서 효소 정량을 테스트 복합물 "요소"(BM Order No 124 770)의 사용으로 실행하였다.
다음 표3은 야생형 효소(독일연방공화국 특허 명세서 제35 00 184호-대장균 DSM 3143)와 비교하여 본 발명에 따른 크레아틴 아미디노 가수분해효소 돌연변이체의 안정성을 제공한다.
[표 3]
37℃에서의 안정성
테스트 조건 : 테스트 복합물 "크레아틴-PAP"
(BM Order No.839 434)로부터의 테스트 혼합물 1
초기 활성 : 12 U/ml. (=100%)
Figure kpo00004
37℃에서 Michaelis 상수(Km)의 비교
테스트 조건 : 0.1 몰/리터 트리스-HCl(pH 8.0)
(최적 테스트 조건)
Figure kpo00005
실시예 2
플라스미드 pBT 109를 함유하는, 대장균 DSM 4105로부터의 안정한 크레아틴 아미디노 가수분해효소 돌연변이체를 독일연방공화국 특허 명세서 제35 00 184호에 기재된 방법으로 100리터 발효물로부터 분리하였다. 121g 단백질을 10.4 U/mg의 특이적 활성으로 얻었다. 이것은 63% 수율에 해당한다.

Claims (20)

  1. 야생형 효소의 아미노산 서열 위치 109얘서 알라닌이 발린으로 대체된, 다음 반응을 촉매하는 크레아틴 아미디노 가수분해효소 :
    크레아틴 + H2O → 사코신 + 요소
  2. 제1항에 있어서, 야생형 효소의 하나의 또 다른 아미노산이 부가적으로 돌연변이된 크레아틴 아미디노 가수분해효소.
  3. 제1항의 크레아틴 아미디노 가수분해효소를 함유하는 플라스미드 pBT 109, DSM 4108P.
  4. 제2항의 크레아틴 아미디노 가수분해효소에 대한 유전자를 함유하는 플라스미드 pBT 119, DSM 4107P.
  5. 플라스미드 pBT 109를 함유하는 대장균, DSM 4105.
  6. 플라스미드 pBT 119를 함유하는 대장균, DSM 4106.
  7. 상시적(常時的)으로 제1항 또는 제2항의 크레아틴 아미디노 가수분해효소를 형성하는 대장균 또는 슈도모나스 푸티다(Pseudomonas putida) 속의 미생물.
  8. 천연 유전자의 위치 326에서 데옥시리보누클레오타이드 C 대신에 T를 갖는, 크레아틴 아미디노 가수분해효소를 포함하는 발현에 대한 재조합 DNA가, 공지된 유전자 공학적 방법에 따라 적당한 발현 시스템 내로 삽입되는, 제1항에 따른 효소의 제조방법.
  9. 제8항에 있어서, 재조합 DNA로서 플라스미드 pBT 109, DSM 4108P가 발현되는 방법.
  10. 제8항에 있어서, 이하의 서열 :
    Figure kpo00006
    Figure kpo00007
    Figure kpo00008
    을 함유하거나, 동일한 아미노산 서열에 대한 유전 암호에 따라 암호화된 그와 동등한 서열을 함유하는 재조합 DNA가 사용되는 방법.
  11. 천연 유전자의 위치 326에서 염기 C가 T로 돌연변이한 것에 부가하여, 효소내에서 하나의 또 다른 아미노산 교환을 일으키는 하나의 또 다른 돌연변이를 갖는, 크레아틴 아미디노 가수분해효소 유전자를 함유하는 재조합 DNA가 공지된 유전자 공학적 방법에 따라 적당한 발현 시스템에서 발현되는, 제2항에 따른 효소의 제조방법.
  12. 제11항에 있어서, 위치 1063에서 염기 G의 A로의 돌연변이를 갖는 재조합 크레아틴 아미디노 가수분해효소 유전자가 발현되는 방법.
  13. 제12항에 있어서, 플라스미드 pBT 119, DSM 4107P가 재조합 DNA로서 발현되는 방법.
  14. 제8항 내지 제10항중의 어느 한 항에 있어서, 발현 시스템으로서 대장균 또는 슈도모나스 푸티다 속의 미생물이 사용되는 방법.
  15. 제14항에 있어서, 대장균 ED 8654, DSM 2102가 사용되는 방법.
  16. 제14항에 있어서, 슈도모나스 푸티다, DSM 2106이 사용되는 방법.
  17. 제8항 또는 제9항에 있어서, 대장균, DSM 4105가 배양되는 방법.
  18. 제11항 내지 제13항중의 어느 한 항에 있어서, 대장균, DSM 4106이 배양되는 방법.
  19. 제8항 내지 제10항중의 어느 한 항에 따른 방법으로 제조된 효소.
  20. 혈청, 혈장 또는 요내의 크레아틴 함량을 정량하는데 제1항 또는 제2항의 효소를 사용하는 방법.
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Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS6437292A (en) * 1987-08-04 1989-02-07 Toyo Jozo Kk Dna having genetic information of creatinase and use thereof
JP2000157279A (ja) 1998-11-25 2000-06-13 Kikkoman Corp クレアチンアミジノハイドロラーゼ及びその製造法
JP3773160B2 (ja) * 1999-01-01 2006-05-10 キッコーマン株式会社 耐熱性クレアチンアミジノハイドロラーゼ及びその製造法
CA2404293C (en) 2001-09-20 2007-05-15 F. Hoffmann-La Roche Ag Variants of an erwinia-type creatinase

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE2122255C3 (de) * 1971-05-05 1987-01-22 Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim Verfahren zur spezifischen Bestimmung von Creatinin
US4039384A (en) * 1975-04-05 1977-08-02 Noda Institute For Scientific Research Creatinine amidohydrolase and creatine amidinohydrolase and process for producing them
JPS5736985A (ja) * 1980-08-14 1982-02-27 Toyobo Co Ltd Kosoanteikaho
JPS59232088A (ja) * 1983-06-15 1984-12-26 Tanabe Seiyaku Co Ltd Ｌ−アスパラギン酸の製法
DE3500184A1 (de) * 1985-01-04 1986-08-14 Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim Mikroorganismus und plasmid fuer konstitutive creatinamidinohydrolase-bildung sowie verfahren zur herstellung derselben
DE3707172C2 (de) * 1986-03-07 1995-09-21 Kikkoman Corp Rekombiniertes DNA-Molekül, das ein Kreatinasegen codiert, rekombinanter Vektor, der diese DNA-Sequenz umfaßt, sowie Verfahren zur Herstellung von Kreatinase unter Verwendung eines Stammes vom Genus Escherichia, der diesen rekombinanten DNA Vektor enthält

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Publication number Publication date
CZ279006B6 (en) 1994-11-16
AU593438B2 (en) 1990-02-08
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DE3803175A1 (de) 1988-11-24
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EP0291055B1 (de) 1993-09-15
IE60307B1 (en) 1994-06-29
DE3884045D1 (de) 1993-10-21
JPS63287484A (ja) 1988-11-24
DK251788A (da) 1988-11-13
JPH0336514B2 (ko) 1991-05-31
EP0291055A3 (en) 1989-11-29

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