JPS63267800A - フイブロネクチンの抽出溶剤又は溶解剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔イ〕　発明の目的 本発明は、動物組織中のフィブロネクチンを抽出するに
当っての抽出溶剤、又は抽出された動物組織由来のフィ
ブロネクチンの溶解剤に関する。

「産業上の利用分野」 本発明によれば、動物組織からフィブロネクチンを効率
よく製造（抽出）することが出来ると共に、化粧品や医
薬品として用いるとき、製剤化が容易となる。

「従来の技術］ フィブロネクチンは、生体内生理活性物質の一つとして
注目され、その所在は、血漿や線維芽細胞膜と、表皮の
基底膜等に分布していることが知られている。

分子量は、血漿由来のフィブロネクチンと、細胞性のフ
ィブロネクチンとは異なり、血漿由来のフィブロネクチ
ンは、還元時２２〜２５万で２量体・を形成し、したが
って、約４６万とされ、一方、細胞性のフィブロネクチ
ンは、２Ｍ体以上であることが知られている。

しかし、免疫化学的反応からは、同−又は近縁の作用を
有しているとされている。フィブロネクチンの生体内の
役割は、細胞又は組織間の粘着、あるいは結合状態を保
持、又はコントロールする物質とされ、例えば、皮膚組
織のコラーゲン線維間の空間の液状物質（ムコ多糖体な
ど）の保持にも重要な関わりを持っていると考えられて
いる。

々イ、に、皮膚組織にあっては、線維芽細胞の増＠（成
長）ｌｌｊｌに関与し、治療分野では、組織損傷に対す
る修復剤としての応用、抗癌剤への応用、さらに、化粧
料への応用などが進められている。

フィブロネクチンに関する刊行物としては、例えば、第
１表に示すごとくの文献がある。

尚、第１表中、１〜２は、フィブロネクチンに関する最
近の研究と、その応用分野が分かり易く解説されている
。又、３〜１０は、具体的なフィブロネクチンに関する
応用に当っての公知刊行物として、我が国における公開
特許公報を示した。

尚、以下、フィブロネクチンについて、これを便宜上、
ＦＮと略記する。

′第１表Ｊ　　ＦＨに関する主な刊行物′発明が解決し
ようとする問題点」 ＦＮの化粧料や医薬品への応用に当っては、水ｔ′Ｒ液
中では、不安定であり、製剤化が困難であること。例え
ば、化粧水中や、その他の透明な水溶性のタイプの化粧
料では、約２〜３時５間の内に、不溶性の澱を生じ、後
に沈澱する。生理的活性は、溶解した状態で発現し、沈
澱、あるいは、不溶性の状醤では消失する。その為には
安定な溶解法の確立が必要である。そこで本発明者らは
、この点を解決することをテーマとなし、その解決に当
り、同時に、ＦＮの溶液が、即、化粧料に配合できるよ
うにすることを目的として、その開発に当った。

〔口〕　発明の構成 本発明は、次に示す、各薬剤の組合せを条件となす、Ｆ
Ｎの抽出溶剤、又は、抽出後のＦＮの溶解剤の組成を、
構成要件となす。

（抽出溶剤又は、溶解剤の組成） Ａ：尿素１０〜４．０Ｍ、塩化ナトリウム０、ＩＭ、ク
エン酸ナトリウム０．０５Ｍ。

ＢＳ尿素１．０〜４０Ｍ、塩化ナトリウム０．１Ｍ、ク
エン酸ナトリウム０．０５Ｍ、エチレンジアミン四酢酸
二ニナトリウム１ｍＭ。

以下に、きらに具体的に、本発明に関して詳記するため
に、実施例等により示す。

１問題点を解決するための手段」 （実施例−１） ＦＮを得るための出発原料として、ここでは、新鮮な牛
の胎盤、又は人の正常分娩後の胎盤の組織を用いた例を
もって示すも、本発明による抽出まず、入手した出発Ｍ
科を流水中で洗い、ミンチカッター等により細切後、脱
血、脱水した組繊細切物を、さらに脱脂（ｎ−ヘキサン
などに浸漬、攪拌して脂質を有機溶媒中に溶出）した後
、その組繊細切物１３ｋｇに、前記のＡ又はＢの溶解剤
の組成による溶剤２０！を加え、４°Ｃにおいて、緩や
かに攪拌を行いながら、−夜浸漬抽出を行う。

次に、遠心分離機を用いて、その残渣物を取る。この操
作は、繰り返し４回行う、最終的な残渣物は、約１１．
４ｋｇ！度である。

この残渣物に対して、前記Ａ溶解剤の組成中、尿素につ
いて４Ｍとなした溶液を、２２．８ｋｇ加え、−夜、４
°Ｃで浸漬、１５分毎にブレンダーを８回行い、遠心脱
水機にかけ、上清液を分取する。この操作を、３回前後
することによって、組織中のＦＮは、そのほとんどが上
清液中に移行される。

上清液は、これを混合し、濾過した後、その濾液を取り
、次に、０．４〜０，６飽和の硫酸アンモニウムを用い
て、その沈澱物を分取する。

沈澱物は、再び前記Ａ溶解剤を添加（約７．８りを加え
て攪拌後、ここで得られた溶解液の内、２００１１１１
１を取り、これにｌＱＱｍＱのローブタノールを加え、
５分間程度の振盪を行った後、遠心分離機にかけ、９．
ＯＯＯｒｐｍ、２０分分間性い、得られた溶液を綿栓濾
過し、その濾液を取り、吸引濾過を行う、この際、綿栓
濾過によって、今だ不溶性成分が確認されているときは
、濾紙Ｎｏ１３１を用いて吸引濾過を行う。

吸引濾過後の濾液は、セファデックスＧ−２５により、
１．６００−カラムに通し、６００−までは除去し、次
の５５０−を分取する。

分画液は、濾紙隘１３１を用いて濾過後、低温濃縮、凍
結乾燥して結晶性の粉末とする。又、例えば化粧品に用
いるには、分画液に対して、ブチレジグリフール、パラ
ベン（メチル０．７％、プロピル０．３％）を加えた後
、−夜、４〜１０　’Ｃで静置した後、吸引濾過を行う
ことによって、ＦＮが安定に溶解し、即、化粧料に用い
られる溶液となすことが出来る。

この溶液の調製に当っては、前記した溶解剤の組成Ａ又
はＢの条件下にあることを必須となすので、その調製は
、ブチレングリフールの添加時に確認し調製する。又、
ＦＮの濃度は、分画液中には、１１００Ｉｔ／ｌ１ｌＦ
以上とし、高含有していることが特徴である。収量的に
は、工程中で用いた、残渣物１１．４ｋｇからは；約１
５〜２３２のＦＮ含有溶液を得ることが出来る。

前記の実施例においては、ＦＮの抽出法についても同時
に示したが、末法によれば、ＦＮの含有量が高く、例え
ば、化粧料に用いるに当って、充分な濃度が、濃縮など
を行わなくとも、１００５ｇ　／　ｍ９以上、含まれた
状態で得られる場合が多いことである。すなわち、溶解
剤の組成Ａ又はＢの使用は、動物組繊細胞からＦＮの抽
出に当って、抽出収量を高めるためにも、最適な条件で
あることがわかった。

１安定性の評価。

本発明によるＦＮは、血漿由来のものと興なり、生理食
塩水中に不溶であることが最大のネックとなり、このた
めに、その溶解剤の選択が、本発明における解決のため
のポイントであった０本発明による溶解剤によれば、血
漿由来のＦＨについても、その抽出、又は溶解剤として
も、もちろん、有利な条件として用いることが出来るわ
けである。

第２表は、実施例１をもとに得られたＦＮ含有溶液の、
主な数値を示し、第３表は、その安定性について求めた
ところの成績結果である。

「第２表、　　ＦＮ含有溶溶液主な数値「第３表、　　
ＦＮ含有溶液の安定性 第３表に示すごとく、末法によるＦＮ含有溶液は、熱、
低温下でも安定性に優れた溶液である。

例えば、化粧品への配合性の良否は、化粧水などの澄明
な液状タイプの製品中に用いて、沈澱物の発生がないこ
とが条件の一つとなる。もちろん、末法で得られたＦＮ
含有溶液については、そのまま、又は香料等を添加して
、即、化粧水として用いることも可能であるが、ここで
は、次の処方からなる、化粧水タイプの美容液中に、末
法によるＦＮ含有溶液を１０％加え、その後の経時的変
化を観察してみたが、何ら影響は認められなく、安定な
化粧水の状態が維持されていることが確認された。

「処方例：化粧水タイプの美容液。

キチンリキッド（カルボキシメチルキチン含有溶液）・
・・・・・・・・・・・・・１５％１．３−／チレング
リコール・・・俸・・・４％ビオフメチフＣＰ−１２（
牛脂盤抽出線維芽細胞増殖作用物質：水溶性蛋白含有溶
液〉・・１２％香料及び助腐剤・・・・・・・・・・・
適　量溶解剤Ａ（但し尿素４．０Ｍ）　　・・・・１０
％エタノール・φ・・・・・・ａ番・・・・５％ＦＮ含
有溶液・・・・・・・・・・・・１０％精製水をもって
全［１００％となす。

ｉｎ記の処方例に示す美容液は、肌に滑りのある保湿作
用を与えてくれるが、肌に切傷などのあるようなときは
、局所に対する修復作用を示す。

又、日焼けによる色素沈着によるシミ、又は褐変化した
肌には、その塗布はシミや褐変化した肌を、もとの皮膚
の色に早く戻すことが出来る。とくに、外出後の灼熱感
をもった顔面に対しては、その灼熱感を早く取り除き、
消炎作用を有する。

さらに、灼熱感（ホテリ）と共に、背中などに対する水
泡（ヒブクレ）に対しては、消炎作用と共に、その後の
褐変化を少なくすることが出来る。

このような作用は、処方中のＦＮが、少なからず有効に
働いているものと推定された。

次表（第４表）は、前記の処方例で示す美容液をもとに
、健康成人男子に対して、日光浴後の灼熱感の解消にか
かる、時間的経過を求めたものである。

「第４表、　灼熱感（ホテリ）に対するＦＮ含有美容液
の解消効果〔ハ〕　発明の効果 ＦＮは水に不溶性であり、又、生理食塩水にも不安定で
あった。そこで本発明者らは、用いる溶解剤が皮膚に対
して安全性も高く、刺激性のないことを条件として、研
究に当ってきた。その結果、本発明による溶解剤の組成
Ａ又はＢにより、ＦＮの抽出溶剤としても優れた性能を
有し、同時にそれを使用して、ＦＮ含有溶液としたもの
は、化粧料のみならず、医薬品外用塗布剤の処方中にも
配合し易くなることがわかった。したがって、そのもた
らす効果は、ＦＮの有効利用に当って、大きなメリット
であると考えられる。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. （１） 尿素１．０〜４．０Ｍ、塩化ナトリウム０．１Ｍ、クエ
   ン酸ナトリウム０．０５Ｍからなる水溶液、又は、上記
   の組成に対し、さらにエチレンジアミン四酢酸二ナトリ
   ウム１ｍＭが加えられた水溶液からなることを特徴とす
   る、動物組織由来フィブロネクチンの抽出溶剤又は、動
   物組織由来フィブロネクチンの溶解剤。