JPS63230613A - 化粧料 - Google Patents
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- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
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-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
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- A—HUMAN NECESSITIES
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
(産業上の利用分野〕
本発明は化粧料に関し、更に詳細には保湿効果が高く、
使用感に僅れた化粧料に関する。
使用感に僅れた化粧料に関する。
〔従来の技術]
化粧料の具備すべき性質のうち、保湿性は化粧料を皮膚
に適用した場合の外界からの刺激や肌あれを防ぎ、また
使用感を向上せしめるため特に!!要である。そして、
従来より化粧料に保湿性を持たせるため、種々の検討が
なされている。例えば化粧料にソルビトール、グリセリ
ン、1.3−ブチレングリコール等のポリオール類を配
合すること;乳酸塩、ピロリドンカルボン酸塩、ヒアル
ロン酸等の皮膚成分を配合すること;動植物抽出物、乳
酸菌培養液等を配合すること;その他尿素を配合するこ
と等が行なわれている(フレグランス ジャーナルNo
、79.84〜71頁(1986) )。
に適用した場合の外界からの刺激や肌あれを防ぎ、また
使用感を向上せしめるため特に!!要である。そして、
従来より化粧料に保湿性を持たせるため、種々の検討が
なされている。例えば化粧料にソルビトール、グリセリ
ン、1.3−ブチレングリコール等のポリオール類を配
合すること;乳酸塩、ピロリドンカルボン酸塩、ヒアル
ロン酸等の皮膚成分を配合すること;動植物抽出物、乳
酸菌培養液等を配合すること;その他尿素を配合するこ
と等が行なわれている(フレグランス ジャーナルNo
、79.84〜71頁(1986) )。
(発明が解決しようとする問題点)
しかしながら、従来の保湿剤の保湿効果は、未だ充分な
ものではなく、さらにこれらの保湿剤を配合した化粧料
の使用感もまた満足すべきものではなかった。
ものではなく、さらにこれらの保湿剤を配合した化粧料
の使用感もまた満足すべきものではなかった。
(問題点を解決するための手段〕
斯かる実状に鑑み本発明者らは、上記問題点を解決すべ
く種々検討を重ねた結果、ヒアルロン酸又はその塩と乳
酸菌培養液を併用することにより優れた保湿効果と使用
感が得られることを見い出し、本発明を完成した。
く種々検討を重ねた結果、ヒアルロン酸又はその塩と乳
酸菌培養液を併用することにより優れた保湿効果と使用
感が得られることを見い出し、本発明を完成した。
すなわち、本発明はヒアルロン酸またはその塩、および
乳酸菌培養液を含有することを特徴とする化粧料を提供
するものである。
乳酸菌培養液を含有することを特徴とする化粧料を提供
するものである。
本発明化粧料に配合されるヒアルロン酸またはその塩と
しては、ニワトリのトサカ等動物組織から抽出したもの
、ストレプトコッカス・ズーエピデミカス(Strep
tococcus zooepidamicu’s)、
ストレプトコッカス ピオゲネス(Streptoco
ccuspyogenes)等のストレプトコツカス属
に属する細菌を培養して得られたものいずれでも使用で
きる。就中、本出願人が先に見い出し、特許出願した(
特願昭61−99446号)分子量200万以上のヒア
ルロン酸又はその塩が好ましい、この分子量200万以
上のヒアルロン酸は、例えば該ヒアルロン酸を生産する
微生物を栄養培地にて培養し、該培養物から採取するこ
とによって製造される。
しては、ニワトリのトサカ等動物組織から抽出したもの
、ストレプトコッカス・ズーエピデミカス(Strep
tococcus zooepidamicu’s)、
ストレプトコッカス ピオゲネス(Streptoco
ccuspyogenes)等のストレプトコツカス属
に属する細菌を培養して得られたものいずれでも使用で
きる。就中、本出願人が先に見い出し、特許出願した(
特願昭61−99446号)分子量200万以上のヒア
ルロン酸又はその塩が好ましい、この分子量200万以
上のヒアルロン酸は、例えば該ヒアルロン酸を生産する
微生物を栄養培地にて培養し、該培養物から採取するこ
とによって製造される。
上記方法において、分子量200万以上のヒアルロン酸
を生産する微生物としては、当該ヒアルロン酸生産能を
有し、ヒアルロニダーゼ非生産性でかつ非溶血性を示す
ストレプトコツカス属に属する細菌、例えば次の如くし
て得られるストレプトコッカス・ズーエピデミカスの変
異株、1株が挙げられる。すなわち、まず鼻粘膜よりヒ
アルロニダーゼ(ヒアルロン酸分解酵素)の強い生成能
を有しかつヒアルロン酸を生産するランスフィールド血
清群C型に属するストレプトコッカス・ズーエピデミカ
ス(来園の同定は、パージエイズ・マニュアル・オブ・
デターミネイティブ・バタテリオロジイー第8版、19
74によった)を得る。この菌株はマツクレナン(Ma
cLennan、 J、Gan、MIcrobiol、
、 14゜134−142.1956)が指摘したよう
に好気条件においてヒアルロン酸を良く生産し、炭素源
としてグルコースを用いた場合、4%のグルコース添加
によって2g/ftのヒアルロン酸を生産した(ヒアル
ロン酸の対糖収率は5%)。そしてこの時得られたヒア
ルロン酸の分子量は30−60万であった。この菌株を
常法(細菌・ファージ遺伝実験法、蛋白質核酸酵素別冊
、共立出版1972)によって紫外線や化学剤(N−メ
チル−N′−二トローN−二トロソグアニジン(NTG
)、エチルメタンスルフォン酸等)で処理して、この処
理菌体を血液寒天培地に混釈してま診、溶血性を示さな
い集落を採取し、次ニコの菌株を再び変異処理した後、
ヒアルロン酸を含有した栄養寒天培地上に塗布し、ヒア
ルロン酸を分解しない集落を採取することによってスト
レプトコッカス・ズーエピデミカスの変異株1株を得る
(後記事参考例1参照)。
を生産する微生物としては、当該ヒアルロン酸生産能を
有し、ヒアルロニダーゼ非生産性でかつ非溶血性を示す
ストレプトコツカス属に属する細菌、例えば次の如くし
て得られるストレプトコッカス・ズーエピデミカスの変
異株、1株が挙げられる。すなわち、まず鼻粘膜よりヒ
アルロニダーゼ(ヒアルロン酸分解酵素)の強い生成能
を有しかつヒアルロン酸を生産するランスフィールド血
清群C型に属するストレプトコッカス・ズーエピデミカ
ス(来園の同定は、パージエイズ・マニュアル・オブ・
デターミネイティブ・バタテリオロジイー第8版、19
74によった)を得る。この菌株はマツクレナン(Ma
cLennan、 J、Gan、MIcrobiol、
、 14゜134−142.1956)が指摘したよう
に好気条件においてヒアルロン酸を良く生産し、炭素源
としてグルコースを用いた場合、4%のグルコース添加
によって2g/ftのヒアルロン酸を生産した(ヒアル
ロン酸の対糖収率は5%)。そしてこの時得られたヒア
ルロン酸の分子量は30−60万であった。この菌株を
常法(細菌・ファージ遺伝実験法、蛋白質核酸酵素別冊
、共立出版1972)によって紫外線や化学剤(N−メ
チル−N′−二トローN−二トロソグアニジン(NTG
)、エチルメタンスルフォン酸等)で処理して、この処
理菌体を血液寒天培地に混釈してま診、溶血性を示さな
い集落を採取し、次ニコの菌株を再び変異処理した後、
ヒアルロン酸を含有した栄養寒天培地上に塗布し、ヒア
ルロン酸を分解しない集落を採取することによってスト
レプトコッカス・ズーエピデミカスの変異株1株を得る
(後記事参考例1参照)。
斯くして得られるストレプトコッカス・ズーエピデミカ
スの変異株1株(以下来園という)は、トッド・ヒエイ
ツト・ブロス(Todd Hewittbroth)寒
天培地上で極めて強い粘性を有する透明な集落を形成し
、非溶血性(β−溶血性:陰性)、ヒアルロニダーゼ非
生産性、ランスフィールド血清群C型に属する連鎖状球
菌であり、来園の菌学的性質は下記の通りである。
スの変異株1株(以下来園という)は、トッド・ヒエイ
ツト・ブロス(Todd Hewittbroth)寒
天培地上で極めて強い粘性を有する透明な集落を形成し
、非溶血性(β−溶血性:陰性)、ヒアルロニダーゼ非
生産性、ランスフィールド血清群C型に属する連鎖状球
菌であり、来園の菌学的性質は下記の通りである。
(a)グラム染色性:陽性
(b)to℃増殖性:陰性
(c)45℃増殖性:陰性
(d) 0.1%メチレンブルー抵抗性:陰性(e)
8.5%食塩抵抗性:陰性 (f)40%胆汁抵抗性:陰性 (g)バシトラシン抵抗性:陽性 (h) pH9,a抵抗性:陰性 (i)60℃、30分抵抗性:陰性 (J)ゼラチン分解性:陰性 (k)澱粉分解性:陽性 (1)馬尿酸ソーダ分解性:陰性 (m)エスタリン分解性:弱陽性 (n)アルギニン分解性:陽性 (0) Wii1酵性ニゲルコース、ガラクトース、シ
ェークロース、ラクトース、マルトース、ソルビトール
およびサリシンは陽性、グリセリン、マンニトール、ト
レハロースおよびアラビノースは陰性。
8.5%食塩抵抗性:陰性 (f)40%胆汁抵抗性:陰性 (g)バシトラシン抵抗性:陽性 (h) pH9,a抵抗性:陰性 (i)60℃、30分抵抗性:陰性 (J)ゼラチン分解性:陰性 (k)澱粉分解性:陽性 (1)馬尿酸ソーダ分解性:陰性 (m)エスタリン分解性:弱陽性 (n)アルギニン分解性:陽性 (0) Wii1酵性ニゲルコース、ガラクトース、シ
ェークロース、ラクトース、マルトース、ソルビトール
およびサリシンは陽性、グリセリン、マンニトール、ト
レハロースおよびアラビノースは陰性。
本出願人は来園の菌学的性質から、来園をストレプトコ
ッカス・ズーエピデミカスYIT2030と命名し、工
業技術B微生物工業技術研究所に微工研条寄第1305
号として寄託した。
ッカス・ズーエピデミカスYIT2030と命名し、工
業技術B微生物工業技術研究所に微工研条寄第1305
号として寄託した。
次に本国を培養して、該培養物から分子量200万以上
のヒアルロン酸を採取する方法について説明する。
のヒアルロン酸を採取する方法について説明する。
来園を培養してヒアルロン酸を得る培地は、炭素源、有
機・無機窒素源およびその他必要に応じて無機塩や有機
微量栄養素を含有するものであることが好ましい、炭素
源としては、グルコース、ガラクトース、シェークロー
ス、ラクトース、フラクトース、マルトース、ソルビト
ール、澱粉加水分解物等の糖分を含むものが好ましく、
他には有機酸や脂肪族アルコール等でもよい、窒素源と
しては有機・無機を問わず一般的な材料でよいが、各種
肉エキス、アミノ酸混合物、ペプトン、酵母エキス等が
好ましい。
機・無機窒素源およびその他必要に応じて無機塩や有機
微量栄養素を含有するものであることが好ましい、炭素
源としては、グルコース、ガラクトース、シェークロー
ス、ラクトース、フラクトース、マルトース、ソルビト
ール、澱粉加水分解物等の糖分を含むものが好ましく、
他には有機酸や脂肪族アルコール等でもよい、窒素源と
しては有機・無機を問わず一般的な材料でよいが、各種
肉エキス、アミノ酸混合物、ペプトン、酵母エキス等が
好ましい。
更に、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウ
ム、鉄等の塩化物、硫酸塩、燐酸塩、硝酸塩、炭酸塩そ
してビタミンなどが必要に応じて添加されつる。
ム、鉄等の塩化物、硫酸塩、燐酸塩、硝酸塩、炭酸塩そ
してビタミンなどが必要に応じて添加されつる。
培養は好気的条件が必須であり、培養液の粘度の上昇に
応じ攪拌速度を上げるのが良いが過度の攪拌は好ましく
ない。培養温度は菌の増殖が行われる25−38℃が好
ましい。更に培養時、来園が乳酸を生成しその乳酸によ
って菌の増殖ならびにヒアルロン酸の生産が抑制される
ことから、乳酸の中和の為にアルカリ水溶液を添加して
、培養液のp)lを6−8の範囲内に調整するのが好ま
しい、この時使用するアルカリ水溶液としては、例えば
水酸化ナトリウム、水酸化カリウムの水溶液やアンモニ
ア水が挙げられる。
応じ攪拌速度を上げるのが良いが過度の攪拌は好ましく
ない。培養温度は菌の増殖が行われる25−38℃が好
ましい。更に培養時、来園が乳酸を生成しその乳酸によ
って菌の増殖ならびにヒアルロン酸の生産が抑制される
ことから、乳酸の中和の為にアルカリ水溶液を添加して
、培養液のp)lを6−8の範囲内に調整するのが好ま
しい、この時使用するアルカリ水溶液としては、例えば
水酸化ナトリウム、水酸化カリウムの水溶液やアンモニ
ア水が挙げられる。
来園は高分子量のヒアルロン酸(分子量200万以上)
を極めて高い収率、生産率で生産する菌株であるが、炭
素源としてグルコースを用いると特に良い結果かえられ
る。すなわち、グルコースを添加すると目的とするヒア
ルロン酸の生産率が極めて向上し、その添加量は0.5
−6%が、好ましい。
を極めて高い収率、生産率で生産する菌株であるが、炭
素源としてグルコースを用いると特に良い結果かえられ
る。すなわち、グルコースを添加すると目的とするヒア
ルロン酸の生産率が極めて向上し、その添加量は0.5
−6%が、好ましい。
来園は高分子物質として、ヒアルロン酸以外の物質を培
養液中に蓄積しないので、培養後、培養液中に蓄積され
たヒアルロン酸の分離、精製は容易で、既に公知の多糖
類の分sy*製法を用いればよい。
養液中に蓄積しないので、培養後、培養液中に蓄積され
たヒアルロン酸の分離、精製は容易で、既に公知の多糖
類の分sy*製法を用いればよい。
分子量200万以上のヒアルロン酸の分離、精製法の一
例を示す。培養液を適当な粘度となるように(100セ
ンチポアズ以下が好ましい)水で希釈し、トリクロル酢
酸にてpl+を4以下にする0次いで遠心分離あるいは
膿濾過(ポアーサイズ0.2μm以下)によって菌体を
分離除去する0次ぎに溶液中に溶解している低分子物質
を、限外濾過、透析、有機溶媒沈澱法又はイオン交換樹
脂等による吸着法などによって除去した後、有機溶媒沈
澱法、凍結乾燥又は噴n乾燥などの手段を用いて分子量
200万以上の゛ヒアルロン酸を得ることができる。
例を示す。培養液を適当な粘度となるように(100セ
ンチポアズ以下が好ましい)水で希釈し、トリクロル酢
酸にてpl+を4以下にする0次いで遠心分離あるいは
膿濾過(ポアーサイズ0.2μm以下)によって菌体を
分離除去する0次ぎに溶液中に溶解している低分子物質
を、限外濾過、透析、有機溶媒沈澱法又はイオン交換樹
脂等による吸着法などによって除去した後、有機溶媒沈
澱法、凍結乾燥又は噴n乾燥などの手段を用いて分子量
200万以上の゛ヒアルロン酸を得ることができる。
このようにして上記培養液から抽出精製して得たヒアル
ロン酸について、ヒアルロン酸標品(分子量約63万、
Sigma社製)と対比しながら種々の検討を行った結
果、氷晶はヒアルロン酸であることを確認した。以下に
その性買を示す。
ロン酸について、ヒアルロン酸標品(分子量約63万、
Sigma社製)と対比しながら種々の検討を行った結
果、氷晶はヒアルロン酸であることを確認した。以下に
その性買を示す。
(1)酢酸セルロース膜を用いる電気泳動において標品
と同じ移動度を示す。
と同じ移動度を示す。
(2)放線菌ヒアルロニダーゼ(大野製薬製)によフて
分解を受け、その分解物をシリカゲル薄層クロマトグラ
フィーにかけると、処理後の標品分解物と同じ移動度で
二つのスポットが現れる。
分解を受け、その分解物をシリカゲル薄層クロマトグラ
フィーにかけると、処理後の標品分解物と同じ移動度で
二つのスポットが現れる。
(3)化学組成を分析す3と、N−アセチル−D−グル
コサミンとD−グルクロン酸がモル比1:1で存在する
。
コサミンとD−グルクロン酸がモル比1:1で存在する
。
(4)比施光度は〔α〕i)。−−69”である。
(5)薄膜法による赤外吸収スペクトルは第1図の通り
で標品と同じ。
で標品と同じ。
(6)重水に溶解して測定した”C−N M Rスペク
トルは第2図の通りで標品と同じ。
トルは第2図の通りで標品と同じ。
(ア)分子量は粘度測定法(T、C,Laurent
et al、。
et al、。
BiochllIl、Biophys、Acta、42
,476−485.1960)による結果、200−3
00万であった。
,476−485.1960)による結果、200−3
00万であった。
また、ヒアルロン酸の塩としては、例えばナトリウム塩
、カリウム塩、リチウム塩、マグネシウム塩、カルシウ
ム塩、リジン塩、アンモニウム塩、トリエタノールアミ
ン塩、プロパツールアミン塩等が挙げられる。
、カリウム塩、リチウム塩、マグネシウム塩、カルシウ
ム塩、リジン塩、アンモニウム塩、トリエタノールアミ
ン塩、プロパツールアミン塩等が挙げられる。
本発明において使用される乳酸菌培養液は、常法、すな
わち、牛乳等の獣乳を主成分とする培養基に乳酸菌を接
種して乳酸発酵を行い、得られた培養物より乳清を分取
することにより製造される。
わち、牛乳等の獣乳を主成分とする培養基に乳酸菌を接
種して乳酸発酵を行い、得られた培養物より乳清を分取
することにより製造される。
乳酸菌としては、例えばラクトバチルス・アシドフィル
ス、同ブルガリクス、同カゼイ、ストレプトコッカス・
サーモフィルス等が使用できる。培養基として用いる獣
乳は、人乳、牛乳、山羊孔など、いずれでもよく、更に
これらの獣乳の脱脂乳または粉乳(脱脂粉乳を含む)か
らの還元乳であってもよい。これらの中では、脱脂乳ま
たは還元脱脂乳が、乳酸発酵後の処理が容易であるため
、特に好ましい。培養基には、獣乳のほかに、乳酸菌の
増殖促進に有効なブドウ糖やショ糖などを加えることが
望ましい。培養条件も特殊なものである必要はないが、
標準的な条件を示すと、上述のような培地を115℃に
15分程度(あるいは110℃に90分間)加熱して殺
菌したのち乳酸菌を接種し、37℃にて2〜3日間培養
する。
ス、同ブルガリクス、同カゼイ、ストレプトコッカス・
サーモフィルス等が使用できる。培養基として用いる獣
乳は、人乳、牛乳、山羊孔など、いずれでもよく、更に
これらの獣乳の脱脂乳または粉乳(脱脂粉乳を含む)か
らの還元乳であってもよい。これらの中では、脱脂乳ま
たは還元脱脂乳が、乳酸発酵後の処理が容易であるため
、特に好ましい。培養基には、獣乳のほかに、乳酸菌の
増殖促進に有効なブドウ糖やショ糖などを加えることが
望ましい。培養条件も特殊なものである必要はないが、
標準的な条件を示すと、上述のような培地を115℃に
15分程度(あるいは110℃に90分間)加熱して殺
菌したのち乳酸菌を接種し、37℃にて2〜3日間培養
する。
得られた培養物から、ろ過または遠心分離により乳清を
を分取する。
を分取する。
なお、斯くして得られる乳清、すなわち乳酸菌培養液は
このままでも使用できるが、わずかながら特有のにおい
を有するので、本発明においては、特開昭58−192
811号の如く乳清をさらに減圧下に加熱して乳清中の
香気成分が実質的に除去されるまでその一部を蒸発させ
たものを使用するのが好ましい。また該乳酸菌培養液は
、これを濃縮して用いてもよい。
このままでも使用できるが、わずかながら特有のにおい
を有するので、本発明においては、特開昭58−192
811号の如く乳清をさらに減圧下に加熱して乳清中の
香気成分が実質的に除去されるまでその一部を蒸発させ
たものを使用するのが好ましい。また該乳酸菌培養液は
、これを濃縮して用いてもよい。
本発明化粧料においてヒアルロン酸またはその塩の配合
量は0.005〜3重量%(以下車に%と記す)、特に
0.05〜2.0%が好ましい。乳酸菌培養液の配合量
は、該培養液の濃縮度、化粧料の形態によっても異なる
が、通常0.1〜90%が好ましい。
量は0.005〜3重量%(以下車に%と記す)、特に
0.05〜2.0%が好ましい。乳酸菌培養液の配合量
は、該培養液の濃縮度、化粧料の形態によっても異なる
が、通常0.1〜90%が好ましい。
本発明化粧料は上記必須成分のほかに通常化粧料に配合
される各種油剤、界面活性剤、防腐剤、粘度調整剤、薬
効剤、他の湿潤剤、香料、アルコール類、水等を適宜配
合することにより、例えば各種クリーム、乳液、化粧水
、エツセンス、パック、ヘア、リンス、ヘアトリートメ
ント、シャンプー、口紅、ファンデーション、育毛料等
の形態とすることができる。
される各種油剤、界面活性剤、防腐剤、粘度調整剤、薬
効剤、他の湿潤剤、香料、アルコール類、水等を適宜配
合することにより、例えば各種クリーム、乳液、化粧水
、エツセンス、パック、ヘア、リンス、ヘアトリートメ
ント、シャンプー、口紅、ファンデーション、育毛料等
の形態とすることができる。
上述の油剤としては流動パラフィン、ワセリン、パラフ
ィンワックス、スクヮラン、みつろう、高級アルコール
、脂肪酸等が;界面活性剤としてはポリオキシエチレン
脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸
エステル、グリセリン脂肪酸エステル、ポリオキシエチ
レングリセリン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン硬
化ヒマシ油、ポリオキシエチレンソルビトール脂肪酸エ
ステル等が;アルコールとしてはエタノール等が:粘度
調整剤としてはカルボキシメチルセルロース、ヒドロキ
シエチルセルロース、ポリビニルアルコール、カルボキ
シビニルポリマー、キサンタンガム等が;他の湿潤剤と
してはソルビトール、グリセリン、1.3−ブチレング
リコール、ピロリドンカルボン酸ナトリウム、乳酸ナト
リウム、ポリエチレングリコール等が;防腐剤としては
パラオキシ安息香酸アルキルエステル、安息香酸ナトリ
。
ィンワックス、スクヮラン、みつろう、高級アルコール
、脂肪酸等が;界面活性剤としてはポリオキシエチレン
脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸
エステル、グリセリン脂肪酸エステル、ポリオキシエチ
レングリセリン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン硬
化ヒマシ油、ポリオキシエチレンソルビトール脂肪酸エ
ステル等が;アルコールとしてはエタノール等が:粘度
調整剤としてはカルボキシメチルセルロース、ヒドロキ
シエチルセルロース、ポリビニルアルコール、カルボキ
シビニルポリマー、キサンタンガム等が;他の湿潤剤と
してはソルビトール、グリセリン、1.3−ブチレング
リコール、ピロリドンカルボン酸ナトリウム、乳酸ナト
リウム、ポリエチレングリコール等が;防腐剤としては
パラオキシ安息香酸アルキルエステル、安息香酸ナトリ
。
ラム、ソルビン酸カリウム等が;薬効剤としてはビタミ
ン類、消炎剤、殺菌剤等が挙げられる。これらの任意成
分のうち、1.3−ブチレングリコールを配合するとさ
らに本発明の効果は増大する。1.3−ブチレングリコ
ールの配合量は0.05〜20%、特に1〜10%が好
ましい。
ン類、消炎剤、殺菌剤等が挙げられる。これらの任意成
分のうち、1.3−ブチレングリコールを配合するとさ
らに本発明の効果は増大する。1.3−ブチレングリコ
ールの配合量は0.05〜20%、特に1〜10%が好
ましい。
本発明化粧料は、ヒアルロン酸又は乳酸菌培養液をそれ
ぞれ単独で含有する従来の化粧料に比べて保湿効果が高
く、かつ使用感、例えば肌への伸び、しっとり感、肌へ
のなめらかさく柔軟性)等が極めて良好なものである。
ぞれ単独で含有する従来の化粧料に比べて保湿効果が高
く、かつ使用感、例えば肌への伸び、しっとり感、肌へ
のなめらかさく柔軟性)等が極めて良好なものである。
次に参考例及び実施例を挙げて本発明の詳細な説明する
。
。
参考例1
牛鼻粘膜より採取した、β−溶血性を示し、ヒアルロニ
ダーゼを生産し、かつヒアルロン酸を生産するストレプ
トコッカス・ズーエピデミカスをトッド・ヒユーイツト
・ブロス培地(ディフコ製)中、37℃で10時間培養
し、対数増殖期の菌体を遠心分離によって集め、低温下
遠心分離を繰り返しつつ2回0.05M トリス−マレ
イン酸緩衝液(pH6,0)を用いて無菌的に洗浄した
後、lXl0’/mj2の菌濃度となるように同緩衝液
に懸濁し、これにNTGを200μg/mflとなるよ
う添加し37℃にて30分分間上うした。つづいて、低
温下菌体を0.05Mトリス−マレイン酸緩衝?1t
([)H6,0)で2回洗浄した後、トッド・ヒユーイ
ツト・ブロス培地に接種して37℃、18時間培養した
。この培養液を滅菌生理食塩水にてlXl0’/mIl
となるように希釈し、その0.1mj!を血液(ウサギ
脱繊血)寒天(20mIl)に混釈してまき培養後、溶
血性を示さない集落を採取した。この変異株の取得顕度
は約4X10−’であった。次ぎにこの非溶血性菌株を
、上と同様に、トッド・ヒユーイツト・ブロス培地に3
7℃で培養し、対数増殖期の菌体を集め、0.05M
トリス−マレイン酸iIT液(pH6,0) テ洗浄後
、NTG200μg/mj2を含む同緩衝液中で37℃
、20分分間上うした。つづいて、低温下菌体を同緩衝
液で洗浄後、限外濾過処理培地(トッド・ヒユーイツト
・ブロス培地からアミコン製限外濾過膜YM−10にて
高分子画分を除去したもの)に接種して37℃、18時
間培養した。この培養液を滅菌生理食塩水にて1−5x
lO”/mILとなるよう希釈し、その0.1mflを
ヒアルロン酸ソーダ(分子量約63万、51g+aa社
製)0.1%を含む上記限外濾過処理培地寒天(高純度
寒天)上に塗布して37℃、20−40時間モイスチャ
ーチャンバー中で培養し、増殖した集落中の菌をレプリ
カ法にて採取しておき、寒天上に10%セチルビリジニ
ュームクロライド水溶液を噴霧して、約50万の菌株の
中から集落周囲が濁る集落を形成するヒアルロニダーゼ
非生産性変異株ストレプトコッカス・ズーエピデミカス
YIT2030を取得した。
ダーゼを生産し、かつヒアルロン酸を生産するストレプ
トコッカス・ズーエピデミカスをトッド・ヒユーイツト
・ブロス培地(ディフコ製)中、37℃で10時間培養
し、対数増殖期の菌体を遠心分離によって集め、低温下
遠心分離を繰り返しつつ2回0.05M トリス−マレ
イン酸緩衝液(pH6,0)を用いて無菌的に洗浄した
後、lXl0’/mj2の菌濃度となるように同緩衝液
に懸濁し、これにNTGを200μg/mflとなるよ
う添加し37℃にて30分分間上うした。つづいて、低
温下菌体を0.05Mトリス−マレイン酸緩衝?1t
([)H6,0)で2回洗浄した後、トッド・ヒユーイ
ツト・ブロス培地に接種して37℃、18時間培養した
。この培養液を滅菌生理食塩水にてlXl0’/mIl
となるように希釈し、その0.1mj!を血液(ウサギ
脱繊血)寒天(20mIl)に混釈してまき培養後、溶
血性を示さない集落を採取した。この変異株の取得顕度
は約4X10−’であった。次ぎにこの非溶血性菌株を
、上と同様に、トッド・ヒユーイツト・ブロス培地に3
7℃で培養し、対数増殖期の菌体を集め、0.05M
トリス−マレイン酸iIT液(pH6,0) テ洗浄後
、NTG200μg/mj2を含む同緩衝液中で37℃
、20分分間上うした。つづいて、低温下菌体を同緩衝
液で洗浄後、限外濾過処理培地(トッド・ヒユーイツト
・ブロス培地からアミコン製限外濾過膜YM−10にて
高分子画分を除去したもの)に接種して37℃、18時
間培養した。この培養液を滅菌生理食塩水にて1−5x
lO”/mILとなるよう希釈し、その0.1mflを
ヒアルロン酸ソーダ(分子量約63万、51g+aa社
製)0.1%を含む上記限外濾過処理培地寒天(高純度
寒天)上に塗布して37℃、20−40時間モイスチャ
ーチャンバー中で培養し、増殖した集落中の菌をレプリ
カ法にて採取しておき、寒天上に10%セチルビリジニ
ュームクロライド水溶液を噴霧して、約50万の菌株の
中から集落周囲が濁る集落を形成するヒアルロニダーゼ
非生産性変異株ストレプトコッカス・ズーエピデミカス
YIT2030を取得した。
なお上記ヒアルロニダーゼ生産・非生産菌の識別法はエ
リカバルケ等の方法(Er1ka−Balkeet a
l、、2b1.Bakt、)lyg、A、259,19
4−200.1985)を改変して行った。
リカバルケ等の方法(Er1ka−Balkeet a
l、、2b1.Bakt、)lyg、A、259,19
4−200.1985)を改変して行った。
参考例2 (バッチ培養)
グルコース6%、ポリペプトン(大五宋養化学製)1.
5%、パン酵母エキス(オリエンタル酵母工業製)0.
5%、燐酸第二カリ0.2%、硫酸マグネシウム7水塩
0.1%、塩化カルシウム0.005%、アデカ/−7
1/LG −109(消泡剤旭電化工業製) 0.00
1%の組成の培地(p’87.0)を101のジャーフ
ァーメンタ−に5J2入れ、滅菌後、前培養したストレ
プトコッカス・ズーエピデミカスYIT2030を1%
接種し、6N−水酸化ナトリウム水溶液にて培養pHを
7に連続的に調節しながら37℃で39時間通気攪拌培
養した。
5%、パン酵母エキス(オリエンタル酵母工業製)0.
5%、燐酸第二カリ0.2%、硫酸マグネシウム7水塩
0.1%、塩化カルシウム0.005%、アデカ/−7
1/LG −109(消泡剤旭電化工業製) 0.00
1%の組成の培地(p’87.0)を101のジャーフ
ァーメンタ−に5J2入れ、滅菌後、前培養したストレ
プトコッカス・ズーエピデミカスYIT2030を1%
接種し、6N−水酸化ナトリウム水溶液にて培養pHを
7に連続的に調節しながら37℃で39時間通気攪拌培
養した。
グルコースは別滅菌して、培養開始時に一度に添加した
。培養の経過と共に、ヒアルロン酸が蓄積し培養29時
間で、培養液の粘度は8000センチポアズ近くに達し
ほとんど流動性がなくなり、培養39時間後、培養液中
のグルコースが零に達した時点で培養を終了した。
。培養の経過と共に、ヒアルロン酸が蓄積し培養29時
間で、培養液の粘度は8000センチポアズ近くに達し
ほとんど流動性がなくなり、培養39時間後、培養液中
のグルコースが零に達した時点で培養を終了した。
収穫した培養液は流動性がないため、これを水にて粘性
が100センチポアズ以下となるように希釈した。次ぎ
にこの溶液をトリクロル酢酸にてpHを4以下にして、
中空糸マイクロフィルターモジュール(PW−103旭
化成製)に通し、菌体および不溶成分を除去し、更に中
空糸限外濾過膜(HrP30−43アミコン製)に、濾
過内液に水を注加しながら通し溶液中の低分子物質を除
去した。そしてこの溶液を凍結乾燥法によって乾燥しヒ
アルロン酸を培養液11当たり6,7g得た。得られた
ヒアルロン酸の分子量は約216万(粘度測定法)であ
った。
が100センチポアズ以下となるように希釈した。次ぎ
にこの溶液をトリクロル酢酸にてpHを4以下にして、
中空糸マイクロフィルターモジュール(PW−103旭
化成製)に通し、菌体および不溶成分を除去し、更に中
空糸限外濾過膜(HrP30−43アミコン製)に、濾
過内液に水を注加しながら通し溶液中の低分子物質を除
去した。そしてこの溶液を凍結乾燥法によって乾燥しヒ
アルロン酸を培養液11当たり6,7g得た。得られた
ヒアルロン酸の分子量は約216万(粘度測定法)であ
った。
参考例3 (連続培養)
グルコース濃度を2.5%にした以外は参考例2と同一
の組成の培地を10JZのジャーファーメンタ−に5J
2入れ、滅菌後(グルコースは別滅菌)、前培養したス
トレプトコッカス・ズーエピデミカスYIT2030を
1%接種し、6N−水酸化ナトリウム水溶液にて培!!
pHを7に調節しながら、37℃で15時間通気攪拌培
養した。その後グルコース濃度を2%にした以外は参考
例2と同一の組成の培地を、希釈率0.3 (hr−’
)で連続的に注加しながら、37℃、pH7で通気攪拌
連続培養を一週問おこなった。
の組成の培地を10JZのジャーファーメンタ−に5J
2入れ、滅菌後(グルコースは別滅菌)、前培養したス
トレプトコッカス・ズーエピデミカスYIT2030を
1%接種し、6N−水酸化ナトリウム水溶液にて培!!
pHを7に調節しながら、37℃で15時間通気攪拌培
養した。その後グルコース濃度を2%にした以外は参考
例2と同一の組成の培地を、希釈率0.3 (hr−’
)で連続的に注加しながら、37℃、pH7で通気攪拌
連続培養を一週問おこなった。
培養槽外に流出した培養液を一定時間ごとに集め、参考
例2と同様にしてヒアルロン酸(分子量約216万(粘
度測定法))を抽出精製した。この結果、ヒアルロン酸
の対糖収率は15%、その生産性は0.9 g / 1
1 / hrであり一日当たり21.8g/ILのヒア
ルロン酸を得ることができた。
例2と同様にしてヒアルロン酸(分子量約216万(粘
度測定法))を抽出精製した。この結果、ヒアルロン酸
の対糖収率は15%、その生産性は0.9 g / 1
1 / hrであり一日当たり21.8g/ILのヒア
ルロン酸を得ることができた。
実施例1
表1および表3に示す組成の化粧水を製造し、人間の皮
膚に塗布したときの保湿効果を、田上らのインピーダン
ス法(Tagami at at、 J。
膚に塗布したときの保湿効果を、田上らのインピーダン
ス法(Tagami at at、 J。
Invest、Dermatol、、75.500〜5
07.1980)を改良した皮表誘電率の測定方法〔に
arl Mo5ler。
07.1980)を改良した皮表誘電率の測定方法〔に
arl Mo5ler。
5onderdruck aus Parfumeri
e und Kosmetik84.375〜379.
1983)を応用して試験した。
e und Kosmetik84.375〜379.
1983)を応用して試験した。
数置1韮
健常男子成人(27歳)の上腕内側部を石けんで洗った
後、左右各3部位、計6部位に4×4cmの印をつけた
。約30分後に皮表水分量測定装置(SKICO53、
アミックグループ、プローブ直径16■)を用い、各部
位の化粧水塗布前の皮表誘電率を3回ずつ測定し、平均
値を求め 。
後、左右各3部位、計6部位に4×4cmの印をつけた
。約30分後に皮表水分量測定装置(SKICO53、
アミックグループ、プローブ直径16■)を用い、各部
位の化粧水塗布前の皮表誘電率を3回ずつ測定し、平均
値を求め 。
た。その直後に被験化粧水を各部位(18cm2)にそ
れぞれ30μi塗布し、指で充分に伸ばした。そして塗
布後経時的に各部位の皮表誘電率を3回ずつ測定し、各
平均値を求めた。
れぞれ30μi塗布し、指で充分に伸ばした。そして塗
布後経時的に各部位の皮表誘電率を3回ずつ測定し、各
平均値を求めた。
該皮表誘電率から前述の文献(にarl Mo5ler
。
。
5ondardruck aus Parfua+er
ie und Kosmetik64.375〜379
.1983)に従い皮表水分含有量を計算により求めた
。なお、部位差、誤差をできるだけ少なくするために化
粧水塗布部位をそれぞれ変え、各試料を6部位にて測定
し、その平均値を採用した。試料塗布前をOとし、皮表
水分含有量の変化を経時的に表わした。測定期間中の相
対湿度は27±7%、室温は26±2℃であった。
ie und Kosmetik64.375〜379
.1983)に従い皮表水分含有量を計算により求めた
。なお、部位差、誤差をできるだけ少なくするために化
粧水塗布部位をそれぞれ変え、各試料を6部位にて測定
し、その平均値を採用した。試料塗布前をOとし、皮表
水分含有量の変化を経時的に表わした。測定期間中の相
対湿度は27±7%、室温は26±2℃であった。
試U玉
表1の化粧水の試験結果を表2に、表3の化粧水の試験
結果を表4にそれぞれ示す、また、これらの結果、すな
わち化粧水塗布後10゜20.30.45.60分後の
皮表水分含有量についての平均値を求め、第3図および
第4図に示した。
結果を表4にそれぞれ示す、また、これらの結果、すな
わち化粧水塗布後10゜20.30.45.60分後の
皮表水分含有量についての平均値を求め、第3図および
第4図に示した。
なお表1および表2中、低分子ヒアルロン酸は分子量約
78万のもの(帝国臓器製薬■製)を用い、高分子ヒア
ルロン酸は参考例2により製造したものを用い、乳酸菌
培養液は乳清から香気成分を除去したもの(0,016
g (乾物量) /mfl )を用いた(以下の実施例
において同じ)0表中の数値は重量%を示す。
78万のもの(帝国臓器製薬■製)を用い、高分子ヒア
ルロン酸は参考例2により製造したものを用い、乳酸菌
培養液は乳清から香気成分を除去したもの(0,016
g (乾物量) /mfl )を用いた(以下の実施例
において同じ)0表中の数値は重量%を示す。
これらの結果より、本発明化粧水はヒアルロン酸又は乳
酸菌培養液をそれぞれ単独で含有する化粧水に比べ優れ
た保湿効果を有していた。
酸菌培養液をそれぞれ単独で含有する化粧水に比べ優れ
た保湿効果を有していた。
またこれに1.3−ブチレングリコールを配合した本発
明化粧水はさらに優れた保湿効果を有していた。
明化粧水はさらに優れた保湿効果を有していた。
以下余白
表1
表2
表3
表4
実施例2
表5の組成の化粧水を製造し、その使用感について評価
した。なお表5中の数値は重量%を示す。
した。なお表5中の数値は重量%を示す。
表5
評価方法および結果:
表5の化粧水を各々10名(男女各5名)のパネラ−の
手の甲に一定量塗布してもらい、肌への伸び、キシミ感
、べとつき感、リッチ感、すべすべ感、しフとり感につ
いてアンケート形式により評価させた。
手の甲に一定量塗布してもらい、肌への伸び、キシミ感
、べとつき感、リッチ感、すべすべ感、しフとり感につ
いてアンケート形式により評価させた。
その結果、本発明品5は比較量8に比べてすべての項目
において優れた使用感を示し、本発明品6は比較量9に
比べて優れた使用感を示した。これらの使用感には、特
にリッチ感およびすべすべ、つるつる感において統計的
に有意な差が認められた。
において優れた使用感を示し、本発明品6は比較量9に
比べて優れた使用感を示した。これらの使用感には、特
にリッチ感およびすべすべ、つるつる感において統計的
に有意な差が認められた。
実施例3
表6の組成の乳液を製造し、その使用感について評価し
た。なお表6中の数値は重量%を示す。
た。なお表6中の数値は重量%を示す。
表6
評価方法及び結果:
実施例2と同様の方法により評価した結果、本発明品7
は比較量10及び11に比べて優れた使用感を示した。
は比較量10及び11に比べて優れた使用感を示した。
これらの使用感には、特にしっとり感およびリッチ感に
おいて統計的に有意な差が認められた。
おいて統計的に有意な差が認められた。
実施例4
表7の組成のクリームを製造し、その使用感について評
価した。なお、表7の数値は重量%を示す。
価した。なお、表7の数値は重量%を示す。
表7
評価方法及び結果:
実施例2と同様の方法により評価した結果、本発明品8
は比較量12および13に比べて優れた使用感を示した
。これらの使用感には、特にしっとり感、リッチ感にお
いて統計的に有意な差が認められた。
は比較量12および13に比べて優れた使用感を示した
。これらの使用感には、特にしっとり感、リッチ感にお
いて統計的に有意な差が認められた。
実施例5
下記組成の化粧水を製造した。
組 成:
■ エタノール 10.0(重量96)■
1.3−ブチレングリコール 2.0■ バ
ラオキシ安息香酸メチル 0.1■ 香
料 0.1■ 乳酸菌培養
液 全体で100トなる量製 法: ■に■を分散し、これに■、■、■、■および■を加え
て十分攪拌することにより化粧水を得た。
1.3−ブチレングリコール 2.0■ バ
ラオキシ安息香酸メチル 0.1■ 香
料 0.1■ 乳酸菌培養
液 全体で100トなる量製 法: ■に■を分散し、これに■、■、■、■および■を加え
て十分攪拌することにより化粧水を得た。
実施例6
下記組成の乳液を製造した。
組 成:
■ ステアリン酸 2.0(重量*)■
流動パラフィン 6.0■ スクワラン
2.0 ■ ソルビタンモノステル−ト 1.5■
ポリオキシエチレンソルビタン 2.0
モノステル−ト(20E、O,) ■ バラオキシ安息香酸ブチル 0.05■
1.3−ブチレングリコール 3.0■ バ
ラオキシ安息香酸メチル 0.1[相] 香
料 0.15■ 乳酸
菌培養液 全体で100トなる量製 法: ■に■および■を加え、■を分散し、分散液を得る。次
いでこれを80℃で■〜■に加えて乳化し、その後[相
]を加えて室温まで冷却して乳液を得た。
流動パラフィン 6.0■ スクワラン
2.0 ■ ソルビタンモノステル−ト 1.5■
ポリオキシエチレンソルビタン 2.0
モノステル−ト(20E、O,) ■ バラオキシ安息香酸ブチル 0.05■
1.3−ブチレングリコール 3.0■ バ
ラオキシ安息香酸メチル 0.1[相] 香
料 0.15■ 乳酸
菌培養液 全体で100トなる量製 法: ■に■および■を加え、■を分散し、分散液を得る。次
いでこれを80℃で■〜■に加えて乳化し、その後[相
]を加えて室温まで冷却して乳液を得た。
実施例フ
下記組成のクリームを製造した。
組 成:
■ 流動パラフィン 23.0(重量豹■
ワ セ リ ン
7.0■ セタノール 1.0 ■ ステアリン酸 2.0■ ミ
1ン ロ ウ
2.0■ ソルビタンモノステアレート 3
.5■ バラオキシ安息香酸ブチル 0.05[
相] 1.3−ブチレンクリコール 3.
0■ バラオキシ安息香酸メチル 0.1@
香 料 0.15@
乳酸培養液 全体で100トなる量製 法: @に[相]および0を加え、これに■を分散甘しめて分
散液を得る。次いでこれを80℃で■〜■に加えて乳化
し、その後@を加えて室温まで冷却してクリームを得た
。
ワ セ リ ン
7.0■ セタノール 1.0 ■ ステアリン酸 2.0■ ミ
1ン ロ ウ
2.0■ ソルビタンモノステアレート 3
.5■ バラオキシ安息香酸ブチル 0.05[
相] 1.3−ブチレンクリコール 3.
0■ バラオキシ安息香酸メチル 0.1@
香 料 0.15@
乳酸培養液 全体で100トなる量製 法: @に[相]および0を加え、これに■を分散甘しめて分
散液を得る。次いでこれを80℃で■〜■に加えて乳化
し、その後@を加えて室温まで冷却してクリームを得た
。
第1図および第2図は参考例2で得られた高分子ヒアル
ロン酸の赤外線吸収スペクトルおよびNMRスペクトル
をそれぞれ示す図面である。 第3図および第4図は、実施例1の化粧水を塗布したと
きの、60分後までの皮表水分含有二の変化の平均値を
示す図面である。 以上 階 ミ 奸
ロン酸の赤外線吸収スペクトルおよびNMRスペクトル
をそれぞれ示す図面である。 第3図および第4図は、実施例1の化粧水を塗布したと
きの、60分後までの皮表水分含有二の変化の平均値を
示す図面である。 以上 階 ミ 奸
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 1、ヒアルロン酸またはその塩、および乳酸菌培養液を
含有することを特徴とする化粧料。 2、ヒアルロン酸またはその塩が分子量200万以上の
ものである特許請求の範囲第1項記載の化粧料。 3、さらに1,3−ブチレングリコールを含有するもの
である特許請求の範囲第1項もしくは第2項記載の化粧
料。
Priority Applications (7)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP62064994A JPH075448B2 (ja) | 1987-03-19 | 1987-03-19 | 化粧料 |
US07/038,907 US5023175A (en) | 1986-05-01 | 1987-04-16 | Novel production process of hyaluronic acid and bacterium strain therefor |
CA000535098A CA1314508C (en) | 1986-05-01 | 1987-04-21 | Production process of hyaluronic acid and bacterium strain therefor as well as cosmetic composition containing hyaluronic acid |
AU71960/87A AU598809B2 (en) | 1986-05-01 | 1987-04-24 | Novel production process of hyaluronic acid and bacterium strain therefor as well as cosmetic composition containing hyaluronic acid |
KR1019870003999A KR960005736B1 (ko) | 1986-05-01 | 1987-04-25 | 히아루론산의 신규 생산방법 |
EP87106247A EP0244757B1 (en) | 1986-05-01 | 1987-04-29 | Novel production process of hyaluronic acid and bacterium strain therefor as well as cosmetic composition containing hyaluronic acid |
DE3750733T DE3750733T2 (de) | 1986-05-01 | 1987-04-29 | Verfahren zur Herstellung von Hyaluronsäure, dafür benötigte Bakterienstämme und kosmetische Zusammensetzung, welche Hyaluronsäure enthält. |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP62064994A JPH075448B2 (ja) | 1987-03-19 | 1987-03-19 | 化粧料 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPS63230613A true JPS63230613A (ja) | 1988-09-27 |
JPH075448B2 JPH075448B2 (ja) | 1995-01-25 |
Family
ID=13274124
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP62064994A Expired - Fee Related JPH075448B2 (ja) | 1986-05-01 | 1987-03-19 | 化粧料 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JPH075448B2 (ja) |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2007055926A (ja) * | 2005-08-24 | 2007-03-08 | Yakult Honsha Co Ltd | 保湿剤 |
JP5404424B2 (ja) * | 2008-01-16 | 2014-01-29 | サンスター株式会社 | 口腔用組成物 |
CN115120550A (zh) * | 2021-03-26 | 2022-09-30 | 株式会社现代百朗德 | 包含对毛发带来有益功效的链球菌培养液的毛发化妆品组合物 |
-
1987
- 1987-03-19 JP JP62064994A patent/JPH075448B2/ja not_active Expired - Fee Related
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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Publication number | Publication date |
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JPH075448B2 (ja) | 1995-01-25 |
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